JURNAL ANALISIS INSTRUMEN PENETAPAN KADAR

THIAMIN PADA TABLET VITAMIN B1 DENGAN HPLC

Megaputri, Michelle Ferdinand, Muhamad Ariq Alwan Winata, Muhammad
Andika Aryana, Muhammad Fajar Ismail
Kelompok 3 kelas 13.5
ABSTRAK

Thiamin dalam tablet vitamin B1 dapat dianalisis dengan menggunakan Kromatografi

Cair Kinerja Tinggi. Larutan standar thiamin yang digunakan dengan konsentrasi 100
ppm. Sampel vitamin B1 dilarutkan dan diencerkan dengan larutan buffer pospat pH 4,5.
Pemisahan ini menggunakan alat HPLC dengan buffer pospat pH 4,5 : metanol (55:45)
sebagai fase gerak dan secara isokratik dengan kecepatan air 0,5mL/menit. Dan kolom
yang digunakan adalah Okta Desil Silena (ODS)/C18. Detektor yang digunakan adalah
UV-VIS pada panjang gelombang 254nm. Dengan membandingkan area contoh dan
standar, konsentrasi thiamin dalam vitamin B1 dapat diketahui.

Thiamin vitamin B1 in tablet can be analyzed by using High Performance Liquid

Chromatography. Standard solution used with thiamin concentration 100 ppm. Vitamin
B1 diluted phosphate buffer solutions pH 4,5. This separation used HPLC with phosphate
buffer solutions pH 4,5 : methanol (55:45) as phase motion and in isocratic with a flow
rate is 0,5mL/minute. And the colomn that is use the Octa Deciles Silena (ODS)/C18. The
detector used is the detector UV-VIS with a wavelength of 254 nm. By comparing the
sample and standard area, the concentration of thiamin B1 can be known.

PENDAHULUAN Thiamin juga dikenal sebagai vitamin B1.

Vitamin adalan senyawa organik yang
dibutuhkan tubuh untuk mengatur
fisiologi tubuh sesorang. Vitamin
merupakan salah satu 5 kelompok gizi
yang sangat diperlukan oleh tubuh. Di
dalam tubuh vitamin berperan sebagai
zat pengatur keseimbangan proses
dalam tubuh. Vitamin dibagi menjadi dua
kelompok yaitu vitamin yang dapat larut
dalam air dan vitamin yang dapat larut
dalam lemak. Vitamin B 1 adalah vitamin
yang berasal dari kelompok vitamin yang
larut dalam air.
Jumlah kebutuhan vitamin dan mineral
untuk manusia berbeda-beda sesuai
dengan umur dan jenis kelamin. Tubuh
manusia tidak dapat memproduksi
vitamin sendiri, untuk itu kita sangat
membutuhkan makanan yang
mengandung vitamin dan mineral seperti
sayur, buah,dan lain-lain. Selain dari
makanan kita juga bisa mendapatkan itu
dari mengkonsumsi suplemen.
TINJAUAN PUSTAKA
A. Thiamin
Thiamin juga mempunyai peran sebagai
bagian dari koenzim dalam
dekarboksilasi oksidatif asam alfa-keto.
Berikut adalah struktur dari thiamin :
Thiamin merupakan gabungan dari
molekul basa pirimidin dan tiazol yang
dirangkai jembatan metilen. Tiamin
mempunyai sifat yang larut dalam alkohol
dan air, dapat rusak oleh panas,
terutama dengan adanya alkali. Pada
kondisi kering, thiamin stabil pada suhu
100oC selama beberapa jam.
Kelembaban akan mempercepat
kerusakannya.
B. High Performance Liquid
Chromatography (HPLC)
High Performance Liquid
Chromatography (HPLC) dapat disebut
juga dengan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT). KCKT merupakan suatu
metode pemisahan berdasarkan sifat
fisika yang dapat digunakan sebagai uji
identitas, uji kemurnian, dan penetapan
kadar. Titik beratnya adalah untuk
analisis suatu senyawa yang tidak mudah
menguap dan tidak stabil pada suhu
tinggi yang tidak dapat dianalisis dngan
kromatografi gas. Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi adalah kromatografi yang
dikembangkan menggunakan cairan
sebagai fase gerak baik cairan polar
ataupun non polar, dan bekerja pada
tekanan tinggi. Dalam kromatografi
partisi cair baik fase diam maupun fase
gerak berupa cairan, pelarut yang
digunakan harus tidak dapat bercampur.
Pelarut yang lebih polar biasanya
digunakan sebagai fase diam, oleh
karena itu sistem ini dinamakan
kromatografi fase normal. Bila fase diam
yang dipakai senyawa non polar,
sedangkan fase geraknya polar atau
terbalik dengan sistem fase normal maka
sistemnya disebut kromatografi fase.
Komponen utama alat yang dipakai
dalam yaitu reservoir zat pelarut untuk
fase gerak, pompa, injektor, kolom,
detektor UV-VIS, dan rekorder.
KCKT memerbolehkan penggunaan
partikel yang berukuran sangat kecil
untuk material terpadatkan dalam
kolom yang mana akan memberi luas
permukaan yang lebih besar
berinteraksi antara fase diam dan
molekul-molekul yang melintasinya.
Hal ini memungkinkan pemisahan
yang lebih baik dari komponen-
komponen dalam campuran. Sampel
yang akan dianalisis dijadikan dalam
volume yang kecil dari fase gerak
dan diubah melalui reaksi kimia oleh
fase diam ketika sampel melalui
kolom. Jika sampel mula-mula
berbentuk padatan harus di-destruksi
dulu kemudian ditreatment sehingga
berupa larutan homogen yang tidak
terdapat endapan lagi dan bening
karena syarat sampel yang dapat
dianalisis menggunakan KCKT
adalah harus tidak ada endapan dan
harus bening. Banyak dari
pengubahan tergantung dari sifat
alami analit, fase diam, dan fase
gerak. Waktu ketika analit keluar dari
ujung kolom disebut waktu retensi
dan merupakan suatu karakteristik
yang unik dari tiap analit.
Penggunaan tekanan menaikkan
kecepatan linear memberikan lebih
sedikit waktu bagi analit untuk
berdifusi dan menghasilkan
kromatogram. Pelarut yang banyak
digunakan yaitu air dan zat-zat
organik seperti methanol.
METODE PENELITIAN
DASAR
Thiamindilarutkan dalam larutan
buffer pospat pH 4,5. Pemisahan
terhadap thiamin dilakukan dengan
menginjeksikan larutan contoh pada
sistem KCKT menggunakan kolom
fase terikat C18 fase gerak campuran
bufferb pospat : methanol (55:45)
secara isokratik dengan kecepatan
air 0,5 mL/menit. Detektor yang
digunakan adalah UV-Vis pada
panjang gelombang 254nm. Dengan
membandingkan luas area sampel
dan standar maka konsentrasi
thiamin dapat diketahui.
Material dan bahan yang dibutuhkan
dalam penetapan ini adalah Corong,
Labu ukur 100 mL, Labu ukur 50 mL,
Pialagelas 800 ml, Pialagelas 400 mL,
Pipet tetes, Pipet colum 5 mL, Pipet
serologi, Kertas saring Whatman No.41,
dan penyaring milipore 0.22 μm. Sistem
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, Agilent
100, Detektor UV 254 nm, fase gerak
methanol : buffer fosfat (45:55),
0,5mL/menit.
Pereaksi yang digunakan :
a. Buffer fosfat pH 4,5
b. Larutan standard induk Thiamin 1000
ppm
c. Larutan standard Thiamin 30 ppm
CARA KERJA :
Persiapan standar
Pembuatan larutan induk Thiamin 1000
ppm Ditimbang 0,1000 gram Thiamin HCl
dan dilarutkan dengan buffer fosfat
dalam labu ukur 100 mL, dihimpitkan dan
dihomogenkan.
1. Larutan standar 100ppm
Standar induk thiamin HCl 1000 ppm
dipipet 10 ml dan dimasukkan kedalam
labu ukur 10 mL dan ditambahkan
larutan buffer pospat pH 4,5 lalu
dihimpitkan dan dihomogenkan dan
disaring dengan kertas saring milliporre.
2. Persiapan contoh
Ditimbang 5 tablet vitamin B1, lalu 2
tablet dihaluskan. Ditimbang 0,2000
gram vitamin B1 yang sudah halus,
dimasukkan ke dalam labu ukur 100ml
dan ditambahkan larutan buffer pospat,
dikocok selama 5 menit, dan disaring
dengan kertas saring no.41. kemudian
dipipet 5 ml filtrat, dimasukkan ke dalam
labu ukur 50 ml, disaring dengan kertas
saring milipore, dan siap diinjeksikan.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pengamatan
Bobot 5 tablet vitamin B1 = 1,0040 gram
Bobot rata-rata tablet = 0,2008 gram
Bobot contoh = 0,2009 gram
mg thiamin/tablet =
%thiamin
xbobot rata−rata
100
12,05
= x 200,8
100
= 24,19 mgthiamin/tablet
C. Pembahasan
Dari hasil praktikum didapatkan diketahui
intersep sebesar 14,59 slope sebesar
11,13 dan regresi sebesar 0,9988.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum penetapan
kadar thiamin dalam vitamin B1 secara
HPLC dengan alat HPLC Agilent 1100
diperoleh hasil sebesar 24,19 mg/tablet.
DAFTAR PUSTAKA
Arifin, Zaenal dan Ismail, Drs. H.E.
Krisnandi. 2012. Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT). Bogor: Sekolah
Menengah Analis Kimia Bogor.
Valls, Felicidad, dkk. 1999. Determination
of Thiamin in Cook Sausages. Spain:
Universidad De Burgos.

A standar I = 77, 25641

A standar II = 129,68535
A standar III = 182,81176
A standar IV = 236,36700
A standar V = 360,75453
A standar VI = 562,33428
A standar sampel = 284,06540

Fp = 10 x

B. Perhitungan

% Thiamin = ¿ ¿ ¿

(284,06540−14,59) 100
x 10 x
11,13 1000
x 100 %
200,9
= 12,05%