UJI DAYA HAMBAT BAKTERI ENDOFIT DAN

AKTINOMISETES TERHADAP BEBERAPA PATOGEN

TANAMAN SECARA IN-VITRO

OLEH :

ANGGI MARLIANA
1703110079

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS RIAU

PEKANBARU

2020
ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan yang maha esa, karena berkat

rahmat dan hidayahnya penulis dapat menyelesaikan kerja praktek dan laporan

dengan judul Uji Daya Hambat Bakteri Endofit Dan Aktinomisetes Terhadap

Beberapa Patogen Tanaman Secara In-Vitro

Pada kesekmpatan kali ini penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-

besarnya kepada :

 Kedua orang tua serta abang dan kakak yang selalu memanjatkan do’a dan

memberikan semangat.

 PT. Arara Abadi yang telah mengizinkan penulis untuk mengikuti dan

melaksanakan kegiatan kerja praktek.

 Ibu Nova Wahyu Pratiwi, M.Sc selaku dosen pembimbing jurusan yang telah

memberikan waktu, arahan demi kelancaran dan kesuksesan kegiatan kerja

praktek serta memberi masukan dalam penyususnan laporan kerja praktek.

 Bapak Bayo Alhusaeri Siregar, S.P, M.Si selaku pembimbing lapangan yang telah

membantu dan membimbing serta memberi arahan kepada penulis selama

melaksanakan kerja praktek.

 Bapak Dr. Herman, S.P, M.Si selaku Koordinator Kerja Praktek.

 Ibu Dr. Vanda Julita Yahya, M.si Selaku ketua jurusan biologi fakultas

matematika dan ilmu pengetahuan alam.

 Teman-teman rumah kontrakan Indah Kasih yang telah bekerjasama dengan baik

dan selalu memberikan semangat selama melaksanakan kegiatan Kerja Praktek di

PT. Arara Abadi.

 Seluruh pegawai kantor dan karyawan Laboratorium Plant Protection Department

iii
 Penulis juga sangat mengharapkan kritik dan saran agar laporan kerja praktek

ini bermanfaat bagi pembaca maupun bagi penulis khusunya.

Pekanbaru, 8 Februari 2019

Anggi Marliana
NIM.1703110079

iv
 DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................ ii

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii

DAFTAR ISI ....................................................................................................... v

I. PENDAHULUAN .......................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ........................................................................................ 1

1.2 Tujuan ..................................................................................................... 3

1.3 Manfaat ................................................................................................... 4

II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................. 5

2.1 Bakteri Ralstonia solanacearum (Bacterial Wild Disease (BWD)) ....... 5

2.1.1 Deskripsi dan Klasifikasi Bakteri R.solanacearum .................. 5

2.1.2 Mekanisme kerusakan dan Gejala Serangan pada Tanaman .... 7

2.2 Bakteri Actinomycetes ............................................................................ 9

2.3 Bakteri Endofit ...................................................................................... 11

2.4 Jamur Fusarium sp. ............................................................................... 14

2.4.1 Deskripsi dan Klasifikasi Jamur Fusarium sp. .......................... 14

2.4.2 Morfologi Jamur Fusarium sp. .................................................. 15

2.4.3 Gejala Serangan Jamur Fusarium sp. ........................................ 17

III METODE .................................................................................................... 19

3.1 Tempat dan Waktu Kegiatan ............................................................... 19

3.2 Alat dan Bahan ..................................................................................... 19

3.3 Cara Kerja ............................................................................................ 19

3.3.1 Pembuatan Media....................................................................... 19

v
 3.3.2 Koleksi dan Peremajaan Isolat ................................................... 20

3.3.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit Terhadap R.solanacearum .. 21

3.3.4 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit Terhadap Fusarium sp. ....... 21

3.3.5 Uji Daya Hambat Actinomycetes Terhadap R.solanacearum ... 21

3.3.6 Uji Daya Hambat Actinomycetes Terhadap Fusarium sp. ........ 22

3.3.7 Uji Keamanan Hayati ................................................................. 22

3.3.7.1 Uji Hipersensitive .......................................................... 22

3.3.7.2 Uji Agar Darah .............................................................. 23

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................. 24

4.1 Sistem Kerja dan Penelitian PT. Arara Abadi ..................................... 25

4.2 Peremajaan Isolat Bakteri Endofit dan Actinomycetes ....................... 25

4.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit Terhadap R.solanacearum ............ 25

4.4 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit Terhadap Fusarium sp .................. 28

4.5 Uji Daya Hambat Actinomycetes Terhadap R.solanacearum ............. 29

4.6 Uji Daya Hambat Actinomycetes Terhadap Fusarium sp. .................. 31

4.7 Uji Keamanan Hayati ........................................................................... 32

4.7.1 Uji Hipersensitive ...................................................................... 33

4.7.2 Uji Agar Darah ........................................................................... 33

V. PENUTUP .................................................................................................... 35

5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 35

5.2 Saran ....................................................................................................... 35

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 36

LAMPIRAN

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.3 Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum ................. 27

Tabel 4.4 Daya Hambat Actinomycetes terhadap R.solanacearum .................. 29

Tabel 4.5 Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp. ...................... 31

Tabel 4.6 Daya Hambat Actinomycetes terhadap Fusarium sp........................ 33

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 4.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum ....... 28
Gambar 4.4 Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap R.solanacearum ........ 30
Gambar 4.5 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp. ............ 32
Gambar 4.6 Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap Fusarium sp. ............. 33
Gambar 4.7.1 Daun Tembakau yang sudah disuntikkan isolat bakteri endofit, air
murni dan R.solanacearum........................................................ 34
Gambar 4.7.2 Hasil Uji agar darah.................................................................... 35
Lampiran 1 Persiapan alat dan bahan................................................................ 41
A. Alat ............................................................................................. 41
B. Bahan .......................................................................................... 43
Lampiran 2 cara kerja........................................................................................ 44
a. Pembuatan media........................................................................ 44
b. Peremajaan isolat bakteri endofit ............................................... 45
c. Peremajaan isolat aktynomicetes ................................................ 45
d. Pengujian Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum ................ 45
e. Pengujian Actinomycetes terhadap R.solanacearum ................. 46
f. Pengujian Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp. ..................... 47
g. Pengujian Actinomycetes terhadap Fusarium sp. ...................... 47
h. Uji Hipersensitive terhadap daun tembakau ............................... 48
i. Pengujian agar darah .................................................................. 48

1
 I.PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Hutan memiliki peranan yang sangat penting dalam mempengaruhi

keberlanjutan lingkungan. Menurut Anjasari (2009) fungsi hutan dibagi menjadi

produksi, lindung, tata klimat, dan lain-lain. Berdasarkan strategi pembangunan

jangka panjang kehutanan tersebut, hutan yang sudah tidak produktif (meliputi

lahan tandus bekas hutan tebangan, rimba karet, hutan-hutan bakau, beberapa

kepemilikan karet skala kecil, perkebunan sawit, padang rumput, dan lain-lain),

oleh pemerintah hutan dimanfaatkan sebagai Hutan Tanaman Industri (HTI)

dengan hasil utama kayu (sebagai bahan baku pulp dan paper). Hal tersebut

mampu menarik banyak investor karena memiliki nilai ekonomi yang tinggi

sehingga pengelolaannya dilakukan oleh swasta dan pemerintah melalui dinas

perhutani hanya berfungsi sebagai regulator.

Provinsi Riau memiliki hutan produksi terbatas atau Hutan Tanaman Industri

(HTI) diantaranya ialah Acacia sp. dan Eucalyptus sp. Tanaman ini penting dalam

pembangunan hutan di Indonesia khususnya untuk keperluan industri maupun

pendidikan dan penelitian. Tanaman Eukaliptus (Eukaliptus sp.) merupakan (HTI)

yang sangat menguntungkan untuk di budidayakan. Eukaliptus adalah salah satu

tanaman utama yang ada di PT.Arara Abadi yang dijadikan sebagai bahan baku

bubur kertas (pulp), kertas tissue dan kertas . Eukaliptus yang ada di Provinsi Riau

adalah Eucalyptus pellita. Namun pertumbuhan dan perkembangan tanaman ini

sering diserang berbagai jenis hama, patogen dan penyakit sehingga kelangsungan

hidupnya menjadi terancam.

2
 Pengendalian patogen tanaman selama ini telah banyak dilakukan dengan

menggunakan bahan kimia. Sebagian besar petani menggunakan pestisida

kimiawi. Upaya tersebut memberikan hasil yang cepat dan efektif. Hal ini

menyebabkan tingkat kepercayaan petani terhadap keampuhan pestisida jimiawi

sangat tinggi (Purwita et al 2013). Namun menurut Nurhayati et al (2011),

penggunaan bahan kimia yang terus menerus ternyata memberikan dampak yang

buruk terhadap lingkungan. Akhir-akhir ini orang semakin menyadari bahwa

penggunaan pestisida kimiawi yang berlebihan tidak hanya berdampak buruk

terhadap lingkungan itu sendiri tetapi juga pada makhluk yang hidup disekitar

lingkungan, seperti matinya organisme berguna, kebalnya hama atau patogen dan

bahaya residu yang terbawa oleh tanaman. Sehingga perlu dilakukannya

pengendalian opatogen secara hayati.

Menurut Suwandi (1993) dalam Sallytha et al (2014) salah satu mikroba

yang memiliki potensi sebagai agen pengendali hayati adalah Actinomycetes yang

diketahui memiliki kemampuan untuk menghasilkan antibiotik seperti

streptomycin, aureomisin, oleandomisin, spiramycin dan eritromisin.

Actinomycetes juga dapat menegendalikan beberapa patogen seperti Sclerotium

rolfsii Saac. Penyebab penyakit rebah semai pada tanaman kedelai dan

F.oxysporum f.sp cubense penyebab penyakit layu fusarium pada pisang.

Actinomycetes adalah organisme tanah yang memiliki sifat-sifat yang yang

umum dimiliki oleh bakteri dan jamur tetapi juga mempunyai ciri khas yang

cukup bebrbeda. Dengan lempeng agar Actinomycetes dapat dibedakan dengan

mudah dengan bakteri pada umumnya.

3
 Bakteri endofit adalah mikroorganisme menguntungkan yang berinteraksi

dengan tanaman inang serta sebagian atau seluruh dari siklus hidupnya tinggal di

dalam jaringan tanaman tanpa menyebabkan gangguan, kerusakan, gejala

penyakit bagi tanaman inang (Purwanto et al 2014).

Bakteri Endofit adalah mikroba yang hidup dijaringan tanaman pada periode

tertentu dan mampu hidup dengan membentuk koloni dalam jaringan tanaman

tanpa membahayakan inangnya. Bakteri endofit tanaman hutan indonesia

mempunyai kemampuan dalam menghasilkan senyawa aktif yang berguna untuk

memproduksi serangan mikroba patogen, beberapa diantaranya mampu

menghambat 2-3 jenis mikroba patogen.

Bakteri endofit bersimbiosis di dalam jaringan tanaman sehingga mikroba

tersebut mampu menghasilkan suatu agensia biologis yang dapat memerangi

penyakit tanaman, sehingga secara langsung tanaman tersebut terhindar dari

serangan penyakit yang juga disebabkan oleh mikroba. Bakteri endofit mampu

mengendalikan serangan bakteri Ralstonia solanacearum penyebab penyakit layu

bakteri pada tanmana Eucalyptus. Gejala yang dapat dilihat pada tanaman yang

terserang penyakit layu bakteri yaitu daun menguning secara bertahap pada pucuk

daun dan terjadi perubahan warna pada batang atau ranting menjadi kehitaman.

1.2 Tujuan

Adapun tujuan dilakukannya kerja praktek ini adalah untuk mempelajari

sistem kerja dan penelitian yang dilakukan di Laboratorium Plant Protection

PT.Arara Abadi terkait Actinomycetes sebagai pengendali patogen. Dapat

mengaplikasikan teori yang telah dipelajari di perkuliahan dan menambah

4
wawasan mahasiswa dalam mengetahui keberadaan mikroorganisme patogen.

Serta mendapatkan ilmu yang dapat di aplikasikan untuk menunjang penelitian

penulis nantinya.

1.3 Manfaat

Adapun manfaat dari kerja praktek ini adalah dapat mengetahui dan

mempelajari sistem kerja dan penelitian terkait Actinomycetes dan bakteri endofit

sebagai pengendali patogen yang dilakukan di Laboratorium Plant Protection,

Divisi R&D PT. Arara Abadi, Perawang, Kabupaten Siak, Provinsi Riau serta

mendapatkan ilmu yang dapat di aplikasikan untuk menunjang penelitian penulis

nantinya.

5
 II.TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bakteri Ralstonia solanacearum (Baciterial Wilt Diases (BWD))

R. Solanacearum diketahui menjadi penyebab penyakit pada ± 650 jenis

tumbuhan, terutama famili solanaceae seperti tembakau, terong, kentang, tomat,

cabe, labu-labuan, dan lain-lain. Selain menyerang famili solanaceae, juga

menyerang tanaman kelompok lain seperti pisang, jahe, kunyit, anggrek, nilam,

kacang-kacangan, bawang, pepaya, strawberry, geranium ( sejenis tanaman hias

yang terkenal di amerika dan Eropa), Anthurium ( tanaman hias), Auracaria,

Casuarina, dan Azadirachta indica. Selain menyerang tanaman pertanian dan

kehutanan, penyakit ini juga menyerang gulma, terutama gulma kelompok,

solanaceae (terong-terongan), Oxalis spp, Amaranthus spp, (bayam-bayaman),

Phyllanthus spp. (meniran), Ageranntum spp, Bidens pilosa, Sida spinosa,

Physalis minima, dan Xanthium spp (Research on forestry, 2012).

2.1.1 Deskripsi dan Klasifikasi Bakteri Ralstonia solanacearum

Bakteri Ralstonia solanaceaerum merupakan bakteri aerob dan bisa

bergerak dengan satu atau beberapa bulu cambuk (flagella). Bentuk batang (rod)

dengan lebar 0,5 mikron dan panjang 1,5 mikron. Temperatur optimum setiap

strain berbeda-beda berkisar 30-37OC (Pracaya 2009).

R.solanacearum tergolong bakteri gram negatif dan tidak memebentuk

spora. Bakteri ini tidak mempunyai enkapsulasi. Karakteristik fisiologi

R.solanacearum merupakan bakteri katalase dan oksidase positif, dapat mereduksi

nitrit, tidak dapat menghidrolisis pati, dan tidak mudah mendegrdasi gelatin.

Koloninya tidak berpendar tetapi dapat memproduksi pigmen coklat pada media

6
kompleks R.solanacearum tidak tahan panas, mati pada suhu 40OC dan tidak

tumbuh pada media yang mengandung garam NaCl 2% (Alhusaeri 2012).

R.solanacearum diketahui mempunyai banyak ras yang berbeda

viruelensinya. Bakteri R.solanacearum dibagi menjadi 5 ras berdasarkan kisaran

inang, yaitu : a) ras 1 menyerang tembakau, tomat, dan famili Solanaceae lainnya

; b) ras 2 menyerang pisang (triploid) dan heloconia; c) ras 3 menyerang kentang;

d) ras 4 menyerang jahe, dan e) ras 5 menyerang murbei. Berdasarkan oksidasi

disakarida dan alkohol heksosa, maka bakteri ini dibagi ke dalam 5 biovar

(Schaad et al, 2001).

R.solanacearum merupakan patogen tular tanah dan tular air. Bakteri ini

dapat bertahan dan menyebar pada berbagai periode waktu di dalam tanah atau air

yang dapat membentuk sumber inokulum (Allen et al 2008). Umumnya bakteri ini

di temukan di dalam tanah dan dapat menyebar melalui biji tanaman. Tanaman

yang terserang menunjukan gejala laten (symptomless) artinya tanaman yang

diserang tidak menunjukan adanya gejala terserang penyakit ( tidak menunjukkan

gejala abnormalitas). Bakteri ini dapat hidup dorman (tidur) di dalam tanah

sampai lebih dari 6 bulan di daerah tropis, sedangkan didaerah sub tropis dapat

bertahan sampai 6 tahun dan dapat hidup sampai kedalaman 1 meter dari

permukaan tanah. Bakteri dapat hidup dengan pH lingkungan 5,0-5,5. Dapat

hidup normal di dalam air, bahan organik, dan tanah. R.solanacearum dapat

berpindah melalui serangga, hewan, manusia, alat-alat pertanian, perpindahan

bahan tanaman seperti cutting, bibit, okulasi (Research on Forestry, 2012).

R.solanacearum dapat diinokulasi ke median secara in-vitro. Namun, tidak

mendukung pertumbuhan bakteri R.solanacearum dan atau pertumbuhannya

7
tertekan oleh bakteri gram negatif lainnya. Media yang sering digunakan yaitu

media agar Tetrazolium Chloride (TZC) atau 2% Sukrosa Pepton Agar (SPA)

(French et al 1995).

Terdapat dua jenis koloni bakteri R.solanacearum, koloni virulen dengan

ciri koloni yang besar, menggembung, fluidal dan berwarna putih dengan merah

pucat dibagian pusat koloni avirulent butyrous (kering), kecil, satu bentuk koloni

dan dengan batas yang jelas. Kedua koloni ini hanya muncul pada hari ketiga

inkubasi pada hari ketiga inkubasi pada 280C (Alhusaeri 2012).

Klasifikasi bakteri R.solanacearum penyakit layu sebagai berikut. Kingdom:

Bacteria; Filum : Protobacteria; Kelas : Beta Proteobacteria; Ordo :

Bukholderiales; Famili : Ralstoniaceae; Genus : Ralstonia; Spesies : Ralstonia

solanacearum ( Wikipedia 2014).

2.1.2 Mekanisme Kerusakan dan Gejala Serangan pada Tanaman

Virulensi adalah kapasitas relatif patogen untuk merusak tanaman inang.

Virulensi penyakit tanaman berkaitan denga sifat-sifat bakteri yang menentukan

kecepatan pertumbuhan dan penyebaran pada inang dan meningkatkan keruskaan

pada jaringan tanaman. Faktor virlensi yang di seksresikan dapat berupa toksin

termasuk Ekstraseluler Polisakarida, enzim, dan hormon tumbuh yang

menginduksi seperti jenis gejala menguning, busuk lunak, hiperplasia, nekrosis

dan layu ( Anaf 2009).

Infeksi terjadi terutama melalui luka pada bagian tanaman. Bakteri

terangkut dalam pembuluh kayu dan pada batang yang lunak, lalu masuk dalam

ruang antar sel dalam kulit dan empelur, menguraikan sel-sel sehingga terjadi

rongga-rongga. Suhu yang tinggi mendukung perkembangan penyakit.

8
 Mekanisme kerusakan Ekstrasluler Polisakarida sebagai penyebab layu

antara lain : penyebaran patogen dalam xylem, pembentukan senyawa

Ekstraseluker Polisakarida hanya pada isolat yang virulen dan pemberian dengan

senyawa metabolit dari patogen pada tanaman. Aspe-aspek yang menyebabkan

layu adalah pengaliran terbatas dan transportasi air ke daun menjadi terhambat,

viskositas cairan dalam jaringan pembuluh mengikat, sehingga terjadi

penyumbatan terhadap transport air, bagian yang paling kritis adalah tangkai dan

tulang daun, terjadi kerusakan pada membran luar dan membran dalam sel dan

keluarnya elektrolit dari dalam sel ( Anaf 2009).

Penyakit yang timbul pada dataran rendah lebih berat karena suhu udara

relatif tinggi. Bakteri berkembang baik di tanah alkalis yang suhunya agak tinggi

di saat banyak hujan. Intensitas penyakit sangat di pengaruhi oleh tanman

terineksi pada musim sebelumnya. Pada cuaca lembab penyakit ini menyerang

lebih dahsyat, dan jika cuaca kembali kering dan panas tanaman terinfeksi tiba-

tiba menjadi layu. Jika hanya beberapa pembuluh yang diserang maka tanaman

hanya memperlihatkan gejala layu pada sebagian pembuluh tanaman. Layu

vascular selalu berkembang dengan lambat, kebalikan dari gejala dieback yang

berkembang dengan cepat (Nasrun 2007).

Gejala yang di timbulkan oleh serangan R.solanacearum pada tanaman

eukaliptus tidak dapat dilihat pada fase pembibitan. Bibit tanaman yang sudah

terinfeksi tetap terlihat segar dan segar. Gejala mulai terlihat pada saat bibit

tanaman sudah dipindahkan ke lapangan yaitu saat tanaman berumur 4-6 bulan.

Gejala awal yang tampak berupa layu pada ujung atas atau salah satu ranting,

9
sedangkan bagian yang lainnya tetap sehat (Alhusaeri 2012). Gejala layu/kering

lama-kelamaan menyebar dan pada serangan berat dapat mematikan seluruh

tanaman. Sedangkan pada bagian batangnya jika di potong maka akan terlihar ada

ooze atau lender pada batang dan warna potongan batang tersebut berubah warna

menjadi coklat. Serangan penyakit layu pada umbi kentang menimbulkan gejala

dari luar tampak bercak-bercak kehitam-hitaman, terdapat lelehan putih keruh (

massa bakteri ) yang keluar dari mata tunas atau ujung stolon ( Rukmana 1997).

Perbedaan penyakit yang disebabkan oleh R.solanacearum dengan

Fusarium sp dapat dilihat dengan memotong batang tanaman yang sakit dan di

masukkan kedalam air. Jika mengeluarkan lender maka layu pada tanaman

tersebut disebabkan oleh cendawan, sedangkan jika tidak mengeluarkan lender

maka layu pada tanaman disebabkan oleh bakteri ( Pracaya, 2009). Patogen ini

sulit dikendalikan, karena dapat bertahan selama satu tahun dalam tanah tanpa

kehilangan virulensinya, serta menyerang tanaman pada berbagai fase

pertumbuhan ( Nasrun 2007 ).

2.2 Bakteri Actinomycetes

Actinomycetes termasuk bakteri yang berbentuk batang, gram positif,

bersifat positif, bersifat anaerobik atau fakultatif. Struktur actinomycetes berupa

filament lembut yang sering disebut hifa atau miselia, sebagaimana yang terdapat

pada fungi, memliki konidia pada hifa yang menegak. Actinomysetes merupakan

bakteri yang berproduksi dengan pembelahan sel, rentan terhadap penisilin tetapi

tahan terhadap zat anti fungi ( Ambarwati 2009 ). Anggota actinobacteria

kebanyakan aerob, tapi beberapa seperti Actinomycetes israelii dapat tumbuh

10
dalam kondisi anaerob ( Zulfadli 2013 ). Sekitar 70% antibiotik yang telah

ditemukan berasal dari Actinnomycetes (Ogunmonyi et al 2010 ). Oleh karena itu

Actinomycetes merupakan sumber potensial dalam eksplorasi antibiotik baru.

Actynomycetes salah satu prokariota yang bentuknya mirip dengan fungi.

Actinomycetes awalnya dinamakan “ ray fungi”. Actinomycetes tumbuh dalam

bentuk filamen miselium dan membentuk spora. Ada dua hal pentimg untuk

membedakan antara fungi dengan Actinomycetes, yakni : 1) Actinomycetes tidak

mempunyai nukleus, sehingga dimasukkan prokariotik; 2) bentuk hifa

Actinomycetes dengan diameter 0,5-1,0 µm, sehingga lebih kecil dari hifa jamur

(3-8 µm diamternya) (Coyne 1999).

Actinomycetes terdiri dari 10-50% total populasi mikroba dalam tanah.

Organisme ini ditemukan dalam tanah (hampir semua), kompos, dan sedimen.

Kelimpahan populasi Actinomycetes di dalam tanah adalah tersebar kedua setelah

bakteri, yakni rentang dari 500.000-100.000.000 propagul per gram tanah.

Propagul adalah bagian dari suatu mikroorganisme yang dapat tumbuh dan

berkembangbiak (Coyne 1999). Actinobacteria lain tinggal didalam tubuh

tumbuhan dan hewan, termasuk beberapa pathogen seperti

Mycobacterium(Zulfadli 2013).

Bakteri Actinomycetes yang diisolasi pada media PSA tumbuh secara

perlahan, koloni melekat erat pada permukaan media, dan memproduksi spora

seperti serbuk. Warna koloni isolat secara umum pada awalnya berwarna putih,

lalu lama-kelamaan berubah warna menjadi abau-abu (Susilowati 2007).

Actinomycetes kelihatan seperti jamur dari luar. Akan tetapi, organisme ini adalah

11
bakteri sesuai dengan semua kriteria untuk sel prokariot. Dinding selnya

mengandung asam muramat, tidak mempunyai mitokondrion, mengandung

ribosom 70S (Sel eukariot mempunyai ribosom 80S dalam sitoplasmanya), tidak

mempunyai pembungkus nukleus, garis tengah selnya berkisar dari 0,5 sampai 2,0

µm, dan dapat dimatikanatau di hambat oleh banyak antibiotika bakteri. Dari

bnayak macam marga yang kini di klasifikasi dalam bangsa Actynomycetes,

hanya sedikit yang dapat menimbulkan penyakit pada manusia ( Volk dan

Wheeler 1998).

2.3 Bakteri Endofit

Bakteri endofit menurut Strobel dan Daisy (2003) merupakan bakteri yang

mampu hidup pada suatu jaringan dalam tanaman selama periode tertentu dari

siklus hidupnya. Bakteri endofit dapat membentuk koloni pada suatu jaringan

dengan melakukan endosimbiosis tanpa menimbulkan ciri tertentu pada tanaman.

Bakteri endofit merupakan salah satu langkah sumberdaya yang dapat di

kembangkan dalam pencarian sumber bahan aktif yang berasal dari

mikroorganisme. Kemampuan bakteri endofit memproduksi senyawa metabolit

sekunder sesuai dengan tanaman inangnya merupakan peluang yang sangat besar.

Bakteri endofit yang tumbuh pada tumbuhan hutan hujan tropis memiliki potensi

yang luar biasa sebagai sumber senyawa bioaktif berupa metabolit sekunder

seperti alkaloid, terpen, steroid, flavonoid, kuinon, fenol dan lain sebagainya

(Prihatiningtias dan Sri 2011).

Keunggulan dari bakteri endofit sebagai sumber`senyawa bioaktif baru

adalah siklus hidup bakteri endofit yang singkat dan senyawa-senyawa yang

12
dihasilkan dapat di produksi dalam skala besar melalui proses fermentasi. Isolasi

senyawa bioaktif dari tumbuhan banyak menemui kenala dikarenakan jumlahnya

yang terbatas dan siklus hidup tumbuhan yang relatif lama. Oleh karena itu,

bakteri endofit memiliki prospek yang baik dalam penemuan senyawa-senyawa

baru (Prihatiningtias dan Sri 2011).

Bakteri endofit dapat ditemukan hampir disemua tumbuhan di muka bumi

ini, dan merupakan bakteri yang tumbuh didalam jaringan tumbuhan. Bakteri

endofit dapat diisolasi dari akar, batang dan daun suatu tumbuhan. Hubungan

antara bakteri endofit dan inangnya dapat berebentuk simbiosis mutualisme

sampai hubungan yang patogenik (Prihatiningtias dan Sri 2011).

Hubungan simbiosis mutualisme ditandai dengan hubungan yang saling

menguntungkan antara bakteri endofit dan tumbuhan inangnya. Bakteri endofit

dapat melindungi tumbuhan inang dari serangan patogen dengan senyawa yang

dikeluarkan oleh bakteri endofit. Senyawa yang dikeluarkan bakteri endofit

berupa senyawa metabolit sekunder yang nerupakan senyawa bioaktif dan dapat

berfungsi untuk membunuh patogen. Tumbuhan inang menyediakan nutrisi yang

dibutuhkan oleh bakteri endofit untuk melengkapi siklus hidupnya (Prihatiningtias

dan Sri 2011).

Beberapa pihak bahkan berspekulasi bahwa masih di mungkinkan adanya

beberapa jenis bakteri endofit lain, seperti ricketsia, dan archaebacteria. Karena

tumbuh dalam jaringan tanaman, dimana tanaman yang satu tentu berbeda dengan

tanaman lainnya, maka tempat hidup bakteri sangat unik sifatnya. Bahkan,

fisiologi tumbuhan tinggi termasuk yang berasal dari spesies yang sama akan beda

13
di lingkungan yang berbeda. Karena itu keanekaragaman bakteri endofit sangatlah

tinggi. Berdasarkan pertimbangan tersebut endofit dapat menjadi sumber berbagai

metabolit sekunder baru yang berpotensi untuk dikembangkan dalam bidang

medis, pertanian, dan industri ( Prasetyoputri dan Ines 2006 ).

Tanaman tingkat tinggi dapat mengandung beberapa bakteri endofit yang

mampu menghasilkan senyawa biologi atau metabolit sekunder yang di duga

sebagai akibat koevolusi datau transfer genetik ( genetic recombinan) dari

tanaman inangnya ke dalam bakteri endofitn sepanjang waktu evolusinya ( Tan

dan Zhou 2001 dalam Radji 2005).

Bakteri endofit dapat menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif yang langka

dan penting bagi tumbuhan inangnya, maka kebutuhan untuk menumbuhkan

tumbuhan yang masa hidupnya panjang dan mungkin termasuk langka akan

berkurang dan keanekaragaman hayati dunia juga terlindungi. Bakteri digunakan

sebagai sumber suatu produk hayati akan memudahkan proses dan mengurangi

biaya produksi, sehingga pada akhirnya menghasilkan produk dengan harga lebih

murah (Tan dan Zhou 2001 dalam Radji 2005).

Endofit awalnya ada diluar tubuh tanaman yang kemudian masuk jika

terjadi luka pada tanaman. Jika sudah berada didalam tanaman, endofit akan

menetap. Endofit berkemang biak didalam tanaman tanpa menyebabkan penyakit

bagi tanaman inangnya. Belum ada penelitian khusus tentang cara metabolisme

bakteri endofit dan kemampuan bakteri endofit menetap selamanya di tanaman.

Masih belum ada penelitian yang membuktikan apakah endofit memiliki

spesifikasi tertentu, misalnya apakah satu endofit selalu muncul pada jenis

14
tumbuhan yang sama ditempat yang berbeda. Banyak faktor luar seperti curah

hujan dan polusi yang mempengaruhi populasi endofit dalam tanman (

Prasetyoputri dan Ines 2006 ).

2.4 Jamur Fusarium sp.

2.4.1 Deskripsi Umum Jamur Fusarium sp.
Jamur Fusarium sp. adalah salah satu jenis patogen tular tanah yang

mematikan, karena patogen ini mempunyai strain yang dapat dorman selama 30

tahun sebelum melanjutkan virulensi dan menginfeksi tanaman. Layu fusarium

disebabkan oleh cendawan jenis Fusarium sp. Kasus serangan penyakit ini banyak

terjadi di dataran rendah. Umumnya, tanaman ini akan layu dan mati dalam tempo

waktu 14-90 hari. Resapan air di lahan yang buruk atau lahan yang banyak

genangan airnya akan meningkatkan risiko serangan penyakit ini (Mukarlina,

2010).

Cendawan Fusarium sp. membentuk polipeptida yang disebut

likomarasmin yaitu suatu toksin yang mengganggu permeabilitas membran

plasma tanaman. Selain itu, Fusarium sp. juga membentuk senyawa yang lebih

sederhana, yaitu asam fusarat dan menghasilkan enzim pektolitik, terutama

pektinmetilesterase (PME) dan depolimerase (DP). PME menghilangkan metil

pada rantai pektin menjadi asam pektat. Depolimerase memecah rantai asam

pektat menjadi poligalakturonida dengan bermacam-macam berat molekul.

Enzim-enzim tersebut memecah bahan pektin yang ada dalam dinding xilem.

Fragmen-fragmen asam pektat masuk ke dalam pembuluh xilem yang kemudian

membentuk massa koloidal yang mengandung bahan non pektin yang dapat

menyumbat pembuluh. Berkas pembuluh akan menjadi cokelat disebabkan karena

fenol-fenol yang terlepas masuk ke dalam berkas pembuluh. Fenol-fenol tersebut

15
oleh enzim fenol oksidase yang dihasilkan tumbuhan inang akan mengalami

polimerisasi menjadi melanin yang berwarna cokelat. Bahan berwarna ini

terutama diserap oleh pembuluh xilem yang berlignin yang menyebabkan warna

cokelat yang khas pada penyakit layu Fusarium (Mukarlina, 2010).

Karakter dari jamur ini adalah menyerang tanaman yang kondisi nya sedang

lemah (peka) karena kekeringan, kekurangan unsur hara, terlalu banyak sinar

matahari dan tanaman terlalu banyak buah (Semangun, 2000).

Menurut Roma (2009), klasifikasi Fusarium spp adalah sebagai berikut.

Jamur Fusarium spp. termasuk kingdom fungi, divisi amastigomycota, sub divisi

deuteromycota, kelas deuteromycetes, ordo monilialales, famili tuberculaiaaceae,

Genus Fusarium dan Spesies Fusarium sp.

2.4.2 Morfologi Jamur Fusarium sp.

Fusarium sp. jamur ini mempunyai ukuran tubuh yang sangat kecil

dan hidupnya bersifat parasitoid yaitu organisme yang bergantung pada organism

lain serta didukung oleh suhu tanah yang hangat dan kelembaban tanah yang

rendah sekali. Populasi akan meningkat jika di tempat yang sama ditanam

tanaman yang merupakan inangnya serta jamur ini menginfeksi tanaman melalui

jaringan meristem pada ujung akar (Pracaya, 2007).

Jamur Fusarium sp. memiliki struktur yang terdiri dari mikronidia dan

makronidia. Permukaan koloninya berwarna ungu dan tepinya bergerigi serta

memiliki permukaan yang kasar berserabut dan bergelombang. Di alam, jamur ini

membentuk konidium. Konidiofor bercabang-cabang dan makrokonidium

berbentuk sabit, bertangkai kecil dan seringkali berpasangan. Miselium terutama

terdapat di dalam sel khusus di dalam pembuluh, juga membentuk miselium yang

16
terdapat diantara sel-sel, yaitu di dalam kulit dan di jaringan parenkim didekat

terjadinya infeksi. Fusarium sp. adalah fungi aseksual yang menghasilkan 3 spora

yaitu :

a. Makrokonidia

Makrokonidia berbentuk panjang melengkung, di kedua ujung sempit

seperti bulan sabit, terdiri dari 3-5 sel dan biasanya di temukan di

permukaan.

b. Mikrokonidia

Mikrokonidia adalah spora dengan 1 atau 2 sel yang dihasilkan Fusarium

pada semua kondisi dan dapat menginfeksi tanaman. Mikrokonidia

memiliki bentuk yang bulat sampai oval, uniseluler dan tidak berwarna.

c. Klamidiospora

Klamidiospora adalah spora dengan sel selain diatas, dan pada waktu

dorman dapat menginfeksi tanaman, sporanya dapat tumbuh di air

(Juniawan, 2015).

Fusarium sp. mengalami fase patogenesis dan saprogenesis. Pada fase

patogenesis, cendawan hidup sebagai parasit pada tanaman inang. Apabila tidak

ada tanaman inang, patogen hidup di dalam tanah sebagai saprofit pada sisa

tanaman dan masuk fase saprogenesis, yang dapat menjadi sumber inokulum

untuk menimbulkan penyakit pada tanaman lain. Penyebaran propagul dapat

terjadi melalui angin, air tanah, serta tanah terinfeksi dan terbawa oleh alat

pertanian dan manusia (Alfizar, 2011).

17
 2.4.3 Gejala Serangan Jamur Fusarium sp.

Jamur Fusarium sp. merupakan penyebab penyakit layu dan busuk

batang pada tanaman bawang merah. Fusarium sp. merupakan jamur yang mampu

bertahan lama dalam tanah sebagai klamidospora, yang terdapat banyak dalam

akar sakit. Jamur mengadakan infeksi melalui akar. Adanya luka pada akar akan

meningkatkan infeksi. Setelah masuk ke dalam akar, jamur berkembang

sepanjang akar menuju ke batang dan di sini jamur berkembang secara meluas

dalam jaringan pembuluh sebelum masuk ke dalam batang palsu. Pada tingkat

infeksi lanjut, miselium dapat meluas dari jaringan pembuluh ke parenkim. Jamur

membentuk banyak spora dalam jaringan tanaman sehingga tanaman menjadi

sakit dan tidak sehat (Semangun, 2000).

Serangan awal layu fusarium ditandai dengan busuk di bagian batang

yang dekat dengan permukaan tanah. Selanjutnya, kebusukan akan menjalar

hingga ke akar. Akibatnya, tanaman akan layu dan kekeringan di bagian ranting

dan pada akhirnya menyebabkan tanaman rebah (Hamid, 2011).

Tanaman yang terserang penyakit ini ditandai dengan menguningnya

daun-daun tua yang diikuti dengan daun muda, pucatnya tulang-tulang daun

bagian atas, terkualainya tangkai daun, dan layunya tanaman. Batang pun

membusuk dan agak berbau amoniak. Jika pangkalnya dipotong, akan terdapat

warna cokelat berbentuk cincin dari berkas pembuluhnya (Wiryanta, 2002).

Gejala serangan Fusarium sp. yang mana awalnya tulang-tulang daun

sebelah atas menjadi pucat, tangkai daun merunduk dan tanaman menjadi layu.

Layu total dapat terjadi antara 2-3 minggu setelah terinfeksi. Tandanya dapat

dilihat pada jaringan angkut tanaman yang berubah warna menjadi kuning atau

18
coklat. Penyakit ini dapat bertahan di tanah untuk jangka waktu lama dan bisa

berpindah dari satu lahan ke lahan lain melalui mesin-mesin pertanian, seresah

daun yang telah terserang, maupun air irigasi. Suhu tanah yang tinggi sangat

sesuai untuk perkembangan penyakit ini (Irzayanti, 2008).

19
 III.METODE

3.1 Tempat dan Waktu Kegiatan

Pelaksanaan kerja praktek ini bertempat di Laboratorium Plant Protection

Department, Divisi R&D PT. Arara Abadi Perawang, Kabupaten Siak, Provinsi

Riau. Kegiatan ini dilaksanakan selama 8 Minggu mulai dari tanggal 17 Januari

hingga 17 Maret 2020.

3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam pelaksanaan kerja praktek ini yaitu Cawan petri, ,

Autoklaf, Tabung reaksi, Bunsen, Camera digital, Erlenmeyer, Jarum Ose, Kertas

label, Korek api, Laminar Air Flow, Micro Pipet, Mikrowave, Kompor Listrik,

Plastik Wrapping, , Sprayer, Timbangan Analitik, Weghing boot, Tipe, Teko

Ukur, Panci, Spatula, Saringan, Vortex dan alat tulis

3.3 Cara Kerja.

3.3.1 Pembuatan Media

Terdapat beberapa media yang di gunakan pada percobaan ini, yaitu

media TZC cair, media PSA, media Napsa dan media NA. Pembuatan media

pada umumya sama, yang membedakan hanya pada komposisinya saja. Pada

pembuatan media NA komposisi berupa Glukosa, pepton, beef extract dan

agar yang kemudian di larutkan menggunakan air murni menggunakan

erlenmeyer, jika semua bahan sudah larut, erlenmeyer dimasukkan ke dalam

microwave agar bahan homogen. Untuk media Napsa komposinya berupa

beef ekstrak, glukosa, pepton, sukrosa, agar dan kentang. Kentang di rebus

hingga mendidih, kemudian ekstrak kentang dicampurkan ke dalam wadah

20
yang berisi bahan. Sedangkan untuk media PSA komposisinya teridir dari

ekstrak kentang, sukrosa dan agar.

3.3.2 Koleksi dan Peremajaan Isolat

Bakteri endofit terdiri dari 20 isolat yang merupakan koleksi

Laboratorium Plant Protection Departement. Sampel bakteri diisolasi dari

bagian akar, batang, pelepah dan daun tanaman kelapa sawit tersebut. Kultur

murni bakteri endofit di tumbuhkan pada medium NA di cawan petri

menggunakan metode gores kuadran (streak) dan diinkubasi pada suhu

ruangan selama 48 jam.

Kultur actinomycetes terdiri dari 10 isolat yang merupakan koleksi

Laboratorium Plant Protection Departement. Kultur murni actinomisetes di

tumbuhakan pada media PSA di cawan petri menggunkan metode gores

kuadran (streak) dan diinkubasi pada suhu ruangan selama 72 jam.

Isolat Ralstonia solanacearum isolat yang merupakan koleksi

Laboratorium Plant Protection Departement. Kultur murni Ralstonia

solanacearum di tumbuhkan pada media NAPSA yang sudah di beri TZC di

cawan petri menggunakan metode gores kuadran (streak) dan diinkubasi pada

suhu ruangan selama 48 jam.

Isolat Fusarium sp. isolat yang merupakan koleksi Laboratorium Plant

Protection Departement. Kultur murni Fusarium sp. di tumbuhkan pada

media PSA di cawan petri menggunakan metode agar blok (potongan agar)

dan diinkubasi pada suhu ruangan selama 120 jam.

21
3.3.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Ralstonia solanacearum

Isolat Ralstonia solanacearum di encerkan dalam air murni sebanyak

10-1. Isolat Ralstonia solanacearum cair sebanyak 0,1 ml di tumbuhkan di

dalam media NAPSA dengan metode sebar menggunakan glassbit. Jika

media sudah kering, isolat bakteri endofit di tumbuhkan di dalam media

napsa yang sudah berisi isolat Ralstonia solanacearum dengan metode gores

menggunkan 2 kali pengulangan (dual culture method) dengan jarak 2 cm.

Kultur ini diinkubasi pada suhu 28oC selama 3-7 hari dan diamati

perkembangan. Zona bening diukur dan dihitung rata-ratanya.

3.3.4 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp.

Isolat Fusarium sp. di potong menggunakan cork boorrer. Isolat

Fusarium sp. di tumbuhkan pada media PSA dengan di balikkan. Isolat

bakteri endofit di tumbuhkan di media PSA yang sudah terdapat isloat

Fusarium sp. dengan metode gores sepanjang 1 cm di ketiga sisi dengan

jarak 1 cm dari isolat Fusarium sp. Kultur ini diinkubasi pada suhu 28oC

selama 3-7 hari dan diamati perkembangan. Diukur pertumbuhan miselia dan

di hitung menggunakan rumus X 100% dari ketiga sisi, kemudian hasil

dirata-ratakan.

3.3.5 Uji Daya Hambat Actinomisetes terhadap Ralstonia solanacearum.

Isolat Ralstonia solanacearum di encerkan dalam air murni sebanyak

10-1. Isolat Ralstonia solanacearum cair sebanyak 0,1 ml di tumbuhkan di

dalam media NAPSA dengan metode sebar menggunakan glassbit. Jika

media sudah kering, isolat actinomisetes di tumbuhkan di dalam media napsa

22
yang sudah berisi isolat Ralstonia solanacearum dengan metode gores

menggunkan 2 kali pengulangan dengan jarak 2 cm. Kultur ini diinkubasi

pada suhu 28oC selama 3-7 hari dan diamati perkembangan. Zona bening

diukur dan dihitung rata-ratanya

3.3.6 Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap Fussarium sp.

Isolat Fussarium sp di potong menggunakan cork boorrer. Isolat

Fusarium sp di tumbuhkan pada media PSA dengan di balikkan. Isolat

actinomisetes di tumbuhkan di media PSA yang sudah terdapat isloat

Fussarium sp dengan metode gores sepanjang 1 cm di ketiga sisi dengan

jarak 1 cm dari isolat Fussarium sp. Kultur ini diinkubasi pada suhu 28oC

selama 3-7 hari dan diamati perkembangan. Diukur pertumbuhan miselia dan

di hitung menggunakan rumus X 100% dari ketiga sisi, kemudian hasil

dirata-ratakan.

3.3.7 Uji Keamanan Hayati

3.3.7.1 Uji Hipersensitive

9 isolat bakteri endofit yang terpilih di tumbuhkan dalam media

NB. Simpan didalam inkubator shaker selama 24 jam. Alat dan bahan

disiapkan, jarum suntik terlebih dahulu di sterilisasi dengan alkohol dan

air murni. Isolat bakteri endofit di ambil sebanyak 1 ml menggunakan

jarum suntik. Isolat cair bakteri endofit di suntikan ke selaput daun

tembakau hingga isolat masuk ke dalam selaput daun tembakau.

Tanaman tembakau di inkubasi selama 24 jam. Lalu diamati apakah

terdapat nekrosis.

23
3.3.7.2 Uji Agar Darah

9 isolat bakteri endofit yang terpilih di tumbuhkan dalam media

NA. Agar darah di bagi menjadi beberapa bagian dan diberi label. 9

isolat bakteri terpilih diinokulasikan kedalam agar darah dengan cara di

totolkan menggunakan tusuk gigi steril. Kultur ini diinkubasi pada suhu

28oC selama 24 jam dan diamati perubahannya.

24
 IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Sistem Kerja dan Penelitian PT. Arara Abadi

PT. Arara Abadi Perawang terletak di Desa Pinang Sebatang Kecamatan

Tualang Kabupaten siak yang dinamakan Resource and Development (R&D).

R&D memiliki beberapa laboratorium yaitu labiratorium Plant Protection

Departement, Laboratorium Biotechnology Departement, and Laboratorium soil

Departement.

Dalam peneingkatan produktifitas dan kualitas serta mutu kerja maka sangat

di perlukan tenaga kerja berkualitas pula. Tenaga kerja yang berkualitas yaitu

tenaga kerja yang memiliki rasa kedisiplinan, semangat dan tanggung jawab yang

tinggi serta mematuhi ketentuan dan peraturan yang di tetapkan PT. Arara Abadi

memiliki beberapa peraturan perusahaan yang harus di taati oleh semua tenaga

kerja, yaitu :

1. Aturan jam kerja karyawan PT, Arara Abadi Perawang, Riau. Waktu kerja

normal perusahaan adalah 8 jam dalam sehari dan 40 jam dalam satu minggu

untuk 5 hari kerja, dengan jam kerja hari senin-jum’at yaitu pukul 07:00-

17:00 WIB dan jam kstirahay pukul 11:30-13:30 WIB.

2. Setiap Karyawan memiliki hak untuk mendapatkan cuti yang di atur sebagai

berikut yaiu, cuti tahunan, cuti sakit, cuti hamil dan keguguran, cuti

kecelakaan kerja, cuti hari libur nasional karyawan shift, izin pribadi, dan izin

meninggalkan pekerjaan dengan mendapatkan upah penuh.

3. Setiap karyawan harus meminta izin tertulis dari atasan, apabila keluar dari

lingkungan kerja pada waktu jam kerja.

25
4. Pakaian yang di gunakan rapi dan sopan, untuk pria tidak diperbolehkan

berambut panjang dan harus di pangkas rapi, sedangkan untuk wanita tidak

diperkenankan menggunakan perhiasan.

5. Gunakan sepatu ke dalam lokasi kerja dan tidak diperbolehkan menggunakan

sandal atau sepatu sandal, kecuali kaki dalam kondisi tertentu.

6. Pekerja yang mangkir selama lima hari kerja atau lebih berturut-turut tanpa

keterangan tertulis yang dilengkapi dengan bukti yang sah dan telah di

panggil oleh pimpinan dua kali secara berturut-turut, dapat di putuskan

hubungan kerjanya karena dianggap mengundurkan diri.

7. Setiap karyawan yang melanggar peraturan perusahaan akan mendapatkan

sanksi-sanksi. Jenis-jenis sanksi disiplin dibedakan sebagai berikut yaitu surat

teguran, surat peringatan pertama, surat peringatan kedua, surat peringatan

kerja, sanksi ganti rugi atau denda, skoring atau bebas tugas sementara dan

PHK.

Plant Protection Departement merupakan salah satu laboratorium yang

bergerak dalam pengendalian dan pencegahan organisme penyebabnya pada

tanaman di lapangan, identifikasi penyakit tanaman, produksi dan monitoring.

Laboratorium ini digunakan untuk identifikasi dan pengendalian hama,

penyakit dan gulma. Di laboratorium ini terdiri dari beberapa ruangan

diantaranya yaitu : Pathology, entomology and weed, preparation and

sterilization, microscope room dan isolation room.

Suatu perusahaan yang ingin memiliki managemen yang baik harus memiliki

struktur organisasi yang baik, begitu pula dengan plant protection

Departement. Struktur organisasi yang baik harus memenuhi syarat sebagai

26
 berikut yaitu adanya pemisah fungsi, pemisah wewenang, dan pemisah

tanggung jawab.

4.2 Peremajaan Isolat Bakteri Endofit dan Actinomycetes

Dari 40 isolat bakteri endofit koleksi Laboratorium Plant Protection

Departmen setelah dilakukan peremajaan, diperoleh 20 isolat bakteri endofit yang

dapat tumbuh pada media NA. Selanjutnya dari 12 isolat Actinomycetes yang

telah dilakukan peremajaan diperoleh 10 isolat Actinomycetes yang dapat tumbuh

pada media PSA.

4.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum

Perlakuan uji daya hambat Bakteri Endofit terhadap Ralstonia solanacearum

dengan metode dual culture menggunakan 20 isolat bakteri endofit yang berbeda-

beda.

Tabel 4.3 Daya Hambat Hambat Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum

Nama Rata-rata
Isolat (mm) Daya Hambat
209B 17,5 Kuat
0216B 12,7 Kuat
074B 10 Kuat
059B 8,2 sedang
208B 7,7 sedang
209B 7,5 sedang
051B 7 sedang
205B 6,5 sedang
201B 5,2 sedang
240B 5,2 sedang
080B 4,7 Tidak menghambat
214B 4 Tidak menghambat

27
 067B 4 Tidak menghambat
054B 3,7 Tidak menghambat
070B 0,3 Tidak menghambat
213B 0,7 Tidak menghambat
204B 0,7 Tidak menghambat
076B 0,22 Tidak menghambat
0198B 0,2 Tidak menghambat
200B 0 Tidak menghambat

R.solanacearum

Bakteri Endofit

Gambar 4.3 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit

terhadap R.solanacearm

Pada uji ini digunakan 20 isolat bakteri endofit yang berbeda-beda, Tabel

4.3 menunjukkan bahwa isolat bakteri endofit yang memiliki daya hambat paling

kuat terhadap R.solanacearum adalah isolat bakteri endofit 209B dengan rata-rata

daya hambat (zona bening) 17,5 mm. Isolat bakteri endofit yang memiliki daya

hambat paling lemah adalah isolat bakteri endofit 0198B dengan rata-rata daya

hambat 0,2 mm. Sedangkan isolat bakteri endofit 200B tidak memiliki memiki

kemampuan untuk menghambat pertumbuhan R.solanacearum.

28
 Menurut David dan stout (1971) pengklasifikasian zona hambat terbagi

menjadi 4 kelas berdasarkan diameter zona hambatnya : > 20 mm sangat kuat,

kuat 10-20 mm, sedang 5-10 mm dan < 5 mm tidak menghambat. Perbedan dalam

kemampuan menghasilkan zona bening mungkin tergantung pada metabolit

sekunder yang dihasilkan oleh isolat uji.

Bakteri endofit mampu mencegah perkembangan penyakit karena

memproduksi siderofor, menghasilkan senyawa metabolit yang bersifat racun bagi

jamur patogen. Endofit juga memiliki kemampuan untuk mereduksi produksi

toksin yang dihasilkan oleh petogen sehingga tidak patogenik terhadap tanaman

atau menginduksi ketahanan tanaman terhadap serangan patogen. Menurut Sturz

et al (2000) dalam Yulianti (2013) yang menyatakan bahwa ada bakteri endofit

yang memiliki potensi mengurangi efek penyakit yang polisiklik dengan cara

memperlambat laju perkembangan penyakit.

4.4 Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap R.solanacearum

Perlakuan uji daya hambat Actinomycetes terhadap Ralstonia solanacearum

dengan metode dual culture menggunakan 10 isolat actinomycetes. .

Tabel 4.4 Daya Hambat Hambat Actinomycetes terhadap R.solanacearum

Rata-rata Daya
Nama Isolat (mm) Hambat
278B 11,3 Kuat
285C 4,5 Lemah
289B 0 Lemah
282B 0 Lemah
290B 0 Lemah
281B 0 Lemah
283B 0 Lemah

29
 279B 0 Lemah
285B 0 Lemah

Actinomycetes

R.solanacearum

Gambar 4.4 Uji Daya Hambat Actinomycetes

terhadap R.solanacearm

Tabel 4.4 menunjukkan bahwa isolat Actinomycetes yang memiliki daya

hambat paling kuat terhadap R.solanacearum adalah isolat Actinomycetes 278B

dengan rata-rata daya hambat (zona bening) 11,3 mm. Isolat Actinomycetes yang

memiliki daya hambat lemah adalah isolat Actinomycetes 285C dengan rata-rata

daya hambat 4,5 mm. Sedangkan 8 isolat Actinomycetes lainnya tidak memiliki

kemampuan untuk menghambat pertumbuhan R.solanacearum.

4.5 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp.

Perlakuan uji daya hambat Bakteri Endofit terhadap Fusarium sp.dengan

metode dual culture menggunakan 11 isolat bakteri endofit yang berebeda-beda .

Tabel 4.5 Daya Hambat Bakteri Edofit terhadap Fusarium sp.

30
 Daya Hambat
Isolat (mm)
076B 41,66%
201B 38,09%
208B 34,84%
0216B 28,78%
067B 26,08%
074B 24,44%
054B 24%
051B 21,73%
070B 20%
076B 15,86%
059B 2,76%
205B 0%
240B 0%
080B 0%
214B 0%
067B 0%
213B 0%
204B 0%
0198B 0%
200B 0%

31
 B.Endofit

Fusarium sp.

Gambar 4.5 Uji Daya Hambat Bakteri Endofit

terhadap Fusarium sp.

Pada Tabel 4.5 menunjukkan bahwa isolat bakteri endofit yang memiliki

daya hambat paling kuat terhadap Fusarium sp. adalah isolat bakteri endofit 076B

dengan persentase kemampuan daya hambat sebesar 41,66%, artinya isolat bakteri

endofit 076B lebih mampu menghambat pertumbuhan Fusarium sp. dibanding 10

isolat bakteri endofit lainnya. Isolat bakteri endofit yang memiliki daya hambat

lemah adalah isolat bakteri endofit 059B dengan persentase kemampuan daya

hambat sebesar 2,76%. Persentase ini diperoleh dari perhitungan jari-jari

pertumbuhan miselia Fusarium sp. yang tumbuh kearah petri, dengan

pertumbuhan terbesar sebagai R1 dan pertumbuhan terkecil sebagai R2.

Kemudian dikalikan dengan 100%.

4.6 Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap Fusarium sp.

Perlakuan uji daya hambat Bakteri Endofit terhadap Ralstonia solanacearum

dengan metode dual culture menggunkan 3 isolat Actinomycetes.

Tabel 4.6 Daya Hambat Actinomycetes terhadap Fusarium sp.

32
 Daya Hambat
Isolat (mm)
291B 17,64%
285C 4,76%
279B 2,22%
278B 0%
289B 0%
282B 0%
290B 0%
281B 0%
283B 0%
285B 0%

Actinomycetes

Fusarium sp.

Gambar 4.5 Uji Daya Hambat Actinomycetes

terhadap Fusarium sp.

Tabel 4.5 menunjukkan bahwa isolat actinomycetes yang memiliki daya

hambat paling kuat terhadap Fusarium sp. adalah isolat actinomycetes 076B

dengan persentase kemampuan daya hambat sebesar 17,64%, artinya isolat

actinomycetes 076B lebih mampu menghambat pertumbuhan Fusarium sp.

dibanding 9 isolat actinomycetes lainnya. Isolat actinomycetes yang memiliki

33
daya hambat lemah adalah isolat actinomycetes 279B dengan persentase

kemampuan daya hambat sebesar 2,22%. Sedaangkan ketujuh isolat

Actinomycetes lainnya tidak memiliki kemampuan menghambat Fusarium sp .

Persentase ini diperoleh dari jari-jari miselia yang tumbuh kearah petri, dengan

pertumbuhan terbesar sebagai R1 dan pertumbuhan terkecil sebagai R2.

Kemudian dikalikan dengan 100%.

4.7 Uji Keamanan Hayati

Uji keamanan hayati dilakukan untuk mengetahui apakah isolat yang

digunakan aman untuk tumbuhan dan hewan. Untuk mengetahui keamanan isolat,

maka dilakukan dua uji yaitu uji hipersensitive dan uji agar darah.

4.7.1 Uji Hipersensitive

Uji ini dilakukan dengan memasukkan 9 isolat cair bakteri endofit yang

terpilih dan suspensi R.solanacearum ke dalam selaput daun tembakau,

inkubasi selama 1X24 jam dan amati daun tembakau yang disuntikan isolat

bakteri endofit. Lalu bandingkan dengan daun kontrol yang disuntikan dengan

media NB.

Kontrol
R.solanacearum

Gambar 4.7a Daun tembakau yang sudah di suntikan isolat bakteri

endofit, air murni dan R.solanacearum

34
 Daun tembakau akan menunjukkan bercak (nekrosis) jika isolat yang

digunakan patogen terhadap tanaman. Dari gambar dapat diketahui bahwa 9

isolat bakteri endofit yang digunakan aman terhadap tanaman tembakau

sedangkan isolat R. solanacearum menunjukkan adanya bercak daun, artinya

R. solanacearum patogen terhadap tanaman tembakau tetapi belum tentu

patogen terhadap tanaman lain. Tanaman tembakau digunakan karena

memiliki sifat yang sangat sensitive, sehingga mudah untuk menampakkan

bercak. Dari 9 isolat bakteri endofit yang di ujikan dipilih lah 5 isolat bakteri

endofit dengan kode 209B, 0216B, 074B, 076B dan 201B yang akan

dilakukan pengujian agar darah .

4.7.2 Uji Agar Darah

Uji agar darah dilakukan untuk melihat apakah isolat bakteri endofit

yang digunakan aman terhadap manusia dan hewan. Isolat bakteri endofit

diinokuaasi ke dalam agar darah dan inkubasi selama 1X24 jam.

209B

Gambar 4.7 b Hasil uji Agar Darah

Komposisi darah yang digunakan sebagai bahan pembuat media adalah

darah kambing, karena darah kambing mudah di peroleh. Uji agar darah

35
menunjukkan hasil positif apabila isolat bakteri mampu menghidrolisis agar

darah menjadi bening. Dari 5 isolat bakteri edofit terpilih yaitu 209B, 0216B,

074B, 076B dan 201B hasil pengujian agar darah menunjukkan 4 isolat bakteri

endofit tidak patogen terhadap manusia dan hewan karena tidak menunjukkan

adanya perubahan warna menjadi bening. Dan satu isolat bakteri endofit

dengan kode 209B menunjukkan uji positif mampu menghidrolisis darah

sehingga isolat bakteri endofit 209B patogen terhadap manusia ataupun hewan.

36
 V. PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan sebagai

berikut :

1. Dari 20 isolat bakteri endofit yang digunakan, diperoleh hasil 3 isolat bakteri

endofit mampu menghambat R.sonalacearum dan 2 isolat bakteri endofit

mampu menghambat Fusarium sp.

2. Dari 10 isolat Actinomycetes yang digunakan, diperoleh 1 isolat

Actinomycetes yang mampu menghambat R.sonalacearum dan 1 isolat

actinomycetes mampu menghambat Fusarium sp.

3. Dari pengujian bakteri endofit X R.solanacearum diperoleh 9 isolat bakteri

endofit terpilih yang akan dilanjutkan ke uji keamanan hayati (Uji

Hipersensitive dan uji aga darah).

4. Berdasarkan uji hipersensitive, 9 isolat bakteri endofit aman terhadap

tumbuhan dan 5 isolat bakteri endofit terpilih 209B, 0216B, 074B, 076B dan

201B untuk dilakukan pengujian agar darah.

5. Pengujian agar darah menunjukkan isolat bakteri endofit 209B patogen

terhadap manusia/hewan dan 4 isolat bakteri endofit lainnya 0216B, 074B,

076B dan 201B tidak patogen terhadap manusia/hewan.

5.2 Saran

Percobaan tentang uji daya hambat actinomycetes dan bakteri endofit

terhadap R.solanacearum dan Fusarium sp. perlu dilanjutkan dan dilakukan

perhitungan koloni serta pengamatan mikroskopik darisolat actynomycetes dan

bakteri endofit yang digunakan.

37
 DAFTAR PUSTAKA

Alhusaeri, Bayo. 2012. Penyakit Layu Bakteri dan Spesies Komplek Ralstonia
solanacearum. Jurnal Mikrobiologi lanjut. 6351090171

Allen, C., J. B. Jones, C. Harmon, dan T. M. Momol. 2008. . USDANRI Project

Ambarwati, Gama. 2009. Isolasi Actinomycetes dari Tanah Sawah Sebagai

Penghasil Antibiotik. Jurnal Penelitian Sains dan Teknologi. 10(2): 101-111

Anaf. 2009. Ralstonia solanacearum. http:// iant. Toulose. Inra. , fr/ bacteria/ cgi/
ralsto. Cgi. Diakses 02 April 2014

Anjasari R. 2009. Pengaruh Hutan Tanaman Industri (HTI) Terhadap Kondisi

Sosial Ekonomi Masyarakat Di Kecamatan Kampar Kiri. [Tugas Akhir].
Jurusan Perencanaan Wilayah Dan Kota Fakultas Teknik Universitas
Diponegoro Semarang

Coyne, Mark. 1999. Soil Microbiology : An Exploratory Approacing. Delmar

Publisher an Intrnasional Thomson Company (ITP)

En.Wikipedia. org/wiki/Ralstonia solanacearum. Diakses 02 April 2014

French, E.B.L., Gutarra, P. Aley dan J. Elphinstone. 1995. Culture Media for
Ralstonia solanacearum Isolation, Identificaation, and Maintenance.
Fitopatologia, 30(3) : 126-130

Indrayadi, H dan Mardai. 2012. Pedoman pengenalan hama dan penyakit di

forestry. Divisi Penelitian Dan Pengembangan Kehutanan (R&D)
Sinarmas Forestry Riau. Hal 7-8

Melliawati, G., I’tishom. R., Hardjowijoto. S., dan Putra. S. T. 2015. Kloning Gen
Melanoma Antigen 1 (Mage-1) dari Jaringan Testis Untuk Mendapatkan
Plasmid Rekombinan Mage-1. MKB, 47(4): 19-206.

Nasrun,. Cristanti. T. Arwiyanto, dan T. Mariska.2007. karakterisasi fisiologi

Ralstonia solanacearum Penyebab Penyakit Layu Bakteri Nilam. Jurnal Litri,
1392): 43-48

Nurhayati, S. Saputra, A. A. D. Putra, I. N. Istiana dan A. Jamil. 2011.

Pengelolaan Kesuburan Tanah, Produktivitas, dan Keuntungannya Sistem
Tumpang Sari (Kelapa Sawit+Nenas) di Lahan Gambut Prrovinsi Riau.

38
 Jurnal Pengelolaan Kesuburan Tanah, Produktivitas, dan Keuntungan
Sistem Tumpang Sari. 133-145

Ogunmwonyi, mazomba, Mabinya, Nguwenya, Green, Akinpelu Olaniran,

Bernard dan Okoh. 2010. Studies On The Culturable Marine Actinomycetes
Isolate From The Nahoon Beach In The Eastern Cape Province Of South
Africa. Jurnal Microbial. Ras.p. 2223-2330

Pracaya. 2009. Hama Dan Penyakit Tanaman. Penebar Suadaya. Jakarta. 427 hal

Prasetyoputri, A dan Ines Atmosukarto. 2006. Biotrend. Mikroba Endofit Sumber

Acuan Baru yang Berpotensial. Vol 1.No.2, p. 13-15

Purwita, A.A., Indah, N.K. dan Trimulyono, G. 2013. Penggunaan Ekstrak Daun
Srikaya (Annona squamosal) Sebagai Pengendali Jamur Fusarium
oxyporum Secara In Vitro, Jurnal Lentera Bio. 2(2) : 179-183

Research and forest. 2012. Penyakit Layu Bakteri Pada Eucaliptus spp. http: //
reseacrh-on-forest-blogspot,com/2012/06/ penyakit-layu-bakteri.html. diakses
pada 06 februari 2019.

Rukmana, R. 1997. Kentang Budidaya dan Pasca Panen. Kanisius. Yogyakarta

216 hal

Sallytha, A. A. M., H. S. Addy dan P. A. Mihardjo. 2014. Penghambatan

Actinomycetes Terhadap Erwinia cartovora Subsp Cartovora Secara In
Vitro.Jurnal Ilmiah Pertanian 1(4):70-72

Schaad,N.W., J.B. Jones, and W. Chun. 2001. Laboratory Guide for Identification
of Plant Pathogen Bacteria 1hird Edition. APS Press. St. Paul Minnessota.
373P

Strobel, Gary dan Bryn Daisy. 2013. Bioprospecting for Microbial Endophytes
and Their Natural Product. Microbiology and Moleculer Biology Review .p.
491-507

Susilowati, O.N., R.D. Hastuti, dan E. Yuniarti. 2007. Isolsi dan Karakterisasi
Aktinomisetes Penghasil Antibakteri Enteropatogen Escherichia coli K1. 1.
Pseudomonas pseudomalles 02 05, dan Listeria monocytogenes 5407. Jurnal
Agrobiogen, 3(1):15-23

39
Tan, R. X. Dan W. X. 2001. Endophytes a rich source of functional metabolites.
Nat Prod.1(8):448-459

Volk, W. A., dan M. F. Wheeler. 1998 Mikrobiologi Dasar Jilid 1. Erlangga :

Jakarta.446 hal

Yulianti, Titiek. 2013. Pemanfaatan Endofit Sebagai Agensia Pengendali Hayati

Hama dan Penyakit Tanaman. Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak
Industri 5(1), april 2013:40-49

Zulfadli. 2013. Mikrobiologi Pertanian : Klasifikasi Bakteri.

Zulfadliad.blogspot.com./2013/04/klasifikasi.bakteri.html.diakses 02 april
2014.

40
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Persiapan Alat dan Bahan

A. Alat

Cawan petri Autoklaf

Mikropipet

Microwave
Timbangan Analitik Vortex

Inkubator Erlenmeyer Teko Ukur

Saringan Bunsen Tissu

41
 Ose
Tipe Glassbit

Spidol Tabung Jar Rak dan Tabung Reaksi

Laminar Air Flow Wieghing

Toples

Corkboorer

42
B. Bahan

Beef Ekstrak Pepton Gliserol

Agar Yeast Ekstrak Glukosa

Sukrosa K2HPO4 Tanaman tembakau

Kentang
Plastik Wrap Alkohol 70%

43
 Isolat Actinomysetes
Isolat Bakteri Endofit
Isolat Ralstonia
solanaceae

Agar darah
Kertas Tali

Lampiran 2. Cara Kerja

a. Pembuatan media

Penuangan bahan ke Penghomogenan

Penimbangan bahan
dalam erlenmeyer menggunakan microwave

Pengautoklafan media Media yang siap di pakai

44
 b. Peremajaan Isolat Bakteri Endofit

Penginokulasian isolat Isolat Bakteri Endofit

Penuangan media bakteri Endofit ke media yang sudah di remajakan
NA

c. Peremajaan Isolat Actinomycetes

Inokulasi actinomisetes Aktinomisetes yang

Penungan media PSA
sudah diremajakan

d. Pengujian Bakteri Endofit terhadap R.solanacearum

Penuangan media Napsa Penuangan glassbit Penumbuhan isolat

R.solanacearum ke
dalam air murni

Isolat Ralstonia Penginokulasian isolat

45
solanearum di vortex R.solanacearum cair ke Perataan isolat cair
hingga homogen media Napsa dengan pengguncangan

Penginokulasian isolat Penyimpanan di dalam

Pengeringan isolat bakteri endofit inkubator

e. Pengujian Aktinomisetes terhadap R. Solanacearum

Penuangan media Napsa

Penuangan glassbit Penumbuhan isolat
R.solanacearum ke dalam
air murni

Isolat Ralstonia Penginokulasian isolat Perataan isolat cair

solanearum di vortex R.solanacearum cair ke dengan pengguncangan
hingga homogen media Napsa

Pengeringan isolat Penginokulasian isolat Penyimpanan di dalam

aktinomisetes inkubator

46
f. Pengujian bakteri endofit terhadap Fussarium sp.

Penginokulasian isolat Penginokulasian isolat

Penuangan media PSA
fussarium ke media PSA bakteri endofit metode
tiga totol

Penyimpanan di dalam
inkubator

g. Pengujian Actinomysetes terhadap Fussarium sp.

Penginokulasian isolat Penginokulasian isolat

Penuangan media PSA
fussarium ke media PSA aktinomisetes dengan
metode tiga totol

Penyimpanan di dalam
inkubator

47
h. Uji Hipersensitif terhadap daun Tembakau

Air murni disiapkan Penginokulasian bakteri vortex untuk

sebanyak 10 ml dalam endofit kedalam air murni menghomogenkan
tabung reaksi

Pensterilisasian jarum
Sterilisasi jarum suntik
suntik menggunakan air Pengambilan isolat
mrnggunakan alkohol
murni bakteri endofit
90%

Penyuntikan isolat Penandaan daun Setelah 24 jam

bakteri endofit cair ke penginokulasian
daun tembakau

i. Pengujian Agar Darah

Penginokuasian isolat
Isolat bakteri endofit siap Penandaan/ pelabelan
bakteri endofit
pakai

48
Lampiran 3. Hasil
a. perhitungan zona hambat Fusarium sp. X Bakteri Endofit
. 076B (R1)= X 100% = 14,28%

(R2)= X 100% = 19,04%

(R3)= X 100% = 14,28%

14,28%+ 19,04%+ 14,28% / 3 = 15,86%

2. 201B (R1)= X 100% = 52,38%

(R2)= X 100% = 33,33%

(R3)= X 100% = 28,57%

52,38%+33,33%+28,57% / 3 = 38,09
3. 208B (R1)= X 100% = 31,81%

(R2)= X 100% = 40,90%

(R3)= X 100% = 31,81%

31,81%+ 40,90% + 31,81% / 3= 34,84%

4. 0216B (R1)= X 100% = 31,81%

(R2)= X 100% = 22,72%

(R3)= X 100% = 31,81%

31,81%+ 22,72% + 31,81%= 28,78%

5. 067B (R1)= X 100% = 34,78%

(R2)= X 100% = 13,04%

(R3)= X 100% = 30,43%

34,78%+13,04%+30,43% / 3= 26,08%
6. 074B (R1)= X 100% = 33,33%

(R2)= X 100% = 20%

(R2)= X 100% = 20%

33,33%+20%+20% / 3= 24,44%

49
7. 054B (R1)= X 100% = 36%

(R2)= X 100% = 16%

(R3)= X 100% = 20%

36%+16%+ 20% / 3= 24%

8. 051B (R1)= X 100% = 34,78%

(R2)= X 100% = 13,04%

(R3)= X 100% = 21,73%

34,78% + 13,04% + 21,73% / 3= 21,73

9. 070B (R1)= X 100% = 10%

(R2)= X 100% = 25%

(R3)= X 100% = 25%

10% +25%+25% / 3= 20%

10. 076B (R1)= X 100% = 10%

(R2)= X 100% = 40%

(R3)= X 100% = 35%

10%+40%+35% /3= 41,66%

11. 059B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 8,3%

(R1)= X 100% = 0%

0%+8,3%+0% /3 = 2,76%

12. 205B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

50
 (R3)= X 100% = 0%

13. 240B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

14. 080B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

15. 214B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

16. 067B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

17. 213B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

18. 204B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

19. 0198 (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

51
 (R3)= X 100% = 0%

20. 200B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

Perhitungan Fusarium sp X Actynomicetes

1.)291B (R1)= X 100% = 11,76%

(R2)= X 100% = 17,64%

(R3)= X 100% = 23,52%

11,76%+17,64%+23,52% / 3= 17,64%

2.)279B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 6,66%

0%+0%+6,66% /3= 2,22%

3.)285C (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% =14,28%

(R3)= X 100% = 0%

0%+14,28%+0% /3= 4,76%

4.)278 B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

5.)289B (R1)= X 100% = 0%

52
 (R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

6.)282B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

7.)290B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

8.)281B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

9.)283B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

10.)285B (R1)= X 100% = 0%

(R2)= X 100% = 0%

(R3)= X 100% = 0%

53