Mikrobiologi Praktikum

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
DISUSUN OLEH :
SANTI YULIANA
2030801033
DOSEN PENGAMPU :
RIRI NOVITA SUNARTI,M.Si
PROGRAM STUDI BIOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI RADEN FATAH PALEMBANG
TAHUN 2021
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum wr wb, segala puji bagi Allah yang telah memberikan

saya kemudahan sehingga saya dapat menyelesaikan laporan praktikum ini
dengan tepat waktu. Shalawat serta salam semoga terlimpah curahkan kepada
baginda tercinta kita yaitu Nabi Muhammad SAW yang kita nanti- nantikan
syafaatnya di akhirat nanti.
Saya mengucapkan syukur kepada Allah SWT atas limpahan nikmat sehat-
Nya ,baik itu berupa sehat fisik maupun akal pikiran ,sehingga saya mampu untuk
menyelesaikan pembuatan laporan praktikum sebagai tugas mata kuliah
Praktikum Mikrobiologi yang berjudul “Laporan Praktikum Mikrobiologi”.
Saya tentu menyadari bahwa Laporan Praktikum ini jauh dari kata
sempurna dan masih banyak terdapat kesalahan serta kekurangan di dalamnya.
Untuk itu, saya mengharapakan kritik serta saran dari pembaca untuk Laporan
Praktikum ini , supaya Laporan Praktikum ini nantinya dapat menjadi Laporan
Praktikum yang lebih baik lagi. Kemudian apabila terdapat banyak kesalahan pada
Laporan Praktikum ini saya mohon maaf yang sebesar besarnya.
Saya juga mengucapkan terima kasih kepada semua pihak khususnya

kepada dosen pengampu saya Ibu Riri Novita Sunarti, M.Si, yang telah
membimbing dalam mata kuliah ini.
Demikian, semoga Laporan Praktikum ini dapat bermanfaat. Terima kasih.

Saya ucapakan Wassalamualaikum wr wb.
Palembang,14 Juni 2021
Penulis
i
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR .............................................................................................. i

DAFTAR ISI ........................................................................................................... ii
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ viii
BAB I PENGENALAN ALAT ............................................................................... 1
PENDAHULUAN................................................................................................. 2
A. Latar Belakang ............................................................................................. 2
B. Tujuan Praktikum ......................................................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA........................................................................................ 4
A. Mikrobiologi ................................................................................................. 4
B. Pengenalan Alat ............................................................................................ 4
METODE PRAKTIKUM ..................................................................................... 7
A. Waktu dan Tempat ....................................................................................... 7
B. Alat dan Bahan ............................................................................................. 7
C. Cara Kerja ..................................................................................................... 7
HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................. 8
A. Hasil.............................................................................................................. 8
Tabel 1. Pengenalan Alat Laboratorium Mikrobiologi ..................................... 8
B. Pembahasan ................................................................................................ 13
PENUTUPAN ..................................................................................................... 14
A. Kesimpulan ................................................................................................. 14
B. Saran ........................................................................................................... 14
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 15
BAB II PEMBUATAN MEDIA ........................................................................... 17
PENDAHULUAN............................................................................................... 18
ii
A. Latar Belakang ........................................................................................... 18
B. Tujuan Praktikum ....................................................................................... 19
TINJAUAN PUSTAKA...................................................................................... 20
A. Mikrobiologi ............................................................................................... 20
B. Pembuatan Media ....................................................................................... 20
METODE PRAKTIKUM ................................................................................... 22
A. Waktu dan Tempat ..................................................................................... 22
B. Alat dan Bahan ........................................................................................... 22
C. Cara Kerja ................................................................................................... 22
HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................... 24
A. Hasil............................................................................................................ 24
B. Pembahasan ................................................................................................ 24
PENUTUPAN ..................................................................................................... 26
A. Kesimpulan ................................................................................................. 26
B. Saran ........................................................................................................... 26
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 27
BAB III STERILISASI......................................................................................... 29
PENDAHULUAN............................................................................................... 30
A. Latar Belakang ........................................................................................... 30
TINJAUN PUSTAKA ........................................................................................ 31
A. Mikrobiologi ............................................................................................... 31
B. Sterilisasi .................................................................................................... 31
A.Waktu dan Tempat ...................................................................................... 33
B. Alat dan Bahan ........................................................................................... 33
C. Cara Kerja ................................................................................................... 33
iii
A. Hasil............................................................................................................ 35
B. Pembahasan ................................................................................................ 35
PENUTUPAN ..................................................................................................... 36
A. Kesimpulan ................................................................................................. 36
B. Saran ........................................................................................................... 36
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 37
BAB IV PEMBIAKAN MIKROORGANISME DAN TEKNIK ISOLASI ..... 38
PENDAHULUAN............................................................................................... 39
A. Latar Belakang ........................................................................................... 39
A. Pembiakan Mikroorganisme....................................................................... 41
B. Teknik Isolasi ............................................................................................. 42
B. Alat dan Bahan ........................................................................................... 46
C. Prosedur Kerja ............................................................................................ 46
A. Hasil............................................................................................................ 49
B. Pembahasan ................................................................................................ 51
PENUTUPAN ..................................................................................................... 56
A. Kesimpulan ................................................................................................. 56
B. Saran ........................................................................................................... 56
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 57
BAB V PEWARNAAN GRAM ........................................................................... 55
PENDAHULUAN............................................................................................... 56
A. Latar Belakang ........................................................................................... 56
iv
A. Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif ........................................ 57
B. Pewarnaan Gram......................................................................................... 57
C. Beberapa Macam Pengecatan Bakteri ........................................................ 59
B. Alat dan Bahan ........................................................................................... 60
C. Cara Kerja ................................................................................................... 60
A. Hasil............................................................................................................ 62
B. Pembahasan ................................................................................................ 62
PENUTUPAN ..................................................................................................... 64
A. Kesimpulan ................................................................................................. 64
B. Saran ........................................................................................................... 64
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 65
BAB VI UJI KUALITAS AIR DENGAN METODE MPN .............................. 67
PENDAHULUAN............................................................................................... 68
A. Latar Belakang ........................................................................................... 68
A. Bakteri Kolifrom ........................................................................................ 70
B. Metode MPN ( Most Probable Number) .................................................... 71
C. Air ............................................................................................................... 72
B. Alat dan Bahan ........................................................................................... 74
C. Cara Kerja ................................................................................................... 75
v
A. Hasil............................................................................................................ 77
B. Pembahasan ................................................................................................ 79
PENUTUPAN ..................................................................................................... 83
A. Kesimpulan ................................................................................................. 83
B. Saran ........................................................................................................... 83
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 84
vi
DAFTAR TABEL
BAB I PENGENALAN ALAT ...............................................................................1
Tabel 1. Pengenalan Alat Laboratorium Mikrobiologi ...............................8
BAB IV PEMBIAKAN MIKROORGANISME DAN TEKNIK ISOLASI ......38
Tabel 1. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media NA .............................49
Tabel 2. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media PDA ...........................50
BAB VI UJI KUALITAS AIR DENGAN METODE MPN ...............................67
Tabel 1. Medium KL..................................................................................77
Tabel 2.Medium BGLB .............................................................................77
Tabel 3. Medium MCA .............................................................................78
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Hasil Pewarnaan Gram .........................................................................61
viii
BAB I
PENGENALAN ALAT
1
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Pada saat melakukan praktikum mikrobiologi, tentu saja terlebih

dahulukita perlu mengetahui jenis alat yang akan digunakan pada praktikum
tersebut.Selain itu, kita juga perlu mengetahui prosedur penggunaannya,
carapembersih dan fungsi dari masing-masing alat tersebut. Pada saat sekarang
inialat merupakan salah satu pendukung dari pada keberhasilan suatu
pekerjaandilaboratorium. Sehingga untuk memudahkan dan
melancarkanberlangsungnya praktikum pengetahuan mengenai penggunaan alat
sangatdiperlukan. Pengenalan alat-alat laboratorium penting dilakukan
untukkeselamatan kerja saat melakukan penelitian (Ririn, 2016).
Alat-alat laboratorium biasanya dapat rusak atau bahkan berbahaya

jikapenggunaannya tidak sesuai dengan prosedur. Pentingnya
dilakukanpengenalan alat-alat laboratorium adalah agar dapat diketahui
carapenggunaan alat tersebut dengan baik dan benar, sehingga kesalahan
prosedurpemakaian alat dapat diminimalisasi sedikit mungkin.
Mikroorganisme terdapat dimana saja, hampir disetiap tempat.
Bahkan benda-benda, air minum, makanan kita sehari-hari yang kita anggap sudah
steril dan bersih, setelah diteliti lagi ternyata masih banyak terdapat
mikroorganisme di dalamnya. Keberadaan mikroorganisme ini tentu saja ada yang
membahayakan dan ada juga yang tidak.Media pertumbuhan mikroorganisme
adalah suatu bahan yang terdiri atascampuran nutrisi (nutrient) yang digunakan
oleh suatu mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembangbiak pada media
tersebut.Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media berupa
molekulmolekul kecil yang dirakituntuk menyusun komponen sel-nya.Media
pertumbuhan juga bisa digunakan untuk mengisolasi mikroorganisme,
identifikasi,dan membuat kultur murni. Media berfungsi sebagai tempat tinggal,
sumber makanan, dan penyedia nutrisi bagi mikroorganisme yang akan dibiakan
pada media, selain itu media juga berfungsi untuk membiakkan, mengasingkan,
mengirimkan dan meyimpan mikroorganisme dalam waktu yang lama di
laboratorium. Media berdasarkan sifat terbagi menjadi 3 yaitu Media padat, Media
2
semi padat semi cair, Media cair. Media berdasarkan Komposisi/susunannya
terdiri atas Media Sintesis, semisintesis, dan media non sintesis. Berdasarkan
tujuan yaitu media selektif atau penghambat dan media diperkaya. Jenis Media
yang sering digunakan, yaitu Nutrient Agar, Nutrient Broth (NB), PDA (Potato
Dextrose Agar), Briliant Green Lactose Billbroth (BGLB), EosinMethylene Blue
Agar (Secara umum sterilisasi merupakan proses pemusnahan kehidupan
khususnya mikroba dalam suatu wadah ataupun peralatan laboratorium.
Hal ini dilakukan karena alat- alat yang digunakan pada laboratorium
mikrobiologi memiliki teknik sterilisasi yang berbeda. Oleh karena itu,
diadakanlah praktikum “Pengenalan alat, Pembuatan media dan sterilisasi” ini
guna memberikan pemahaman kepada kita tentang hal-hal yang berkaitan dengan
Alat, sterilisasi dan pembuatan media serta menambah pengetahuan dan
keterampilan tentang teknik atau tata cara sterilisasi dan pembuatan media dalam
mikrobiologi. EMBA).
B. Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dilakukannya percobaan ini adalah :
Untuk mengenal dan mengetahui fungsi dari tiap-tiap alat yang digunakan
dalam praktikum mikrobiologi.
3
TINJAUAN PUSTAKA
A. Mikrobiologi
Mikrobiologi ditripkan sebagai ilmu yang mempelajari mahluk hidup

berukuran mikroskopis meliputi bakteri, algae, protozoa, fungi dan
virus.Mikrobiologi dapat di pandang sebagai ilmu dasar yang mempelajari biologi
dan mikroba, seperti fisiologi, taksonomi, ekologi dan genetika mikroba serta
dapat berperan sebagai ilmu terapan antara lain mikrobilogi pertanian. Fungsi
mikrobiologi pertanian antara lain agar meningkatkan produktivitas pertanian baik
kualitas maupun kuantitas dan dapat menekan kemungkinan bahwa kehilangan
hasil produksi (Tumbas, 2012).
Mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu dari biologi yang mempelajari
tentang organisme yang mikroskopik yakni meliputi bakteri, virus, fungi, alga dan
protozoa. Mikrobiologi boleh dikatakan merupakan ilmu yang masih baru. Dunia
jasad renik barulah ditemukan sekitar 300 tahun yang lalu dan makna
sesungguhnya mengenai mikroorganisme itu barulah dipahami sekitar 200 tahun
kemudian.Selama 40 tahun terakhir, mikrobiologi muncul sebagai bidang biologi
yang sangat berarti karena mikroorganisme digunakan oleh para peneliti dalam
penelaah hampir semua gejala biologis yang utama (Feeyra, 2013).
B. Pengenalan Alat
Kemampuan menggunakan alat laboratorium adalah sikap yang

ditunjukkandalam bekerja dan berfikir untuk mendapatkan pengetahuan sains
pada kegiatan eksperimen di laboratorium untuk mencapai tujuan pembelajaran.
Kemampuan menggunakan alat laboratoriumnya tinggi akan berusaha secara tepat
dan efisienuntuk memahami materi tersebut daripada siswa yang kemampuan
menggunakanalat laboratoriumnya rendah (Manasikana, 2012).
Di dalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari alatalat yang
berada di laboratorium. Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi
hampir sama dengan peralatan-peralatan yang umumnya digunakan di
laboratorium kimia, yaitu berupa alat-alat gelas antara lain: tabung reaksi,cawan
petri, pipet ukur, dan pipet volumetrik, labu ukur, labu erlenmeyer, gelas piala, pH
4
meter, gelas arloji, termometer, botol tetes, pembakar spiritus, kaki tiga dengan
kawat asbes, dan rak tabung reaksi. Di samping peralatan gelas tersebut, pada
laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat yang khusus antara lain:
autoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulum), jarum preparat, gelas objek,
kaca penutup, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk membiakan
mikroorganisme dengan suhu tertentu yang kostan, spektrofotometer untuk
mengukur kepekatan suspensi atau larutan,penangas air untuk mencairkan
medium, magnetik stirrer untuk mengaduk, dan tabung durham untuk penelitian
fermentasi (Alfi, 2013).
Didalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari alat-alat

yang berada di laboratorium. Peralatan yang digunakan pada laboratorium
mikrobiologi hampir sama dengan peralatan-peralatan yang umumnya digunakan
di laboratorium kimia, yaitu berupa alat-alat gelas antara lain: tabung reaksi,
cawan petri, pipet ukur, dan pipet volumetrik, 4 labu ukur, labu erlenmeyer, gelas
piala, pH meter, gelas arloji, termometer, botol tetes, pembakar spiritus, kaki tiga
dengan kawat asbes, dan rak tabung reaksi. Di samping peralatan gelas
tersebut,pada laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat yang khusus
antara lain : autoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulum), jarum preparat,
gelas objek,kaca penutup, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk
membiakan mikroorganisme dengan suhu tertentu yang kostan, spektrofotometer
untuk mengukur kepekatan suspensi atau larutan, penangas air untuk mencairkan
fermentasi. Alat - alat laboratorium mikrobiologi seperti lemari pengeram
(inkubator), autoklav, rak dan tabung reaksi, beker glass, pipet hisap, pipet ukur,
pinset, cawan petri, lidi kapas steril, lampus pritus, ose (Selian, et all, 2013).
Laboratorium merupakan tempat untuk melakukan kegiatan praktikum

atau kegiatan penelitian. Banyak alat-alat yang terdapat di laboratorium baik yang
berbahaya maupun tidak, oleh sebab itu kita harus mengetahui cara penggunaan,
fungsi dan prinsip kerja setiap alat-alat tersebut. laboratorium mempunyai banyak
fungsi diantaranya, sebagai tempat untuk mengasah penalaran (melalui
5
pengamatan, pencatatan dan pemahaman), sebagai sumber belajar, memperdalam
sifat ingin tahu seseorang dan membina rasa percaya diri (Pasaribu, 2013).
Didalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari alat-alat

yang berada di laboratorium. Peralatan yang digunakan pada laboratorium
mikrobiologi hampir sama dengan peralatan-peralatan yang umumnya digunakan
di laboratorium kimia, yaitu berupa alat-alat gelas antara lain: tabung reaksi,
cawan petri, pipet ukur, dan pipet volumetrik, labu ukur, labu erlenmeyer, gelas
piala, pH meter, gelas arloji, termometer, botol tetes, pembakar spiritus, kaki tiga
dengan kawat asbes, dan rak tabung reaksi. Di samping peralatan gelas tersebut,
pada laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat yang khusus antara lain:
autoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulum), jarum preparat, gelas objek,
kaca penutup, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk membiakan
mikroorganisme dengan suhu tertentu yang kostan, spektrofotometer untuk
mengukur kepekatan suspensi atau larutan, penangas air untuk mencairkan
fermentasi (Ardiansyah, 2013).
6
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Praktikum ini dilakukan pada hari Jum’at tanggal 26 Maret 2021 pukul 14.00 –
18.00 WIB dan bertempat di gedung Laboratorium Terpadu Fakultas Sains dan
Teknologi.
B. Alat dan Bahan
Alat :
1. Inkubator 11. Jarum Inokulum?Ose
2. Autoklaf 12. Beker Glass
3. Mikroskop 13. Batang Penyebar
4. Hot plate dan Strirrer Bar 14. Gelas Ukur
5. Colony counter 15. Bunsen
6. Laminar air flow
7. Pipet makro dan tip

8. Cawan petri
9. Tabung reaksi
10. Erlenmeyer
C. Cara Kerja
Pengenalan Alat :
1. Menyiapkan alat-alat yang digunakan dalam praktikum pengenalan alat

mikrobiologi.
2. Mengamati bagian-bagian dari alat tersebut dan mengetahui fungsinya
masing-masing.
3. Demonstrasi penggunaan alat, teknik inokulasi bakteri dan menuang
media
7
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Berikut adalah hasil dari alat-alat yang biasanya digunakan dalam praktikum
mikrobiologi :
Tabel 1. Pengenalan Alat Laboratorium Mikrobiologi

No Nama Alat Kegunaan Alat
1 Untuk menyimpan medium sel

kultur, dan suhu inkubator yaitu
sekitar 37oC. (Zhu, et al., 2015).
Untuk inkubasi media yang telah
ditanami mikrobaa dan untuk
menyimpan bahan pemeriksaan
di mana mikroba yang
terkandung akan mati bila
Inkubator disimpan dalam lemari es.
2. Autoklaf adalah alat pemanas

tertutup yang digunakan untuk
mensterilisasi suatu benda
menggunakan uap bersuhu dan
bertekanan tinggi (121 C, 15 lbs)
selama kurang lebih 15 menit.
Peningkatan tekanan pada autoklaf
tidak dimaksudkan untuk membunuh
mikroorganisme, melainkan
Autoklaf meningkatkan suhu dalam autoklaf .
8
3. Mikroskop adalah alat yang
digunakan untuk menghasilkan
bayangan benda dengan kelipatan
ukuran yang sangat besar. Ukuran
bayangan yang dihasilkan oleh
mikroskop dapat mencapai jutaan
kali ukuran benda aslinya. Mikroskop
digunakan untuk mengamati benda
yang sangat kecil dan benda yang
tidak tampak oleh indra penglihatan
Mikroskop secara langsung.
4. hot plate merupakan salah satu alat

laboratorium yang sering digunakan
dalam sebuah penelitian. Adapun
fungsi dari alat ini ada dua. Pertama,
untuk memanaskan larutan yang
mudah terbakar, dan kedua untuk
menghomogenkan larutan.
Hot Plate
5. Colony counter adalah alat bantu

yang digunakan untu menghitung
koloni bakteri yang ditumbuhkan di
media yang disimpan dalam cawan
petridish. Jenis colony counter ada
yang otomatis dan semi otomatis,
untuk yang otomatis adalah
penghitungan jumlah sudah
dilakukan secara otomatis oleh
Colony Counter sistem komputerisasi.
9
6. Laminar Air Flow adalah sebuah
instrumen laboratorium yang biasa
digunakan untuk melakukan
inokulasi mikrobiologi. Instrumen
yang satu ini bentuknya cukup besar
dan menyerupai meja. Laminar air
flow memiliki nama lain seperti clean
bench, laminar air flow cabinet
Laminar Air Flow ataupun LAF.
7. Fungsi dari mikropipet ini

digunakan untuk memindahkan
cairan dalam jumlah yang
kecil(mikro) secara akurat.
Penggunaan mikropipet sebagai
alat bantu di laboratorium tentu
sangat penting guna mendukung
aplikasi atau expertiment yang
Pipet mikro sedang di kerjakan.
8. Cawan Petri atau telepa Petri adalah

sebuah wadah yang bentuknya
bundar dan terbuat dari plastik atau
kaca yang digunakan untuk
membiakkan sel.
Cawan Petri
10
9. Sebagai media pertumbuhan dan
penampungan cairan lainnya seperti

pelarut selain itu juga dapat dapat
diisidengan media padat, prinsip
kerjanya yaitu pada waktu
memanaskan media yang ada
Tabung reaksi didalam tabung reaksi (Ririn ,2016)
10. Sebagai tempat mereaksikan larutan

dan menyimpan larutan dalam waktu
yang lama
Erlenmeyer
11. Untuk memindahkan/mengambil

koloni suatu mikrobia ke media
yang akan digunakan kembali.
Prinsip kerjanya yaitu ose
disentuhkan pada bagian mikrobia
kemudian menggosokkan pada kaca
preparat untuk diamati (Ririn ,2016)
Jarum Inokulum/ Ose
11
12. Beaker glass berfungsi sebagai
pemanas, misalnya tempat untuk
memanaskan bahan/larutan diatas hot
plate, memanaskan aquades untuk
melarutkan bahan kimia
Beker Glass
13. Batang penyebar digunakan untuk

menyebarkan biakan bakteri yang
terdapat di atas wadah pembiakan.
Bentuknya segitiga kecil. Berfungsi
sebagai alat penyebar
mikrobamikroba
Batang Penyebar
14. Gelas ukur adalah peralatan

laboratorium umum yang digunakan
untuk mengukur volume cairan.
Gelas Ukur
12
15. Bunsen yang digunakan untuk
pemanasaan, sterilisasi, dan
pembakaran.
Bunsen
B. Pembahasan
Berdasarkan hasil pengamatan mengenai pengenalan alat-alat

mikrobiologi, memberi kejelasan pada kita bahwa peralatan mikrobiologi dapat
dikelompokkan kedalam peralatan elektrik, gelas, dan non gelas. Sebagai
praktikkan tentu saja kita harus mengetahui cara prosedur penggunaannya, cara
pembersihannya, dan fungsinya dalam praktikum di dalam laboratorium.
13
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
Pada praktikum kali ini yang dapat disimpulkan ialah :
1. Peralatan yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi terdiri dari:

jarum ose, spreader, bunsen, cawan petri, tabung reaksi, tabung
erlenmeyer, mikropipet,inkubator ,mikroskop, autoklaf,
,pemanas/microwave, kaca preparat dan cover glass, colony counter,
laminar air flow dan spatula
2. Peralatan yang terbuat dari gelas atau kaca meliputi tabung reaksi, cawan
petri, kaca preparat dan cover glass, erlenmeyer dan spreader. Peralatan
yang terbuat dari non gelas, yaitu mikropipet, jarum ose dan spatula.
Peralatan yang bersifat elektrik seperti shake incubator, inkubator
,mikroskop autoklaf, timbangan ,pemanas/microwave, colony counter,
laminar air flow.
3. Peralatan yang digunakan dalam inokulasi bakteri adalah seperti cawan
petri, tabung reaksi, bunsen, LAF, jarum ose, beaker, dan erlenmeyer
B. Saran
Diharapkan semua praktikan dapat hands-on secara langsung dalam demonstrasi

penggunaan alat agar kedepannya lebih mahir dalam praktikum dalam
laboratorium.
14
DAFTAR PUSTAKA
Feeyra. 2013. Penuntun Dasar Dasar Kimia. Jakarta: Lepdikbud
Harti, Agnes. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Andi Offset
Khaeruni, Andi dan Vit Neru Satrah. 2017. Penuntun Praktikum Mikrobiologi
Pangan. Universitas Halu Oleo. Kendari.
Machmud, M. 2013. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai

Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan. Bogor.
Mirsadiq, Lucky. 2013. Laporan Praktikum Migrobiologi Pertanian. Universitas

Sebelas Maret. Surakarta.
Suardani, Dkk. 2014. Identifikasi E Colli 0157:H7 dari Feses Ayam dan Uji Profil
Hemolisisinya Pada Media Agar Darah. Jurnal kedokteran hewan. Vol
8. No. 1.
Suhardi, S.H., Koesnandar, D. K. Indriani, H. Arnaldo 2015. Biosafety: Pedoman

Keselamatan Kerja di Laboratorium Mikrobiologi dan Rumah Sakit.
PT. Multazam Mitra Prima
Ardiansyah. 2013. Blog Ardiansyah. Pengenalan Alat Laboratorium.
http://addhy-ar dhy.blogspot.com/2013/07/pengenalan-alat-alat.html.
Diakses pada Tanggal 6 April 2021
Pasaribu, Devita A. 2013. Blog Devita. Alat Laboratorium.
http://devitapasaribu.blog spot.com/2013/05/laporan-
mikrobiologiumum.html. diakses pada tanggal 6 april 2021
Adrian, Ririn. 2016. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk

Mengatasi Keselamatan Kerja dan Keberhasilan Praktikum. Jurnal
Permatasi, et all, 2013. Uji Pembuatan Marning Jagung dengan Menggunakan

Autoclave. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem. Vol. I.
No.1
15
Safitri,M.F dan Swarastuti, A., 2011,Kualitas Kefir BerdasarkanKonsentrasi Kefir
Grain, Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan, Vol2(2).
Selian L. et all, 2013, Uji Most Probable Number (MPN) dan Deteksi Bakteri
Koliform Dalam Minuman Jajanan yang dijual DiSekolah Dasar
Kecamatan Sukabumi Kota Bandar Lampung
Zhu, S, et all. 2015. Culture at a Higher Temperatire Midly Inhibits Cancer Cell
Grouth but Enhances Chemotherapetic Effect by Inhibiting Cell-Cell
Collaboration. Plos One. 10 (10): 1-17.Mikrobiologi Vol. 1 No. 1. ISSN
: 01A114084
16
BAB II
PEMBUATAN MEDIA
17
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Pada saat melakukan praktikum mikrobiologi, tentu saja terlebih dahulu

kita perlu mengetahui jenis alat yang akan digunakan pada praktikum
tersebut.Selain itu, kita juga perlu mengetahui prosedur penggunaannya, cara
pembersih dan fungsi dari masing-masing alat tersebut. Pada saat sekarang inialat
merupakan salah satu pendukung dari pada keberhasilan suatu pekerjaan
dilaboratorium. Sehingga untuk memudahkan dan melancarkan berlangsungnya
praktikum pengetahuan mengenai penggunaan alat sangatdiperlukan. Pengenalan
alat-alat laboratorium penting dilakukan untuk keselamatan kerja saat melakukan
penelitian (Ririn, 2016).
Mikroorganisme terdapat dimana saja, hamper
disetiap tempat. Bahkan benda-benda, air minum, makanan kita sehari-hari
yang kita anggap sudah steril dan bersih, setelah diteliti lagi ternyata masih
banyak terdapat mikroorganisme di dalamnya. Keberadaan mikroorganisme ini
tentu saja ada yang membahayakan dan ada juga yang tidak. Media pertumbuhan
mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (nutrient)
yang digunakan oleh suatu mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembangbiak
pada media tersebut. Mikroorgansme memanfaatkan nutrisi pada media berupa
molekulmolekul kecil yang dirakituntuk menyusun komponen sel-nya.Media
identifikasi,dan membuat kultur murni. Media berfungsi sebagai tempat tinggal,
laboratorium. Media berdasarkan sifat terbagi menjadi 3 yaitu Media padat, Media
semi padat semi cair, Media cair. Media berdasarkan Komposisi/susunannya
terdiri atas Media Sintesis, semisintesis, dan media non sintesis. Berdasarkan
tujuan yaitu media selektif atau penghambat dan media diperkaya. Jenis Media
yang sering digunakan, yaitu Nutrient Agar, Nutrient Broth (NB), PDA (Potato
Dextrose Agar), Briliant Green Lactose Billbroth (BGLB), EosinMethylene Blue
18
Agar (Secara umum sterilisasi merupakan proses pemusnahan kehidupan
khususnya mikroba dalam suatu wadah ataupun peralatan laboratorium.
Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media berupa
molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel-nya. Media
identifikasi, dan membuat kultur murni. Media berfungsi sebagai tempat tinggal,
laboratorium.
B. Tujuan Praktikum
Berdasrkan latar belakang diatas maka tujuan dari praktikum ini adalah
memahami pembuatan media
19
TINJAUAN PUSTAKA
A. Mikrobiologi

B. Pembuatan Media
Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (zat
makanan) yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba termaksud bakteri patogen.
Selain untuk menumbuhkan mikrobia medium dapat digunakan pula untuk isolasi,
memperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikrobia
(Khaeruni dan Satrah, 2017).
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat makanan atau nutrisi yang diperlukan oleh mikroorganisme
untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi di dalam media
berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel.
Dengan media, pertumbuhan dapat dilakukan dengan isolasi mikroorganisme
menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.
Bahan dasar adalah air (H2O) sebagai pelarut dari agar-agar (rumput laut) dimana
agar-agar tersebut berfungsi sebagai pemadat media (Suhardi, 2013).
20
Media biakan yang mampu mendukung optimalisasi pertumbuhan
milroorganisme harus dapat memenuhi persyaratan nutrisi bagi mikroorganisme.
unsur tersebut berupa garam organik, sumber energy (karbon), vitamin dan zat
pengatur tumbuh (ZPT). Selain itu dapat pula ditambahkan komponen lain seperti
senyawa organik dan senyawa kompleks lainnya (Suardana dkk, 2014).
Media adalah kelangsungan hidup dan pertumbuhan mikroorganisme dipengaruhi
oleh adanya nutrisi dan faktor lingkungan.berdasarkan komposisi atau susunan
bahannya media antara lain :
1. Media alami
2. Media sintesis
3. Media semi sintesis
Berdasarkan bentuknya media dibedakan menjadi sebagai berikut :
1. Media cair
2. Media padat
3. Media semi padat/semisolid
Berdasarkan fungsi atau kegunaanya dibedakan sebagai berikut :
1. Media umum (konvensional)
2. Media khusus (selektif)
3. Media deferensial
4. Media pengaya (modifikasi)
21
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Waktu : Pada hari Jumat Tanggal 26 Maret 2021 Jam 14.00-17.00

Tempat : Laboratorium Terpadu,UIN Raden Fatah Palembang
B. Alat dan Bahan
Alat :
1. Timbangan analitik
2. Gelas ukur
3. Elemeyer
4. Tabung reaksi
5. Kaca pengaduk
6. Autoklaf
Bahan :
1. Aquades
2. Kapas
3. Alumunium foil
4. Alcohol
5. Kentang 200g
6. Dektrosa/gula
7. Agar-agar
8. Kompor gas
C. Cara Kerja
Membuat media umum/konvensional untuk pertumbuhan bakeri (Nutrien

Agar).
1. Membuat media umum/konvensional untuk pertumbuhan bakteri (Nutrient
Agar) :
Beef extract ..........................................10g
Pepton ...................................................10g
Agar-agar ..............................................15g
Aquades ................................................100 ml
22
2. Buat ekstrak daging (daging 0,5kg direbus dalam air 1000ml hingga
volume air menjadi setengah atau direbus selama 1-2 jam
3. Sering ekstrak daging dengan kertas saring, kemudian tambahkan aquades
hingga volume menjadi 1000ml
4. Masukan pepton dan agar-agar dan diaduk sampai homogeny
5. Biarkan diatas api sampai hampir mendidih
6. Masukkan kedalam tabung reaksi sebanyak 5 ml untuk agar miring, dan
disimpan dalam erlenmeyer
7. Semua tabung dan erlenmeyer yang berisi medium ditutup dengan kapas
dan alumunium foil
8. Sterilkan dengan autoklaf
9. Setelah disterilkan tabung reaksi yang berisi 5 ml di miringkan untuk
media agar miring di erlenmeyer di simpan dalam inkubator/water bath
Membuat media umum untuk jamur (Potato Dectrosa Agar)
1. Membuat media umum untuk Jamur (PDA):
Kentang .................................................200 ml
Dektrosa/gula ........................................10 gr
Agar-agar ...............................................15 gr
Aquades .................................................1000 ml
2. Bersihkan kentang lalu dipotong kecil-kecil. Kemudian di masak dalam
500ml aquades. Biarkan mendidih selama 1 jam. Jaga volume agar tetap
3. Sering diekstrak kentang,ambil filtratnya
4. Tambahkan dektrosa sambil/gula sambil dipanaskan dengan menggunakan
api sedang.
5. Tambahkan agar-agar, panaskan dan aduk hingga homogen. Setelah
mendidih diangkat dan masukkan kedalam botol/erlenmeyer
6. Tutup dengan kapas dan alumunium foil, kemudian sterilisasi dengan
autoklaf.
23
A. Hasil
Pembuatan Media NA :
Berbentuk padat, perpaduan antara bahan ilmiah dan senyawa kimia,dibuat
dari campuran ekstrak daging dan pepton dengan menggunakan agar sebagai
pemadat.
Pembuatan PDA :
Digunakan untuk pertumbuhan jamur, dibuat dari campuran kentang,
dexstrosa dan agar.
B. Pembahasan
Dalam pertumbuhan mikroorganisme tergantung dari nutrien media yang

dibuat. Kebanyakan mikroorganisme membutuhkan air. bahan-bahan yang terlarut
di dalam air yang digunakan mikroorganisme untuk membentuk badan sel dan
memperoleh energi yang berasal dari bahan makanan. Perbedaan antara medium
NA dan medium PDA yaitu terdapat pada nutrien penyusunnya. Pada medium
NA, nutrien utama penyusunnya yakni adalah sepotong kaldu sedangkan medium
PDA nutrien utama penyusunnya terdapat pada kentang. Karena itu nutrient ini
dinamakan Potato Dextrose Agar.
Nutrient Agar (NA) merupakan suatu medium yang berbentuk padat, yang
merupakan perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa-senyawa kimia. NA
dibuat dari campuran ekstrak daging dan peptone dengan menggunakan agar
sebagai pemadat. Dalam hal ini agar digunakan sebagai pemadat, karena sifatnya
yang mudah membeku dan mengandung karbohidrat yang berupa galaktam
sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Dalam hal ini ekstrak beef
dan pepton digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan sumber protein,
nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme
untuk tumbuh dan berkembang. Medium Nutrient Agar (NA) merupakan medium
yang berwarna coklat muda yang memiliki konsistensi yang padat dimana
medium ini berasal dari sintetik dan memiliki kegunaan sebagai medium untuk
menumbuhkan bakteri.
24
Medium PDA (Potato Dekstrosa Agar) berdasarkan susunannya
merupakan medium organik semi alamiah atau semi sintetis sebab terdiri dari
bahan alamiahyang ditambah dengan senyawa kimia; berdasarkan konsistensinya
merupakan medium padat karena mengandung agar yang memadatkan medium;
berdasarkan kegunaannya merupakan medium untuk pertumbuhan jamur.
Medium PDA terdiri dari kentang yang berfungsi sebagai sumber energi, nitrogen
organik, karbon dan vitamin, dekstrosa sebagai sumber karbon, agar sebagai
bahan pemadat medium dan aquadest sebagai pelarut untuk menghomogenkan
medium dan sumber O2.
25
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
Kesimpulan yang di dapat setalah melakukan praktikum ini yaitu media

pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-
zat makanan atau nutrisi yang diperlukan oleh mikroorganisme untuk
pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi di dalam media berupa
molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan
media, pertumbuhan dapat dilakukan dengan isolasi mikroorganisme menjadi
kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Bahan
dasar adalah air (H2O) sebagai pelarut dari agar-agar (rumput laut) dimana agar-
agar tersebut berfungsi sebagai pemadat media.
B. Saran
Saran saya dalam praktikum pembuatan media dan sterilisasi adalah agar
para praktikan lebih memperhatikan arahan dari asisten sehingga pada saat
praktikum tidak terjadi kesalahan dan Saran saya kepada pihak laboratorium
untuk melengkapi atau memperbanyak alat-alat laboratorium yang ada, untuk
membuat waktu praktikum yang efisien dan juga hasil yang maksimal.
26
DAFTAR PUSTAKA


Hemolisisinya Pada Media Agar Darah. Jurnal kedokteran hewan. Vol 8.
No. 1.

Ardiansyah. 2013. Blog Ardiansyah. Pengenalan Alat Laboratorium.

http://addhy-ar dhy.blogspot.com/2013/07/pengenalan-alat-alat.html. Diakses
pada Tanggal 6 April 2021
Pasaribu, Devita A. 2013. Blog Devita. Alat Laboratorium.

http://devitapasaribu.blog spot.com/2013/05/laporan-mikrobiologiumum.html.
diakses pada tanggal 6 april 2021
Adrian, Ririn. 2016. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk

Mengatasi Keselamatan Kerja dan Keberhasilan Praktikum. Jurnal
27
No.1
Collaboration. Plos One. 10 (10): 1-17.Mikrobiologi Vol. 1 No. 1. ISSN :
01A114084
28
BAB III
STERILISASI
29
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Pada proses setrilisasi dan penyiapan media ini, kita harus memperhatikan
beberapa hal, tujuanya adalah agar bahan yang kita siapkan tidak terkontaminasi
oleh mikroba yang tidak kita kehendaki. Sterilisasi yang baik dapat mencegah
tumbuhnya mikroba lain yang tidak diharapkan dalam bahan yang telah
disterilisasi. Teknik sterilisasi yang digunakan berbeda antara satu dengan
lainnya, tergantung dari jenis material yang digunakan.
Sterilisasi dalam Mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan
semua mikroorgansime yang terdapat pada atau didalam suatu benda. Ada tiga
cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu menggunakan uap dari air
yang mendidih selama beberapa menit, yang kedua dengan menggunakan
autoklave, atau yang ketiga dengan penyaringan atau filtrasi. Pada proses
setrilisasi dan penyiapan media ini, kita harus memperhatikan beberapa hal,
tujuanya adalah agar bahan yang kita siapkan tidak terkontaminasi oleh mikroba
yang tidak kita kehendaki. Sterilisasi yang baik dapat mencegah tumbuhnya
mikroba lain yang tidak diharapkan dalam bahan yang telah disterilisasi. Teknik
sterilisasi yang digunakan berbeda antara satu dengan lainnya, tergantung dari
jenis material yang digunakan. Alat-alat yang digunakan dalam praktikum
mikrobiologi juga harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman serta bakteri,
virus dan jamur. Untuk mensterilkannya diperlukan pula pengetahuan tentang
cara-cara dan teknik sterilisasi.
B. Tujuan Praktikum
Berdasrkan latar belakang diatas maka tujuan dari praktikum ini adalah
memahami bagaimana sterilisasi alat.
30
TINJAUN PUSTAKA
A. Mikrobiologi

B. Sterilisasi
Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua organism yang

teradapat pada suatu benda. Proses sterilisasi dapat dibedakan menjadi 3 macam,
yaitu penggunaan panas (pemijaran dan udara panas); penyaringan;
penggunaanbahan kimia (etilena oksida, asam perasetat, formaldehida dan
glutaraldehida alkalin) (Mirsadiq, 2013).
Sterilisasi dengan uap air panas, bahan yang mengandung cairan tidak
dapat didterilkan dengan oven sehingga digunakan alat ini. alat ini disebut Arnold
steam sterilizer dengan suhu 1000 C dalam keadaan lembab. Secara sederhana
dapat pula digunakan dandang. Mula-mula bahan disterilkan pada suhu 1000 C
selama 30 menit untuk membunuh sel-sel vegetatif mikrobia. kemudian disimpan
pada suhu kamar 24 jam untuk memberi kesempatan spora tumbuh menjadi sel
vegetatif, lalu dipanaskan lagi 1000 C 30 menit. dan diinkubasi lagi 24 jam dan
disterilkan lagi, jadi ada 3 kali sterilisasi. Banyak bakteri berspora belum mati
31
dengan cara ini sehingga dikembangkan cara berikutnya yaitu uap air bertekanan
(Machmud, 2015).
Sterilisasi merupakan salah satu teknik yang penting dalam bekerja dalam
laboratorium. Teknik labarotorium merupakan kiat-kiat mengenai seluk beluk
laboratorium. Sebelum melakukan praktikum di dalam laboratorium diperlukan
pengenalan mengenai beberapa pengetahuan pokok dan teknik-teknik
laboratorium ini untuk mencegah timbulnya bahaya yang ditimbulkan oleh alat
dan bahan dalam laboratorium maupun kesalahan dalam penggunaan peralatan
(Tim Kimia Dasar, 2012: 1). Dengan sterilisasi, maka kontaminasi dapat
dihindari, baik itu kontaminasi agen biologis, bahan kimia, dan lain-lain.
Kontaminasi dapat menyebabkan terjadinya positif/negatif palsu yang dapat
membuat hasil riset siasia dan tersebarnya agen biologis berbahaya seperti
mikroorganisme patogen yang dapat membahayakan pekerja di laboratorium.
Sterilisasi bahan disebut steril apabila bahan tersebut bebas dari
mikroorganisme. Sterilisasi dapat dilakukan dengan berbagai macam metode ;
metode kimia,mekanik dan fisika.
Sterilisasi secara kimia
Bahan/senyawa kimia mempunyai sifat membunuh mikroorganisme dapat
digunakan untuk sterilisasi (disinfektan), misalnya di bidang kedokteran.
Contohnya alcohol,ditergen,karbol,lisol,merkurokhrom dan lain-lain.
Sterilisasi secara mekanik
Bahan yang tidak boleh dipanaskan seperti serum darah atau beberapa
macam gula tertentu dapat disterilisasi dengan cara filtrasi (penyaringan).
Sterilisasi dengan cara filtrasi mengguanakan suatu saringan yang berpori sangat
kecil (0.22 mikron atau 0,45 mikron) sehingga tertahan pada saringan tersebut.
Sterilisasi secara fisika
Umumnya dilakukan dengan cara pemanasan pada suhu tinggi. Salah satu
contohnya adalah menggunakan alat autoklaf,disterilisasi pada suhu 121°C
dengan tekanan atm/15 psi selama 15 menit.
32
METODE PRAKTIKUM
A.Waktu dan Tempat
Waktu : Pada hari Jumat Tanggal 26 Maret 2021 Jam 14.00-17.00

Tempat : Laboratorium Terpadu, UIN Raden Fatah Palembang
B. Alat dan Bahan
1. Autoclaf
2. Oven
3. BSC
4. Glassware
5. Plastik Tahan Panas
6. Cawan petri
7. Tabung Reaksi
8. Caret Gelang
9. Alumium foil
10. Alkohol
C. Cara Kerja
Sterilisasi Fisika (Autoklaf)

1. Sebelum dihidupkan periksa alat AUTCLAVE-PRESSURE STEAM
STERILIZERS, sudah bersih atau belum.
2. Isi air dalam alat sebatas sarangan.
3. Masukkan bahan-bahan yang akan disterilisasi. Sebelumnya diberi indikator
tanda sudah steril/belum dengan autoclave tape
4. Tutup covernya dengan mencocokan dengan tanda kuncinya
5. Rapatkan kunci-kunci secara diagonal sampai rapat betul. Posisi alat pada
high
6. Tekan power/ ON dengan menutup katup agar uap air tidak keluar.
7. Bila tekanan sudah sampai pada tanda 15 tekanan sudah mencapai 121°C
atau caution
8. Tekan timer selama 15 menit
9. Bila sudah 15 menit, maka katup dibuka bersamaan dengan itu matikan
power
33
10. Bila alat sudah dalam posisi 0, maka buka katu. Biarkan alat dingin dahulu
11. Buka metal to metal secara diagonal. Ambil hasil sterilan, lihat indikator
autclae tape nya.
Sterilisasi cara kimia
1. Sebelum membuka ruangan atau bagian steril di dalam
tabung/cawan/erlenmeyer sebaiknya bagian mulut (bagian yang
memungkinkan kontaminan masuk) dibakar/dilewatkan api terlebih
dahulu.
2. Pinset, batang L,dll dapat disemprot dengan alkohol terlebih dahulu lalu
dibakar
3. Ujung jarum inokulum yang sudah dipijarkan harus ditunggu dingin
dahulu atau dapat ditempelkan tutup cawan bagian dalam untuk
mempercepat transfer panas yang terjadi.
34
A. Hasil
Hasil akhir dari proses sterilisasi sesuai dengan petunjuk praktikum yang
kita dapatkan setelah menginkubasi alat dan bahan ke dalam autoklaf pada suhu
121℃ selama 15 menit, alat dan bahan tersebut menjadi steril (matinya
mikroorganisme yang terdapat pada alat dan bahan).
B. Pembahasan
Dalam pengerjaan praktikum mikrobiologi, diperlukan juga ruangan dan

tempat kerja yang steril. Ruang yang steril merupakan suatu keadaan ruang yang
bebas dari semua bentuk kehidupan mikroba yang patogen maupun yang
nonpatogen. Agar ruangan praktikum tetap steril, lakukanlah sterilisasi rutin
terhadap alat-alat dan tempat kerja. Contohnya meja, semprotkan alkohol 70% ke
meja. Kondisi yang steril juga dapat membantu keberhasilan dalam praktikum
mikrobiologi. Bukan hanya ruang kerja yang steril, tetapi pengerjaan kita dalam
praktikum mikrobiologi juga harus steril serta memakai alat pelindung diri.
Seperti gloves, jas lab, masker serta penutup kepala
Autoklaf adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan bahan yang
menggunakan tekanan 15 psi (2 atm) dan suhu 121oC. Suhu dan tekanan tinggi
yang diberikan kepada alat dan media yang disterilisasi memberikan kekuatan
yang lebih besar untuk membunuh sel dibanding dengan udara panas. Biasanya
untuk mensterilkan media digunakan suhu 121oC dan tekanan 15 lb/in2 (SI =
103,4 Kpa) selama 15 menit. Alasan digunakan suhu 121oC atau 249,8oF adalah
karena air mendidih pada suhu tersebut jika digunakan tekanan 15 psi.
Prinsip Kerja Autoklaf merupakan alat sterilisasi dengan menggunakan
Uap Panas Bertekanan. Yaitu mempunyai tekanan 2 atm/ 15 psi (pounds per
square inci) dan suhu 121°C selama 15 menit untuk bahan dan 20 menit untuk
alat.
35
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
Media yang steril dapat dibuat dengan cara memperhatikan kebersihan

saat membuat media dan setelah media selesai dibuat, maka media tersebut
dimasukkan kedalam autoclave untuk disterilisasi.
B. Saran
Saran saya dalam praktikum pembuatan media dan sterilisasi adalah agar
para praktikan lebih memperhatikan arahan dari asisten sehingga pada saat
praktikum tidak terjadi kesalahan dan Saran saya kepada pihak laboratorium
untuk melengkapi atau memperbanyak alat-alat laboratorium yang ada, untuk
membuat waktu praktikum yang efisien dan juga hasil yang maksimal
36
DAFTAR PUSTAKA

Hemolisisinya Pada Media Agar Darah. Jurnal kedokteran hewan. Vol 8.
No. 1.
No.1
Collaboration. Plos One. 10 (10): 1-17.Mikrobiologi Vol. 1 No. 1. ISSN :
01A114084
37
BAB IV
PEMBIAKAN
MIKROORGANISME
DAN TEKNIK ISOLASI
38
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Mikroorganisme atau mikroba adalah organisme yang berukuran sangat

kecil sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat bantuan. Mikroorganisme
disebut juga organisme mikroskopik. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal
(uniseluler) maupun bersel banyak (multiseluler) Namun, beberapa protista
bersel tunggal masih terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa spesies
multisel tidak terlihat mata telanjang.
Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota,

protista, dan alga renik. Fungi, terutama yang berukuran kecil dan tidak
membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai bagiannya, meskipun banyak
yang tidak menyepakatinya. Kebanyakan orang beranggapan bahwa yang dapat
dianggap mikroorganisme adalah semua organisme sangat kecil yang dapat
dibiakkan dalam cawan petri atau inkubator di dalam laboratorium dan mampu
memperbanyak diri secara mitosis.
Untuk mempelajari morfologi mikroba,kita perlu menangkap dan

membiakkannya pada media agar nutrisi (media padat) terlebih dahulu. Biasanya
mikroba akan tumbuh pada media ini setelah di inkubasi selama 1-2x24 jam
Media adalah suatu bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba baik
di atas maupun di dalamnya, sehingga dapat dipelajari aktifitas mikroba,
pengaruh suatu bahan terhadap pertumbuhan mikroba dan memperoleh zat
tertentu yang dihasilkan oleh mikroba tertentu (Anonim, 2011).
Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan

memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan
tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri
(inokulasi) terlebih dahulu diusahakan agar semua alat yang ada dalam
hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari
terjadinya kontaminasi. Inokulasi adalah menanam inokula secara aseptis ke
dalam media steril baik pada media padat maupun media cair. Inokula
merupakan bahan yang mengandung mikroba atau biakan mikroba baik dalam
keadaan cair maupun padat.
39
Keragaman yang luas dalam hal tipe nutrisi diantara bakteri, diimbangi
oleh tersedianya berbagai macam media yang banyak macamnya untuk
kultuivasinya. Macam media tersebut dapat dibagi berdasarkan bentuknya dan
susunannya. Berdasrkan bentuknya, media dibagi atas medis cair, semi cair dan
padat. Sedang menurut susunannya, media dapat dibagi atas media kompleks
dan media sintetik (Rais, 2011).
Media padat digunakan untuk melihat bentuk koloni, media setengah

padat untuk menguji ada tidaknya mortalitas dan kemampuan fermentasi
sedangkan media cair digunakan untuk membiakkan organism dalam jumlah
besar terutama mikroba yang terdapat dalam jumlah minim dan juga dapat
melihat mikroba yang bersifat aerob, anaerob, anaerob fakultatif dan
mikroaerofil (Anonim, 2011).
B. Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari pembuatan laporan praktikum ini adalah sebagai berikut :
1. Mempelajari morfologi koloni mikroba pada berbagai media agar nutrisi
padat.
2. Mempelajari tata cara mengisolasi bakteri, sehingga diperoleh biakan
murni.
3. Untuk mengetahui teknik pemindahan biakan mikroba dari wadah satu ke
wadah yang lain sehingga tidak bercampur dengan bakteri lain.
40
TINJAUAN PUSTAKA
A. Pembiakan Mikroorganisme
Sifat-sifat suatu koloni ialah sifat-sifat yang ada sangkut-pautnya dengan

bentuk, susunan,permukaan, pengkilatan dan sebagainya. Pengamatan sifat-sifat
ini dapat dilakukan dengan pandangan biasa tanpa menggunakan mikroskop.
Supaya sifat-sifat tersebut tampak jelas, bakteri perlu ditumbuhkan pada medium
padat.
Berikut empat cara menumbuhkan bakteri pada medium padat :
1. Ujung kawat inokulasi yang membawa bakteri digesekkan pada

permukaan media dalam cawan petri sampai meliputi seluruh permukaan,
maka diperoleh piaraan lempengan (plate atau streak culture).
2. Ujung kawat yang membawa bakteri digesekkan pada permukaan media
miring, maka diperoleh piaraan miring (slant culture).
3. Ujung kawat yang membawa bakteri ditusukkan ke dalam media dalam
tabung reaksi sedang permukaan medium ini tidak miring, sehingga
diperoleh piaraan tusukan (Stab Culture).
4. Setetes suspensi bakteri dicampur-adukan dengan media cair, maka
diperoleh piaraan adukan (shake culture).
Pembiakan mikroba dalam laboratorium memerlukan medium yang

berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan
mikroorganisme. Zat hara digunakan oleh mikroorganisme untuk pertumbuhan,
sintesis sel, keperluan energi dalam metabolisme, dan pergerakan. Lazimnya,
medium biakan berisi air, sumber energi, zat hara sebagai sumber karbon,
nitrogen, sulfur, fosfat, oksigen, hidrogen serta unsur-unsur sekelumit (trace
element). Dalam bahan dasar medium dapat pula ditambahakan faktor
pertumbuhan berupa asam amino, vitamin atau nukleotida (Waluyo, 2007).
Media biakan ada yang berbentuk padat, cair dan semi padat . Media
padat adalah media biakan yang dipadatkan dengan agar, ada yang bersifat
reversible (dapat dibalik) seperti agar nutrien dan ada yang bersifat ireversible
(tidak dapat dibalik) seperti serum darah terkoagulasi. Dalam kedokteran, media
padat yang bersifat irreversible paling sering digunakan. Sedang agar nutrient
41
banyak digunakan dalam media lain. Bentuk media lain berupa cair adalah
campuran komponen-komponen zat kimia tertentu dengan air suling, sedang
media yang secara fisik merupakan intermediate antara media cair dan padat,
seperti agar lunak (Rais, 2011).
B. Teknik Isolasi
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba

dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba.
Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel
mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Nur, I. dan
Asnani, 2007).
Mikroorganisme dapat diperoleh dari lingkungan air, tanah, udara,

suubstrat yang berupa bahan pangan, tanaman dan hewan. Jenis
mikroorganismenya dapat berupa bakteri, khamir, kapng dan sebagainya.
Populasi dari mikroba yang ada di linkungan ini sangatlah beraneka ragam
sehinga dalam mengisolasi diperlukan beberapa tahap penanaman sehingga
berhasil diperoleh koloni yang tunggal. Koloni yang tunggal ini kemudian yang
akan diperbanyak untuk suatu tujuan penelitian misalnya untuk menngisolasi
DNA mikroba yang dapat mendeteksi mikroba yang telah resisten terhadap suatu
antibiotik. Atau untuk mengetahui mikroba yang dipakai untuk bioremediasi
holokarbon (Ferdiaz, 1992).
Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari
suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah
metode cawan gores dan metode cawan tuang. Yang didasarkan pada prinsip
pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu. Dengan
anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat
diamati (Afrianto, 2004).
Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara

lain digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri
kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari
satu spesies (Dwidjoseputro, 2005).
42
Menurut Dwidjoseputro (2005), dalam keadaan sebenarnya (di alam
bebas) tidak ada bakteri yang hidup tersendiri terlepas dari spesies lainnya.
Kerapkali bakteri patogen kedapatan bersama-sama bakteri saproba. Yang
terakhir ini boleh disebut penyerbu yang membonceng (secondary invaders).
Mungkin juga bakteri patogen yang membonceng. Untuk menentukan siapa
pembonceng dan siapa yang diboncengi diberikan pedoman “siapa yang
kedapatan di situ lebih dulu, dan siapa yang datang terkemudian”. Untuk
menyendirikan suatu spesies ada dikenal beberapa cara, yaitu:
1. Dengan pengenceran
Cara ini pertama-tama dilakukan oleh Lister dalam tahun 1865. Ia
berhasil memiara murni Streptococcus lactis yang diisolasikannya dari
susu yang sudah masam. Suatu sampel dari suatu suspensi yang berupa
campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung
tersendiri. Dari enceran ini kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lagi.
Dan dari pengenceran yang kedua ini diambil 1 ml untuk diencerkan
lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 0,1 ml untuk
disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar kita akan
mendapatkan beberapa koloni tumbuh dalam medium tersebut, tetapi
mungkin juga kita hanya memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang
demikian ini kita memperoleh satu koloni murni, dan selanjutnya spesies
ini dapat kita jadikan biakan murni. Kalau kita belum yakin, bahwa
koloni tunggal yang kita peroleh itu murni, kita dapat mengulang
pengenceran dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel.
2. Dengan penuangan
Robert Koch (1843 – 1905) mempunyai metode yang lain, yaitu
dengan mengambil sedikit sampel campuran bakteri yang sudah
diencerkan, dan sampel ini kemudian disebarkan di dalam suatu medium
dari kaldu dan gelatin encer. Dengan demikian yang diperoleh hanyalah
suatu piaraan adukan. Setelah medium itu mengental, maka selang
beberapa jam kemudian nampaklah koloni-koloni yang masing-masing
dapat dianggap murni.
3. Dengan pengesekan
43
Metode ini sekarang banyak digunakan, karena tidak begitu
memakan waktu, tapi dengan cara ini maka bakteri anaerob tidak dapat
tumbuh. Jika ujung kawat inokulasi dibengkokkan, kemudian ujung itu
setelah disentuhkan suatu koloni lalu digesekkan pada permukaan
medium padat, maka beberapa waktu kemudian daripada itu (kurang
lebih setelah 12 jam) akan tampaklah koloni-koloni yang letaknya
tersebat di permukaan medium.
4. Dengan mengucilakan satu sel
Pekerjaan ini dilakukan di bawah obyektif mikroskop. Jika
tampak suatu tetesan hanya mengandung satu bakteri, maka dengan lain
mikropipet, tetesan tersebut dipindahkan ke suatu medium encer dengan
maksud supaya bakteri tersebut berbiak dulu. Kemudian dari sini dapat
diperoleh biakan murni.
5. Dengan inokulasi hewan
Metode ini didasarkan atas suatu kenyataan, bahwa tidak semua
bakteri dapat tumbuh di dalam tubuh seekor hewan. Misal kita ambil
dahak dari seseorang yang sedang menderita tbc.
Menurut Dwidjoseputro (2005), sifat-sifat koloni yang tumbuh pada

agaragar lempengan, pada agar-agar miring dan pada tusukan gelatin adalah
sebagai berikut :
a. Sifat-sifat koloni pada agar-agar lempengan mengenai bentuk, permukaan

dan tepi. Bentuk koloni dilukiskan sebagai titik-titik, bulat berbenang, tak
teratur, serupa akar, serum kumparan. Permukaan koloni dapat datar,
timbul mendatar, timbul melengkung, timbul mencembung, timbul
membukit dan timbul berkawah. Tepi koloni ada yang utuh, ada yang
berombak, ada yang berbelah-belah, ada yang bergerigi, ada yang
berbenang-benang dan ada yang keriting.
b. Sifat-sifat koloni pada agar-agar miring. Sifat ini berkisar pada bentuk dan
tepi koloni dan sifat itu dinyatakan dengan kata-kata seperti : serupa
pedang, serupa duri, serupa tasbih, serupa titik-titik, serupa batang dan
serupa akar.
44
c. Sifat koloni tusukan dalam gelatin. Ada bakteri yang dapat mengencerkan
gelatin. Karena itu, maka bentuk-bentuk koloninya juga berbeda-beda.
Lagipula bentuk koloni yang tidak dapat mengencerkan gelatin. Bila
dilihat dari samping koloni yang tidak mengencerkan gelatin dapat serupa
pedang, tasbih, bertonjol-tonjol dan berjonjot. Jika bakteri mampu
mengencerkan gelatin, maka bentuk koloninya dapat serupa kawah, serupa
mangkuk, serupa corong, pundi-pundi dan berlapis.
45
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Praktikum ini dilakukan pada hari Jum’at tanggal 26 Maret 2021 pukul 14.00 –
18.00 WIB dan bertempat di gedung Laboratorium Terpadu Fakultas Sains dan
Teknologi.
B. Alat dan Bahan
Pembiakan Mikroorganisme :
Media Potato Dextro Agar (PDA), media Nutrient Agar (NA), cawan petri,
tabung reaksi, alcohol 70%.
Teknik Isolasi :
Adapun alat dan bahan yang digunakan pada percobaan ini yaitu :
Alat :
1. Cawan petri
2. Pipet tetes
3. Bunsen
4. Erlenmeyer
5. Incubator
6. Colony counter
Bahan :
1. Medium TEA (Touge Ekstrak Agar)

2. Alkohol 70%
3. Kertas Koran
4. Spritus
5. Tissue
C. Prosedur Kerja
1. Cairkan media Nutrient Agar (NA)
46
2. Tuang media yang cair kedalam cawan petri steril dan biarkan hingga
beku.
3. Mikroba dari udara,bukalah cawan petri I selama 5-10 menit, kemudian
tutuplah dengan segera
4. Mikroba dari mulut (percikan ludah), salah seorang anggota kelompok
mengcapkan beberapa kata/batuk-batuk sambil berhadapan dengan media
agar yang terbuka dengan jarak 10cm dari permukaan agar cawan petri II,
kemudian tutuplah dengan segera.
5. Mikroba dari debu, dengan cara mengusap cotton buds yang steril pada
debu diatas meja dan goresan pada lempeng agar pada cawan petri III,
kemudian tutuplah dengan segera.
6. Mikroba rambut, masukkan 1-2 helai rambut ke permukaan lempeng agar
pada cawan petri IV, kemudian tutuplah dengan segera.
7. Inokulasikan pada suhu kamar selama 1-2x24 jam
8. Lakukan pengamatan terhadap koloni mikroba yang tumbuh pada media
lempeng tersebut. koloni bakteri ditandai dengan bentuknya seperti
lender,tetes mentega,atau tetesan sari buah. Sedangkan koloni jamur
ditandai dengan adanya miselium yang berbentuk seperti bulu halus.
9. Lakukan pengamatan mengenai morfologi bakteri dan jamur.
Teknik Isolasi :
1. Menyiapkan tiga buah cawan petri, bunsen dan medium yang digunakan
yaitu TEA serta memberikan label pada cawan petri.
2. Membuka penutup Erlenmeyer (aluminium foil dan kapas penyumbat) dan
memanasi tepi lubang Erlenmeyer hal ini dimaksudkan untuk menghindari
kontaminasi bakteri dari udara karena bagian tersebut akan dialiri medium.
3. Dalam waktu yang bersamaan memanasi tepi cawan petri yang akan
dibuka sebagai tempat menuang cairan atau medium dari Erlenmeyer.
4. Menopang cawan petri dengan tiga jari (jari tengah, kelingking anak jari)
menahan bagian belakang dengan jari telunjuk dan membuka penutup
cawan petri (cukup sedikit terbuka) dengan ibu jari.
47
5. Kemudian melakukan penuangan medium dibagian belakang api bunsen.
Dan mendinginkan medium yang berada dalam cawan petri dengan
keadaan tetap tertutup, sebelum dilakukan isolasi.
6. Memasukkan sampel yang akan diisolasi yaitu dari kotoran gigi, kulit dan
rambut masing-masing kedalam cawan petri yang telah disediakan.
7. Memasukkannya kedalam incubator dan dibiarkan hingga 24 jam.
8. Diamati dengan menggunakan colony counter dan dihitung jumlah
koloninya
48
A. Hasil
Tabel 1. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media NA

No Sampel Gambar Keterangan
1 Rambut Pada media NA
rambut
ditumbuhi
bakteri
2 Udara NA udara tidak

ditumbuhi
apapun setelah di
inkubasi selama
24 jam.
49
Tabel 2. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media PDA
No Sampel Gambar Keterangan
1. Rambut Media PDA pada
rambut
ditumbuhi
bakteri dan fungi
2. Udara
Media PDA pada

udara tidak
ditumbuhi
apapun setelah
diinkubasi
selama 24 jam
Berdasarkan hasil pengamatan bahwa media NA dan PDA pada udara itu
tidak ditumbuhi apapun setelah di inkubasi 24 jam, sedangkan media NA pada
rambut ditumbuhi bakteri dan media PDA rambut ditumbuhi bakteri dan fungi.
50
media biakan adalah media steril yang digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme. Media biakan yang mampu mendukung optimalisasi
pertumbuhan milroorganisme harus dapat memenuhi persyaratan nutrisi bagi
mikroorganisme. Media biakan terdiri atas media padat, media setengah padat
dan media cair. Media padat terdiri atas media tegak, media miring dan media
cawan.
B. Pembahasan
Media biakan adalah media steril yang digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme. Media biakan yang mampu mendukung optimalisasi
pertumbuhan milroorganisme harus dapat memenuhi persyaratan nutrisi bagi
mikroorganisme. Untuk meneliti bakteri di laboratorium, kita harus dapat
menumbuhkan mereka dalam biakan murni. Untuk melakukan hal ini, haruslah
dimengerti jenis-jenis lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi
pertumbuhannya. Dalam laboratorium, lingkungan fisik yang dimaksud adalah
media biakan. Media biakan adalah media steril yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme. Media biakan terdiri dari garam organik,
sumber energi (karbon), vitamin dan zat pengatur tumbuh (ZPT). Selain itu dapat
pula ditambahkan komponen lain seperti senyawa organik dan senyawa
kompleks lainnya.
Dalam pembiakan dikenal adanya media PDA dan Media NA. Media ini
memiliki kesamaan, yakni media yang digunakan untuk membiakkan mikroba.
Namun media ini juga memiliki perbedaan masung-masing. Media PDA (Potato
Dextrose Agar) merupakan media yang digunakan untuk membiakkan jamur dan
bakteri. Menurut Rais (2011) bahwa media PDA adalah medium yang umum
digunakan dalam kultivasi bakteri. Selain karena proses pembuatannya mudah,
juga karena memiliki komposisi yang kompleks bagi perkembangan bakteri,
yaitu nerupa. Dan untuk media NA (Nutrient Agar) merupakan media yang
digunakan untuk membiakkan bakteri dengan tidak rutin. Dalam penggunaannya
bersifat solid dan tahan terhadap suhu tinggi. Bakteri yang tumbuh biasanyan
diatas permukaan sehingga nampak bentuk koloninya. Begitupula yang
dikemukakan Sari (2008) bahwa media NA (Nutrien Agar) fungsi penggunaan
51
medium NA karena komposisinya yang terdiri dari ekstrak daging sapi di
dalamnya yang mengandung protein, karbohidrat, vitamin, dan sedikit lemak,
juga terdapat adanya faktor pertumbuhan yang tidak mampu disintesis
mikroorganisme.
Menurut Manurung (2009) bahwa Nutrien agar adalah medium umum

untuk uji air dan produk dairy. NA juga digunakan untuk pertumbuhan
mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian mikroorganisme
heterotrof. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef,
pepton, dan agar. Na merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam
prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sewage, produk pangan, untuk
membawa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk
mengisolasi organisme dalam kultur murni. Pada pembuatan medium NA ini
ditambahkan pepton agar mikroba cepat tumbuh, karena mengandung banyak
N2.
Dalam praktikum kali ini dilakukan pembuatan media padat, dimana

media padat ini berfungsi untuk membiakkan mikroba dengan jumlah yang
sedikit sehingga memungkinkan untuk pengamatan bentuk koloni. Media padat
mengandung agar sedangkan media cair tidak mengandung agar. Hal ini seperti
yang diungkapkan oleh Waluyo (2007) bahwa media padat diperoleh dengan
cara menambahkan agar-agar. Agar berasal dari ganggang/alga yang berfungsi
sebagai bahan pemadat. Alga digunakan karena bahan ini tidak diuraikan oleh
mikroorganisme, dan dapat membeku pada suhu diatas 45oC. Sedangkan
menurut Rais (2011) bahwa Media padat adalah media biakan yang dipadatkan
dengan agar, ada yang bersifat reversible (dapat dibalik) seperti agar nutrien dan
ada yang bersifat ireversible (tidak dapat dibalik) seperti serum darah
terkoagulasi. Sedang agar nutrient banyak digunakan dalam media lain.
Media padat dibagi tiga jenis yakni media tegak, media miring dan media
cawan. Media tegak (deep tube agar) adalah media yang berfungsi untuk
mengamati jenis mikroba yang bersifat anaerob sedangkan media miring
merupakan media yang digunakan sebagai tempat menggoreskan bakteri yang
bersifat anaerob fakultatif/hidup dipermukaan dan tempat pertumbuhan koloni
52
bakteri. Sedangkan untuk media cawan berfungsi untuk pembiakkan bakteri
aerob yang berkoloni. Hal ini didukung dari hasil penelitian yang dilakukan oleh
Fernando (2011) bahwa media miring yang dibuat, digunakannya untuk
membiakan bakteri anaerob. Sedangkan untuk media cawan dibuktikan oleh
percobaa Nursusilawati (2010) bahwa media cawan untuk pembiakan bakteri
koloni yang hidup dipermukaan (membutuhkan oksigen.
Teknik Isolasi :
Percobaan kali ini membahas cara atau teknik yang biasa digunakan
dalam mengisolasi mikroba dari habitat alaminya. Teknik isolasi
mikroorganisme adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba di luar
lingkungan alamiahnya. Pemisahan mikroorganisme dari lingkungannya ini
bertujuan untuk memperoleh biakan bakteri yang sudah tidak bercampur lagi
dengan bakteri lainnya atau yang disebut biakan murni. Di kehidupan normalnya
atau di habitat alamiahnya mikroba sulit ditemukan dalam bentuk koloni sendiri.
Mikroba ini pasti ditemukan dalam bentuk koloni yang hidup bersama-sama
dengan koloni mikroba yang lainnya. Oleh karena itu, pengisolasian ini
dilakukan.
Metode yang digunakan dalam pembiakan mikroba bermacam -macam

diantaranya, metode cawan gores dan metode cawan tuang. Metode cawan gores
adalah suatu metode yang mempunyai dua keuntungan, yaitu menghemat bahan
dan waktu. Namun untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan
yang memadai yang biasanya di peroleh dari pengalaman. Metode cawan tuang
adalah cara lain untuk memperoleh koloni murni dari populasi campuran
mikroba ialah dengan cara mengencerkan spesimen dalam medium agar yang
telah disterilkan dan dicairkan kemudian didinginkan 50°C yang kemudian
dituang ke cawan petri.
Pengisolasian ini dilanjutkan dengan pembuatan medium tempat mikroba

ini nantinya akan tumbuh atau dengan kata lain membuat habitus sintetisnya.
Medium ini terlebih dahulu disterilkan dengan cara melidah89apikan mulut botol
tempat penyimpanan medium agar tersebut. Begitupun dengan cawan petri itu
sendiri. Sebelum semua prosedur kerja dilakukan terlebih dahulu tangan harus
53
disterilkan menggunakan alcohol 70% yang disemprotkan ke seluruh permukaan
tangan.
Praktikum kali ini adalah mempelajari teknik isolasi mikroba dengan cara
metode cawan tuang. Adapun media yang digunakan yaitu TEA . TEA (Tauge
Ekstrak Agar) merupakan digunakan untuk menumbuhkan jamur (khamir dan
kapang). Medium TEA ini, berdasarkan konsistensinya termasuk dalam medium
(solid medium) dan termasuk dalam medium semi alamiah karena tersusun dari
bahan-bahan alamiah dan bahan sintetik. Serta termasuk dalam medium non-
sintetik karena tersusun dari bahan-bahan organik dan susunan kimianya tidak
dapat ditentukan secara pasti. Berdasarkan fungsinya, TEA termasuk medium
penguji (assay medium), karena dapat digunakan untuk pengujian vitamin, asam-
asam amino, dan lain-lain. Melalui medium ini juga dapat digunakan untuk
mengamati koloni koloni dan bentuk pertumbuhan jamur.
Pada praktikum ini kita mempelajari bagaimana melakukan teknik

inokulasi biakan mikroorganisme pada medium steril sehingga bisa
mendefinisikan bahwa teknik inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri
dari medium lama kemedium baru dengan tingkat ketelitian sangat tinggi dan
dituntut untuk bekerja secara aseptic yaitu bebas dari pengaruh kontaminan
mikroorganisme yang lain. Teknik aseptic dilakukan dengan penyediaan alat-alat
kerja yang steril dan bekerja didekat api Bunsen agar terhindar dari kontaminan
udara.pada waktu inokulasi jarum yang digunakan untuk meindahkan mikroba
harus dipijarkan diatas api segera sebelum dan sesudah melakukan pemindahan.
setelah di inokulasi biakan bakteri disimpan dan diinkubasi dalam lingkungan
yang sesuai untuk petumbuhan.
Setelah diinkubasi selama 48 jam diperoleh hasil pertumbuhan mikroba

pada medium TEA yang digunakan yang ditandai dengan terbentuknya 1 koloni
pada cawan petri yang mengandung mikroba dari kotoran gigi manusia. Pada
cawan petri pertama ini diketahui bahwa terdapat 90kontaminasi berupa
Rhizopus dan Aspergillus. Rhizopus ditandai dengan adanya bulatan-bulatan
warna putih sedangkan Aspergillus ditandai dengan adanya bulatan-bulatan
warna hijau disekitar cawan petri (medium). Kontaminasi ini dikarenakan pada
54
saat pengerjaan tidak dilakukan dengan benar-benar steril sehingga ada mikroba
yang lain yang masuk kedalam medium. Pada cawan petri kedua dengan sampel
mikroba dari kulit diperoleh jumlah koloni sebanyak 11 koloni dengan
kontaminan Rhizopus dan Aspergillus. Dan pada cawan petri ketiga diperoleh 6
koloni dengan sampel mikroba dari rambut. Kontaminan pada cawan petri ketiga
ini adalah Rhizopus, Aspergillus dan Tricoderma.
Berdasarkan percobaan ini berarti medium TEA dapat digunakan untuk

mengisolasi mikroba karena mengandung berbagai komposisi yang mengandung
nutrisi untuk pertumbuhan mikroba.
55
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan percobaan dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa :

1. Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk menumbuhkan
mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya, untuk memperoleh biakan
murni. Biakan murni yaitu mikroba yang sudah tidak bercampur lagi
dengan mikroba lainnya Teknik isolasi haus dilakukan secara steril agar
tidak terkontaminasi oleh mikroba-mikroba lain dari luar.
2. Teknik yang digunakan untuk teknik isolasi mikroba adalah teknik
goresan, yaitu metode goresan radian, langsung dan kuadran.
3. Medium TEA dapat digunakan untuk mengisolasi bakteri dengan teknik
penuangan.
4. Media steril yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme. Media
biakan yang mampu mendukung optimalisasi pertumbuhan
milroorganisme harus dapat memenuhi persyaratan nutrisi bagi
mikroorganisme. Media biakan terdiri atas media padat, media setengah
padat dan media cair. Media padat terdiri atas media tegak, media miring
dan media cawan.
B. Saran
Saran yang dapat saya ajukan pada praktikum pembuatan media dan
larutan pengancer ini adalah sebaiknya untuk alat dan fungsinya diperkenalkan
terlebih dahulu sebelum dilakukan praktikum terutama untuk alat sterilisasi. Hal
ini akan membantu praktikan dalam melakukan praktikum.
56
DAFTAR PUSTAKA
Amrida. 2011. Mikrobiologi Pangan. http://amrida-akkas.blogspot.com/2011/05/

laporan-lengkap-mikrobiologi-pangan.html. Diakses pada tanggal 14
April 2021
Anonim.2010. Jenis-Jenis Pemindahan. http:// www.scrib.com./ doc/403051141.

Diakses pada tanggal 14 April 2021
Anonim, 2011. Penuntun Praktikum Mikrobiolodi Akuatik. Fakultas Perikanan

dan Ilmu Kelautan Univertias Haluoleo. Kendari.
Feni. 2010. Teknik Biakan Murni. http://feni-

mikrobiologi.blogspot.com/2010/12/ desinfektan.html. Diakse pada
tanggal 14 April 2021.
Fernando. 2011. Pembuatan Media Agar Miring. http://www.scribd.com/doc/

39590242/Pembuatan-Medium-Agar-Miring-5. Diakses pada tanggal
14 April 2021
Junaidi. 2009. Pengecetan Bakteri Gram.

http://wawanjunaidi.blogspot.com/2009/07/pengecatan-gram-pada-
bakteri.html. Diakses pada tanggal 14 April 2021.
Krettiawan, Hary. Isolasi

Bakteri.http://www.docstoc.com/docs/27558449/isolasibakteri.
Diakses pada tanggal 14 April 2021.
Kuspriyadani, ratih. 2010. Pengecetan Sederhana, Kapsul dan gram. http://

ratihkuspriyadani.blogspot.com/2010/11/laporanpraktikummikrobiolo
gi -umum.html. Diakses pada tanggal 14 April 2021
Manurung, Pebrin. 2009. Pembuatan Medium dan Sterilisasi. Laporan hasil

Praktikum.
Nursusilawati. 2010. Pembiakan Bakteri Massal Entomopatogen.

http://nursusilawati.blogspot.com/2010_05_01_archive.html. Diakses
pada tanggal 14 April 2021.
57
Afrianto, L., 2004, Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan, Cakrawala
(Suplemen pikiran rakyat untuk iptek), Farmasi FMIPA ITB,
Bandung.
Dwidjoseputro, D., 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi, Djambatan, Jakarta.
Ferdiaz, S., 1992, Mikrobiologi Pangan, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Lay, B.W., 1994, Analisis Mikroba di Laboratorium, PT Raja Grafindo Persada,

Jakarta.
Nur Indriyani, Asnani, 2007, Penuntun Praktikum Mikrobiologi Akuatik,

Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Unhalu, Kendari
58
BAB V
PEWARNAAN GRAM
55
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit, karena
selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri.
Ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitianpenelitian
mikrobiologi. Hal itu untuk mempermudah proses identifikasi bakteri.
Bakteri juga dapat dibedakan melalui teknik pewarnaan gram. Teknik

pewarnaan gram tersebut dapat menghasilkan warna merah dan ungu. Bakteri
gram negatif ditandai dengan pewarnaan ungu sedangkan yang positif berwarna
merah. Hal ini bertujuan untuk memberikan warna pada bakteri pada akhirnya
dapat diidentifikasi dengan mudah.
Pada praktikum proses pewarnaan gram olesan bakteri yang terfiksasi

dikenai larutan-larutan berikut dalam urutannya yaitu ungu kristal, larutan
1yodium, alkohol (bahan pengecat), dan safranin atau beberapa pewarna
tandingan lain yang sesuai. Teknik Pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit tapi
perlu ketelitian dan kecermatan bekerja serta mengikuti aturan dasar yang
berlaku.
Berdasarkan uraian permasalahan di atas, maka perlu dilakukannya

praktikum “Pewarnaan Gram” agar memberikan pemahaman kepada kita tentang
hal-hal yang berkaitan dengan pewarnaan atau pengecatan bakteri untuk
membantu identifikasinya.
B. Tujuan Praktikum
Berdasarkan latar belakang, tujuan yang ingin dicapai pada praktikum ini
adalah :
1. Memahami pengertian pewarnaan bakteri

2. Memahami macam – macam pewarnaan bakteri
3. Memahami teknik pewarnaan gram pada bakteri untuk memisahkan
bakteri gram negatif dan positif.
56
TINJAUAN PUSTAKA
A. Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif
Ditinjau dari komponen penyusun dinding sel bakteri gram positif

relative lebih sederhana berbanding bakteri gram negatif yaitu terdiri dari dua
sampai tiga lapis membrane sitoplasma yang tersusun dari asam teikhik dan
asam teikhouronik berupa polimer yang larut dalam air, sedangkan dinding sel
bakteri negative lebih kompleks dan lebih tebal, tersusun dari peptidoglikon,
lipoprotein dan lipopolisakarida, sehingga dinding sel bakteri gram positif lebih
permeable terhadap senyawa yang bersifat hidrofil dibandingkan sel bakteri
gram negatif.
Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang lebih sederhana, dengan
jumlah peptidoglikan yang relative banyak. Dinding sel bakteri gram negative
memiliki peptidoglikan yang lebih sedikit dan secara structural lebih kompleks.
Membrane bagian luar pada dinding sel gram negatifmengandung
lipopolisakarida, yaitu karbohidrat yang terikat dengan lipid. Diantara bakteri
patogen, yang menyebabkan penyakit, spesies gram negative umumnya lebih
berbahaya dibandingkan dengan spesies gram positif
Respon hambatan mikroba gram positif lebih kuat dibandingkan mikroba

gram negative. Hal ini disebabkan oleh perbedaan komponen penyusun dinding
sel antara mikroba gram positif dan gram negative. Dinding sel mikroba gram
positif banyak mengandung teikoronat serta molekul polisakarida. Komponen
kimia ini melindungi sel dari kegiatan lisis enzim, sedangkan zat – zat lain
menentukkan reaksi sel pada pengecatan gram dan ada pula yang menarik dan
mengikta bakteriofage (Purwani, 2009).
B. Pewarnaan Gram
Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk
membedakan spesies bakteri mejadi dua kelompok besar, yaitu gram positif dan
gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode
tersebut diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian
Gram (1853-1938) yang mengembangkan teknik tersebut pada tahun 1884 untuk
membedakan antara Pneumococcus dan bakteri Klebsiella Pneumonia.
57
Pewarnaan gram dibagi menjadi dua hasil yaitu gram positif dan gram
negatif, tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau kristal
violet. Beberapa bakteri tidak terwarnai dengan pewarnaan gram, karena dinding
selnya mengandung banyak lipid, sehingga digunakan pewarnaan tahan asam
untuk mengidentifikasinya. Pada pewarnaan tersebut sel bakteri akan berwarna
merah tetapi sel jaringan akan berwarna hijau
Pewarnaan Gram dilakukan untuk mengelompokkan bakteri menjadi 2

yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negative. Pada pewarnaan Gram ini,
reagen yang digunakan ada 4 jenis, yaitu kristal violet, iodine, alkohol dan
safranin. Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna ungu dari kristal
violet sehingga ketika diamati mikroskop akan menunjukkan warna ungu
sedangkan bakteri Gram negative tidak dapat mempertahankan warna ungu dari
kristal violet tetapi zat warna safranin dapat terserap pada dinding sel sehingga
akan memperlihatkan warna merah. (Pratita, 2012).
Kelompok bakteri gram negative ditandai dengan sel bakteri yang

berwarna merah saat pengamatan secara mikroskopik. Warna merah tersebut
disebabkan karena hilangnya pewarna kristal violet pada waktu dekolorisasi
dengan alkohol kemudian sel bakteri menyerap pewarna merah yaitu safranin.
Pewarnaan Gram digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri serta

untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negative. Perbedaan warna
pada bakteri gram positif dan gram negatifmenunjukkan bahwa adanya
perbedaan struktur dinding sel antara kedua jenis bakteri tersebut. Bakteri gram
positif memiliki struktur dinding sel dengan kandungan peptidoglikan yang tebal
sedangkan bakteri gram negatifmemiliki sturktur dinding sel dengan kandungan
lipid yang tinggi (Fitri, 2011).
Pengecatan gram dilakukan pada kultur bakteri umur 24 jam yang

ditumbuhkan pada medium padat. Bakteri gram positif akan memberikan warna
ungu ketika diberi cat gram. Warna ungu tersebut terjadi karena dinding sel
bakteri mengikat cat Kristal violet yang diperkuat oleh iodine dan Kristal violet
tersebut tidak akan hilang pada waktu diberi cat peluntur sehingga tidak
58
terpengaruh pada saat diberi cat penutup yang berwarna merah (Romadhon,
2012).
Pewarnaan dilakukan dengan membuat bekasan isolate digelas obyek,

kemudian diwarnai dengan larutan Kristal violet dan yodium secara bergantian
selama beberapa menit dan dicuci dengan aquadest, selanjutnya dicuci dengan
alkohol dan ditetesi dengan larutan cat penutup safranin. Pengamatan 5dilakukan
dengan menggunakan mikroskop, bakteri gram positif akan Nampak berwarna
ungu, sedangkan gram negatifberwarna merah (Purwohadisantoso, 2009).
C. Beberapa Macam Pengecatan Bakteri
Berikut macam pengecatan bakteri menurut Henny dan Seprianto ( 2019 )
1. Pengecatan negatif
Pengecatan dilakukan untuk mewarnai latar belakang preparat dan sel
bakteri itu sendiri tidak terwarnai.
2. Pengecatan sederhana
Pengecatan dilakukan dengan memakai 1 macam larutan ( zat warna biru
metilen/Kristal violet) Sel akan berwarna sesuai dengan jenis cat yang
dipakai.
3. Pengecatan diferensial
Pengecatan ini dilakukan memakai beberapa larutan zat warna/cat,
dengan pengecatan ini bakteri dapat dikelompokkan dalam suatu
kelompok tertentu. Misal pengecatan Gram, pengecatan tahan asam.
4. Pengecatan khusus
Pewarnaan ini dipakai untuk mewarnai bagian-bagian sel bakteri yang
tidak bisa diwarnai dengan pewarnaan biasa. Contoh: pewarnaan spora.
59
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Waktu : Pada hari Jumat tanggal 26 Maret 2021 jam 14.00-17.00

B. Alat dan Bahan
Alat :
1. Mikroskop
2. Bunsen
3. Kaca Objek dan cover glass
4. Pipet tetes
Bahan :
1. Biakan bakteri gram positif dan negatif

2. Crystal violet
3. Larutan Iodin
4. Alkohol 96%
5. Safranin
6. Akuades
7. Minyak immersi
C. Cara Kerja
1. Ambil biakan murni bakteri dengan jarum ose.

2. Letakkan bakteri pada kaca obyek steril, ratakan. Fiksasi kaca obyek
bakteri ke bunsen beberapa kali.
3. Teteskan crystal violet pada bakteri, diamkan selama 30-60 detik. Buang
sisa pewarna dan cuci dengan air. Teteskan iodin, diamkan 1-2 menit. Cuci
kembali dengan air. Tambahkan alkohol pada preparat dan diamkan
selama 20 detik (dekolorisasi). Cuci kembali dengan air mengalir.
Tambahkan safranin, dan diamkan selama 10-20 detik. Cuci dengan air
mengalir. Keringkan preparat hingga kering.
4. Amati preparat pada mikroskop dengan perbesaran 1.000X. Pengamatan
dengan perbesaran ini harus menggunakan minyak immersi.
60
5. Catat hasil pengamatan
61
A. Hasil
Gambar 1. Hasil Pewarnaan Gram
Basil berkoloni, terdapat warna merah yang mendominasi ( bakteri gram

negatif )
B. Pembahasan
Pada praktikum pewarnaan gram ini dilakukan pada sample bakteri ecoli.
Pewarnaan gram bertujuan untuk mengelompokkan bakteri ke dalam bakteri
negatif dan bakteri positif. Isolat bakteri pada sampel ecoli adalah dominan
bakteri gram positif dimana isolat tersebut murni, Karena sedikit bakteri tersebut
terdapat zat warna kristal violet sewaktu proses pewarnaan gram, sehingga
koloni bakteri tampak berwarna ungu atau biru. Salah satu kemungkinan lain
yang menyebabkan warna biru keunguan dan merah muncul bersamaan mungkin
dikarenakan kurangnya pembilasan dengan air.
Warna merah yang mucul menandakan bakteri gram negatif, karena

hilangnya pewarna kristal violet pada waktu dekolorisasi dengan alkohol
kemudian sel bakteri menyerap safranin. Karena bakteri gram negatif
mengandung lipid lebih rendah sehingga dinding sel bakteri akan lebih mudah
8terdehidrasi akibat perlakuan dengan alkohol. Pemberian alkohol berfungsi
62
untuk dekolorisasi bakteri, sehingga menyebabkan zat utama dalam sel muncul.
Dinding sel yang terdehidrasi menyebabkan daya permeabilitasnya berkurang
sehingga zat warna ungu kristal keluar dari sel kemudian sel akan menyerap
safranin (Jayanti, 2010).
Berikut hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pewarnaan gram adalah sebagai
berikut:
1. Fase yang paling kritis dari pewarnaan gram adalah tahap dekolorisasi
yang mengakibatkan iodine lepas dari sel. Pemberian alkohol jangan
sampai berlebih yang akan menyebabkan dekolorisasi yang berlebih
sehingga sel gram positif tampak seperti gram negatif. Namun juga jangan
sampai terlalu sedikit dalam penetesan alkohol yang tidak akan melarutkan
iodine secara sempurna sehingga sel gram negatif seperti gram positif.
2. Preparasi pewarnaan gram terbaik adalah menggunakan kultur muda yang
tidak lebih lama dari 24 jam. Umur kultur akan berpengaruh pada
kemampuan sel menyerap warna utama khususnya pada gram positif.
Mungkin akan menampakkan gram variabel yaitu satu jenis sel, sebagian
berwarna ungu dan sebagian merah karena pengaruh umur.
63
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
Dalam praktikum ini diperoleh kesimpulan bahwa praktikum pewarnaan

gram menggunakan sampel ecoli adalah didapat hasil bakteri gram positif. Hal
ini berarti isolat bakteri murni, kesalahan lain mungkin terdapat karena
kurangnya pembilasan dengan aquadest dan kurangnya ketepatan alkohol pada
saat dekolorisasi.
B. Saran
Saran dari praktikum kali ini yaitu alat dan bahan yang digunakan dapat
berfungsi dengan baik misalnya Mikroskop, diharapkan Mikroskop dapat
dipakai dengan baik. Praktikan dalam penetesan cat juga perlu diperhatikan serta
pengambilan isolate bakteri dengan benar dan aseptis
64
DAFTAR PUSTAKA
Fitri, L., Yekki Y., 2011, Isolasi Dan Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri
Kitinolitik, Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi, Vol. 3 , No. 2.
Jayanti, Mirna W., Bernadetta O., Moch Y., 2010, Karakterisasi Bakteri Toleran
Uranium Dalam Limbah Uranium Fase Organik TBP-Kerosin, Prosiding
Seminar Nasional Teknologi Pengelolaan Limbah IX, Pusat Teknologi
Limbah Radioaktif-BATAN, Fakultas Teknik Universitas Sultan Ageng
Tirtayasa.
Pratita, Maria Yuli E., Surya Rosa P., 2012 , Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Termofilik Dari Sumber Mata Air Panas Di Songgoriti Setelah Dua Hari
Inkubasi, Jurnal Teknik Pomits, Vol. 1, No. 1.
Purwani, Eni, Setyo Wulang N. H., Rusdin R., 2009, Respon Hambatan Bakteri
Gram Positif Dan Negatif Pada Ikan Nila Yang Diaktifkan Dengan
Ekstrak Jahe, Jurnal Kesehatan, Vol. 2, No. 1.
Purwohadisantoso, Kristian, Elok Z., Ella S., 2009, Isolasi Bakteri Asam Laktat
Dari Sayur Kubis Yang Memiliki Kemampuan Penghambatan Bakteri
Patogen, Jurnal Teknologi Pertanian, Vol. 10, No. 1.
Romadhon, Subagiyo, Sebastian M., 2012, Isolasi dan Karaterisasi Bakteri

Asam Laktat dari Usus Udang Penghasil Bakteriosin Sebagai Agen
Antibakteria Produk – Produk Hasil Perikanan, Jurnal Saintek
Perikanan, Vol. 8, No. 1
Saraswati, H dan Seprianto. 2019. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Program

Studi Bioteknologi Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Esa
Unggul [PDF FILE]
65
BAB VI
UJI KUALITAS AIR
DENGAN METODE
MPN
67
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Air merupakan suatu sarana utama untuk meningkatkan derajat kesehatan

masyarakat karena air merupakan salah satu media dari berbagai macam
penularan penyakit. Air bersih adalah air yang jernih, tidak berwarna, tawar dan
tidak berbau. Sumber daya alam yaitu air, dapat diperoleh dari air permukaan
meliputi air sungai, danau, waduk, rawa dan genangan air lainya.
Air merupakan kebutuhan yang paling dibutuhkan di dalam kehidupan

manusia. Air yang ada di alam bukanlah didapat sebagai air murni, melainkan
sebagai air yang mengandung bermacam-macam zat, baik yang terlarut ataupun
tersuspensi. Jenis dan jumlah zat tersebut tergantung dari kondisi lingkungan
sekitar sumbernya.
Air merupakan materi esensial bagi kehidupan makhluk hidup, karena

makhluk hidup memerlukan air untuk mempertahankan kelangsungan hidupnya.
Secara umum fungsi air dalam tubuh setiap mikroorganisme adalah untuk
melarutkan senyawa organik, menstabilkan suhu tubuh dan melangsungkan
berbagai reaksi kimia tingkat seluler.
Pemeriksaan air secara mikrobiologi sangat penting dilakukan karena air

merupakan substansi yang sangat penting dalam menunjang kehidupan
mikroorganisme yang meliputi pemeriksaan secara mikrobiologi baik secara
kualitatif maupun kuantitatif dapat dipakai sebagai pengukuran derajat
pencemaran.
Uji kualitatif Coliform secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji
dugaan (presumptive test), uji penetapan (confirmed test), dan uji pelengkap
(completed test). Metode pengujian yang digunakan adalah metode Most
Probable Number(MPN) atau Jumlah Perkiraan Terbatas (JPT).
Analisis kuantitatif mikrobiologi pada air minum penting dilakukan

untuk mengetahui mutu air minum tersebut. Ada beberapa cara yang dapat
digunakan untuk menghitung atau mengukur jumlah jasad renik dalam suatu
68
suspensi, salah satunya adalah pemeriksaan adanya bakteri Coliform pada
minuman dengan metode MPN (Most Probable Number).
Pemeriksaan derajat pencemaran air secara mikrobiologi umumnya

ditunjukkan dengan kehadiran bakteri indikator seperti Coliform dan Fecal
coli.Bakteri Coliform sebagai suatu kelompok dicirikan sebagai bakteri
berbentuk batang gram negatif, tidak membentuk spora, aerobik,
dan anaerobik fakultatif yang memfermentasi laktosa dengan menghasilkan asam
dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35° C. Berdasarkan hal inilah yang
melatar belakangi dilaksanakannya praktikum ini untuk mengetahui teknik
pengujian kualitas air dengan menggunakan metode MPN sehingga dapat
mengetahui air yang baik untuk dikonsumsi.
B. Tujuan Praktikum
Praktikum ini bertujuan agar mahasiswa mampu mengetahui kualitas air

secara mikrobiologis dengan menggunakan metode MPN (Most Probable
Number).
69
TINJAUAN PUSTAKA
A. Bakteri Kolifrom
Bakteri Coliform adalah jenis bakteri yang umum digunakan sebagai

indikator penetuan kualitas sanitasi makanan dan air. Coliform sendiri
sebenarnya bukan penyebab dari penyakit-penyakit bawaan air, namun bakteri
jenis ini mudah untuk dikultur dan keberadaannya dapat digunakan sebagai
indikator keberadaan organisme patogen seperti bakteri lain, virus atau protozoa
yang banyak merupakan parasit yang hidup dalam sistem pencernaan manusia
serta terkandung dalam feses. Organisme indikator digunakan karena ketika
seseorang terinfeksi oleh bakteri patogen, orang tersebut akan mengekskresi
organisme indikator jutaan kali lebih banyak dari pada organisme patogen. Hal
inilah yang menjadi alasan untuk menyimpulkan bila tingkat keberadaan
organisme indikator rendah maka organisme patogen akan jauh lebih rendah atau
bahkan tidak ada sama sekali. Bakteri Coliform dijadikan sebagai bakteri
indikator karena tidak patogen, mudah serta cepat dikenal dalam tes
laboratorium serta dapat dikuantifikasikan, tidak berkembang biak saat bakteri
patogen tidak berkembang biak, jumlahnya dapat dikorelasikan dengan
probabilitas adanya bakteri patogen, serta dapat bertahan lebih lama daripada
bakteri patogen dalam lingkungan yang tidak menguntungkan (Colome, 2001).
Bakteri Coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik

lain. Lebih tepatnya, sebenarnya, bakteri Coliform feka adalah bakteri indikator
adanya pencemaran bakteri patogen. Penentuan Coliform fekal menjadi indikator
pencemaran dikarenakan jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan
keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah,
cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Contoh bakteri
Coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, Coliform
adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan Coliform, artinya,
kualitas air semakin baik. (Friedheim, 2001). Eschericia coli, merupakan anggota
Coliform yang dapat dibedakan dari bakteri Coliform lain karena
kemampuannya memfermentasikan laktosa pada suhu 44°C (pada JPT hal ini
70
dilakukan pada tahap terakhir atau saat uji kelengkapan). Pengidentifikasian
dapat dilihat dari pertumbuhan dan reaksi yang memberikan warna berbeda pada
media kultur khusus. Saat dikulutur pada media EMB, hasil positif E. coli adalah
koloni berwarna hijau metalik. Tidak seperti golongan Coliform pada umumnya,
E. coli merupakan bakteri yang berasal dari feses dan kehadirannya efektif
mengkonfirmasi adanya kontaminasi fekal pada badan air. Umumnya, pada
feses, E. coli ada sebanyak 11% dari Coliform .
B. Metode MPN ( Most Probable Number)
Jumlah mikroorganisme dapat dihitung melalui beberapa cara, namun

secara mendasar dapat dikelompokkan menjadi dua yaitu perhitungan langsung
dan tidak langsung. Perhitungan secara langsung dapat mengetahui beberapa
jumlah mikroorganisme pada suatu bahan pada suatu saat tertentu tanpa
memberikan perlakuan terlebih dahulu, sedangkan jumlah organisme yang
diketahui dari cara tidak langsung terlebih dahulu harus memberikan perlakuan
tertentu sebelum dilakukan perhitungan. Perhitungan secara langsung, dapat
dilakukan dengan beberapa cara antara lain adalah dengan membuat preparat
dari suatu bahan (preparat sederhana diwarnai atau tidak diwarnai) dan
penggunaan ruang hitung (counting chamber). Sedangkan perhitungan cara tidak
langsung hanya untuk mengetahui jumlah mikroorganisme pada suatu bahan
yang masih hidup saja (viable count). Dalam pelaksanaannya, ada beberapa cara
yaitu, perhitungan pada cawan petri (total plate count/TPC), perhitungan melalui
pengenceran, perhitungan jumlah terkecil atau terdekat (Metode MPN) dan
kalorimeter (cara kekeruhan atau turbidimetri). Metode perhitungan MPN sering
digunakan dalam pengamatan untuk menghitung jumlah bakteri yang terdapat di
dalam tanah seperti Nitrosomonas danNitrobacter. Kedua jenis bakteri ini
memegang peranan penting dalam meningkatkan pertumbuhan dan produksi
tanaman, sehubungan dengan kemampuannya dalam mengikat N2 dari udara dan
mengubah amonium menjadi nitrat (Suriawiria, 2005).
Metode MPN merupakan salah satu metode perhitungan secara tidak

langsung. Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumptive
71
test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test).
Dalam uji tahap pertama, keberadaan Coliform masih dalam tingkat probabilitas
rendah, masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif Coliformdalam
sampel (Suriawiria, 2005).
Dalam metode MPN, pengenceran harus dilakukan lebih tinggi daripada

pengenceran dalam hitungan cawan, sehingga beberapa tabung larutan hasil
pengenceran tersebut mengandung satu sel jasad renik. Beberapa tabung
mungkin mengandung lebih dari satu sel, sedangkan tabung lainnya tidak
mengandung sel. Dengan demikian setelah inkubasi diharapkan terjadi
pertumbuhan pada beberapa tabung yang dinyatakan sebagai tabung positif
sedang tabung lainnya negatif. Metode MPN biasanya digunakan untuk
menghitung jumlah mikroba di dalam contoh yang berbentuk cair, meskipun
dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan melakukan
pengenceran terlebih dahulu. Metode MPN merupakan uji deretan tabung yang
menyuburkan pertumbuhan Coliform sehingga diperoleh nilai untuk menduga
jumlahColiform dalam sampel yang diuji. Uji positif akan menghasilkan angka
indeks. Angka ini disesuaikan dengan tabel MPN untuk menentukan jumlah
Coliform dalam sampel (Adam, 2001).
Untuk metode MPN (most probable number) digunakan medium cair

dalam wadah berupa tabung reaksi, perhitungan di lakukan berdasarkan jumlah
tabung yang positif yaitu tabung yang mengalami perubahan pada mediumnya
baik itu berupa perubahan warna atau terbentuknya gelembung gas pada dasar
tabung durham. Pada metode perhitungan MPN ini digunakan bentuk tiga seri
pengenceran, yang pertama 10-1, 10-2 dan 10-3. Kemudian dari hasil perubahan
tersebut dicari nilai MPNnya pada tabel nilai MPN, dan untuk jumlah bakterinya
maka digunakan rumus (Cowan, 2004).
C. Air
Air merupakan bahan esensial bagi hidupnya organisme, oleh karena itu
air selalu penuh dengan benda-benda hidup. Manusia dan makhluk-makhluk lain
yang tidak hidup di dalam air senantiasa mencari tempat-tempat tinggal dekat air
72
supaya mudah mengambil air untuk keperluan hidupnya, maka desa atau kota
zaman dulu tumbuh di sekitar sumber air, di tepi sungai, atau di tepi danau.
Sesudah manusia lebih maju, tempat tinggalnya tidak perlu dekat air dengan
sumber jauh yang disalurkan dengan pipa dan didistribusikan. Pentingnya air di
dalam tubuh manusia, berkisar antara 50%–70% dari seluruh total berat badan.
Tulang manusia mengandung air sebanyak 22% berat tulang, dalam darah dan
ginjal sebanyak 83%. Pentingnya air bagi kesehatan dapat dilihat dari jumlah air
yang ada di dalam organ, 80% dari darah terdiri atas air, dalam tulang
mengandung 25%, sedangkan dalam urat syaraf terdapat 75% air, dalam ginjal
mengandung 80% air, dalam hati 70% air, dan otot 75% air. Kekurangan air
menyebabkan penyakit batu ginjal dan kandung kemih, karena terjadi kristalisasi
unsur-unsur yang ada di dalam cairan tubuh. Kehilangan air sebanyak 15% dari
berat badan dapat mengakibatkan kematian. Kebutuhan minum orang dewasa
adalah minimum 1,5–2 liter air sehari (Prescott, 2003).
Air merupakan komponen esensial bagi kehidupan jasad hidup. Akan

tetapi dapat juga merupakan suatu substansi yang membawa malapetaka, karena
air dapat membawa mikroorganisme patogen dan zat-zat kimia yang bersifat
racun .Banyaknya kontaminan dalam air memerlukan standar tertentu untuk
menjamin kebersihannya. Air yang terkontaminasi oleh bakteri patogen saluran
cerna sangat berbahaya untuk diminum. Hal ini dapat dipastikan dengan
penemuan organisme yang ada dalam tinja manusia atau hewan dan yang tidak
pernah terdapat bebas di alam. Ada beberapa organisme yang termasuk kategori
ini, yaitu bakteri Coliform (Escherichia coli), Enterococcus faecalis,dan
Clostridium. Di Indonesia, bakteri indikator air terkontaminasi adalah
Escherichia coli (Fardiaz, 2002).
73
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Waktu : pada hari jumat tanggal 26 Maret 2021 jam 14.00-17.00
B. Alat dan Bahan
Alat :
1. Botol dengan volume 100 ml

2. LAF (Laminar Air Flow)
3. Tabung reaksi kecil
4. Tabung Durham
5. Vortex
6. Gelas ukur 10 ml
7. Pipet ukur
8. Lampu spiritus
9. Inkubator
10. Rak tabung reaksi
Bahan :
1. Sampel air minum

2. Aquades steril
3. Medium KL (Kaldu Laktose)
4. Medium BGLB (Briliant Green Lactose Bile Broth)
5. Medium MCA (Mac Conkey Agar)
6. Alkohol 70%
7. Lisol
8. Sabun cuci
9. Koro api
10. 10.Lap
74
C. Cara Kerja
Tes Pendugaan :
1. Menyediaan 100 ml sampel air sumur yang akan diperiksa. Menyiapkan

juga 3 buah tabung reaksi berisi 9 ml aquades steril dan 9 buah tabung
reaksi berisi tabung Durham yang telah diisi 3 ml medium kalsu lactose
2. Secara aseptik menginokulasikan 1 ml sampel air sumur ke dalam tabung

reaksi berisi 9ml aquades steril dan 9 lalu mengocok tabung tersebut
sehingga diperoleh pengenceran sebesae 10-1
3. Melakukan pengenceran dengan cara yang sama sehingga diperoleh

pengenceran 10-2 dan 10-3
4. Menyiapkan 9 tabung reaksi berisi medium kaldu laktose, memberi kode

A1, A2, A3, B1, B2, B3, C1, C2, dan C3. Memasukkan 1ml sampel
dengan pengenceran 10-1 ke dalam tabung A1, A2, A3. Memasukkan
1ml sampel dengan pengenceran 10-2 ke dalam tabung B1, B2, B3.
Memasukkan 1 ml sampel dengan pengenceran 10-3 ke dalam tabung
C1, C2, dan C3
5. Menginkubasikan semua taung reaksi pada suhu 370 C selama 1x24 jam.
Jika timbul gas dalam tabung Durham pad abagian dasar, maka
melakukan tes penegasan. Jika tidak ada gas, menunggu hingga 1x24
jam berikutnya. Jika tetap tidak ada gas, maka sampel air minum tersebut
tidak perlu diperiksa lebih lanjut
Tes Penegasan :
1. Melakukan inokulasi air minum yang menghasilkan gasa pada tes

pendugaan. Memperlakukan seperti pada tes pendugaan, tetapi medium
yang digunakan ialah BGLB (Briliant Green Lactose Bile Broth)
sebanyak 9 tabung reaksi @3ml
75
2. Memasukkan semua tabung reaksi tersebut ke dalam inkubator pada
suhu 440C selama 1x24 jam. Jika terdapat gas pada bagian dasar tabung
Durham, berarti dalam sampel air minum terdapat bakteri Coliform fekal.
Jika tidak ada gas, maka menunggu sampai 2x24 jam. Jika ada gas,
berarti sampel air tersebut mengandung bakteri Coliform fekal. Untuk
mengetahui nilai MPN bakeri coliform yang tergantung dalam sampel air
minum ini, kita dapat melihat dalam tabel MPN.Menghitung nilai MPN
Coliform berdasarkan rumus.
Tes Kepastian :
1. Menginokulasikan 0,1 ml sampel air minum padamasing-masing tingkat

pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3 pada medium Mac Conkey Agar (MCA),
kemudian inkubasikan pada suhu 370C selam 1x24 jam atau 2x24 jam
2. Lalu mengamati koloni bakteri yang tumbuh pada permukaan medium.

Koloni yang berwarna merah merupakan koloni bakteri yang
memfermentasikan laktose, sedang koloni yang tidak berwarna merah
merupakan koloni bakteri yang tidak memfermentasikan laktose.
3. Menghitung jumlah koloni bakteri kedua kelompok bakteri ini,

berdasarkan tingkat pengenceran, lalu hitung reratanya.
76
A. Hasil
Tabel 1. Medium KL
Medium Ada/tidaknya gelembung

KL
A1 √
A2 -
A3 -
B1 -
B2 √
B3 -
C1 -
C2 -
C3 -
Tabel 2. Medium BGLB

Medium
Ada/tidaknya gelembung
BGLB
A1 -
A2 -
A3 -
B1 -
B2 √
B3 -
C1 √
C2 -
C3 √
77
Tabel 3. Medium MCA
Medium Ada/tidaknya koloni
MCA berwarna merah
1 -
2 -
3 -
Berdasarkan data yang diperoleh, didapatkan nilai MPN pada tiap-tiap uji
dengan medium tertentu.
Pada medium KL, didapatkan nilai MPN dari perhitungan sebagai berikut:
Sedangkan pada medium BGLB, didapatkan nilai MPN dari perhitungan sebagai
berikut:
Dan pada medium MCA, didapatkan nilai sebagai berikut :
78
B. Pembahasan
Dalam pengujian mengenai kualitas air, dilakukan tiga tahap pengujian.

Tahap pertama yaitu Uji Pendugaan dengan menggunakan medium KL (Kaldu
Laktose). Uji pendugaan ini dilakukan untuk mengetahui ada atau tidaknya
mikroorganisme pada air dengan indicator ada atau tidaknya gelembung pada
medium dalam waktu 1x24 jam. Berdasarkan data yang diperoleh dalam uji ini,
diketahui terdapat dua seri tabung yang tampak adanya gelembung. Yaitu pada
seri tabung A1 dan B2 dari 3 seri tabung (A, B, dan C). Dimana A merupakan
tingkat pengenceran pertama, B merupakan tingkat pengenceran kedua, dan C
merupakan tingkat pengenceran ketiga). Dapat diambil kesimpulan untuk uji
pendugaan pada sampel air A1 dan B2 ditemukan mikroba yang mampu
memfermentasiakan laktosa dimana bearti mikroba tersebut menghasilkan gas
pada tabung Durham. Terbentuknya gelembung gas dalam tabung Durham
disebabkan karena adanya mikroba pembentuk gas (Fardiaz S., 1992). Didukung
oleh sumber lain bahwa timbulnya gas disebabkan karena kemampuan bakteri
coliform yang terdapat pada sampel air dalam memfermentasikan laktosa dengan
menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam dan pada suhu 350 C (Pelczar
dan Chan., 2006). Dengan demikian didapatkan nilai MPN tabel sebesar 0,073.
Sedangkan nilai MPN Colliform sebesar 7,3 sel/ 100 ml.
Tahap kedua adalah uji kepastian. Dalam uji ini digunakan medium
BGLB (Brilliant Green Lactose Bile Broth). Menurut Dwijoseputro, hijau
berlian yang terdapat pada uji kepastian berguna untuk menghambat
pertumbuhan bakteri Gram positif dan menggiatkan pertumbuhan bakteri
golongan kolon dengan melihat ada atau tidaknya gas sebelum 48 jam berakhir.
Dengan demikian hanya bakteri golongan kolon saja yang dapat tumbuh di
medium ini (Dwijoseputro, 2005). Setelah 2x24 jam didapatkan data yang
diperoleh , diketahui bahwa dari ketiga seri tabung, hanya tabung B dan C yang
menunjukkan hasil positif sedangkan A tidak. Padahal pada uji pendugaan, hasil
79
positif ditunjukkan oleh tabung A dan B sedangkan C tidak. Ini berarti pada
sampel air di tabung A terdapat mikroorgaisme gram positif dan bukanlah
bakteri golongan kolon. Pada tabung seri B terdapat mikroorganisme golongan
kolon. Sedangkan pada tabung seri C pada uji pendugaan tidak terdapat
gelembung namun pada uji kepastian pada tabung C terdapat gelembung yang
menunjukkan bahwa pada tabung C terdapat bakteri golongan kolon. Ketidak
sesuaian hasil pada uji pendugaan dengan uji kepastian pada tabung C mungkin
disebabkan oleh kurang telitinya pengamat sehingga pengamat tidak melihat
adanya gelembung pada uji pendugaan untuk tabung seri C. Faktor lain yang
mungkin menjadi penyebab ketidak sesuaian ini adalah pada pengamatan 1x24
jam pada medium KL gelembung belum tampak/muncul sehingga seolah-olah
uji pendugaan pada tabung C menunjukkan hasil negatif.
Tahap pengujian yang ketiga yakni pengujian dengan medium MCA

(Mac Conkey Agar). Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya
bakteri E.coli pada sampel air yang diuji dengan melihat ada tidaknya koloni
E.coli berwarna merah. Dari data yang kami peroleh mengenai uji ini diketahui
bahwa pada sampel air yang di uji tidak ditemukan adanya E.coli.
Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas

air minum. Kelompok bakteri coliform terdiri atas Eschericia coli, Enterobacter
aerogenes, Citrobacter fruendii, dan bakteri lainnya. Meskipun jenis bakteri ini
tidak menimbulkan penyakit tertentu secara langsung, keberadaannya di dalam
air menunjukkan tingkat sanitasi rendah. Oleh karena itu, air yang akan
dikonsumsi harus bebas dari semua jenis coliform. Semakin tinggi tingkat
kontaminasi bakteri coliform, semakin tinggi pula risiko kehadiran bakteri-
bakteri patogen lain yang biasa hidup dalam kotoran manusia dan hewan. Salah
satu contoh bakteri patogen-yang kemungkinan terdapat dalam air
terkontaminasi kotoran manusia atau hewan berdarah panas-adalah Shigella,
yaitu mikroba penyebab gejala diare, deman, kram perut, dan muntah-muntah
(Fardiaz,1989).
80
Jenis bakteri coliform tertentu, misalnya E. coli O:157:H7, bersifat
patogen dan juga dapat menyebabkan diare atau diare berdarah, kram perut,
mual, dan rasa tidak enak badan (Dad,2000).
Pengamatan uji kualitas air kali ini, digunakan metode MPN (Most
Probable Number ). Di mana metode ini terdiri atas tiga tahap, yaitu uji
pendugaan, uji penegasan, dan uji penguatan.
Uji tahap pertama (pendugaan), menggambarka keberadaan coliform

masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini
mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis
bakteri selain coliform juga memiliki sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi
untuk mengetes kembali kebenaran adanya coliform dengan bantuan medium
selektif diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji konfirmasi
dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan mikroskop terhadap ciri-
ciri coliform: berbentuk batang, gram negatif, tidak-berspora (Fardiaz,1989).
Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan
jumlah unit tumbuh (growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming
unit) dalam sampel. Namun, pada umumnya, nilai MPN juga diartikan sebagai
perkiraan jumlah individu bakteri. Satuan yang digunakan, umumnya per 100
mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai MPN 10/g dalam sebuah sampel
air, artinya dalam sampel air tersebut diperkirakan setidaknya mengandung 10
coliform pada setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN, maka air tersebut makin
tinggi kualitasnya, dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit
kepercayaan 95% sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai
MPN terendah dan nilai MPN tertinggi (Fardiaz,1989).
Metode MPN ini menggunakan medium cair di dalam tabung reaksi,

yang perhitungannya dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif setelah
diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat
dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas pada tabung
Durham untuk mikroba pembentuk gas, seperti E. coli. Metode MPN ini
biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam sampel cair,
81
dapat pula dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba untuk sampel yang
bentuknya padat, dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1:10 dari sampel
tersebut.
Menurut Dwidjoseputro (1989), air tanah mangandung zat-zat anorganik

maupun zat-zat organic yang merupakan tempat yang baik bagi pertumbuhan
dan perkembangan mikroorganisme (kehidupan mikroorganisme).
Mikroorganisme yang autotrof merupakan penghuni pertama dalam air yang
mangandung zat-zat anorganik. Sel-sel yang mati merupakan bahan organic yang
memungkinkan kehidupan mikroorganisme yang heterotrof. Temperatur juga
ikut menentukan populasi mikroorganisme di dalam air. Pada temperature sekitar
30°C merupakan temperatur yang baik bagi kehidupan bakteri patogen yang
berasal dari hewan maupun manusia. Sinar matahari (terutama sinar ultraviolet)
memang dapat mematikan bakteri, akan tetapi daya tembus sinar ultraviolet ke
dalam air tidak maksimal. Air yang berarus deras kurang baik bagi kehidupan
bakteri. Hal ini berkaitan dengan tidak maksimalnya perkembangbiakan bakteri,
karena kebanyakan bakteri memerlukan media/ substrat yang tenang untuk
perkembangbiakannya (Dwijoseputro, 1989).
Masalah air bersih yang kurang memenuhi syarat sangat berpengarauh

terhadap kualitas produk. Sebagai contoh di dalam industri minuman, jika air
yang digunakan kurang baik maka produk yang dihasilkan juga kurang baik,
apalagi jika air yang digunakan tidak steril maka produk yang dihasilkan dapat
terkontaminasi oleh mikroorganisme patogen yang mana dapat membayakan
konsumen (Fardiaz,1989). Berdasarkan hasil nilai MPN yang kami lakukan,
maka nilai tersebut menunjukkan bahwa sampel yang kami uji kurang layak
untuk diminum. Namun, dimungkinkan pula terjadi
Kesalahan praktikan saat praktikum, dimana kurangnya praktikan dalam

memperhatikan teknik aseptic. Jadi, coliform adalah indikator kualitas air. Makin
sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin baik.
82
PENUTUPAN
A. Kesimpulan
MPN adalah suatu teknik enumerasi pada mikrobia (dalam hal ini
coliform fecal), pada suatu bahan cairan. Metode MPN terdiri dari tiga tahap,
yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji
kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan coliform
masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Organisme
kelayakan konsumsi air atau bahan pangan cair adalah kelompok bakteri
koliform yaitu: spesies Escherichia coli, Enterobacter dan Klebsiella.
Semakin tinggi nilai MPN suatu air maka semakin banyak bakteri
koliform pada air tersebut.
B. Saran
Adapun saran yang dapat ingin disampaikan adalah sebaiknya di dalam

pelaksanaan praktikum kali ini waktu yang telah ditetapkan digunakan sebaik-
baiknya sehingga praktikum dapat berjalan sesuai dengan apa yang
diinginkan. Selain itusampel yang diujikan dapat diganti untuk praktikum
selanjutnya, sehingga dapat diketahui kualitas air yang diujikan selanjutnya.
Sebelum kita menggunakan atau mengkonsumsi air dari dari sumber

tertentu alangkah baiknya apabila diperiksa terlebih kandungan apa saja yang
terdapat dalam air tersebut karena apabila air mengandung bakteri patogen tentu
dapat mengganggu kesehatan tubuh.
83
DAFTAR PUSTAKA
Colome,JS. Et al. 2001. Laboratory Exercises in Microbiology. West

Publishing Company. New York
Cowan,ST. 2004. Manual for the Identification of Medical Fungi. Cambridge

University Press. London.
Dad.2000.Bacterial Chemistry and Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New
York, p. 426.
Dwijoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Penerbit Jambatan.
Fardiaz, S.,.1989. Analisis Mikrobiologi Pangan, Departemen Pendidikan dan

Kebudayaan,IPB.
Prescott, L.M. 2003. Microbiology. Mc Graw Hill. New York
Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti. Jakarta.
S. Budiarti, Retni dan Harlis. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Lingkungan
84

Mikrobiologi Praktikum

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Mikrobiologi Praktikum

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

RIRI NOVITA SUNARTI,M.Si

PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI RADEN FATAH PALEMBANG

Assalamualaikum wr wb, segala puji bagi Allah yang telah memberikan

Saya juga mengucapkan terima kasih kepada semua pihak khususnya

Demikian, semoga Laporan Praktikum ini dapat bermanfaat. Terima kasih.

Palembang,14 Juni 2021

KATA PENGANTAR .............................................................................................. i

BAB I PENGENALAN ALAT ...............................................................................1

Tabel 1. Pengenalan Alat Laboratorium Mikrobiologi ...............................8

BAB IV PEMBIAKAN MIKROORGANISME DAN TEKNIK ISOLASI ......38

Tabel 1. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media NA .............................49

Tabel 2. Pembiakan Mikroorganisme Pada Media PDA ...........................50

BAB VI UJI KUALITAS AIR DENGAN METODE MPN ...............................67

Tabel 1. Medium KL..................................................................................77

Tabel 2.Medium BGLB .............................................................................77

Tabel 3. Medium MCA .............................................................................78

Gambar 1. Hasil Pewarnaan Gram .........................................................................61

Pada saat melakukan praktikum mikrobiologi, tentu saja terlebih

Alat-alat laboratorium biasanya dapat rusak atau bahkan berbahaya

Mikroorganisme terdapat dimana saja, hampir disetiap tempat.

Adapun tujuan dilakukannya percobaan ini adalah :

Mikrobiologi ditripkan sebagai ilmu yang mempelajari mahluk hidup

Kemampuan menggunakan alat laboratorium adalah sikap yang

Didalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari alat-alat

Laboratorium merupakan tempat untuk melakukan kegiatan praktikum

Didalam pekerjaan mikrobiologi seringkali kita tidak terlepas dari alat-alat

A. Waktu dan Tempat

B. Alat dan Bahan

7. Pipet makro dan tip

1. Menyiapkan alat-alat yang digunakan dalam praktikum pengenalan alat

Tabel 1. Pengenalan Alat Laboratorium Mikrobiologi

1 Untuk menyimpan medium sel

2. Autoklaf adalah alat pemanas

4. hot plate merupakan salah satu alat

5. Colony counter adalah alat bantu

7. Fungsi dari mikropipet ini

8. Cawan Petri atau telepa Petri adalah

penampungan cairan lainnya seperti

10. Sebagai tempat mereaksikan larutan

11. Untuk memindahkan/mengambil

Jarum Inokulum/ Ose

13. Batang penyebar digunakan untuk

14. Gelas ukur adalah peralatan

Berdasarkan hasil pengamatan mengenai pengenalan alat-alat

Pada praktikum kali ini yang dapat disimpulkan ialah :

1. Peralatan yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi terdiri dari:

Diharapkan semua praktikan dapat hands-on secara langsung dalam demonstrasi

Feeyra. 2013. Penuntun Dasar Dasar Kimia. Jakarta: Lepdikbud

Harti, Agnes. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Andi Offset

Machmud, M. 2013. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai

Mirsadiq, Lucky. 2013. Laporan Praktikum Migrobiologi Pertanian. Universitas

Suhardi, S.H., Koesnandar, D. K. Indriani, H. Arnaldo 2015. Biosafety: Pedoman

Ardiansyah. 2013. Blog Ardiansyah. Pengenalan Alat Laboratorium.

Pasaribu, Devita A. 2013. Blog Devita. Alat Laboratorium.

Adrian, Ririn. 2016. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk

Permatasi, et all, 2013. Uji Pembuatan Marning Jagung dengan Menggunakan

Pada saat melakukan praktikum mikrobiologi, tentu saja terlebih dahulu

Mikrobiologi ditripkan sebagai ilmu yang mempelajari mahluk hidup

A. Waktu dan Tempat