sds-page your sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis adalah metode

elektroforesis dan teknik yang sangat kuat dalam mempelajari protein. sebuah sds-page
protein dipisahkan dalam gel poliakrilamida berdasarkan berat molekulnya untuk persiapan
sampel buffer pemuatan yang mengandung SDS beta mercaptoethanol bromofenol biru dan
gliserol ditambahkan ke sampel protein.

Sampel protein mungkin berasal secara biologis misalnya dari prokariotik atau Anda
membuat jaringan unggul virus sampel lingkungan atau protein murni ketika buffer sampel
telah ditambahkan sampel kemudian dipanaskan pada 95 derajat Celcius selama lima menit.

protein adalah biomolekul besar yang terdiri dari satu atau lebih rantai panjang residu asam
amino Asam meno adalah senyawa organik yang mengandung gugus fungsi karboksil dan
ditambang bersama dengan protein rantai samping yang dibentuk dengan menghubungkan
asam amino dengan ikatan peptida dan melipat menjadi satu atau lebih konfirmasi spasial
spesifik didorong oleh jumlah interaksi seperti ikatan hidrogen.

interaksi hidrofobik ikatan disulfida dan ikatan ion SDS adalah surfaktan anionik dan
mengandung gugus kepala polar dengan muatan negatif bersih di ujung rantai karbon
hidrofobik yang panjang. SDS mendenaturasi protein asli dengan mengganggu ikatan
hidrogen hidrofobik dan interaksi ionik sementara agen pereduksi beta mercaptoethanol
digunakan untuk memutuskan ikatan disulfida juga ketika campuran protein dipanaskan, SDS
mengikat secara seragam ke protein dan muatan intrinsik protein ini menjadi diabaikan.

jika dibandingkan dengan muatan negatif yang disumbangkan oleh SDS yang dibawa oleh
perlakuan ini. protein terlipat menjadi molekul linier dengan muatan negatif bersih oleh
karena itu protein ini dapat dipisahkan dalam gel poli akrilamida berdasarkan berat
molekulnya. Preparasi Vergil digunakan larutan gel pemisah dengan ph 8,8 dan larutan gel
susun dengan ph 6,8 yang digunakan dan keduanya terdiri dari akrilamida ini akrilamida
amonium persulfat e dan teh med gel diproduksi oleh polimerisasi antara dua pelat kaca yang
ditambatkan secara vertikal dalam kaset gel pemisah dituangkan terlebih dahulu .

Reaksi polimerisasi adalah polimerisasi adisi vinil yang diprakarsai oleh sistem pembangkit
radikal bebas amonium persulfat digunakan sebagai inisiator radikal bebas sementara tea
med mempercepat laju pembentukan radikal bebas dari persulfat. Radikal bebas ini
mengubah monomer akrilamida menjadi radikal bebas yang bereaksi dengan monomer yang
tidak aktif untuk memulai reaksi berantai polimerisasi rantai polimer yang memanjang secara
acak dihubungkan silang oleh Biss akrilamida menghasilkan gel dengan porositas .
Karakteristik ukuran pori gel terkait dengan rasio akrilamida terhadap Biss akrilamida
konsentrasi rendah lebih disukai untuk sampel dengan berat molekul tinggi, larutan gel susun
dituangkan di atas gel pemisah padat dan sisir plastik ditempatkan di atas gel. susun gel
selama polimerisasi memungkinkan ini

Pembentukan sumur-sumur kecil di dalam gel setelah gel berpolimerisasi sempurna, sisir
dihilangkan dan kaset gel ditempatkan secara vertikal di antara dua elektroda, elektroda
positif yang terletak di bagian bawah gel, sedangkan elektroda negatif yang ditempatkan di
bagian atas gel dimasukkan gel. ke dalam ruang dan berisiko sistem buffer lisin klorida
dengan pH 8.3 dituangkan untuk memungkinkan konduksi arus melalui gel SDS juga ada
dalam gel dan buffer berjalan untuk memastikan bahwa setelah protein didenaturasi mereka
tetap seperti itu sepanjang menjalankan aplikasi sampel selain sampel penanda ukuran berat
molekul biasanya dimuat ke gel ini terdiri dari protein dengan ukuran yang diketahui dan
dengan demikian memungkinkan estimasi ukuran protein dalam sampel aktual yang
bermigrasi secara paralel di trek yang berbeda dari gel setiap sampel diputar ke dalam
sumurnya sendiri di dalam gel dan seperti yang telah kita lihat sebelumnya Roma fenol biru
dan gliserol yang ada dalam sampel bromophenol blue adalah pewarna yang berguna untuk
memvisualisasikan sampel di dalam sumur dan gliserol meningkatkan kepadatan sampel dan
digunakan untuk membuat sampel jatuh ke dasar sumur sampel daripada hanya mengalir
keluar dan bercampur dengan buffer berjalan setelah prosedur aplikasi sampel medan listrik
diterapkan di seluruh gel menyebabkan protein bermuatan negatif bermigrasi melintasi gel
menjauh dari elektroda negatif dan menuju elektroda positif juga protein kecil bermigrasi
relatif mudah melalui mesh gel sementara lebih besar protein lebih mungkin untuk
dipertahankan dan dengan demikian bermigrasi lebih lambat melalui gel gel susun digunakan
untuk memastikan bahwa semua protein tiba di gel pemisah pada saat yang sama karena
sumur gel sekitar satu sentimeter dalam sehingga tanpa adanya protein gel yang menumpuk
semuanya akan memasuki gel pemisah pada waktu yang berbeda sehingga menghasilkan pita
yang sangat tercoreng seperti yang telah kita lihat sebelumnya buffer berjalan terdiri dari
glisin dan ion klorida sehingga di sumur sampel kita akan memiliki protein ion klorida dan
protein lisin dan ion klorida bermuatan negatif baik glisin dapat ada dalam tiga keadaan
bermuatan yang berbeda tergantung pada pH penunjuk listrik es pH I dari glisin sama dengan
5,97 pada pH ini glisin membawa muatan netral karena perolehan dan kehilangan proton
pada pH di bawah pH I glisin membawa muatan positif bersih dan pada pH di atas pH I
menjadi bermuatan negatif buffer berjalan pH sama dengan 8,3 yang di atas pH I glisin
sehingga pada pH ini glisin bermuatan negatif setelah arus listrik diterapkan, protein ion
klorida dan lisin dipaksa masuk ke gel susun di mana pH sama enam koma delapan pada pH
ini glisin beralih terutama ke bahan ini ik bermuatan netral Keadaan hilangnya muatan ini
menyebabkan mereka bergerak sangat lambat dalam medan listrik ion klorida di sisi lain
bergerak muc h lebih cepat ion klorida bermigrasi di depan protein sebagai ion utama dan
molekul lisin bermigrasi di belakang protein sebagai ion awal yang tertinggal akibatnya
protein terperangkap dan terkonsentrasi ke zona sempit antara ion klorida dan glisin. gel di
mana pH beralih 28,8 pada pH ini molekul glisin sebagian besar bermuatan negatif dan dapat
bermigrasi lebih cepat daripada protein protein dipisahkan sehingga protein dengan berat
molekul lebih tinggi bergerak lebih lambat melalui gel akrilamida berpori daripada protein
dengan berat molekul lebih rendah karena relatif kecil ukuran molekul Brahma fenil biru
bermigrasi lebih cepat daripada protein dan dengan kontrol optik dari pita berwarna yang
bermigrasi , elektroforesis dapat dihentikan sebelum pewarna dan sebelum sampel benar-
benar bermigrasi melalui gel dan meninggalkannya pada akhir pemisahan elektroforesis
semua protein diurutkan berdasarkan ukuran dan kemudian dapat dianalisis dengan metode
lain misalnya metode pewarnaan protein dan deteksi imunologi seperti teknik western blot
setelah melepas pelat kaca gel yang menumpuk dibuang dan gel pemisah dapat diwarnai
Kumasi biru adalah pewarna protein yang paling populer itu adalah pewarna anionik yang
nan secara khusus mengikat protein struktur Kumasi biru didominasi nonpolar dan biasanya
digunakan dalam eksisi metanol diasamkan dengan asam asetat protein dalam gel difiksasi
dengan asam asetat dan secara bersamaan diwarnai setelah pewarnaan protein terdeteksi
sebagai pita biru pada latar belakang yang jelas penanda ukuran berat molekul dalam jalur
terpisah dalam gel dapat digunakan untuk menentukan perkiraan massa molekul biomolekul
yang tidak diketahui dengan membandingkan jarak yang ditempuh relatif terhadap penanda
yang Anda