ARTIKEL ILMIAH

PRAKTIKUM BIOKIMIA
“IDENTIFIKASI KANDUNGAN ASAM AMINO PADA SAMPEL
DENGAN MENGGUNAKAN TEKNIK KROMATOGRAFI KERTAS”

Oleh,
NAMA : GEDE YUDHA YASA WIDHANA
NIM : 1603051018
KELAS :VA

PRODI ANALIS KIMIA

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PENDIDIKAN GANESHA
2018
 IDENTIFIKASI KANDUNGAN ASAM AMINO PADA SAMPEL DENGAN
MENGGUNAKAN TEKNIK KROMATOGRAFI KERTAS

Gede Yudha Yasa Widhana (1603051018)

Prodi Analis Kimia, Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Pendidikan Ganesha

ABSTRAK
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui perbandingan koefisien distribusi (R f) dari
berbagai asam amino dan untuk menentukan kandungan asam amino pada sampel melalui kromatografi
kertas dengan teknik ascending. Metode yang digunakan dalam percobaan ini adalah metode kromatografi
kertas yang merupakan metode kualitatif. Hasil nilai Rf yang diperoleh dari percobaan ini yaitu dari asam
amino leusin, glisin, tirosin, triptofan, dan metionin dalam eluen fenol secara berturut-turut yaitu 0,66, 0,94,
0,93, 0,90. Hasil nilai Rf dari asam amino leusin, glisin, tirosin, triptofan, dan metionin dalam eluen
campuran n-butanol, aquades dan asam asetat glasial secara berturut-turut yaitu:0,80, 0,91, 0,43, dan 0,33.
Berdasarkan identifikasi perbandingan nilai Rf sampel dengan standar dan karakteristik larutan sampel
dan standar maka dapat diprediksi bahwa sampel unknown A mengandung asam amino triptofan, sampel
unknown B mengandung asam amino triptofan, metionin dan glisin, sampel unknown C mengandung asam
amino leusin dan tirosin.

Kata kunci : asam amino, identifikasi, kromatografi kertas, nilai Rf.

ABSTRACT
The purpose of this experiment is to determine the ratio of the distribution coefficient (Rf) of various
amino acids and to determine the amino acid content in the samples through ascending paper
chromatography techniques. The method used in this experiment is a paper chromatography method which
is a qualitative method. Rf value results obtained from these experiments are of the amino acid leucine,
glycine, tyrosine, tryptophan, and methionine in the eluent phenol in a row are 1, 0.93, 0.95, 0.79, and 0.94.
Results Rf value of the amino acid leucine, glycine, tyrosine, tryptophan, and methionine in the eluent
mixture n-butanol, distilled water and glacial acetic acid respectively are: 0.79, 0.81, 0.71, 0.68 and 0.88.
Based on the comparison of the value of Rf¬ sample identification with the standards and characteristics of
the sample solution and standard, it can be predicted that the unknown sample A contains the amino acid
tryptophan, an unknown sample B contains the amino acid tryptophan, methionine, and glycine, C unknown
samples containing amino acids leucine and tyrosine.

Keywords: amino acids, identification, paper chromatography, the value of Rf.

PENDAHULUAN cair dan fase gerak berwujud cair), dan gas-

Kromatografi adalah teknik pemisahan
campuran didasarkan atas perbedaan
distribusi dari komponen-komponen
campuran tersebut diantara dua fase, yaitu
fase diam (padat atau cair) dan fase gerak
(cair atau gas) (Patnaik 2004). Teknik
pemisahan ini memanfaatkan interaksi
komponen dengan fase diam dan fase gerak
serta sifat fisik dan sifat kimia komponen.
Berdasarkan fase gerak dan fase diam yang
digunakan, kromatografi dibedakan menjadi
liquid-solid chromatography (kromatografi
dengan fase diam berwujud padat dan fase
gerak berwujud cair), gas-solid
chromatography (kromatografi dengan fase
diam berwujud padat dan fase gerak
berwujud gas), liquid-liquid chromatography
(kromatografi dengan fase diam berwujud
liquid chromatography (kromatografi dengan
fase diam berwujud padat dan fase gerak
berwujud gas) (Harvey 2000).
Teknik pemisahan kromatografi ini
pertama kali diperkenalkan oleh Michael
Tswet (1906) seorang ahli botani dari Rusia.
Kromatografi berasal dari kata “chroma” dan
“graphein”. Dalam bahasa Yunani kedua
kata tersebut berarti “warna” dan “menulis”.
Pengertian kromatografi menyangkut metode
pemisahan yang didasarkan atas distribusi
diferensial komponen sampel diantara dua
fase, yaitu fase diam (stationary phase) dan
fase gerak (mobile phase). Fase gerak akan
membawa komponen yang dapat
mengakibatkan pergerakan diferensial dari
komponen. Fase diam dapat berupa padatan
atau caquadesan yang terikat pada
permukaan padatan (kertas atau suatu
adsorben), sedangkan fase gerak dapat
berupa caquadesan yang disebut dengan
eluen atau pelarut, atau gas pembawa yang
inert. Gerakan fase gerak ini mengakibatkan
terjadinya migrasi diferensial komponen-
komponen dalam sampel
Pemisahan dengan metode
kromatografi memiliki kelebihan
dibandingkan dengan metode pemisahan
lainnya yaitu kromatografi dapat digunakan
untuk sampel atau konstituen yang sangat
kecil (semi mikro dan makro), cukup selektif
terutama untuk senyawa senyawa organik
multi komponen, proses pemisahan dapat
dilakukan dengan waktu yang relatif singkat,
harganya murah dan sederhana, karena
umumnya tidak memerlukan alat yang mahal
dan rumit (Soebagio, dkk., 2000).
Dalam kromatografi selalu terjadi
kecenderungan sebagai berikut: (a)
kecenderungan molekul-molekul komponen
untuk melarut dalam caquadesan, (b)
kecenderungan molekul-molekul komponen
untuk melekat pada permukaan padatan halus
(adsorpsi = penyerapan), (c) kecenderungan
molekul-molekul komponen untuk bereaksi
secara kimia (penukar ion), dan (d)
kecenderungan molekul-molekul tereklusi
pada pori-pori fase diam.
Berdasarkan interaksi komponen
dengan fase diam dan fase gerak,
kromatografi dibedakan menjadi
kromatografi adsorpsi (kromatografi dengan
teknik penyerapan komponen oleh adsorben
tertentu), kromatografi partisi (kromatografi
dengan partisi terjadi antara fase gerak dan
fase diam), kromatografi pertukaran ion
(kromatografi yang dapat memisahkan
senyawa dengan afinitas ion yang berbeda
dengan resin penukar ion), dan kromatografi
permeasi atau filtrasi (kromatografi
berdasarkan perbedaan bobot molekul)
(Skoog et al 2002). Berdasarkan bentuk
ruang penyangganya, kromatografi
dibedakan menjadi kromatografi planar
(kromatografi dengan fase diam terletak pada
permukaan datar) yang meliputi kromatografi
kertas dan kromatografi lapis tipis serta
kromatografi kolom (kromatografi dengan
fase diam tertahan pada sebuah kolom) yang
meliputi kromatografi manual, high
performance liquid chromatography, dan
kromatografi gas (Harvey 2000). Percobaan
ini hanya melakukan aplikasi kromatografi
kertas dan kromatografi lapis tipis. Prinsip
dari kedua aplikasi tersebut adalah dengan
meneteskan sampel pada kertas di garis
startnya berulang-ulang. Setelah kering,
kertas dimasukkan dalam pelarut jenuh dan
dibiarkan bergerak menuju garis finish.
Kromatografi lapis tipis menggunakan
lempeng tipis/ plastik yang dilapisi adsorben
sebagai penyangga. Kromatografi kertas
menggunakan kertas sebagai penyangga
(Rouessac 2007).
Kromatografi kertas digunakan untuk
pemisahan zat anorganik, organik, dan
biokimia dalam jumlah yang sedikit. Dalam
percobaan ini dilakukan analisis secara
kualitatif terhadap larutan yang mengandung
bermacam-macam asam amino.
Kromatografi kertas dapat dilakukan secara
satu dimensi atau dua dimensi. Apabila
macam komponen tidak terlalu banyak, maka
cara dua dimensi seringkali diperlukan.
Untuk itu diperlukan dua macam larutan
eluen, yang satu diperlukan untuk ke satu
arah, dan yang kedua diperlukan untuk ke
arah lain yang tegak lurus pada arah elusi,
setelah kromatografi kering.
Pelaksanaan pemisahan dengan metode
kromatografi kertas terbagi dalam tiga tahap
yaitu tahap penotolan cuplikan, tahap
pengembangan, dan tahap identifikasi. Pada
tahap penotolan kertas kromatografi yang
sudah disiapkan ditotolkan larutan cuplikan
dengan menggunakan mikropipet atau pipa
kapiler pada garis yang sudah dibuat. Pada
tahap pengembangan, ujung kertas
kromatografi yang dekat garis awal yang
telah berisi totolan cuplikan dicelupkan ke
dalam pelarut (eluen) yang terdapat dalam
bejana kromatografi. Komponen-komponen
cuplikan akan terbawa oleh rembesan
cuplikan. Perbedaan kelarutan komponen-
komponen cuplikan dalam eluen akan
mengakibatkan kecepatan bergerak
komponen-komponen dalam kertas juga
berbeda. Perbedaan kecepatan bergerak
komponen-komponen ini lenih umum disebut
migrasi diferensial. Hasil pemisahan akan
nampak sebagai noda-noda berwarna pada
kertas dengan jarak yang berbeda-beda dari
awal. Pada tahap identifikasi atau
penampakan noda, jika noda sudah berwarna
dapat langsung diperiksa dan ditentukan Rf-
nya. Besaran Rf (rate of flow) menyatakan
derajat retensi suatu komponen dalam fase
diam. Rf juga disebut faktor referensi atau
faktor refensi ( Soebagio, 2000).
Setiap komponen memiliki harga Rf
tertentu. Jarak yang ditempuh oleh setiap
senyawa dari garis dasar relatif terhadap
jarak tempuh pelarut/eluen didefinisikan
sebagai Rf.
Jarak yang ditempuh sampel dari garis dasar
Rf =
Jarak yang ditempuh pelarut dari garis dasar
Nilai Rf dari suatu senyawa pada sistem
kromatografi kertas bergantung pada banyak
variabel, di antaranya sistem pelarut,
temperatur, lamanya elusi, dan jenis kertas.
Karena dipengaruhi oleh banyaknya variabel,
maka Rf suatu senyawa yang sudah diketahui
METODE
Alat dan bahan
Alat yang digunakan dalam percobaan
ini adalah, 1 buah ruang kromatografi, 1
buah pipa kapiler 1 buah gelas kimia 250
mL, 5 buah gelas kimia 100 mL, 2 buah
batang pengaduk, 1 buah spatula, 1 buah
penggaris, 1 buah gunting, 1 buah pinset, 1
buah oven pemanas, 2 buah pipet tetes.
Bahan yang digunakan dalam percobaan ini
adalah larutan elusi n-butanol, asam cuka dan
air secukupnya, larutan glisin secukupnya,
larutan triptofan secukupnya, larutan leusin
secukupnya, larutan tirosin secukupnya,
larutan metionin secukupnya, alkohol
secukupnya, hcl pekat secukupnya, fenol
secukupnya, larutan ninhidrin secukupnya,
dan kertas kromatografi.
Prosedur Kerja
Penyiapan Kertas Kromatografi
Kertas kromatografi disiapkan dengan
ukuran yang disesuaikan dengan wadah
kromatografi. Pada bagian sekitar 1,5 cm dari
tepi bawah kertas ditandai dengan pensil.
Proses Kromatografi dengan
Menggunakan Eluen Fenol
Kertas kromatografi dengan ukuran 15
x 25 cm ditotolkan dengan larutan leusin,
glisin, tirosin, triptofan, metionin, sampel A,
sampel B dan sampel C menggunakan pipa
kapiler. Jarak totolan antara satu dengan
yang lain adalah 1,5 cm. Perlu diperhatikan
tiap tetesan harus dikeringkan terlebih dahulu
dijadikan standar atau patokan untuk
menentukan Rf senyawa lainnya.
Dalam praktikum ini dilakukan analisis
secara kualitatif terhadap larutan yang
mengandung bermacam-macam asam amino.
Pengamatan yang dilakukan cukup sulit
mengingat asam amino yang terlarut tidak
menunjukkan warna tertentu. Untuk
mengantisipasi hal tersebut, maka setelah
elusi dihentikan, posisi eluen ditandai dengan
pensil, lalu kromatogram dikeringkan dan
selanjutnya disemprot dengan larutan
ninhidrin. Ninhidrin akan bereaksi dengan
asam amino menghasilkan senyawa
berwarna, umumnya berwarna cokelat dan
ungu, dengan reaksi sebagai berikut.
dengan diangin-anginkan sebelum tetesan
berikutnya ditotolkan. Kertas dijaga bersih
dan sedapatnya tidak tersentuh jari.
Selanjutnya, kertas digantungkan dalam
ruang kromatografi selama beberapa jam
agar elusi dapat berjalan. Setelah larutan
elusi berjalan kurang lebih 10 cm dari batas
sampel, elusi dihentikan dan kertas
kromatografi dikeluarkan dari ruang
kromatografi. Kemudian, batas larutan
ditandai dengan pensil dan kertas
kromatografi dikeringkan pada suhu 100-
105oC. Setelah itu, kertas yang telah
dikeringkan disemprot dengan larutan
ninhidrin yang selanjutnya dikeringkan
kembali. Kemudian, diukur jarak eluen
dengan jarak warna yang dibentuk.
Proses Kromatografi Dengan
Menggunakan Eluen Campuran N-
Butanol, Aquades dan Asam Asetat Glasial
Siapkan kertas kromatografi
dengan ukuran 15 x 25 cm dan
ditandai dengan pensil 1,5 cm dari
tepi bawah. Kemudian, dengan pipa
kapiler ditotolkan larutan standar
asam amino dan sampel
berdampingan dengan jarak 1,5 cm.
Larutan ujung terletak 2 cm dari
pinggir kertas. Setelah itu, tiap-tiap
tetesan harus dikeringkan dulu,
misalnya dengan alat pengering
rambut. Haruslah diusahakan supaya
cukup asam amino ditempatkan pada
kertas tersebut. Hendaknya kertas
 juga bersih dan sedapat mungkin
jangan disentuh oleh jari, gunakan
pinset. Karena diyakinkan ruang
kromatografi telah jenuh oleh uap
eluen. Kemudian kertas tersebut
digantungkan dalam ruang
kromatografi dan dicelupkan tepi
bawah kertas kromatografi dalam
eluen, usahakan jangan sampai
totolan asam amino standar dan
sampel terendam oleh eluen. Elusi
asam amino standar dan sampel kira-
kira eluen menempuh jarak 10 cm.
Elusi dihentikan dan ditandai jarak
yang ditempuh oleh eluen dengan
pensil. Kertas kromatografi
selanjutnya dikeringkan pada suhu
105-110oC. Kemudian kertas
disemprot dengan larutan ninhidrin
dan dikeringkan kembali selama 5
menit. Noda-noda asam amino yang
akan terlihat. Selanjutnya dapat
dihitung harga Rf-nya.
HASIL PENGAMATAN DAN
PEMBAHASAN
Percobaan ini menggunakan
teknik kromatografi kertas yang
didasarkan atas distribusi diferensial
komponen sampel diantara dua fase.
Dua fase yang dilibatkan dalam
kromatografi kertas terdiri dari fase
diam (stationary phase) dan fase
gerak (mobil phase). Praktikum
kromatografi kertas ini dilakukan
untuk menentukan asam amino yang
terdapat pada campuran asam amino
dengan membandingkan harga Rf
masing-masing asam amino yang
terdeteksi pada sampel dengan
standar. Teknik kromatografi kertas
yang digunakan adalah teknik
rembesan menaik (ascending). Pada
teknik ascending, campuran pelarut
(eluen) akan bermigrasi melewati
noda (spot) dengan arah ke atas.
Pada percobaan ini digunakan dua
eluen yaitu eluen fenol dan eluen
campuran n-butanol, asam asetat
glasial dan aquades.
Campuran eluen n-butanol,
asam asetat glasial, dan aquades
dibuat dengan mencampurkan ketiga
larutan tersebut ke dalam corong
pisah dan dikocok sehingga
terbentuk campuran yang berwarna
keruh. Setelah didiamkan terbentuk
dua lapisan. Lapisan atas berwarna
keruh, dan lapisan bawah tak
berwarna. Terbentuknya dua lapisan
ini disebabkan karena ketiga larutan
tidak bercampur secara sempurna.
Hal ini disebabkan karena aquades
dan asam asetat dapat bercampur
secara sempurna dikarenakan ke dua
senyawa tersebut adalah kovalen
polar. Demikian juga, dengan n-
butanol dan asam asetat dapat
bercampur sempurna ke dua-duanya
sama-sama merupakan senyawa
organik. Sedangkan aquades dan n-
butanol hanya bercampur sebagian
sehingga ketika campuran tersebut
didiamkan setelah dikocok, terlihat
adanya dua lapisan.
Tujuan penambahan asam
asetat dalam pembuatan eluen ini
adalah untuk mendistribusikan kedua
pelarut yang tidak saling bercampur.
Larutan n-butanol dan aquades sama-
sama dapat terdistribusi dalam asam
asetat sehingga dengan penambahan
asam asetat glasial pada
perbandingan volume tertentu dapat
diperoleh campuran atau caquadesan
yang mengandung n-butanol, asam
asetat dan aquades. Pengocokan
dilakukan dengan tujuan untuk lebih
menyempurnakan distribusi antara
ketiga caquadesan tersebut. Dalam
hal ini, n-butanol sebagai pelarut
nonpolar bertindak sebagai fase
gerak, dan aquades (air) pelarut polar
bertindak sebagai fase diam.
Aquades sebagai fase diam
umumnya terserap pada pori-pori
kertas. Oleh karena itu fase diam
bersifat polar. Molekul aquades
sebagai fase diam yang polar akan
terdistribusi pada permukaan kertas,
interaksi ini merupakan efek yang
sangat penting selama proses
kromatografi kertas. Molekul
aquades sebagai fase diam yang
teradsorpsi pada permukaan kertas
menghasilkan ribuan tetes kecil
sehingga memungkinkan aquades
bertindak sebagai fase diam. Fase
diam yang teradsorpsi akan dilewati
oleh fase gerak yaitu komponen non
polar dari eluen (n-butanol) atau
fenol (non polar). Hal ini
mengakibakan terjadi partisi atau
pemisahan campuran karena adanya
perbedaan distribusi asam amino
yang menyusun campuran asam
amino dalam fase gerak dan aquades
sebagai fase diam.
Kertas kromatografi yang
digunakan harus dijaga
kebersihannya, dihindarkan dari
kontak langsung dengan tangan
sehingga harus dipegang dengan
menggunakan penjepit atau
melengkapi tangan dengan
menggunakan slop tangan. Apabila
terjadi kontak langsung antara tangan
dengan kertas kromatografi maka
kemungkinan dapat mengganggu
proses kromatografi. Tangan
seringkali dalam keadaan lembab
karena mengeluarkan keringat
sebagai hasil pengeluaran dari tubuh
manusia. Keringat ini mengandung
minyak dan urea yang merupakan zat
organik sehingga kemungkinan
senyawa-senyawa organik tersebut
akan ikut bermigrasi sebagai fase
nonpolar (fase gerak). Hal inilah
yang nantinya akan dapat
mempengaruhi proses dan hasil dari
kromatografi.
Wadah kromatografi yang
akan digunakan terlebih dahulu harus
dijenuhkan dengan eluen. Pada tahap
pertama, wadah kromatografi
dijenuhkan dengan eluen fenol.
Proses penjenuhan dilakukan dengan
memasukkan eluen fenol ke dalam
wadah kromatografi dan ditutup.
Penjenuhan bertujuan untuk
mempersiapkan kondisi agar
kromatografi dapat berjalan lebih
cepat. Hal ini dikarenakan ketika
udara dalam kromatografi sudah
jenuh begitu pula dengan kertasnya
maka ketika elusi sampel dimulai,
eluen tersebut akan fokus bekerja
untuk mengelusi komponen sampel.
Penotolan asam amino dan
sampel pada kertas kromatografi
diameternya tidak melebihi 0,4 cm.
Apabila diameter totolan melebihi
0,4 cm, kemungkinan akan terjadi
perembesan dari fase gerak dan fase
diamnya sehingga menjadi tidak
jelas karena warna yang terdeteksi
terlalu menyebar dan mengganggu
hasil pengamatan sehingga sulit
untuk menghitung harga Rf-nya.
Kertas kromatografi yang digunakan
berisi larutan asam amino yang
terdiri dari larutan triptofan, leusin,
tirosin, glisin, sampel A, sampel B,
dan sampel C. Setiap menotolkan
larutan yang akan diuji, totolan
tersebut dikeringkan dengan cara
diangin-anginkan terlebih dahulu
kemudian dilanjutkan dengan
menotolkan kembali larutan asam
amino lain yang akan diuji.
Pada tahap pengembangan,
kertas kromatografi yang sudah
berisi larutan yang akan diuji
dimasukkan ke dalam wadah
kromatografi yang sudah dijenuhkan
dengan eluen fenol. Pencelupan
diusahakan tidak merendam totolan
asam amino dan sampel atau garis
awal. Setelah kertas kromatografi
dicelupkan, eluen langsung
merembes melewati totolan larutan
yang diuji. Komponen-komponen
larutan yang diuji akan terbawa oleh
rembesan cuplikan. Perbedaan
kelarutan komponen-komponen
larutan yang diuji dalam eluen akan
mengakibatkan kecepatan bergerak
komponen-komponen dalam kertas
juga berbeda. Perembesan dihentikan
setelah eluen hampir bergerak sekitar
±10 cm. Setelah eluen bergerak
bergerak sekitar ±10 cm, kertas
kromatografi dikeluarkan dari wadah
kromatografi.
Pada tahap identifiksi atau
penampakan noda, jarak tempuh
eluen ditandai dengan pensil dan
kertas dikeringkan pada suhu 100-
105oC. Hal ini dikarenakan pada
suhu ini molekul aquades akan
menguap. Setelah dikeringkan belum
ada penampakan noda sehingga
untuk menampakan noda tersebut
dilakukan penyemprotan kertas
dengan larutan ninhidrin. Tujuan
disemprotkan larutan ninhidrin pada
kertas kromatografi untuk
memudahkan pengamatan karena
ninhidrin akan memberikan warna
 apabila bereaksi dengan asam amino. (aquades) dan fase gerak (n-butanol).
Namun, warna tidak langsung Untuk mengatasi hal tersebut, kertas
muncul ketika disemprotkan dikeringkan kembali di atas pemanas
ninhidrin karena diduga masih listrik. Setelah kering, timbul warna
terdapat molekul-molekul aquades berupa bercak-bercak ungu yang
yang teradsorpsi sehingga ninhidrin mengindikasikan adanya asam
tidak dapat bereaksi sempurna amino.
dengan asam amino yang
terdistribusi pada fase polar

A. Eluen fenol + H2O (20:8) ml

SAMPEL JARAK TEMPUH (CM) NILAI RF WARNA
NODA PELARUT NODA
Triptopan 5,5 8,3 0,66 violet
Leusin 7,8 8,3 0,94 violet
Alanin 7,7 8,3 0,93 violet
Glisin 7,5 8,3 0,90 violet

B. Eluen n-butanol + aquadest + asam glasial (100:100:24) ml

SAMPEL JARAK TEMPUH (CM) NILAI RF WARNA
NODA PELARUT NODA
Triptopan 6,8 8,5 0,80 violet
Leusin 7,7 8,5 0,91 violet
Alanin 3,7 8,5 0,43 violet
Glisin 2,7 8,5 0,33 violet

Asam amino yang ada pada sampel
unknown dapat ditentukan menggunakan
selisih Rf paling kecil yang merupakan asam
amino yang dimaksud. Berdasarkan data di
atas, dapat diketahui bahwa sampel A pada
eluen fenol memiliki nilai Rf yang mendekati
triptofan. Bila dilihat dari selisih antara R f
sampel A dengan Rf dari larutan triptofan
memiliki nilai nol sehingga sampel A diduga
mengandung asam amino triptofan.
Selanjutnya nilai Rf dari sampel B
Percobaan yang kedua dilakukan
kromatografi kertas dengan menggunakan
eluen campuran n-butanol, aquades, dan
asam asetat glasial. Pada eluen n-butanol
wadah kromatografi juga dilakukan
penjenuhan, dengan memasukkan eluen n-
butanol serta campurannya. Kromatografi
menggunakan eluen n-butanol tekniknya
sama dengan kromatografi menggunakan
eluen fenol. Setelah proses kromatografi
mendekati nilai Rf dari asam amino triptofan,
glisin, dan metionin sehingga sampel B
diduga mengandung asam amino triptofan,
glisin, dan metionin. Sampel C memiliki nilai
Rf mendekati nilai Rf dari asam amino tirosin
dan leusin sehingga sampel C diduga
mengandung asam amino tirosin dan leusin.
Adapun data selisih Rf Sampel Unknown
dengan Rf Standar pada Eleuen fenol sebagai
berikut.
selesai, kertas kromatografi juga
diperlakukan sama seperti kertas
kromatografi pada percobaan menggunakan
eluen fenol yaitu mengeringkan di atas
pemanas listrik dan setelah kering disemprot
dengan larutan ninhidrin. Kemudian
dikeringkan kembali di atas pemanas listrik.
Setelah dikeringkan timbul warna ungu,
kemudian diukur jarak tempuh eluen dan
jarak sampel masing-masing asam amino
serta sampel A,B, dan C yang terdapat pada
Untuk mengetahui kandungan asam
amino pada sampel dilakukan perhitungan
selisih nilai Rf sampel dengan nilai Rf
larutan asam amino standar pada eluen
campuran n-butanol, asam asetat glasial, dan
aquades. Dalam menentukan asam amino
yang ada pada sampel unknown digunakan
selisih Rf paling kecil yang merupakan asam
amino yang dimaksud. Berdasarkan data di
atas,dapat diketahui bahwa sampel A pada
eluen campuran n-butanol, asam asetat
glasial, dan aquades memiliki nilai R f yang
mendekati triptofan. Bila dilihat dari selisih
antara Rf sampel A dengan Rf dari larutan
Berdasarkan data yang didapatkan
pada kedua eluen yang berbeda, diperoleh
bahwa sampel unknown A mengandung
asam amino triptofan. Sampel B berturut-turut: 0,80, 0,91, 0,43, 0,33. Sampel
mengandung asam amino triptofan, metionin
dan glisin, sedangkan pada sampel C
mengandung asam amino tirosin dan leusin.
Namun, terdapat perbedaan Rf yang ada
dalam sampel unknown pada saat
menggunakan eluen fenol dan eluen
campuran n-butanol, asam asetat glasial,
serta aquades disebabkan karena eluen yang
belum terdistribusi secara maksimal sehingga
pemisahan belum terjadi secara sempurna.
Terjadi sentuhan atau gesekan antar
kromatogram ketika proses elusi, sehingga
berdampak pada kesulitan dalam
mengidentifikasi zat yang terkandung dalam
sampel. Selain itu juga karena ketidaktepatan
saat menotolkan larutan pada kertas
kromatografi yang seharusnya penotolan
larutan tidak melebihi diameter 0,4 cm.
Dengan demikian pada eluen fenol distribusi
noda asam amino yang terkandung pada
sampel unknown sulit untuk diidentifikasi.
Hal inilah menjadi penyebab perbedaan Rf
asam amino yang didapatkan pada sampel
unknown antara menggunakan elun fenol dan
eluen n-butanol.
SIMPULAN
Berdasarkan pembahasan di atas
dapat ditarik simpulan bahwa perbandingan
koefisien distribusi (Rf) dari asam amino
leusin, glisin, tirosin, triptofan, dan metionin
dalam eluen fenol dengan H2O berturut-turut
adalah 0,66, 0,94, 0,93, dan 0,90.
kertas kromatografi.
triptofan memiliki nilai nol sehingga sampel
A diduga mengandung asam amino triptofan.
Selanjutnya nilai Rf dari sampel B
mendekati nilai Rf dari asam amino triptofan,
metionin dan glisin sehingga sampel B
diduga mengandung asam amino triptofan,
metionin dan glisin. Kemudian nilai Rf dari
sampel C sama dengan nilai Rf dari asam
amino leusin dan tirosin sehingga sampel C
diduga mengandung asam amino leusin dan
tirosin. Adapun data selisih Rf Sampel
Unknown dengan Rf Standar pada Eleuen
campuran n-butanol, asam asetat glasial, dan
aquades sebagai berikut
Perbandingan koefisien distribusi (Rf) dari
asam amino leusin, glisin, tirosin, triptofan,
dan metionin dalam eluen campuran n-
butanol, aquades dan asam asetat glasial
unknown A mengandung asam amino
triptofan, sampel unknown B mengandung
asam amino triptofan, metionin dan glisin,
dan sampel unknown C mengandung asam
amino tirosin dan leusin.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih saya sampaikan kepada
dosen pengampu mata kuliah praktikum
biokimia Dr. I Nyoman Tika, M.Si. serta
asisten I Made Wirahadi Kusuma, atas
bimbingan dan masukan selama praktikum
identifikasi kandungan asam amino pada
sampel dengan menggunakan teknik
kromatografi kertas ini. Terima kasih juga
saya sampaikan kepada Ibu Putu Lilik
pratami selaku laboran di prodi analis kimia
atas bantuan dalam memberikan segala
keperluan yang berkaitan dengan praktikum
serta ucapan terimakasih kepada rekan
kelompok saya yang telah melakukan
percobaan bersama sehingga percobaan ini
dapat dilaksanakan dengan baik.
DAFTAR PUSTAKA
Conn, E.E. and P.K. Stumpf. 1976. Outline
of Biochemistry. 4th edition. John Willey
and Sons Co., Inc. New York. p.590-595
Heasley, V.L., V.J. Christensen and G.E.
Heasley. 1997. Chemistry and Life in
Laboratory. 4th edition. Prentice Hall Co.,
Inc. USA. P. 56-70
Sastrohamidjojo, H. 2002. Kromatografi. Soebagio,dkk. 2000. Kimia Analitik II.
Edisi kedua. Penerbit Liberty. Yogyakarta. Malang: Universitas Negeri Malang.
Hal. 1-24.