PRAKTIKUM KULTUR KALUS

LAPORAN PRAKTIKUM
Diajukan untuk memenuhi sebagian dari syarat – syarat guna
menyelesaikan mata kuliah Kultur Jaringan

Oleh:

Puteri Anggrayni (512019015)

Catur Setiyani (512019040)
Danendra Guido Panadi (512019056)
Wildan Dewanata (512019068)

FAKULTAS PERTANIAN DAN BISNIS

UNIVERSITAS KRISTEN SATYA
WACANA SALATIGA
2021
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI.....................................................................................................................1
DAFTAR GAMBAR.........................................................................................................2
BAB I.................................................................................................................................3
1.1 Dasar Teori.........................................................................................................3
1.2 Tujuan.................................................................................................................4
BAB II...............................................................................................................................5
2.1 Waktu dan Tempat Penelitian..............................................................................5
2.2 Alat dan Bahan....................................................................................................5
2.3 Cara Kerja.............................................................................................................5
BAB III..............................................................................................................................6
3.1 Hasil Pengamatan.................................................................................................6
3.2 Pembahasan..........................................................................................................8
KESIMPULAN...............................................................................................................10
Daftar Pustaka.................................................................................................................11

1
 DAFTAR GAMBAR

Minggu 1
Gambar 1......................................................................................................6
Gambar 2......................................................................................................6
Gambar 3......................................................................................................6
Minggu 2
Gambar 4......................................................................................................6
Gambar 5......................................................................................................6
Gambar 6......................................................................................................6
Gambar 7......................................................................................................6
Gambar 8......................................................................................................6
Gambar 9......................................................................................................6
Minggu 3
Gambar 10....................................................................................................6
Gambar 11....................................................................................................6
Gambar 12....................................................................................................6
Gambar 13....................................................................................................7
Gambar 14....................................................................................................7
Gambar 15....................................................................................................7
Minggu 4
Gambar 16....................................................................................................7
Gambar 17....................................................................................................7
Gambar 18....................................................................................................7
Gambar 19....................................................................................................7
Gambar 20....................................................................................................7
Gambar 21....................................................................................................7
Minggu 5
Gambar 22....................................................................................................7
Gambar 23....................................................................................................7
Gambar 24....................................................................................................7
Gambar 25....................................................................................................7
Gambar 26....................................................................................................7
Gambar 27....................................................................................................7

2
 BAB I

1. 1 Dasar teori
Salah satu teknik kultur in vitro yang banyak digunakan untuk menghasilkan bibit
tanaman bebas penyakit adalah kultur kalus. Kultur kalus dapat dapat diproduksi da;am
jumlah banyak dengan kondisi lingkungan yang terkontrol. Kultur kalus juga tidak
membutuhkan lahan yang luas dan juga dapat menghasilkan metabolit lebih tinggi dari
tanaman aslinya (Yustina, 2003).
Kalus adalah kumpulan masa sel yang belum terorganisasi atau amorphous yang
terjadi dari sel-sel jaringan yang membelah diri secara terus menerus. Pada kultur jaringan,
kalus dapat terbentuk dari bekas-bekas luka irisan. Sebagian sel pada luka irisan tersebut akan
mengalami proliferasi. Terdapat beberapa tipe kalus antara lain, yaitu kalus embriogenik,
kalus proliferative, dan kalus senesen (Fauziyyah, 2012).
Kalus adalah kumpulan sel yang diperoleh dari eksplan tangkai daun atau urat daun
yang telah disterilkan sebelum ditumbuhkan di media MS. Perkembangan dari kultur kalus
adalah embrio somatik. Proses kultur kalus memerlukan waktu yang singkat dan bibit hasil
dari kultur kalus lebih beragam jika dibandingkan dengan eksplan berupa tunas (Lingga,
2007).
Pada media kultur in vitro , penggunaan zat pengatur tumbuh (ZPT) merupakan hal
yang perlu diperhatikan. Dari golongan auksin, ZPT yang sering digunakan adalah Indole
Aceti Acid (IAA), Napthalane Acetic Acid (NAA), dan 2.4-D (Yuliarti, 2010). Penggunaan
senyawa 2.4-D dengan konsentrasi yang rendah dapat mendorong pembelahan sel,
mendorong pertumbuhan tanaman, dan meningkatkan daya kecambah benih. Karbohidrat
juga penting untuk media kultur, terutama gula. Karena penggunaan gula jenis sukrosa dalam
media kultur dapat mempengaruhi induksi embrio somatik (Wattimena, 2001).
Kontaminasi dapat diakibatkan oleh eksplan baik eksternal maupun internal,
mikroorganisme yang masuk ke daalam botol kultur, media, atau alat kultur yang kurang
steril, ruang kerja dan kultur yang kotor yang biasanya mengandung spora di udara ruangan
laboratorium, serta kecerobohan dalam pengkulturan. Untuk membuat kondisi aseptic dapat
menggunakan autoklaf, desinfektan, dan LAF. Proses kultur kalus memerlukan kondisi yang
steril, jika terjadi kontaminasi maka kultur akan mati atau rusak. Media kultur dan eksplan
merupakan komponen yang paling rentan terhadap kontaminasi mikroorganisme karena
keduanya dapat berfungsi sebagai substrat yang baik untuk pertumbuhan jamur dan bakteri.
Permukaan media serta eksplan akan tertutup oleh mikroorganisme jika terjadi kontaminasi.
3
Mikroorganisme juga akan menyerang eksplan melalui luka-luka yang terdapat pada eksplan
akibat dari pemotongan dan penanganan saat sterilisasi (Oratmangun, 2017).
Kontaminasi yang disebabkan oleh jamur, pada media dan eksplan akan terselimuti
oleh spora berbentuk kapas atau miselium berwarna putih dan hijau. Sedangkan eksplan yang
terkontaminasi oleh bakteri akan berlendir berwarna kuning dan yang sebagian lagi melekat
pada media membentuk gumpalan yang basah. Cara yang dapat dilakukan untuk mengurangi
kontaminasi adalah sebaiknya menggunakan bahan sterilisasi dengan konsentrasi yang tepat
dan periode perendaman yang lebih lama agar lebih efektif dalam membunuh
mikroorganisme tanpa mematikan sel-sel pada jaringan yang dikulturkan (Wati, 2020).

1.2 tujuan
1. Mengetahui perkembangan kultur Kalus

4
 BAB II
METODELOGI

2.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Praktikum kultur pucuk ini dilaksanakan pada Minggu, 21 oktober 2021 di
Laboratorium Fakultas Pertanian dan Bisnis Universitas Kristen Satya Wacana.
2.2 Alat dan Bahan
A. Bahan
1. Wortel
2. Clorox 20%
3. Alcohol 70%
4. Botol media
5. Media MS dengan ZPT 2,4 D 1mg/l
B. Alat
1. LAF/Entkas
2. Pisau steril
3. Petridish

2.3 Cara Kerja

1. Wortel segar dan sehat, buang bagian-bagian yang kotor
2. Cuci wortel dengan diterjen, kupas kulit luar, lalu iris dalam potongan kira-kira 2 cm.
3. Sterilkan dalam alkohol 70% selama 1 menit
4. Bilas dengan aquades steril
5. Rendam dalam larutan Clorox 20% selama 10 menit
6. Bilas lagi dengan aquades steril 3x
7. Bagian ujung eksplan yang kontak dengan larutan steril dipotong
8. Ambil bagian cambium dan ditanam dalam media MS dengan hormone 2,4 D
9. Kultur diletakkan pada rak terbuka didalam ruang kultur dengan temperature rata-rata
250C
10. Periksa kultur setelah 1 minggu, untuk melihat perkembangan kultur.
11. Setelah 4 minggu kalus yang friable dapat disubkulturkan pada media baru.

5
 BAB III
HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

3. 1 Hasil Pengamatan Kultur Kalus Wortel

21 Oktober 2021
MS0 BA+NAA 2,4 D Keterangan
Penanaman kalus wortel
berdasarkan perlakuan ZPT
1. MS0
2. BA 1 mg/l + NAA 0,1
mg/l
3. 2,4D 1 mg/l
*eksplan dipotong dengan dua
ukuran yaitu ukuran besar
yang berasal dari wortel A dan
ukuran kecil yang berasal dari
wortel B.
28 Oktober 2021
MS0 BA+NAA 2,4 D Keterangan
Eksplan wortel masih tampak
segar, baik itu eksplan
berukuran besar maupun
eksplan dengan ukuran kecil.

4 November 2021
MS0 BA+NAA 2,4 D Keterangan
Eksplan wortel dengan ukuran
kecil berubah warna menjadi
coklat sedangkan eksplan
dengan ukuran besar belum
mengalami perubahan,

6
 11 November 2021
MS0 BA+NAA 2,4 D Keterangan
Eksplan wortel dengan ukuran
kecil berubah warna menjadi
coklat dan mengering.
Sedangkan eksplan dengan
ukuran besar pada media
dengan ZPT BA&NAA
terdapat lapisan lendir sebagai
indikasi terjadinya kontaminasi
dari eksplan

18 November 2021
MS0 BA+NAA 2,4 D Keterangan
Eksplan ukuran kecil berwarna
coklat dan kering. Tidak terjadi
pertumbuhan kalus.

Eksplan dengan media MS0

dan 2,4D eksplan nampak
segar namun tidak terjadi
pertumbuhan kalus.
Sedangkan ZPT BA+ NAA
eksplan kontaminasi bakteri

Kultur Kalus Wortel

7
 Contoh Kultur Kalus wortel yang Berhasil dengan
penambahan ZPT 2,4D 1mg/l
3.2 Pembahasan

Pada praktikum kultur kalus ini yaitu menggunakan eksplan wortel. Eksplan adalah
bahan tumbuhan yang dipakai unflrk memperbanyak tumbuhan dengan sistem kultur
jaringan. Kesesuaian bagian tumbuhan untuk dijadikan eksplan, dipengaruhi oleh banyak
faktor. Ukuran eksplan yang digunakan pada praktikum ini berbeda – beda yaitu besar dan
kecil. Menurut Dwiyani (2015), Makin besar ukuran eksplan akan mempermudah proses
kultur dan menyebabkan lebih banyak plantlet yang dihasilkan, namun akan diperoleh anakan
tanaman yang bebas virus makin sedikit. Ukuran eksplan yang semakin besar akan
menyebabkan eksplan lebih kuat dalam proses sterilisasi sehingga memungkinkan persentase
eksplan bertahan hidup paska sterilisasi lebih besar dan diperoleh jumlah plantlet yang lebih
banyak. Namun semakin besar ukuran eksplan menyebabkan keikutsertaan jaringan
pembuluh pada eksplan yang digunakan sehingga kemungkinan adanya virus pada plantlet
yang dihasilkan akan menjadi lebih besar. Menurut Wilheln (2000) bahwa pada jaringan
muda, frekuensi induksi dapat mencapai l00 %, sementara frekuensi inisiasi pada jaringan
dewasa hanya 20% dan dibutuhkan subkultur dalam beberapa bulan. Jadi selainjenis, umur
eksplan juga merupakan faktor penentu kemampuan induksi kalus. Dalam induksi kalus,
hampir semuabagian dari organtumbuhan dapat digunakan sebagai sumber eksplan.

8
 Namun pada praktikum kalus dengan eksplan wortel, kondisi ekspaln yang digunakan
yaitu wortel layu dan tidak segar. Wortel yang layu dan tidak segar kemampuan untuk
beregenerasi sangat rendah sehingga menyebabkan kegagalan dalam kultur kalus. Jaringan
muda yang bersifat meristematik akan lebih mudah menghasilkan kalus. Seedling
(kecambah) yang dibuat secara in vitro dari biji (yang sudah disterilkan) sangat baik
digunakan sebagai bahan eksplan untuk pembuatan kalus. Berdasarkan penelitian dari
Sitinjak (2011), menyatakan bahwa kesesuaian bagian tumbuhan untuk dijadikan eksplan,
dipengaruhi oleh banyak faktor. Oleh karena itu perlu diketahui, bahwa ada tiga hal penting
yang berpengaruh terhadap respon in 1ilro tersebut, yaitu: kemampuan rogenerasi, tingkat
fisiologi dan kesehatan dari tumbuhan donor. Pada inisiasi dan perkembangan dari sel
tunggal atau dari sekelompok sel sering bergantung pada sifat eksplan, yang berhubungan
dengan kondisi tumbuh dan tahap perkembangan dari bagian tumbuhan yang dijadikan
eksplan. Jaringan muda dari tipe tertentu sangat cocok untuk induksi kultur kalus.
Pada minggu pertama ekplan sudah disterilkan dengan prosedur yang sudah dipelajari
sebelumnya yang membuat bagian ekplan, bahan dan alat ekplan sudah disterilkan dengan
baik. Pada minggu kedua ekplan besar maupun kecil masih terlihat segar belum ada
terjadinya kontaminasi dari ekplan yang dipratikan. Pada minggu ke 3 ekplan kecil
mendapatkan tanda – tanda terjadinya kontaminasi begitupun ekplan yang berukuran besar
akan tetapi memiliki perbedaan antara kontaminsi ekplan besar dan kecil, untuk yang kecil
berubah warna menjadi coklat sedangkan ekplan yang besar dibagian dinding labu takar

9
terdapat lendir, ini bisa terjadi karna kurangnya sterilisi ketat terhadap ekplan sehingga
mikroba-mikroba yang ada didalam maupun disekitar eksplan berkembang biak di dalam
media. Sterilisasi yang kurang sempurna kemungkinan besar terjadi pada saat eksplan akan
ditanam di dalam botol kultur. Penyemprotan alkohol setelah selesai pengamatan bertujuan
untuk mencegah kontaminasi setelah diamati(Husen, 2008).

BAB IV
KESIMPULAN

Dalam hasil pratikan yang sudah dilakukan dapat disimpulkan terdapat beberapa
eksplan yang tekena kontaminasi, dan ada beberapa eksplan yang berhasil atau tidak terkana
kontaminasi. Kontaminasi pada pratikan ini terdapat kontaminasi bakteri pada eksplannya.

10
11
 DAFTAR PUSTAKA

Dwiyani, R. 2015. Kultur Jaringan Tanaman. Pelawa Sari “Percetakan & Penerbit”.
Denpasar.
Fauziyyah, D., Hardiyati, T., dan Kamsinah. 2012. Upaya Memacu Pembentukan Kalus
Eksplan Embrio Kedelai (Glycine max L. Merril) dengan Pemberian Kombinasi 2.4-D
dan Sukrosa Secara Kultur In Vitro. Jurnal Pembangunan Pedesaan 12(1):30-37.
Lingga ,L. 2007. Anthurium. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Oratmangun, K, M., Pandiangana, D., dan Kandou, F, E. 2017. Deskripsi Jenis-jenis
Kontaminan dari Kultur Kalus catharanthus roseus (L.) G. Don. Jurnal MIPA UNSRAT.
6(1):47-52.
Sitinjak, R. 2011. ENISIASI KUILTUR KALUS PADA TUMBUHAN. Jurnal Akademia.
15(3): 44-47.
Wati, T., dkk. 2020. Perbanyakan Begonia Bimaensis Undaharta dan Ardaka dengan Teknik
Kultur Jaringan. Metamorfosa : Journal of Biological Sciences. 7(1):112-122.
Wattimena, G. A. 2001. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. IPB Press. Bogor.
Yuliarti, N. 2010. Kultur In Vitro Tanaman Skala Rumah Tangga. Lily Publisher.
Yogyakarta.
Yustina. 2003. Kultur Jaringan : Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Agro
Medika Pustaka. Jakarta.
Wilheln, E. 2000. Somatic embryogenesis in oak (Quercas spp). Invitro CellDev. Biol. Plant.
36: 349457

12