Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

molekul
Tinjauan

Pemisahan Kromatografi dari

Enantiomer Vitamin E
Ju-Yen Fu1, Thet-Thet Htar2, Leanne De Silva2, Doryn Meam-Yee Tan1dan Lay-Hong Chuah2,*
1 Unit Nutrisi, Divisi Pengembangan Produk dan Layanan Konsultasi, Dewan Minyak Sawit Malaysia, 6
Persiaran Institusi, Bandar Baru Bangi, 43000 Kajang, Selangor, Malaysia; fujuyen@gmail.com (J.-YF);
dtmy1988@gmail.com (DM-YT)
2 Sekolah Farmasi, Universitas Monash Malaysia, Bandar Sunway, 47500 Subang Jaya, Selangor, Malaysia;
thet.thet.htar@monash.edu (T.-TH); leannedesilva@gmail.com (LDS)
* Korespondensi: alice.chuah@monash.edu ; Telp.: +60-3-5514-4454

Editor Akademik: Yoshio Okamoto

Diterima: 19 Oktober 2016; Diterima: 20 Desember 2016; Diterbitkan: 4 Februari 2017

Abstrak:Vitamin E diakui sebagai vitamin esensial sejak ditemukan pada tahun 1922. Sebagian besar
minyak nabati mengandung campuran tokoferol dan tokotrienol dalam komposisi vitamin E. Secara
struktural, tokoferol dan tokotrienol berbagi cincin kromanol yang sama dan rantai samping pada posisi
C-2. Karena tiga pusat kiral di tokoferol, mereka dapat muncul sebagai delapan stereoisomer yang
berbeda. Tanaman sumber tokoferol secara alami terjadi dalam bentuk:RRsedangkan tokoferol sintetik
biasanya dalam bentuk campuran semua rasemat. Demikian pula, dengan hanya satu pusat kiral,
tokotrienol alami terjadi sebagaiR-isoform. Dalam ulasan ini, kami bertujuan untuk membahas
beberapa metode kromatografi yang telah digunakan untuk memisahkan stereoisomer tokoferol dan
tokotrienol. Metode ini meliputi kromatografi cair kinerja tinggi, kromatografi gas dan kombinasi
keduanya. Kajian akan fokus pada pengembangan metode termasuk pemilihan kolom kiral, metode
deteksi dan pilihan pelarut elusi dalam konteks efisiensi pemisahan, resolusi dan kemurnian kiral.
Aplikasi untuk pemisahan enansiomer dalam vitamin E juga akan dibahas terutama dalam hal potensi
biologis yang khas di antara stereoisoform.

Kata kunci:vitamin E; tokoferol; tokotrienol; kromatografi; enansiomer

1. Perkenalan

Vitamin E terdiri dari dua keluarga senyawa yang larut dalam lemak terutama tokoferol dan tokotrienol.
Tokoferol dikenal sebagai bagian dari sistem pertahanan antioksidan karena kemampuannya menangkap radikal
peroksil terutama yang berasal dari asam lemak tak jenuh ganda.1]. Secara alami, tokoferol ditemukan sebagai
konstituen vitamin E utama dalam minyak kacang kedelai, minyak safflower dan bibit gandum sementara tokotrienol
terutama ditemukan dalam minyak sawit dan minyak dedak padi.2,3]. Karena -tokoferol (α-Toc) telah terbukti
memperkaya plasma dibandingkan dengan tokoferol lain, ini adalah bentuk yang paling disorot dalam penelitian
vitamin E [4-6]. Menjadi konstituen kecil dalam vitamin E, tokotrienol mendapatkan perhatian yang meningkat dalam
beberapa tahun terakhir karena sifat biologisnya yang kuat termasuk perlindungan saraf dan aktivitas antikanker.7,8].

Baik tokoferol dan tokotrienol memiliki struktur inti umum yang terdiri dari, sistem cincin 6-
kromanol (benzopiran) yang disubstitusi dengan gugus metil dan rantai samping isoprenoid. Tergantung
pada variasi jumlah dan posisi substituen metil pada cincin, dapat diklasifikasikan lebih lanjut sebagai -, -,
-, dan -tokoferol dan -, -, -, dan -tokotrienol ( Angka1). Secara singkat, bentuk adalah trimetil, bentuk dan
adalah dimetil dan bentuk adalah monometil. Rantai samping isoprenoid di tokoferol direpresentasikan
sebagai ekor fitil jenuh dengan tiga stereocenter di C2, C4kandan C8kan. Oleh karena itu, secara teoritis,
total delapan stereoisomer aktif optik dapat diharapkan dari masing-masing -, -,

Molekul2017,22, 233; doi:10.3390/molekul22020233 www.mdpi.com/journal/molecules

Molekul2017,22, 233 2 dari 17

-, dan -tokoferol. Namun, tokoferol alami ditemukan hanya memiliki (2R, 4kanR, 8kanR) karena
biosintesisnya yang terjadi pada tumbuhan bersifat spesifik secara enansiomer. Sebaliknya, tokotrienol
memiliki stereocenter tunggal dengan tiga ikatan rangkap tidak terkonjugasi pada ekor isoprenoidnya.
Tokotrienol alami ditemukan dengan (2R, 3kanE, 7kanE) konfigurasi secara eksklusif. Perlu dicatat bahwa
setiap komponen vitamin E memiliki kekuatan yang berbeda dalam aktivitas antioksidan dan biologis.9].

Tokoferol Tokotrienol R1 R2
-Tocopherol -Tocotrienol CH3 CH3
-Tocopherol -Tocotrienol CH3 H
-Tocotrienol -Tocotrienol H CH3
-Tocopherol -Tocotrienol H H

Gambar 1.Struktur dan posisi metil tokoferol dan tokotrienol.

Seiring dengan meningkatnya informasi tentang manfaat kesehatan vitamin E, total dan semi-
sintesis -Toc dan -tocotrienols telah dikembangkan untuk memenuhi kebutuhan vitamin E. Sejauh
ini, bentuk -Toc yang paling umum tersedia adalah semua -rasemat-α-Memanggil-ras-α-Toc), yang
diperoleh dari reaksi 2,3,5-trimethylhydroquinone dengan rasemat isophytol dalam suasana asam [
10-12]. Reaksi ini menghasilkan campuran rasemat -Toc yang mengandung delapan stereoisomer
dalam proporsi yang sama. Delapan stereoisomer dapat dikelompokkan menjadi 2Rkonfigurasi (RR,
RS, RRS, danRSS) dan 2Skonfigurasi (SS,SRS,SSR, danSR). Sintesis stereoselektif -Toc telah
menghasilkan 2-ambo-α-Toc (campuran dariRR- danSR-α-Toc dalam rasio 1: 1) dan 4kan-ambo-8kan
-ambo-α-Toc (campuran 2kan-konfigurasi stereoisomer). Produk-produk ini dianggap sebagai
produk tokoferol yang diperkaya secara enansiomer. Atau, menggunakan pendekatan semi-
sintetik, konversi kimia dari -, -, -tokoferol alami yang diisolasi dari sumber nabati keRR-α-Toc
(2,5,7,8-tetrametil-2R-(4kanR,8kanR,12-trimethyl-tridecyl)-6-chromanol)) melalui esterifikasi telah
dicoba untuk menghasilkanRR-α-ester tokoferil [13].
Karena masalah stabilitas kimia semua-ras-α-Toc dalam bentuk bebas, turunan ester yang
lebih stabil seperti asetat dan suksinat telah disiapkan. Bentuk -Toc yang tersedia secara komersial
adalah RR-α-Memanggil-ras-α-Toc serta turunan esterifikasinya seperti all-ras-α-tokoferil asetat
(semuaras-α-Toc asetat) [1]. Sehubungan dengan biopotensi stereoisomer -Toc,RR-α-Toc memiliki
aktivitas antioksidan dan pemulung radikal tertinggi. Biopotensi aktivitas vitamin E yang lebih tinggi
diamati terutama padaR-enansiomer dari -Toc relatif terhadap yang sesuai2S-isomer (yaitu,RR=
100%, SS=60%;RSS=73%,SR=31%;RS=57%,SRS=37%;RRS=90%,SSR=21%) [14,15]. Perbedaan
bioaktivitas dan bioavailabilitas stereoisomer -Toc yang berbeda telah menarik minat banyak
peneliti. Studi-studi ini juga berkontribusi pada rekomendasi nutrisi seperti Dietary Reference
Intake yang dilaporkan oleh Institute of Medicine (IOM) [16]. Berdasarkan aktivitas biologis khas
antara 2R- dan 2S-isomer, panel merekomendasikan untuk tidak menyertakan2Sbentuk
-stereoisomer dari -Toc dalam tunjangan diet untuk vitamin E. Ketika dianalisis dalam populasi
Irlandia, persentase plasmaRR-isomer ditemukan lebih rendah pada kelompok yang mengambil
semua-ras-suplemen vitamin E dibandingkan dengan kelompok yang menerima suplemen vitamin
E alami dan kelompok yang tidak diberi suplemen sama sekali [17].
Molekul2017,22, 233 3 dari 17

Seperti tokoferol, sintesis total telah menghasilkan produk rasemat (total delapan isomer, RS, danE/
Z-) untuk setiap tokotrienol. Tantangan utama dalam sintesis total tokotrienol adalah pengaturan
kiralitas pada posisi 2. Pada tahun 1976, sintesis stereoselektif total dari2R,3kanE,7kanE-α-tokotrienol
dilaporkan untuk pertama kalinya dengan hasil keseluruhan 3,44% dari trimetilhidrokuinon dan rata-rata
84,5% untuk masing-masing dari 20 langkah sintesis [18]. Setelah beberapa dekade, Couladouros et al.
melaporkan sintesis pendek dan nyaman dari 2-metilkromanmethanol murni optik dan seri alami -, -, dan
-tokotrienol [19].
Untuk memahami distribusi stereoisomer vitamin E dalam plasma, dan jaringan, sebagai
bahan tambahan makanan, berbagai metode analisis telah dikembangkan untuk dapat
memisahkan dan mengukur stereoisomer. Ulasan ekstensif pada pemisahan kromatografi
homolog vitamin E telah dilakukan sebelumnya [20,21]. Namun, tantangan utama dalam
pemisahan kromatografi stereoisomer -Toc tetap berada di bidang resolusi kiral. Tinjauan ini
berfokus pada metode kromatografi percobaan, yang membahas analisis kiral campuran rasemat
tokoferol dan tokotrienol yang diperoleh dari berbagai jenis sampel.

2. Kromatografi Cair

Pada tahun 1984, Yamaguchi et al. pertama kali melaporkan bahwa tiga jenis -tokoferil asetat yang
berbeda, yaitu, bentuk alami -Toc (RR-α-Tok), 2-ambo-α-Tok dan semua-ras-α-Toc yang ditemukan dalam
preparat komersial yang berbeda, dapat dibedakan dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
(HPLC) [22]. Para penulis menggunakan Chiralpak OT (+) yang tersedia secara komersial, berbasis (1)-
poli(trifenilmetil metakrilat) sebagai fase diam kiral dengan asetonitril sebagai fase gerak yang diatur pada laju
aliran 0,5 mL/menit dan tampak ultraviolet (UV). ) panjang gelombang 284 nm. Kromatogram yang diperoleh
menunjukkan bahwaRR-α-Toc asetat dielusi sebagai puncak tunggal dan 2-ambo-α-Toc asetat dipisahkan
menjadi dua puncak karena merupakan campuran dari dua epimer (Puncak 1:RR-α-Tok; dan Puncak 2:SR-α-
Tok). Meskipun semua-ras-α-Toc asetat merupakan campuran dari delapan stereoisomer, kromatogram yang
diperoleh menunjukkan hanya dapat dipisahkan menjadi 3 puncak dengan pemisahan rasemat yang tidak
sempurna. Para penulis menyimpulkan bahwa Puncak 1 mewakili ras dariRR+SSdan satu ras lagi:RRS+SSRatau
RS+SRS; Puncak 2 diwakili RRS+SSRatauRS+SRSdan Puncak 3 adalah ras dariSR+RSS.
Vecchi dkk. melihat kelemahan dalam metode ini dan berhipotesis bahwa metode tersebut dapat
direvisi dengan cara yang memungkinkan pemisahan lengkap (semuaras-α-Toc asetat menjadi dua
puncak yang mengandung (2R,4kan-ambo,8kan-ambo)- dan (2S,4kan-ambo,8kan-ambo)-α-tokoferol, di
mana setiap puncak akan berisi masing-masing stereoisomer dengan konfigurasi cincin kromanol C(2)
yang sama. Para penulis mencapai pemisahan kromatografi dari semuaras-α-Toc asetat menggunakan
kolom baja stasioner buatan sendiri dengan (+) poli(trifenilmetilmetakrilat) ((+)-PTMA) terikat pada silika
gel. Asetonitril dan air (9:1,v/v) digunakan sebagai fase gerak dengan laju alir 0,5 mL/menit, dan sistem
HPLC digabungkan dengan deteksi UV pada 200 nm. Kromatogram yang diperoleh menunjukkan lima
puncak dengan identitas mereka ditentukan melalui co-injeksi stereoisomer asli, di mana Puncak 1
adalahRS+RSS; Puncak 2 dan 3 adalahRR+RRS; Puncak 4 adalahSS+SSR; dan Puncak 5 adalahSRS+SR.
Metode ini menghasilkan hasil yang dapat direproduksi secara memuaskan dengan kelemahan kecil
yaitu memakan waktu. Para penulis juga melaporkan bahwa resolusi semuaras-α-Toc asetat
menggunakan kolom (+)-PTMA sangat tergantung pada ukuran pori silika gel, derajat polimerisasi (+)-
PTMA, ketebalan lapisan penyangga dengan polimer dan suhu. Namun, masa hidup fase diam (+)-PTMA
dilaporkan lebih pendek daripada fase diam yang terikat secara kimia karena pertumbuhan polimer yang
konstan dari fase gerak. Juga dicatat bahwa setelah berminggu-minggu penggunaan terus menerus dari
fase diam ini, selektivitas kolom berubah sendiri di mana puncak depan semua-ras-α-Toc asetat secara
bertahap bergerak lebih dekat satu sama lain dan akhirnya tampak tidak lagi terpisah [23]. Metode
kromatografi ini akibatnya digunakan oleh Weiser et al. Penulis makalah juga merekomendasikan
penggunaan kolom Chiracel OD fase kiral dari Daicel yang lebih menghemat waktu, tetapi hanya tersedia
setelah mereka menyelesaikan studi mereka.
Molekul2017,22, 233 4 dari 17

Ueda dkk. juga telah merevisi metode HPLC oleh Yamaguchi et al. untuk pemisahan kromatografi. Metode
baru ini memungkinkan pemisahan semuaras-α-Toc asetat menjadi empat puncak [22,24]. Para penulis
menganalisis semua-ras-α-Toc asetat pada 30◦C menggunakan kolom Chiralpak OP (+) dengan metanol dan air
(96:4,v/v) diatur pada laju aliran 0,3 mL/menit pada panjang gelombang deteksi UV 284 nm. Semua-ras-α-Toc
pada spesimen biologi tikus yang ditemukan terbagi menjadi empat puncak dengan perbandingan luas puncak
4:2:1:1 yang terdiri dari (RR+RS+RRS+RSS), (SS+SSR),SR, danSRS, masing-masing. Batas deteksi stereoisomer
dalam sampel adalah sekitar 10 ng. Metode yang baru direvisi oleh Ueda et al., yang memungkinkan
pemisahan lengkap dari semuaras-α-Toc asetat menjadi 2R-isomer dan 2Sisomer, akibatnya digunakan oleh
Kiyose et al. dalam berbagai penelitian dengan sedikit variasi dalam metanol hingga H2Rasio O fase gerak [25-
27].
Mengikuti perkembangan kolom OD Chiralcel, fase diam kiral tipe tris(3,5-dimetil-fenilkarbamat)
selulosa, Nakamura et al. memisahkan turunan metil eter -Toc dari ekstrak lipid seluler melalui kolom OD
HPLC Chiralcel fase kiral. Heksana digunakan sebagai fase gerak dan diatur pada laju alir 1 mL/menit [28
]. Detektor UV diatur pada 283 nm untuk memungkinkan deteksi -Toc metil eter (α-Toc-ME) isomer. Fase
diam kiral ini memisahkan semuaras-α-Turunan Toc-ME menjadi lima puncak (Gambar2) dan seluruh
analisis membutuhkan waktu 80 menit. Puncak 1 berisi empat2S-isomer, yang terelusi pada 25 menit;
Puncak 2 terkandungRSS-isomer (terelusi pada menit ke-38); Puncak 3 terkandungRRS-isomer (terelusi
pada 43 menit); Puncak 4 terkandungRR(dielusi pada 52 menit); dan Puncak 5 berisiRS(dielusi pada 61
menit). Derivatisasi -Toc menjadi metil eter dilakukan untuk memblokir gugus hidroksil, sehingga
mengubah polaritas analit dan meningkatkan sifat kromatografinya.29].

Gambar 2.Pemisahan kiral -Toc metil eter dengan kolom OD Chiracel. Puncak 1: empat 2S-isomer; Puncak
2:RSS-; Puncak 3:RRS; Puncak 4:RR; dan Puncak 5:RS[28]. Dicetak ulang dengan izin Hak Cipta (1998) oleh
Springer.

Sedangkan Nakamura dkk. melakukan analisis mereka menggunakan kolom OD Chiralcel, Kiyose et al.
menggunakan kolom Chiralcel OD-H. Kedua kolom seri H dan non-H dilaporkan memiliki selektivitas yang
sama, dengan Chiralcel OD-H memiliki efisiensi kromatografi yang unggul dan resolusi keseluruhan [15]. Kiyose
dkk. menyuntikkan -Toc-ME yang diekstraksi dari jaringan tikus dan plasma ke dalam sistem HPLC yang
dilengkapi dengan Chiralcel OD-H menggunakan heksana dan isopropil alkohol (97.3:2.7,v/v) diatur pada laju
alir 0,3 mL/menit dan panjang gelombang deteksi UV 268 nm. Puncak pertama pada kromatogram diwakiliRR
-α-Toc-ME sedangkan puncak kedua diwakiliSR-α-Toc-ME. Lauridson dan Jenson juga menganalisis -Toc-ME
yang diekstraksi dari susu babi dari laktasi dan darah menggunakan kolom Chiralcel OD-H dengan sedikit
perubahan dalam metode mereka, yang telah dikutip oleh penelitian yang menganalisis -Toc dari lemak
subkutan babi danLongissimus dorsiotot [30,31]. Secara singkat, -Toc diekstraksi dan diturunkan menjadi metil
eternya dan disuntikkan ke dalam sistem HPLC yang dilengkapi dengan Chiralcel OD-H menggunakan heptana
dan isopropanol (99,95:0,05,v/v) sebagai fase gerak [32]. Panjang gelombang deteksi fluoresensi (FL) untuk
eksitasi dan emisi ditetapkan masing-masing pada 295 nm dan 330 nm. Kromatogram menunjukkan bahwa
delapan stereoisomer dipisahkan menjadi lima puncak di mana Puncak 1 berisi keempat 2Sbentuk (2SR/SR/S)-;
Puncak 2 berisi 2RSS-; Puncak 3 berisi 2RRS-; Puncak 4 berisi 2RR-; dan Puncak 5 berisi 2RS-α-Tok. Demikian
pula dalam sebuah studi oleh Kłaczkow et al. menggunakan kolom Chiralcel OD-H untuk memisahkan semua
ras-α-Toc ditemukan dalam sediaan farmasi ke dalam stereoisomer masing-masing [29]. Fasa gerak yang
digunakan adalah heksana yang diatur pada aliran
Molekul2017,22, 233 5 dari 17

kecepatan 1,5 mL/menit. Kromatogram menunjukkan bahwa stereoisomer -Toc dipisahkan menjadi lima
puncak yang mengandung delapan stereoisomer dimana Puncak 1 mengandung 2S (SSR+SS+SRS+SR)
stereoisomer (dielusi pada 12,6 menit); Puncak 2 berisiRRSstereoisomer (terelusi pada 21,5 menit); Puncak 3
berisi RSSstereoisomer (dielusi pada 23,3 menit); Puncak 4 berisiRRstereoisomer (terelusi pada 27,8 menit); dan
Puncak 5 berisiRSstereoisomer (terelusi pada 32,4 menit). Berbagai penelitian lain telah dilakukan selama
bertahun-tahun untuk memisahkan -Toc menjadi stereoisomer individualnya menggunakan kolom Chiralcel
OD-H dalam pakan ayam, hati dan paha [33], bahan pakan sapi, otot, susu dan darah [34-36] Biji Garcinia Kola [
37] dan plasma manusia [17] dengan variasi kecil dalam komposisi fase gerak dan deteksi FL seperti yang
ditunjukkan pada Tabel1.
Chen dkk. mengembangkan fase diam kiral baru untuk elektrokromatografi tubulus terbuka
dengan melumpuhkan bahan nano kitosan ke kapiler yang dimodifikasi. Nanomaterial kitosan (CS)
diimobilisasi melalui kopolimerisasi nano-CS yang dimodifikasi glisidil metakrilat dengan metakrilamida
(MAA) dan pengikat silang bis-akrilamida sehingga menghasilkan pembentukan kapiler MAA-CS.
Dibandingkan dengan kolom yang dikemas (yaitu, Chiralpak-OP dan Chiralcel OD/OD-H), kolom tubular
terbuka tidak memiliki rasio fase. Namun, penggunaan kolom tubular terbuka relatif mudah, yang
menghilangkan kebutuhan untuk pembuatan rumit dari setiap frit yang diperlukan untuk pembuatan
kolom. Para penulis mengevaluasi pemisahan kiral -Toc menggunakan rasemat all-ras-α-Solusi Toc dari
sediaan farmasi tanpa derivatisasi apa pun untuk mengevaluasi kemampuan kiralitas selektif fase MAA-
CS yang dikembangkan. Metode yang digunakan adalah kapiler MAA-CS dengan buffer borat pada pH
yang bervariasi yaitu 7,5-9,5 dimodifikasi dengan 10%v/vasetonitril sebagai elektrolit latar. Tegangan
yang diberikan adalah 10 kV dan -Toc ditambahkan melalui injeksi hidrostatik dan terdeteksi pada 200
nm. Namun, kromatogram yang dihasilkan dari metode ini hanya memisahkan -Toc menjadi dua puncak
yang sesuai dengan 2Rdan 2Sdiastereoisomer dari -Toc. Sementara perubahan tingkat pH dan adanya
asetonitril sebagai pengubah membantu memisahkan dua puncak, kromatogram yang diperoleh analog
dengan yang diperoleh pada pekerjaan sebelumnya menggunakan kiral poli akrilat dan Chiralpak-OT
sebagai fase diam HPLC untuk pemisahan -Toc stereoisomer [38].
Di sisi lain, Drotleff et al. berusaha mengembangkan metode HPLC yang andal untuk menganalisis
isomer tokotrienol sintetis untuk mengidentifikasi produk rasemat tokotrienol. Sebelum derivatisasi,
-tokotrienol dibagi menjadiE/Zisomer melalui HPLC preparatif pada -siklodekstrin (β-PM) permetilasi. -PM
adalah oligosakarida siklik yang terikat secara kovalen dengan silika gel. Cincin siklodekstrin -PM
memberikan struktur siklus yang dapat diilustrasikan sebagai kerucut terpotong dengan rongga interior
hidrofobik. Perilaku pemisahan cincin siklodekstrin dipengaruhi oleh gugus hidroksil hidrofilik termetilasi
yang ditemukan pada ujung terbuka kerucut terpotong yang menggunakan kompleks inklusi, ikatan
hidrogen, dan interaksi dipol sebagai mekanisme pemisahan.39]. Tersedia secara komersialRS-α-
tokotrienol disuntikkan ke dalam HPLC yang dilengkapi dengan kolom Nucleodex -PM menggunakan
asetonitril dan air (60:40v/v) pada laju aliran 6,5 mL/menit dan deteksi UV 230 nm [40]. Kromatogram
menampilkan empat puncak yang mewakili empat isomer rantai samping dari yang tersedia secara
komersial RS-α-tokotrienol dengan orde elusiRS,Z-Z-, kedua dan ketigaRS,Z-E- danRS,E-Z- dan RS,E-E-α-
tokotrienol sebagai isomer akhir yang akan dielusi. SetelahE/Zisomer diisolasi melalui pemisahan
keempat fraksi yang masing-masing mengandung sepasang enansiomer -tokotrienol, E/Z-α-tokotrienol
dimetilasi [39]. Selanjutnya dilakukan pemisahan kromatografi -tokotrienol metil eter pada kolom
Chiralcel OD-H 0,05% (v/v) isopropanol dalam isoheksana sebagai fase gerak dan laju alir 1,0 mL/menit.
Emisi deteksi FL dan panjang gelombang eksitasi ditetapkan masing-masing pada 339 dan 295 nm.
Derivatisasi tokotrienol menjadi metil eter mereka dilakukan untuk memblokir gugus hidroksil yang
sangat polar sehingga mencegah asosiasi yang tidak spesifik dengan situs karbamat fase diam dan
memungkinkan interaksi dengan selulosa pada fase diam. Para penulis juga mengevaluasi dampak dari
berbagai fase gerak pada pemisahanRS,E/Z-α-tokotrienol metil eter. Mereka menemukan bahwa
isoheksana (100%) menghasilkan resolusi enam puncak luas yang dapat dicapai dalam waktu 60 menit,
sedangkan isoheksana dan isopropanol (90:10,v/v) menghasilkan elusi dari kedelapan isomer tanpa
pemisahan.
Molekul2017,22, 233 6 dari 17

Tabel 1.Metode HPLC untuk pemisahan -Toc dan -, -, -, dan -tocotrienol.

Kolom Fase Seluler analit Panjang Gelombang Deteksi Pemisahan Stereoisomer/Diastereomer Aplikasi Referensi
Kiralcel OD-H FL: 284 nm (Keluaran)
n-heksana -Toc metil eter (SS+SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS Pakan sapi dan otot, plasma manusia [17,36]
(250×4,6 mm ID) 326 nm (Em)
Kiralpak OP (+) (RR+SS,RRS+SSR,RS+SRS), (RRS+RS,RS+
Asetonitril -Toc asetat UV: 284 nm Produk komersial [22]
(250×4,6 mm ID) SRS), (SSR+RSS)
Nucleosil1000-5 dilapisi dengan
(+)-PTMA) Asetonitril/H2HAI -Toc asetat UV: 200 nm (RS+RSS), (RR+RRS), (SS+SSR), (SRS+SR) Produk komersial, darah dan jaringan tikus [23]
(250×4mm ID)
Kiralpak OP (+) Jaringan tikus, darah, plasma dan jaringan, serum
Metanol/H2HAI -Toc asetat UV: 284 nm (RR+RS+RRS+RSS), (SS+SSR),SR,SRS [24-27]
(250×4,6 mm ID) manusia dan lipoprotein

Kiralcel OD
n-heksana -Toc metil eter UV: 283 nm (SS+SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS Ekstrak lipid seluler [28]
(250×4,6 mm ID)
Kiralcel OD-H FL: 295 nm (Kecuali)
n-heksana -Toc metil eter (SS+SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS Sediaan farmasi Vitamin E [29]
(250×4,6 mm ID) 330 nm (Em)
Susu babi dari laktasi, darah, lemak subkutan dan
Kiralcel OD-H FL: 290 nm (Mis)
n-heptana/isopropanol -Toc metil eter (SSS +SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS otot babi Longissimus dorsi, plasma tikus, jaringan [30-32,34]
(250×4,6 mm ID)
327nm (Em) dan feses, susu sapi dan darah

Kiralcel OD-H FL: 295 nm (Kecuali)

n-heptana / isopropanol -Toc metil eter (SS+SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS Pakan ayam, hati dan paha [33]
(250×4,6 mm ID) 330 nm (Em)
Kiralcel OD-H FL: 296 nm (Kecuali)
n-heptana/isopropanol -Toc metil eter (SS+SSR+SR+SRS),RSS,RRS,RR,RS Plasma sapi, kolostrum, susu dan neutrofil darah [35]
(250×4,6 mm ID) 372 nm (Em)
Kiralcel OD-H
Heksana/etanol -Toc UV: 220 nm (SS+SSR+SR+SRS), (RSS+RRS+RR+RS) Biji Garcinia Kola [37]
(250×4,6 mm ID)
Elektrolit latar belakang:
kapiler MAA-CS
buffer borat dimodifikasi -Toc UV: 220 nm (SS+SSR+SR+SRS), (RSS+RRS+RR+RS) Sediaan farmasi Vitamin E [38]
(52cm (47cm)×ID 75mm)
dengan asetonitril

Kiralcel OD-H FL: 295 nm (Kecuali)

Isoheksana/isopropanol -tokotrienol (RS,ZZ), (RS,ZE-), (RS,EZ-), (RS,E-E) Sediaan farmasi Vitamin E [39]
(250×4,6 mm ID) 339nm (Em)
(RS,Z-Z- +RS,E/Z- diastereomer),
Nukleodeks -PM
Asetonitril/H2HAI -tokotrienol UV: 230 nm (RS,Z-Z- enansiomer), (RS,E/Z-diasteromer ), (RSS Sediaan farmasi Vitamin E [40]
(200×4mm ID)
,EE), (RS,EE+RS,E/Z- diastereomer)

UV, deteksi Ultraviolet; FL, Deteksi fluoresensi; Contoh, eksitasi; Em, Emisio.
Molekul2017,22, 233 7 dari 17

Kromatogram dariE/Z-α-tokotrienol metil eter ditunjukkan pada Gambar3a–d [39]. Kromatogram

menunjukkan bahwa pasanganZZ-α-tokotrienol metil eter enansiomer memiliki waktu retensi yang berbeda
selama lebih dari enam menit. ItuRS,E/Z-α-tokotrienol yang berasal dari puncak kedua metode -PM
menunjukkan pemisahan yang berbeda sedangkan enansiomer dari yang lainRS,E/Z-α-tokotrienol yang berasal
dari puncak ketiga metode -PM memiliki waktu retensi yang menghasilkan elusi pada interval 3 menit.
Pasangan keempat enansiomerEE-α-tocotrienol methyl ether enantiomers adalah garis dasar dipisahkan. Para
penulis juga menemukan bahwa dengan mengecualikan pemisahan preparatif dariE/Zpada fase -PM sebelum
metilasi menghasilkan delapanRS,E/Z-α-tokotrienol dipisahkan menjadi lima puncak dengan rasio luas puncak
18:5:24:19:27:7 (Gambar3e). Puncak 1 pada kromatogram mengandung dua diastereomer dariZ-Z- danE/Z-α-
tokotrienol metil eter; Puncak 2 mengandung satu enansiomer dariZ-Z-α-tokotrienol metil eter; Puncak 3 berisi
dua diastereomer dariE/Z-α-tokotrienol metil eter; Puncak 4 terkandungMELIHAT-α-tokotrienol metil eter;
Puncak 5 terkandungR,E,E-α-tokotrienol metil eter dielusi bersama dengan diastereomerE/Z-α-tokotrienol metil
eter; dan Puncak 6 diasumsikan sebagai produk degradasi dariR,E,E-α-tokotrienol metil eter. Untuk
mengevaluasi lebih lanjut efektivitas metode singkat ini, pemisahan -, -, dan -tokotrienol sintetis yang juga
terdiri dari delapan kemungkinanRS,E/Z-isomer juga diselidiki.RS,E/Z-β-tokotrienol metil eter memiliki waktu
retensi yang lama yaitu 42 menit. Kromatogram menunjukkan sembilan puncak tetapi karena intensitasnya
yang rendah, puncak keempat dianggap bukan isomer. Sedangkan,RS,E/Z-γ-tokotrienol metil eter dielusi dalam
waktu 10 menit dan dibagi menjadi enam puncak danRS,E/Z-δ-tokotrienol metil eter menunjukkan pemisahan
semua delapan isomer.

Gambar 3.(sebuah-e) Kromatogram pemisahan kiral dariE/Z-α-tokotrienol metil eter dengan kolom
Chiralcel OD-H menjadi enansiomernya: (sebuah) pasangan enansiomer dariRS,Z-Z-α-tokotrienol
metil eter; (b) pasangan enansiomer dariRS,E/Z-α-tokotrienol metil eter; dan (c) pasangan
enansiomer dari RS,E/Z-α-tokotrienol metil eter. Puncak terakhir dianggap sebagai produk degradasi
dari enansiomer kedua yang dielusi; (d) Puncak 1:S,E-E-α-tokotrienol metil eter; Puncak 2:R,E-E-α-
tokotrienol metil eter; dan Puncak 3 dianggap mewakili produk degradasi Puncak 2; (e)
Kromatogram pemisahan kiral dariRS,E/Z-α-tokotrienol metil eter dengan penghilangan langkah
HPLC preparatif. Puncak 1: pasangan diastereomer dariZ-Z- danE/Z-α-tokotrienol metil eter; Puncak
2:Z-Z-α-tokotrienol metil eter enansiomer; Puncak 3: pasangan diastereomer dariE/Z-α-tokotrienol
metil eter; Puncak 4:S,E-E-α-tokotrienol metil eter; Puncak 5:R,E-E-α-tokotrienol metil eter dilarutkan
dengan diastereomer dariE/Z-α-tokotrienol metil eter; dan Puncak 6 dianggap sebagai produk
degradasi dariR,E-E-α-tokotrienol metil eter [39]. Dicetak ulang dengan izin. Hak Cipta (2001) oleh
Elsevier.
Molekul2017,22, 233 8 dari 17

3. Kromatografi Gas

Pada tahun 1960, metode optik digunakan untuk membedakanRR-α-Tok dan semua-ras-α-Tok [41,
42]. Metode yang terlibat mengoksidasi dua senyawa dengan kalium ferisianida dan rotasi optik produk
ditentukan menggunakan polarimeter. Namun, metode ini hanya mengungkapkan komposisi
enansiomer pada C2. Teknik kromatografi gas (GC) pertama yang digunakan untuk menentukan
komposisi diasteroisomerik sampel -Toc alami dan sintetis dikembangkan oleh Solver dan Thompson [42
]. Dalam studi mereka, sampel -Toc diturunkan ke trimetilsilil (TMS) eter yang sesuai sebelum dikenakan
pemisahan kromatografi gas. Diastereoisomer dari tokoferol TMS eter dipisahkan pada 115 m×Kolom
kapiler kaca 0,25 mm dilapisi dengan fase cair sangat polar SP2340, pada suhu kolom 195◦C. Untuk
mencapai resolusi puncak yang lebih baik, Cohen et al. menyempurnakan metode GC dengan mengubah
semuaras-α-Toc ke metil eter yang sesuai [43]. Pemisahan dilakukan pada 100 m×0.25 mm glass capillary
column at 190 ◦C dengan Silar 10 C sebagai fase diam. Metode ini diadaptasi oleh Weiser dan Vecchi
untuk menganalisis preparat yang berbeda dari -Toc yang tersedia secara komersial [14,44]. Selain itu,
Piironen et al. menggunakan metode derivatisasi yang sama untuk mempelajari transfer stereoisomer
-Toc dari pakan ayam ke telur [45]. Padahal beda kolom (CP-Sil 88, 50 m×0,22 mm) digunakan untuk
pemisahan GC, jumlah puncak yang terdeteksi sama dengan yang dilaporkan oleh Cohen et al. Hal ini
karena kolom memiliki polaritas yang sama dengan kolom yang digunakan oleh Cohen et al. Semua
metode GC yang dilaporkan menggunakan fase diam cair akiral dan detektor ionisasi nyala mampu
memisahkan semua diastereoisomer dari semua-ras-α-Toc menjadi empat puncak berbeda dengan
magnitudo yang sama, dalam urutan elusi puncak 1:RRSdanSSR; puncak 2:RRdan SS; puncak 3:RSdanSRS
; puncak 4:RSSdanSR(Angka4). Ini menunjukkan bahwa metode ini hanya dapat membedakan empat
diastereoisomer tetapi tidak delapan stereoisomer, dan empat rasemat hadir dalam jumlah yang setara.
Kondisi kromatografi metode GC yang diterbitkan dirangkum dalam Tabel2.

Gambar 4.Kromatogram gas semua-ras-α-Toc-ME. Empat pasang diastereomer dari semua-ras-α-Toc-ME

memiliki tinggi puncak yang sama [44]. Dicetak ulang dengan izin. Hak Cipta (1981) oleh Hogrefe.
Molekul2017,22, 233
Kolom
100 m×Kolom kapiler kaca 0,3
mm dilapisi denganSilar10C;
suhu 185◦C
Kolom kapiler kaca
(115 m×0,25 mm, dilapisi dengan
fase cair sangat polar SP2340;
suhu 195◦C)
Kolom kapiler kaca
(100 m×0,3 mm, dilapisi
dengan Silar10C; suhu 185◦C)
100 m×Kolom kapiler kaca 0,3
mm dilapisi denganSilar10C;
suhu 185◦C
Kolom kapiler silika menyatu (50 m×
0,22 mm, CP-Sil 88; suhu diprogram
dari 150 hingga 210◦C pada 2◦C/mnt)
(dengan penahanan 2 menit pada
150◦C dan tahan 10 menit pada 210◦
C) dan dari 210 hingga 230◦C pada 1◦
C/menit (dengan penahanan 20
menit pada 230◦C)
Gas Pembawa
Hidrogen pada 25 cm/s;
rasio split 1/50
Hidrogen pada 19 cm/s;
rasio split 1/50 hingga 1/100
Hidrogen pada 17cm/s;
rasio perpecahan 1/200
Hidrogen pada 25 cm/s;
rasio split 1/50
Helium pada 1,8 mL/menit;
rasio split 1/30
9 dari 17
Meja 2.Metode GC untuk pemisahan -Toc.
Stereoisomer/Diastereomer
Kondisi Injektor Suhu FID analit Aplikasi Referensi
Pemisahan
Persiapan yang berbeda dari
semua-ras-α-tokoferil asetat dari
Konsentrasi sampel 1 mg/mL; produksi skala besar, (RRS+SSR), (RR+SS), (RS+
270◦C Produk komersial [14]
suhu 270◦C 4'-ambo-8'-ambo-α-tokoferil asetat, SRS), (RSS+SR)
RRR-α-tokoferil asetat. Semua sampel
diderivatisasi menjadi metil eter.
RR-α-tokoferol, 2-ambo-α-tokoferol, semua 2-ambo-α-tokoferol:RR,SR.
Ukuran sampel 1.7µL pada ras-α-tokoferol dan 4'-ambo-8'-ambo-α- Semua-ras-α-tokoferol:
konsentrasi 2 mg/mL; 300◦C tokoferol. Semua sampel diderivatisasi (RR+SS), (RSS+SR). 4'-ambo-8'- Produk komersial [42]
suhu 280◦C menjadi eter TMS. ambo-α-tokoferol: RR,RSS
Ukuran sampel 2µL pada konsentrasi 1 Semua-ras-α-tokoferol dan -tokoferil
(RRS+SSR), (RR+SS), (RS+
mg/mL; 300◦C asetat. Semua sampel diderivatisasi Produk komersial [43]
SRS), (RSS+SR)
suhu 250◦C menjadi metil eter.
Semua-ras-α-tokoferil asetat, 2-ambo
Konsentrasi sampel 1 mg/mL; -α-tokoferil asetat, RRR-α-tokoferil (RRS+SSR), (RR+SS), (RS+
270◦C Produk komersial [44]
suhu 270◦C asetat. Semua sampel diderivatisasi SRS), (RSS+SR)
menjadi metil eter.
Ukuran sampel 0,7–2,0 -tokoferol dalam pakan ayam dan telur, (RRS+SSR), (RR+SS), (RS+ Pakan hewan
260◦C [45]
µL; suhu 240◦C diturunkan menjadi metil eter. SRS), (RSS +SR) dan produk
FID, detektor ionisasi nyala.
Molekul2017,22, 233 10 dari 17

4. Sistem Gabungan

Sebuah studi oleh Vecchi et al. menunjukkan bahwa kombinasi kiral HPLC dan GC mampu memisahkan
semua delapan stereoisomer [23]. Alih-alih menggunakan trimetilsilil eter [42], metil eter [43] atau bentuk
asetat [22] dari -Toc, Vecchi et al. melaporkan penggunaan bentuk etil eter dari -Toc dalam pemisahan
stereoisomer. Aliran skema dari proses pemisahan ditunjukkan pada Gambar5. Dengan menggunakan fase
diam HPLC kiral buatan sendiri dengan (+)-PTMA yang dilapisi pada silika gel, metode ini melaporkan
pemisahan yang lebih baik dibandingkan dengan Yamaguchi et al. Penulis mengharapkan empat puncak dari
pemisahan HPLC, tetapi lima puncak diperoleh sebagai gantinya, dengan tiga puncak memiliki 2R-isomer dan
dua puncak memiliki 2S-isomer seperti yang dijelaskan sebelumnya di bagian Kromatografi Cair. Untuk
pemisahan lebih lanjut menggunakan GC, semua fraksi 2R digabungkan menjadi fraksi tunggal A, dan semua 2
Specahan digabungkan menjadi pecahan lain B (Gambar5). Fraksi A dan B kemudian mengalami pemisahan GC
masing-masing. Untuk menghitung intensitas relatif dari isomer individu, intensitas relatif isomer dari keempat
puncak dari GC dikalikan dengan intensitas relatif dari puncak HPLC yang sesuai menggunakan rumus berikut
(diadaptasi dari Vecchi et al.).SSisomer digunakan sebagai contoh di sini. Hal yang sama dapat diterapkan
untuk menghitung proporsi relatif stereoisomer lain dengan mengganti area puncak yang relevan:

FGC(B6) FLC(B)×100 = % (S,S,S)

× (1)
FGC(B5+6+7+8) FLC(A+B)
dimana F = luas permukaan puncak; GC (B6) = puncak 6 GC (B) yang sesuai dengan isomer (S,S,S); LC (B) =
puncak B dari HPLC; LC (A + B) = jumlah semua puncak dari kedua fraksi A dan B dalam HPLC; dan GC (B5
+ 6 + 7 + 8) = jumlah semua puncak—5, 6, 7 dan 8 dalam GC (fraksi B).

Gambar 5.Skema aliran proses pemisahan untuk delapan stereoisomer.

Meskipun pemisahan berhasil diperoleh untuk semua stereoisomer, proses melalui dua peristiwa
kromatografi adalah membosankan. Penulis berharap pada akhirnya suatu metode HPLC (tanpa
kombinasi dengan GC) untuk memisahkan kedelapan stereoisomer akan dikembangkan [23].
Ris dkk. juga melaporkan kombinasi metode kromatografi gas kapiler (GC) dan sistem HPLC untuk
memisahkan semua delapan stereoisomer -Toc dalam jaringan tikus dan plasma setelah pemberian oral.ras-α-
Perawatan Tok [46]. Sebelum pemisahan dimulai, -Toc diekstraksi dan dimurnikan dari jaringan dan plasma,
kemudian diubah menjadi -Toc-ME. Stereoisomer kemudian mengalami pemisahan dengan HPLC kiral, diikuti
oleh kapiler GC. Dua jenis kolom HPLC kiral dilaporkan di sini, yaitu kolom Nucleosil 1000-5 buatan sendiri yang
dilapisi dengan (+)-PTMA (250×4 mm) seperti yang dilaporkan oleh Vecchi et al., dan kolom OD Chiralcel yang
tersedia secara komersial (250×4,6 mm) dari Daicel. Kolom OD Chiralcel adalah alternatif yang menghemat
waktu tanpa bahaya mengemas kolom sendiri. Setelah pemisahan dengan HPLC fase kiral, 5 puncak diperoleh:
puncak pertama terdiri dari semua stereoisomer 2S (SSR+SS +SRS+SR), sedangkan empat puncak berikut
diidentifikasi sebagaiRSS, RRS,RRdanRS, masing-masing. Selanjutnya, 2Scampuran stereoisomer menjadi
sasaran pemisahan menggunakan metode GC kapiler yang dilaporkan sebelumnya oleh Vecchi et al. atau
Cohen dkk. [23,43]. Pemisahan dilakukan dengan urutan SSR, SSS, SRS dan SRR. Studi ini menunjukkan bahwa
delapan stereoisomer dapat dipisahkan dari semuaras-α-Toc diekstraksi dan dimurnikan dari jaringan dan
plasma.
Molekul2017,22, 233 11 dari 17

Tabel 3.Metode kombinasi (HPLC-GC) untuk pemisahan -Toc.

HPLC GC Stereoisomer/Diastereomer
analit Aplikasi Referensi
Kolom Fase Seluler Panjang Gelombang Deteksi Kolom Kondisi Injektor Suhu FID Pemisahan

Nukleosil1000-5 Tabung kapiler kaca

dilapisi dengan Asetonitril/H2HAI berlapis Silar 10 C Modus tanpa split R RS, RRR, RSR, RSS, SRR, SSS, Komersial
-Toc etil eter 200nm (UV) 220◦C [23]
(+)-PTMA) (9:1,v/v) (100 m×0,30 mm), di 260◦C SRS, SRR produk
(25×0,4 cm) isotermal pada 165◦C
Tabung kapiler kaca
-Toc asetat (HPLC), Kiralcel OD Asetonitril/H2HAI berlapis Silar 10 C Modus tanpa split R RS, RRR, RSR, RSS, SRR, SSS, darah tikus
200nm (UV) ◦C 220◦C [47]
-Toc metil eter (GC) (25×0,46 cm) (9:1,v/v) (100 m×0,30 mm), pada 260 SRS, SRR dan tisu
isotermal pada 165◦C
Nukleosil1000-5
dilapisi dengan Tabung kapiler kaca
(+)-PTMA) berlapis Silar 10 C Modus tanpa split RRS, RRR, RSR, RSS, SRR, SSS, darah tikus
-Toc metil eter n-heksana 200nm (UV) 220◦C [46]
(25×0,4 cm) (100 m×0,30 mm), di 260◦C SRS, SRR dan tisu
Kiralcel OD isotermal pada 165◦C
(25×0,46 cm)

FID, detektor ionisasi nyala.

Molekul2017,22, 233 12 dari 17

Pada tahun 1996, Weiser et al. menyelidiki biodiskriminasi semua stereoisomer -Toc dalam jaringan dan
plasma tikus yang diberi semua-ras-α-Toc asetat atauRR-α-Toc asetat [47]. Metode pemisahan yang sama
seperti Vecchi et al. digunakan. Di sini OD Chiralcel dari Daicel sepenuhnya menggantikan kolom buatan sendiri
yang memakan waktu. Sampel stereoisomer diekstraksi dan dimurnikan dari jaringan dan plasma tikus.
Stereoisomer -Toc dipulihkan. Mereka kemudian diasetilasi menjadi -Toc asetat sebelum mengalami pemisahan
dengan sistem HPLC kiral. Pada tahap ini, empat puncak diperoleh, dengan puncak 1 dan 2 mengandung 2R
stereoisomer (RS+RSS,RR+RRS) dan puncak 3 dan 4 yang mengandung stereoisomer 2S (SS+SSR,SRS+SR).
Sampel yang dikumpulkan diubah dari -α-Toc asetat menjadi -α-Toc-ME, dan disuntikkan secara terpisah ke
dalam sistem GC kapiler [23] sebagai semua-R-rasdan semua-S-rascampuran -α-Toc-ME. Kedelapan
stereoisomer berhasil dipisahkan menjadi stereoisomer individu. Para penulis melaporkan biodiskriminasi yang
berhasil dari semua delapan stereoisomer -Toc dalam jaringan dan plasma tikus setelah suplementasi oral
semua-ras-α-Toc asetat pada tikus yang kekurangan vitamin E. Karya ini dapat dilihat sebagai kelanjutan dari
yang dilaporkan oleh Vecchi et al. dan Riss et al., dengan 2Rdan 2Spuncak dikumpulkan dan mengalami
pemisahan lebih lanjut dengan kapiler GC. Dua sistem GC alternatif lainnya juga dilaporkan di sini: 100 m×
minyak silikon siano 0,25 mm [43] atau 50 m×kolom kapiler silika leburan 0,22 mm [45]. Semua metode
kombinasi yang dilaporkan dalam dirangkum dalam Tabel3.

5. Aplikasi

Evolusi teknik pemisahan dan kemampuan untuk mengukur stereoisomer vitamin E, termasuk
tokoferol dan tokotrienol, telah secara substansial memfasilitasi pemahaman kita tentang sifat
fisikokimia dan diskriminasi biologis. Kembali pada tahun 1982, biopotensi semuaras-α-Toc asetat danRR
-α-Toc asetat dibuat pada rasio 1:1,36 berdasarkan tes resorpsi-gestasi tikus konvensional [14]. Rasio ini
telah diadopsi secara luas di bidang pakan ternak dan nutrisi manusia. Dengan kemajuan dalam metode
pemisahan kromatografi, informasi lebih lanjut tentang bioavailabilitasnya telah terungkap. Dengan
demikian, hasil dari studi bioavailabilitas dapat dikorelasikan dengan potensinya, menambah perspektif
pada subjek yang diminati. Misalnya, pada tikus yang dilengkapi dengan semua-ras-α-Toc asetat (100
mg/kg), konsentrasi isomer 2R secara nyata lebih tinggi daripada konsentrasi isomer 2S dalam plasma,
sel darah merah, otak, hati, kelenjar adrenal dan jaringan adiposa.24]. Begitu pula ketika semua-ras-α-
Toc asetat ditambahkan dalam pengganti susu untuk anak sapi,RR-α-Toc ditemukan sebagai
stereoisomer dominan dalam plasma dan jaringan.48]. Sedangkan 2 lainnyaR-isomer memiliki tingkat
penyerapan lebih rendah daripada RRR-isomer, the2S-isomer pada dasarnya tidak digunakan oleh anak
sapi. Hasilnya sesuai dengan rekomendasi IOM bahwaS-isomer cenderung kurang dimanfaatkan dalam
sistem biologis. Dalam studi terpisah di mana tikus dilengkapi dengan peningkatan dosis all-ras-α-Toc
asetat atauRR-α-Toc asetat, koefisien absorpsi rata-rata dariRR-sumber lebih tinggi dari semua-ras
-sumber [49]. Tren peningkatan dari 77,2 menjadi 83,3 dalam koefisien penyerapan semuaras-sumber
diamati dengan peningkatan dosis dari 25 menjadi 200 mg/kg pakan sementara sumber RRR mencapai
rata-rata 86,8 koefisien penyerapan pada dosis serendah 25 mg/kg pakan. Faktanya, -Toc alami dalam
bentuk misel yang ditambahkan pada 1/3 dosis -Toc sintetis menghasilkan konsentrasi -Toc plasma yang
serupa dalam studi anak babi [30]. Ketika diselidiki pada manusia, suplementasiRR-α-Toc pada 100 mg/
hari menghasilkan kadar -Toc serum yang serupa dibandingkan dengan 300 mg/hari semua-ras-α-Toc
asetat, berkorelasi dengan 1/3 dari perbedaan dosis [27]. Studi ini juga menunjukkan bahwa hanya
sejumlah kecil 2S-isomer terdeteksi dalam serum, yang secara signifikan lebih rendah dari 2R-isomer.

Dari sudut pandang mekanistik, lipoprotein densitas tinggi (HDL) ditemukan menunjukkan
kapasitas donor tertinggi untuk -Toc ketika diselidiki pada sel otot rangka tikus dengan adanya
lipoprotein.28]. Sel diinkubasi pada dosis ekipotensial dari semuaras- danRR-α-Toc (1.36:1) tidak
menunjukkan biodiskriminasi yang signifikan dalam penyerapan 2S- dan 2R-isomer, yaitu 2S- dan 2R
-isomer terakumulasi pada rasio 1:1. Dari penelitian ini, penulis mendalilkan bahwa biodiskriminasi in
vivo -Toc dikaitkan dengan pengayaan plasma denganRR-isomer bukan mekanisme di seluler
Molekul2017,22, 233 13 dari 17

tingkat. Studi yang melibatkan penggunaan berlabel deuteriumRR- danSR-α-Toc asetat mengungkapkan
tren serupa di mana diskriminasi antara stereokimia tidak terjadi selama penyerapan melainkan sebagai
fenomena pasca-penyerapan di hati [50]. Hal ini didukung oleh fakta bahwa kilomikron mengandung
konsentrasi yang sama dariRR- danSR-isomer, sedangkan plasma dan lipoprotein densitas sangat
rendah (VLDL) sangat membedakan stereokimia alami vs sintetis.
Selain studi biodiskriminasi dan mekanistik, pemisahan stereoisomer vitamin E juga telah digunakan
sebagai metode yang dapat diandalkan untuk membedakan sumber babi yang berbeda dari peternakan
terkontrol [31]. Dengan menganalisis sampel lemak babi, keberadaan yang lebih tinggiRR-isomer yang
disumbangkan oleh bentuk alami vitamin E menunjukkan pakan babi dari sumber alami, tertinggi dalam
kategori FREE-RANGE, diikuti oleh FREE-FEED, FEED-OUT dan FEED. Hasil dari penelitian ini juga membantu
untuk mengidentifikasi apakah suplementasi dalam pakan disumbangkan oleh bahan minyak alami atau
bentuk sintetis vitamin E. Dalam penelitian pakan ternak lain, kuantifikasi distribusi stereoisomer -Toc dalam
jaringan hati babi membantu mengidentifikasi interaksi antara diet komposisi asam lemak dan penyerapan
vitamin E [51]. Studi ini mendalilkan bahwa permintaan untukRR-isomer -Toc sebagai anti-oksidan berkorelasi
langsung dengan derajat ketidakjenuhan lemak pangan.

6. Kesimpulan

Perbedaan bioavailabilitas dan biopotensi stereoisomer individu tokoferol dan tokotrienol

telah menyebabkan pentingnya pemisahan kiral untuk studi terkait farmasi. Tantangan dalam
resolusi kiral umumnya disebabkan oleh karakter enansiomer yang memiliki sifat fisik dan kimia
yang identik. Memiliki stereocenter tunggal dalam tokotrienol, pemisahan lengkap campuran
rasemat - dan -tokotrienol telah berhasil dicapai dengan menggunakan metode kiral HPLC (3,5-
dimetil fenil karbamat) dalam sistem analisis tunggal [39]. Namun, pemisahan delapan
stereoisomer -Toc, sejauh ini, membutuhkan kombinasi setidaknya dua metode analisis yang
berbeda, terutama HPLC dan GC. Analisis HPLC dari tokoferol dan tokotrienol memerlukan
derivatisasi ke ester atau eter yang sesuai untuk mencegah degradasi senyawa sebelum dielusi.

Karena keterbatasan dalam sistem analitik untuk memberikan pemisahan lengkap

stereoisomer -Toc, distribusi kedelapan stereoisomer dalam jaringan tidak dapat diukur [47]. Akhir-
akhir ini, kombinasi GC dan spektrometri massa (MS) telah memungkinkan kuantifikasi tokoferol
berlabel deuterium dalam darah dan jaringan.52,53]. Salah satu keuntungan dari metode ini adalah
molekul vitamin E berlabel yang diserap dapat dibedakan dari vitamin E endogen. Dengan cara ini,
peneliti dapat mengukur distribusi -Toc berlabel di berbagai jaringan. Namun, teknik ini tidak
memberikan informasi tentang jumlah delapan stereoisomer.
Baru-baru ini, teknologi dalam kolom kromatografi dan sistem analitik telah berkembang pesat. Studi
lebih lanjut dalam pemisahan delapan stereoisomer -Toc dari berbagai matriks sampel dalam sistem analitis
tunggal (KCKT kiral) dapat dieksplorasi menggunakan deteksi elektrokimia yang lebih sensitif daripada
absorbansi UV atau deteksi FL yang umum digunakan. Survei literatur yang dilakukan oleh Kumar et al.
mengungkapkan bahwa teknologi MS telah ditingkatkan secara signifikan dengan memajukan berbagai teknik
ionisasi termasuk ionisasi elektrospray (ESI), dan ionisasi tekanan atmosfer (API) [54]. Selama beberapa tahun
terakhir, beberapa studi analisis kiral obat-obatan telah dilakukan menggunakan kromatografi cair enansiomer
yang digabungkan dengan spektrometri massa tandem (LC-MS).55-57]. Teknik LC-MS didasarkan pada
kombinasi daya pisah HPLC menggunakan fase diam kiral yang ditingkatkan dan sistem deteksi spektrometri
massa superior yang dioperasikan oleh sumber API. Aplikasi ini telah terbukti lebih dapat diandalkan
dibandingkan dengan metode GC-MS dalam penentuan komposisi enansiomer metamfetamin dalam sampel
urin [58].
Selain pendekatan LC-MS, ada pendekatan lain dari analisis kiral selektif massal menggunakan MS. Salah
satunya adalah analisis yang dilakukan dengan menggunakan sumber ion seperti resonansi-enhanced multiphoton
ionization (REMPI), yang dihubungkan dengan cahaya terpolarisasi sirkular, dichroism sirkular elektronik (ECD) dalam
spektrometer massa. Ini didasarkan pada spektrum UV dari molekul terionisasi, yang dihasilkan
Molekul2017,22, 233 14 dari 17

dalam selektivitas massa ditingkatkan, sensitivitas dan kecepatan. Baru-baru ini, teknik photoelectron circular
dichroism (PECD) telah dikembangkan untuk membedakan enansiomer melalui pencitraan partikel. Ketika
molekul kiral difotoionisasi oleh laser femtosecond terpolarisasi sirkuler, distribusi sudut spasial fotoelektron
yang dipancarkan oleh ionisasi analit kiral dapat diperoleh dengan menggunakan teknik pencitraan [59].
Teknik ini telah dikembangkan lebih lanjut untuk digabungkan dengan spektroskopi kebetulan fotoion
(PEPICO) untuk mendapatkan PECD yang dipilih secara massal.60]. Boesl dan Kartouzian telah meninjau secara
ekstensif pada analisis kiral selektif-massa dan telah mencatat bahwa PECD yang dikombinasikan dengan
PEPICO adalah metode yang menjanjikan untuk mempelajari kiral molekul [61]. Oleh karena itu, analisis kiral
tokoferol dan tokotrienol dapat dieksplorasi lebih lanjut dengan penerapan teknologi MS canggih.

Ucapan terima kasih:Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Dewan Minyak Sawit Malaysia atas dukungannya dalam penulisan makalah ini.

Kontribusi Penulis:Semua penulis berkontribusi sama dalam konsepsi, penulisan, dan peninjauan naskah. Semua
penulis telah membaca dan menyetujui naskah akhir.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Panel EFSA NDA (Panel EFSA tentang Produk Diet, Nutrisi dan Alergi). Opini Ilmiah tentang Nilai Referensi
Diet untuk vitamin E sebagai -tokoferol.EFSA J.2015,13, 4149.
2. Wah, SH; Cho, YM; Ong, SH Konstituen minor minyak sawit.Selai. Kimia Minyak. Soc.1985,62, 237–240. [
CrossRef]
3. Aggarwal, BB; Sundaram, C.; Prasad, S.; Kannappan, R. Tocotrienols, vitamin E abad ke-21: Potensinya
melawan kanker dan penyakit kronis lainnya.Biokimia. farmasi.2010,80, 1613–1631. [CrossRef] [PubMed]

4. Brigelius-Flohe, R. Vitamin E dan metabolisme obat.Biokimia. Biofis. Res. komuni.2003,305, 737–740. [

CrossRef]
5. Zingg, JM Vitamin E: Tinjauan arah penelitian utama.mol. Asp. Med.2007,28, 400–422. [CrossRef] [PubMed]

6. Traber, MG; Rader, D.; Akut, RV; Ramakrishnan, R.; Pembuat bir, HB; Kayden, HJ Studi dosis-respons vitamin E pada
manusia dengan penggunaan deuterated RRR-α-tocopherol.Saya. J.klin. nutrisi1998,68, 847–853. [PubMed]
7. De Silva, L.; Chuah, LH; Meganathan, P.; Fu, JY Tokotrienol dan metastasis kanker.BioFaktor2016,42, 149-162.
[PubMed]
8. Gopalan, Y.; Shuaib, IL; Magosso, E.; Ansari, MA; Abu Bakar, MR; Wong, JW; Khan, NA; Liong, WC; Sundram, K.;
Ng, BH; dkk. Investigasi klinis efek perlindungan tokotrienol vitamin E sawit pada materi putih otak.
Pukulan2014,45, 1422–1428. [CrossRef] [PubMed]
9. Kamal-Eldin, A.; Appelqvist, LA Sifat kimia dan antioksidan tokoferol dan tokotrienol. Lemak1996,31, 671–701.
[CrossRef] [PubMed]
10. Netscher, T. Stereoisomer tokoferol—Sintesis dan analisis.Chimia1996,50, 563–567.
11. Netscher, T. Metatesis silang: Persiapan efisien olefin isoprenoid tersubstitusi trialkil sebagai perantara kunci
untuk sintesis tokoferol.Curr. Atas. Med. Kimia2005,5, 1579–1585. [CrossRef] [PubMed]
12. Malaise, G.; Bonrat, W.; Breuninger, M.; Netscher, T. Rute baru menuju zat antara vitamin E melalui metatesis
silang olefin.Helv. Chim. Akta2006,89, 797–812. [CrossRef]
13. Jensen, SK; Lauridsen, stereoisomer C. Alfa-tokoferol.Vitamin2007,76, 281–308. [PubMed]
14. Weiser, H.; Vecchi, M. Stereoisomer dari alfa-tokoferil asetat. II. Biopotensi dari semua delapan stereoisomer, secara
individu atau campuran, sebagaimana ditentukan oleh tes resorpsi-gestasi tikus.Int. J.Vitam. nutrisi Res.1982,52, 351–
370. [PubMed]
15. Kiyose, C.; Kaneko, K.; Muramatsu, R.; Ueda, T.; Igarashi, O. Penentuan simultan RRR- dan SRR-alfa-tokoferol
dan kuinonnya dalam plasma dan jaringan tikus dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
kiral.Lemak1999,34, 415–422. [CrossRef] [PubMed]
16. Institut Kedokteran.Asupan Referensi Diet untuk Vitamin C, Vitamin E, Selenium, dan Karotenoid; Pers
Akademi Nasional: Washington, DC, AS, 2000; p. 529.
Molekul2017,22, 233 15 dari 17

17. Zhao, Y.; Monahan, FJ; McNulty, BA; Brennan, L.; Gibney, MJ; Gibney, Stereoisomer alfa-Tocopherol ER dalam
Plasma Manusia Dipengaruhi oleh Tingkat dan Bentuk Suplemen Vitamin E yang Digunakan.
J. Nutr.2015,145, 2347–2354. [CrossRef] [PubMed]
18. Scott, JW; Bizzarro, FT; Paroki, DR; Saucy, G. Sintesis (2R,4kanR,8kanR)-alfa-tokoferol dan (2R,3kanE,7kanE)-alfa-
tokotrienol.Helv. Chim. Akta1976,59, 290–306. [CrossRef] [PubMed]
19. Couladouros, EA; Moussos, VI; Lampropoulou, M.; Sedikit, JL; Hyatt, JA Rute kimia yang singkat dan mudah
menuju 2-metil chromanmethanols murni optikal. Sintesis asimetris total beta-, gamma-, dan delta-
tokotrienol.J.Org. Kimia2007,72, 6735–6741. [CrossRef] [PubMed]
20. Abidi, SL Analisis kromatografi antioksidan lipid yang diturunkan dari tokol.J. Kromatografi. SEBUAH2000,881, 197–216. [
CrossRef]
21. De Leenheer, AP; Nelis, HJ; Lambert, KAMI; Bauwens, RM Kromatografi vitamin yang larut dalam lemak dalam
kimia klinis.J. Kromatografi.1988,429, 3-58. [CrossRef]
22. Yamaguchi, H.; Itakura, Y.; Kunihiro, K. Analisis stereoisomer alfa-tokoferil asetat dengan HPLC. Iyakuhin
Kenkyu1984,15, 536–540.
23. Vecchi, M.; Walther, W.; Glinz, E.; Netscher, T.; Schmid, R.; Lalonde, M.; Walter, V. Chromatographische
Trennung dan kuantitatif Bestimmung aller acht Stereoisomer von a-Tocopherol.Helv. Chim. Akta1990, 73,
782–789. [CrossRef]
24. Ueda, T.; Ichikawa, H.; Igarashi, O. Penentuan stereoisomer alfa-tokoferol dalam spesimen biologis
menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase kiral.J. Nutr. Sci. vitamin. (Tokyo)1993,39, 207–219. [
CrossRef] [PubMed]
25. Nitta, C.; Hayashi, K.; Ueda, T.; Igarashi, O. Distribusi Stereoisomer -Tocopherol pada Tikus. Biosci.
Bioteknologi. Biokimia.1993,57, 1406–1407. [CrossRef]
26. Nitta-Kiyose, C.; Hayashi, K.; Ueda, T.; Igarashi, O. Distribusi Stereoisomer -Toc pada Tikus. Biosci.
Bioteknologi. Biokimia.1994,58, 2000–2003. [CrossRef]
27. Kiyose, C.; Muramatsu, R.; Kameyama, Y.; Ueda, T.; Igarashi, O. Biodiskriminasi stereoisomer alfa-tokoferol
pada manusia setelah pemberian oral.Saya. J.klin. nutrisi1997,65, 785–789. [PubMed]
28. Nakamura, T.; Reicher, H.; Sattler, W. Perbandingan serapan RRR-alpha- dan all-rac-alpha-tocopherol oleh
mioblas otot rangka tikus permanen (sel L6): Efek lipase lipoprotein eksogen.Lemak1998,33, 1001–1008. [
CrossRef] [PubMed]
29. Klaczkow, G.; Anuszewska, EL Penentuan stereoisomer rasemat alfa-tokoferol dalam sediaan farmasi
dengan kromatografi cair kinerja tinggi dan kromatografi gas.
Akta Pol. Farmasi.2008,65, 715–721. [PubMed]
30. Azan, D.; Cordero, G.; Lopez-Bote, CJ; Lauridsen, C.; Rey, AI Efek vitamin E alami misel oral (D-alfa-tokoferol)
v. vitamin E sintetis (DL-alpha-tocopherol) dalam pakan pada tingkat alpha-tocopherol, distribusi
stereoisomer, stres oksidatif dan respon imun pada anak babi.Satwa2014,8, 410–419. [CrossRef] [PubMed]

31. Rey, AI; Lopez-Bote, CJ Alpha-tocopherol stereoisomer analysis sebagai metode diskriminan untuk membedakan asupan
pakan babi Iberia selama fase penggemukan.Kimia Makanan.2014,142, 342–348. [CrossRef] [PubMed]
32. Lauridsen, C.; Jensen, SK Pengaruh suplementasi all-rac-alpha-tocopheryl acetate preweaning dan vitamin C
pascasapih pada alpha-tocopherol dan respon imun anak babi.J.Anim. Sci.2005,83, 1274–1286. [CrossRef] [
PubMed]
33. Cortinas, L.; Barroeta, A.; Galobart, J.; Jensen, SK Distribusi stereoisomer alfa-tokoferol di hati dan paha
ayam.sdr. J. Nutr.2004,92, 295–301. [CrossRef] [PubMed]
34. Meglia, GE; Jensen, SK; Lauridsen, C.; Persson Waller, K. Konsentrasi alfa-tokoferol dan komposisi stereoisomer
dalam plasma dan susu dari sapi perah yang diberi vitamin E alami atau sintetis di sekitar anak.
J. Susu Res.2006,73, 227–234. [CrossRef] [PubMed]
35. Weiss, WP; Hogan, JS; Wyatt, DJ Bioavailabilitas relatif vitamin E all-rac dan RRR berdasarkan fungsi neutrofil
dan konsentrasi alfa-tokoferol dan isomer total pada sapi perah periparturient dan anaknya.
J. Ilmu Susu.2009,92, 720–731. [CrossRef] [PubMed]
36. Röhrle, FT; Moloney, AP; Hitam, A.; Osorio, MT; Sweeney, T.; Schmidt, O.; Monahan, FJ -Tocopherol stereoisomer
pada daging sapi sebagai indikator suplementasi vitamin E pada pakan ternak.Kimia Makanan.2011,124, 935–
940. [CrossRef]
Molekul2017,22, 233 16 dari 17

37. Mazzini, F.; Betti, M.; Netscher, T.; Gali, F.; Salvadori, P. Konfigurasi asam garcinoat analog vitamin E yang
diekstraksi dari biji Garcinia Kola.Kiralitas2009,21, 519–524. [CrossRef] [PubMed]
38. Chen, JL; Hsieh, KH Nanochitosan berikatan silang dengan poliakrilamida sebagai fase diam kiral untuk
elektrokromatografi kapiler tubulus terbuka.Elektroforesis2011,32, 398–407. [CrossRef] [PubMed]
39. Drotleff, AM; Ternes, W. Penentuan RS,E/Z-tokotrienol dengan HPLC.J. Kromatografi. SEBUAH2001,909, 215–223. [
CrossRef]
40. Drotleff, AM; Ternes, W. Pemisahan dan karakterisasi isomer cis-trans dari a-tokotrienol dengan HPLC
menggunakan fase b-siklodekstrin permetilasi.Z. Lebenisme. Unter. Forsch. SEBUAH1998,206, 9–13. [CrossRef]
41. Mayer, H.; Metzger, J.; Isler, O. Stereokimia gamma-tocotrienol alami (plastochromanol-3),
plastochromanol-8 dan plastochromenol-8.Helv. Chim. Akta1967,50, 1376–1393. [CrossRef] [PubMed]
42. Slover, HT; Thompson, RH Pemisahan kromatografi stereoisomer -tokoferol.Lemak1981, 16, 268–275. [
CrossRef]
43. Cohen, N.; Scott, CG; Neukom, C.; Lopresti, RJ; Weber, G.; Saucy, G. Sintesis Total Semua Delapan
Stereoisomer -Tocopheryl Acetate. Penentuan kemurnian diastereoisomer dan enansiomernya dengan
kromatografi gas.Helv. Chim. Akta1981,64, 1158-1173. [CrossRef]
44. Weiser, H.; Vecchi, M. Stereoisomer alfa-tokoferil asetat—Karakterisasi sampel dengan metode fisika-kimia
dan penentuan aktivitas biologis dalam uji resorpsi-gestasi tikus.Int. J.Vitam. nutrisi Res.1981,51, 100-113.
[PubMed]
45. Piironen, VI; Liljeroos, AI; Koivistoinen, PE Transfer Stereoisomer a-Tocopherol dari Feed ke Telur.
J. Pertanian. Kimia Makanan.1991,39, 99-101. [CrossRef]
46. Riss, G.; Korman, AW; Glinz, E.; Walther, W.; Ranalder, UB Pemisahan delapan stereoisomer all-rac-alpha-
tocopherol dari jaringan dan plasma: kromatografi cair kinerja tinggi fase kiral dan kromatografi gas
kapiler.Metode Enzim.1994,234, 302–310. [PubMed]
47. Weiser, H.; Ris, G.; Kormann, AW Biodiskriminasi dari delapan stereoisomer alfa-tokoferol menghasilkan akumulasi
preferensial dari empat bentuk 2R dalam jaringan dan plasma tikus.J. Nutr.1996,126, 2539–2549. [PubMed]

48. Dersjant-Li, Y.; Jensen, SK; Bos, LW; Peisker, MR Bio-diskriminasi stereoisomer alfa-tokoferol dalam pemeliharaan dan anak
sapi yang diberi susu pengganti yang dilengkapi dengan all-rac-alpha-tocopheryl acetate.Int. J.Vitam. nutrisi Res.2009,79
, 199–211. [CrossRef] [PubMed]
49. Jensen, SK; Norgaard, JV; Lauridsen, C. Bioavailabilitas stereoisomer alfa-tokoferol pada tikus tergantung
pada dosis diet semua-ras- atauRR-alfa-tokoferil asetat.sdr. J. Nutr.2006,95, 477–487. [CrossRef] [PubMed]

50. Traber, MG; Burton, GW; Ingold, KU; Kayden, HJ RRR- dan SRR-alfa-tokoferol disekresikan tanpa diskriminasi dalam
kilomikron manusia, tetapi RRR-alfa-tokoferol lebih disukai disekresikan dalam lipoprotein densitas sangat
rendah.J. Lipid Res.1990,31, 675–685. [PubMed]
51. Lauridsen, C.; Theil, PK; Jensen, SK Komposisi -tokoferol dan asam lemak dalam jaringan babi setelah suplementasi
makanan dengan vitamin E dan sumber lemak yang berbeda.animasi. Ilmu Pakan. teknologi.2013,179, 93-102. [
CrossRef]
52. Burton, GW; Traber, MG; Akut, RV; Walters, DN; Kayden, H.; Hughes, L.; Ingold, KU Konsentrasi alfa-tokoferol
plasma dan jaringan manusia sebagai respons terhadap suplementasi dengan vitamin E alami dan sintetis yang
dideuterasi.Saya. J.klin. nutrisi1998,67, 669–684. [PubMed]
53. Lauridsen, C.; Engel, H.; Jensen, SK; Craig, AM; Traber, MG Menyusui induk babi dan anak babi menyusui secara istimewa
menggabungkanRR- keseluruhan-ras-alpha-tocopherol menjadi susu, plasma dan jaringan.J. Nutr.2002, 132, 1258–1264.
[PubMed]
54. Kumar, AP; Jin, D.; Lee, Y.-I. Perkembangan terbaru pada metode spektroskopi untuk analisis kiral senyawa
enansiomer.aplikasi Spektrosk. Putaran.2009,44, 267–316. [CrossRef]
55. Nie, Y.; Liu, X.; Yang, X.; Zhao, X. Review: Aplikasi terbaru dari metode spektrometri massa kromatografi cair
kiral-tandem untuk penentuan farmasi dan biomedis enansiomer.J. Kromatografi. Sci. 2013,51, 753–763. [
CrossRef] [PubMed]
56. Barba, C.; Santa-Maria, G.; Herraiz, M.; Martínez, RM Analisis enansiomer langsung minyak esensial Mentha. Kimia
Makanan.2013,141, 542–547. [CrossRef] [PubMed]
Molekul2017,22, 233 17 dari 17

57. Kretin, BN; Dubourdieu, D.; Marchal, A. Pengembangan metode kuantisasi untuk menguji kedua enansiomer lyoniresinol
dalam anggur, minuman keras, dan kayu ek dengan kromatografi cair-spektrometri massa resolusi tinggi. dubur.
Bioanal. Kimia2016,408, 3789–3799. [CrossRef] [PubMed]
58. Bangsal, LF; Enders, JR; Bel, DS; Cramer, HM; Wallace, FN; McIntire, GL Peningkatan Pemisahan Kiral
Enansiomer Metamfetamin Menggunakan CSP-LC-MS-MS.J. Anal. racun.2016,40, 255–263. [CrossRef] [
PubMed]
59. Janssen, MH; Powis, I. Mendeteksi kiralitas dalam molekul dengan pencitraan dikroisme melingkar fotoelektron.
fisik. Kimia Kimia fisik.2014,16, 856–871. [CrossRef] [PubMed]
60. Fanood, MM; Rama, NB; Lehmann, CS; Powis, saya.; Janssen, MH Enansiomer-analisis spesifik dari campuran multi-
komponen dengan berkorelasi pencitraan elektron-ion spektrometri massa.Nat. komuni.2015,6, 7511. [CrossRef]
[PubMed]
61. Boesl, U.; Kartouzian, A. Analisis Kiral Selektif Massal.annu. Pdt. Kimia2016,9, 343–364. [CrossRef] [PubMed]

© 2017 oleh penulis; pemegang lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di bawah syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons
Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).