Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Ilmu Farmasi Terapan Vol. 8(06), pp 075-081, Juni 2018 Tersedia
online di http://www.japsonline.com
DOI: 10.7324/JAPS.2018.8610
ISSN 2231-3354

Penerapan sidik jari dan kemometrik metabolit H-NMR untuk

otentikasiCurcuma longadipalsukan denganManga temulawak

Anjar Windarsih1, Abdul Rohman2*, Respati Tri Swasono3

1 Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
2 Jurusan Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
3 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

INFORMASI ARTIKEL ABSTRAK

Sejarah artikel:
Diterima pada: 11/03/2018
Diterima pada: 27/04/2018
Tersedia online: 29/06/2018
Kata kunci:
Kemometrik,temulawak
panjang,Kurkumin, H-NMR,
KLT.
Curcuma longaatau kunyit diketahui memiliki banyak fungsi dalam bidang bahan makanan, kosmetika, dan obat-
obatan tradisional. Rimpangnya mengandung kurkuminoid, terutama kurkumin yang diyakini sebagai senyawa aktif
yang bertanggung jawab untuk aktivitas farmakologis. Keaslian dariC. longasangat penting untuk menghindari praktik
pemalsuan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan kromatografi lapis tipis (KLT) untuk analisis
kurkumin yang dikombinasikan dengan sidik jari metabolit H-NMR dan analisis multivariat untuk otentikasiC. longa
bubuk. Penentuan kurkumin dalam bubuk murni dan bubukC. longadenganManga temulawakdilakukan dengan
metode KLT tervalidasi dengan komposisi fase gerak toluena: asam asetat glasial (82:18 v/v) dan silika gel 60 F sebagai
254
fase diam dengan panjang elusi 9 cm. Kandungan kurkumin dalam bubuk murni dari beberapa daerah berkisar antara
4,28-5,62%, sedangkan yang dipalsukan sebesar 5,25-1,35%. Sidik jari metabolit H-NMR yang dikombinasikan dengan
kemometrik analisis komponen utama (PCA) dan proyeksi ortogonal ke analisis struktur-diskriminan laten (OPLS-DA)
menggunakan variabel pergeseran kimia berhasil digunakan untuk mengklasifikasikan bubuk murni dan bubuk yang
dipalsukan.C. longa.

PENGANTAR bubuk dariC. longaakan memberikan produk berkualitas tinggi. Karena

Curcuma longaL. atau kunyit adalah salah satu herba
tanaman yang banyak dibudidayakan di daerah tropis terutama di
India dan Asia Tenggara. Rimpang ini telah dikenal memiliki banyak
fungsi dalam bahan makanan, kosmetik, dan obat tradisional.
Berbagai aktivitas farmakologi rimpang telah dilaporkan seperti
aktivitas antioksidan, antiinflamasi, antibakteri, hepatoprotektif,
kardioprotektif, dan antikanker.Mohantydkk., 2004;Sepupudkk.,
2007). Rimpang memiliki kandungan yang kaya akan kurkuminoid,
terutama kurkumin yang diyakini sebagai komponen aktif utama.
Kandungan kurkumin sangat penting karena digunakan sebagai
salah satu parameter dalam pengendalian mutuC. longa(Chengdkk
., 2010). Kualitas tinggi
Penulis yang sesuai
*
Abdul Rohman, Jurusan Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi,
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Email: abdul_kimfar@ugm.ac.id
ada berbagai produk yang dikembangkan dari kunyit dan
permintaannya yang meningkat, sangat penting untuk memastikan
keaslian kunyit untuk menghindari pemalsuan (Jurenka, 2009).
Pemalsuan adalah praktik umum dalam produk obat tradisional.
Pemalsuan menimbulkan masalah serius karena berkaitan dengan
khasiat, keamanan, dan kualitas produk. Kunyit berpotensi dipalsukan
dengan bahan laintemulawakjenis yang mudah didapat dan harganya
lebih murah sepertiManga temulawak(remyadkk., 2004). Pemalsuan
akan mempengaruhi kandungan kurkumin dalam campuran karenaC.
manga hanya memiliki kurkumin yang sangat rendah. Oleh karena itu,
sangat penting untuk mengembangkan metode yang cepat dan andal
untuk mendeteksi pemalsuan (Marikkardkk., 2001).
Beberapa metode telah dikembangkan untuk
otentikasi bubuk kunyit seperti kromatografi lapis tipis (
Pothitirat dan Gritsanapan, 2005), kromatografi lapis tipis
kinerja tinggi (Ashrafdkk., 2012), kromatografi cair kinerja
tinggi (Jayaprakashadkk., 2002), dan Fourier

© 2018 Anjar Windarsihdkk.Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons -NonCommercial-
ShareAlikeUnported License (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/).
076 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081
mengubah spektroskopi inframerah (Rohmandkk., 2015). Kromatografi lapis
tipis (KLT) telah lama dikembangkan untuk analisis kurkumin dalam
temulawakspesies, terutamaC. longa bubuk (Paramasivamdkk., 2009).
Namun, kondisi KLT yang optimum untuk mendapatkan resolusi pemisahan
kurkumin yang lebih baik dan bentuk puncak yang baik dengan tailing yang
minimum masih perlu dieksplorasi. KLT menawarkan banyak keuntungan
untuk analisis kurkumin, seperti sederhana dalam preparasi, hanya
menggunakan pelarut organik dalam volume kecil, dapat digunakan untuk
analisis kualitatif dan semikuantitatif, mampu menganalisis beberapa
sampel secara bersamaan, dan membutuhkan waktu dan biaya yang lebih
sedikit.phattanawasindkk., 2009). Kami mengembangkan metode baru
menggunakan komposisi fase gerak toluena: asam asetat glasial (82:18 v/v)
untuk mendapatkan resolusi yang lebih baik dan bentuk puncak yang baik.
Oleh karena itu, kami melakukan validasi metode untuk membuktikan
metode KLT yang kami usulkan.
Spektroskopi H-NMR muncul sebagai metode canggih
dalam sidik jari metabolit untuk produk alami tanaman (van der
Kooydkk., 2009). Ini menawarkan beberapa keunggulan
dibandingkan teknik analisis lainnya karena analisisnya yang cepat,
sederhana dalam preparasi sampel, reproduktifitas tinggi, dan
secara simultan dapat mendeteksi beragam kelompok metabolit
tanaman primer dan sekunder.Daidkk., 2010). Kemometrik analisis
multivariat memiliki kemampuan besar untuk menganalisis data
besar yang dihasilkan dari pengukuran H-NMR (Kimdkk., 2011).
Penerapan spektroskopi H-NMR dan analisis multivariat telah
berhasil diterapkan untuk menentukan spesies atau asal dandelion
(Jung dkk., 2011), ceri manis Italia (Longobardidkk., 2013), dan Ilex
Amerika (Kimdkk., 2010). Selain itu, spektroskopi H-NMR dan
analisis multivariat telah berhasil diterapkan untuk membedakan
antara saffron murni dan palsu.Petrokisdkk., 2015).Namun dengan
penelusuran literatur, belum pernah dilakukan penelitian sidik jari
metabolit untuk mendeteksi pemalsuan serbuk rimpang C. longa
dengan C. manga menggunakan metode spektroskopi H-NMR.
Rafidkk.(2011)telah membedakanC. longa,C.
xanthorrhiza, danZingiber cassumunarmenggunakan analisis sidik jari TLC.
Namun, mereka hanya melakukan analisis KLT kualitatif dengan memeriksa
titik KLT yang dihasilkan dari masing-masing spesies. Dalam penelitian ini,
kami mengembangkan TLC sebagai metode baru untuk otentikasi
C. longadengan menentukan kandungan kurkumin secara
kuantitatif baik yang murni maupun yang dipalsukanC. longa
denganC. mangadalam berbagai konsentrasi.Gad dan Bouzabata
(2017)juga telah mengembangkan spektroskopi H-NMR dan
kemometrik untuk kontrol kualitas kunyit. Namun, model untuk
otentikasiC. longa dipalsukan denganC. mangabelum
dikembangkan. Dalam penelitian ini, penggunaan sidik jari
metabolit berbasis spektroskopi H-NMR yang dikombinasikan
dengan kemometrik analisis komponen utama (PCA) dan teknik
yang lebih kuat, proyeksi ortogonal ke analisis diskriminan struktur
laten (OPLS-DA) diterapkan untuk membedakan antara dan bubuk
palsu dariC. longa denganC.manga.
BAHAN DAN METODE
Pengumpulan dan persiapan sampel rimpang
Contoh rimpang dariC. longadikumpulkan dari beberapa
daerah di Yogyakarta dan Jawa Tengah, sedangkan rimpangC.
mangadikumpulkan dari Yogyakarta. Rimpang dibersihkan,
dipotong kecil-kecil, dan dikeringkan di udara. Rimpang kering digiling
menjadi bubuk halus. Bubuk itu digunakan untuk analisis. yang
dipalsukanC. longasampel disiapkan dengan menambahkanC. manga
dalam berbagai proporsi (5, 10, 25, 40, 50, dan 75% wt/wt).
Persiapan larutan standar dan sampel
Larutan standar kurkumin dibuat dengan melarutkan 10
mg standar kurkumin dalam 10 mL metanol (1 mg/mL) sebagai
larutan stok.
Untuk preparasi sampel, A-50 mg bubuk murni dan palsu
dariC. longaditimbang dengan teliti dan dimasukkan ke dalam tabung
mikro 2 mL. Serbuk tersebut ditambahkan 1,5 mL metanol kemudian
divorteks selama 5 menit. Selanjutnya sampel disentrifugasi selama 5
menit dengan kecepatan 4000 rpm. Supernatan digunakan sebagai
larutan uji.
Instrumentasi dan kondisi TLC
Standar dan sampel terlihat dalam bentuk pita lebar 5
mm dengan jarum suntik mikroliter Camag menggunakan Camag
Linomat V (CAMAG, Muttenz, Swiss). Fasa diam yang digunakan
adalah pelat aluminium silika gel precoated 60F (20 cm × 20 cm
dengan ketebalan
254
0,2 mm; E.Merck, Darmstadt, Jerman). Tingkat
aplikasi adalah 150 nL/s dan jarak antara dua band adalah 15 mm.
Fasa gerak yang digunakan adalah toluena: asam asetat glasial
dengan perbandingan 88:18 v/v. Pelat dikembangkan dalam
urutan menaik di ruang yang telah dipressaturasi selama 2 jam
dengan fase gerak. Panjang elusi 9 cm dan KLT dilakukan pada
suhu 25 ± 2°C dan RH 60 ± 5%. Setelah pengembangan, pelat
dikeringkan dan analisis densitometri dilakukan pada 427 nm
menggunakan pemindai TLC Camag IV yang dioperasikan oleh
perangkat lunak WinCATS.
Validasi metode kromatografi lapis tipis
Validasi metode KLT dievaluasi dengan menilai
beberapa karakteristik kinerja yaitu spesifisitas, linieritas,
akurasi, presisi dan sensitivitas menurut International
Conference on Harmonization (ICH, 2005).
Kekhususan
Larutan standar kurkumin dan sampel dibuat
dan kemudian terlihat dan dielusi. Spektrum standar dan
sampel diamati. Spektrum dan nilai Rf (faktor retardasi) standar
kurkumin dan kurkumin dalam sampel harus sama.
Linearitas
Sebuah 50 ppm larutan standar kurkumin disiapkan
dari larutan stok. Larutan ini dinodai pada volume yang
berbeda (3, 4, 5, 6, dan 7 L) untuk mendapatkan konsentrasi
masing-masing 150, 200, 250, 300, dan 350 ng/spot kurkumin.
Data konsentrasi versus luas puncak diamati. Linearitas
dievaluasi dengan nilai koefisien korelasi (R). Linearitas dengan
nilai R 0.997 dapat diterima untuk analisis.
Ketepatan
Akurasi dilakukan dengan menggunakan metode penambahan
standar. Selama analisis akurasi, 120 ng, 150 ng, dan 180 ng standar kurkumin
ditambahkan ke sampel masing-masing sebagai konsentrasi tingkat rendah,
sedang, dan tinggi. Jumlah kurkumin yang ditambahkan adalah
 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081 077

dibuat dari standar kurkumin 60 ppm, 75 ppm, dan 90 ppm. Pengujian
dilakukan dalam tiga ulangan dan nilai perolehan kembali (%) dari
standar yang ditemukan di setiap tingkat konsentrasi ditentukan.
presisi
Presisi intraday dan interday ditentukan.
Presisi intraday diukur menggunakan sampel dalam enam
ulangan. Presisi antar hari dilakukan dengan mengulang pengujian
intraday dalam tiga hari yang berbeda. Presisi dinyatakan sebagai
persentase koefisien variasi (% CV).
dan sensitivitas. Spesifisitas diukur dengan membandingkan standar
kurkumin dan sampel untuk spektrum Rf dan UV-nya. Titik tunggal
kurkumin yang tersolusikan dengan baik diamati pada nilai Rf 0,47 ±
0,3, baik pada sampel standar maupun sampel yang dievaluasi (Gambar
1). Densitogram standar kurkumin dan kurkumin dalamC. longa muncul
pada nilai Rf yang sama dan pemisahan yang jelas dari kurkumin dari
komponen lain (demethoxycurcumin) diC. longa sampel diperoleh.
AU

Kepekaan
Sensitivitas dievaluasi dengan mengukur batas deteksi
(LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ). LOD dan LOQ dihitung
berdasarkan persamaan berikut (LOD = 3,3σ/kemiringan kurva
kalibrasi kurkumin; LOQ = 10σ/kemiringan kurva kalibrasi
kurkumin). LOD dan LOQ yang ditemukan dilakukan dengan
menggunakan standar kurkumin.
Rf

Uji kandungan kurkumin

Ara.1: Spektrum standar kurkumin dan kurkumin dalamCurcuma panjangSebuah sampel.
Larutan uji sampel terlihat pada pelat KLT,
dielusi, dan terdeteksi. Persentase kandungan kurkumin pada masing- Linearitas diamati pada rentang konsentrasi
masing sampel ditentukan dengan mengukur area under the curve (AUC) 150-350 ng standar kurkumin. Kurva kalibrasi linier dengan
masing-masing sampel. persamaan regresikamu=26.815x+1954,4, dan koefisien
determinasi dan korelasi berturut-turut adalah 0,097 dan 0,9985
Persiapan sampel untuk pengukuran H-NMR (Gambar 2). Metode yang dikembangkan menunjukkan kurva
kalibrasi linier. BerdasarkanChandkk. (2004), model dengan
A-25 mg bubuk murni dan palsu dariC. longaditimbang dan
koefisien determinasi (R2) 0,997 memiliki linearitas yang baik.
dimasukkan ke dalam tabung sentrifus 2 mL. Serbuk tersebut ditambahkan
Akurasi adalah kedekatan kesepakatan antara nilai referensi yang
0,5 mL metanol D-4 (CD OD) dan 0,5 mL buffer KH PO pH 6,0 dalam DO yang
3 2 4 diterima dan nilai yang ditemukan dalam pengukuran (ICH, 2005).
mengandung2TSP (trimethylsilyl propionic acid) 0,01%. PH diatur menjadi 6,0
Akurasi dilaporkan sebagai persen pemulihan. Nilai perolehan
menggunakan NaOD 0,1 M. Campuran divorteks selama 1 menit,
dievaluasi menggunakan metode penambahan standar. Sampel
diultrasonik selama 20 menit, disentrifugasi pada 13500 rpm selama 10
ditambahkan dengan standar kurkumin dalam tiga taraf yang
menit, dan kemudian supernatan (800 L) dipindahkan ke dalam tabung NMR.
berbeda, yaitu masing-masing 120 ng, 150 ng, dan 180 ng.
Pemulihan standar ditambahkan ditentukan. Pemulihan yang
Pengukuran H-NMR dan analisis multivariat ditemukan berada pada kisaran 99,06-101,10% (Tabel 1). Kriteria
penerimaan uji perolehan kembali menggunakan konsentrasi
Spektrum H-NMR direkam pada 500 MHz
analit 60 ppm, 75 ppm, dan 90 ppm adalah 90-107%.(Gonzalez dan
Spektrometer Jeol ECZ-R. Masing-masing spektrum H-NMR diperoleh
Herrador, 2007). Hasil kami memenuhi persyaratan untuk kriteria
dengan kekuatan medan 11.74736 T (500 MHz), X_Offset 5.0 ppm,
penerimaan pemulihan. Oleh karena itu, metode ini memiliki
relaksasi delay 5 s dan 128 scan. Spektrum dikoreksi fase secara
akurasi yang baik.
otomatis dan manual. Baseline dikoreksi dilakukan dengan
menggunakan polinomial fit. Spektrum ditampung (bucketing) dengan
lebar yang sama 0,04 ppm dalam kisaran 0,00-10,00 ppm tidak
termasuk daerah sisa metanol (3,30-3,34 ppm) dan air (4,71-5,10 ppm)
menggunakan MestreNova 12.0.0.

Analisis data
Analisis multivariat dilakukan menggunakan PCA dan
OPLS-DA dengan software Minitab 16 dan SIMCA 14.

HASIL DAN DISKUSI

Validasi metode
KLT yang digunakan untuk analisis kuantitatif kurkumin adalah
divalidasi dengan menentukan spesifisitas, linearitas, akurasi, presisi, Ara.2: Kurva kalibrasi kurkumin.
078 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081

Meja1: Studi pemulihan kurkumin menggunakan metode adisi standar. presisi intraday adalah 2% (Tabel 2). Presisi interday dilakukan
seperti pada presisi intraday dalam tiga hari yang berbeda. %RSD
Jumlah Jumlah
Pemulihan Berarti RSD presisi antar hari adalah 2% (Tabel 2). Untuk uji presisi, kriteria
kurkumin kurkumin
(%) pemulihan (%) (%)
ditambahkan (ng) ditemukan (ng) penerimaan menurut Horwitz untuk uji presisi dengan kandungan
120 120.6116 100.51 100.01 0,88 analit (x) 1% <x10% tidak lebih dari 2,8% (Gonzalez dan Herrador,
2007). Hasil kami memenuhi persyaratan untuk kriteria
120 118.7917 98,99
penerimaan presisi. Oleh karena itu, metode yang dikembangkan
120 120.6340 100.53
ini memiliki presisi yang baik.
150 151,9411 101,29 101,10 0.27 Sensitivitas diamati dengan mengukur batas deteksi
150 151.1803 101.79 (LOD) dan limit of quantification (LOQ) dari metode yang
dikembangkan. LOD yang ditemukan adalah 16,46 ng dan LOQ yang
150 151.8068 101.20
ditemukan adalah 49,89 ng. Hasil ini menunjukkan bahwa metode ini
180 181.2605 100.70 99,06 1.43 memiliki sensitivitas yang baik. Nilai LOD dan LOQ yang rendah
180 176,6735 98.15 menunjukkan metode yang dikembangkan memiliki sensitivitas yang
180 177.0166 98.34 baik. Kandungan kurkumin bervariasi di beberapa daerah karena
pembentukan metabolit dipengaruhi oleh kondisi lingkungannya.
Presisi intraday diukur menggunakanC. longa Perbedaan kondisi lingkungan antar daerah dapat mempengaruhi
Sampel. Presisi dinyatakan sebagai %RSD. Nilai RSD sintesis metabolit termasuk kurkumin (pemesandkk., 2014).

Meja 2: Presisi intraday dan interday.

Hari 1 Hari ke-2 Hari ke-3

Replikasi
AUC Jumlah (ng) AUC Jumlah (ng) AUC Jumlah (ng)

1 8133,2 230.4233 8024.4 226.3658 8045 227.1341

2 8002.4 225.5454 8185 232.355 8177.9 232.0902

3 7903.8 221.8684 7966.7 224.2141 8107 229.4462

4 8057.7 227.6077 8107.2 229.4537 7971.7 224.4005

5 7926.3 222.7074 8264.9 235.3347 8262.8 235.2564

6 8111,2 229.6028 8017.9 226.1234 8049.2 227.2907

Rata-rata (ng) 226.2925 228.9745 229.2697

SD 3.54 4.24 3.90

RSD (%) 1.57 1.85 1.70

Metode yang divalidasi TLC digunakan untuk mengukur
kandungan kurkumin dariC. longabubuk rimpang dari beberapa daerah
dan juga kandungan kurkumin dalam rangkaian yang dipalsukan
C. longa. Kurkumin ditemukan dari beberapa daerah diC. longa sekitar
4,28%-5,62% (Gambar 3).C. longadari Gunung Kidul dipilih dalam
pembuatan rangkaian sampel oplosan karena memiliki kandungan
kurkumin tertinggi. Kurkumin yang ditemukan dalam bubuk palsu dari
C. longadenganC. mangasekitar 5,25- 1,35% (Gambar 4). Kandungan
kurkumin menurun seiring dengan peningkatan konsentrasi bahan
pezina. Berdasarkan laporan sebelumnya, kandungan kurkumin dalam
C. mangasangat rendah, tidak lebih dari 0,05% (Polisigoudradkk., 2011),
oleh karena itu, ketika mereka dicampur dengan murniC. longabubuk,
itu akan menurunkan kandungan kurkumin dalam campuran. Oleh
karena itu, metode TLC yang dikembangkan dapat digunakan untuk
pengendalian kualitasC. longauntuk memastikan keasliannya.
Sidik jari metabolit H-NMR dan kemometrik dari
analisis multivariat
Sidik jari metabolit dapat dipahami sebagai:
pola kimia yang dihasilkan dari output mesin analitik yang
berisi banyak informasi, misalnya spektrum H-NMR
dihasilkan dari pengukuran. Sidik jari metabolit H-NMR menyediakan
sekitar 100-1000 variabel yang akan sangat berguna untuk analisis lebih
lanjut (Verpoortedkk., 2007). Sidik jari metabolit melibatkan pengurutan
dataset dan kemudian setiap sampel diklasifikasikan. Kemometrik
analisis multivariat adalah metode statistik yang dapat mengelola data
kompleks yang dihasilkan dari spektrum H-NMR. Ini sangat berguna
dalam analisis sidik jari metabolit. spektrum dariC. longadanC. manga
menunjukkan spektrum spesifik untuk setiap sampel (Gambar 5a dan
5b). Ada beberapa perbedaan di daerah pergeseran kimia tertentu.
Perbedaan ini disebabkan oleh kandungan metabolitnya yang berbeda
untuk masing-masingtemulawakjenis.C. longa memiliki lebih banyak
sinyal dengan intensitas lebih tinggi di wilayah 0,00-3,00 ppm,
sedangkanC. mangahanya memiliki beberapa sinyal dengan intensitas
rendah. Di daerah 5,50-10,00 ppm,C. longajuga memiliki lebih banyak
sinyal dan intensitas yang lebih tinggi daripadaC. manga, tetapi tidak
ada sinyal setelah wilayah 8,00 ppm.C. mangamasih memiliki sinyal di
wilayah 8,50 ppm dan 9,50 ppm. Daerah 0,30-3,00 ppm, 3,00-6,00 ppm,
dan 6,00-10,00 ppm masing-masing berasosiasi dengan minyak atsiri/
asam lemak, karbohidrat, dan senyawa aromatik (pemesandkk., 2014).
 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081 079

Gambar 3: Kandungan kurkumin dalamCurcuma longadari beberapa daerah. Gambar 4: Kandungan kurkumin yang dipalsukanCurcuma longadenganManga temulawak.

sebuah

b Intensitas
Intensitas

c
Intensitas

Gambar 5: Spektrum H-NMR murniCurcuma longa(a), murniManga temulawak(b), dan dipalsukanCurcuma longa(50%) denganManga temulawak(c).
080 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081

Kurkuminoid adalah contoh kandungan metabolit

ditemulawakspesies yang akan mempengaruhi profil spektrum H- C. lo nga
NMR. Sinyal kurkumin muncul pada daerah 7,28 ppm (singlet), 3,90 dewasaterated C. longa

ppm (singlet), dan 7,22 ppm (doublet), sedangkan sinyal 0.25

0.4
C. m
anga
demethoxycurcumin muncul pada daerah 5,89 ppm (singlet), 3,94 0.1

ppm (singlet), dan 6,92 ppm ( ganda) (Awindkk., 2016). KarenaC. 0,5

PC2
CL1 0,75
mangahanya memiliki kandungan kurkuminoid yang sangat 1
CL2 0,055%
rendah, sinyal kurkuminoid muncul pada intensitas yang lebih
CL3
rendah dibandingkan denganC. longa. Oleh karena itu, itu TM2

membuat spektrumC. longamemiliki lebih banyak sinyal dengan

intensitas lebih tinggi di wilayah 6,00-8,00 ppm daripada diC.
manga. Spektrum dipalsukanC. longadengan 50% dariC. manga
menunjukkan pola yang mirip dengan spektrum murniC. longa(
Gambar 5c). Sulit untuk membedakan dengan memeriksa PC1
spektrum murni dan palsuC. longasecara visual. Oleh karena itu,
diperlukan analisis multivariat untuk mengatasinya. Gambar 7: Plot skor PCA murni dan palsuCurcuma longadengan inisaya
Manga
temulawak.
PCA dapat digunakan untuk membedakan antara murniC. longa
dan murniC.manga.Plot skor dariC. longadanC. manga muncul di area
yang berbeda (Gambar 6). Analisis komponen utama (PCA) adalah salah C. longa

satu analisis multivariat yang dapat digunakan untuk C. longa yang dipalsukan

mengklasifikasikan dan membedakan antara sekelompok sampel tanpa

mengetahui keanggotaannya. Selain itu, PCA juga dapat digunakan CL2 CL1
M5
M10
untuk mengklasifikasikan antara bubuk murni dan bubuk palsuC. longa. CL4 CL6
CL3 M25
PCA berhasil membedakan antara bubuk murni dan bubuk palsuC. CL5 M40
M50
longadenganC. mangadalam berbagai proporsi kecuali dalam 5% CL7
CCLL1110

konsentrasi pemalsuan (Gambar 7). Di sisi lain, OPLS-DA adalah CL9

pengenalan pola terawasi yang memungkinkan lebih kuat untuk
klasifikasi dibandingkan dengan PCA. OPLS-DA memungkinkan
pemisahan yang lebih baik dariC. longadan dipalsukanC. longadengan
C.manga.Semua rangkaian pezina jelas dipisahkan dari
C. longa(Angka 8). OPLS-DA menunjukkan kesesuaian yang baik
(R2X = 0,912, R2Y = 0,795) dan prediktifitas yang baik (Q2 =
0,711). OPLS-DA berhasil membedakan antara murni dan palsu
C. longadenganC. mangabahkan dalam 5% konsentrasi
pemalsuan (Gambar 8). Validasi OPLS-DA dengan uji permutasi
menunjukkan bahwa model OPLS-DA robust dan kredibel. Oleh
karena itu, kombinasi metode spektroskopi H-NMR dan analisis
multivariat menjadi metode yang ampuh untuk otentikasiC.
longa.
M7
5
Gambar 8: Plot skor OPLS-DA dariCurcuma longadari beberapa daerah dan
dipalsukanCurcuma longadenganManga temulawak.
KESIMPULAN
Kesimpulannya, metode kromatografi lapis tipis yang
dikembangkan untuk pendugaan kandungan kurkumin dalam serbuk
murni dan serbuk palsu dapat digunakan untuk analisis rutin kurkumin
dengan reproduktifitas yang baik. Metode spektroskopi H-NMR yang
dikombinasikan dengan kemometrik PCA dan OPLS-DA adalah metode
yang ampuh dalam sidik jari metabolit dan berhasil dikonfirmasi untuk
mengklasifikasikan antara murni dan palsu.Curcuma longabedak
denganManga temulawak.

PENGAKUAN
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Fakultas
Farmasi Universitas Gadjah Mada, Dana Abadi Pendidikan
Indonesia (LPDP) dan Laboratorium Penelitian dan Pengujian
Terpadu Universitas Gadjah Mada.

Gambar 6: Plot skor PCA dariCurcuma longadanManga temulawak.
REFERENSI
Ashraf K, Mujeeb M, Ahmad A,dkk. Analisis HPTLC yang divalidasi
metode untuk kuantifikasi variabilitas kandungan kurkumin dalam Curcuma longa
L (kunyit) yang dikumpulkan dari wilayah geografis yang berbeda di India. Asian
Pac J Trop Biomed, 2012; 2:S584-S588.
Awin T, Mediani A, Maulidiani,dkk. Profil fitokimia
dan aktivitas biologis spesies Curcuma yang mengalami metode pengeringan dan
sistem pelarut yang berbeda: pendekatan metabolomik berbasis NMR. Prod
Tanaman Industri, 2016; 94:342-352. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.
indcrop.2016.08.020.
 Windarsihdkk./Jurnal Ilmu Farmasi Terapan 8 (06); 2018: 075-081
Booker A, Frommenwiler D, Johnston D,dkk. Bahan kimia
variabilitas sepanjang rantai nilai kunyit (Curcuma longa): perbandingan
spektroskopi resonansi magnetik nuklir dan kromatografi lapis tipis
kinerja tinggi. J Etnofarmasi, 2014; 152:292-301. doi: http://dx.doi.org/
10.1016/j.jep.2013.12.042.
Chan CC, Lam H, Lee YC, Zhang XM. 2004. Validasi Metode
Analisis dan Verifikasi Kinerja Instrumen. Hoboken, New Jersey: Wiley
Interscience, John Wiley and Sons, Inc.
Cheng J, Weijun K, Yun L,dkk. Pengembangan dan validasi
metode UPLC untuk pengendalian kualitas Curcuma longa Linn.: Kuantisasi
simultan tiga kurkuminoid secara cepat. J Pharm Biomed Anal, 2010;
53:43-49. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.jpba.2010.03.021.
Sepupu M, Adelberg J, Chen F, Rieck J. Kapasitas antioksidan
rimpang segar dan kering dari empat klon kunyit (Curcuma longa
L.) ditumbuhkan secara in vitro. Prod Tanaman Industri, 2007; 25:129-135. doi: http://
dx.doi. org/10.1016/j.indcrop.2006.08.004.
Dai H, Xiao C, Liu H,dkk. Analisis gabungan NMR dan LC-DAD-MS
mengungkapkan variasi metabonomik yang komprehensif untuk tiga
kultivar fenotipik Salvia Miltiorrhiza Bunge. J Proteome Res, 2010;
9:1565-1578. doi: http://dx.doi.org/10.1021/pr901045c.
Gad HA, Bouzabata A. Penerapan chemometrics dalam kualitas
pengendalian kunyit (Temulawak longa)berdasarkan Ultra-violet, Fourier
transform infra-red, dan1Spektroskopi H-NMR. Kimia Makanan, 2017;
237:857-864.
Gonzalez AG, Herrador MA. Panduan praktis untuk analitis
validasi metode, termasuk ketidakpastian pengukuran dan profil
akurasi. Tren Anal Chem, 2007; 26:1-7.
ICH. 2005. Validasi prosedur analitis: teks dan metodologi Q2(R1).
Int Conf Harmon Tech Membutuhkan Regist Pharm Untuk Penggunaan
Manusia.
Jayaprakasha GK, Jaganmohan RL, Sakariah KK. Sebuah metode
HPLC ditingkatkan untuk penentuan kurkumin, demethoxycurcumin dan
bisdemethoxycurcumin. J Agric Food Chem, 2002; 50:3668-3672.
Jung Y, Ahn YG, Kim HK,dkk. Karakterisasi dandelion
spesies menggunakan profil metabolit berbasis 1H-NMR- dan GC-MS. Analis,
2011; 136:4222-4231. doi: http://dx.doi.org/10.1039/c1an15403f.
Jurenka JS. Sifat anti-inflamasi kurkumin, utama
penyusun Curcuma longa: tinjauan penelitian praklinis dan klinis. Altern
Med Rev J Clin There, 2009; 14:141-153.
Kim HK, Saifullah, Khan S,dkk. Klasifikasi metabolisme
Spesies Ilex Amerika Selatan oleh metabolomik berbasis NMR. Fitokimia,
2010; 71:773-784. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.phytochem.2010.02.001.
Kim HS, Park SJ, Hyun SH,dkk. Pemantauan biokimia
buah raspberry hitam (Rubus coreanus Miquel) menurut tahap pematangan
dengan 1H NMR menggunakan sistem pelarut ganda. Food Res Int, 2011; 44:
1977-1987. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodres.2011.01.023.
Longobardi F, VentrellaA, BiancoA,dkk. 1H-NMR Non yang tidak ditargetkan
sidik jari dan analisis statistik multivariat untuk karakterisasi asal
geografis ceri manis Italia. Kimia Makanan, 2013; 141:3028-3033.
doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2013.05.135.
Marikkar JMN, Lai OM, Ghazali HM, Man YBC. Deteksi
081
lemak babi dan lemak babi acak sebagai pemalsuan dalam minyak kelapa sawit yang dihilangkan
baunya dengan pemutih dengan kalorimetri pemindaian diferensial. J Am Minyak Chem Soc,
2001; 78:1113-1119. doi: http://dx.doi.org/10.1007/s11746-001-0398-5.
Mohanty I, Singh Arya D, Dinda A,dkk. Efek perlindungan
Curcuma longa pada iskemia-reperfusi yang diinduksi cedera miokard dan
mekanismenya. Ilmu Kehidupan, 2004; 75:1701-1711. doi: http://dx.doi. org/
10.1016/j.lfs.2004.02.032.
Paramasivam M, Poi R, Banerjee H, Bandyopadhyay A.
Metode kromatografi lapis tipis kinerja tinggi untuk penentuan kuantitatif
kurkuminoid dalam plasma nutfah Curcuma longa. Kimia Makanan, 2009;
113:640-644. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.07.051.
Petrakis EA, Cagliani LR, Polissiou MG, Consonni R.
Evaluasi kunyit (Crocus sativusL.) pemalsuan dengan pemalsuan tanaman
dengan (1) sidik jari metabolit H NMR. Kimia Makanan, 2015; 173:890-896.
doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.10.107.
Phattanawasin P, Sotanaphun U, Srifong L. Validasi TLC-
Metode Analisis Citra untuk Kuantifikasi Simultan Kurkuminoid dalam
Curcuma longa. Kromatografi, 2009; 69:397-400. doi: http://dx.doi. org/
10.1365/s10337-008-0893-y.
Policegoudra RS, Aradhya SM, Singh L. Mango ginger
(Curcuma amada Roxb.) - rempah-rempah yang menjanjikan untuk fitokimia dan
aktivitas biologis. J Biosci, 2011; 36:739-748.
Pothitirat W, Gritsanapan W. Analisis kuantitatif kurkumin,
demethoxycurcumin dan bisdemethoxycurcumin dalam ekstrak kurkuminoid
mentah dari Curcuma longa di Thailand dengan TLC-Densitometry. Mahidol Univ J
Pharm Sci, 2005; 32:23-30.
Rafi M, Rohaeti E, Miftahudin A, Darusman LK. Diferensiasi
dariCurcuma longa, Curcuma xanthorrhiza dan Zingiber cassumunardengan
analisis sidik jari kromatografi lapis tipis. Indo J Chem, 2011; 11(1):71-74.
Remya R, Syamkumar S, Sasikumar B. Isolasi dan
amplifikasi DNA dari bubuk kunyit. Br Food J, 2004; 106:673- 678. doi:
http://dx.doi.org/10.1108/00070700410558201.
Rohman A, Devi, Sudjadi, Nugroho A. Analisis Kurkumin
diCurcuma longadan Curcuma xanthoriza Menggunakan Spektroskopi FTIR
dan Kemometrik. Res J Med Plant, 2015; 9:179-186. doi: http://dx.doi. org/
10.3923/rjmp.2015.179.186.
van der Kooy F, Malta F, Choi YH,dkk. Kontrol kualitas
bahan herbal dan fitofarmaka dengan sidik jari metabolik berbasis MS
dan NMR. Planta Med, 2009; 75:763-775. doi: http://dx.doi. org/10.1055/
s-0029-1185450.
Verpoorte R, Choi YH, Kim HK. Metabolomik berbasis NMR di
bekerja di fitokimia. Phytochem Rev, 2007; 6:3-14. doi: http://dx.doi.
org/10.1007/s11101-006-9031-3.
Cara mengutip artikel ini:
Windarsih A, Rohman A, Swasono RT. Penerapan sidik jari
dan kemometrik metabolit H-NMR untuk otentikasi
Curcuma longadipalsukan denganManga temulawak. J
App Pharm Sci, 2018; 8(06): 075-081.