MAKALAH

KIMIA ANALISIS
KROMATOGRAFI

DOSEN PENGAMPU :
OKTRI LESTARI, M.Pd

DISUSUN OLEH :
ARIFAH RAHMAWATI ( 10122004)
ARMI ABDILA (10122005)
DIAH VELLA PUTRI DWINKA (10122011)
HALIZA EKA PUTRI (10122013)
UTA ARTALITA (10122030)

PROGRAM STUDI S1 FARMASI SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN HAR-

KAUSYAR 2023

KATA PENGANTAR
 Puji syukur kita panjatkan atas ke hadirat Allah swt. Karena atas rahmat dan karunia-
Nya penulis dapat menyelesaikan makalah tentang “Formulasi Sediaan Padat”

Dalam penulisan makalah ini, penulis berusaha semaksimal mungkin dalam

penyusunannya. Namun, tidak ada gading yang tidak retak, begitu pun dengan makalah ini
masih banyak kesalahan-kesalahan baik penulisan maupun isi dari makalah sehingga penulis
mengharapkan kritik dan saran kepada pembaca demi pencapaian kesempurnaan dalam
makalah ini.

Penulis berharap melalui makalah ini bermanfaat khususnya bagi penulis dan pihak
yang telah membacanya,serta penulis mendoakan semoga segala bantuan yang telah
diberikan mendapatkan balasan dari Allah SWT.

Pematang Reba, September 2023

Penulis

DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR.................................................................................................................................2
DAFTAR ISI.............................................................................................................................................3
BAB I....................................................................................................................................................5
PENDAHULUAN.................................................................................................................................5
A. Latar Belakang..............................................................................................................................5
B. Rumusan Masalah.........................................................................................................................6
BAB II...................................................................................................................................................7
TINJAUN PUSTAKA...........................................................................................................................7
A. DEFENISI KROMATOGRAFI.................................................................................................7
B. JENIS JENIS KROMATOGRAFI.............................................................................................9
2.1.1 Kromatografi Kolom..............................................................................................................11
1.1.7 Manfaat dan Contoh Aplikasi Kromatografi Kolom................................................................17
2.2.1 Kromatografi Kertas................................................................................................................18
2.2.2 Fungsi Kromatografi Kertas.....................................................................................................20
2.3.1 Kromatografi Lapis Tipis..........................................................................................................20
2.3.2 Prinsip Kerja Kromatografi Lapis Tipis.....................................................................................21
2.3.3 Cara Kerja Kromatografi Lapis Tipis........................................................................................21
2.4.1 Kromatografi Cair Vakum (KCV)..............................................................................................23
2.4.2 Cara kerja kromatografi cair vakum........................................................................................23
2.5.1 Kromatografi Gas (GC)...........................................................................................................24
2.5.2 Prinsip Kerja Kromatografi Gas...............................................................................................25
2.5.3 Kelebihan dan Kelemahan Kromatografi................................................................................25
2.5.4 Fase diam................................................................................................................................25
2.6.1 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)..................................................................................26
2.6.2 Kelebihan dan Kelemahan Kromatografi KCKT.......................................................................27
2.6.3 Fase gerak...............................................................................................................................27
2.7.1 Aplikasi Teknik Kromatografi..................................................................................................27
BAB III................................................................................................................................................30
PENUTUP...........................................................................................................................................30
A. Kesimpulan..............................................................................................................................30
B. Saran........................................................................................................................................30
DAFTAR PUSTAKA................................................................................................................................31
LAMPIRAN.......................................................................................................................................32
 BAB I

PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Kromatografi pertama kali dikembangkan oleh seorang ahli botani Rusia Michael
Tsweet pada tahun 1903 untuk memisahkan pigmen berwarna dalam tanaman dengan cara
perkolasi esktrak petroleum eter dalam kolom gelas yang berisi kalsium karbonat (CaCO3).
Saat ini kromatografi merupakan teknik pemisahan yang paling umum dan paling sering
digunakan dalam bidang kimia analisis dan dapat dimanfaatkan untuk melakukan analisis,
baik analisis kualitatif, kuantitatif, atau preparative dalam bidang farmasi, lingkungan,
industri, dan sebagainya. (Fatma, 2009).
Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan molekul berdasarkan perbedaan pola
pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul)
yang berada pada suatu sampel. Pemisahan ini terdiri dari dua fase yaitu fase gerak dan fase
diam. Dikatakan fase gerak karena dalam pemisahan kromatografi ini zat yang berupa cair
atau gas yang akan mengangkat sampel melalui fase diam. Dikatakan fase diam karena zat
yang berupa padat atau cair yang pada posisi diam dan sebagai tempat melekatnya kandungan
sampel yang dibawa oleh fase gerak. (Fatma, 2009).
Kromatografi dapat bersifat preparatif maupun analitik. Tujuan kromatografi
preparatif biasanya adalah untuk memisahkan senyawa dalam campuran (biasanya digunakan
untuk pemurnian). Kromatografi analitik digunakan untuk mengetahui perbandingan senyawa
dalam campuran. Pemilihan teknik kromatografi sebagian besar bergantung pada sifat
kelarutan senyawa yang akan dipisahkan. Jenis-jenis kromatografi yang bermanfaat dalam
analisi kualitatif dan analisis kuantitatif adalah kromatografi kertas, kromatigrafi lapis tipis
(KLT), kromatografi kolom, kromatografi gas, dan kromatografi cair kinerja tinggi.
Kromatografi kertas dan KLT pada umunya lebih bermanfaat untuk tujuan indentifikasi,
karena lebih mudah dan sederhana. (Fatma, 2009).
Kromatografi merupakan suatu metode pemisahan yang dewasa ini telah banyak
digunakan, dibandingkan dengan metode yang lainnya seperti detilasi, kristalisasi,
pengendapan, ekstraksi, dan lain-lain mempunyai keuntungan dalam pelaksanaan yang lebih
sederhana, penggunaan waktu yang sangat singkat terutama mempunyai kepekaan yang
tinggi serta mempunyai kemampuan memisahkan yang tinggi.
Meskipun dasar kromatografi adalah suatu proses pemisahan namun banyak diantara
cara ini dapat digunakan untuk analisi kuatitatif. Jenis-jenis kromatografi yang bermanfaat
dalam analisi kualitatif dan analisis kuantitatif adalah kromatografi kertas, kromatigrafi lapis
tipis (KLT), dan kromatografi kolom.
Teknik pemisahan kromatografi dilakukan untuk mendapatkan pemisahan campuran
diantara dua fase. Fase tersebut adalah fase diam dan fase gerak. Fase diam dapat berupa zat
cair dan zat padat, sedangkan fase gerak dapat berupa zat cair atau gas. Latar belakang dari
makalah ini adalah menghadirkan materi dasar yang akan memperkenalkan dengan berbagai
aspek dari proses kromatografi, menjelaskan dalam istilah yang sederhana bagaimana prinsip
kerja kromatografi, dan menunjukan beberapa penerapan yang telah membuat kromatografi
tidak dapat diabaikan dalam istilah yang sederhana bagaimana prinsip kerja kromatografi,
dan menunjukan beberapa penerapan yang telah membuat kromatografi tidak dapat diabaikan
dalam berbagai bidang kehidupan.

B. Rumusan Masalah
1. Apa pengertian dari kromatografi?

2. Apa saja jenis-jenis kromatografi?

3. Bagaimana cara kerja tiap-tiap jenis kromatografi?

C. Tujuan
1. Mengetahui dan memahami pengertian kromatografi.

2. Mengetahui dan memahami jenis-jenis kromatografi.

3. Mengetahui dan memahami cara kerja tiap-tiap jenis kromatografi.

BAB II
 TINJAUN PUSTAKA
A. DEFENISI KROMATOGRAFI
Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan, yang pertama kali dipakai untuk
memisahkan zat-zat warna tanaman. Hal ini tersimpul dari istilah yang dipakai- kroma adalah
zar warna. Pemisahan dengan teknik ini dijalankan dengan mengadakan manipulasi atas dasar
perbedaan sifat-sifat fisik dari zat-zat yang menyusun suatu campuran (Adnan, 1997).
Kromatografi adalah pemisahan kompomen dari suatu campuran berdasarkan dua
fasa, yaitu fasa gerak dan fasa diam. Fasa diam sebagai pemisah campuran, dan fasa gerak
sebagai pembawa campuran (Fatma, 2009).
Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, dimana komponenkomponen
yang dipisahkan didistribusikan di antara dua fase, salah satu fase tersebut adalah suatu
lapisan stasioner dengan permukaan yang luas, yang lainnya sebagai fluida yang mengalir
lembut di sepanjang landasan stasioner (Underwood dan Day,2002)
Pada kolom kromatografi terdapat fasa diam yang umumnya terbuat dari material
padatan yang dapat mengabsorpsi komponen-komponen dalam sampel. Fasa diam ini dapat
berupa cairan yang melarutlkan komponen-komponen dalam sampel. Komponen-komponen
dalam sampel masuk ke dalam kolom kromatografi yang mengandung fasa diam, dan terjadi
interaksi antara komponen-komponen yang terbawa oleh fasa gerak dan fasa diam. Interaksi
ini berbeda-beda untuk masing masing komponen yang terdapat dalam campuran tersebut,
sehingga terjadi proses pemisahan. Setelah komponen-komponen dalam sampel terpisah,
masing-masing komponen tersebut dideteksi oleh detektor yang terdapat pada peralatan
kromatografi. Signal yang keluar dari detektor kromatografi dapat di plot terhadap waktu.
Plot signal terhadap waktu ini disebut “kromatogram”. (Underwood dan Day,2002)
Penemu Kromatografi adalah Tswett yang pada tahun 1903, mencoba memisahkan
pigmen-pigmen dari daun dengan menggunakan suatu kolom yang berisi kapur (CaCO3).
lstilah kromatografi diciptakan oleh Tswett untuk melukiskan daerahdaerah yang berwarna
yang bergerak kebawah kolom. Pada waktu yang hampir bersamaan, D.T. Day juga
menggunakan kromatografi untuk memisahkan fraksifraksi petroleum, namun Tswett lah
yang pertama diakui sebagai penemu dan yang menjelaskan tentang proses kromatografi.
Penyelidikan tentang kromatografi menurun untuk beberapa tahun sampai digunakan suatu
teknik dalam bentuk kromatografi padatan cair (LSC). Kemudian pada akhir tahun 1930-an
dan permulaan tahun 1940-an, kromatografi mulai berkembang. (Mulja, 1995).
Dasar kromatografi lapisan tipis (KLT) diletakkan pada tahun 1938 oleh Izmailov dan
Schreiber, dan kemudian diperhalus oleh Stahl pada tahun 1958. Hasil karya yang baik sekali
dari Martin dan Synge pada tahun 1941 (untuk ini mereka memenangkan Nobel) tidak hanya
mengubah dengan cepat kromatografi cair tetapi seperangkat umum langkah untuk
pengembangan kromatografi gas dan kromatografi kertas. Pada tahun 1952, Martin dan
James mempublikasikan makalah pertama mengenai kromatografi gas. Diantara tahun 1952
dan akhir tahun 1960-an kromatografi gas dikembangkan menjadi suatu teknik analisis yang
canggih. (Mulja, 1995).
Kromatografi cair, dalam praktek ditampilkan dalam kolom gelas berdiameter besar,
pada dasamya dibawah kondisi atmosfer. Waktu analisis lama dan segala prosedur biasanya
sangat membosankan. Pada akhir tahun 1960-an, semakin banyak usaha dilakukan untuk
pengembangan kromatografi cair sebagai suatu teknik mengimbangi kromatografi gas.
(Mulja, 1995).
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) atau Kromatografi Cair
Penampilan Tinggiatau High Preformance = Tekanan atau Kinerja Tinggi, High Speed =
Kecepatan Tinggi dan Modern = moderen) telah berhasil dikembangkan dari usaha ini.
Kemajuan dalam keduanya instrumentasi dan pengepakan kolom terjadi dengan cepatnya
sehingga sulit untuk mempertahankan suatu bentuk hasil keahlian membuat instrumentasi dan
pengepakan kolom dalam keadaan tertentu. Tentu saja, saat ini dengan teknik yang sudah
matang dan dengan cepat KCKT mencapai suatu keadaan yang sederajat dengan
kromatografi gas. Sekarang ini, kromatografi sangat diperlukan dalam memisahkan suatu
campuran senyawa. HPLC didefinisikan sebagai kromatografi cair yang dilakukan dengan
memakai fase diam yang terikat secara kimia pada penyangga halus yang distribusi ukuranya
sempit ( kolom ) dan fase gerak yang dipaksa mengalir dengan laju alir yang terkendali
dengan memakai tekanan tinggi sehingga menghasilkan pemisahan dengan resolusi tinggi
dan waktu yang relatif singkat. (Mulja, 1995).
Prinsip Kromatografi Pada prinsipnya semua cara pemisahan kromatografi mengalami
proses yang sama yaitu adanya distribusi komponen-komponen dalam fasa diam dan fasa
gerak dengan memanfaatkan perbedaan-perbedaan sifat-sifat fisik komponen yang akan
dipisahkan (Mulja, 1995).
Perbedaaan sifat tersebut diantaranya :
 Kelarutan yang berbeda terhadap suatu pelarut
 Sifat untuk bertaut (adsorpsi) yang berbeda satu sama lain dengan suatu serbuk bahan
padat.
 Sifat dapat menguap pada temperatur yang berbeda satu sama lain.

Kromatografi jenis ini memakai fase diam cair dan fasa gerak cair. Pemisahan
komponen-komponen akan sangat tergantung pada perbedaan Kd (Koefisien distribusi)
molekul-molekul yang dipisahkan. Mekanisme pemisahan dengan kromatografi kertas
prinsipnya sama dengan mekanisme pada kromatografi kolom. Adsorben dalam kromatografi
kertas adalah kertas saring, yakni selulosa. Sampel yang akan dianalisis ditotolkan ke ujung
kertas yang kemudian digantung dalam wadah. Kemudian dasar kertas saring dicelupkan ke
dalam pelarut yang mengisi dasar wadah. Fasa mobil (pelarut) dapat saja beragam. Bisa
menggunakan: air, etanol, asam asetat atau campuran zat-zat ini dapat digunakan. (Khopkar,
2002)
Cara membedakan fase gerak dan fase diam:
1. Fase diam (Stationary phase) merupakan salah satu komponen yang penting dalam proses
pemisahan dengan kromatografi karena dengan adanya interaksi dengan fase diamlah
terjadi perbedaan waktu retensi (tR) dan terpisahnya komponen suatu senyawa analit
termasuk asam amino. Fase diam dapat berupa bahan padat atau porous (berpori) dalam
bentuk molekul kecil atau cairan yang umumnya dilapiskan pada padatan pendukung.
(Khopkar, 2002)
2. Fase gerak (Mobile phase) merupakan pembawa analit (asam amino), dapat bersifat inert
maupun berinteraksi dengan analit tersebut. Fase gerak dapat berupa bahan cair dan dapat
juga berupa gas inert yang umumnya dapat dipakai sebagai carrier gas senyawa mudah
menguap (volatil). (Khopkar, 2002)
Faktor yang mempengaruhi dalam kromatografi:
1. Pelarut, disebabkan pentingnya koefisien partisi, maka perubahan-perubahan
yang sangat kecil dalam komposisi pelarut dapat menyebabkan perubahan-
perubahan harga Rf.
2. Suhu, perubahan dalam suhu merubah koefisien partisi dan juga kecepatan
aliran.
3. Ukuran dari bejana, volume dari bejana mempengaruhi homogenitas dari
atmosfer jadi mempengaruhi kecepatan penguapan dari komponen-komponen
pelarut dari kertas. Jika bejana besar digunakan, ada tendensi perambatan lebih
lama, seperti perubahan komposisi pelarut sepanjang kertas, maka koefisien
partisi akan berubah juga. Dua faktor yaitu penguapan dan kompisisi
mempengaruhi harga Rf.
4. Kertas, pengaruh utama kertas pada harga Rf timbul dari perubahan ion dan
serapan, yang berbeda untuk macam-macam kertas. Kertas mempengaruhi
kecepatan aliran juga mempengaruhi kesetimbangan partisi.
5. Sifat dari campuran, berbagai senyawa mengalami partisi diantara volume-
volume yang sama dari fasa tetap dan bergerak. Mereka hampir selalu
mempengaruhi karakteristik dari kelarutan satu terhadap lainnya hingga
terhadap harga Rf mereka. (Khopkar, 2002)

B. JENIS JENIS KROMATOGRAFI

Kromatografi berdasarkan prinsip/mekanisme pemisahannya pemisahannya,
kromatografi dapat dibedakan menjadi :
a. Kromatografi Adsorpsi
Adsorpsi merupakan penyerapan pada permukaannya saja dan jangan sekali-
kali dikacaukan dengan proses absorpsi yang berarti penyerapan keseluruhan.
Adsorpsi pada permukaan melibatkan interaksi-interaksi elektrostatik seperti
ikatan hidrogen, penarikan dipol-dipol, dan penarikan yang diinduksi oleh
dipole. Silika gel merupakan jenis absorben (fase diam) yang penggunaannya
paling luas. Permukaan silika gel terdiri atas gugus Si-O-Si dan gugus silanol
(Si-OH). Kromatografi Adsorpsi seperti(Rohman,2007).
b. Kromatografi Partisi
Partisi merupakan analog dengan ekstraksi pelarut. Fase diam diikatkan pada
padatan lapis tipis yang lembam (inert). Karena fase diam cair diikatkan pada
padatan pendukung maka masih diperdebatkan apakah proses adsorpsinya
merupakan partisi murni atau partisi yang dimodifikasi karena absorpsi juga
mungkin terjadi (Rohman,2007). Cara ini didasarkan pada partisi linarut
antara dua pelarut yang tak bercampur, salah satunya diam (fase diam) dan
yang lainnya bergerak (fase gerak). Pada tahap awal KC, fase diam dibuat
 dengan cara yang sama seperti membuat penyangga kromatografi gas
(Johnson dan Stevenson, 1991).
c. Pertukaran Ion
Cara ini didasarkan pada pertukaran (penjerapan) ion antara fase gerak dan
titik ion pada kemasan. Banyak dammar diperoleh dari kopolimer stirena
divinil benzena yang telah ditambahi gugus fungsi. Dammar jenis asam
sulfonat dan jenis amin kuartener merupakan pilihan terbaik untuk sebagian
besar pemakaian. Baik fase terikat maupun dammar telah digunakan. Cara
tersebut banyak dipakai dalam ilmu hayat, contohnya pemisahan asam amino,
dan dapat pula dipakai untuk pemisahan kation dan anion (Jonhson dan
Stevenson, 1991)
d. Kromatografi Eksklusi
Eksklusi berbeda dari mekanisme sorpsi yang lain, yakni dalam eksklusi tidak
ada interaksi spesifik antara solute dengan fase diam. Teknik ini unik karena
dalam pemisahan didasarkan pada ukuran molekul dari zat padat pengepak
(fase diam). Pengepak adalah suatu gel dengan permukaan berlubang-lubang
sangat kecil (porous) yang inert. Sebagai fase gerak digunakan cairan.
Kromatografi jenis ini sangat dipengaruhi oleh perbedaan bentuk struktur dan
ukuran molekul (Rohman, 2007).
 2.1.1 Kromatografi Kolom

Kromatografi kolom merupakan teknik kromatografi yang paling awal yang pertama
kali di lakukan oleh D. T. Davy yaitu untuk membedakan komposisi minyak bumi.
Ditinjau dari mekanismenya kromatografi kolom merupakan kromatografi serapan
atau adsorbsi. Kromatografi kolom digolongkan ke dalam kromatografi cair- padat
(KCP) kolom terbuka. Pemisahan kromatografi kolom adsorpsi didasarkan pada
adsorpsi komponen-komponen campuran dengan afinitas berbeda-beda terhadap
permukaan fase diam. Kromatografi kolom adsorpsi termasuk pada cara pemisahan
cair-padat. Substrat padat (adsorben) bertindak sebagai fase diam yang sifatnya tidak
larut dalam fase cair. Fase bergeraknya adalah cairan (pelarut) yang mengalir
membawa komponen campuran sepanjang kolom. Prinsip yang mendasari kromatografi
kolom adsorpsi ialah bahwa komponen-komponen dalam zat, contoh yang harus diperiksa
mempunyai afinitas yang berbeda-beda terhadap adsorben dalam kolom. Apabila kita
mengalirkan cairan (elutor) secara kontinyu melalui kolom yang berisi zat contoh
yang telah diadsorpsikan oleh penyarat kolom, maka yang pertama- tama dihanyutkan
elutor ialah komponen yang paling lemah terikat kepada adsorben. Komponen-
komponen lainnya akan dihanyutkan menurut urutan afinitasnya terhadap adsorben,
sehingga terjadi pemisahan daripada komponen-komponen tersebut.

Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah

yang banyak berdasarkan adsorpsi dan partisi. Kemasan adsorben yang sering
digunakan adalah silika gel G-60, kieselgur, Al2O3, dan Diaion. Cara pembuatannya
ada dua macam:

 Cara kering yaitu silika gel dimasukkan ke dalam kolom yang telah diberi
kapas kemudian ditambahkan cairan pengelusi.

 Cara basah yaitu silika gel terlebih dahulu disuspensikan dengan cairan
pengelusi yang akan digunakan kemudian dimasukkan ke dalam kolom melalui
dinding kolom secara kontinyu sedikit demi sedikit hingga masuk semua,
sambil kran kolom dibuka. Eluen dialirkan hingga silika gel mapat, setelah
silika gel mapat eluen dibiarkan mengalir sampai batas adsorben kemudian
kran ditutup dan sampel dimasukkan yang terlebih dahulu dilarutkan dalam
eluen sampai diperoleh kelarutan yang spesifik. Kemudian sampel dipipet dan
dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom sedikit demi sedikit hingga
masuk semua, dan kran dibuka dan diatur tetesannya, serta cairan pengelusi
ditambahkan. Tetesan yang keluar ditampung sebagai fraksi-fraksi.

1.1.1 Fase Diam dan Fase Gerak dalam Kromatografi Kolom

Metode pemisahan kromatografi kolom ini memerlukan bahan kimia yang cukuP banyak
sebagai fasa diam dan fasa bergerak bergantung pada ukuran kolom gelas. Untuk melakukan
pemisahan campuran dengan metode kromatografi kolom diperlukan waktu yang cukup
lama, bisa berjam-jam hanya untuk memisahkan satu campuran. Selain itu, hasil pemisahan
kurang jelas artinya kadang-kadang sukar mendapatkan pemisahan secara sempurna karena
pita komponen yang satu bertumpang tindih dengan komponen lainnya. Masalah waktu yang
lama disebabkan laju alir fasa gerak hanya dipengaruhi oleh gaya gravitasi bumi, ukuran
diameter partikel yang cukup besar membuat luas permukaan fasa diam relatif kecil sehingga
tempat untuk berinteraksi antara komponen-komponen dengan fasa diam menjadi terbatas.
Apabila ukuran diameter partikel diperkecil supaya luas permukaan fasa diam bertambah
menyebabkan semakin lambatnya aliran fasa gerak atau fasa gerak tidak mengalir sama
sekali. Selain itu fasa diam yang sudah terpakai tidak dapat digunakan lagi untuk pemisahan
campuran yang lain karena sukar meregenerasi fasa diam.
Pemisahan tergantung pada kesetimbangan yang terbentuk pada bidang antarmuka di antara
butiran-butiran adsorben dan fase bergerak serta kelarutan relatif komponen pada fase
bergeraknya. Antara molekul-molekul komponen dan pelarut terjadi kompetisi untuk
teradsorpsi pada permukaan adsorben sehingga menimbulkan proses dinamis. Keduanya
secara bergantian tertahan beberapa saat di permukaan adsorben dan masuk kembali pada
fase bergerak. Pada saat teradsorpsi komponen dipaksa untuk berpindah oleh aliran fase
bergerak yang ditambahkan secara kontinyu. Akibatnya hanya komponen yang mempunyai
afinitas lebih besar terhadap adsorben akan secara selektif tertahan. Komponen dengan
afinitas paling kecil akan bergerak lebih cepat mengikuti aliran pelarut.
Teknik pemisahan kromatografi kolom partisi sangat mirip dengan kromatografi kolom
adsorpsi. Perbedaan utamanya terletak pada sifat dari penyerap yang digunakan. Pada
kromatografi kolom partisi penyerapnya berupa materi padat berpori seperti kieselguhr,
selulosa atau silika gel yang permukaannya dilapisi zat cair (biasanya air). Dalam hal ini zat
padat hanya berperan sebagai penyangga (penyokong) dan zat cair sebagai fase diamnya.
Fase diam zat cair umumnya diadsorpsikan pada penyangga padat yang sejauh mungkin inert
terhadap senyawa-senyawa yang akan dipisahkan. Zat padat yang penyokong harus penyerap
dan menahan fase diam serta harus membuat permukaannya seluas mungkin untuk
mengalirnya fase bergerak. Penyangga pada umumnya bersifat polar dan fase diam lebih
polar dari pada fase bergerak. Dalam kromatografi partisi fase bergeraknya dapat berupa zat
cair dan gas yang mengalir membawa komponen-komponen campuran sepanjang kolom. Jika
fase bergeraknya dari zat cair, akan diperoleh kromatografi partisi cair-cair. Teknik ini
banyak digunakan untuk pemisahan senyawa-senyawa organik maupun anorganik. Untuk
memisahkan campuran, kolom yang telah dipilih sesuai campuran diisi dengan bahan
penyerap seperti alumina dalam keadaan kering atau dibuat seperti bubur dengan pelarut.
Pengisian dilakukan dengan bantuan batang pengaduk untuk memanfaatkan adsorben dan
gelas wool pada dasar kolom. Pengisian harus dilakukan secara hat-hati dan sepadat mungkin
agar rata sehingga terhindar dari gelembung- gelembung udara, untuk membantu
homogenitas biasanya kolom setelah diisi divibrasi diketok-ketok. Sejumlah cuplikan yang
dilarutkan dalam sedikit pelarut, dituangkan melalui sebelah atas kolom dan dibiarkan
mengalir ke dalam adsorben. Komponen- komponen dalam campuran diadsorpsi dari larutan
secara kuantitatif oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada permukaan atas kolom.
Dengan penambahan pelarut secara terus-menerus, masing-masing komponen akan bergerak
turun melalui kolom dan pada bagian atas kolom akan terjadi kesetimbangan baru antara
bahan penyerap, komponen campuran dan eluen. Kesetimbangan dikatakan tetap apabila
suatu komponen yang satu dengan yang lainnya bergerak ke bagian bawah kolom dengan
waktu atau kecepatan berbeda-beda sehingga terjadi pemisahan (Yazid, 2005).
Fasa diam atau adsorben (penjerap) dalam kromatografi kolom adalah zat padat. Fasa diam
yang paling umum untuk kromatografi kolom adalah silika gel , diikuti dengan alumina.
Serbuk selulosa pernah banyak digunakan. Kromatografi kolom memungkinkan melakukan
teknik kromatografi pertukaran ion, kromatografi fasa terbalik, kromatografi afinitas, atau
penjerapan bed ekspansi (Bahasa inggris: expanded bed adsorption, EBA). Fasa diam
biasanya serbuk halus atau gel dan atau mikropori untuk peningkatan permukaan, meskipun
dalam EBA digunakan bed berfulida. Ada rasio penting antara berat fasa diam dan berat
kering campuran analit yang dapat diaplikasikan ke dalam kolom. Untuk kolom silika, rasio
berada antara 20:1 hingga 100:1, bergantung pada kedekatan jarak elusi antar komponen
analit. Fasa gerak atau eluen dapat berupa pelarut murni atau campuran pelarut. Pemilihan
dilakukan sedemikian rupa sehingga nilai factor retensi senyawa yang diinginkan berada pada
kisaran 0,2 - 0,3 untuk meminimalkan waktu dan jumlah eluen yang diperlukan selama
kromatografi. Eluen dapat pula dipilih berdasarkan daya pisahnya sehingga senyawa yang
berbeda dapat dipisahkan secara efektif. Optimasi eluen dilakukan melalui uji pendahuluan
berskala kecil, biasanya menggunakan kromatografi lapisan tipis (KLT) dengan fasa gerak
yang sama.
Ada laju aliran optimum untuk masing-masing pemisahan. Semakin cepat laju aliran eluen
akan meminimalkan waktu yang dibutuhkan untuk melalui kolom sehingga meminimalkan
difusi, menghasilkan pemisahan yang lebih baik. Namun, laju aliran maksimum perlu dibatasi
karena analit memerlukan waktu tertentu untuk berada pada kesetimbangan antara fasa diam-
fasa gerak, lihat persamaan Van Deemter. Kolom laboratorium sederhana bekerja dengan
prinsip aliran gravitasi. Laju aliran kolom semacam ini dapat dinaikkan dengan menambah
eluen baru di bagian atas fasa diam, atau diturunkan dengan mengatur keran di bagian bawah.
Laju aliran yang lebih cepat dapat diperoleh dengan menggunakan pompa atau gas
bertekanan (misalnya: udara, nitrogen, atau argon) untuk menekan pelarut melalui kolom
(kromatografi kolom kilat). Ukuran partikel fasa diam pada kromatografi kolom kilat
biasanya lebih halus daripada kromatografi kolom gravitasi. Misalnya, silika gel untuk
kromatografi kilat berukuran antara 230 – 400 mesh (40 – 63 µm), sementara untuk
kromatografi gravitasi antara 70 – 230 mesh (63 – 200 µm).
Telah dikembangkan lembar lajur (spreadsheet) yang mendukung suksesnya pengembangan
kolom kilat. Lembar lajur memperkirakan volume retensi dan pita volume analit, jumlah
fraksi yang diperkirakan untuk masing-masing kandungan analit, dan resolusi antara dua
puncak yang berdekatan. Informasi ini memungkinkan pengguna memilih parameter optimal
untuk pemisahan berskala preparatif sebelum dicobakan pada kolom kilat.

1.1.2 Macam-macam Kromatografi Kolom

a. Kromatografi Kolom Gravitasi (KKG)
KKG termasuk jenis teknik kromatografi yang paling awal dikembangkan dan
termasuk kromatografi serapan yang sering disebut kromatografi elusi. Kolom
kromatografi dapat berupa pipa gelas yang dilengkapi dengan kran dan gelas
penyaring di dalamnya. Ukuran kolom tergantung pada banyaknya zat yang
akan dipisahkan. Untuk menahan penyerap yang diletakkan di dalam kolom
dapat digunakan glass woll atau kapas.
 Aplikasi teknik ini banyak digunakan untuk pemurnian senyawa setelah
melewati teknik KLT, misalnya untuk pemurnian karotenoid, klorofil, serta
senyawa bioaktif tumbuhan lainnya. Teknik ini tidak dilengkapi dengan
spektrometer yang secara otomatis dapat mengukur spektrum serapannya. Biasanya,
pengambilan fraksi cairan dilakukan secara manual dan kemudian diukur dengan
spectrometer.

b. Kromatografi Vakum Cair (KVC)

Kromatografi vakum cair merupakan salah satu kromatografi vakum khusus
yang biasanya menggunakan silika gel sebagai adsorben. Kelebihan KVC jika
dibandingkan dengan kromatografi kolom biasa terletak pada kecepatan proses
(efisiensi waktu) karena proses pengelusian dipercepat dengan memvakumkan
kolom selain itu KVC juga dapat memisahkan sampel dalam jumlah banyak.
Pemilihan jenis silika gel yang tepat merupakan faktor yang sangat penting
untuk mendapatkan hasil pemisahan yang baik. Ukuran partikel silika gel yang
terlalu kecil akan menyebabkan proses elusi berjalan sangat lambat.

Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa

metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai
absorben dan berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat : metanol
(elusi gradien) dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan
penarikan eluen.

Adapun cara kerja kromatografi vakum cair yaitu kolom kromatografi

dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT 10-40 μm) dalam
keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum
dihentikan, pelarut yang
kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penyerap lalu divakumkan
lagi. Kolom dihisap sampai kering dan sekarang siap dipakai jika kolom tidak
retak atau turunnya eluen sudah sesuai dengan kolom.

Sampel dilarutkan dalampelarut yang sesuai atau sampel dibuat serbuk

bersama adsorben (impregnasi) dan dimasukkan ke bagian atas kolom,
kemudian dihisap perlahan-lahan. Kolom selanjutnya dielusi dengan pelarut
yang sesuai, dimulai dengan yang paling nonpolar. Kolom dihisap sampai
kering pada setiap pengumpulan fraksi. Pada kromatografi vakum cair, fraksi-
fraksi yang ditampung biasanya bervolume jauh lebih besar dibandingkan
 dengan fraksi-fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom biasa. Langkah
pemisahan menggunakan kromatografi vakum cair biasanya dilakukan pada
tahap awal pemisahan.

Berbeda halnya dengan kromatografi kolom yang menggunakan tekanan pada

bagian atas kolom untuk meningkatkan laju aliran, pada kromatografi vakum
cair, bagian atasnya terbuka sehingga untuk mengotak atik kolom untuk
penggantian pelarut mudah dilakukan (meskipun kromatografi vakum cair
juga menggunakan tekanan rendah untuk meningkatkan laju aliran fasa gerak).

c. Kromatografi Kolom Tekan (KKT)

Kromatografi kolom tekan merupakan modifikasi dari kromatografi kolom
gravitasi dengan menambahkan tekanan udara dari atas kolom dan digunakan
untuk isolasi. Prinsip kromatografi kolom tekan yaitu pergerakan eluen
dibantu dengan tekanan udara yang berasal pompa udara. Kromatografi kolom
tekan dilakukan sebagai
lanjutan dari KVC dan dilakukan dengan cara basah. Hasil dari KKT
membentuk
Kristal dan fraksi yang sama akan diuapkan sebagaiman ururtan pelarutnya
yaitu: heksan, kloroform, etil, aseton, dan methanol.
Pada kromatografi kolom tekan, senyawa biasanya terlebih dahulu diisolasi
dengan melakukan maserasi atau perendaman menggunakan pelarut seperti
alkohol. Setelah proses maserasi, sampel yang didapatkan kemudian
difraksinasi menggunakan kromatografi kolom tekan. Pada kromatografi
kolom tekan fasa diam berupa silika gel 60 (230-400 mesh) untuk pengisian
kolom dan silika gel 60 (60-70 mesh) untuk diimpreg dengan sampel dengan
perbandingan (1:1). Perbandingan eluen fase gerak yang digunakan pada
kromatografi kolom tekan secara berturut-turut adalah n- heksana : etil asetat
terlihat pada tabel berikut :

Beberapa adsorben yang digunakan dalam KKT yaitu :

1. Silica merupakan adsorben medium yang bersifat sedikit asam. Silica
digunakan untuk senyawa biasa untuk mendapatkan hasil pemisahan
yang baik.

2. Florisil merupakan adsorben yang lebih ringan menggunakan 200

mesh yang efektif memudahkan proses pemisahan. Jika kurang dari
200 mesh, lebih baik digunakan pemurnian dengan filtrasi.

3. Alumina merupakan adsorben ringan sampai medium. Sangat efektif

untuk memudahkan proses pemisahan dan pemurnian amina.
 4. Silika fase balik merupakan senyawa yang mampu mengelusi paling
cepat pada senyawa polar dan paling lambat nonpolar.
1.1.3 Cara Kerja Kromatografi Kolom
Komponen tunggal ditahan pada fasa diam berupa adorben karena telah terikat.
Ketika eluen dialirkan, maka senyawa akan melakukan migrasi, terbawa oleh eluen
sesuai dengan kesesuaian kepolaran. Masing – masing senyawa dalam komponen
mempunyai kecepatan yang berbeda – beda dalam melewati kolom. Selama proses
berlangsung, akan didapatkan beberapa fraksi. Masing – masing fraksi kemungkinan
mengandung senyawa yang berbeda. Untuk mengujinya, fraksi hasil kromatografi
kolom dapat diamati menggunakan KLT. Fraksi dengan RF yang mirip, kemungkinan
mengandung senyawa yang sama. Fraksi dapat diamati lebih lanjut menggunakan
spektroskopi.
Seluruh proses kromatografi kolom dapat dilihat pada gambar berikut:

Gambar. Teknik kromatografi kolom

1.1.4 Teknik Pemisahan dengan Cara Kromatografi Kolom

Teknik pemisahan kromatografi kolom dalam memisahkan campuran, kolom yang
telah dipilih sesuai ukuran diisi dengan bahan penyerap (adsorben) seperti alumina
dalam keadaan kering atau dibuat seperti bubur dengan pelarut. Pengisian dilakukan
dengan bantuan batang pemanpat (pengaduk) untuk memanpatkan adsorben dengan
gelas wool pada dasar kolom. Pengisian harus dilakukan secara hati-hati dan sepadat
mungkin agar rata sehingga terhindar dari gelembung-gelembung udara. Untuk
membantu homogenitas pengepakan biasanya kolom setelah diisi divibrasi, diketok-
ketok atau dijatuhkan lemah pada pelat kayu. Sejumlah cuplikan dilarutkan dalam
sedikit pelarut, dituangkan melalui sebelah atas kolom dan dibiarkan mengalir ke
dalam adsorben. Komponen-komponen dalam campuran diadsorpsi dari larutan
secara kuantitatif oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada permukaan atas
kolom, dengan penambahan pelarut (eluen) secara terus-menerus, masing-masing
komponen akan bergerakturun melalui kolom dan pada bagian atas kolom akan terjadi
kesetimbangan baru antara bahan penyerap, komponen campuran dan eluen.
Kesetimbangan dikatakan tetap bila suatu komponen yang satu dengan lainnya
bergerak ke bagian bawah kolom dengan waktu atau kecepatan berbeda-beda
sehingga terjadi pemisahan. Jika kolom cukup panjang dan semua parameter
pemisahan betul-betul terpilih seperti diameter kolom, adsorben, pelarut dan
kecepatan alirannya, maka akan terbentuk pita-pita (zona- zona) yang setiap zona
berisi satu macam komponen. Setiap zona yang keluar dari kolom dapat ditampung
 dengan sempurna sebelum zona yang lain keluar dari kolom. Komponen (eluat) yang
diperoleh dapat diteruskan untuk ditetapkan kadarnya, misalnya dengan cara titrasi
atau spektofotometri.

1.1.5 Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Kromatografi Kolom

a. Analisis Kuantitatif
Komponen (eluat) yang diperoleh dapat diteruskan untuk ditetapkan kadarnya
dengan cara titrasi ataupun spektofotometri.
b. Analisis Kualitatif
Pergerakan komponen melalui kolom akan terjadi kesetimbangan baru antara
bahan penyerap, komponen campuran dan eluen. Kesetimbangan dikatakan tetap
bila suatu komponen yang satu dengan lainnya bergerak ke bagian bawah kolom
dengan waktu atau kecepatan berbeda – beda sehingga terjadi pemisahan dengan
terbentuk pita – pita (zona – zona) yang setiap zona berisi satu macam komponen
(eluat). Setiap zona yang keluar dari kolom dapat ditampung dengan sempurna
sebelum zona yang lain keluar dari kolom.

1.1.7 Manfaat dan Contoh Aplikasi Kromatografi Kolom

Karena menjadi metode kromatografi sebagai pemisahan dasar dalam kimia,
kromatografi kolom memiliki manfaat dan kegunaan yang sangat luas terutama pada
bidang Kimia organik. Kromatogarfi kolom juga dapat diaplikasikan dalam berbagai
kegunaan. Berikut ini beberapa contoh manfaat dan aplikasi kromatografi kolom.
(Canell, 1998; Sarker et al., 2006).
1. Pemurnian dari hasil reaksi sintesis kimia
Dalam kimia organik kita mengenal reaksi sintesis dimana reaksi tersebut
memungkinkan pembentukan produk dari reaktan tertentu. Pada reaksi
sintesis, tidak selalu menghasilkan produk yang murni atau hanya satu jenis
produk melainkan juga kadang terdapat produk lain yang disebut dengan
produk samping hasil reaksi. (Canell, 1998; Sarker et al., 2006). Untuk
memisahkannya dengan produk utama maka harus dilakukan pemurnian, cara
yang paling mudah adalah dengan menggunakan kromatografi kolom. Melalui
kromatografi kolom dengan didasarkan pada perbedaan sifat kepolaran
senyawa yang dipisahkan maka dapat dihasilkan senyawa hasil reaksi yang
murni. (Canell, 1998; Sarker et al., 2006).
2. Isolasi senyawa aktif dalam bahan alam
Masih berkaitan dengan kimia organik, kita sering menggunakan senyawa
aktif dari bahan alam tertentu karena memiliki aktivitas farmakologis seperti
antibakteri, antijamur, antioksidan, dan lain lain. Untuk mengisolasi senyawa
tersebut secara murni dari suatu bahan alam seperti daun daunan, diperlukan
metode pemisahan seperti dengan menggunakan kromatografi kolom. Dengan
metode ini, sampel bahan alam akan dibuat ekstrak lalu dilakukan pemisahan
melalui elusi. Hasilnya didapatkan senyawa aktif yang diinginkan dan dapat
 dikarakterisasi lebih lanjut menggunakan alat yang lebih kompleks seperti
menggunakan FTIR atau NMR. (Canell, 1998; Sarker et al., 2006).
3. Analisis limbah lingkungan
Kromatografi kolom juga berperan penting dalam kimia analisis dimana
metode ini digunakan dalam analisis limbah lingkungan. (Canell, 1998;
Sarker et al., 2006).
Untuk dapat mengetahui tingkat pencemaran seperti misalnya dalam limbah
cair maka diperlukan pemurnian dari kandungan limbah tersebut secara
individu sehingga dapat ditentukan zat apa saja yang terkandung pada limbah
tersebut. Kromatografi kolom menjadi cara yang paling murah untuk
melakukan analisis ini karena dengan cara ini kita hanya perlu melakukan
elusi pada sampel sehingga didapatkan fraksi pemisahan, selanjutnya dari
fraksi tersebut akan dilakukan karakterisasi lebih lanjut untuk memastikan zat
apa yang ada di dalamnya. (Canell, 1998; Sarker et al., 2006).
Meskipun begitu metode ini sudah jarang digunakan karena saat ini terdapat
metode yang relatif lebih mudah seperti menggunakan HPLC dan GC.Metode
kromatografi kolom menjadi metode konvensional yang masih digunakan
hingga saat ini meskipun telah dikembangkan berbagai metode kromatografi
lain yang lebih canggih. Kromatografi kolom tetap menjadi pilihan karena
metode yang sederhana dan tentunya murah untuk penggunaan tertentu.Dalam
kromatografi kolom, hal paling penting yang harus diperhatikan yaitu pada
proses elusi dimana kita harus secara tepat menentukan fraksi hasil pemisahan
dan memisahkannya untuk setiap fraksi. Ketika bekerja di laboratorium
terutama untuk bidang kimia organik, maka kita harus menguasai metode
kromatografi kolom. (Canell, 1998; Sarker et al., 2006).

2.2.1 Kromatografi Kertas

Kromatografi kertas adalah suatu metode pemisahan campuran dari substansinya menjadi
komponen- komponennya berdasarkan distribusi suatu senyawa pada dua fase, yaitu fase
diam dan fase gerak. Fasa diam dalam kromatografi berupa air yang terikat pada selulosa
kertas, sedangkan fasa geraknya berupa pelarut organik nonpolar (pelarut yang sesuai).
Kromatografi kertas sering dipakai untuk memisahkan zat-zat warna penyusun tinta atau
bahan perwarna lainnya. Kromatografi kertas yaitu suatu pemisahan dimana fase diam
berupa zat cair yang menggunakan zat padat untuk menyokong fase diam yaitu kertas,
kemudian diletakkan dalam bejana tertutup yang berisi uap jenuh larutan. Ini adalah
merupakan jenis dari sistem partisi di mana fase diam adalah air, disokong oleh molekul-
molekul selulosa dari kertas, dan fase bergerak biasanya merupakan campuran dari satu
atau lebih pelarut-pelarut organik dan air. Kromatografi kertas adalah metode analitik
yang digunakan untuk memisahkan zat atau bahan kimia yang berwarna terutama pigmen.
Hal ini juga dapat digunakan untuk menganalisis warna primer atau sekunder pada
percobaan tinta. Kromatografi kertas merupakan bidang khusus kromatografi cair-cair.
Fase diam berupa lapisan tipis air yang terserap oleh kertas. Selain air dapat juga dipakai
cairan lain. Pengerjaannya sangat sederhana. Penempatan satu tetes larutan cuplikan pada
ujung kertas dan kemudian mencelupkannya ke dalam pelarut (eluen) sudah cukup untuk
memisahkan komponen-komponen cuplikan. Kromatografi kertas atau KKt pada
hakekatnya ialah KLT pada lapisan tipis selulosa atau kertas. Cara ini ditemukan jauh
sebelum KLT dan telah dipakai secara efektif selama bertahun-tahun untuk pemisahan
molekul biologi yang polar seperti asam amino, gula, dan nukleotida. Metode ini
merupakan KCC dengan fase diam cair biasanya air, berada pada serabut kertas. KKt
paling baik jika dibandingkan dengan KLT pada lapisan tipis serbuk selulosa. KKt tidak
memerlukan pelat pendukung, dan kertas dapat dengan mudah diperoleh dalam bentuk
murni sebagai kertas saring. Lapisan sellulosa harus dicetak atau dibeli khusus. Panjang
serabut pada kertas lebih panjang daripada serabut pada lapisan sellulosa yang lazim,
menyebabkan lebih banyak terjadi difusi ke samping dan bervak lebih besar. Akhirnya
lapisan selulosa lebih rapat dan pelarut cenderung mengalir melaluinya lebih cepat dan
menghasilkan pemisahan lebih tajam.
Ini yang telah ditentukan, kertas diambil dari bejana dan kedudukan dari permukaan
pelarut diberi tanda dan lembaran kertas dibiarkan kering. Jika senyawa-senyawa
berwarna maka mereka akan terlihat sebagai pita atau noda yang terpisah. Jika senyawa
tidak berwarna harus dideteksi dengan cara fisika dan kimia yaitu dengan menggunakan
suatu pereaksi – pereaksi yang memberikan sebuah warnaa terhadap beberapa atau semua
dari senyawa -senyawa. Bila daerah dari noda yang terpisah telah dideteksi, maka perlu
mengidentifikasi tiap individu dari senyawa. Metoda identifikasi yang paling mudah
adalah berdasarkan pada kedudukan dari noda relatif terhadap permukaan pelarut,
menggunakan harga Rf.
Harga Rf merupakan parameter karakteristik kromatografi kertas dan kromatografi lapis
tipis. Harga ini merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senyawa pada kromatogram
dan pada kondisi konstan merupakan besaran karakteristik dan reprodusibel.
Harga Rf didefinisikan sebagai perbandingan antara jarak senyawa dari titik awal dan
jarak tepi muka pelarut dari titik awal.
Jarak titik tengah noda dari titik awal jarak
RF = _________________________________________
Tepi muka pelarut dari titik awal
Ada beberapa faktor yang menentukan harga Rf yaitu:
a) Pelarut, disebabkan pentingnya koefisien partisi, maka perubahan – perubahan
yang sangat kecil dalam komposisi pelarut dapat menyebabkan perubahan –
perubahan harga Rf.
b) Suhu, perubahan dalam suhu merubah koefisien partisi dan juga kecepatan aliran.
c) Ukuran dari bejana, volume dari bejana mempengaruhi homogenitas dari atmosfer
jadi mempengaruhi kecepatan penguapan dari komponen – komponen pelarut
dari kertas. Jika bejana besar digunakan, ada tendensi perambatan lebih lama,
seperti perubahan komposisi pelarut sepanjang kertas, maka koefisien partisi akan
berubah juga. Dua faktor yaitu penguapan dan kompisisi mempengaruhi harga Rf.
d) Kertas, pengaruh utama kertas pada harga Rf timbul dari perubahan ion dan
serapan, yang berbeda untuk macam -macam kertas. Kertas mempengaruhi
kecepatan aliran juga mempengaruhi kesetimbangan partisi.
 e) Sifat dari campuran, berbagai senyawa mengalami partisi diantara volume-
volume yang sama dari fasa tetap dan bergerak. Mereka hampir selalu
mempengaruhi karakteristik dari kelarutan satu terhadap lainnya hingga terhadap
harga Rf mereka.

Gambar. Teknik kromatografi kertas

2.2.2 Fungsi Kromatografi Kertas

1) Penguraian tinta.
2) Penguraian klorofil.
3) Identifikasi pewarna makanan dan minuman.
4) Kromatografi kertas diterapkan untuk analisis campuran asam amino dengan sukses
besar.
5) Kromatografi kertas diterapkan untuk analisis campuran asam amino dengan sukses
besar. Karena asam amino memiliki sifat yang sangat mirip, dan asam-asam amino
larut dalam air dan tidak mudah menguap (tidak mungkin didistilasi)

2.2.3 Kelebihan dan Kekurangan Kromatografi Kertas

a. Kelebihan:
 Alat dan bahan yang digunakan sederhana.
 Lebih terjangkau.
b. Kekurangan
 Hasil dari analisis kurang begitu akurat

2.3.1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau
alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya.
Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan
dengan kromatografi.
Kromatografi lapis tipis digunakan untuk pemisahan senyawa secara cepat, dengan
menggunakan zat penjerap berupa serbuk halus yang dipaliskan serta rata pada lempeng kaca.
Lempeng yang dilapis, dapat dianggap sebagai “kolom kromatografi terbuka” dan pemisahan
dapat didasarkan pada penyerapan, pembagian atau gabungannya, tergantung dari jenis zat
penyerap dan cara pembuatan lapisan zat penyerap dan jenis pelarut. Kromatografi lapis tipis
dengan penyerap penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Harga Rf
yang diperoleh pada kromatografi lapis tipis tidak tetap, jika dibandingkan dengan yang
diperoleh pada kromatografi kertas. Oleh karena itu pada lempeng yang sama di samping
kromatogram zat yang di uji perlu dibuat kromatogram zat pembanding kimia, lebih baik
dengan kadar yang berbeda-beda (Dirjen POM, 1979, hal. 782).

2.3.2 Prinsip Kerja Kromatografi Lapis Tipis

Pada proses pemisahan dengan kromatografi lapis tipis, terjadi hubungan kesetimbangan
antara fase diam dan fase gerak, dimana ada interaksi antara permukaan fase diam dengan
gugus fungsi senyawa organik yang akan diidentifikasi yang telah berinteraksi dengan fasa
geraknya. Kesetimbangan ini dipengaruhi oleh 3 faktor, yaitu: kepolaran fase diam, kepolaran
fase gerak, serta kepolaran dan ukuran molekul.
Pada kromatografi lapis tipis, eluent adalah fase gerak yang berperan penting pada proses
elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fase diam (adsorbent). Interaksi antara
adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen. Oleh sebab itu
pemisahan komponen secara kromatografi dipengaruhi oleh laju alir eluent dan jumlah
umpan. Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya pelarut atau
campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang banyak digunakan adalah
jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif
polar, dapat mengusir pelarut yang tak polar dari ikatannya dengan alumina (gel silika).
Semakin dekat kepolaran antara senyawa dengan eluen maka senyawa akan semakin terbawa
oleh fase gerak tersebut. Hal ini berdasarkan prinsip “like dissolved like”.

2.3.3 Cara Kerja Kromatografi Lapis Tipis

 Sebuah garis menggunakan pensil digambar dekat bagian bawah lempengan dan
setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu.
 Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah
gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu
diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana posisi bercak berada.
 Menutup gelas kimia untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia
terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia
biasanya ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi
jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah penguapan pelarut.

Gambar.met kromatografi lapis tipis

2.4.1 Kromatografi Cair Vakum (KCV)
Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode fraksinasi yaitu
dengan memisahkan crude extract menjadi fraksi-fraksinya yang lebih sederhana.
Pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fasa diam dan aliran fasa
geraknya dibantu dengan pompa vakum.Fasa diam yang digunakan dapat berupa
silika gel atau alumunium oksida (Ghisalberti,2008).
Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa metabolit
sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai absorben dan berbagai
perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat : metanol (elusi gradien) dan
menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan eluen (Helfman, 1983).

Gambar. Teknik kromatografi cair vakum

2.4.2 Cara kerja kromatografi cair vakum

Cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi dikemas kering (biasanya
dengan penjerap mutu KLT 10-40 μm) dalam keadaan vakum agar diperoleh
kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut yang kepolarannya rendah
dituangkan ke permukaan penjerap lalu divakumkan lagi. Kolom dipisah sampai
kering dan sekarang siap dipakai (Hostettman,1986).
Kromatografi cair vakum merupakan salah satu jenis dari kromatografi kolom.
Kromatografi kolom merupakan suatu metode pemisahan campuran larutan dengan
perbandingan pelarut dan kerapatan dengan menggunakan bahan kolom.
Kromatografi kolom lazim digunakan untuk pemisahan dan pemurnian senyawa
(Schill, 1978). Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan
dalam KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom terbagi menjadi dua macam,
yaitu:
a. Cara Basah
Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan melarutkan fasa
diam dalam fase gerak yang akan digunakan. Campuran kemudian
dimasukkan ke dalam kolom dan dibuat merata. Fase gerak dibiarkan
 mengalir hingga terbentuk lapisan fase diam yang tetap dan rata, kemudian
aliran dihentikan (Sarker et al., 2006).
b. Cara kering
Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara memasukkan
fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi. Fase diam tersebut
selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan digunakan (Sarker et al.,
2006). Preparasi sampel saat akan dielusi dengan KCV juga memiliki
berbagai metode seperti preparasi fasa diam. Metode tersebut yaitu cara basah
dan cara kering (Canell, 1998). Preparasi sampel cara basah dilakukan dengan
melarutkan sampel dalam pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak
dalam KCV. Larutan dimasukkan dalam kolom kromatografi yang telah terisi
fasa diam. Bagian atas dari sampel ditutupi kembali dengan fasa diam yang
sama. Sedangkan cara kering dilakukan dengan mencampurkan sampel
dengan sebagian kecil fase diam yang akan digunakan hingga terbentuk
serbuk. Campuran tersebut diletakkan dalam kolom yang telah terisi dengan
fasa diam dan ditutup kembali dengan fase diam yang sama (Canell, 1998;
Sarker et al., 2006).
Contoh Penerapan Kromatografi Cair Vakum
 Digunakan dalam proses pemisahan senyawa flavonoid dari rimpang
 Digunakan dalam fraksinasi ekstrak etanol daun mangrove kacangan(R.
apiculata)

2.5.1 Kromatografi Gas (GC)

Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan fisik dengan unsur-unsur yang akan
dipisahkan terdistribusi antara dua fasa. Dua fasa yang dimaksud adalah fase diam dan fase
gerak yang dapat berupa cairan atau gas. Kromatografi gas adalah suatu proses dimana
campuran menjadi komponenkomponennya oleh suatu gas yang melewati suatu lapisan
serapan yang stasioner. Kromatografi gas banyak digunakan pada senyawa-senyawa yang
mudah menguap, terutama pada jenis gas. Kromatografi gas banyak digunakan analisis kimia
karena aliran fase gerak sangat terkontrol dan kecepatannya tetap, pemisahan fisik terjadi
dalam kolom yang jenisnya beragam seperti kolom kapiler, kolom kemasan. Kromatografi
gas sangat mudah digabung dengan instrumen fisiko-kimia yang lain seperti GC-MS.
Kromatografi gas mudah dijalankan dan mudah dipahami, penafsiran data yang diperoleh
biasanya cepat, langsung dan mudah (H.M McNair dan E.J Bonelli. 1988).
 Gambar . Teknik kromatografi gas

2.5.2 Prinsip Kerja Kromatografi Gas

Bila suatu campuran gas atau campuran yang dapat diuapkan diinjeksikan kedalam kolom,
maka gas pembawa yang inert akan membawa campuran melewati kolom yang berisi fase
diam berupa cairan atau padatan. Laju migrasi tiap komponen akan berbeda-beda pada nilai
koefesien partisi/komponen distribusinya. Komponen yang interaksi atau daya ikatnya pada
fase diam lebih kuat maka laju migrasinya lebih lambat, sehingga terjadi pemisahan secara
fisik (tanpa merusak struktur komponen). Komponen-komponen campuran keluar dari kolom
bersama gas pembawa dan dideteksi oleh detektor, sehingga diperoleh kromatogram dengan
komponen–komponen yang telah terpisah.

2.5.3 Kelebihan dan Kelemahan Kromatografi

1. Kelebihan
a. Waktu analisis yang singkat dan ketajaman pemisahan yang tinggi.
b. Dapat menggunakan kolom lebih panjang untuk menghasilkan efisiensi
c. pemisahan yang tinggi.
d. Gas mempunyai vikositas yang rendah.
e. Kesetimbangan partisi antara gas dan cairan berlangsung cepat sehingga
analisis relatif cepat dan sensitifitasnya tinggi.
f. Pemakaian fase cair memungkinkan kita memilih dari sejumlah fase diam
yang sangat beragam yang akan memisahkan hampir segala macam campuran.
(Mulja,1995)
2. Kekurangan
a. Teknik Kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap.
b. Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam
jumlah besar. Pemisahan pada tingkat mg mudah dilakukan, pemisahan pada
tingkat gram mungkin dilakukan, tetapi pemisahan dalam tingkat pon atau ton
sukar dilakukan kecuali jika ada metode lain.
c. Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap
fase diam dan zat terlarut. (Mulja,1995)

2.5.4 Fase diam

Pemilihan fase diam yang tepat merupakan parameter terpenting pada kromatografi
gas. Secara ideal fasa diam tersebut harus mempunyai ciri sebagai berikut :
 harus menunjukkan koefisien distribusi yang berbeda,
 harus mempunyai kelarutan yang rendah,
 harus mempunyai tekanan uap yang rendah pada suhu kerja.
Banyaknya pilihan fase diam yang dapat digunakan menyebabkan pemakaian yang
luas dan selektif untuk masing-masing sampel yang berbeda. Pemilihan fase diam
yang tepat merupakan hal yang sangat penting.
2.6.1 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) atau biasa disebut juga dengan HPLC (High Performance
Liquid Chromatography) merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis bahan
obat, baik dalam bulk atau dalam sediaan farmasetik, serta dalam cairan biologis. KCKT dapat
digunakan baik untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif (Rohman, 2009).

KCKT ini tergolong kromatografi kolom, sebagaimana kromografi kolom lainnya sampel yang
melalui kolom akan mengalami pemisahan senyawasenyawa di dalamnya. Jika kekuatan interaksi
masing-masing senyawa berbedabeda maka senyawa-senyawa tersebut akan terpisah menjadi puncak-
puncak tersendiri. Progres dari pemisahan kromatografi ini akan dimonitor oleh suatu detektor yang
sesuai yang terletak pada ujung kolom. Hasil yang diperoleh akan berbentuk suatu kromatogram yang
terdiri atas puncak untuk masing-masing senyawa yang terpisah (Gambar 7) (Harvey, 2000).

Pemisahan senyawa dalam KCKT diatur oleh distribusi senyawa dalam fase gerak dan fase diam.
Penggunaan kromatografi cair secara sukses terhadap suatu masalah yang dihadapi membutuhkan
penggabungan secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis kolom, fase gerak,
panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fase gerak, suhu kolom, dan ukuran sampel (Gandjar dan
Rohman, 2007).

Teori mengenai KCKT dapat dibagi menjadi 2 aspek yaitu aspek kinetik dan aspek termodinamik.
Aspek kinetik dari KCKT bertanggung jawab atas pelebaran kromatogram, sedangkan aspek
termodinamik mempengaruhi waktu retensi analit dalam kolom. Bila dilihat dari segi analisis, faktor
kinetik mempengaruhi lebar dari puncak kromatogram (efisiensi) dan faktor termodinamik akan
memperngaruhi letak puncak pada kromatogram (selektivitas). Sedangkan dilihat dari segi praktis,
efisiensi pemisahan pada KCKT lebih berkaitan dengan optimasi instrumen, dimensi kolom dan
geometri partikel. Selektivitas lebih berkaitan dengan interaksi intermolekuler dan dipengaruhi oleh
tipe eluen, komposisi, temperatur dan variabel lainnya yang memungkinkan variasi fungsional
(Kazakevich dan LoBrutto, 2007).

Gambar. Teknik KCKT

2.6.2 Kelebihan dan Kelemahan Kromatografi KCKT

1. Kelebihan
 Cepat
 Kolom dapat digunakan kembali
 Ideal untuk zat bermolekul besar dan berionik
 Mudah rekoveri sampel f. (Mulja,1995)
 2. Kekurangan
 Memerlukan biaya yang banyak untuk proses pemisahannya
 Memerlukan orang yang trampil dalam pemisahannya(Mulja,1995)

2.6.3 Fase gerak

Fase gerak pada KCKT. Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang
dapat bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi (Gandjar
dan Rohman, 2007). Terdapat dua jenis elusi yaitu elusi isokratik dimana komposisi dari fase
gerak konstan selama proses elusi, dan elusi gradient dimana komposisi fase gerak dapat
diubah-ubah selama proses elusi (Kar, 2005).
Fase gerak yang biasanya digunakan dalam KCKT fase terbalik adalah campuran hidro
organik. Senyawa organik yang umumnya digunakan adalah metanol dan asetonitril atau
campuran keduanya. Senyawa-senyawa lainnya yang dapat digunakan dalam fase gerak
untuk penyesuaian selektivitas adalah tetrahidrofuran, IPA, dan DMSO (Kazakevich dan
LoBrutto, 2007).

2.7.1 Aplikasi Teknik Kromatografi

A. Pada Bidang Bioteknologi

Dalam bidang bioteknologi, kromatografi mempunyai peranan yang sangat
besar. Misalnya dalam penentuan, baik kualitatif maupun kuantitatif, senyawa
dalam protein. Protein sering dipilih karena ia sering menjadi obyek molekul
yang harus di-purified (dimurnikan) terutama untuk keperluan dalam bio-
farmasi. Kromatografi juga bisa diaplikasikan dalam pemisahan
molekulmolekul penting seperti asam nukleat, karbohidrat, lemak, vitamin dan
molekul penting lainnya. Dengan data-data yang didapatkan dengan
menggunakan kromatografi ini, selanjutnya sebuah produk obat-obatan dapat
ditingkatkan mutunya, dapat dipakai sebagai data awal untuk menghasilkan
jenis obat baru, atau dapat pula dipakai untuk mengontrol kondisi obat tersebut
sehingga bisa bertahan lama. (Canell, R. J. P. 1998).

B. Pada Bidang Klinik

Dalam bidang clinical (klinik), teknik ini sangat bermanfaat terutama dalam
menginvestigasi fluida badan seperti air liur. Dari air liur seorang pasien,
dokter dapat mengetahui jenis penyakit yang sedang diderita pasien tersebut.
Seorang perokok dapat diketahui apakah dia termasuk perokok berat atau
ringan hanya dengan mengetahui konsentrasi CN- (sianida) dari sampel air
liurnya. Demikian halnya air kencing, darah dan fluida badan lainnya bisa
memberikan data yang akurat dan cepat sehingga keberadaan suatu penyakit
dalam tubuh manusia dapat dideteksi secara dini dan cepat. Sekarang ini,
deteksi senyawa oksalat dalam air kencing menjadi sangat penting terutama
bagi pasien kidney stones (batu ginjal). Banyak metode analisis seperti
 spektrofotometri, manganometri, atau lainnya, akan tetapi semuanya
membutuhkan kerja ekstra dan waktu yang cukup lama untuk mendapatkan
hasil analisis dibandingkan dengan teknik kromatografi. Dengan alasan-alasan
inilah, kromatografi kemudian menjadi pilihan utama dalam membantu
mengatasi permasalahan dalam dunia bioteknologi, farmasi, klinik dan
kehidupan manusia secara umum. (Canell, R. J. P. 1998)

C. Pada Bidang Forensik

Aplikasi kromatografi pada bidang forensik pun sangat membantu, terutama
dilihat dari segi keamanan. Masih lekatdalam ingatan kita, sebuah peristiwa
Black September Tragedy mengguncang Amerika pada tanggal 11 September
2001 yang ditandai dengan runtuhnya dua gedung kesayangan pemerintah
Amerika Serikat. Demikian halnya diIndonesia yang marak dengan aksi
peledakan bom yang terjadi di mana-mana. Perhatian dunia pun akhirnya
mulai beralih dengan adanya peristiwa-peristiwa pengeboman/peledakan
tersebut ke bahaya explosive (bahan peledak) dengan peningkatan yang cukup
tajam. Kini kromatrografi menjadi hal yang sangat penting dalam
menganalisis berbagai bahan-bahan kimia yang terkandung dalam bahan
peledak. Hal ini didorong karena dengan semakin cepat diketahuinya bahan-
bahan dasar apa saja bahan peledak, maka akan makin mempercepat
diambilnya tindakan oleh bagian keamanan untuk mengatasi daerah-daerah
yang terkena ledakan serta antisipasi meluasnya efek radiasi yang
kemungkinan akan mengena tubuh manusia di sekitar lokasi ledakan. Lebih
jauh lagi, efek negatifnya terhadap lingkungan juga bisa segera diketahui.
Pada dasarnya setiap bahan peledak, baru akan meledak jika terjadi benturan,
gesekan, getaran atau adanya perubahan suhu yang meningkat. Dengan
terjadinya hal-hal seperti ini, memberikan peluang bahan peledak tersebut
berubah manjadi zat lain yang lebih stabil yang diikuti dengan tekanan yang
tinggi, yang bisa menghasilkan ledakan dahsyat atau bahkan munculnya
percikan api. (Canell, R. J. P. 1998)

D. Dalam bidang lingkungan

Dalam masalah lingkungan, sebagai konsekuensi majunya peradaban
manusia, berarti permasalahan pun semakin “maju”. Salah satu permasalahan
serius yang dihadapi oleh negara-negara berkembang dan utamanya negara
majuadalah persoalan global warming (pemanasan global). Menurut survei
National Institute for Environmental Studies, Japan, tahun 2006 lalu, bahwa
masyarakat di Jepang memperkirakan tingkat pemanasan global merupakan
masalah lingkungan paling serius dan tingkatannya hampir 7 kali lipat dari
satu dekade yang lalu saat polling kali pertama dilakukan pada tahun 1997.
Kontrol kondisi air hujan menjadi penting karena beberapa efek yang fatal
yang mungkin bisa terjadi, di antaranya jatuhnya hujan asam dapat
meningkatkan keasaman danau, sungai, bendungan yang pada akhirnya
mungin dapatmenyebabkan kematian pada kehidupan air. Demikian pula
keasaman pada tanah dapat meningkat dan merembes keair permukaan tanah
yaitu sumber air minum sehari-hari. (Canell, R. J. P. 1998)
E. Dalam bidang farmasi
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan suatu metoda
pemisahancanggih dalam analisis farrnasi yang dapat digunakan sebagai uji
identitas, ujikemumian dan penetapan kadar. Titik beratnya adalah untuk
analisis senyawa-senyawa yang tidak mudah menguap dan tidak stabil pada
suhu tinggi, yang tidak bisa dianalisis dengan Kromatografi Gas. Banyak
senyawa yang dapat dianalisis,dengan KCKT mulai dari senyawa ion
anorganik sampai senyawa organikmakromolekul. Untuk analisis dan
pemisahan obat /bahan obat campuran rasemisoptis aktif dikembangkan suatu
fase pemisahan kiral (chirale Trennphasen) yangmampu menentukan rasemis
dan isomer aktif.Pada Farmakope Indonesia Edisi III Tahun 1979 KCKT
belum digunakansebagai suatu metoda analisis baik kualitatif maupun
kuantitatif. Padahal diFarmakope negara-negara maju sudah lama digunakan,
seperti Farmakope AmerikaEdisi 21 (United State of Pharmacopoeia XXI),
Farmakope Jerrnan Edisi 10 (DeutchesArzneibuch 10).Pada Farmakope
Indonesia Edisi IV Tahun 1995 sudah digunakan KCKT dalamanalisis
kualitatif maupun kuantitatif dan uji kemumian sejumlah 277 (dua ratustujuh
puluh tujuh) obat/bahan obat. Perubahan yang sangat spektakuler dari
Farmakope Indonesia Edisi IV Tahun 1995 ini menunjukkan bahwa
PemerintahIndonesia melalui Departemen Kesehatan Republik Indonesia dan
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan benar-benar telah
mengikuti perkembangan dankemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi
canggih dalam bidang analisis obat. (Canell, R. J. P. 1998)

F. Aplikasi dalam bidang lainnya

Sebenarnya masih sangat banyak aplikasi kromatografi dalam bidang-bidang
keilmuan lainnya. Beberapa aplikasi tersebut misalnya dalam industri kertas,
pertambangan, proses logam, petrokimia, pertanian, kedokteran dan lain-lain.
Namun karena keterbatasan ruang, dalam tulisan ini penulis hanya
menampilkan beberapa contoh peran serta kromatografi dalam memudahkan
dan mempercepat perolehan “target data” dalam beberapa bidang yang
tersebut diatas. (Canell, R. J. P. 1998).
 BAB III

PENUTUP
A. Kesimpulan
1. Kromatografi Kolom merupakan teknik pemisahan kimia berdasarkan
pertukaran ion anion dan ion kation. Kromatografi kolom adalah kromatografi
yang menggunakan kolom sebagai alat untuk memisahkan komponen-
komponen dalam campuran.
2. Kromatografi Kertas adalah suatu metode pemisahan campuran dari
substansinya menjadi komponen- komponennya berdasarkan distribusi suatu
senyawa pada dua fase, yaitu fase diam dan fase gerak.
3. Kromatografi Lapis Tipis yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng
gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel,
atau bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan
metode pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi.
4. Prinsip KLT yaitu pemisahan komponen-komponen berdasarkan perbedaan
adsorpsi atau partisi oleh fase diam dibawah gerakan pelarut pengembang.
5. Kerja dengan KLT dimulai dari (1) penyiapan plat, eluen dan sampel, (2)
penotolan, (3) elusi, (4) deteksi bercak atau noda.

B. Saran

Perlu dilakukan kajian lebih mendalam mengenai ketiga jenis kromatografi tersebut
mengingat cakupan materinya yang sangat luas. Oleh karena itu penyusun sangat
mengharapkan saran dan kritik yang sifatnya membangun agar dalam pembuatan
makalah selanjutnya bisa lebih baik lagi, atas perhatiannya penyusun ucapkan
terimakasih.
 DAFTAR PUSTAKA

Adna, Mochamad. 1997. Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan.

Yogyakarta : Andi Offset.
Alimin, et al. (2007). Kimia Analitik. Makassar: Alauddin Press.
Dirjen, P. (1979). Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta: Depertemen Kesehatan RI.
Cahnell, R.J.P. 1998. Natural Products Isolation Methods in Biotechnology ; 4.
Totowa:Humana Press.
Estien, Y. (2005). Kimia Fisika Paramedis. Yogyakarta: Andi.
Gandjar, LG. dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar,
Yogyakarta, pp. 228-232, 339, 344, 345, 346, 383.
Gandjar, I. G. & Rahman, A. (2008). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gritter, R. J., Bobbit, J. M. & Arthur, E. S. (1991). Pengantar Kromatografi. Bandung:
Penerbit ITB.
Ghisalberti, E.L. 2008. Detection and Isolation of Bioactive Natural Products dalam
Bioactive Natural Product: Detection, Isolation, and Structural Deteermination 2nd
Edition. New York: CRC Press.
Harbone, J. B. (1987). Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan.
Bandung: Penerbit ITB.
Hendayana, S. (2006). Kimia Pemisahan. Bandung: PT. Remaja Rosdakarya.
Hostettmann, K., Hostettmann, M. & Marston, A. (1995). Cara Kromatografi Preparatif.
Bandung: Penerbit ITB.
Johnson, E.L. dan Stevenson, R. 1991. Dasar Kromatografi Cair. Penerjemah:
Kosasih Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB.
John Wiley & Sons, Inc, New Jersey, pp. 25, 35, 145, 146, 161, 192.
Kazakevich, Y., dan LoBrutto, R., 2007, HPLC for Pharmaceutical Scientists.
Kisman, Dr. Sastro, et al. (1994). Analisis Farmasi Cet. 2. Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press.
Khopkar, S.M. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: UI Press.
Khopkar, S. M. (2008). Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Erlangga.
Mulja, M. S. 1995. Analisis Instrumen. Surabaya: Airlangga University Press.
Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Belajar.
Rohman. (2009). Kromatografi untuk Analisis Obat. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Sarker, et. al. 2006. Natural Products Isolation. Totowa: Humana Press.
Soebagio, et al. (2003). Kimia Analitik II. Malang: Jurusan Kimia FMIPA Universitas
Negeri Malang.
Underwood, A.L dan Day, R.A. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif edisi ke-6.
Jakarta:Erlangga.
 LAMPIRAN

GAMBAR TANGGAL TEMPAT

Pembuatan Makalah
06 Oktober 2023 STIKes Har-Kausyar

Pembuatan Power Point

10 Oktober 2023 STIKes Har-Kausyar