Plants 11 00221

Machine Translated by Google
tanaman
Artikel
Stres Kekeringan Menginduksi Morfo-Fisiologis dan Proteom
Perubahan Pandanus amaryllifolius
1 2 1
Muhammad Asyraf Mohd Amnan , Wan Mohd Aizat , Fiqri Dizar Khaidizar dan Boon Chin Tan 1,*
1
Centre for Research in Biotechnology for Agriculture (CEBAR), Universiti Malaya,
Kuala Lumpur 50603, Malaysia; m.asyraf.amnan@um.edu.my (M.A.M.A.); fiqri@um.edu.my (F.D.K.)
2
Institut Biologi Sistem (INBIOSIS), Universitas Nasional Malaysia, Bangi 43600, Malaysia;
wma@ukm.edu.my
* Korespondensi: boonchin@um.edu.my; Telp: +60-3-7967-7982
Abstrak: Kekeringan merupakan salah satu ancaman signifikan terhadap sektor pertanian. Namun, pengetahuan
mengenai respons tanaman terhadap cekaman kekeringan dan pemulihan pascakekeringan masih terbatas.
Pandanus amaryllifolius, tanaman toleran kekeringan sedang, terkenal karena kemampuannya bertahan dalam
kondisi kelembaban tanah tingkat rendah. Memahami regulasi molekuler dari sinyal stres kekeringan pada tanaman
ini dapat membantu memandu desain tanaman yang rasional untuk mengatasi tantangan lingkungan ini. Penelitian
ini bertujuan untuk mengetahui perubahan morfofisiologis, biokimia, dan protein P. amaryllifolius sebagai respon
terhadap cekaman kekeringan dan pada masa pemulihan. Kekeringan secara signifikan mengurangi kadar air relatif
daun dan kandungan klorofil P. amaryllifolius. Sebaliknya, kebocoran elektrolit relatif, kandungan prolin dan
malondialdehid, serta aktivitas enzim antioksidan pada sampel yang diberi perlakuan kekeringan dan sampel yang
diperoleh kembali relatif lebih tinggi dibandingkan sampel yang diberi air baik. Perubahan protein antara tanaman
yang mengalami kekeringan, pengairan baik, dan tanaman pulih dievaluasi menggunakan proteomik kuantitatif
berbasis tandem mass tag (TMT). Dari 1.415 protein dengan kelimpahan berbeda, 74 mengalami perubahan secara
signifikan. Mayoritas perbedaan protein di antara keduanya terkait dengan metabolisme karbon, fotosintesis, respons
Kutipan: Amnan, MAM; Azat,
stres, dan aktivitas antioksidan. Ini adalah studi pertama yang melaporkan perubahan protein sebagai respons
WM; Khaidizar, FD; Tan, SM
terhadap cekaman kekeringan di Pandan. Data yang dihasilkan memberikan wawasan mengenai mekanisme tanggap
Stres Kekeringan
terhadap kekeringan pada P. amaryllifolius.
Menginduksi Perubahan Morfo-
fisiologis dan Proteom Pandanus amaryllifolius.
Kata Kunci: enzim antioksidan; stres kekeringan; Pandanus amaryllifolius; proteomik; protein yang responsif terhadap
Tanaman 2022, 11, 221.
https://doi.org/10.3390/plants11020221 stres; LCMS/MS berlabel TMT
Editor Akademik: Alfredo Guéra

dan Francisco Gasulla Vidal
Diterima: 25 Desember 2021 1. Perkenalan
Diterima: 13 Januari 2022 Stress kekeringan merupakan ancaman signifikan terhadap produktivitas pertanian di seluruh dunia, yang
Diterbitkan: 15 Januari 2022 menyebabkan 83% kerugian ekonomi pertanian. Sekitar US$29 miliar hilang dari seluruh kerusakan pertanian akibat
Catatan Penerbit: MDPI tetap netral bencana alam [1]. Kekeringan telah mempengaruhi hasil gabah dan menyebabkan kerugian sekitar US$840 juta di
sehubungan dengan klaim yurisdiksi beberapa daerah penghasil beras di Thailand [2].
Di Malaysia, penurunan hasil padi sebesar 12–51% akibat cekaman kekeringan dilaporkan pada tahun 2007 hingga
dalam peta yang dipublikasikan dan afiliasi institusi.
ionisasi. 2011 [3]. Selain itu, bertambahnya populasi dunia meningkatkan tekanan pada pertanian untuk menggunakan air
secara lebih efisien. Oleh karena itu, sangat penting untuk memahami respons terhadap kekeringan dan mekanisme
adaptif tanaman karena hal ini dapat membantu meningkatkan kinerja tanaman dalam kondisi cekaman kekeringan.
Hak Cipta: © 2022 oleh penulis. Cekaman kekeringan mengganggu proses fisiologis dan biokimia pada tanaman, termasuk membran sel,
Pemegang Lisensi MDPI, Basel, Swiss.
mengganggu transportasi zat terlarut, laju fotosintesis, penyerapan nutrisi, translokasi, dan menyebabkan kebocoran
Artikel ini adalah artikel akses terbuka
elektron dan akumulasi berlebihan spesies oksigen reaktif (ROS) [4,5]. Dampak cekaman kekeringan pada tanaman
didistribusikan berdasarkan syarat dan
bergantung pada tingkat keparahan dan masa pertumbuhan tanaman [6]. Untuk mengatasi dampak buruk ini,
ketentuan Creative Commons
tanaman telah mengembangkan respons yang rumit dan strategi adaptif. Ini termasuk kelebihan produksi osmolit
Lisensi Atribusi (CC BY) (https://
yang kompatibel, perubahan kadar hormonal endogen, dan regulasi fisiologis dan
creativecommons.org/licenses/by/
4.0/).
Tanaman 2022, 11, 221. https://doi.org/10.3390/plants11020221 https://www.mdpi.com/journal/plants

Tanaman 2022, 11, 221 2 dari 21
perubahan molekuler [7]. Dalam kondisi kekeringan sedang, tanaman merespons dan beradaptasi dengan
mengubah arsitektur akar [8] dan penutupan stomata [9], dengan harapan dapat menjaga keseimbangan antara
toleransi terhadap stres dan pertumbuhan. Namun, jika kondisi kekeringan menjadi parah, tanaman cenderung
mengaktifkan mekanisme perlindungan terhadap kerusakan sel, menyesuaikan sistem enzim antioksidan in vivo
untuk menghilangkan ROS yang berlebihan, dan mengakumulasi protein untuk mempertahankan turgor sel, yang
bertujuan untuk bertahan hidup dalam kondisi tersebut (9).
Upaya ekstensif telah dilakukan untuk memahami mekanisme responsif dan adaptif tanaman terhadap
cekaman kekeringan dengan menggunakan teknik “omics” yang berbeda. Pendekatan proteomik telah digunakan
untuk menentukan respons proteom tanaman di bawah tekanan kekeringan. Misalnya, Liu dkk. menentukan
perubahan protein murbei sebagai respons terhadap cekaman kekeringan menggunakan teknik tandem mass tag
(TMT)-label LCMS/MS [10]. Para penulis menemukan bahwa protein yang terlibat dalam fotosintesis, metabolisme
energi dan gula, produksi antioksidan, hormon , dan homeostasis sel banyak berubah dalam kondisi kekeringan.
Menggunakan teknik yang sama, Xiao dkk. mengidentifikasi 123 protein yang berubah secara berbeda antara
akar halus kapas yang mengalami kekeringan selama 30 hari dan kontrol [11]. Jumlah protein meningkat menjadi
1273 ketika kapas terkena perlakuan kekeringan selama 45 hari. Goche dkk. melaporkan bahwa 237 dan 187
protein akar diubah secara signifikan pada varietas sorgum yang rentan kekeringan dan toleran kekeringan (12).
Studi kekeringan proteomik lainnya juga telah dilaporkan pada buncis [13], selentingan [14], gandum [15], dan
pisang [16].
Pandanus amaryllifolius merupakan anggota keluarga pinus sekrup Pandanaceae. Tanaman ini biasa
dikenal dengan nama pinus ulir wangi, pandan (Malaysia dan Indonesia), pandan mabango (Filipina), dan toei
hom (Thailand). P. amaryllifolius banyak dibudidayakan di Asia Tenggara, seperti di Thailand, Indonesia, dan
Malaysia. Tanaman pandan tumbuh berkelompok dengan ukuran daun mencapai tinggi 40–80 cm dan lebar
sekitar 4,5 cm. Daunnya berwarna hijau tua dengan duri tajam di pinggirnya dan biasa digunakan sebagai
penyedap makanan, pewarna alami, dan obat herbal. Selain memiliki nilai aromatik, daun P. amaryllifolius juga
diketahui mengandung senyawa fenolik yang memiliki manfaat bagi kesehatan. Misalnya, Ghasemzadeh dan
Jaafar melaporkan bahwa asam galat dan asam sinamat yang diisolasi dari P. amaryllifolius dapat menghambat
78% garis sel kanker payudara MCF-7 [17]. Selain itu, sindrom metabolik, seperti penambahan berat badan,
penumpukan jaringan adiposa perut, dan tekanan darah, dapat dikurangi setelah pengobatan dengan ekstrak
daun P. amaryllifolius [18].
Pandan spp. adalah tanaman toleran kekeringan sedang [19]. Misalnya, P. tectorius dapat bertahan hidup
pada kondisi kekeringan selama lebih dari 6 bulan, sedangkan P. odaritissimus dapat bertahan hidup pada daerah
dengan curah hujan kurang dari 2000 mm setiap tahunnya [20]. Namun, tidak ada cukup informasi mengenai
sejauh mana toleransi P. amaryllifolius terhadap kekeringan meskipun mempunyai nilai obat. Memahami strategi
tanaman untuk beradaptasi dan bertahan hidup di bawah tekanan kekeringan dapat menyempurnakan pemahaman
kita tentang respons terhadap stres kekeringan pada tanaman dan membantu mengembangkan tanaman yang
toleran terhadap kekeringan. Dalam penelitian ini, kami menguji morfologi pertumbuhan, aktivitas enzimatik
antioksidan, dan perubahan protein antara tanaman P. amaryllifolius yang mengalami cekaman kekeringan,
pengairan baik, dan pemulihan air.
2. Hasil
2.1. Perubahan Morfologi Pandanus amaryllifolius yang Tertekan Kekeringan
Percobaan awal kami yang memaparkan tanaman Pandan pada kondisi cekaman kekeringan hingga
satu bulan menunjukkan bahwa tanaman tersebut tidak dapat bertahan hidup setelah 14 hari (data tidak
ditampilkan). Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami menentukan respons tanaman Pandan pada awal
hingga pertengahan kekeringan. Pada tataran morfologi, diketahui perubahan respon tanaman Pandan
terhadap cekaman kekeringan pada beberapa interval waktu (Gambar 1A). Persentase kandungan air
relatif daun (LRWC) untuk sampel yang mengalami cekaman kekeringan berkurang secara signifikan
setelah 4 hari perlakuan kekeringan, sedangkan persentase kebocoran elektrolit relatif (REL) untuk sampel
yang mengalami cekaman kekeringan meningkat secara signifikan setelah 10 hari perlakuan kekeringan
( Gambar 1B,C). Bobot segar dan kering tunas dan akar pada tanaman yang diairi dengan baik umumnya
lebih tinggi dibandingkan pada tanaman Pandan yang mengalami cekaman kekeringan (Gambar 1D–G).
Yang mengejutkan, berat kering akar tanaman yang mengalami cekaman kekeringan selama 7 hari ternyata jauh leb
Tanaman 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER 3 dari 23
Tanaman 2022, 11, 221 3 dari 21

tunas dan akar pada tanaman yang diairi dengan baik umumnya lebih tinggi dibandingkan Pan-danus yang mengalami
cekaman kekeringan (Gambar 1D–G). Yang mengejutkan, berat kering akar tanaman yang mengalami cekaman kekeringan
selama 7 hari secara signifikan lebih tinggi dibandingkan tanaman yang diairi dengan baik (Gambar 1G). Begitu pula
dengan
rasio akartanaman
terhadapyang diairi
pucuk padadengan baik
sampel (Gambarkekeringan
cekaman 1G). Demikian
7 haripula,
lebihrasio
tinggiakar terhadap pucuk
dibandingkan pada
sampel kekeringan
cekaman yang 7diairi
hari,
dengan baik,
tanaman lebih1H).
(Gambar tinggi dibandingkan
Namun, dengan
kandungan tanaman
klorofil yang
a, klorofil b, diairi
total dengan baikca-klorofil
klorofil dan (Gambarb, 1Htotal
). Namun, klorofil
klorofil dan a,
karotenoid
pada sampel
kandungan cekaman
rotenoid kekeringan
pada adalah
sampel yang sama. cekaman kekeringan berkurang secara signifikan dibandingkan dengan
mengalami
penurunan
tanaman yang signifikan
yang disiram dibandingkan
dengan baik dengan
(Gambar 2A–D). Setelah tanaman yang diairiulang,
dilakukan penyiraman dengan
hanyabaik (Gambar
tanaman 2A–D).
Pan yang Setelah
mengalami disiram
cekaman ulang,
kekeringan
selama 7 hari
tanaman dan tanaman
danus Pandan
dapat pulih yang mengalami
kembali (Gambarcekaman kekeringan
3A). Oleh karenaselama 7 hari
itu, hari kesaja yang mampu
7 perlakuan pulih (Gambar
kekeringan 3A). Oleh
adalah harikarena
ke 7 itu, hari
perlakuan kekeringan yang dipilih
dipilih untuk percobaan berikutnya. untuk percobaan selanjutnya.
Gambar 1. Respons Pandanus amaryllifolius yang mengalami cekaman kekeringan dan pengairan baik. P.amaryllifolius
Gambar 1. Respons Pandanus amaryllifolius yang mengalami cekaman kekeringan dan pengairan baik. P.amaryllifolius
tanaman mengalamicekaman
tanaman mengalami cekamankekeringan
kekeringandengan
denganmenahan
menahanair
airselama
selama4,
4,7,
7,10,
10,dan
dan14
14hari.
hari.P.
Disiram denganyang
amaryllifolius baik disiram
dengan
P. baik digunakan
amaryllifolius bertugassebagai
sebagaikontrol.
kontrol.(A)
(A)Foto
Fototanaman
tanamanpandan
pandandiambil
diambilpada
padajam
hari4,ke
7,4, 7, 10, 10, dan 14. (B)
Persentase
dan LRWC
14 hari. (B) daun P. LRWC
Persentase amaryllifolius
daun P. pada titik waktupada
amaryllifolius yangtitik
berbeda.
waktu yang berbeda. (C) Persentase REL tiap sampel
pada titik panen berbeda.
(C) Persentase (D) Tembak
REL tiap sampel padaPandan yang
titik panen masih segar.
berbeda. (D) Tembak berat segar
(E)
Pandan. (F) Tembak berat kering Pandan. (G) Berat segar akar(G) Berat segar akar Pan-Pandanus. (E) Berat segar akar
Berat segar akar Pandan. (F) Tembak berat kering Pandan.
danus. (H)(H)
Pandan. Rasio akar
Rasio terhadap
akar pucuk
terhadap pucukberat kering
berat Pandan.
kering Artinya
Pandan. yang
Berarti diberi
diberi tanda
label asterisk
asterisk tadi merupakan arti dari
berbeda nyata berdasarkan uji-t Student ketika p-value < 0,01. berbeda nyata
berdasarkan uji-t Student ketika p-value < 0,01.

Tanaman 2022, 11, 221 4 dari 21
Gambar 2. Kandungan pigmen pada sampel daun Pandanus amaryl yang diairi baik dan cekaman kekeringan-Gambar 2. Kandungan
pigmen pada sampel daun Pandanus amaryl yang diairi baik dan cekaman kekeringan-Gambar 2. Kandungan pigmen pada
sampel daun(A)
Konsentrasi yang diairia dengan
klorofil (U mgÿ1baik
DW),dan
(B)Pandanus
klorofil b amaryl-folius yang mengalami cekaman kekeringan pada waktu berbeda.
lifolius pada titik waktu yang berbeda. Konsentrasi (A) klorofil a (U mgÿ1 DW), (B) klorofil lifolius pada titik waktu yang berbeda.
Konsentrasi (A) klorofil a (U mgÿ1 DW), (B) klorofil (U mgÿ1 DW), (C) klorofil total (U mgÿ1 DW), dan (D) karotenoid (U mgÿ 1
b (UDW).
mgÿ1Berarti
DW), diberi label total (U mgÿ1 DW), dan (D) karotenoid (U mgÿ1 DW). Berarti berlabel b (U mgÿ1 DW), (C) klorofil
(C) klorofil
total (U mgÿ1 DW), dan (D) karotenoid (U mgÿ1 DW). Rerata yang bertanda asterisk (*) berbeda nyata berdasarkan uji-t
Student ketika nilai p < 0,01. dengan tanda bintang (*) berbeda nyata berdasarkan uji-t Student ketika p-value < 0,01.
dengan tanda bintang (*) berbeda nyata berdasarkan uji-t Student ketika p-value < 0,01.
Gambar 3. Perbandingan Pandanus amaryllifolius yang banyak airnya, yang tahan kekeringan, dan yang banyak mendapat air kembali
Gambar 3. Perbandingan tanaman Pandanus amarylli yang memiliki pengairan baik, cekaman kekeringan, dan pemulihan
air. Gambar 3. Perbandingan tanaman Pandanus amarylli yang memiliki pengairan baik, cekaman kekeringan, dan pemulihan
air. (A)berdaun.
tanaman Tanaman (A)pandan mengalami
Tanaman cekaman
pandan diberi kekeringan
cekaman dengan
kekeringan menahan
dengan caraair selama air
menahan 7 hari, sedangkan
selama 7 hari, tanaman folius.
(A) Tanaman pandan diberi cekaman kekeringan dengan cara menahan air selama 7 hari, tanaman yang mendapat air kembali
sedangkan
disiram tanaman
setelah yang memperoleh
perlakuan airselama
kekeringan kembali
7 disiram
hari dansetelah
disiramperlakuan
kembali kekeringan
selama 7 7 hari dan disiram kembali sedangkan
hari.
tanaman yang memperoleh air kembali disiram setelah perlakuan kekeringan 7 hari dan disiram kembali. P. amaryllifolius
yang disiram dengan baik berfungsi sebagai kontrol. Garis batang menunjukkan skala tanaman = 10 cm.
(B) Persentase kadar air relatif daun P. amaryllifolius. (C) Persentase
kebocoran elektrolit relatif untuk setiap sampel. (D) Massa tunas P. amaryllifolius. (E) Massa akar
P.amaryllifolius. (F) Rasio massa akar-tunas P. amaryllifolius. Berarti diberi label dengan alfabet adalah
berbeda nyata berdasarkan ANOVA diikuti post hoc ketika p-value < 0,05.
selama 7 hari. P. amaryllifolius yang disiram dengan baik berfungsi sebagai kontrol. Garis batang menunjukkan skala tanaman
= 10 cm. (B) Persentase kadar air relatif daun P. amaryllifolius. (C) Persentase kebocoran elektrolit relatif untuk setiap sampel.
(D) Massa tunas P. amaryllifolius. (E)
Massa akar P. amaryllifolius. (F) Rasio massa akar-tunas P. amaryllifolius. Rerata yang diberi label alfabet berbeda nyata
berdasarkan ANOVA diikuti post hoc ketika nilai p < 0,05.
Tanaman 2022, 11, 221 5 dari 21
Untuk memahami mekanisme tanaman Pandan yang responsif terhadap kekeringan, serangkaian percobaan baru yang
Untuk memahami
terdiri dari tanaman yang diberimekanisme tanaman
air baik, tanaman Pandan
yang yang responsif
mengalami cekaman terhadap kekeringan,
kekeringan serangkaian
selama 7 hari, penelitian
serta tanaman baru
yang
mengalami cekaman
Percobaan kekeringan
yang terdiri selama
dari tanaman 7 hari
yang diairidan tanaman
dengan yang disiram
baik, tanaman kembali dilakukan
yang mengalami sejak sampel
cekaman kekeringan 7 hari,tanaman yangyang
serta tanaman
mengalami cekaman
mengalami kekeringan
cekaman selama
kekeringan 10 hari.
7 hari dan tidak
tanaman dapat
yang pulih
disiram setelah
ulang disiram
dilakukan ulang.
sejak Sampel-sampel
sampel yang mengalamiini juga menjadi
cekaman kekeringan 10 hari diambil.
tidak
sasaran dapatmorfologi,
analisis pulih setelah disiram
biokimia, ulang.
dan Sampel-sampel ini juga mengalami morfologi,
proteomik.
analisis
LRWC biokimia, dan proteomik.
pada tanaman Pandan menurun seiring dengan menurunnya kadar air tanah LRWC pada tanaman Pandan
menurun
(Gambar 3 dan seiring
S1). Secara dengan
khusus, menurunnya
tanaman kadar
Pandan yang air tanahcekaman kekeringan menunjukkan tingkat pengembalian sebesar
mengalami
20% (Gambar
dibandingkan 3 dan
dengan S1). Secara
tanaman yangkhusus, tanaman
diairi dengan Pandan
baik tetapiyang mengalami
mencatat LRWC cekaman kekeringan menunjukkan
yang sebanding peningkatan
dengan pengurangan airsebesar 20%
sumur
memiliki dibandingkan
cukup dengan tanaman
air setelah penyiraman ulang yang diairi3B).
(Gambar dengan
RELbaik tetapi
sampel mencatat
yang LRWC
mengalami yang sebanding
cekaman dengan
kekeringan tanaman
adalah yang
tanaman
yang disiram
lebih tinggi setelah
dari tanaman disiram
yang diairiulang (Gambar
dengan 3B).
baik dan REL(Gambar
pulih sampel 3C).
yangKekeringan
mengalami yang
cekaman kekeringan
terjadi adalah
lebih tinggi dibandingkan
tanaman yang mendapat air baik dan pulih kembali (Gambar 3C). Kekeringan yang terjadi
stres tidak mempengaruhi massa tunas dan akar (Gambar 3D,E). Namun tekanan akar tidak mempengaruhi massa tunas
tinggi dan akar (Gambar
dibandingkan 3D,E).
dengan Namun,lain.
perlakuan rasio akarpucuk
Rasio terhadap
padatunas padayang
Pandan Pandan yang mengalami
mengalami cekaman kekeringan
cekaman kekeringan jauh lebih jauh
tinggilebih
dibandingkan dengan perlakuan lain.
manajemen (Gambar 3F). Kandungan pigmen sampel daun pada Pandan yang mengalami cekaman kekeringan (Gambar
3F).menurun
tanaman Kandungan pigmen
secara sampel
signifikan daun pada
(Gambar 4A –tanaman
D). PerluPandan yangbahwa
disebutkan mengalami cekaman
klo-daun kekeringan
menurun secara signifikan (Gambar
4A – D). Perlu disebutkan bahwa klorofil daun
kandungan rofil dan karotenoid pada tanaman yang pulih sama dengan tanaman yang mengalami kekeringan dan kandungan
karotenoid pada tanaman yang pulih sama dengan tanaman yang mengalami cekaman kekeringan,
tanaman mengalami stres, yang mungkin disebabkan oleh waktu pemulihan yang tidak mencukupi (Gambar 4A–D).
yang mungkin disebabkan oleh waktu pemulihan yang tidak mencukupi (Gambar 4A–D).
Gambar 4. Kandungan pigmen pada sampel daun Pandan yang diairi dengan baik, mengalami cekaman kekeringan, dan pulih kembali
Gambar 4. Kandungan
kekeringan, pigmen
dan pulih. sampel daun
Konsentrasi untuk Panda-amaryllifolius
(A) klorofil a (U mgÿ1 DW), (B) yang diairi
klorofil b (Udengan baik, mengalami cekaman
mgÿ1 DW),
nus amaryllifolius. Konsentrasi (A) klorofil a (U mgÿ1 DW), (B) klorofil b (U mgÿ1
(C) klorofil total (U mgÿ1 DW), dan (D) karotenoid (U mgÿ1 DW). Berarti diberi label dengan alfabet
DW), (C) klorofil total (U mgÿ1 DW), dan (D) karotenoid (U mgÿ1 DW). Rerata yang diberi label berbeda secara signifikan
berdasarkan ANOVA diikuti post hoc ketika nilai p < 0,05.
alfabet berbeda secara signifikan berdasarkan ANOVA diikuti post hoc ketika p-value < 0,05.
Daun Pandan tampak sedikit layu dan terjepit setelah 7 hari mengalami kekeringan
pengobatan tetapi pulih setelah disiram kembali. Namun, ada efek kecoklatan yang teramati
Daun Pandan menunjukkan sedikit layu dan terjepit setelah 7 hari kekeringan pada ujung daun dewasa (Gambar S2A).
Piksel pigmen warna daun kuning-hijau
pengobatan tetapi pulih setelah disiram kembali. Namun, terdapat persentase efek kecoklatan yang teramati pada tanaman
yang mengalami cekaman kekeringan dan tanaman yang pulih sedikit lebih tinggi dibandingkan tanaman yang diairi dengan baik
tanaman (Gambar S2B).
2.2. Perubahan Kandungan Prolin dan Malondialdehid pada Tanaman Pandan pada Cekaman Kekeringan
Prolin, sebagai osmoprotektan, terlibat dalam melindungi tanaman dari bahaya

dampak yang disebabkan oleh tekanan lingkungan. Malondialdehid (MDA), yang dihasilkan dari
pemecahan asam lemak tak jenuh ganda, merupakan produk peroksidasi lipid membran.
Baik prolin dan MDA berfungsi sebagai indikator toleransi stres. Dalam penelitian ini, prolin
kandungan tanaman Pandan yang mengalami cekaman kekeringan (1,6 µM gÿ1 FW) secara signifikan lebih tinggi
dibandingkan tanaman yang disiram dengan baik (1,3 µM gÿ1 FW) dan tanaman pulih (0,8 µM gÿ1 FW) (Gambar 5A).
Menekankan
Prolin, sebagai osmoprotektan, terlibat dalam melindungi tanaman dari efek berbahaya yang disebabkan oleh tekanan
lingkungan. Malondialdehyde (MDA), yang dihasilkan dari pemecahan asam lemak tak jenuh ganda, adalah produk peroksidasi
lipid membran.
Tanaman 2022, 11, 221 6 dari 21
Baik prolin dan MDA berfungsi sebagai indikator toleransi stres. Dalam penelitian ini, kandungan prolin tanaman Pandan yang
mengalami cekaman kekeringan (1,6 ÿM gÿ1 FW) secara signifikan lebih tinggi dibandingkan tanaman yang diairi dengan baik
(1,3 ÿM gÿ1 FW) dan tanaman pulih (0,8 ÿM gÿ1 FW) (Gambar 5A).
Demikian pula
kandungan MDAkandungan
tanamanMDA tanaman
Pandan Pandan yang
yang cekaman mengalami
kekeringan cekaman
paling tinggi. kekeringan paling tinggi (9,2) Demikian pula
nM gÿ1
(9,2 nMFW)
gÿ1(Gambar 5B). Sampel
FW) (Gambar yang disiram
5B). Sampel dengan
yang diairi baikbaik
dengan dandan
diperoleh
diambilkembali
kembalimencatat
mencatatkandungan MDA MDA yang
hal yang sama
konten (7,7 nM
sama (7,7 nM gÿ1
gÿ1 FW).
FW).
Gambar 5. Perubahan
kekeringan osmolit
dan banyak dan peroksidasi
air. Gambar lipid peroksidasi
5. Perubahan pada tanaman Pan-danus
osmolit amaryllifolius
dan lipid pada tanamanyang mengalami
Pan-danus cekaman yang
amaryllifolius
mengalami
segar danuscekaman kekeringan
amaryllifolius. dan banyakprolin
(A) Kandungan air. (A) Kandungan
daun prolin daun
P. amaryllifolius yangP.diukur
amaryllifolius
dalam µM yang
gÿ1diukur dalam ÿM gÿ1 berat
berat segar
(FW).
(FW).(B)
(B)Kandungan
KandunganMalondialdehyde
Malondialdehyde(MDA)
(MDA)daun
daunP.P.amaryllifolius
amaryllifoliusyang
yangdiukur
diukurdalam
dalamÿM µMgÿ1gÿ1FW.
FW.
Rerata yang diberi label alfabet berbeda nyata berdasarkan ANOVA diikuti post Hoc. Rata-rata yang diberi label alfabet berbeda
nyata berdasarkan ANOVA diikuti post hoc
hoc ketika nilai p-nya < 0,05. ketika
nilai p-nya <0,05.
2.3. Perubahan
Perubahan Enzim
Enzim Antioksidan
Antioksidan pada
pada Tanaman
Tanaman Pandan
Pandan Sebagai
sebagai Respon
Respon Terhadap
terhadap StresStres Kekeringan 2.3.
Kekeringan
Stres
aktivitas
kekeringan
enzim antioksidan.
umumnya meningkatkan
Hidrogen peroksida
aktivitas
(H2O2)
enzimtertinggi
antioksidan.
(30,0Stres
µM mntÿ1
kekeringan
g tertinggi umumnya meningkatkan
ÿ1
hidrogen peroksida (H2O2) (30,0 ÿM minÿ1 gÿ1) dan superoksida dismutase )(SOD)
dan superoksida
(462,1 gÿ1 dismutase (SOD)
(462,1 gÿ1
Tingkat FW)FW) tercatat
dicatat pada pada tanaman
tanaman yang yang memperoleh
memperoleh air (Gambar
air (Gambar 6A,B).
6A,B). Katalase
Katalase (CAT) dan (CAT) dan peroksidase (POD)
untuk
Tanaman 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER baik tanaman
dan yang
yang pulih diairi denganaktivitas
menunjukkan baik dan yang
yang pulih
jauh menunjukkan
lebih sig-peroksidase
tinggi secara (POD) untuk
signifikan dibandingkan tanaman
tanaman yang
yang diairi dengan
7 dari
mengalami 23
cekaman
aktivitas kekeringan
yang (Gambar
lebih tinggi 6C ,D). Paling
dibandingkan tanamanatas
yang mengalami cekaman kekeringan (Gambar 6C,D). Aktivitas aktivitas
ÿ1
askorbatperoksidase
askorbat peroksidase(APX)
(APX)(10,4
tertinggi (10,4 gÿ1)
M minÿ1 M minÿ1 g
dan glutathione ) dan M
reduktase (GR) (126,0 glutathione
(126,0 M reduktase
minÿ1 g (GR)
ÿ1
) ditemukan
minÿ1 gÿ1) ditemukan pada sampel yang pada sampelcekaman
mengalami yang mengalami cekaman
kekeringan kekeringan
(Gambar 6E,F). (Gambar 6E,F).
Gambar 6. Aktivitas (A) hidrogen peroksida (H2O2 ) dan enzim antioksidan, (B) superoksida
Gambar 6. Aktivitas (A) hidrogen peroksida (H2O2) dan enzim antioksidan, (B) superoksida dis-dismutase (SOD), (C) katalase
(CAT), (D) peroksidase (POD), (E) askorbat peroksidase ( APX), dan
mutase (SOD), (C) katalase (CAT), (D) peroksidase (POD), (E) askorbat peroksidase (APX), dan (F)
(F) glutathione reduktase (GR) pada daun Pandanus amaryllifolius sebagai respon terhadap cekaman kekeringan dan
glutathione reduktase (GR) pada daun Pandanus amaryllifolius sebagai respon terhadap cekaman kekeringan dan pemulihan
air. Absorbansi
pemulihan. diukur
Absorbansi melalui
diukur spektrofotometer.
melalui Akumulasi
spektrofotometer. H2O2
Akumulasi adalah
H2O2 ditunjukkan dalam µM minÿ1 g
ÿ1
berat segar
ÿM minÿ1 gÿ1 berat segar (FW), sedangkan SOD(FW), sedangkan
ditampilkan SOD
sebagai U ditampilkan sebagai Upewarnaan
gÿ1 FW berdasarkan gÿ1 FW berdasarkan NBT
NBT, pewarnaan
ÿ1 FW. Berarti diberi label
dan penghambatan.
inhibisi. CAT, POD, APX,CAT,
dan POD, APX, dan dalam
GR ditampilkan GR ditunjukkan dalam
M minÿ1 gÿ1 M Rerata
FW. minÿ1 gyang diberi label alfabet berbeda nyata
berdasarkan ANOVA diikuti post hoc ketika nilai p < 0,05. dengan abjad berbeda nyata berdasarkan ANOVA diikuti post
hoc bilamana
nilai p <0,05.
2.4. Perubahan Protein pada Tanaman Pandan yang Tersiram Air, Tertekan Kekeringan, dan Sembuh
Untuk mengidentifikasi perubahan protein tanaman Pandan di bawah cekaman kekeringan, total protein dari tanaman
yang diairi dengan baik, tanaman yang mengalami kekeringan, dan tanaman yang pulih dari air diekstraksi untuk analisis nano-
LC-MS/MS. Dari 1415 protein yang teridentifikasi, 74 protein ditemukan signifikan
Tanaman 2022, 11, 221 7 dari 21
2.4. Perubahan Protein pada Tanaman Pandan yang Tersiram Air, Tertekan Kekeringan, dan Sembuh
Untuk mengidentifikasi perubahan protein tanaman Pandan di bawah cekaman kekeringan, protein
total dari tanaman yang diairi dengan baik, tanaman yang mengalami kekeringan, dan tanaman yang pulih
dari air diekstraksi untuk analisis nano LC-MS/MS. Dari 1415 protein yang teridentifikasi, 74 protein
ditemukan mengalami perubahan signifikan (Tabel 3). Protein-protein ini divisualisasikan dengan pengelompokan hiera
(Gambar S3A dan S4) dan dikelompokkan menjadi empat kelompok berdasarkan ekspresi rasio log
antar perawatan (Gambar S3B). Cluster 1 menunjukkan bahwa 12 protein di dalam sumur diairi
jumlah sampel berkurang ketika terkena cekaman kekeringan (Gambar S3B). Di dalam
Sebaliknya, cluster 4 menunjukkan bahwa sembilan protein dalam sampel yang diperoleh meningkat
kelimpahannya jika dibandingkan dengan sampel yang mengalami cekaman kekeringan (Gambar S3B).
Tabel 1. Daftar profil protein yang mengalami banyak perubahan antara pengairan baik, cekaman kekeringan, dan
memulihkan Pandanus amaryllifolius.
Pencapaian Protein Proses Biologis Fungsi Gugus a

F1SWA0 Sintase Zerumbone Sintesis protein Oksidoreduktase 1
P49043 Enzim pemroses vakuolar Endopeptidase tipe sistein Hidrolase 1
P48711 Ribulosa bifosfat karboksilase 1
Fotorespirasi pengikatan ion magnesium
rantai besar
protein ribosom 50S L27, 1
Q9FLN4 Ribonukleoprotein pengikatan mRNA
kloroplastik
A0A357 protein ribosom 30S S18, 1
Ribonukleoprotein pengikatan rRNA
kloroplastik
A1E9N5 protein ribosom 30S S7, 1
Ribonukleoprotein pengikatan rRNA
kloroplastik
O23760 Asam caffeic 3-O-metiltransferase Biosintesis lignin Metiltransferase 1
protein ribosom 30S S15, Konstituen struktural dari
B2LMP1 Ribonukleoprotein 1
kloroplastik ribosom
A2WXD9 Fotosistem II 22 kDa protein 1, Non-fotokimia 1
Fotosintesis
kloroplastik pendinginan
Fotosistem II protein 22 kDa, Non-fotokimia 1
Q9XF91 Fotosintesis
kloroplastik memadamkan
protein ribosom 30S S4, 1
Q32RY4 Ribonukleoprotein ikatan rRNA
kloroplastik
O24461 Protein terkait ras Rab7 Transportasi protein aktivitas GTPase 1
O22925 Reseptor penyortiran vakuolar 2 Transportasi protein pengikatan ion kalsium 2
Alanin-glioksilat
Q940M2 aminotransferase 2 homolog 1, Fotorespirasi aminotransferase 2
mitokondria
Q9LUI2 Protein JARINGAN 1A Sitoskeleton Protein pengikat aktin 2
P43644 Homolog protein DnaJ ANJ1 Respon stress pendamping 2
Hlm11143 Kejutan panas protein 70 kDa Respon stress pendamping 2
A4QLY6 Fotosistem I pusat besi-belerang Fotosintesis (ET) Oksidoreduktase 2
Q05737 Protein pengikat GTP YPTM2 Transportasi protein aktivitas GTPase 2
Q04960 Homolog protein DNAJ Respon stress pendamping 2
Q9XIM0 Protein pengikat CCG 1 Respon seluler terhadap hipoksia Pengikatan kompleks mediator 3
P81370 Protein mirip Thaumatin Pertahanan tanaman Patogenesis 3
Dinding sel
Q6DBP4 Pektin asetilesterase 8 Biogenesis/ 3
degradasi hidrolase
Q9FLC0 Peroksidase 52 Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 3
Q96520 Peroksidase 12 Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 3
P48980 Beta-galaktosidase Metabolisme karbohidrat Glikosidase 3
reduktase protoklorofilida, Oksidoreduktase 3
Q01289 Biosintesis klorofil
kloroplastik
P26792 Beta-fruktofuranosidase, tidak larut 3
Metabolisme karbohidrat Glikosidase
isoenzim 1
RNA yang bergantung pada ATP kotak MATI 3
Q0DM51 Biogenesis ribosom Hidrolase
helikase 3, kloroplastik
F6H7K5 Tiamin tiazol sintase 2, Transferase 3
Biosintesis tiamin
sintase 3-
Q9LN49 ketoasil-KoA kloroplastik 4 Asiltransferase Biosintesis asam lemak 3
Tanaman 2022, 11, 221 8 dari 21
Tabel 2. Lanjutan.
Fosfo-2-dehidro-3-
Q75LR2 deoksiheptonat aldolase 1, Biosintesis asam amino Transferase 3
kloroplastik
O82627 Sintase pati terikat butiran 1, 3
Biosintesis pati Glikosiltransferase
kloroplastik/amiloplastik
Q8W0A1 Beta-galaktosidase 2 Metabolisme karbohidrat Glikosidase 3
O23787 Sintase tiamin tiazol, Transferase 3
Biosintesis tiamin
kloroplastik
Q9ZQ94 UDP-glikosiltransferase 73C5 Metabolisme Brassinosteroid Glikosiltransferase 3
Dinding sel
O80731 Pektin asetilesterase 3 3- Hidrolase 3
biogenesis/degradasi
Q9C992 ketoasil-KoA sintase 7 Asiltransferase Biosintesis asam lemak 3
O22436 Subunit magnesium-kelatase ChlI, 3
Biosintesis klorofil Ligase
kloroplastik
Gamma aminobutirat aminotransferase 3
Q84P54 Biosintesis biotin
transaminase 1, mitokondria
Beta-xylosidase/alpha-L-
A5JTQ2 arabinofuranosidase 1 Metabolisme karbohidrat Glikosidase 3
(Pecahan)
protoklorofilida reduktase B, Oksidoreduktase 3
kloroplastik
Q9SD46 Peroksidase 36 Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 3
O04931 Alfa-glukosidase 29 Pemrosesan mRNA Glikosidase 3
kDa ribonukleoprotein B, 3
Q08937 metabolisme karbohidrat Ribonukleoprotein
kloroplastik
Q5ZE07 Homolog multitembaga oksidase LPR1 Oksidoreduktase 3
2 Homeostatis fosfat
A4S6Y4 Homolog protease lon, Stres oksidatif 3

mitokondria pengikatan DNA
Glutamat-1-semialdehida Isomerase 3
2,1-aminomutase, kloroplastik
Piruvat kinase plastidial 1, Kinase 3
Q9LIK0 Gugus besi-
kloroplastik
faktor perakitan cluster Fe-S HCF101, belerang glikolisis 3
Q6STH5 Pengikatan cluster 4Fe-4S
kloroplastik perakitan
Protein pendamping ClpB3, 3
Q0E3C8 mitokondria Respon stress pendamping
Q94LW3 Protein homeobox diikat-1 seperti 3 Biosintesis lendir pengikatan DNA 3
Fenilpropanoid 3
Q42600 Sitokrom P450 84A1 Monooksigenase
biosintesis
Beta-fruktofuranosidase, tidak larut 3
Q56UD0 Metabolisme karbohidrat Glikosidase
isoenzim 6
Q8L7S6 Beta-heksosaminidase 3 Metabolisme karbohidrat Glikosidase 3
Q39613 Peptidil-prolil cis-trans isomerase Lipatan protein pendamping 3
Ribonukleosida-difosfat Oksidoreduktase 3
Q9SJ20 Replikasi DNA
reduktase subunit besar
Protein pendamping ClpB2, 3
Q75GT3 Respon stress pendamping
kloroplastik
Protein pengikat RNA CP29B, 3
Q9ZUU4 pemrosesan mRNA Ribonukleoprotein
kloroplastik
Magnesium-protoporfirin IX
Q9M591 monometil ester [oksidatif] Biosintesis klorofil Oksidoreduktase 3
siklase, kloroplastik
Geranilgeranil difosfat Oksidoreduktase 3
Q9CA67 Biosintesis klorofil
reduktase, kloroplastik
P50246 Adenosilhomosisteinase Metabolisme satu karbon Hidrolase 3
Respon yang disebabkan oleh hipersensitif Saluran ion kalium
Q6ZIV7 Pengikatan histidin kinase 3
protein 1 peraturan
Q9SI75 Faktor pemanjangan G, kloroplastik 4- Biosintesis protein Faktor pemanjangan 3
P24846 hidroksi-tetrahidrodipikolinat 3
Biosintesis asam amino Enzim alosterik
sintase 1, kloroplastik
Tanaman 2022, 11, 221 9 dari 21
Tabel 3. Lanjutan.
Protein penambah oksigen yang berevolusi 4

Q41932 Fotosintesis (ET) pengikatan ion kalsium
3-2, kloroplastik
P25795 Keluarga aldehid dehidrogenase 7 Oksidoreduktase 4
anggota A1 Respon stress
Q9AXH0 Katalase Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 4
O65660 Protein yang mengandung domain PLAT 1 Respon stress Katalase 4
A2YH64 Isozim katalase B Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 4
Q0E4K1 Isozim katalase A Hidrogen peroksida Oksidoreduktase 4
O04932 Kemungkinan sukrosa-fosfat 4
Glikosiltransferase Biosintesis sukrosa
sintase 1 3-
ketoasil-KoA tiolase 5, 4
Q570C8 Asiltransferase Biosintesis asam lemak
peroksisomal
Q9SG80 Alfa-L-arabinofuranosidase 1 Metabolisme L-arabinosa Hidrolase a 4
Cluster 1–4 menunjukkan akumulasi diferensial dari protein yang berubah secara berbeda (ekspresi rasio log) antara
perawatan (Gambar S3B). Cluster 1 mewakili penurunan kelimpahan protein dari sampel yang diairi dengan baik ke sampel yang
mengalami stres kekeringan dan pemulihan. Klaster 2 menunjukkan pola kelimpahan protein yang meningkat pada kelompok yang diairi
menjadi sampel yang mengalami stres kekeringan, namun menurun dari sampel yang mengalami stres kekeringan menjadi sampel pemulihan. Cluster 3 mewakili penurunan
Kelimpahan protein jika dibandingkan dengan daerah yang mengalami cekaman kekeringan dan yang mengalami cekaman kekeringan, namun jumlahnya meningkat dari yang mengalami cekaman kekeringan hingga yang mengalami cekaman kekeringan
sampel pemulihan. Cluster 4 menunjukkan peningkatan kelimpahan protein dari sampel yang diairi dengan baik hingga sampel yang pulih.
Di antara 74 protein yang diidentifikasi, terdapat protein yang berhubungan dengan karbohidrat dan stres
kelompok protein yang berubah secara berbeda terbesar dalam penelitian ini (Gambar 7A,B). Ini,
39 protein unik ditemukan pada Perbandingan 1 (Kekeringan vs. Air Baik), 40 protein pada 10 dari 23
Tanaman 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER
Perbandingan 2 (Pemulihan vs. Air yang cukup), dan 57 protein dalam Perbandingan 3 (Pemulihan vs.
Kekeringan) (Gambar 8A).
Gambar 7. Peta panas dari kelas protein yang berubah secara berbeda yang diidentifikasi antara yang diairi dengan baik,
mengalami stres kekeringan, dan Pandanus amaryllifolius yang pulih dari air. (A) Protein terkait karbon teridentifikasi
Gambar 7. Peta panas dari kelas protein yang berubah secara berbeda yang diidentifikasi antara pengairan yang
baik, antar perlakuan.
mengalami (B) Protein
stres kekeringan, terkait
dan stres diidentifikasi
Pandanus diyang
amaryllifolius antara perlakuan.
pulih dari air. Skala intensitasprotein terkait karbon
(A) Identifikasi
menunjukkan kisaran(B)
antara perawatan. peningkatan regulasi
Protein terkait stres(ungu) atau penurunan
diidentifikasi di antara regulasi (kuning)
perlakuan. Skala di antara perlakuan.
intensitas menunjukkan kisaran
peningkatan regulasi (ungu) atau penurunan regulasi (kuning) protein antar perlakuan.
nts 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER 11 dari 23

Tanaman 2022, 11, 221 10 dari 21
Kekeringan vs Banyak air Pemulihan vs Penyiraman yang baik
(39) (40)
(A)
(C)
Pemulihan vs Kekeringan
(57)
(B)
24%
4,8%
4,8% 13%
6,5%
6,5% 8%
ÿlog 10 (nilai p uji eksak Fisher)
Gambar 8.fungsional
Gambar 8. Kategorisasi Kategorisasi
dan fungsional dan pengayaan
pengayaan protein protein
yang berubah yang
secara berubah
berbeda secara
antara sampel berbeda-beda
yang diairi dengan baik, kekeringan, dan sampel pemulihan. (A) Diagram Venn mewakili perbandingannya
sampel yang disiram, kekeringan, dan pemulihan. (A) Diagram Venn menunjukkan perbandingan kelimpahan protein
yang berbeda-beda
denganyang
perbedaan
teridentifikasi
kelimpahan
pada daun
protein
tanaman
yang teridentifikasi
Pandan yangpada
diberi
daun
perlakuan
tanaman
cekaman
Pandankekeringan,
yang diberi perlakuan kekeringan
disiram dengan baik,
stres dan pemulihan;
fungsi, (B) Pengayaan
pengairan yang KEGG dari (B)
baik, dan pemulihan; protein yang diubah
Pengayaan KEGG secara berbedaprotein
berdasarkan berdasarkan
yang diubah secara berbeda
kategori nasional;
dan dan (C) pengayaan
(C) pengayaan ontologi
ontologi gen gen berdasarkan
berdasarkan jalurjalur
KEGG KEGG menurut kategori biologis dan fungsional;
menurut
proses, fungsi molekuler,
proses biologis,dan komponen
fungsi seluler.
molekuler, dan komponen seluler.
Untuk mengklasifikasikan fungsi dari

Untuk mengklasifikasikan 74 74
fungsi protein yang
protein yangberubah
berubah secara berbeda,jalur KEGG
secara berbeda,
dilakukan analisis pengayaan jalur KEGG (Gambar 8). Hasilnya menunjukkan
analisis pengayaan dilakukan (Gambar 8). Hasil penelitian menunjukkan bahwabahwa
15 15 berbeda
protein yang diubah
protein yangsecara
diubah berbeda terlibat
terlibat dalam dalam metabolisme
metabolisme karbohidrat
karbohidrat dan dan 8terlibat
8 protein lainnya proteindalam pemrosesan
lainnya terlibat dalam
informasi pemrosesan
genetik dan kofaktor informasi genetik dan
serta metabolisme kofaktor
vitamin serta
(Gambar 8B).metabolisme vitamin
(Gambar 8B). Berdasarkan
Berdasarkan klasifikasi
klasifikasi fungsional
fungsional ontologi
ontologi gen gen (GO),
(GO), sebagian sebagian
besar mengalamibesar proteinyang berbeda
perubahan
yang berubah secara
protein berbeda
terlibat dalam terlibat
proses dalam proses dan
fotosintesis fotosintesis
responsdan respons
stres (Gambar terhadap
8C). stres
(Gambar 8C).
3. Diskusi
3.1. Stres Kekeringan Berpengaruh Terhadap Pertumbuhan dan Aktivitas Enzim Antioksidan Tanaman Pandan
Cekaman kekeringan berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan tanaman Pandan seperti LRWC,
rasio akar-pucuk, biomassa pucuk dan akar, REL, dan kandungan klorofil, menghasilkan
akumulasi ROS yang dapat merusak membran sel. Penurunan kadar air daun
dapat menurunkan tekanan turgor sel dan mempengaruhi kekuatan serta struktur mekanik
tanaman [21]. Hal ini terlihat pada respon morfologi daun pada cekaman kekeringan
Tanaman pandan. Selain itu, persentase REL meningkat secara signifikan pada P. amaryllifolius yang
mengalami kekeringan, menunjukkan bahwa integritas membran sel kemungkinan akan terpengaruh.
Tanaman 2022, 11, 221 11 dari 21
karena stres oksidatif. Sebaliknya, Pandan yang diberi air ulang menunjukkan penurunan REL. Pada tebu,
peningkatan REL sebesar 62% ditemukan pada sampel yang mengalami cekaman kekeringan dibandingkan
dengan kontrol [22] tetapi berkurang setelah penyiraman ulang [23]. Demikian pula, Oraee dan Tefranifar
menemukan bahwa perlakuan kekeringan meningkatkan REL pada tanaman banci, sedangkan REL pada
tanaman banci yang mengalami tekanan kekeringan berkurang [24].
Telah diketahui secara umum bahwa aktivitas fotosintesis tanaman dipengaruhi oleh cekaman kekeringan
[25,26]. Oleh karena itu, tidak mengherankan jika tanaman Pandan yang terkena cekaman kekeringan
menunjukkan penurunan kandungan klorofil dan karotenoid. Karena kloroplas adalah tempat produksi utama
ROS, peningkatan akumulasi ROS dapat merusak mesin fotosintesis. Namun, perlu dicatat bahwa tanaman
yang dipulihkan menunjukkan kandungan klorofil dan karotenoid yang serupa dengan tanaman yang mengalami
stres kekeringan, sehingga menunjukkan bahwa degradasi pigmen terhenti selama periode pemulihan. Namun
demikian, penyiraman ulang yang lebih lama mungkin diperlukan agar tanaman dapat memulihkan unsur
pigmennya.
Konsentrasi klorofil b lebih tinggi dibandingkan klorofil a sehingga memberikan rasio klorofil a:b lebih rendah.
Kemungkinan penyebab fenomena ini bisa disebabkan oleh pemberian intensitas cahaya di ruang pertumbuhan
yang terkendali, di mana tanaman beradaptasi dengan meningkatkan jumlah pigmen klorofil b untuk menangkap
cahaya yang lebih luas [27].
Temuan serupa dilaporkan oleh Yang et al. [28], dimana daun kedelai menghasilkan klorofil a lebih rendah
dibandingkan b pada intensitas cahaya rendah.
Stres kekeringan umumnya menyebabkan akumulasi MDA dan prolin [29]. Hasil kami jelas menunjukkan
bahwa cekaman kekeringan meningkatkan kandungan MDA dan prolin di P. amaryl lifolius. Sebaliknya,
penyiraman ulang mengurangi kandungan MDA dan prolin, yang menunjukkan kapasitas P. amaryllifolius untuk
menjaga integritas membran dan mengembalikan fungsinya. Temuan ini sesuai dengan penelitian sebelumnya,
dimana MDA dan prolin meningkat pada kondisi cekaman kekeringan di berbagai tanaman [30,31]. MDA adalah
indeks cedera oksidatif, dimana produksi MDA berkorelasi dengan kemampuan pemulungan ROS [32]. Prolin
merupakan respons adaptif yang penting terhadap cekaman kekeringan pada tanaman. Ia bertindak sebagai
pemulung ROS, osmoprotektan, penyeimbang redoks, aktivator detoksifikasi, dan sumber nitrogen dan karbon
[33].
ROS, seperti superoksida (O2 •ÿ), radikal bebas (•OH), dan H2O2, dihasilkan dan terakumulasi dalam
tanaman sebagai respons terhadap cekaman kekeringan [34]. Sistem enzim antioksidan melindungi tanaman
dari cekaman abiotik melalui mekanisme pemulungan ROS. Dalam penelitian ini, aktivitas enzim antioksidan
seperti CAT, APX, POD, dan GR pada tanaman yang mengalami cekaman kekeringan umumnya lebih tinggi
dibandingkan pada tanaman yang diairi dengan baik. Aktivitas antioksidan yang lebih tinggi berkontribusi
terhadap rendahnya tingkat H2O2 pada tanaman yang mengalami stres. Meskipun SOD merupakan garis
pertahanan pertama terhadap ROS, aktivitasnya pada tanaman Pandan yang mengalami cekaman kekeringan
sebanding dengan tanaman yang banyak airnya. Hal ini menunjukkan bahwa detoksifikasi ROS yang sebagian
besar terdiri dari H2O2 ditangkap oleh CAT, APX, POD, dan GR. Secara keseluruhan, sistem enzim antioksidan
yang ditingkatkan membantu tanaman Pandan mengatasi akumulasi ROS dalam kondisi kekeringan.
3.2. Kelimpahan Protein Stres dan Pertahanan di Bawah Stres Kekeringan

Tanaman merespon dan beradaptasi terhadap kondisi cekaman kekeringan dengan mengubah sirkuit
regulasi dalam transkripsi dan ekspresi protein, mengatur ulang jalur metabolisme, dan proses fisiologis [16].
Ini adalah studi pertama yang mengetahui perubahan protein sebagai respons terhadap cekaman kekeringan
di Pandan menggunakan pendekatan proteomik berlabel TMT. Protein yang terlibat dalam metabolisme
karbohidrat dan responsif terhadap stres diidentifikasi sebagai kelompok protein terbesar yang mengalami
perubahan berbeda dalam penelitian ini, menunjukkan peran penting mereka dalam respons terhadap kondisi
stres kekeringan.
Dalam penelitian ini, kelimpahan protein kejutan panas 70 (HSP70) dan protein DnaJ ho molog dalam
sampel yang mengalami cekaman kekeringan meningkat dibandingkan dengan perlakuan lain.
HSP adalah molekul pendamping yang melindungi tanaman dengan mempertahankan lipatan yang tepat dan
mencegah agregasi protein [35]. Pelipatan dan disagregasi protein yang tepat sangat penting untuk
kelangsungan hidup sel dalam kondisi stres. Hingga saat ini, beberapa anggota famili gen HSP70 telah
diidentifikasi di berbagai spesies tumbuhan. Dari jumlah tersebut, beberapa anggota HSP70 memilikinya
Tanaman 2022, 11, 221 12 dari 21
dilaporkan terlibat dalam respon stres kekeringan. Misalnya, HSP70 pada kacang tanah meningkat jumlahnya
sebagai respons terhadap kekeringan [36]. Protein homolog DNAJ adalah komponen penting dalam mesin
pendamping dan dapat diinduksi oleh tekanan dingin [37], panas [38], dan kekeringan [39,40]. Penelitian lain
menunjukkan bahwa beberapa HSP, pendamping DnaJ, dan Grp pendamping 60b diubah secara berbeda
dalam kondisi kekeringan [41,42]. Bukti yang muncul menunjukkan bahwa akumulasi HSP berkorelasi
dengan toleransi stres pada tanaman, karena protein ini hanya diinduksi pada perlakuan stres [43]. Studi-
studi ini telah mengungkapkan pentingnya protein mirip HSP70 dan DnaJ dalam memberikan toleransi stres
abiotik pada tanaman.
Protein domain polisistin, lipoksigenase, alfa-toksin, dan triasilgliserol lipase (PLAT) diinduksi oleh
asam absisat dan terlibat dalam respons stres abiotik. Protein ini memediasi jalur pensinyalan asam absisat
setelah berikatan dengan faktor transkripsi bZIP AREB/ABFs. Protein PLAT ditemukan terakumulasi secara
melimpah dalam penelitian ini.
Jumlah PLAT juga meningkat pada quinoa yang mengalami cekaman salinitas (44). Hyun dkk. dalam
menyelidiki fungsi Arabidopsis PLAT, AtPLAT1 dalam tembakau [45]. Para penulis menemukan bahwa
ekspresi AtPLAT1 dalam tembakau mendorong pertumbuhan dan meningkatkan toleransi terhadap stres
terhadap dingin, kekeringan, dan garam. Namun, peran protein PLAT dalam respons terhadap stres
kekeringan masih kurang dan memerlukan eksplorasi lebih lanjut.
3.3. Protein Terkait Membran Sel Meningkat di bawah Stres Kekeringan

Protein pengikat aktin Jaringan (NET) meningkat pada tanaman Pandan yang mengalami cekaman
kekeringan dibandingkan dengan tanaman yang diairi dengan baik, mungkin karena kebutuhan untuk
menjaga integritas sel tanaman. Protein NET berasosiasi dengan kompartemen membran berbeda dalam
sel tumbuhan dan memfasilitasi interaksi membran-aktin [46]. Pada tingkat transkrip, Li et al. menemukan
bahwa gen NET1A pada kapas diinduksi oleh cekaman kekeringan, dan ekspresinya berbeda secara
signifikan antara kontrol dan perlakuan kekeringan [47]. Meskipun peran protein NET dalam respon stres
masih belum jelas, telah dikemukakan bahwa tekanan mekanis, gravitasi, dan osmotik dapat secara langsung
menginduksi akumulasi protein NET [48].
Alpha-L-arabinofuranosidase (ASD) adalah protein dinding sel, yang mengkatalisis hidrolisis ikatan L-
arabinofuranosidic pada hemiselulosa yang mengandung L-arabinose [49]. Pada penelitian ini, protein ASD1
meningkat ketika terkena cekaman kekeringan. Peran ASD dalam stres kekeringan telah ditunjukkan pada
jagung [50] dan pinus maritim [51].
3.4. Kelimpahan Protein Terkait Metabolisme Karbohidrat di Bawah Stres Kekeringan

Protein yang terlibat dalam metabolisme karbohidrat meningkat dalam jumlah besar, kemungkinan
besar disebabkan oleh kebutuhan energi yang disebabkan oleh stres kekeringan. Salah satu protein yang
menonjol dalam kategori ini adalah sukrosa fosfat sintase (SPS). Ketika tanaman mengalami cekaman
kekeringan, SPS mengkatalisis konversi uridin difosfat-glukosa dan fruktosa 6-fosfat menjadi sukrosa. Nemati
dkk. menemukan bahwa SPS berubah secara melimpah setelah terkena cekaman kekeringan pada bibit
gandum [52]. Penelitian lain menunjukkan bahwa pengobatan kekeringan secara nyata meningkatkan
aktivitas SPS [53,54]. Tingginya kelimpahan SPS yang ditunjukkan oleh penelitian lain pada spesies tanaman
yang mengalami cekaman kekeringan mungkin disebabkan oleh kebutuhan sel akan energi ekstra untuk
mengatasi stres.
Hasil keseluruhan menunjukkan bahwa respons daun Pandan terhadap cekaman kekeringan
melibatkan berbagai proses biologis, termasuk peningkatan kelimpahan sebagian besar protein yang terkait
dengan stres dan pertahanan, membran sel, dan metabolisme karbohidrat. Perubahan protein ini dapat
berkontribusi terhadap perubahan morfofisiologis tanaman untuk mentoleransi kondisi kekurangan air.
Temuan kami menunjukkan bahwa, selain protein terhadap stres dan pertahanan, modulasi protein yang
berhubungan dengan membran sel dan metabolisme karbohidrat dapat menjadi strategi yang berharga
untuk mempertahankan proses metabolisme tanaman dalam menanggapi stres kekeringan.
Menjaga stabilitas membran sel dapat membantu tanaman mempertahankan metabolisme fisiologis normal
di bawah tekanan kekeringan. Di sisi lain, peningkatan metabolisme karbohidrat dapat membantu tanaman
yang mengalami kekeringan dalam mempertahankan pertumbuhan normal dengan meningkatkan produksi
energi. Oleh karena itu, protein ini dapat digunakan sebagai penanda protein untuk mengidentifikasi kekeringan
Tanaman 2022, 11, 221 13 dari 21
toleransi pada tanaman dan selanjutnya dapat membantu ahli biologi tanaman dalam memilih gen yang diinginkan
untuk mengembangkan varietas baru yang tahan kekeringan. Kami membayangkan kumpulan data proteomik kami
memberikan landasan untuk penelitian lebih lanjut yang akan memperkuat pemahaman kita tentang bagaimana
tanaman merespons tekanan lingkungan untuk kelangsungan hidup yang lebih baik.
4. Bahan dan Metode 4.1.

Bahan Tanaman dan Perawatan Kekeringan
P. amaryllifolius bebas penyakit berumur tiga bulan yang dibeli dari I Green Nursery Sdn.
Bhd., Muar, Johor, Malaysia, dipindahkan ke polibag (20 × 11 cm2 ) yang berisi 600 g tanah liat
lanau lempung. Tanaman diaklimatisasi di ruang pertumbuhan di Universiti Malaya, Malaysia, dan
dipelihara pada suhu 28 ± 2 ÿC dengan intensitas cahaya 1500 lux dalam siklus fotoperiode 12:12
jam dan kelembaban relatif 80 ± 5% selama 2 minggu. Semua tanaman menerima 20 mL air
sekali sehari dan pupuk daun seminggu sekali sebelum perlakuan. Perlakuan kekeringan dilakukan
dengan menahan air selama 4, 7, 10, dan 14 hari, dan dilakukan penyiraman kembali selama 7
hari setelah perlakuan kekeringan. Tanaman yang disiram dengan baik disiram setiap hari selama
periode percobaan. Berdasarkan hasil morfologi, titik waktu yang tepat kemudian dipilih untuk
analisis biokimia dan proteomik. Kadar air tanah di seluruh pot dipantau setiap hari menggunakan
alat pengukur kelembaban tanah (HH2 Moisture Meter, Delta-T, Cambridge, UK). Percobaan
dilakukan dalam rancangan acak kelompok lengkap dengan 8 ulangan biologis untuk setiap
perlakuan.
4.2. Penentuan Kadar Air Relatif Daun Kadar air

relatif daun (LRWC) diukur menurut Turner [55]. Secara singkat, sampel daun yang dipanen
dibersihkan dengan etanol 70%, dipotong kecil-kecil (2 cm2), dan ditimbang berat segarnya (FW)
sebelum dipindahkan ke cawan petri. Sampel daun direndam dalam 20 mL air suling selama 6
jam pada suhu kamar. Berat jenuh (SW) sampel diukur sebelum dikeringkan dalam oven selama
2 hari.
Sampel kering kemudian diukur berat keringnya (DW). LRWC dihitung menggunakan rumus
berikut:
LRWC (%) = [(FW ÿ DW)/(SW ÿ DW)] × 100 (1)
4.3. Pengukuran Kebocoran Elektrolit Relatif

Kebocoran elektrolit relatif (REL) diukur menurut Quan et al. [56].
Sekitar 100 mg daun direndam dalam 10 mL air deionisasi dan diinkubasi pada suhu kamar
selama 6 jam dalam kondisi pengocokan 150 rpm. Setelah mengukur konduktivitas listrik awal
(Ci ) menggunakan pengukur konduktivitas (Cyberscan CON 11, Eutech Instrument, Thermofisher,
Singapura), sampel daun direbus selama 20 menit dan diukur konduktivitas sel yang dilisiskan
(Cmax). REL dihitung sebagai:
REL (%) = Ci/Cmaks × 100 (2)
4.4. Pengukuran Berat Tanaman

Bobot segar dan kering daun dan akar diukur secara terpisah. Berat segar sampel diukur
segera setelah panen. Sampel kemudian disimpan dalam kantong kertas sebelum dikeringkan
dalam oven selama 7 hari atau sampai tercapai berat konstan untuk diukur berat keringnya. Berat
kering akar dan daun digunakan untuk menghitung rasio akar terhadap pucuk.
4.5. Uji Kolorimetri Otomatis

Warna daun dievaluasi dengan cara memanen 6 ujung daun (panjang 10–12 cm), dilap
dengan etanol 70%, dan disusun pada latar belakang putih. Daun difoto dengan menggunakan
Nikon D5100 (Nikon Corp, Tokyo, Jepang), diproses dengan perangkat lunak Image J [57], dan dianalisis
Tanaman 2022, 11, 221 14 dari 21
dengan uji kolorimetri otomatis [58]. Piksel tersebut dikelompokkan menjadi empat kategori, yaitu hijau,
hijau-kuning, kuning, dan coklat.
4.6. Pengukuran Kandungan Klorofil

Kandungan klorofil ditentukan menurut [59] dengan sedikit modifikasi.
Bubuk daun dimasukkan ke dalam pengering beku semalaman untuk menghilangkan semua kandungan
air dalam sel sebelum pigmen diekstraksi. Sekitar 0,1 g bubuk daun kering beku dicampur dengan 2
mL aseton 80% (v/v) dalam tabung mikrosentrifugasi 2 mL. Campuran diinkubasi dalam gelap selama
20 menit sebelum disentrifugasi pada 10.000× g rpm selama 15 menit. Sekitar 100 µL supernatan
dicampur dengan 900 µL 80% (v/v) aseton. Absorbansi campuran diukur dengan spektrofotometer
pada 470, 647, dan 663 nm. Kandungan klorofil dan karotenoid dihitung berdasarkan rumus di bawah
ini:
Klorofil a, Ca = 12.25A663 ÿ 2.79A647 (3)
Klorofil b, Cb = 21.50A647 ÿ 5.10A663 Total (4)
klorofil, Ca+b = 7.15A663 + 18.71A647 (5)
Total karotenoid, Cx+c = (1000A470 ÿ 1,82Ca ÿ 85,02Cb) 198 (6)
4.7. Penentuan Kandungan Malondialdehid

Kandungan Malondialdehyde (MDA) diukur seperti yang dijelaskan oleh Heath dan Packer [60].
Sampel daun segar (100 mg) dihomogenisasi dalam nitrogen cair, kemudian diekstraksi dengan 1,5
mL 0,1% (b/v) asam trikloroasetat (TCA), dan disentrifugasi pada 13.000× g rpm selama 10 menit pada
suhu 4 ÿC. Sekitar 300 µL supernatan ditambahkan ke dalam 1 mL campuran reaksi yang mengandung
0,5% (v/v) asam tiobarbiturat (TBA) dalam 20% (b/v) TCA. Campuran dipanaskan pada suhu 95 ÿC
selama 30 menit, didinginkan di atas es, dan disentrifugasi pada 10.000× g rpm selama 10 menit.
Supernatan diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 dan 600 nm dan
dihitung dengan rumus sebagai berikut:
MDA = [(A532 ÿ A600) × VTr × 1000]/(Koefisien kepunahan MDA × 1 cm × Ve) g FW (7)
A532 ÿ A600 = Absorbansi MDA-TBA.

VTR = Volume reaksi (mL).
Ve = Volume ekstrak enzim (mL).
Koefisien kepunahan penculikan MDA-TBA pada 532 nm adalah 155 mMÿ1 cmÿ1 .
FW = Berat segar sampel.
4.8. Pengukuran Kandungan Prolin

Kandungan prolin diukur menurut Bates et al. [61] dengan modifikasi. Sekitar 200 mg sampel
daun digiling dengan 2 mL etanol 70% (v/v) dan campuran disentrifugasi pada 13.000× g rpm selama
20 menit. Supernatan ditambahkan ke dalam campuran reaksi yang mengandung 500 ÿL asam asetat
glasial: 500 ÿL reagen asam-ninhidrin yang baru dibuat: 500 ÿL ekstrak sampel atau standar prolin.
Campuran dicampur dan direbus pada suhu 100 ÿC dalam blok pemanas selama 1 jam. Setelah
diletakkan di atas es selama 30 menit, campuran diekstraksi dengan 1 mL toluena. Fase toluena
dikumpulkan dengan hati-hati ke dalam tabung reaksi. Absorbansi fraksi diukur pada 520 nm dengan
toluena sebagai blanko. Kurva standar prolin dibuat pada konsentrasi 1, 5, 10, 25, 50, 100, dan 200
µM. Kandungan prolin dihitung berdasarkan rumus berikut:
Prolin (µMgÿ1 FW) = [(µg prolin/mL × mL toluena) µg 115,5/µmole]/(g FW/5) (8)
4.9. Uji Enzimatik Antioksidan

Sekitar 200 mg sampel daun dicampur dengan 2 mL buffer ekstraksi dingin (100 mM buffer fosfat,
pH 7,0, mengandung 0,1 mM asam disodium ethylenediaminetetraacetic, dan 0,1 g polivinilpirolidon).
Campuran disentrifugasi pada 13.000 × g rpm selama 10 menit
Tanaman 2022, 11, 221 15 dari 21
pada suhu 4 ÿC. Supernatan digunakan untuk uji enzimatik antioksidan berikutnya. Aktivitas enzim
untuk setiap pengujian dihitung menggunakan rumus berikut:
ÿ1
Aktivitas enzim (M minÿ1 g FW) = (ÿA× VTr)/(ÿ × ÿt × 1 cm × Ve × g FW) × 1000 (9)
ÿA = Selisih serapan.
VTR = Volume reaksi (mL).
Ve = Volume ekstrak enzim (mL). ÿt =
Selisih waktu serapan (min).
Untuk CAT, ÿ(Hidrogen peroksida) = 36,0 molÿ1 cmÿ1 .
Untuk APX, ÿ(Asam askorbat) = 2,8 mmolÿ1 cmÿ1 .
Untuk POD, ÿ(Guaiacol) = 26,6 molÿ1 cmÿ1 .
Untuk GR, ÿ(NADPH) = 6220 molÿ1 cmÿ1 .
4.9.1. Superoksida Dismutase

Aktivitas SOD ditentukan menurut Dhindsa et al. [62]. Secara singkat, 3 mL campuran reaksi
yang mengandung 50 mM buffer fosfat (pH 7,0), 9,9 mM L-metionin, 55 µM nitro blue tetrazolium
(NBT), 0,025% (v/v) Triton X-100 (Sharlau, Mahmutbey, Turki) , 100 µL ekstrak enzim, dan 4,8 µM
riboflavin disiapkan dalam tabung reaksi dan ditutup dengan aluminium foil. Riboflavin ditambahkan
terakhir untuk memulai reaksi. Campuran dikocok dan diinkubasi pada suhu 30 ÿC selama 10 menit
di bawah sumber cahaya putih (35 W) yang ditempatkan pada ketinggian 20 cm di atas tabung
reaksi. Campuran diukur pada 560 nm. Blanko dibuat dengan mengganti sampel dengan buffer
ekstraksi. Aktivitas SOD dihitung berdasarkan rumus di bawah ini:
SOD (Satuan gÿ1 FW) = [(Sampel Kosong) A560nm]/(Blank A560nm)] × (Volume reaksi)/(Volume enzim) × 100 ×
(10)
1/50 0,1 g FW
4.9.2. Katalase
Uji CAT dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Aebi (63) dengan modifikasi. Campuran reaksi
3 mL mengandung 50 mM buffer fosfat (pH 7,0), 8,33 mM H2O2 yang baru disiapkan, dan 100 µL
ekstrak enzim. Ekstrak enzim ditambahkan terakhir untuk memulai reaksi. Aktivitas CAT diukur
pada 240 nm.
4.9.3. Askorbat Peroksidase
Aktivitas APX diukur menurut Chen dan Asada [64]. Campuran reaksi 1 mL mengandung 50
mM buffer fosfat (pH 7,0), 200 ÿL ekstrak enzim, 0,5 mM asam askorbat, dan 0,42 mM H2O2. H2O2
ditambahkan terakhir untuk memulai reaksi. Aktivitas APX diukur pada panjang gelombang 290 nm.
4.9.4. Peroksidase
Uji POD dilakukan menurut Maehly dan Chance [65] dengan modifikasi.
Campuran reaksi 1 mL mengandung 100 mM buffer fosfat (pH 7,0), 0,5 mM guaiacol, 0,0833 mM
H2O2, dan 100 µL ekstrak enzim. H2O2 ditambahkan terakhir untuk memulai reaksi.
Aktivitas POD diukur pada panjang gelombang 470 nm.
4.9.5. Glutathione Reduktase
Aktivitas GR ditentukan seperti yang dijelaskan oleh Mannervik [66]. Campuran reaksi 1 mL
mengandung 500 µL buffer uji (0,2 M buffer kalium fosfat, pH 7,0, 0,2 mM EDTA, 50 µL 20 mM
glutathione teroksidasi yang baru disiapkan, 50 µL 2 mM larutan NADPH, dan 300 µL ekstrak enzim)
dan air suling. Penurunan serapan pada 340 nm adalah
dipantau selama 1 menit.
Tanaman 2022, 11, 221 16 dari 21
4.9.6. Hidrogen Peroksida

Tingkat H2O2 dalam sampel daun ditentukan menurut Velikova et al. [67] dengan sedikit
modifikasi. Secara singkat, 100 mg bubuk daun dihomogenisasi dengan 1,5 mL 0,1% (b/v) TCA dalam
penangas es. Setelah sentrifugasi pada 10.000× g rpm selama 15 menit, sekitar 250 ÿL supernatan
dicampur dengan 1 mL campuran reaksi yang mengandung 2,5 mM buffer kalium fosfat, pH 7,0, dan
0,5 M kalium iodida. Konsentrasi H2O2 diukur pada 390 nm dan dihitung menggunakan kurva standar
dengan konsentrasi 2,5 hingga 100 µM.
4.10. Ekstraksi dan Kuantifikasi Protein

Total protein dari lima ulangan biologis dari masing-masing perlakuan diekstraksi menggunakan
pengendapan TCA/aseton dengan metode fenol [68] dengan sedikit modifikasi. Sampel daun (200 mg)
diekstraksi menggunakan 4 mL dingin 10% (b/v) TCA/aseton yang mengandung 10 mM dithiothreitol
(DTT) dan protease inhibitor 0,001% (v/v). Homogenat disentrifugasi pada 15.000× g rpm selama 5
menit pada suhu 4 ÿC. Pelet diresuspensi dengan 1,5 mL 10% (b/v) TCA/aseton sebelum disentrifugasi
pada 15.000× g rpm selama 5 menit pada suhu 4 ÿC. Pelet kemudian dicuci dengan 80% es dingin
aseton yang mengandung 10 mM DTT. Setelah disentrifugasi pada 15.000× g rpm selama 5 menit
pada suhu 4 ÿC, pelet diresuspensi dengan 1,5 mL buffer ekstraksi natrium dodesil sulfat (SDS) (1%
(b/v) SDS, 0,15 M Tris-HCl, pH 8,8, 0,1 M DTT, 1 mM EDTA, dan 0,001% (v/v) protease inhibitor).
Campuran diinkubasi pada suhu 65 ÿC selama 1 jam sebelum disentrifugasi pada 15.000× g rpm
selama 10 menit pada suhu kamar dan supernatan dikumpulkan dalam tabung baru. Volume yang
sama dari fenol yang disangga Tris (pH 8,0) kemudian ditambahkan ke supernatan. Fase fenol pada
lapisan bawah diekstraksi dan dicampur dengan buffer pencuci (10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 1 mM EDTA,
dan sukrosa 0,7 M). Setelah sentrifugasi, lapisan atas dicampur dengan 1,5 mL 0,1 M amonium asetat
dalam metanol. Campuran diinkubasi pada suhu ÿ20ÿC semalaman dan disentrifugasi pada 15.000× g
rpm selama 10 menit pada suhu 4 ÿC. Pelet dicuci dengan 1,5 mL 0,1 M amonium asetat dalam
metanol, disentrifugasi pada 15.000× g rpm selama 5 menit pada suhu 4ÿC, dan dicampur dengan 1
mL aseton dingin es 80% (v/v) yang mengandung 20 mM DTT. Setelah sentrifugasi, pelet dikeringkan
secara vakum dalam desikator selama 5 menit dan diresuspensi dalam buffer lisis S-Traps (5% SDS,
100mM trietilammonium bikarbonat, TEAB, pH 7,55) (Protifi, Huntington, NY, USA) untuk LCMS/
Analisis MS atau buffer resuspensi (7 M urea, 2 M tiourea, 4% (b/v) 3-[(3-cholamidopropyl)
dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS), 30 mM Tris-HCl (pH 8.0), dan 1% DTT) untuk
pengukuran kadar protein. Kandungan protein ditentukan dengan menggunakan reagen Bradford [69],
dimana albumin serum sapi digunakan sebagai standar protein.
4.11. Persiapan Protein

Sampel kering dikirim ke Fasilitas Analisis Proteome Australia (APAF) untuk LC-MS/MS. Sekitar
140 µg total protein dari masing-masing sampel diresuspensi dalam buffer lisis S-Trap dan dikurangi
dengan 10 mM DTT selama 30 menit pada suhu 56 ÿC dan dialkilasi dengan 25 mM iodoacetamide
(IAA) selama 30 menit pada suhu kamar dalam gelap. PH larutan disesuaikan dengan menambahkan
12% asam fosfat berair dengan perbandingan 1:10 untuk konsentrasi akhir 1,2% dan diencerkan
dengan menggunakan buffer pengikat S-Trap (90% metanol berair mengandung 100 mM TEAB, pH
7,55). Buffer pengikat S-Trap kemudian ditambahkan ke buffer lisis yang diasamkan. Campuran
dipindahkan ke kolom berlabel S-Trap sebelum disentrifugasi pada 4000× g. Buffer pengikat S-Trap
digunakan untuk mencuci kolom dua kali dan protein yang tertahan pada kolom dicerna dengan 125
ÿL larutan trypsin (~10 ÿg trypsin (Pierce, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) dalam 50 mM
triethylammonium bicarbonate) pada 47 ÿC selama 3 jam. Selanjutnya, 50 mM trietilammonium
bikarbonat ditambahkan ke kolom setelah sentrifugasi untuk mengelusi peptida, sedangkan peptida
sisanya dielusi dari kolom dengan sentrifugasi berurutan dengan asam format berair 0,2% diikuti
dengan asetonitril berair 50% (ACN) yang mengandung asam format 0,2% asam. Peptida disentrifugasi
vakum dan diresuspensi dalam 110 µL 200 mM HEPES (pH 8,8). Setiap 10 µL sampel
Tanaman 2022, 11, 221 17 dari 21
kemudian dikumpulkan ke dalam tabung. Konsentrasi peptida dari larutan yang dilarutkan
ditentukan dengan menggunakan uji peptida kolorimetri kuantitatif Pierce (Thermo Scientific).
4.12. Pelabelan dan Fraksinasi TMT Protein

Semua sampel diberi label dalam label TMT 10-plex (Thermo Scientific) dan diinkubasi pada
suhu kamar selama 1 jam dengan pusaran sesekali. Selanjutnya, 5% hidroksilamin ditambahkan
ke setiap sampel, divorteks, dan diinkubasi pada suhu kamar selama 15 menit untuk menghilangkan
kelebihan label TMT. Untuk memastikan jumlah peptida dalam setiap sampel sama, jumlah yang
sama dari setiap sampel berlabel TMT dicampur, dikeringkan dengan vakum, dan diresuspensi
dalam asam format 2% ACN 0,1% untuk mendapatkan faktor normalisasi. Semua sampel berlabel
TMT dikumpulkan dengan rasio 1:1. Peptida berlabel TMT dikeringkan secara vakum, dilarutkan
dalam asam trifluoroasetat 0,1% dan difraksinasi pada tiga konsentrasi 12,5%, 17,5%, dan 50%
ACN dengan trietilamina 0,1% dari Kit Fraksinasi Peptida Fase Terbalik Pierce pH Tinggi (Thermo
Scientific).
4.13. Kromatografi Cair-Spektroskopi Massa Tandem

Akuisisi ketergantungan data satu dimensi (DDA) LC-MS/MS (Q-Exactive, Thermo Fisher)
dilakukan dengan menyuntikkan setiap fraksi peptida berlabel TMT ke dalam perangkap peptida,
diikuti dengan buffer pemuatan (99,9 % air dan 0,1% asam format). Peptida dielusi dari perangkap
ke kolom nano-LC dan dipisahkan dengan gradien linier 1% fase gerak A (99,9% air dan 0,1%
asam format) hingga 30% selama 110 menit pada 300 nL/menit, diikuti oleh 85% B (99,9% ACN
dan 0,1% asam format) selama 8 menit. Sumber ionisasi ditetapkan sebagai mode ion positif,
dimana prekursor peptida 350–1850 m/z dipindai pada resolusi 70.000. 10 ion paling kuat dalam
pemindaian survei menjadi sasaran fragmentasi oleh HCD menggunakan energi tumbukan yang
dinormalisasi sebesar 35 dengan lebar isolasi prekursor 0,7 m/z. Prekursor dengan muatan +2
hingga +4 menjadi sasaran analisis MS/MS dengan parameter: sinyal minimum 6200 ion diperlukan
untuk memicu MS2, nilai target AGC 2 × 105 untuk MS2 dan waktu injeksi maksimum 250 ms
dengan Resolusi pemindaian 70.000 MS/MS, dan pengecualian dinamis 90 detik.
4.14. Analisis Data Proteomik

File data mentah yang dihasilkan dicari berdasarkan rangkaian protein Viridiplantae yang
diunduh dari UniProt (ditinjau, 40.400 rangkaian protein; 210312_uniprot-taxonomy_
viridiplantae+reviewed.fasta) (diakses pada Maret 2021) menggunakan Proteome Discoverer
2.1.0.81 (Thermo Scientific) dan Sequest HT algoritma pencarian, memungkinkan hingga dua
pembelahan yang terlewat per peptida dan toleransi massa prekursor 20 ppm. Karbonilasi sistein
digunakan sebagai modifikasi tetap, sedangkan oksidasi metionin, deaminasi (N, Q), Glu-> PyroGlu,
Gln-> PyroGlu, asetilasi N-Terminus, TMT6Plex (K), dan TMT6Plex (N-Term) adalah digunakan
sebagai modifikasi variabel. Hanya peptida berkeyakinan tinggi yang dipilih menggunakan algoritma
perkolator untuk pencocokan spektrum peptida (PSM) dalam pencarian basis data dengan ambang
batas tingkat penemuan palsu (FDR) yang ditetapkan sebesar 0,01 untuk identifikasi protein.
Protein yang teridentifikasi disaring berdasarkan perbandingan rasio kelimpahannya; Perbandingan
1 (Kekeringan vs. Air Baik), Perbandingan 2 (Pemulihan vs. Air Baik), dan Perbandingan 3
(Pemulihan vs. Kekeringan), mengikuti nilai p kurang dari 0,05 (Uji-t Student) dan berada dalam
kisaran perubahan kurang dari 0,5 kali lipat dan perubahan kelimpahan lebih dari 1,2 kali lipat.
4.15. Klasifikasi Fungsional Protein

Protein yang berubah secara signifikan berbeda divisualisasikan dengan pengelompokan
hierarki menggunakan perangkat lunak Perseus (versi 1.6.0.7) (70). Protein yang mengalami
perubahan berbeda ini kemudian dimasukkan ke dalam Kyoto Encyclopedia of Genes and
Genomes (KEGG) (https://www.kegg.jp/) (diakses pada 17 Oktober 2021) untuk kategorisasi
fungsional protein, sedangkan analisis jalur pengayaan dilakukan menggunakan fungsional DAVID.
alat anotasi dengan Arabidopsis thaliana sebagai latar belakang perbandingan.
Tanaman 2022, 11, 221 18 dari 21
4.16. Analisis Statistik Data
morfologi dan antioksidan enzim pada titik waktu yang berbeda dianalisis dengan uji-t Student, dimana data yang dianalisis
dianggap signifikan secara statistik ketika nilai p < 0,01. Perbandingan antara sampel yang diairi dengan baik, kekeringan, dan
pemulihan dianalisis menggunakan analisis varians (ANOVA) diikuti dengan kisaran Tukey post hoc menggunakan perangkat
lunak SPSS Statistics (versi 23.0; IBM) dengan nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik.
5. Kesimpulan
Stres kekeringan yang terjadi mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan P. amaryllifolius.

Tanaman yang mengalami cekaman kekeringan menunjukkan penurunan kandungan LRWC dan klorofil, sedangkan kandungan
REL, MDA, dan prolin meningkat. Akumulasi ROS pada tanaman yang mengalami cekaman kekeringan meningkatkan aktivitas
enzim antioksidannya. Mekanisme P. amaryllifolius yang responsif terhadap kekeringan ditentukan pada tingkat proteom.
Mayoritas perbedaan protein antara tanaman yang mengalami cekaman kekeringan dan tanaman yang mendapat banyak air
diklasifikasikan sebagai protein kejutan panas dan protein yang berhubungan dengan fotorespirasi, sedangkan protein yang
terlibat dalam metabolisme karbon, biosintesis klorofil, dan antioksidan diubah secara signifikan pada tanaman yang memanfaatkan
air. Penelitian lebih lanjut harus dilakukan di lapangan untuk lebih memahami mekanisme tanggap kekeringan pada P.
amaryllifolius.
Bahan Pelengkap: Berikut ini tersedia online di https://www.mdpi.com/article/10.3390/plants11020221/s1. Gambar S1. Kadar air
tanah diukur dalam sampel yang diairi dengan baik, kekeringan dan pemulihan selama 14 hari percobaan; Gambar S2.
Perbandingan daun Pandanus amaryllifolius dengan perlakuan berbeda. (A) Daun disusun menurut posisinya dari tengah (nomor
1) sampai daun dewasa (nomor 6) dan garis palang = 5 cm. Tata letak ini digunakan untuk uji kolorimetri otomatis (ACA); (B)
Perbandingan persentase piksel pigmen hijau dan hijau kuning pada setiap titik waktu menggunakan ACA. Rerata yang diberi
label abjad berbeda nyata berdasarkan ANOVA diikuti post hoc jika p-value < 0,01; Gambar S3. Pengelompokan hierarki
kelimpahan protein rata-rata dan pengelompokan antara perbandingan perlakuan untuk Pandanus amaryllifolius yang diairi
dengan baik, mengalami stres kekeringan, dan pulih. (A) Peta panas perbandingan kelimpahan protein signifikan antar perlakuan
menurut kelompok clusternya.
Skala intensitas menunjukkan kisaran peningkatan regulasi (merah) atau penurunan regulasi (hijau) protein antar perlakuan; (B)
Protein dengan kelimpahan berbeda yang signifikan antar perlakuan dikelompokkan menjadi 4 kelompok sesuai dengan ekspresi
rasio log; Gambar S4. Peta panas perbandingan kelimpahan protein nyata antar perlakuan menurut kelompok clusternya. Skala
intensitas menunjukkan kisaran peningkatan regulasi (ungu) atau penurunan regulasi (kuning) protein antar perlakuan.
Kontribusi Penulis: Konseptualisasi, BCT, WMA dan FDK; metodologi dan analisis data, MAMA; penulisan—persiapan draf asli,
MAMA, BCT, WMA; penulisan—review dan editing, FDK; pengawasan, BCT, WMA dan FDK; perolehan pendanaan, BCT Semua
penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.
Pendanaan: Penelitian ini didanai oleh Kementerian Pendidikan Tinggi, Malaysia, di bawah Skema Hibah Penelitian Funda
mental (FRGS/1/2018/STG03/UM/02/2) dan Universiti Malaya di bawah RU Fund (ST003-2021;
RU004A-2020 ;RU005-2019;TU002C-2018).
Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan: Tidak berlaku.
Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan: Tidak berlaku.
Pernyataan Ketersediaan Data: Data proteomik spektrometri massa telah disimpan ke Konsorsium ProteomeXchange melalui
repositori mitra PRIDE [71] dengan pengidentifikasi kumpulan data PXD028784.
Konflik Kepentingan: Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mempunyai kepentingan bersaing.
Tanaman 2022, 11, 221 19 dari 21
Referensi
1. FAO. Dampak Bencana dan Krisis Terhadap Pertanian dan Ketahanan Pangan: 2017; FAO: Roma, Italia, 2018; ISBN 978-92-5-130359-7.
2. Dinas Pertanian Luar Negeri USDA. Tersedia online: https://www.fas.usda.gov/data/thailand-impact-drought-agriculture-2020
(diakses pada 21 September 2021).
3. Zulkarami, B.; Razi, IM; Halimi, MS; Mondal, MA; Panhwar, QA; Islam, MR Efektivitas fitohormon yang berbeda pada pengisian gabah dan hasil padi (Oryza sativa L.) di
bawah cekaman kekeringan. J.Agri Pangan. Mengepung. 2014, 12, 697–700.
4. Nalina, M.; Saroja, S.; Chakravarthi, M.; Rajkumar, R.; Radhakrishnan, B.; Chandrashekara, KN Stres oksidatif yang disebabkan oleh defisit air dan respon diferensial
pada enzim antioksidan dari kultivar teh yang toleran dan rentan dalam kondisi lapangan. tindakan.
Fisiol. Tanaman. 2021, 43, 10. [Referensi Silang]
5. Zhou, J.; Chen, S.; Shi, W.; David-Schwartz, R.; Li, S.; Yang, F.; Lin, Z. Profil transkriptome mengungkap dampak kekeringan
toleransi di juncao raksasa. Pabrik BMC. biologi. 2021, 21, 2. [Referensi Silang] [PubMed]
6. Wang, D.; Chen, Q.; Chen, W.; Guo, Q.; Xia, Y.; Wang, S.; Jing, D.; Liang, G. Analisis fisiologis dan transkripsi mengungkap mekanisme pengaturan melatonin dalam
menginduksi ketahanan terhadap kekeringan pada bibit loquat (Eriobotrya japonica Lindl.). Mengepung. Contoh.
Bot. 2021, 181, 104291. [Referensi Silang]
7. Bankaji, saya.; Sleimi, N.; Vives-Peris, V.; Gómez-Cadenas, A.; Pérez-Clemente, RM Identifikasi dan ekspresi faktor transkripsi cucurbita WRKY sebagai respons
terhadap defisit air dan stres garam. Sains. Hortik. 2019, 256, 108562. [Referensi Silang]
8. Maurel, C.; Nacry, arsitektur P. Root dan hidrolika menyatu untuk menyesuaikan diri dengan perubahan ketersediaan air. Nat. Tanaman 2020, 6,
744–749. [Referensi Silang]
9. Santos, J.; Oliveira, LE; Coelho, VT; Lopes, G.; Souza, T.; Porto, AC; Lira, J.; Masote, R.; Rocha, C.; Gomes, MP Kinerja hevea brasiliensis dalam kondisi kekeringan
pada osmoregulasi dan aktivitas antioksidan melalui evaluasi vakuolar invertase dan gula pereduksi. Tanaman. Sains. Hari ini 2021, 8, 312–323. [Referensi Silang]
10. Liu, Y.; Ji, D.; Ahli Bedah, R.; Chen, J.; Lin, T.; Huang, J.; Luo, J.; Zhu, Y.; Zhang, C.; Lv, Z. Respon fisiologis dan proteomik pohon murbei (Morus alba L.) terhadap
gabungan cekaman garam dan kekeringan. Int. J.Mol. Sains. 2019, 20, 2486. [Referensi Silang]
11. Xiao, S.; Liu, L.; Zhang, Y.; Matahari, H.; Zhang, K.; Bai, Z.; Dong, H.; Liu, Y.; Li, C. Analisis proteomik kuantitatif berbasis tag massa (TMT) Tandem mengungkapkan
respons akar halus terhadap cekaman kekeringan pada kapas (Gossypium hirsutum L.). Pabrik BMC. biologi. 2020, 20, 328. [Referensi Silang]
12. Goche, T.; Shargie, NG; Cummins, saya.; Coklat, AP; Chivasa, S.; Ngara, R. Analisis perbandingan fisiologis dan proteom akar dari dua varietas sorgum merespons
keterbatasan air. Sains. Rep.2020, 10, 11835. [CrossRef]
13. Gupta, S.; Mishra, SK; Misra, S.; Pandey, V.; Agrawal, L.; Nautiyal, CS; Chauhan, PS Mengungkap kompleksitas kelimpahan protein pada akar buncis di bawah cekaman
kekeringan menggunakan pendekatan proteomik komparatif. Tanaman. Fisiol. Biokimia. 2020, 151, 88–102. [Referensi Silang]
14. Azri, W.; Cosette, P.; Guillou, C.; Rabhi, M.; Nasr, Z.; Mliki, A. Respon fisiologis dan proteomik terhadap cekaman kekeringan pada daun dua tanaman anggur liar (Vitis
sylvestris): Sebuah studi perbandingan. Tanaman. Peraturan Pertumbuhan. 2020, 91, 37–52. [Referensi Silang]
15. Zhu, D.; Luo, F.; Zou, R.; Liu, J.; Yan, Y. Analisis proteom fisiologis dan kloroplas terpadu daun bibit gandum
di bawah tekanan garam dan osmotik. J. Proteomik 2021, 234, 104097. [CrossRef] [PubMed]
16. Amnan, MAM; Pua, T.-L.; Lau, S.-E.; Tan, SM; Yamaguchi, H.; Hitachi, K.; Tsuchida, K.; Komatsu, S. Stres osmotik pada pisang dihilangkan dengan oksida nitrat
eksogen. RekanJ 2021, 9, e10879. [Ref Silang] [PubMed]
17. Ghasemzadeh, A.; Jaafar, HZ Profil senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan dan antikankernya dalam ekstrak pandan (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dari berbagai
lokasi di Malaysia. Pelengkap BMC. Alternatif. medis. 2013, 13, 341.
[Referensi Silang]
18. Reshidan, NH; Abd Muid, S.; Mamikutty, N. Pengaruh ekstrak air daun Pandanus amaryllifolius (Roxb.) terhadap model tikus sindrom metabolik yang diinduksi fruktosa.
Pelengkap BMC. Alternatif. medis. 2019, 19, 232. [Referensi Silang] [PubMed]
19. Agroforestri.org. Tersedia online: https://agroforestry.org/images/pdfs/P.tectorius-pandanus.pdf (diakses pada 13 Januari 2022).
20. Gurmeet, S.; Amrita, P. Pandan Unik—Rasa, Makanan dan Obat. J.Farmasi. fitokimia. 2015, 3, 8–14.
21. Kumar, S.; Sachdeva, S.; Bhat, KV; Vats, S. Respon tanaman terhadap stres kekeringan: Dasar fisiologis, biokimia dan molekuler. Dalam Toleransi Stres Abiotik Biotik
pada Tanaman; Vats, S., Ed.; Springer: Singapura, 2018; hlm.1–25. ISBN 978-981-10-9029-5.
22. Reyes, JAO; Carpentero, AS; Santos, PJA; Delfin, EF Pengaruh rezim air, genotipe, dan tahapan formatif terhadap respon agrofisiologi tebu (Saccharum officinarum L.)
terhadap kekeringan. Tanaman 2020, 9, 661. [CrossRef] [PubMed]
23. Junior, SDO; de Andrade, JR; dos Santos, CM; Silva, ALJ; Endres, L.; Silva, JV; dos Santos Silva, Akumulasi LK Osmoregulator meminimalkan efek cekaman kekeringan
pada tebu dan berkontribusi pada pemulihan efisiensi fotokimia di fotosistem II setelah penyiraman ulang. tindakan. Fisiol. Tanaman. 2020, 42, 62. [Referensi Silang]
24. Zhang, F.; Zhu, K.; Wang, YQ; Zhang, ZP; Lu, F.; Yu, markas besar; Zou, JQ Perubahan karakteristik fluoresensi fotosintesis dan klorofil sorgum di bawah tekanan
kekeringan dan genangan air. Fotosintesis 2019, 57, 1156–1164. [Referensi Silang]
25. Sanjari, S.; Shobbar, Z.-S.; Ghanati, F.; Afshari-Behbahanizadeh, S.; Farajpour, M.; Jokar, M.; Khazaei, A.; Shahbazi, M. Analisis molekuler, kimia, dan fisiologis lilin daun
sorgum di bawah cekaman kekeringan pasca pembungaan. Tanaman. Fisiol. Biokimia. 2021, 159, 383–391. [Ref Silang] [PubMed]
26. Oraee, A.; Tehranifar, A. Mengevaluasi potensi toleransi kekeringan banci melalui respon fisiologis dan biokimia
hingga masa kekeringan dan masa pemulihan. Sains. Hortik. 2020, 265, 109225. [Referensi Silang]
Tanaman 2022, 11, 221 20 dari 21
27. Dinç, E.; Ceppi, MG; Itu, SZ; Bottka, S.; Schansker, G. Intensitas fluoresensi chl a sangat tidak sensitif terhadap perubahan kandungan klorofil daun selama rasio chl
a/b tetap tidak terpengaruh. Biokimia. Biofisika. Akta (BBA)-Bioenergi. 2012, 1817, 770–779. [Ref Silang] [PubMed]
28. Yang, F.; Feng, L.; Liu, Q.; Wu, X.; Penggemar, Y.; Raza, MA; Cheng, Y.; Chen, J.; Wang, X.; Yong, T.; dkk. Pengaruh interaksi intensitas cahaya dan rasio merah
terhadap merah jauh terhadap fotosintesis daun kedelai pada kondisi ternaungi. Mengepung. Contoh. Bot. 2018, 150, 79–87. [Referensi Silang]
29. Lau, SE; Hamdan, MF; Pua, TL; Saidi, NB; Tan, BC Menanam sinyal oksida nitrat di bawah tekanan kekeringan. Tanaman 2021, 10, 360.
[Referensi Silang]
30. Kegagalan, ML; Lovato, AKU; Antolín, MC; Clementi, LA; Torres, N.; Gervasio, S.; Martín, CA Peran akumulasi prolin terhadap kualitas buah lada (Capsicum annuum
L.) yang ditanam dengan kompos K-Rich dalam kondisi kekeringan. Sains. Hortik. 2019, 249, 280–288. [Referensi Silang]
31. Liu, Y.; Dia, Z.; Xie, Y.; Su, L.; Zhang, R.; Wang, H.; Li, C.; Panjang, S. Mekanisme ketahanan kekeringan Phedimus aizoon L. Sci. Reputasi.
2021, 11, 13600. [CrossRef] [PubMed]
32. Marci ´nska, I.; Czyczyÿo-Mysza, I.; Skrzypek, E.; Filek, M.; Grzesiak, S.; Grzesiak, MT; Janowiak, F.; Hura, T.; Dziurka, M.; Dziurka, K. Dampak cekaman osmotik
terhadap karakteristik fisiologis dan biokimia pada genotipe gandum rentan kekeringan dan tahan kekeringan. tindakan. Fisiol. Tanaman. 2013, 35, 451–461.
[Referensi Silang]
33. Hossain, MA; Hoque, MA; Burritt, DJ; Fujita, M. Proline melindungi tanaman terhadap stres oksidatif abiotik: Mekanisme biokimia dan molekuler. Dalam Kerusakan
Oksidatif pada Tanaman; Ahmad, P., Ed.; Pers Akademik: San Diego, CA, AS, 2014; hal.477–522.
ISBN 978-0-12-799963-0.
34. Raja, V.; Qadir, SU; Alyemeni, MN; Ahmad, P. Dampak kekeringan dan tekanan panas secara individu dan kombinasi terhadap parameter fisio-biokimia, respon
antioksidan, dan ekspresi gen pada Solanum lycopersicum. 3 Bioteknologi 2020, 10, 208.
[Referensi Silang]
35. Nagaraju, M.; Kumar, A.; Rajasheker, G.; Manohar Rao, D.; Kavi Kishor, PB DnaJs, pendorong penting Hsp70s: Penapisan seluruh genom, karakterisasi, dan ekspresi
gen keluarga DnaJ dalam Sorghum bicolor. mol. biologi. Rep.2020, 47, 7379–7390. [Referensi Silang]
36. Carmo, LST; Martins, ACQ; Martins, CCC; Passo, MAS; Silva, LP; Araujo, ACG; Brasileiro, ACM; Miller, RNG; Guimaraes, PM; Mehta, A. proteomik komparatif dan
analisis ekspresi gen di Arachis duranensis mengungkapkan protein respons stres yang terkait dengan toleransi kekeringan. J.Proteom. 2019, 192, 299–310.
[Referensi Silang]
37. Wang, T.; Ya, C.; Wang, M.; Chu, G. Identifikasi protein responsif terhadap stres dingin pada bibit Anabasis aphylla melalui ITRAQ
teknik proteomik. J.Tanaman. Berinteraksi. 2017, 12, 505–519. [Referensi Silang]
38. Zhou, W.; Zhou, T.; Li, M.-X.; Zhao, C.-L.; Jia, N.; Wang, X.-X.; Matahari, Y.-Z.; Li, G.-L.; Xu, M.; Zhou, R.-G.; dkk. Arabidopsis j-protein atdjb1 memfasilitasi
termotoleransi dengan melindungi sel terhadap kerusakan oksidatif akibat panas. Fitol Baru. 2012, 194, 364–378. [Referensi Silang]
39. Sirohi, P.; Yadav, BS; Afzal, S.; Mani, A.; Singh, NK Identifikasi gen yang responsif terhadap cekaman kekeringan pada padi (Oryza sativa) oleh
meta-analisis data microarray. J.Genet. 2020, 99, 35. [Referensi Silang] [PubMed]
40. Luo, Y.; Fang, B.; Wang, W.; Yang, Y.; Rao, L.; Zhang, C. Analisis luas genom keluarga protein-j beras: Identifikasi, organisasi genom, dan profil ekspresi di bawah
berbagai tekanan. 3 Bioteknologi 2019, 9, 358. [CrossRef]
41. Pandey, A.; Chakraborty, S.; Data, A.; Chakraborty, N. Pendekatan proteomik untuk mengidentifikasi protein inti yang responsif terhadap dehidrasi
dari buncis (Cicer arietinum L.). mol. Sel. Proteom. 2008, 7, 88–107. [Ref Silang] [PubMed]
42. Choudhary, MK; Basu, D.; Data, A.; Chakraborty, N.; Chakraborty, S. Proteom inti beras yang responsif terhadap dehidrasi (Oryza sativa L.) menggambarkan jaringan
protein, pengatur baru adaptasi seluler, dan perspektif evolusi. mol. Sel. Proteom.
2009, 8, 1579–1598. [Ref Silang] [PubMed]
43. Razi, K.; Muneer, S. Mekanisme Fisiologis yang Diinduksi Stres Kekeringan, Jalur Pensinyalan dan Respon Molekuler dari
Kloroplas pada Tanaman Sayuran Biasa. Kritik. Pdt. Bioteknologi. 2021, 41, 669–691. [Ref Silang] [PubMed]
44. Rasouli, F.; Kiani-Pouya, A.; Shabala, L.; Li, L.; Tahir, A.; Kamu M.; Hedrich, R.; Chen, Z.; Wilson, R.; Zhang, H.; dkk. Efek salinitas
pada proteom sel penjaga di Chenopodium quinoa. Int. J.Mol. Sains. 2021, 22, 428. [Referensi Silang] [PubMed]
45. Hyun, TK; van der Graaff, E.; Albacete, A.; Eom, SH; Großkinsky, DK; Bohm, H.; Janschek, U.; Pelek, Y.; Ali, WW; Kim, SY; dkk. Protein1 domain Arabidopsis PLAT
sangat terlibat dalam toleransi stres abiotik. PLoS SATU 2014, 9, e112946.
[Referensi Silang]
46. Li, J.; Blanchoin, L.; Staiger, CJ Memberi sinyal untuk bertindak dalam dinamika stokastik. Ann. Pdt. Tanaman. biologi. 2015, 66, 415–440. [Referensi Silang]
[PubMed]
47. Li, H.-M.; Liu, S.-D.; Ge, C.-W.; Zhang, X.-M.; Zhang, S.-P.; Chen, J.; Shen, Q.; Ju, F.-Y.; Yang, Y.-F.; Li, Y.; dkk. Analisis asosiasi toleransi kekeringan dan sifat-sifat
terkait kapas dataran tinggi pada tahap pembibitan. Int. J.Mol. Sains. 2019, 20, 3888. [Referensi Silang]
[PubMed]
48. Hawkins, TJ; Deeks, MJ; Wang, P.; Hussey, PJ Evolusi superfamili NET yang mengikat aktin. Depan. Tanaman. Sains. 2014, 5,
254. [Referensi Silang] [PubMed]
49. Saha, BC ÿ-l-Arabinofuranosidases: Biokimia, biologi molekuler dan aplikasi dalam bioteknologi. Bioteknologi. Adv. 2000, 18,
Tanaman 2022, 11, 221 21 dari 21
50. Zhu, J.; Alvarez, S.; Marsh, EL; LeNoble, AKU; Cho, I.-J.; Sivaguru, M.; Chen, S.; Nguyen, HT; Wu, Y.; Schachtman, DP; dkk.
Proteom dinding sel pada zona pemanjangan akar primer jagung. ii. perubahan spesifik wilayah pada protein yang larut dalam air dan protein yang terikat secara ionik ringan
di bawah defisit air. Tanaman. Fisiol. 2007, 145, 1533–1548. [Referensi Silang]
51. Lopez-Hinojosa, M.; dari Maria, N.; Guevara, MA; Velez, MD; Kepala, JA; Diaz, LM; Tempat, JA; Pizzaro, A.; Manjarrez,
JIKA; Collada, C.; dkk. efek batang bawah pada ekspresi gen batang atas pada pinus maritim. Sains. Rep.2021, 11, 11582. [CrossRef]
52. Nemati, M.; Piro, A.; Norouzi, M.; Moghaddam Vahed, M.; Nisticò, DM; Mazzuca, S. Analisis komparatif fisiologis dan proteomik daun mengungkapkan sifat toleran dan sensitif
terhadap cekaman kekeringan pada dua garis induk gandum dan keturunan F6 mereka.
Mengepung. Contoh. Bot. 2019, 158, 223–237. [Referensi Silang]
53. Yang, J.; Zhang, J.; Li, C.; Zhang, Z.; Bu, F.; Li, M. Respon metabolisme gula pada daun apel yang mengalami cekaman kekeringan jangka pendek. Tanaman. Fisiol. Biokimia.
2019, 141, 164–171. [Referensi Silang]
54. La, VH; Lee, B.-R.; Islam, MT; Taman, S.-H.; Lee, H.; Bae, D.-W.; Kim, T.-H. Pergeseran antagonis dari akumulasi sukrosa yang dimediasi asam absisat ke asam salisilat
berkontribusi terhadap toleransi kekeringan di Brassica napus. Mengepung. Contoh. Bot. 2019, 162, 38–47.
[Referensi Silang]
55. Turner, NC Teknik dan pendekatan eksperimental untuk pengukuran Status air tanaman. Tanaman. Tanah 1981, 58, 339–366.
[Referensi Silang]
56. Quan, W.; Hu, Y.; Mu, Z.; Shi, H.; Chan, Z. Ekspresi AtPYL5 yang berlebihan di bawah kendali promotor spesifik sel penjaga meningkatkan toleransi stres kekeringan di
arabidopsis. Tanaman. Fisiol. Biokimia. 2018, 129, 150–157. [Referensi Silang]
57. Schneider, CA; Rasband, WS; Eliceiri, KW NIH Image to ImageJ: 25 tahun analisis gambar. Nat. Metode 2012, 9, 671–675.
[Referensi Silang]
58. Bresson, J.; Bieker, S.; Riester, L.; Boneka, J.; Zentgraf, U. Pedoman analisis penuaan daun: Dari kuantifikasi hingga penyelidikan fisiologis dan molekuler. J.Eks. Bot. 2018, 69,
769–786. [Ref Silang] [PubMed]
59. Lichtenthaler, HK Klorofil dan karotenoid: Pigmen biomembran fotosintesis. Dalam Metode Enzimologi; Tanaman
Membran sel; Pers Akademik: San Diego, CA, AS, 1987; Jilid 148, hlm.350–382.
60. Heath, RL; Packer, L. Fotoperoksidasi dalam kloroplas terisolasi: I. kinetika dan stoikiometri peroksidasi asam lemak. Lengkungan.
Biokimia. Biofisika. 1968, 125, 189–198. [Referensi Silang]
61. Bates, LS; Waldren, RP; Teare, ID Penentuan cepat prolin bebas untuk studi tekanan air. Tanaman. Tanah 1973, 39, 205–207.
[Referensi Silang]
62.Dhindsa, RS; Matowe, W. Toleransi kekeringan pada dua lumut: Berkorelasi dengan pertahanan enzimatik terhadap peroksidasi lipid. J.
Contoh. Bot. 1981, 32, 79–91. [Referensi Silang]
63. Aebi, H. Katalase. Dalam Metode Analisis Enzimatik, edisi ke-2; Bergmeyer, HU, Ed.; Pers Akademik: San Diego, CA, AS, 1974; hal.100-1 673–684. ISBN 978-0-12-091302-2.
64. Chen, G.-X.; Asada, K. Inaktivasi askorbat peroksidase oleh tiol membutuhkan hidrogen peroksida. Tanaman. Fisiol Sel. 1992, 33,
65. Kesempatan, B.; Maehly, AC Uji katalase dan peroksidase. Metode Enzimol. 1955, 2, 764–775. [Referensi Silang]
66. Mannervik, B. Pengukuran aktivitas glutathione reduktase. Saat ini. protokol. racun. 1999, 1, 7.2.1–7.2.4. [Referensi Silang]
67. Velikova, V.; Yordanov, saya.; Edreva, A. Stres oksidatif dan beberapa sistem antioksidan pada tanaman kacang-kacangan yang diberi perlakuan hujan asam: Pelindung
peran poliamina eksogen. Tanaman. Sains. 2000, 151, 59–66. [Referensi Silang]
68. Wu, X.; Xiong, E.; Wang, W.; Scali, M.; Cresti, M. Metode persiapan sampel universal yang mengintegrasikan pengendapan asam trikloroasetat/aseton dengan ekstraksi fenol
untuk analisis proteomik tanaman. Nat. protokol. 2014, 9, 362–374. [Ref Silang] [PubMed]
69. Bradford, MM Metode yang cepat dan sensitif untuk kuantisasi jumlah mikrogram protein memanfaatkan prinsip
pengikatan protein-pewarna. Dubur. Biokimia. 1976, 72, 248–254. [Referensi Silang]
70. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, SAYA; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Platform komputasi Perseus untuk
analisis komprehensif data (prote)omics. Nat. Metode 2016, 13, 731–740. [Ref Silang] [PubMed]
71. Vizcaino, JA; Côté, RG; Csordas, A.; Dianes, JA; Fabregat, A.; Asuh, JM; Griss, J.; Alpi, E.; Birim, M.; Contell, J.; dkk. Basis data PROteomics Identifications (PRIDE) dan alat
terkait: Status pada tahun 2013. Asam Nukleat Res. 2013, 41, H1063–D1069.
[Ref Silang] [PubMed]

Plants 11 00221

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Plants 11 00221

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Machine Translated by Google

Stres Kekeringan Menginduksi Morfo-Fisiologis dan Proteom

Perubahan Pandanus amaryllifolius

Editor Akademik: Alfredo Guéra

Diterima: 25 Desember 2021 1. Perkenalan

Tanaman 2022, 11, 221. https://doi.org/10.3390/plants11020221 https://www.mdpi.com/journal/plants

Tanaman 2022, 11, 221 2 dari 21

Tanaman 2022, 11, 221 3 dari 21

Tanaman 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER 4 dari 23

(B) Persentase kadar air relatif daun P. amaryllifolius. (C) Persentase

Prolin, sebagai osmoprotektan, terlibat dalam melindungi tanaman dari bahaya

Tanaman 2022, 11, 221 7 dari 21

Pencapaian Protein Proses Biologis Fungsi Gugus a

Tanaman 2022, 11, 221 8 dari 21

Pencapaian Protein Proses Biologis Fungsi Gugus a

A4S6Y4 Homolog protease lon, Stres oksidatif 3

Tanaman 2022, 11, 221 9 dari 21

Pencapaian Protein Proses Biologis Fungsi Gugus a

Protein penambah oksigen yang berevolusi 4

nts 2022, 11, x UNTUK TINJAUAN PEER 11 dari 23

Kekeringan vs Banyak air Pemulihan vs Penyiraman yang baik

ÿlog 10 (nilai p uji eksak Fisher)

Untuk mengklasifikasikan fungsi dari

Tanaman 2022, 11, 221 11 dari 21

3.2. Kelimpahan Protein Stres dan Pertahanan di Bawah Stres Kekeringan

Tanaman 2022, 11, 221 12 dari 21

3.3. Protein Terkait Membran Sel Meningkat di bawah Stres Kekeringan

3.4. Kelimpahan Protein Terkait Metabolisme Karbohidrat di Bawah Stres Kekeringan

Tanaman 2022, 11, 221 13 dari 21

4. Bahan dan Metode 4.1.

4.2. Penentuan Kadar Air Relatif Daun Kadar air

LRWC (%) = [(FW ÿ DW)/(SW ÿ DW)] × 100 (1)

4.3. Pengukuran Kebocoran Elektrolit Relatif

REL (%) = Ci/Cmaks × 100 (2)

4.4. Pengukuran Berat Tanaman

4.5. Uji Kolorimetri Otomatis

Tanaman 2022, 11, 221 14 dari 21

4.6. Pengukuran Kandungan Klorofil

Klorofil a, Ca = 12.25A663 ÿ 2.79A647 (3)

Klorofil b, Cb = 21.50A647 ÿ 5.10A663 Total (4)

klorofil, Ca+b = 7.15A663 + 18.71A647 (5)

Total karotenoid, Cx+c = (1000A470 ÿ 1,82Ca ÿ 85,02Cb) 198 (6)

4.7. Penentuan Kandungan Malondialdehid

MDA = [(A532 ÿ A600) × VTr × 1000]/(Koefisien kepunahan MDA × 1 cm × Ve) g FW (7)

A532 ÿ A600 = Absorbansi MDA-TBA.

4.8. Pengukuran Kandungan Prolin

Prolin (µMgÿ1 FW) = [(µg prolin/mL × mL toluena) µg 115,5/µmole]/(g FW/5) (8)

4.9. Uji Enzimatik Antioksidan

Tanaman 2022, 11, 221 15 dari 21

4.9.1. Superoksida Dismutase

4.9.3. Askorbat Peroksidase

4.9.5. Glutathione Reduktase

Tanaman 2022, 11, 221 16 dari 21

4.9.6. Hidrogen Peroksida

4.10. Ekstraksi dan Kuantifikasi Protein

4.11. Persiapan Protein

Tanaman 2022, 11, 221 17 dari 21

4.12. Pelabelan dan Fraksinasi TMT Protein

4.13. Kromatografi Cair-Spektroskopi Massa Tandem

4.14. Analisis Data Proteomik

4.15. Klasifikasi Fungsional Protein

Tanaman 2022, 11, 221 18 dari 21

4.16. Analisis Statistik Data