Identifikasi

dan Analisis
Kelompok 4

Benzodiazepin
1.
2.
Muhammad Fikri S.
Nabilla Fadyah M.
3. Nia Ariani
4. Nur Azizah
5. Rachmat Angga W.
6. Reny Sri Wahyuni
7. Sabrina Intan S.
Benzodiazepin

KLASIFIKASI DAN DEFINISI

ANALISIS KUALITATIF DAN

KUANTITATIF
LATAR BELAKANG
Analisis Benzodiazepin

Alprazolan & diazepam

 DEFINISI
BENZODIAZEPIN

APA ITU BENZODIAZEPIN ?

Benzodiazepin merupakan sekelompok obat golongan
psikotropika yang memiliki efek dari neurotransmitter
gamma-aminobutyric (sedatif)
 KLASIFIKASI
GOLONGAN BENZODIAZEPIN :

Alprazolam Bromazepam Brotizolam Cemazepam

Chlordiazepoxide Clobazam Clonazepam

 ANALISIS BENZODIAZEPAM
SECARA KUALITATIF
Langkah Kerja Menggunakan KLT
(silika gel GF254) 1. Persiapan larutan untuk diterapkan pada plat KLT
• Bubuk: Siapkan larutan pada konsentrasi 5 mg / ml dalam
metanol.
• kapsul: Menghilangkan isi dari sampel yang representatif dari
kapsul dan membuat larutan yang mengandung setara dengan
sekitar 5 mg / ml obat dalam metanol.
• tablet: Menggiling sejumlah tablet menjadi bubuk halus dan
membuat larutan yang mengandung setara dengan sekitar 5mg
/ ml obat dalam metanol.
• Larutan encer: Spot langsung atau menggunakan konsentrasi
5 mg / ml jika konsentrasi obat dikenal.
• Larutan standar: Semua solusi dibuat pada konsentrasi 5mg
/mL di metanol. Terapkan 2μl dari 5mg/ml obat dalam metano
l ke plat.
 ANALISIS BENZODIAZEPAM
SECARA KUALITATIF
Langkah Kerja Menggunakan KLT
(silika gel GF254) 2. Visualisasi
Plat harus dikeringkan sebelum visualisasi pada suhu 120°C s
elama 5 menit dalam oven.
Metode visualisasi :
A. sinar UV pada 254 nm
B. 2NH2SO4 amati di bawah sinar UV pada 366 nm
C. larutan kalium iodoplatinate reagen
Diasamkan kalium iodoplatinate reagen: Larutkan 0.25g dari
platini klorida dan 5 g kalium iodide dalam air 100 ml. kaliu
m iodoplatinate reagen; diasamkan dengan menambahkan 5
ml asam klorida pekat 100 ml larutan iodoplatinate.
 ANALISIS BENZODIAZEPAM
SECARA KUALITATIF

Metode
(silika gel GF254)
Pertama mengamati plat di bawah sinar UV gelombang pendek. Se

mprot dengan 2NH2SO4 dan dipanaskan dalam oven pada suhu 80°

C selama 5 menit. Mengamati bintik neon di bawah sinar UV panja

ng (366nm). Plat kemudian dapat disemprotkan dengan reagen iodo

platinate yang telah diasamkan. Semua benzodiazepin memberikan

titik berwarna ungu ketika disemprotkan dengan reagen (reaksi

positif alkaloid).
 ANALISIS BENZODIAZEPAM
SECARA KUANTITATIF

GC-MS

LC-MS
SPECTRO-IR
GC-FID

HPLC
 GC-FID

PREPARASI SAMPEL
• Untuk preparasi sampel dan standar dibuat dalam
larutan dengan pelarut metanol dalam konsentrasi
GC-FID 1 mg/Ml
 GC-FID
OPTIMASI ALAT

GC-FID
 GC-FID
indeks retensi BP-1
SENYAWA Kapiler
Alprazolam 2936
BROMAZEPAM 2626
Camazepam 2954
chlordiazepoxide * 2815 (2531, 2646)
clobazam 2582
clonazepam 2833
Asam Clorazepic * 2521 (2783)
Clotiazepam 2485
Cloxazolam * 2344 (2604)
Delorazepam 2537
 GC-MS

GC-MS adalah salah satu teknik yang paling umum diguna

kan untuk identifikasi dan kuantisasi sampel obat forensik

Sebagai teknik “ditulis dengan tanda penghubung”, itu men

ggabungkan kekuatan pemisahan GC dengan kekhususan
analit dari teknik spektroskopi, menyediakan data spektral
yang sangat spesifik pada individu senyawa dalam campur
an kompleks dari senyawa sering tanpa pemisahan sebelu
mnya.
GC-MS
OPTIMASI ALAT
 GC-MS
IDENTIFIKASI / ANALISIS

Identifikasi GC-MS dilakukan dengan me-

mbandingkan waktu retensi dan spektrum
massa analit dengan yang standar refere-
nsi. Semua senyawa diidentifikasi oleh
GC-MS dan dilaporkan oleh analis harus
dibandingkan dengan spektrum saat
massa standar referensi yang tepat,
sebaiknya diperoleh pada instrumen yang
sama, dioperasikan di bawah kondisi
yang sama.
 HPLC

metode HPLC sulit untuk pemisahan senyawa, karena keragam

an struktur kimia antara benz-odiazepin. Tetapi, metode berikut
direkomend-asikan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif dari
semua turunan benzodiazepin bawah kontrol internasional.
Pemilihan kolom dan sistem pelarut oleh labor-atorium nasional
akan tergantung pada benzo-diazepin tertentu yang umum
tersedia di negara itu.
HPLC
OPTIMASI
HPLC
Hasil :
HPLC
Hasil :
HPLC
Hasil :
 LC-MS

Metode yang cepat, sederhana dan sangat sensitif untuk

analisis simultan dari empat belas jenis benzodiazepin
menggunakan triple quadrupole MS dalam mode
ESI. Sampel konsentrasi yang sesuai dibuat dari
standar internal yang dideuterasi. Batas kuantifikasi
sebagian besar benzodiazepin yang menggunakan
metode ini adalah sekitar 0,5 mg / mL
LC-MS
OPTIMASI
LC-MS
Kondisi MS
SPEKTROFOTOMETER-IR

(A) Benzodiazepin sebagai garam hidroklorida

1. Chlordiazepoxide, flurazepam dan medazep
am dianggap sebagai garam hidroklorida.
2. Isi kapsul dihaluskan dan dilarutkan dengan
1 sampai 2 ml metanol.
3. Dikumpulkan ekstrak dan diuapk an sampa
i kering.
4. Menginduksi kristalisasi dan menjalankan
spektrum inframerah garam benzodiazepin
yang dilakukan dengan metode pelet KBr.
SPEKTROFOTOMETER-IR

(B) Benzodiazepine basa bebas

1. Dihaluskan tablet yang mengandung sekitar
10 mg obat dan di larutkan dalam 1ml larutan
0,1 M NaOH
2. Diekstrak dengan CHCl3.
3. Menguapkan CHCl3 sampai kering dan
menginduksi kristal.
metode standar lainnya dapat digunakan tergantung
pada instrumentasi yang tersedia. Spektrum IR harus
dibandingkan dengan sampel standar yang disiapkan
/ diperlakukan dengan cara yang sama sebagai
bahan uji.
 Thank you
ANY QUESTION ?