Laporan Praktikum Biokimia

Program Studi Pendidikan

Biologi
Fakultas Biologi
Universitas Kristen

Satya

Wacana

Aktivitas Enzim Amilase dari Saliva Manusia

Oleh:
Aldo Pramudya
432015010

I.

Pendahuluan

Enzim termasuk dalam kelompok protein yang berperan sebagai pengkatalis pada reaksi-reaksi
biologis. Enzim dapat juga didefenisikan sebagai biokatalisator yang dihasilkan oleh jaringan yang
berfungsi meningkatkan laju reaksi dalam jaringan itu sendiri. Semua enzim yang diketahui hingga
kini hampir seluruhnya adalah protein. Berat molekul enzim pun sangat beraneka ragam, meliputi
rentang yang sangat luas (Suhtanry & Rubianty, 1985).
Pada enzim dikenal beberapa istilah diantaranya holoenzim, apoenzim, kofaktor, gugus prostetik,
koenzim, dan substrat. Apoenzim adalah suatu enzim yang seluruhnya terdiri dari protein, sedangkan
holoenzim adalah enzim yang mengandung gugus protein dan gugus non protein. Gugus yang bukan
protein tadi dikenal dengan istilah kofaktor. Pada kofaktor ada yang terikat kuat pada protein dan
sukar terurai dalam larutan yang disebut gugus prostetik dan adapula yang tidak terikat kuat pada
protein sehingga mudah terurai yang disebut koenzim. Baik gugus prostetik maupun koenzim,
keduanya merupakan bagian yang memungkinkan enzim bekerja pada substrat. Substrat merupakan
zat-zat yang diubah atau direaksikan oleh enzim (Poedjadi, 2006).
Enzim amilase dapat memecah ikatan pada amilum hingga terbentuk maltosa. Ada tiga macam
enzim amilase, yaitu amilase, amilase dan amylase, yang terdapat dalam saliva (ludah) dan
pankreas adalah amilase. Enzim ini memecah ikatan 1-4 yang terdapat dalam amilum dan disebut
endo amilase karena pada enzim ini memecah bagian dalam atau bagian tengah molekul amilum
(Poedjiadi, 2006).
Molekul enzim seperti bentuk protein pada umumnya, enzim memiliki struktur tiga dimensi.
jenis-jenis struktur protein tersebut yang mendukung akivitas enzim sebagai biokatalisator. Enzim
akan kehilangan sifat dan kemampuannya bila kedua faktor tidak terpenuhi, seperti jenis-jenis
struktur, suhu dan pH yang tidak sesuai (Sadikin, 2002).

II.

Tujuan

Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah untuk mengetahui aktivitas enzim amilase

III.Bahan dan Metode

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin tanggal 4 Oktober 2016 pukul 09.00-11.00 WIB
bertempat di Laboratorium Biokimia dan Biologi Molekuler, Fakultas Biologi, Universitas Kristen
Satya Wacana, Salatiga. Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah. tabung reaksi,Gelas bekker,
labu takar, waterbath, spektrofotometer, dan kuvet. Sedangkan bahan yang digunakan pada praktikum
ini adalah tisu, saliva, akuadest, buffer fosfat 0,1M pH 7, Larutan pati stok 1%, larutan yodium(0,2%
iodin dan 2% Kalium iodida), dan HCl 1N.

Metode kerja dilakukan dengan dikumpulkan dan tempatkan saliva pada gelas hingga
mencapai volume 5-10 ml. untuk metode Penentuan aktivitas amylase dilakukan 1 ml saliva
diencerkan menjadi 10 ml dengan buffer fosfat 0,1M pH 7. 4tabung reaksi y diberi label A-E, Ke
masing-masing dimasukkan saliva yang telah diencerkan sebesar 1 ml, ditambahkan masing-masing
dengan 1ml larutan pati 0,0; 0,1; 0,2; 0,4; dan 0,8%, lalu diinkubasi selama 15 menit suhu 37 oC
dalam waterbath , pada akhir reaksi, ditambahkan1 ml HCl 1N, pada masing tabung reaksi ditetesi 1
ml lar. yodium(0,2% iodin dan 2% Kalium iodida), ukur absorbansi larutan dengan panjang
gelombang 580 nm, dan digunakan tabung A sebagai blanko.
Lalu dihitung kadar pati sisa ditentukan menggunakan kurva standar dibuat dari data pengukuran
absorbansi deret standar konsentrasi , lalu aktivitas enzim amilase saliva ditentukan dengan rumus :
1U = [S]/ T, penentuan konsentrasi pati pada larutan standar, dibuat seri konsentrasi pati dari
larutan stok pati 1%, menjadi 0; 0,1; 0,2;0,3; 0,4; 0,8; dan 1%, tabung reaksi dimasukan konsentrasi
pati yang dibuat 1 ml larutan pati dan 1 mllarutan yodium, terakhi diukur absorbansi larutan
pada panjang gelombang 580 nm, diplotkan data konsentrasi pati pada sumbu X dan data absorbansi
pada sumbu Y, lalu dibuat persamaan garis lurus.

III.

Hasil dan Pembahasan

A. Hasil

Berdasarkan hasil pengamatan aktivitas enzim amylase didapatkan hasil sebagai berikut.
Grafik 1. Persamaan Garis Lurus Lineweaver

Lineweaver-Burk Plot
13
11
f(x) = 0.52x + 0.84
9
1/V

1/v

Linear (1/v)

3
1
-5

-10
-3

10

15

20

25

1/[S]

Tabel 1. Nilai Km dan Vmax penentuan Aktivitas Saliva

Vmax
Gradien
1.189243482
0.5154

Km
0.612987631

B. Pembahasan
Pada praktikum digunakan 2 parameter untuk mengukur aktivitas enzim,menggunakan
kinetika enzim untuk penentuan Km (Konstanta michaelis) dan Vmax (Kecepatan maksimum). Nilai
Km tidak bergantung besarnya konsentrasi enzim , apabila Vmax besarnya dipengaruhi olek

konsentrasi enzim. Penentuan Km (Konstanta michaelis) dan Vmax (Kecepatan maksimum)

dilakukan dengan saat optimasi kerja enzim dengan membat kurva garis lurus yang disebut
lineweaver-burk.
Enzim yang memiliki konsentrasi yang tetap, peningkatan konsentrasi substrat akan
menaikkan kecepatan reaksi enzimatis sampai mencapai kecepatan maksimum yang tetap. Pada titik
maksimum semua enzim telah jenuh oleh substrat sehingga penamahan substrat tidak akan
meningkatkan kecepatan reaksi enzimatis. Pada suatu konsentrasi substrat tertentu, kecepatan reaksi
bertambah dengan bertambahnya konsentrasi enzim. Konsentrasi enzim tetap, maka pertambahan
konsentrasi substrat akan menaikkan kecepatan reaksi.
Substrat dengan konsentrasi yang rendah, bagian aktif enzim hanya menampung sedikit
substrat. Apabila konsentrasi substrat diperbesar, maka semakin banyak substrat yang dapat
berhubungan dengan enzim pada bagian aktif tersebut.
Pada konsentrasi enzim yang tetap, penambahan konsentrasi substrat akan menaikkan
kecepatan reaksi enzimatis sampai mencapai kecepatan maksimum yang tetap. Penambahan substrat
setelah kecepatan maksimum tidak berpengaruh lagi, karena telah melampaui titik jenuh enzim..
Seperti pada katalis lain, kecepatan suatu reaksi yang menggunakan enzim tertentu tergantung pada
konsentrasi enzim tersebut. Akan tetapi pada batas konsentrasi tertentu, tidak terjadi kenaikan
kecepatan reaksi walaupun konsentrasi substrat diperbesar. dengan kata lain, kecepatan reaksi
enzimatis berbanding lurus dengan konsentrasi enzim sampai batas tertentu sehingga reaksi
mengalami kesetimbangan. Pada saat setimbang peningkatan konsentrasi enzim sudah tidak
berpengaruh konsentrasi substrat. (Tosari, 2008).

IV.

Daftar Pustaka

Poedjiadi, Anna, 2006. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: Universitas Indonesia PRESS.

Sadikin, Muhammad. 2002. Biokimia Dara. Jakarta: Widia Medika.
Suhtanry, Rubianty. 1985. Kimia Pangan. Makassar: Badan Kerja Sama Perguruan Negeri Indonesia
Bagian Timur.
Tosari A. A. 2008. Aktivitas Enzim Amilase. (file:///C:/Users/ASUS/Downloads/181960397-aktivitasenzim-amilase-pdf.). Diakses pada 17 Oktober 2016.