ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

BAKTERI Pseudomonas sp

No : 06
Hari,tanggal : Senin s/d Rabu, 15-17 desember 2014
Materi Umum : Persiapan Isolasi dan Identifikasi Bakteri Pseudomonas sp
Tujuan Umum : Untuk mengetahui cara Isolasi dan Identifikasi bakteri
Pseudomonas sp
Alat :
Lampu spirtus
Ose
Objec Glass
Spidol
Rak Tabung
Pipet tetes
Rak pewarnaan
Reagensia :
Gram A ( Carbol Gention Violet )
Gram B ( Lugol )
Gram C ( Alkohol 96 % )
Gram D ( Carbol Fuchsin )
R/ Erlich
R/ Methyl Red
R/ KOH 40%
R/ Alpha Naphtol
Nacl 0,9%

Media :1. Media Pertumbahan Bakteri Pseudomonas sp

~ Mac Conkey Agar
~ Endo Agar
~ BA ( Blood Agar )
~ NA ( Nutrient Agar )
2. Media Reaksi Biokimia
1. NA miring
2. Glukosa

Seri gula-gula 1
 3. Laktosa
4. Mannitol
5. Maltosa
6. Sukrosa
7. Sim ( Sulfur Indol Motil)
8. MR ( Methyl red )
9. VP ( Voges Proskawer )
10. SC ( Simon Citrat )
11. TSIA
Spesimen : Biakan bakteri Pseudomonas sp dengan kode sampel ps

HARI I
Materi : 1. Pewarnaan Gram
2. Penanaman pada media pertumbuhan ( MCA, BA & NA )
Tujuan : 1. Untuk mengetahui morfologi dan sifat bakteri terhadap
pewarnaan gram dan memilih media yang cocok.
2. Untuk mengetahui sifat kultivasi (sifat pertumbuhan)
bakteri pada media pertumbuhan.

Prosedur :
I. Pewarnaan Gram
1. Bersihkan objek glass dari lemak dengan cara dipanaskan diatas api bunsen
dan diberi etiket pada bagian atas dan ligkaran pada bagian tengah ,
kemudian dibalik.
2. Ose dipanaskan sampai merah membara dan biarkan dingin.
3. Ambil satu ose kuman letakkan keatas objek glass ditengah lingkaran spidol
yang sudah di beri etiket, ratakan.
4. Ose dipanaskan sampai merah membara
5. Biarkan mengering pada suhu kamar.
6. Fiksasi sebanyak 3 kali diatas nyala api Bunsen.
7. Teteskan zat warna :
a. Gram A ( Carbol gention violet ) selama 1 menit lalu dibilas
b. Gram B ( Lugol ) selama 1 menit lalu dibilas
c. Gram C ( Alkohol 96 % ) sampai zat warna luntur
d. Gram D ( Basic fucshin ) selama 30 detik lalu dibilas

2
 Pembilasan dilakukan dengan menggunakan aquades.
8. Keringkan pada suhu kamar.
9. Periksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 10 x 100.

Hasil pewarnaa Gram :

KRITERIA HASIL GAMBAR

Bentuk Batang Perbesaran 10 X 100
Warna Merah
Susunan Menyebar ( Rain )

Sifat Gram ( - )

II. Penanaman pada media pertumbuhan

1. Penanaman bakteri Pseudomonas sp pada media MCA, NA Dan BA.
2. Disiapkan terlebih dahulu bahan dan alat yang digunakan.
1. Pada cawan Petri yang sudah ada media di beri etiket.
2. Panaskan ose sampai merah membara dan biarkan dingin.
3. Diambil satu ose kuman.
4. Lakukan penyetrekkan pada media dengan jalur zig-zag
1/ 3 bagian padat
1/ 3 bagian sedikit jarang
1/ 3 bagian jarang

3
 5. Diinkubasi pada suhu 37 0 selama 1 X 24 jam dalam posisi terbalik

HARI II

Materi : 1. Pembacaan hasil pada media pertumbuhan( MCA, NA & BA)

2. Penanaman pada media Seri gula-gula Panjang.
3. Pewarnaan Gram.

Tujuan :1. Untuk melihat dan mengetahui sifat kultivasi (ciri-ciri koloni) pada
media MCA, NA & BA.
2. Untuk memperbanyak kuman pada media NA dan untuk mengetahui
sifat biokimia
3. Untuk memastikan atau memperjelas morfologi dan sifat bakteri yang
terdapat pada media.

Prosedur :
1. Pembacaan hasil pada media pertumbuhan.

KRITERIA BA MCA NA
Bentuk bulat bulat bulat
Warna Putih ke abu- Jernih Kehijauan
abuan
Ukuran Kecil besar Besar - besar Kecil sedang
Eluvasi Sedikit Sedikit Sedikit
Cembung cembung cembung
Tepian Rata Rata Rata
Permukaan Smooth smooth smooth
Sifat haemolityc - -

2. Penanaman Pada Media Gula

2.1. Penanaman pada media NA - miring
a. Dipanaskan ose sampai merah membara biarkan dingin.
b. Ambil satu ose kuman secara aseptis lalu ditanam pada media Namiring dengan
cara distrekkan pada permukaan agar.
c. Lalu ose dibakar kembali.

4
2.2. Penanman pada media SIM
a. Dipanaskan ose sampai merah membara biarkan dingin
b. Diambil satu ose kuman kemudian ditusukkan tegak lurus pada media sim
sampai dasar tabung.
c. lalu ose dipanaskan kembali

2.3. Penanaman pada media Methyl Red dan Voges Proskower

a. Dipanaskan ose sampai merah membara biarkan dingin
b. Ambil satu ose kuman lalu ditempelkan pada dinding tabung media MR dan VP.
c. Lalu ose dipanaskan kembali.

2.4. Penanaman pada media Simon Citrate

a. Dipanaskan ose terlebih dahulu sampai merah membara biarkan dingin.
b. Ambil satu ose kuman kemudian strekkan pada permukaan media agar.
c. Lalu ose dipanaskan kembali.

Semua media yang sudah ditam di incubasi 370C dalam incubator 1 x 24 jam

Gambar cara penanaman Seri Gula- gula

5
3. Pewarnaan Gram
Hasil pewarnaa Gram :

KRETERIA HASIL GAMBAR

Bentuk Batang
Warna Merah
Susunan Menyebar ( Rain )
Sifat Gram Negatif ( - )

HARI III
Materi : 1.Pembacaan hasil pada media seri gula gula panjang
2.Diagnosa
3.Kesimpulan

Tujuan : 1.Untuk mengetahui sifat reaksi biokimia pada seri gula-gula .

2. Untuk menilai hasil pekerjaan dari hari I sampai dengan hari III.
3. Menyimpulkan hasil bakteri dalam spesimen.

1. Prosedur pembacaan Hasil

1.1. Interpretasi Fermentasi gula ada 4, yaitu antara lain :
a. Tidak tumbuh :
Bakteri yang ditanam pada media gula tidak tumbuh dan tidak menguraikan
gula, sehingga tidak terjadi perubahan suasana (pH) sehingga warna media tetap
hijau.
b. Negatif ( - ) :
Bakteri yang ditanam pada media gula tumbuh tetapi tidak menguraikan gula
sehingga tidak terjadi perubahan suasana (pH) sehingga warna media tetap hijau
(timbulnya kekeruhan).
c. Positif (+) :
Bakteri tumbuh dan meragikan gula sehingga merubah suasana dari netral ke
arah asam terjadi perubahan indicator BTB dari hijau ke kuning.
d. Positif Gas (+g) :
Terjadi pertumbuhan dan memfermentasi gula sehingga terjadi perubahan
suasana dari netral kearah asam terjadi perubahan indicator BTB dari hijau ke
kuning dan terbentuk gas yang masuk kedalam tabung durham.

6
1.2. Prosedur pembacaan hasil pada media IMVIC :
a. Indol tes (SIM) :
1. Amati pertumbuahannya bakteri yang sudah ditanam media SIM ,
yang telah diincubasikan 370C selama 1 x24 jam
2. Tetesi reagen Erhlich sebanyak 5 tetes melalui dinding tabung .
3. Baca hasil
b. Methyl Red tes :
- Bakteri yang sudah ditanam kedalam media MR, yang kemudian
dieramkan / diincubasi 370C selama 1 2 hari, lalu ditetesi reagen
methyl red sebanyak 5 tetes.
c. Voges Proskouer tes :
- 1 ose bakteri yang sudah ditanam pada media VP, kemudian
diinkubasikan 370C selama 1 - 2 hari, kemudian ditetesi dengan KOH
40% sebanyak 4 dan Alpha Naphtol sebanyak 12 tetes campur, baca
hasil setelah 5 menit terbentuk warna merah jambu, bearati acetyl
methyl carbinol .

1.3. Interpretasi Hasil

1. Indol test : ( + ) terbentuk cincin merah.
( - ) tidak terbentuk cincin merah.
2. MR test : ( + ) warna merah pada lapisan permukaan.
( - ) warna kuning pada lapisan permukaan.
3. VP test : ( + ) warna merah jambu pada lapisan permukaan.
( - ) warna hitam pada lapisan permukaan.
1.4. Pembacaan Hasil
1. Media NA : tumbuh.
2. SIM :
~ Sulfur : (-) tidak terbentuk warna hitam.
~ Indol : (-) tidak terbentuk cincin merah.
~ Motil : (+) ada gerak bakteri
3. MR : ( - ) tidak terbentuk cincin merah
4.VP : ( - ) tidak Terbentuk warna merah jambu
5.SC : ( + ) media berubah menjadi biru
6.TSIA : (L/D) m/m, (-)gas, (-) sulfur
7.Gula : ( + ) hanya pada Glukosa

7
 2. Diagnosa
1. Sifat bakteri terhadap zat pewarnaan Gram :
Gram ( - ) Batang berwarna merah, susunan menyebar ( rain )

2. Sifat terhadap media pertumbuhan :

Pada MCA : Bulat,Jernih, Rata,smooth,sedikit cembung, besar.
Pada BA : Bulat,Putih keabu-abuan ,rata,smooth,
cembung,besar,haemolityc
Pada NA : Bulat,kehijauan,rata,smooth,sedikit cembung,kecil-sedang

3. Pembacaan hasil pada seri gula-gula

S I M TSIA
NA Gl Lk Mn Ml Sk MR VP SC
S I M L/D H2S Gas

tumbuh + - - - - - - + - - + M/M - -

4. Kesimpulan

Dari hasil praktikum didapatkan hasil dari sampel nomor 1 ditemukan bakteri
Pseudomonas Aeroginosa sp.

Jambi , 17 Desember 2014

PRAKTIKAN

SELLA SANTI NOVA

8
 PEMBIMBING PRAKTIKUM

I II III

( DJ. Simanungkalit, SP ) ( Suyoso, AMAK ) ( A. syarthibi, SKM )

IV

(SafruddinLubis,AMAK)