Struktur sel Corynebacterium diphtheriae

BY L. F. HEWITT
Serum Research Institute (Dewan Riset Medis), Carshalton, Surrey

RINGKASAN: Bila diteliti oleh mikroskop kontras fase hidup diphtheria bacilli
umumnya tampak cukup transparan. Mereka kadang-kadang uniseluler namun
sering dibagi menjadi kompartemen oleh silase silang yang terlihat. Pada strain
gravis dan mitis, septa silang biasanya sedikit jumlahnya dan kompartemennya
panjang, namun pada strain intermiten biasanya sering banyak cross-septa, dan
organisme itu menyerupai rantai cocci yang menyatu. Sel berbentuk sel dengan
pembengkakan terlihat pada kultur hidup yang tidak diobati seperti preparat
bakteri yang dirusak dan diwarnai, dan kadang bentuk bercabang ditemukan.
Filamen yang terbagi kadangkala terjadi pada kultur magnesium kekurangan,
sementara pada sel kultur kaya magnesium dengan banyak silang jaraknya jarang.
Kehadiran garam magnesium memiliki beberapa efek perlindungan terhadap
penghambatan pertumbuhan yang dihasilkan oleh garam berilium. Dalam kultur
yang mengandung selenite atau tellurite bakteri menjadi merah atau hitam, butiran
yang mengandung selenium dan telurium terjadi dan daerah yang menyerupai
struktur kromatik dapat dilihat.

Morfologi yang tercatat pada bentonit difteri terutama didasarkan pada organisme
yang terbunuh yang tetap dan diwarnai dengan metode konvensional, namun baru-
baru ini telah terjadi perkembangan prosedur penetapan dan pewarnaan baru
(Badian, 1933; Piekarski, 1937; Stille, 1937; Robinow, 1942; Klieneberger-Nobel,
1945; Knaysi, 1946; Mudd & Smith, 1950; Smith, 1950). Menarik untuk
menentukan berapa banyak penampilan yang terlihat adalah artefak dan
bagaimana mereka sesuai dengan morfologi sel yang tidak diobati. Terjadinya
pembengkakan berbentuk bintang menyebabkan Lehmann & Neumann (1899)
menggunakan nama Corynebacterium yang masih dapat diterima secara umum
(Topley & Wilson, 1946; Bergey, 1948), walaupun sama sekali tidak semua
organisme dalam budaya difteri menunjukkan pembengkakan saat bernoda. Jika,
seperti yang disarankan oleh Bisset (1949, 1950), pembengkakan disebabkan oleh
artefak yang disebabkan oleh penetapan dan pewarnaan, dan jika bakteri difteri
jelas berbentuk batang atau coccal dalam keadaan alami yang tidak diobati,
beberapa perubahan dalam nomenklatur dan klasifikasi tampaknya diinginkan .
Karena mikroskop sel hidup yang menggunakan mikroskop kontras fase relatif
baru, belum pasti struktur seluler terlepas dari bentuk luarnya akan terlihat dalam
berbagai sediaan, atau metode persiapan apa yang paling efektif.

BAHAN DAN METODE

Strain difteri yang diperiksa adalah yang secara serologis diketik sebelumnya
(Hewitt, 1947) dan strain yang baru saja diisolasi. Media kultur yang digunakan
untuk propagasi mereka adalah serum Loeffler, serum agar dan plat agar darah,
dan berbagai kaldu khusus yang akan disebutkan kemudian. Sebagian besar
persiapan yang dilakukan dilakukan dengan modifikasi teknik sel slide (Fleming,
Voureka, Kramer & Hughes, 1950; Pulvertaft & Weston, 1950). Organisme halus
mungkin rusak akibat pengeringan atau pemanasan berkepanjangan. Untuk
menghindari erusakan yang parah dari bakteri pada penutup-slip tidak boleh
dibiarkan tetap terpapar udara lama dan jika dipasang di media cair, suhu harus
dibiarkan jatuh sebelum kultur ditutup. Indeks bias gelatin 30%, serta titik
leburnya, membuatnya lebih unggul dari agar untuk berbagai keperluan, dan
dalam kebanyakan kasus, hasil yang baik diperoleh dengan gelatin. Semua
preparat diperiksa dengan menggunakan 2 mm. Tujuan kontras fase dari Cooke,
Troughton & Simms.
PENGAMATAN
Sitoplasma sel hidup C. diphtheriue dalam persiapan yang dijelaskan di atas,
seringkali hampir transparan, dan septa silang yang membagi sel menjadi
kompartemen jelas terlihat tanpa pewarnaan. Pada strain gravis dan mitis yang
digambarkan pada P1. 1, buah ara 1-5, sel yang mengandung satu sampai tiga
silang terlihat. Gambar, 1 dan 2 menggambarkan bidang yang sama pada 2 jam.
selang; Pada saat itu septum ekstra silang telah muncul di sel di tengah lapangan.
Pembagian sel terjadi pada persilangan silang namun tidak ada penyempitan pada
sel pada titik ini yang telah diamati sebelumnya. Kedua sel putri itu tiba-tiba
membungkuk sehingga menimbulkan formasi 'surat cina' yang sudah dikenal.
Sebagai perbandingan ada ditunjukkan pada P1.1, buah ara. 6, $ 2, dua preparat
bebek pembunuh difteri yang dioleskan pada uap osmium tetroxide dan 70 yo
ethanol, diiratkan dalam 10 asam yann dan diwarnai dengan kristal violet, sebuah
prosedur yang digunakan untuk menunjukkan dinding sel (Gutstein, 1924).
Kesamaan yang erat antara penampilan sel hidup yang diperiksa dengan
mikroskop kontras fase dan sediaan yang bernoda sangat mencolok, berbeda
dengan penampilan preparat yang sangat berbeda yang dibuat dengan metode
fiksasi panas konvensional dan metode pewarnaan. Beberapa strain pada
pertunjukan tertentu, selain bentuk seperti batang yang sederhana, bentuk klub
dan organisme yang bengkak (Pl 1, gambar 3; P1.2, gambar 16-19). Sesekali
bentuk bercabang tak terbantahkan ditemui, seperti yang bisa dilihat dengan jelas
di P1. 2, buah ara 8-13. Struktur nuklir umumnya tidak terlihat pada kultur yang
tumbuh pada media biasa namun beberapa struktur terperinci dapat dilihat pada
PI. 3, Ara. 32. Strain Intermedius sangat berbeda dalam penampilan dari strain
gravis atau mitis. Banyak silang membagi sel menjadi kompartemen seperti
kompartemen lingkaran atau oval, yang masing-masing dapat ditunjukkan dengan
metode pewarnaan yang sesuai untuk mengandung tubuh kromatin. Di P1. 2, ara
14, ditunjukkan foto fase-fase regangan intermedius, dan pada P1. 2, ara 15,
regangan yang sama dengan uap osmium tetroxide dan 70 yo ethanol, dipanaskan
dengan N-HC ~ dan diwarnai dengan larutan Giemsa encer (Robinow, 1942).
Jelas bahwa setiap kompartemen seluler dibatasi oleh dinding sel dan
mengandung struktur nuklir. Tampilan khas strain intermediate yang diwarnai
dengan metode rutin konvensional terbukti karena struktur multi-seluler ini dan
pewarnaan material nuklir yang lebih dalam di kompartemen terpisah. Dalam
beberapa budaya organisme intermediasi terlihat di mana septum silang terbentuk
di bagian terluas dari kompartemen seluler (Gambar 2, gambar 16, 17). Gambaran
diagram dari bentuk khas bentonid difteri hidup ditunjukkan pada Gambar 1. Pada
lc diperlihatkan dinding sel dari strain intermedius dan Di E bahan nuklir di
kompartemen sel seperti yang diungkapkan oleh metode pewarnaan Giemsa yang
baru saja disebutkan. Webb (1948) menggambarkan efek kekurangan magnesium
dalam menghambat pembelahan sel beberapa spesies bakteri Gram positif. Dalam
kasus defisiensi magnesium C. diphoriae menyebabkan pembatasan atau bahkan
penghambatan pertumbuhan yang lengkap, dan kadang-kadang bentuk filamen
terlihat. P1. 3, Ara. 29, adalah grafik foto strain gravis yang tumbuh dalam kaldu
kekurangan magnesium. Cross-septa

Gambar 1. Bentuk sel khas C. diphtheriae. (Semua mewakili tampilan kontras fase
sel hidup kecuali saya yang merupakan preparasi bernoda setelah fiksasi dengan
asam osmat dan hidrolisis dengan asam.)
Telah terbentuk, namun ruptur akhir sel belum terjadi dan filamen terbentuk.
Dalam P1.3, gambar. 30, ditunjukkan strain yang sama tumbuh pada waktu yang
sama dalam kaldu yang sama dengan 0,1 yo magnesium sulfat yang telah
ditambahkan. Tidak ada silang yang terlihat dan sel-sel pendek memiliki daerah
refraksi yang lebih tinggi di kutub, mungkin karena akumulasi kompleks asam
nukleat magnesium. Contoh lain bentuk filamen C. diphtheriae yang tumbuh pada
media kekurangan magnesium terlihat pada P1. 3, Ara. 31. Pada beberapa strain
gravis, defisiensi magnesium menyebabkan munculnya banyak silang dalam sel
sehingga menyerupai strain interrnedius. Garam berilium dalam konsentrasi lebih
dari sekitar 0,004 ~ 0 menghambat pertumbuhan C. diphtheriae, beberapa strain
menjadi lebih sensitif daripada yang lain. Dengan adanya kelebihan garam
magnesium (1 yo), penghambatan ini sebagian dapat dibalik, menunjukkan
kemungkinan bahwa berilium dapat menghambat pertumbuhan berdasarkan
antagonisme kompetitif terhadap magnesium yang dibutuhkan untuk proses enzim
seluler. Pengurangan tellurite oleh difteri bacilli sangat diketahui (Conradi &
Troch, 1912), dan di media yang mengandung koloni selenit C. diphtheriae
menjadi merah tua berwarna merah karena produksi selenium (Hewitt, 1947). Sel
hitam atau abu-abu C. diphtheriae tumbuh di media kirim memiliki
beberapabentuk yang tidak biasa; Bakteri yang hidup tampak melengkung dan
sulit dipotret. Struktur seluler yang sangat refraktori terlihat dan sering ada pasang
bintik kecil di setiap kompartemen seluler (PI 2, gambar 20-25). Bintik-bintik ini
memiliki indeks bias tinggi dan kadang-kadang tampak ringan dengan mikroskop
kontras fase karena sifatnya yang sangat refraktil. Beberapa bentuk aneh yang
terlihat diwakili secara diagram pada Gambar 2. Bangkai difteri yang tumbuh di
media selenite juga memiliki patch refraktori seperti yang terlihat pada PI. 3, buah
ara 26-28. Tampaknya tellurium dan selenium dasar ketika dibentuk oleh proses
reduksi seluler dapat disimpan secara lokal di dalam sel, mungkin di wilayah
struktur nuklir. Munculnya sel hidup dari beberapa corynebacteria berbeda
ditunjukkan pada PI. 3, buah ara 33-38. Termasuk C. pyogenes, C. hofmannii,
difteri, dan C. fascian, agen infektif tanaman (diberikan oleh Dr S. E. Jacobs).

Gambar 2. C. diphtheriae; Sel hidup tumbuh di media yang mengandung tellurite

atau selenite, dan dalam magnesium-deficient broth.
PEMBAHASAN Pleomorphism C. diphtheriue sangat jelas ketika sel hidup
diperiksa dengan mikroskop kontras fase. Bentuk bacillary oval kecil, bakteri
tersegmentasi panjang dan bentuk bercabang kadang terlihat. Organisme dengan
bentuk klub dan pembengkakan kutub terjadi dan membenarkan nomenklaturnya
sebagai corynebacteria. Karena bentuk klub terlihat dalam budaya hidup, mereka
bukanlah artefak karena diperbaiki dan diwarnai. Di banyak media kultur,
refraktivitas dan transparansi sel yang relatif seragam membuat mudah terlihat
silang yang sering ada dan membagi sel menjadi dua atau lebih komplemen.
Dalam kasus strain mitis dan gravis umumnya ada sedikit persilangan silang dan
kompartemennya panjang, namun pada tipe intermediol terdapat banyak
kompartemen melingkar. Segmentasi ini menyumbang munculnya karakteristik
strain intermediate yang khas, karena sel-sel tersebut mengandung banyak silang
dan seringkali menyerupai rantai koksa leburan. Bentuk eksternal adalah
serangkaian tonjolan, masing-masing tonjolan yang mewakili kompartemen
seluler tunggal yang dengan metode pemasangan dan pewarnaan yang tepat dapat
ditunjukkan mengandung bahan kromatin. Agaknya setiap kompartemen seluler
pada segmentasi mengandung struktur genetik lengkap untuk transmisi
karakteristik regangan. Meskipun serupa dalam reaksi fermentasi, strain
intermediate dapat dibedakan dari kelompok mitis, tidak hanya oleh
penampilannya saat diwarnai tetapi juga dengan metode serologis (Hewitt, 1947).
Tampilan tersegmentasi dari sel hidup memberikan satu bukti lagi bahwa
diferensiasi ke dalam kelompok intermedius dan mitis secara tegas didasarkan
pada perbedaan sitologi yang pasti. Penyusutan selama fiksasi panas mengubah
penampilan C. diphtheria yang diwarnai dengan metode rutin, namun ada
kemiripan yang sangat dekat dengan penampilan dinding sel dan silang dalam sel
hidup dan dalam preparasi bernoda yang diperbaiki oleh asam osmat dan
diimplikasikan dengan Asam tanat Faktor yang paling penting dalam morfologi
bakteri adalah komposisi media kultur. Biasanya perkalian C. diphtheriue terjadi
karena pembagian posisi septik silang, sel punca betina membungkuk, akhirnya
membentuk kelompok sel yang berdekatan yang berdekatan yang mudah
terjangkit organisme lain, sehingga memungkinkan kultur sel tunggal dan isolasi
sangat sulit. Seperti yang dilaporkan oleh Webb (1948) dalam kasus organisme
lain, defisiensi magnesium pada media kultur mengganggu pembelahan sel C.
diphtheriae dan bakteri yang tidak terpecah dengan banyak silang dapat
ditemukan. Beberapa bukti diperoleh antagonisme timbal balik antara magnesium
dan garam berilium dan beberapa pembalikan efek toksik berilium dengan
kelebihan besar garam magnesium diamati. Warna hitam dan merah diasumsikan
oleh bakteri difteri yang tumbuh di media sampingan dan selenite masing-masing
adalah karena pengendapan unsur-unsur di daerah yang didefinisikan di dalam sel
dan tampaknya ada replikasi deposit ini di setiap segmen sel. Tampak mungkin
bahwa deposisi ini terjadi di lokasi struktur nuklir kompartemen sel dan pasang
bintik-bintik refraksi yang terlihat serupa dengan pasangan struktur kromatik yang
dilaporkan oleh Robinow (1942) pada spora B. mycoides. Diperlukan
penyelidikan lebih lanjut mengenai hal-hal ini, namun nampaknya yakin bahwa
mikroskop kontras fase, yang digabungkan dengan variasi media kultur dan
dengan perlakuan kimia lainnya, kemungkinan akan sangat berkontribusi dalam
pengembangan sitologi bakteri.