Fase preanalytical sangat penting dalam hematologi, di mana jumlah partikel dan

sel dilakukan di seluruh darah antikoagulan. Penggunaan yang benar dan.

Konsentrasi antikoagulan adalah wajib untuk menghindari palsu
hasil, yang dapat mempengaruhi keputusan klinis. EDTA adalah
antikoagulan pilihan, tetapi memiliki beberapa batasan, terutama untuk
menjaga stabilitas dan bentuk trombosit. Stabilitas hematologis
parameter tinggi, dengan pengecualian leukosit
dan retikulosit. Namun, stabilitas (dan ketepatan instrumental)
harus dievaluasi bersama dengan variabilitas biologis
dan indeks individualitas dari berbagai parameter hematologis.
Tes hematologi juga dipengaruhi dan terganggu oleh
jumlah lipid dan kilomikron yang tinggi. Prosedur pencampuran
dari tabung setelah menggambar darah dan sebelum analisis
juga penting untuk mendapatkan data yang benar dan valid. Ada
beberapa contoh gangguan pada hematologi otomatis
analisa yang digunakan untuk mendiagnosis dan melakukan skrining
kondisi patologis. Cryoglobulin dan parasit erythrocytes
dapat menyebabkan hasil palsu WBC, RBC dan PLT, tetapi
pengulangan interferensi ini dapat digunakan untuk
memperingatkan ahli patologi dan dapat mengungkapkan keberadaan
protein patologis atau parasit darah. Parameter baru
telah diusulkan oleh analisa hematologis modern,
langsung ditentukan atau dihitung dari ukuran tradisional, tetapi
dampak klinis dari parameter baru ini sering tergantung
pada variabel preanalitik.

Faktor-faktor preanalitik adalah sumber penting

variasi atau kesalahan dalam pengukuran laboratorium klinis.
Variasi dalam koleksi spesimen dan efek keterlambatan
dalam pretreatment sampel diperiksa secara spesifik
belajar dengan mengumpulkan spesimen darah dari kedua lengan
10 orang dari petugas laboratorium di Laboratorium
Pusat Rumah Sakit Universitas Tampere. Sampel
dari 14 orang dewasa termasuk orang sehat dan
pasien dari klinik rawat jalan digunakan untuk memeriksa
efek dari transportasi regional. Yang diterbitkan
perkiraan ketidakpastian termasuk komponen-komponen berikut:
variasi biologis (diperoleh dari literatur),
koleksi spesimen dari kedua lengan, penundaan
pretreatment spesimen setelah pengumpulan, transportasi regional (juga
digunakan untuk pasien rawat jalan di rumah
menghadiri rumah sakit) dan variasi analitik
(Ketidakpastian yang tersisa setelah koreksi untuk bias yang diketahui).
Ketidakpastian pengukuran eritrosit
count (RBC), mean corpuscular volume (MCV)
dan konsentrasi hemoglobin (Hb) kecil. Itu
stabilitas sampel untuk pemeriksaan hematologis
baik kecuali trombosit (PLT), yang seharusnya
dianalisis tanpa penundaan. Ketidakpastian pengukuran
jumlah leukosit (WBC) idealnya harus diperkirakan
juga pada level yang lebih signifikan dalam klinis
pasien (di bawah 1 x 109 / L dan 50 x 109 / L), dan di
kondisi non-puasa yang digunakan untuk pasien darurat.
Transportasi secara luas meningkatkan ukuran
ketidakpastian retikulosit (Ret), yang dicirikan
dari variabilitas analitis yang tinggi, meskipun
pengenalan di laboratorium rutin instrumen otomatis
(1). Oleh karena itu, variabilitas total Ret cukup
tinggi dan itu bisa mempengaruhi interpretasi klinis
data, terutama ketika hasil ini memiliki tujuan hukum
(2).

Ada korelasi lemah antara Hb dan indeks massa tubuh (BMI) di atlet profesional
milik
untuk disiplin olahraga yang berbeda, sementara korelasinya
kurang untuk parameter hematologi lainnya. Karena itu
variabilitas massa tubuh tidak sangat mempengaruhi
stabilitas parameter hematologis (3).
Stabilitas parameter hematologi
tinggi: Hb dan hematocrit (Ht) stabil selama 48 jam,
trombosit dan indeks eritrosit selama 24 jam. Leukosit
stabil selama 48 jam, tetapi jumlah diferensial harus
dilakukan sebelum 6 jam dari gambar darah. Stabilitas
Ret lebih rendah daripada parameter hematologis lainnya
dan itu juga tergantung pada teknik analitik
(4).
Nilai Ret diukur pada Sysmex XT2000
dalam spesimen EDTA disimpan pada temperatur yang berbeda
selama selang waktu 72 jam dari gambar
menurun secara konsisten setelah 4, 8, 24 dan 48 jam pada
suhu ruangan, tetapi tampaknya cukup stabil dalam spesimen
disimpan pada 2 ° C. Nilai-nilai Ret utama stabil
hingga periode penyimpanan 72 jam, tetapi ini diatributkan
ke artefak dari sistem hematologi. Meskipun
Nilai Ret, Ht dan Hb pada dasarnya stabil pada 2 ° C
selama 24 jam, Ht menunjukkan bias signifikan yang diatributkan
modifikasi MCV (5). Darahnya bisa
dipindahkan pada suhu kamar, tetapi suhu 4 ° C
optimal, terutama untuk trombosit (6).

Pengambilan gambar darah harus dilakukan secara ideal

ketika subjek sedang berpuasa. Ini sangat penting
untuk mendapatkan serum yang jernih dan untuk menghindari gangguan yang
disebabkan
untuk kekeruhan pada analisis kimia klinis. Hematologi
tes juga dipengaruhi dan terganggu dari tinggi
jumlah lipid dan kilomikron. Hyperlipemic
sampel dapat menyebabkan hasil palsu Hb, biasanya
meningkatkan nilai. Misalnya, nilai tinggi
MCHC (> 360 g / L), karena interferensi langsung
pengukuran spektrofotometri Hb, telah dijelaskan dalam spesimen dari pasien
yang menderita
hipertrigliseridemia genetik atau diperoleh (7) atau dari
pasien yang menerima emulsi intravena (8). Sangat tinggi
konsentrasi trigliserida (> 6,59 mmol / L) mengganggu
dengan pengukuran hemoglobin, seperti yang dijelaskan pada
instrumen Coulter. Ketika lipid membentuk tetesan
memiliki volume tinggi, mereka bisa mengganggu PLT
hitungan: gangguan pada jumlah trombosit pada Bayer
instrumen dilaporkan ketika konsentrasi trigliserida
adalah> 3,44 mmol / L (8).
Gangguan pada WBC dan di scatterplots tertentu
dari jaringan adiposa subkutan telah
dilaporkan dalam sampel yang diperoleh oleh femoralis traumatik
vena tusukan (9).
Konsentrasi glukosa yang tinggi dapat menginduksi spurious
nilai tinggi MCV. Selama fase pengenceran
darah, segera setelah aspirasi sampel ke dalam
instrumen, RBC membengkak, karena air ditimbulkan oleh
jumlah glukosa yang tinggi hadir dalam RBC.
Konsentrasi glukosa darah sangat tinggi
(> 27,75 mmol / L) menginduksi efek osmolar pada eritrosit:
MCV, MCHC, dan Ht tidak akurat. Bayer
teknologi tampaknya sangat sensitif terhadap hal ini
efek, karena RBC adalah isovolumetrically sphericized
dalam instrumen ini (10).
Ada beberapa aspek dari prosedur preanalytical
yang terkadang diabaikan, tetapi mereka
mempengaruhi hasil analitis, meskipun dengan level yang berbeda
signifikansi, karena perubahan tidak selalu
secara klinis penting. Misalnya, aplikasi tourniquet
selama waktu 2,30 ± 0,12 menit pada 27
pengendara sepeda profesional menginduksi modifikasi berikut:
Ht + 2.4%, Hb +1.4%, Ret –1.9%. Itu harus
dijabarkan bahwa dalam empat dari dua puluh tujuh atlet
Modifikasi Ht lebih tinggi dari tujuan analitis dan itu
bisa sangat penting untuk tujuan hukum (11).
Prosedur pencampuran tabung setelah
gambar darah dan sebelum analisis juga penting untuk
mendapatkan data yang benar dan valid. Misalnya, kapan
dibandingkan dengan spesimen referensi terbalik 6
kali, hasil pada spesimen tidak terungkap menunjukkan signifikan
menurun untuk jumlah sel darah merah, hemoglobin,
hematokrit dan jumlah trombosit, sedangkan rata-rata
volume trombosit meningkat secara signifikan (12).
Persiapan dan perawatan yang tepat dari tabung
sangat penting untuk mendapatkan data yang benar: overfilling
tabung koleksi mengarah ke pencampuran sampel yang tidak memadai
dan pengaturan konten seluler: semua parameternya
diubah (13).
Ritme sirkadian tidak layak untuk hematologis
parameter

Nadir (nilai terendah selama 24 jam) untuk Ht

ditunjukkan pada malam hari dengan variasi ke dalam hari
5% (dari 45,3 ± 3,1 hingga 42,9 ± 1,5%, pada 8 individu);
variasinya lebih tinggi ketika latihan submaksimal
diadakan. RBC, Hb, dan Ht menunjukkan irama sirkadian amplitudo rendah,
dengan acrophase (bagian tertinggi dari
fluktuasi normal) pada jam 11:00, yang lebih rendah
dari variabilitas analitis. WBC memiliki acrophase
pada malam hari (21.00–24: 00) dengan variasi 0,9-2,0
x 109 / L. Ret menunjukkan acrophase pada 01:00 (antara
20:00 dan 04:30; fluktuasi lebih tinggi daripada analitis
variabilitas; standarisasi gambar di
dini hari diperlukan.
Ritme circaseptan untuk RBC, Hb dan Ht adalah
dilaporkan, dengan acrophase pada hari Senin. Variasi musiman
menentukan hemodilusi pada musim panas (peningkatan
dari 9% volume plasmatic) (14).
EDTA adalah antikoagulan pilihan untuk hematologi
pengujian (15).
PH EDTA bervariasi berdasarkan jenis garam:
keasaman EDTA menurun ketika jumlah ion
meningkat. Larutan asam bebas dari EDTA menunjukkan pH
2,5 ± 1,0, sedangkan garam K3 (larutan 1%) dicirikan
dengan pH 7,5 ± 1,0. Garam EDTA adalah hiperosmolar,
menyebabkan hilangnya air dari sel. Sel menyusut
kurang jelas ketika K2 dan Na2 EDTA digunakan.
Microhaematocrit, referensi International Council
untuk Standardisasi dalam Hematologi (ICSH) metode untuk
Volume sel dikemas (PCV), tidak dipengaruhi oleh K2 dan
Na2EDTA, sementara itu dikurangi oleh K3EDTA. Jadi, K2
harus lebih disukai daripada garam K3, seperti yang direkomendasikan oleh
Komite Nasional untuk Standar Laboratorium Klinis
(NCCLS) (16, 17).

berarti volume corpuscolar (MCV) dan menghitung

PCV. Efek penyusutan sel seharusnya tidak secara klinis
penting. Sebaliknya, konsentrasinya
sangat penting. Dacie & Lewis mengusulkan konsentrasi K2EDTA
1,5 ± 0,25 g / L dan konsentrasi yang sama adalah
direkomendasikan oleh NCCLS (1,5-2,2 g / L), sedangkan
ICSH merekomendasikan konsentrasi 4,55 mmol / L dari
darah (18). Ketika konsentrasi EDTA meningkat,
MCV diukur dengan instrumen otomatis
bervariasi dipengaruhi, tetapi pada dasarnya cenderung meningkat. Ini
efek kurang jelas ketika K3 digunakan (19).
Hirudin, polipeptida dari 7 KDa dihasilkan dari
kelenjar ludah lintah, menghambat koagulasi pada sangat
dosis rendah (10 mg per 1 mL darah) dan tidak
membutuhkan kehadiran antitrombin. Hirudin ireversibel
berikatan dengan ekor carboxyterminal ke fibrinogen
situs pengikatan thrombin, menghambat konversi
fibrinogen menjadi fibrin. Dalam penyelidikan baru-baru ini, hasilnya
pengujian laboratorium dalam sampel yang dikumpulkan dalam 4 tabung mL
mengandung konsentrasi hirudin akhir 1000 antitrombotik
unit aktivitas per ml dibandingkan
yang diperoleh dalam sampel yang dikumpulkan oleh K2 tradisional
EDTA dan tabung serum (20). Secara keseluruhan, hasil dari CBC
dan parameter hematologi cukup memuaskan.
Korelasi yang lebih rendah hanya dicatat untuk monosit
dan basofil; monosit kadang-kadang diakui
sebagai basofil di Coulter STKS

EDTA tidak mampu menstabilkan sepenuhnya PLT yang memungkinkan

terjadinya beberapa perubahan morfologis. Ketika bersentuhan dengan EDTA,
PLT menjalani waktu yang berbeda modifikasi dari diskus menjadi bola
bentuk. Meskipun beberapa hemocytometers modern
mengukur volume rata-rata PLT (MPV), penggunaan klinisnya
telah dibatasi oleh beberapa perangkap preanalytical. MPV
mungkin merupakan temuan klinis yang valid untuk mendeteksi sumber
dari trombositopenia. MPV normal dalam autoimun
trombositopenia, sementara itu meningkat dalam disebarluaskan
koagulasi intravaskular (DIC), mikroangiopati
atau dalam patologi merusak pematangan PLT
dan lepaskan (21). Ada hubungan terbalik yang konsisten
antara jumlah dan volume PLT, seperti yang ditunjukkan
oleh Bessman (22); hubungan semacam itu linear
hingga 400 x 109 / L PLT. Modifikasi MPV
tergantung pada waktu kontak dengan antikoagulan.
Mekanisme ini melibatkan modifikasi membran
permeabilitas, melalui AMP siklik (cAMP)
reaksi mediasi. PLT mengalami bola
berubah, menghasilkan peningkatan volume yang nyata
ketika partikel melewati sebuah impedansi berbasis
analisa. Peningkatan volume terbukti dalam 60 menit
mengikuti gambar darah dan menjadi lebih jauh
stabil dalam tiga jam. Karena itu, MPV seharusnya
selalu diukur pada waktu yang tetap dari gambar darah
untuk memungkinkan intra yang dapat diandalkan (longitudinal) dan antar-
individu
perbandingan (23).

Peningkatan volume PLT pada umumnya

diamati dengan menggunakan analisa impedansi. Di lightscattering-
hemositometer berdasarkan, di mana hematologi
parameter ditentukan oleh volume dan cahaya
indeks refraksi, MPV terukur lebih bervariasi.
MPV biasanya menurun dalam sistem ini,
meskipun peningkatan yang kurang sering dapat dicatat dalam
sepertiga dari kasus. Ketika kedua teknologi itu
dibandingkan, tidak ada perbedaan yang signifikan untuk
Jumlah PLT, sementara MPV hemositometer berbasis hamburan cahaya
lebih rendah daripada MPV yang berbasis impedansi
satu (24).
Antikoagulan selain EDTA telah diusulkan
untuk mendapatkan pengukuran yang benar dan valid
MPV, termasuk ACD (adenosin, sitrat, dan dekstrosa)
dan Na2EDTA, natrium sitrat dan PGE1 (prostaglandin
E1) (22), CTAD (sitrat, teofilin, adenosin, dekstrosa) dan pyridoxalphosphate,
yang memiliki
telah divalidasi pada sistem berbasis impedansi (15).
Pseudothrombocytopenia yang diinduksi EDTA dapat terdeteksi pada
beberapa sistem otomatis oleh sarana bendera dan grafik. Selain itu, dapat pula
dibedakan dengan membandingkan data yang diperoleh pada sampel yang
ditampung dalam tabung EDTA dan natrium sitrat. Pseudothrombocytopenia
mungkin terkait dengan hasil negatif jika dibiarkan tidak terdeteksi, dan memicu
penyelidikan lebih lanjut yang tidak perlu. Pseudothrombocytopenia yang
diinduksi EDTA dapat diamati baik dalam kesehatan atau penyakit
dan mereka tidak terkait dengan jenis kelamin dan usia.
Sebagaimana yang dilaporkan dalam beberapa studi epidemiologi (27-
32), prevalensi pseudothrombocytopenia yang diinduksi EDTA hampir 0,1% dan
frekuensinya tampak lebih tinggi pada pasien trombositopenik, mulai dari 1,25%
menjadi 15,3%

Rupanya, bentuk trombositopenia palsu ini disebabkan oleh autoantibodi IgM

yang ditujukan
glikoprotein IIa dan IIIb pada permukaan PLT. Di
Bahkan, PLTs pasien dengan penyakit Glanzmann, yang
ditandai oleh kurangnya ekspresi IIa / IIIb
kompleks, tidak bereaksi dengan autoantibodi
subjek pseudothrombocytopenic (34).
Kompleks IIa / IIIb sangat penting untuk adhesi PLT,
langkah pertama agregasi dan pembentukan trombus.
EDTA dapat menginduksi modifikasi struktural
morfologi dan eksternalisasi kompleks, memicu
reaksi imunologi dengan autoantibodi.
Fenomena ini tampaknya tidak dimediasi
oleh kalsium chelation dan telah dilaporkan juga
untuk molekul yang mirip dengan EDTA, sebagai ethylentriamminopentaacetic
asam (35). Apalagi, kinetiknya
waktu - tetapi tidak bergantung pada suhu (36); tiba-tiba
muncul dalam waktu dua jam dari gambar darah, sebagai
ditunjukkan oleh sebuah kasus yang terjadi selama rawat inap
pasien (37).
Ada beberapa contoh interferensi
analisa hematologis otomatis yang digunakan
untuk mendiagnosis dan memeriksa kondisi patologis.
Cryoglobulin dan parasit eritrosit dapat menginduksi
hasil palsu dari WBC, RBC dan PLT, tetapi pengulangannya
interferensi-interferensi ini dapat digunakan untuk mengingatkan
ahli patologi dan mengungkapkan keberadaan patologis
protein atau parasit darah. Cryoglobulin telah
didefinisikan sebagai protein serum dengan bergantung pada suhu
kelarutan, mewakili peningkatan anomali dari
konstituen protein normal serum. Paraprotein
terkait dengan mieloma atau imunoproliferatif
Gangguan ini sering berupa cryoglobulins. Curah hujan
cryoprotein tergantung pada konsentrasi mereka, imunoglobulin
kelas yang mereka miliki, dan pH
medium (38).
Krioglobulinemia idiopatik ditandai
oleh trias gejala: purpura, arthralgia dan kelemahan,
sering disertai gagal ginjal, tetapi seperti itu
Kondisi ini sering dikaitkan dengan banyak penyakit yang berbeda
(cryoglobulinaemia sekunder). A yang umum digunakan
klasifikasi mencakup tiga jenis cryogobulins (39):
imunoglobulin monoklonal tunggal, secara karakteristik
ditemukan pada pasien dengan multiple myeloma atau Waldenstrom's
macroglobulinaemia, biasanya IgM, lebih jarang
lgG, dan jarang IgA; monoclonal-polyclonal
(cryoglobulin campuran); cryoglobulin campuran poliklonal,
berhubungan dengan infeksi atau penyakit radang atau,
lebih jarang, idiopatik. Secara tradisional, untuk menyaring
kehadiran cryoglobulin, serum harus disimpan
pada 4 ° C selama beberapa hari dan diperiksa penampilannya
dari endapan yang sepenuhnya reversibel pada rewarming. Endapan dapat
dikuantifikasi, setelah
sentrifugasi serum dalam tabung.
Kehadiran cryoglobulin dapat mempengaruhi hematologi
tes laboratorium. Pada analisa otomatis dari
Kriogenik seri Coulter bertahun-tahun yang lalu telah dijelaskan
untuk menghasilkan pseudoleukocytosis dan / atau pseudothrombocytosis,
karena endapan globular atau silindris
dibentuk oleh protein dihitung sebagai sel atau partikel
(38, 40). Dengan penghitung otomatis lainnya, seperti itu
sebagai orang-orang Technicon, yang menggunakan reagen-reagen baru
dan pengencer IBC pada pH rendah (3,2) kriopresipitasi
tidak terjadi (41): cryoprotein tidak mengendap
pada pH <5.0 atau> 8.0. Dalam instrumen Technicon,
namun, interferensi terlihat pada jumlah PLT,
menunjukkan kurva distribusi hiperbolik yang sangat mirip
ke WBC satu dalam sistem impedansi (42).
Terjadinya cryoprecipitate di Coulter
instrumen dalam kasus cryoglobulinaemia, bukan
menjadi sumber hasil yang tidak akurat, mewakili suatu
temuan penting dalam deteksi laboratorium cryoglobulins.
Kami menjelaskan kemungkinan penggunaan pseudoleukocytosis
dan koresponden khas hiperbolik
bentuk kurva WBC untuk menyaring keberadaan cryoglobulins
(43).
Sensitivitas tinggi (10 ditandai 14 kasus),
spesifisitas yang tinggi (ada di beberapa pasien
dengan cryocrit serendah 3% dan kurangnya false-positive
hasil), dan reproduktifitas yang baik (semua kasus diikuti
dikonfirmasi) memungkinkan kita untuk mempertimbangkan interferensi
protein krioprecipitable dalam pola Coulter
(memberikan hasil yang palsu, tetapi mudah dikenali),
alat penting dalam mendeteksi cryoglobulinaemia
bahkan pada pasien yang tidak terduga. Histogram WBC
diamati pada cryoglobulinaemia tampaknya
spesifik untuk penyakit ini, karena belum pernah ditemukan di
kondisi lain. Dalam beberapa kasus, cryoprecipitates
kecil dan mereka tidak dapat mempengaruhi WBC
menghitung, tetapi mereka mengganggu diferensial, sementara
diklasifikasikan sebagai limfosit (44).
Deskripsi dari beberapa hasil palsu diinduksi
oleh kehadiran parasit malaria yang bersangkutan tunggal
kasus: pada satu pasien yang dirawat karena malaria, RBC kecil
terinfeksi oleh trofozoit dari Plasmodium falciparum
disalahartikan sebagai PLT oleh analyzer, mengarah ke
jumlah PLT palsu (45). Peningkatan
sensitivitas analisa memungkinkan laporan akurat
interferensi tetap parasit malaria pada neutrofil
plot lobularity di Abbott Cell Dyn, menginduksi yang aneh
awan tambahan diwakili dari RBCs parasit.
Sebuah penelitian menggunakan Abbott Cell-Dyn 4000 dan sinar laser
analisis depolarisasi menemukan bahwa kasus yang diobati sembuh
malaria tanpa parasitemia residual ditunjukkan pola depolarisasi abnormal. Ini
adalah
dijelaskan oleh kinetika clearance hemozoin. Itu
pengangkatan monosit yang mengandung pigmen lebih lambat
(median, 216 jam) dibandingkan dengan eritrosit yang parasit
(median, 72 jam) (46). Sebuah penelitian menyaring parasit
melalui metode analisis Coulter VCS. Ini
metode deteksi tergantung pada perubahan volume SD limfosit dan monosit di
hadapannya
malaria. Dengan menggunakan perhitungan, "faktor malaria" adalah
diproduksi. Faktor malaria yang lebih besar dari 3,7 adalah
indikator infeksi malaria: kekhususan metode
adalah 94% dan sensitivitas 98%. Palsu-positif
hasil dari penelitian ini hampir eksklusif dari
sampel dari pasien dengan infeksi selain malaria
dan pasien dengan HIV. Beberapa infeksi bakteri dan virus
termasuk HIV tampaknya meningkatkan standar deviasi
(SD) dari volume limfosit dan karenanya
dapat menyebabkan hasil positif palsu untuk malaria saat
Faktor malaria digunakan untuk diagnosis. Saat malaria
faktor lebih besar dari 3,7 digunakan bersama dengan
algoritma menggunakan volume SD dari monosit,
berarti volume monosit, trombosit rendah dan eosinofil
jumlah, dan kehadiran puncak di WBC
ambang batas memantau histogram untuk mendeteksi malaria, spesifisitas
ditingkatkan