ISOLASI METABOLIT SEKUNDER

DARI FRAKSI ETIL ASETAT TUMBUHAN SIAK-SIAK

(Dianella ensifolia (L.) DC.)

PROPOSAL PENELITIAN

Oleh:
NAWWAR IRFAN
NIM : 1501032

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI RIAU
YAYASAN UNIV RIAU
PEKANBARU
2019
 DAFTAR ISI

Halaman
DAFTAR ISI ................................................................................................. i
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... iii
DAFTAR TABEL ........................................................................................ iv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ v
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1
Latar belakang ........................................................................................... 1
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.................................................................. 4
2.1 Tinjauan Umum Tumbuhan Siak-siak ................................................ 4
2.1.1 Klasifikasi Tumbuhan Siak-siak .................................................. 4
2.1.2 Nama Lain dan Habitatnya .......................................................... 4
2.1.3 Deskripsi Tumbuhan siak-siak .................................................... 5
2.1.4 Penggunaan Secara Tradisional dan Ilmiah ................................. 5
2.1.5 Kandungan Kimia Tumbuhan siak-siak ...................................... 5
2.2 Tinjauan Metabolit Sekunder .............................................................. 9
2.2.1 Alkaloid ....................................................................................... 9
2.2.2 Flavonoid ..................................................................................... 10
2.2.3 Tanin ............................................................................................ 11
2.2.4 Steroid .......................................................................................... 12
2.2.5 Terpenoid ..................................................................................... 12
2.2.6 Saponin ........................................................................................ 13
2.2.7 Fenolik ......................................................................................... 13
2.3 Metode Isolasi Metabolit Sekunder ..................................................... 14
2.3.1 Skrining Fitokimia ....................................................................... 14
2.3.2 Metode Ekstraksi ......................................................................... 14
2.3.3 Metoda Isolasi .............................................................................. 18
2.3.4 Metoda Kromatografi .................................................................. 18
2.3.4.1 Kromatografi Lapis Tipis..................................................... 18
2.3.4.2 Kromatografi Kolom ............................................................ 21
2.4 Fraksinasi dan Pemekatan ................................................................... 22

i
 2.5 Rekristalisasi dan Uji Kemurnian........................................................ 23
2.6 Identifikasi Senyawa Organik dengan Spektroskopi........................... 25
2.6.1 Spektroskopi Ultraviolet .............................................................. 25
2.6.2 Spektroskopi Inframerah ............................................................. 26
2.6.3 Spektrofotometri NMR ................................................................ 27
BAB III PELAKSANAAN PENELITIAN ................................................ 29
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................. 29
3.2 Alat dan Bahan Penelitian ................................................................... 29
3.2.1 Alat .............................................................................................. 29
3.2.2 Bahan ........................................................................................... 29
3.3 Prosedur Penelitian .............................................................................. 29
3.3.1 Pengambilan Sampel ................................................................... 30
3.3.2 Penyiapan Sampel ........................................................................ 30
3.3.3 Uji Skrining Fitokimia ................................................................. 30
3.3.4 Ekstraksi Sampel ......................................................................... 32
3.3.5 Pengujian Ekstrak Metanol dengan KLT .................................... 32
3.3.6 Fraksinasi ..................................................................................... 32
3.3.7 Pemisahan zat mengunakan kromatografi kolom ........................ 33
3.3.8 Pengujian Hasil Kromatografi Kolom dengan KLT .................... 34
3.3.9 Pemurnian dan Rekristalisasi....................................................... 34
3.3.10 Identifikasi Senyawa Isolat ........................................................ 35
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN

ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman
1. Struktur senyawa dari akar Siak-siak ................................................... 6
2. Struktur senyawa dari daun Siak-siak .................................................. 7
3. Struktur senyawa dari akar Siak-siak .................................................. 7
4. Struktur senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dari
tumbuhan Siak-siak .............................................................................. 8
5. Struktur senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dari
tumbuhan Siak-siak .............................................................................. 8
6. Kerangka dasar flavonoid..................................................................... 10
7. Kerangka tannin ................................................................................... 11
8. Kerangka steroid .................................................................................. 11
9. Salah satu senyawa triterpenoid ........................................................... 12
10. Metode Penentuan Nilai Rf .................................................................. 21
11. Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)............................... 41
12. Skema Uji Skrinning Fitokimia Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC) ................................................................. 42
13. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Metanol dari Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC) ................................................................. 43
14. Skema Kerja Fraksinasi Etil Asetat Tumbuhan siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC) ................................................................. 44
15. Skema Kerja Kromatografi Kolom dan Pemurnian Senyawa
Fraksi Etil Asetat Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC) ................................................................. 45

iii
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman
1. Hasil skrining fitokimia Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC.) ................................................................ 46

iv
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman
1. Gambar Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)................. 41
2. Skema Uji Skrining Fitokimia Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC) ................................................................. 42
3. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Metanol dari Tumbuhan Siak-
siak (Dianella ensifolia (L.) DC) ......................................................... 43
4. Skema Kerja Fraksinasi Etil Asetat Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC)................................................................. 44
5. Skema Kerja Kromatografi Kolom dan Pemurnian Senyawa Fraksi
Etil Asetat Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC) ............ 45
6. Hasil skrining fitokimia Tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC)................................................................. 46

v
 BAB I

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Indonesia memiliki kekayaan hayati terbesar yang memiliki lebih dari

30.000 spesies tanaman tingkat tinggi. Hingga saat ini tercatat 7000 spesies

tanaman telah diketahui khasiatnya namun kurang dari 300 tanaman yang

digunakan sebagai bahan baku industri farmasi secara reguler. Penduduk dunia

masih menggantungkan sistem pengobatan tradisional yang mayoritas melibatkan

tumbuhan untuk menyembuhkan penyakit dan lebih dari 80% penduduk dunia

menggunakan obat herbal untuk mendukung kesehatan mereka (Saifuddin, dkk.,

2011).

Obat tradisional merupakan aset nasional yang cukup besar dan perlu

terus digali, diteliti, dikembangkan dan dioptimalkan pemanfaatannya. Sebagai

suatu negara dengan wilayah yang mempunyai tingkat keanekaragaman hayati

yang tinggi, potensi tumbuhan yang ada merupakan suatu aset dengan nilai

keunggulan komparatif dan sebagai suatu modal dasar utama dalam upaya

pemanfaatan dan pengembangannya untuk menjadi komoditi yang kompetitif

(Anonim, 2007).

Tumbuhan liar menjadi peranan penting dalam penggunaan obat di

masyarakat dan menjadi sumber dari molekul bioaktif yang sangat beragam dan

masih menyimpan potensi untuk dikembangkan. Sebagian masyarakat di suatu

daerah seringkali memanfaatkan tumbuhan liar sebagai obat tradisional yang

efektif. Tumbuhan liar di suatu daerah oleh masyarakat dapat digunakan sebagai

1
potensi dalam pengobatan alternatif. (Tuttolomondo, et al., 2014).

Pada saat ini banyak masyarakat kembali ke pengobatan alami atau

tradisional untuk mengurangi efek samping dari penggunaan obat sintetik.

Indonesia sebagai negara tropis memiliki beraneka tumbuhan yang dapat

dimanfaatkan untuk kepentingan manusia baik sebagai makanan, obat,

kosmetika, minuman dan lain-lain (Zuhud, 2007).

Dianella ensifolia (L.) DC., salah satu tanaman yang termasuk dalam

genus Dianella (Liliaceae), didistribusikan secara luas di selatan Cina. Akar D.

ensifolia digunakan sebagai obat tradisional Cina dalam pengobatan bisul, kurap

dan radang kelenjar getah bening (Anonim, 1980).

Investigasi fitokimia akar Dianella ensifolia (L.) DC., oleh

Lojanapiwatna (1982) berhasil diisolasi 7 macam senyawa yaitu, Musizin

(dianellidin) (1) methyl 2,4-dihydroxy-3,5,6-trimethybenzoate (2), methyl

orsellinate (3), 2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone (4), 5,7dihydroxy-

2,6,8-trimethylchromone (5) and 5,7-dihydroxy-2,8-dirnethylchromone (6) methyl

2,4-dihydroxy-3,6-dimethylbenzoate (7).

Menurut Randrianasolo 2015 telah mengisolasi senyawa

Dihydronaphtaquinone 2-hexyl-3-(2-hydroxyethyl)-2,3 dihydronaphtaquinone 1-4

dari serbuk kering daun Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC.). Senyawa ini

diisolasi dari ekstrak etanol dan diberi nama armandinilol dan dua quinon yaitu

chrysophanol dan isoeugenitol.

Tang (2016) menemukan Senyawa kimia ekstrak etanol dari akar

Dianella ensifolia (L.) DC. Senyawa tersebut berjenis sikloartana dari

triterpenoid yang dinamai 22-hydroxy-cyclolaudenol dan berhasil mengisolasi

2
dua senyawa jenis sikloartana dari triterpenoid yaitu sikloneolitsol dan

siklopholidonol. Sejumlah triterpenoid jenis sikloartana diisolasi dari berbagai

tanaman, dan banyak dari mereka menunjukkan antitumor yang lemah.

Tang, et al (2017) selanjutnya juga menemukan dua senyawa flavan

diberi nama (2S) -2 ′, 4′-dihydroxy-7-methoxy-8-metilflavan dan (2S)-2′-

hydroxy-4 ′, 7-dimethoxy-8-methylflavan yang diisolasi dari ekstrak etanol akar

Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC). Dengan menggunakan metode penyarian

yang sama yaitu perkolasi.

Penelitaian yang di lakukan Mammone, et al (2010) ekstrak Dianella

ensifolia (L.) DC., mengandung senyawa 1-(2,4-dihydrophenyl)-3-(2,4-

dimethoxy-3 methylphenyl) propane (DP), yang ditemukan dapat menghambat

radikal bebas 1-1-difenil-2-pikril hidrazil (DPPH) dengan nilai EC50 78 µm. DP

juga dapat menghambat oksidasi lipid dengan EC50 sekitar 30 µm.

Berdasarkan latar belakang diatas, peneliti ingin meneliti tumbuhan siak-

siak (Dianella ensifolia L.), karena tumbuhan ini banyak tumbuh tersebar di

Riau. Tumbuhan hanya dianggap hama oleh petani sawit dan masih belum banyak

penelitian tentang tumbuhan siak-siak serta belum ada diteliti di Indonesia. Dari

beberapa jurnal yang didapatkan kebanyakan penelitian hanya berfokus meneliti

bagian akarnya saja dan hanya sebagian yang meneliti pada bagian atas

permukaan tanah tumbuhan tersebut. oleh karena itu peneliti tertarik untuk

mengisolasi metabolit sekunder yang terdapat diseluruh bagian tumbuhan yang

berada diatas permukaan tanah dari tumbuhan Siak-siak ini.

3
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Tinjauan Umum Tumbuhan

2.1.1 Klasifikasi Tumbuhan Siak-siak

Berikut klasifikasi tumbuhan Siak-siak berdasarkan identifikasi yang

dilakukan di Laboratorium Botani Jurusan Biologi FMIPA Universitas Riau yaitu:

Kingdom : Plantae

Devisi : Magnoliophyta

Kelas : Liliopsida

Bangsa : Liliales

Suku : Liliaceae

Marga : Dianella

Spesies : Dianella ensifolia (L.) DC.

Nama Lokal : Siak-siak

2.1.2 Nama Lain dan Habitatnya

Genus Dianella dan termasuk family Liliaceae, memiliki 21 spesies yang

tersebar di seluruh Asia tropis, Australia, dan Pasifik. Dianella ensifolia (L.) DC.

Spesies yang berasal dari madagaskar di desa Betafo, tanaman ini telah digunakan

dalam pengobatan tradisional, daunnya di gunakan dalam bentuk infusa, akarnya

digunakan sebagai obat yang merangsang sel-sel otak dan obat sembelit.

(Randrianasolo, et al 2015)

Tumbuhan Dianella ensifolia (L.) DC., biasa ditemukan di hutan, lereng

berumput, dekat permukaan laut sampai 1700 mdpl. Tanaman ini terdapat juga di

4
daerah Fujian, Guangdong, Guangxi, Guizhou, Hainan, Jiangxi, Sichuan, Taiwan,

Yunnan, Bangladesh, Bhutan, Kamboja, India, Indonesia, Selatan Jepang, Laos,

Malaysia, Myanmar, Nepal, Philippines, Sri Lanka, Thailand, Vietnam; Africa

(Madagascar), timur Australia, Pacific Islands. (Anonim, 2000)

2.1.3 Deskripsi Tumbuhan siak-siak

Tumbuhan ini memiliki rimpang yang merayap, tebal 5–8 mm. Daun

berbentuk pedang, secara bertahap menyempit di kedua ujungnya, 30–80 × 1–2.5

cm, kasar, tulang daun dibawah dan terdapat rambut kaku pendek ditepinya, apex

tumpul. Panjang daun 1–2 m, dengan beberapa batang daun yang menyerupai

batang pohon 3-8 cm. Bunga biasanya dengan bunga agak jauh dari pangkal

tanamannya. Tangkai bunga 0,7-2 cm,. Kelopak bunga menyebar, putih, putih

kehijauan, kekuning-kuningan, atau ungu kebiru-biruan, menyirip meruncing

hingga lonjong sempit, 6–7x3–3,5 mm. Benang sari lebih pendek dari kelopak;

tangkai benang sari agak bengkok dekat tengah. Buah seperti beri berwarna biru,

bulat. Jumlah rata-rata 5-6 biji. (Anonim, 2000)

2.1.4 Penggunaan Secara Tradisional dan Ilmiah

Akar Dianella ensifolia (L.) DC., di Cina digunakan sebagai obat bisul

hingga terbentuk abses tinea dan kelenjar getah bening phlogistic. (Anonim, 1980)

Di Thailand, tumbuhan siak-siak digunakan dalam pengobatan. Masyarakat lokal

di provinsi surat thani, Thailand bagian selatan menggunakan akar tumbuhan

tersebut untuk mengobati penyakit ginjal. (Suvatti, 1978)

2.1.5 Kandungan Kimia Tumbuhan

Investigasi fitokimia akar Dianella ensifolia (L.) DC oleh Lojanapiwatna

(1982) berhasil diisolasi 7 macam senyawa yaitu, Musizin (dianellidin) (1) yang

5
berhasil diisolasi dari ekstrak benzena yang di fraksinasi dengan NaHCO3 lalu

ada methyl 2,4-dihydroxy-3, 5,6-trimethybenzoate (2), methyl orsellinate (3), 2,4-

dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone (4), 5,7-dihydroxy-2,6,8-

trimethylchromone (5) dan 5,7-dihydroxy-2, 8-dirnethylchromone (6) yang berhasil

diisolasi dari ekstrak benzene yang di fraksinasi dengan NaOH. Lalu dari

ekstrak kloroform berhasil diisolasi senyawa methyl 2,4-dihydroxy-3, 6-

dimethylbenzoate (7).

Gambar 1. Struktur senyawa dari akar Siak-siak (Lojanapiwatna, et al 1982)

Randrianasolo (2015) telah diisolasi senyawa dihydronaphtaquinone 2-

hexyl-3-(2-hydroxyethyl)-2,3 dihydronaphtaquinone 1-4 dari serbuk kering daun

Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC.). Senyawa ini di isolasi dari ekstrak etanol

dan diberi nama armandinilol dan dua quinon yaitu chrysophanol dan

isoeugenitol.

6
 Gambar 2. Struktur senyawa dari daun Siak-siak (Randrianasolo, et al 2015)

Penelitian yang dilakukan Tang, et al (2016) ditemukan senyawa kimia

dari ekstrak etanol akar Dianella ensifolia (L.) DC., dengan menggunakan metode

penyarian perkolasi senyawa tersebut berjenis sikloartana dari triterpenoid yang

dinamai 22-hydroxy-cyclolaudenol (1) dan juga berhasil mengisolasi dua senyawa

jenis sikloartana lain yaitu sikloneolitsol dan siklopholidonol. Selanjutnya juga

ditemukan dua senyawa flavan yang diberi nama (2S)-2′,4′-dihydroxy-7-methoxy-

8-metilflavan dan (2S)-2′-hydroxy-4′ (2), 7-dimethoxy-8-methylflavan (3) yang

diisolasi dari ekstrak etanol akar Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)., dengan

menggunakan metode penyarian yang sama yaitu perkolasi (Tang, 2017)

7
Gambar 3. Struktur senyawa dari akar Siak-siak. 22-hydroxy-cyclolaudenol(1)
(2S)-2′,4′-dihydroxy-7-methoxy-8-metilflavan dan (2S)-2′-hydroxy-
4′(2) dan 7-dimethoxy-8-methylflavan(3)

Kemudian pada Penelitian Nesterov, et al (2008) Tumbuhan Dianella

ensifolia (L.) DC., (Liliacea) menunjukkan potensi sebagai antioksidan dengan

nilai IC50 sebesar 0,24 µM . Senyawa yag berhasil diisolasi yaitu 1-(2,4-

dihydroxyphenyl)-3-(2,4dimethoxy-3-methylphenyl)-propane. Sedangkan hasil

penelitian yang dilakukan Mammone, et al (2010) Ekstrak Dianella ensifolia (L.)

DC., mengandung senyawa 1-(2,4-dihydrophenyl)-3-(2,4-dimethoxy-

3methylphenyl)-propane, yang ditemukan dapat menghambat radikal bebas 1-1-

difenil-2-pikril hidrazil (DPPH) dengan nilai EC50 78 µM. Senyawa ini juga dapat

menghambat oksidasi lipid dengan EC50 sekitar 3,0 µM.

Gambar 4. Struktur senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dari tumbuhan

Siak-siak (Nesterov, et al 2008)

8
Gambar 5. Struktur senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dari tumbuhan
Siak-siak (Mammone, et al 2010)

2.2. Tinjauan Umum Metabolit sekunder

Metabolit sekunder merupakan produk metabolisme yang khas pada suatu

tanaman yang dihasilkan oleh suatu organ tetapi tidak dimanfaatkan secara

langsung sebagai sumber energi bagi tanaman, biasa digunakan sebagai zat

pelindung bagi tanaman (Taiz dan Zeiger, 1998). Metabolit sekunder biasanya

dihasilkan tanpa melalui reaksi metabolit primer (Karbohidrat, Protein dan lemak)

(Anggarwulan dan Solichatun, 2007)

2.2.1 Alkaloid

Alkaloid adalah senyawa metabolit sekunder mengandung unsur nitrogen

(N) biasanya pada cincin heterosiklik dan bersifat basa. Senyawa alkaloid

kebanyakan berbentuk padatan dan berwarna putih, tetapi ada yang berupa cairan

yaitu nikotin, ada juga yang berwarna kuning seperti berberin dan serpentin.

Namun ada senyawa yang memiliki atom N, tetapi tidak termasuk dalam

golongan alkaloid antara lain asam amino, amina, dan asam nukleat (Hanani,

2015).

Senyawa alkaloid dapat dideteksi dengan cara skrining fitokimia awal

yaitu serbuk simplisia 1 gram dikocok dengan 20 ml metanol dan 3 ml ammonia,

dipanaskan pada suhu 60oC sambil dikocok 15 menit. Larutan disaring, lalu

9
filtratnya dipekatkan hingga lebih kurang 3 ml, kemudian ditambah 5 ml asam

klorida 1 N. Kemudian, ditambahkan pereaksi Dragendroff, timbul warna merah

hingga jingga. Jika ditambahkan pereaksi Mayer akan terbentuk endapan putih

yang berarti postitif alkaloid (Hanani, 2015).

2.2.2 Flavonoid

Senyawa flavonoid diturunkan dari unit C6-C3 (fenilpropana) yang

bersumber dari asam sikimat (melalui fenilalanin) dan unit C6 yang diturunkan

dari jalur poliketida. Fragmen poliketida ini disusun dari tiga molekul malonil Co-

A, yang bergabung dengan unit C6-C3 (sebagai Co-A tioester) untuk membentuk

unit awal triketida. Oleh karena itu, flavonoid yang berasal dari biosintesis

gabungan terdiri atas unit-unit yang diturunkan dari asam sikimat dan jalur

poliketida (Michael et al, 2009).

Flavonoid merupakan senyawa polar karena mempunyai sejumlah gugus

hidroksil, sehingga akan larut dalam pelarut polar seperti, etanol, metanol,

butanol, aseton, air dan lain-lain. Adanya gula yang terkait pada flavonoid (bentuk

umum yang ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoid lebih mudah larut

dalam air dan dengan demikian campuran pelarut di atas dengan air merupakan

pelarut yang lebih baik untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar

seperti isoflavon, flavanon, flavon, dan flavanol yang termetoksilasi cenderung

lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter dan kloroform (Markham, 1988).

Senyawa flavonoid sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk

daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, buah, bunga dan biji. Kebanyakan flavonoid

ini berada pada tumbuh-tumbuhan, kecuali alga (Doloksaribu, 2011).

10
 Senyawa flavonoid dapat dideteksi dengan cara skrining fitokimia awal

yaitu sebanyak 2 gram simplisia dikocok dengan 30 ml diklorometan selama 15

menit, lalu disaring. Filtrat diuapkan hingga kering, residu dilarutkan dalam 1-2

ml metanol 50%, jika perlu dengan pemanasan di atas penangas air, kemudian

ditambah sedikit logam magnesium dan 5-6 tetes asam klorida pekat, lalu

dipanaskan di atas penangas air dan warna yang timbul diamati (Hanani, 2015).

Gambar 6. Kerangka dasar flavonoid

2.2.3 Tanin

Tanin merupakan senyawa yang sangat komplek, biasanya terdapat

campuran polifenol yang sangat sulit dikristalkan. Tanin dengan air membentuk

larutan koloidal yang mempunyai reaksi asam dan rasanya sangat sepat. Makin

murni tanin, makin kurang kelarutannya dalam air dan makin mudah diperoleh

dalam bentuk kristal.

Tanin larut pula dalam pelarut organik yang polar, setidaknya sampai

batas tertentu, tetapi tidak larut dalam pelarut organik non polar seperti benzen

dan kloroform. Larutan tanin dalam air dapat diendapkan dengan penambahan

asam mineral atau garam (Robinson, 1995).

Gambar 7. Kerangka tannin

11
2.2.4 Steroid

Sterol atau steroid pada umumnya berupa alkohol dengan gugus hidroksil

pada C3. Sterol adalah triterpen yang kerangka dasarnya sistem cincin

siklopentana perhidrofenantren (Robinson, 1995).

Senyawa steroid dapat dideteksi dengan cara skrining fitokimia awal yaitu

sampel dilarutkan dengan kloroform, setelah itu ditambahkan dengan asam asetat

anhidrat sebanyak 0,5 ml, selanjutnya ditambahkan sebanyak 2 ml asam sulfat

pekat melalui dinding tabung. Adanya steroid ditandai dengan terbentuknya cincin

biru kehijauan (Anonim, 1979).

Gambar 8. Kerangka steroid

2.2.5 Terpenoid

Senyawa terpenoid dapat dideteksi dengan cara skrining fitokimia awal

yaitu sampel dilarutkan dengan kloroform lalu ditambahkan air lalu dikocok, dua

lapisan yang terbentuk dipisahkan, diambil lapisan kloroform setelah itu

ditambahkan dengan asam asetat anhidrat sebanyak 0,5 ml, selanjutnya

ditambahkan sebanyak 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Adanya

terpenoid ditandai dengan terbentuknya cincin kecoklatan atau violet pada

perbatasan larutan. (Anonim, 1979).

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isopropena dan secara biosintesis masuk jalur asam mevalonat yang

diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yaitu, skualena (Harborne, 1987).

12
 Gambar 9. Salah satu senyawa triterpenoid

2.2.6 Saponin

Saponin merupakan suatu glikosida yang memiliki berat molekul dan

kepolaran yang tinggi. Sebagai glikosida, saponin dapat dihidrolisis dengan asam

atau enzim untuk menghasilkan aglikon (sapogenin), gula, dan asam uronat.

Saponin merupakan surfaktan yang kuat yang menimbulkan busa bila dikocok

dalam air dan pada konsentrasi yang rendah sering menyebabkan hemolisis sel

darah merah. Saponin tersebar luas pada tanaman tingkat tinggi dan merupakan

obat yang pahit menusuk. Saponin larut dalam air dan etanol tetapi tidak larut

dalam eter (Robinson, 1995).

Senyawa saponin dapat dideteksi dengan cara skrining fitokimia awal

yaitu sampel ditambah aquadest didalam tabung reaksi. Kemudian dikocok kuat

dan vertikal selama 10 detik. Hasil positif apabila timbul busa stabil selama 10

menit (Sukandar dkk, 2008).

2.2.7 Fenolik

Senyawa fenolik merupakan senyawa yang berasal dari tumbuh-tumbuhan

yang mempunyai cincin aromatik, mengandung satu atau lebih gugus hidroksil

yang terikat langsung (Harborne, 2006). Senyawa fenolik cenderung mudah larut

dalam air karena umumnya seringkali berkaitan dengan gula sebagai glikosida.

Kelarutan senyawa fenolik dalam air bertambah bila gugus fungsi hidroksilnya

13
bertambah banyak. Senyawa fenolik umumnya larut baik dalam pelarut organik

yang polar (Robinson, 1995).

2.3. Metode Isolasi Metabolit Sekunder

2.3.1 Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan pada penelitian

fitokimia. Secara umum dapat dikatakan bahwa sebagian besar metodenya

merupakan reaksi pengujian warna dengan satu pereaksi warna. Metode yang

digunakan atau dipilih untuk melakukan skrining fitokimia harus memenuhi

beberapa persyaratan antara lain sederhana, cepat, dapat dilakukan dengan

peralatan minimal, bersifat semikuantitatif yaitu memiliki kepekaan untuk

senyawa yang bersangkutan, selektif terhadap golongan senyawa yang dipelajari

(Noerono, 1994).

Pendekatan skrining fitokimia meliputi analisa kuantitatif kandungan

kimia dalam tumbuhan atau bagian tumbuhan (akar, batang, daun, bunga, buah

dan biji), terutama kandungan metabolit sekunder yang bioaktif seperti alkaloid,

antrakuinon, flavonoid, glikosida jantung, dan sebagainya. Adapun tujuan

pendekatan skrining fitokimia adalah untuk mengetahui tumbuhan yang

mengandung senyawa kimia yang berguna untuk pengobatan (Farnsworth, 1966).

2.3.2 Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses pemisahan yang diperoleh dengan mengekstrak zat

aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai,

kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang

tersisa diperlukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan

(Anonim, 1995). Ekstraksi merupakan suatu cara unutuk menarik komponen

14
kimia yang terdapat dalam bahan simplisia. Cara ekstraksi yang tepat tergantung

pada susunan jaringan, kandungan air, bahan tanaman dan jenis zat yang akan

diekstraksi (Herwandi, 1991).

Tujuan ekstraksi adalah menarik atau memisahkan senyawa dari campuran

atau simplisia. Ada berbagai cara ekstraksi, masing-masing cara tersebut memiliki

kelebihan dan kekurangan. Pemilihan metode dilakukan dengan memperhatikan

sifat senyawa, pelarut yang digunakan dan alat yang tersedia (Hanani, 2005).

Metode ekstraksi dapat digunakan dengan cara panas atau cara dingin.

Metode yang umum digunakan adalah cara dingin, yaitu maserasi. Maserasi bisa

disebut juga perendaman (Harboune, 1987). Metode-metode ekstraksi yang sering

digunakan diantaranya :

1. Maserasi

Maserasi merupakan proses penyarian sederhana dengan cara merendam

bahan alam atau tumbuhan dalam pelarut dan waktu tertentu. Maserasi ini

bertujuan untuk menarik zat-zat berkhasiat dari simplisia, baik simplisia dengan

zat berkhasiat yang tidak tahan pemanasan maupun simplisia dengan zat

berkhasiat yang tahan pemanasan. Alat yang digunakan juga sederhana yaitu

dapat digunakan botol besar berwarna gelap atau Erlenmeyer yang sesuai, yang

penting tertutup rapat untuk menghindari penguapan pelarut (Djamal, 1998).

Prinsip maserasi adalah penyarian zat aktif yang dilakukan dengan cara

merendam serbuk sampel ke dalam cairan penyari yang sesuai selama tiga hari

pada temperatur kamar terlindung dari cahaya, cairan penyari akan masuk ke

dalam sel melewati dinding sel. Isi sel akan larut karena adanya perbedaan

konsentrasi antara larutan di dalam sel dengan di luar sel. Larutan yang

15
konsentrasinya tinggi akan terdesak keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan

konsentrasi rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut berulang sampai terjadi

keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Selama

proses maserasi dilakukan pengadukan dan penggantian cairan penyari setiap hari.

Endapan yang diperoleh dipisahkan dan filtratnya dipekatkan (Anonim, 2010).

2. Perkolasi

Perkolasi merupakan suatu cara penarikan, memakai alat yang disebut

perkolator, yang simplisianya terendam dalam cairan penyari dimana zat-zatnya

terlarut dan larutan tersebut akan menetes secara beraturan keluar sampai

memenuhi syarat-syarat yang telah ditetapkan (Anonim, 2011). Keuntungan cara

ekstraksi ini adalah senyawa yang tersari lebih sempurna dibanding maserasi.

Sedangkan kerugiannya adalah memerlukan waktu lebih lama dan pelarut yang

lebih banyak (Hanani, 2015).

3. Sokhletasi

Sokhletasi merupakan teknik ekstraksi yang digunakan terhadap bahan

alam padat yang senyawa kimianya tahan panas. Prinsipnya yaitu menggunakan

suatu pelarut yang mengalami penguapan dan pendinginan secara berulang-ulang,

dan dapat melarutkan senyawa organik yang terdapat pada bahan alam tersebut.

Metode sokhletasi mempunyai keunggulan dari metode lainnya, karena

melalui metode ini penyarian dapat dilakukan berulang-ulang dan pelarut yang

digunakan relatif sedikit. Tetapi kelemahan utama pada sokhletasi adalah tidak

dapat digunakan pada senyawa termolabil karena sokhletasi merupakan teknik

dengan menggunakan pemanasan, membutuhkan waktu yang lama karena

menunggu pelarut terlihat jernih sebagai tanda penyarian sempurna dan

16
diperlukan pengawasan secara terus menerus, dan kapasitas soklet menjadi

kendala apabila sampel yang akan diekstraksi besar jumlahnya (Djamal, 1998).

Prinsip sokhletasi adalah penarikan komponen kimia yang dilakukan

dengan cara serbuk sampel ditempatkan dalam klonsong yang telah dilapisi kertas

saring sedemikian rupa, cairan penyari dipanaskan dalam labu alas bulat sehingga

menguap dan dikondensasikan oleh kondensor bola menjadi molekul-molekul

cairan penyari yang jatuh ke dalam klonsong menyari zat aktif di dalam sampel

dan jika cairan penyari telah mencapai permukaan sifon, seluruh cairan akan turun

kembali ke labu alas bulat melalui pipa kapiler hingga terjadi sirkulasi. Ekstraksi

sempurna ditandai bila cairan di sifon tidak berwarna, tidak tampak noda jika di

KLT, atau sirkulasi telah mencapai 20-25 kali. Ekstrak yang diperoleh

dikumpulkan dan dipekatkan (Anonim, 2010).

4. Digestasi

Proses penyarian yang sama dengan maserasi menggunakan pemanasan

pada suhu 30oC sampai 40oC. Cara ini dilakukan untuk simplisia pada suhu biasa

tidak tersari dengan baik. Jika pelarut yang dipakai mudah menguap pada suhu

kamar dapat digunakan alat pendingin tegak, sehingga penguapan bisa dicegah

(Sjahid, 2008).

5. Infusa

Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia nabati

dengan air pada suhu 90oC selama 15 menit (Djamal, 1998).

6. Dekokta

Dekokta adalah suatu proses penyarian yang hampir sama dengan infusa,

bedanya untuk dekokta dipanaskan selama 30 menit terhitung suhu mencapai

17
90oC. Dekokta dapat dilakukan untuk simplisia yang tidak mengandung minyak

atsiri atau simplisia yang mengandung bahan yang tidak tahan terhadap

pemanasan (Djamal, 1998).

7. Refluk

Penarikan komponen kimia yang dilakukan dengan cara sampel

dimasukkan ke dalam labu alas bulat bersama-sama dengan cairan penyari lalu

dipanaskan, uap-uap cairan penyari terkondensasi pada kondensor bola menjadi

molekul-molekul cairan penyari yang akan turun kembali menuju labu alas bulat,

akan menyari kembali sampel yang berada pada labu alas bulat, sedemikian

seterusnya berlangsung secara berkesinambungan sampai penyarian sempurna,

penggantian pelarut dilakukan sebanyak 3 kali setiap 3-4 jam. Filtrat yang

diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan (Anonim, 2010).

2.3.3 Metoda Isolasi

Isolasi adalah proses pengambilan atau pemisahan suatu zat dari suatu

campuran menggunakan pelarut yang sesuai. Dalam melakukan isolasi atau

penyarian dari bahan alam dapat digunakan bahan-bahan tumbuhan, hewan segar

maupun yang telah dikeringkan, tergantung simplisia dan senyawa yang akan

diisolasi (Djamal, 1998).

Umumnya pemisahan dan pemurnian kandungan kimia pada ekstrak

tumbuhan dilakukan secara fisikokimia, terutama dilakukan dengan salah satu dari

empat teknik kromatografi, yaitu kromatografi kertas (KKT), kromatografi lapis

tipis (KLT), kromatografi gas cair (KGC) dan kromatografi cair kinerja tinggi

(KCKT/HPLC) (Hendrayana, 2006).

18
2.3.4 Metoda Kromatografi

Kromatografi merupakan suatu teknik pemisahan yang didasarkan atas dua

fase yaitu menggunakan fase diam (stationary phase) dan fase gerak (mobile

phase). Teknik kromatografi telah berkembang dan telah digunakan untuk

memisahkan dan mengkuantifikasi berbagai macam komponen yang komplek,

baik komponen organik maupun komponen anorganik (Djamal, 1998).

2.3.4.1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi merupakan proses pemisahan yang didasarkan atas

perbedaan distribusi komponen diantara fase gerak dan fase diam (Vogel, 1978).

Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah metode pemisahan fisikokimia yang

didasarkan atas penyerapan, partisi, atau gabungannya. KLT merupakan salah satu

teknik kromatografi yang banyak digunakan untuk analisi kualitatif senyawa

organik, isolasi senyawa tunggal dari campuran multikomponen, analisis

kuantitatif dan isolasi skala preparatif. Teknik KLT sangat bermanfaat untuk

analisis obat dan bahan lain dalam laboratorium karena hanya memerlukan

peralatan sederhana, waktu yang cukup singkat, dan jumlah yang diperiksa cukup

kecil (Stahl, 1969).

a. Fase Diam

Fase diam adalah lapisan tipis penyerap yang seragam atau media terpilih

digunakan sebagai media pembawa. Penjerap dilekatkan pada penyangga sebagai

pelapis untuk mendapatkan lapisan yang stabil dengan ukuran yang sesuai.

Penyangga yang sering digunakan terbuat dari bahan gelas, plastik dan

alumunium, sedangkan penjerap yang paling sering digunakan antara lain silika

gel, alumina, kieselguhr dan selulosa (Touchstone and Dobbins, 1983).

19
 Ukuran standar untuk lempeng KLT adalah 20 x 20 cm. Ukuran lainnya

dari lempeng antara lain 5 x 20 cm, 10 x 20 cm dan 20 x 40 cm. Lempeng mikro

dapat dibuat dari slide mikroskop. Lapis tipis dapat mengandung indikator

fluorosensi yang ditambahkan untuk membantu penampakan bercak tak berwarna

pada lapisan yang dikembangkan. Jadi, lapisan yang mengandung indikator

fluorosensi akan berpendar jika disinari pada panjang gelombang yang tepat. Jika

senyawa pada bercak yang akan ditampakkan mengandung ikatan rangkap

terkonjugasi atau mengandung cincin aromatik, maka sinar UV yang mengeksitasi

tidak akan mencapai indikator fluorosensi dan tidak ada cahaya yang dipancarkan.

Hasilnya berupa bercak gelap dengan latar belakang yang berfluorosensi.

Indikator terkandung pada penjerap dengan konsentrasi 1% (Gritter et al, 1991).

b. Fase Gerak

Sifat dan komposisi kimia fase gerak ditentukan oleh jenis zat yang

dipisahkan dan jenis penjerap yang digunakan untuk pemisahan. Komposisi fase

gerak dapat berupa pelarut murni maupun campuran komplek dari beberapa

pelarut (Touchstone and Dobbins, 1983). Seluruh senyawa organik termasuk

pelarut digolongkan menurut kemampuan dasarnya untuk membuat ikatan

hidrogen. Terdapat pelarut yang merupakan donor atau aseptor pasangan elektron

dan mempunyai kemampuan untuk membentuk jembatan intermolekul (hidrofilik

dan pelarut polar) ataupun pelarut yang tidak mempunyai tersebut (lipofilik dan

pelarut non polar). Diantara perbedaan tersebut terdapat pelarut dengan polaritas

sedang (Gritter et al, 1991).

20
 c. Metode Deteksi

Bercak yang terpisah dapat diamati dengan beberapa cara setelah lempeng

dikeringkan. Cara untuk mendeteksi bercak terdiri dari dua macam yaitu metode

kimia dan metode fisik. Dari kedua jenis tersebut, masing-masing dapat dibedakan

lagi menjadi dua macam metode destruktif dan non destruktif (tidak memberikan

perubahan permanen pada identifikasi). Contoh untuk metode kimia destruktif

adalah dengan asam sulfat, sedangkan metode non destruktif adalah dengan uap

iodine. Contoh untuk metode fisik adalah pengamatan di bawah sinar UV banyak

digunakan dan bersifat non destruktif terhadap sebagian besar zat, walaupun pada

beberapa vitamin dan steroid dapat bersifat destruktif.

Berdasarkan senyawa yang diperiksa, pemisahan pada lempeng

selanjutnya dapat diperiksa dengan beberapa teknik. Jika zat berupa radioaktif

atau dicurigai demikian maka bercak dapat dideteksi menggunakan scanner

radioisotope. Dalam kondisi yang memungkinkan, juga dimungkinkan untuk

mengukur daerah bercak dan menghitung densitasnya menggunakan

fotodensitometer (Touchstone and Dobbins, 1983). Derajat retensi dinyatakan

dengan Rf yang digunakan untuk menyatakan posisi dari zat setelah

pengembangan, dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut (Harmita, 2006) :

Jarak yang di tempuh noda

Rf =
Jarak yang di tempuh eluen

Gambar 10. Metode Penentuan Nilai Rf

21
2.3.4.2 Kromatografi Kolom

Kromatografi kolom merupakan salah satu metode kromatografi dengan

fase gerak cair dan fase diam padat. Penggunaan fase gerak (eluen) disesuaikan

dengan kepolaran senyawa yang akan dipisahkan, baik menggunakan sistim

pelarut tunggal maupun pelarut campur secara Step Gradient Polarity (SGP),

dimana kepolaran eluen yang digunakan ditingkatkan secara bertahap.

Kromatografi kolom biasanya menggunakan fase diam seperti silika gel 60 (70-

230 μm, Merck®).

Fase diam yang akan digunakan ditempatkan dalam tabung kaca berbentuk

silinder, pada bagian bawah tertutup dengan katup atau kran dan fase gerak

dibiarkan mengalir ke bawah melaluinya dengan gaya berat atau gaya gravitasi

atau menggunakan tekanan yang didorong. Pada kondisi yang dipilih dengan baik,

eluen yang merupakan komponen campuran, komponen pada ekstrak turun berupa

pita dengan laju yang berlainan dan dengan demikian dipisahkan.

Komponen pada ekstrak biasanya dipisahkan dengan cara membiarkannya

mengalir keluar dari kolom dan mengumpulkannya sebagai fraksi dalam jumlah

tertentu. Jenis fase diam atau adsorben yang paling banyak digunakan dalam

kromatografi kolom dan mudah didapatkan berupa alumina dan silika gel (Gritter

et al, 1991).

2.4 Fraksinasi dan Pemekatan

Fraksinasi adalah proses untuk memisahkan kandungan senyawa bahan

alam atas perbedaan sifat kelarutannya dalam kondisi yang ditentukan. Umumnya

senyawa bahan alam dibedakan atas 3 kelompok, yaitu senyawa non polar seperti

lemak, terpen dan steroid. Senyawa semi polar seperti kumarin, fenolik tak

22
terglikosida dan alkaloid. Senyawa polar seperti flavonoid glikosida, alkaloid

kuartener dan lain-lain (Djamal, 2011).

Tujuan utama fraksinasi adalah untuk menyederhanakan komposisi dan

homogenitas sifat zat sehingga lebih mudah diisolasi menjadi senyawa tunggal

atau zat murni. Ekstrak total yang didapatkan melalui proses ekstraksi, biasanya

berupa larutan encer sebelum difraksinasi. Apabila sudah dikentalkan, perlu

penambahan air suling untuk membuat konsistensi ekstrak cukup encer dan tidak

menyulitkan atau mencegah terbentuknya emulsi (Djamal, 2011).

Untuk proses fraksinasi berdasarkan tingkat kepolaran umumnya

digunakan pelarut n-heksana untuk menarik zat yang bersifat non polar, etil asetat

atau kloroform untuk memisahkan senyawa yang bersifat semi polar dan senyawa

yang termasuk kelompok polar difraksinasi dengan butanol. Proses fraksinasi

harus berurutan dari non polar sampai dengan polar dan tidak boleh dibalik

(Djamal, 2011).

Pemekatan adalah peningkatan jumlah partial solute atau senyawa terlarut

dengan proses penguapan hasil ekstraksi yang masih mengandung banyak pelarut.

Tujuan pemekatan adalah agar konsentrasi senyawa lebih besar dan memudahkan

penyimpanan. Dalam proses pemekatan, suhu yang digunakan sebaiknya tidak

terlalu tinggi untuk mencegah peruraian senyawa dalam ekstrak (Hanani, 2015)

Pemekatan dapat dilakukan dengan beberapa cara, seperti menggunakan

penangas air (waterbath). Proses pemekatan ini sederhana, sangat mudah dan

cocok untuk ekstrak dengan pelarut yang memiliki titik didih tidak terlalu tinggi.

Namun proses ini membutuhkan waktu yang cukup lama sehingga kemungkinan

ada senyawa yang terurai (Hanani, 2015).

23
 Pemekatan juga dapat dilakukan menggunakan penguap putar (vacuum

rotary evaporator), dilakukan pada suhu rendah sekitar 40-50oC dan dibantu

dengan alat vakum udara sehingga titik didih pelarut lebih rendah. Penguapan

berlangsung cepat sehingga kemungkinan terjadinya penguraian senyawa yang

termolabil dapat dihindari (Hanani, 2015).

2.5 Rekristalisasi dan Uji Kemurnian

Pengkristalan kembali (rekristalisasi) melibatkan pemurnian suatu zat

padat dengan cara melarutkan zat padat tersebut, mengurangi volume larutannya

dengan pemanasan, dan kemudian mendinginkan larutan. Dengan memanaskan

larutan, pelarut akan menguap hingga larutan mencapai titik lewat jenuh. Saat

larutan mendingin, kelarutan akan berkurang secara cepat dan senyawa mulai

mengendap. Agar rekristalisasi berjalan dengan baik, zat pengotor setidaknya

harus dapat larut dalam pelarut untuk rekristalisasi atau mempunyai kelarutan

lebih besar dari senyawa yang diinginkan. Jika hal ini tidak terpenuhi, zat

pengotor akan ikut mengkristal bersama senyawa yang diinginkan (Bresnick,

2003).

Salah satu pengujian kemurnian senyawa hasil isolasi yaitu berdasarkan

titik leleh. Titik leleh dapat diukur dengan Melting Point Apparatus. Pada

penentuan titik leleh suatu senyawa, bila harga yang diperoleh memiliki selisih

angka yang lebih kecil dari 2oC, maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki

kemurnian yang lebih baik, tetapi jika selisihnya lebih besar dari 2oC maka

senyawa tersebut belum murni (Harborne, 1987).

Uji kemurnian dapat dilakukan dengan penentuan titik leleh suatu kristal.

Mulai dari kristal itu meleleh sampai kristal itu meleleh seluruhnya. Jika harga

24
antara titik mulai meleleh sampai meleleh seluruhnya tidak lebih dari 2 oC maka

dapat dikatakan senyawa tersebut murni (Sharp et al, 1989).

2.6 Identifikasi Senyawa Organik dengan Spektroskopi

Spektroskopi adalah teknik fisikokimia yang mengamati interaksi atom

atau molekul dengan radiasi elektromagnetik. Oleh karena itu teknik-teknik

spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur senyawa yang tidak

diketahui dan untuk mempelajari karakteristik ikatan senyawa yang diketahui

(Fessenden and Fessenden, 1986).

2.6.1 Spektroskopi Ultraviolet

Spektrum serapan kandungan tumbuhan dapat diukur dalam larutan yang

sangat encer dengan pembanding blanko pelarut serta menggunakan

spektrofotometer yang merekam otomatis (Harborne, 1987). Spektrofotometri

UV-Vis merupakan suatu metode identifikasi yang didasarkan pada struktur

elektronik molekul, yang dikenal sebagai spektroskopi elektronik

(Sastrohamidjojo, 2013). Spektrofotometri UV adalah pengukuran panjang

gelombang dan intensitas sinar ultraviolet yang diabsorbsi oleh sampel. Sebagai

sumber cahaya biasanya digunakan lampu hidrogen. Panjang gelombang dari

sumber cahaya akan dibagi oleh pemisah panjang gelombang seperti prisma atau

monokromator. Ketika suatu atom atau molekul menyerap cahaya maka energi

tersebut akan menyebabkan elektron terluarnya tereksitasi ke tingkat energi yang

lebih tinggi (Dachriyanus, 2004).

Energi keseluruhan dari suatu molekul adalah jumlah energi

elektroniknya, energi getar dan energi rotasi. Energi yang diserap dalam transisi

elektronik suatu molekul dihasilkan dari transisi elektron valensi dalam molekul-

25
molekul tersebut. Transisi ini terdiri dari eksitasi dari suatu elektron suatu orbital

yang ditempati ke orbital berikutnya yang berenergi lebih tinggi. Hubungan antara

energi yang diserap dalam transisi elektronik dinyatakan dengan:

ΔE = h.v = hc/λ

Keterangan :

ΔE = Energi yang diserap

v = Frekuensi (Hz)

h = Tetapan Planck (6.6 x 10-27J.s)

λ = Panjang gelombang

c = Kecepatan cahaya (3 x 108 m/s)

Energi yang diserap bergantung pada perbedaan energi antara tingkat dasar

dan tingkat tereksitasi. Semakin kecil perbedaan energi semakin besar panjang

gelombang dari serapan. Kelebihan energi dalam tingkat tereksitasi dapat

dihasilkan dalam disosiasi atau ionisasi dari molekul-molekul atau mungkin

dipancarkan sebagai panas atau cahaya (Silverstein, 1986).

2.6.2 Spektroskopi Inframerah

Spektroskopi inframerah (infrared, untuk selanjutnya disingkat dengan

spektroskopi IR) merupakan spektroskopi vibrasional (getaran). Spektroskopi IR

merupakan teknik analisis yang sangat popular untuk analisis berbagai jenis

sampel, baik sampel produk farmaseutik, makanan, cairan biologis, maupun

sampel lingkungan. Karena pada spektroskopi ini melibatkan cahaya (foton),

maka metode spektroskopi juga seringkali disebut dengan metode

spektrofotometri (Rohman, 2014). Sinar inframerah adalah spektrum

elektromagnetik yang terletak diantara daerah tampak dan spektrum radio, yaitu

26
antara bilangan gelombang 4000-400 cm-1. Bila sinar inframerah dilewatkan

melalui suatu cuplikan senyawa organik maka sejumlah sinar dengan bilangan

gelombang tertentu diserap, sedangkan sinar dengan bilangan gelombang yang

lain diteruskan atau ditransmisikan tanpa diserap (Noerdin, 1986).

Bagi kimiawan organik sebagian besar kegunaannya terbatas antara

bilangan gelombang 4000 cm-1dan 666 cm-1. Letak pita di dalam spektrum

inframerah dinyatakan dengan ukuran bilangan gelombang (cm-1) yang secara

langsung berbanding lurus dengan energi getaran. Intensitas pita dinyatakan

dengan transmitan (T) atau absorbansi (A). Transmitan adalah perbandingan

antara kuat sinar yang ditransmisikan oleh sebuah cuplikan dan kuat sinar yang

diterima oleh cuplikan tersebut sedangkan absorban adalah kebalikan transmitan

(Silverstein, 1986).

Salah satu keunggulan utama spektroskopi IR dengan spektroskopi lainnya

adalah karena sifatnya sebagai spektrum sidik jari, yang mana tidak ada dua buah

senyawa atau sampel yang berbeda mempunyai spektrum IR yang sama.

Spektrum IR satu senyawa dengan spektrum IR senyawa lain dapat dibedakan

dari jumlah puncaknya, intensitasnya, atau bilangan gelombang eksak tiap-tiap

puncak. Oleh karena itu, spektrum IR kebanyakan digunakan untuk identifikasi

suatu senyawa kimia atau melakukan konfirmasi senyawa kimia melalui gugus

fungsionalnya (Rohman, 2014).

2.6.3 Spektrofotometri NMR

Spektrofotometri NMR merupakan jenis spektrofotometri absorbsi lainnya

selain UV dan IR. Spektrofotometri NMR tergantung dari kondisi medan magnet.

Sampel dapat menyerap radiasi elektromagnetik dalam daerah radio frekuensi

27
pada frekuensi yang diatur oleh karakteristik sampel (Silverstein, 2005). Dasar

dari metode spektroskopi resonansi magnetik inti (NMR) ini adalah kajian

terhadap momen magnet dari inti atom dalam molekul yang timbul akibat

perputaran inti tersebut. Momen magnet dari satu inti atom dipengaruhi oleh

atom-atom yang ada di dekatnya, sehingga atom yang sama dapat mempunyai

momen magnet yang berbeda tergantung pada lingkungannya. Bila inti atom

diletakkan diantara kutub-kutub magnet yang sangat kuat maka inti akan

mensejajarkan medan magnetiknya (paralel) atau melawan (antiparalel) dengan

medan magnet (Hart, 2003).

Spektrofotometri proton atau 1H NMR memberikan informasi struktural

mengenai atom-atom hidrogen dalam sebuah molekul organik. Tidak semua inti
1
H membalikkan spinnya tepat sama dengan frekuensi radio karena inti-inti

tersebut mungkin berbeda dalam lingkungan kimianya. Kondisi ini menyebabkan

pergeseran kimia.

28
 BAB III

PELAKSANAAN PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan Januari 2019 sampai April 2019,

bertempat di Laboratorium Penelitian, Laboratorium Biofarmasi Sekolah Tinggi

Ilmu Farmasi Riau Pekanbaru dan Laboratorium Kimia Organik FMIPA

Universitas Riau.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: satu set

alat destilasi, satu set alat rotary evaporator, peralatan gelas pada umumnya

(seperti beker gelas, Erlenmenyer, gelas ukur, tabung reaksi dan corong), kapas,

lumpang, plastic wrapping, kertas saring, spatel, pipet tetes, vial, pipa kapiler,

neraca analitik, lampu Bunsen, chamber, spektrofotometer UV-Vis (Genesys®),

plat KLT, alumunium foil, seperangkat alat kromatografi kolom, alat penentu titik

leleh Stuart Melting Point Apparatus (SMP-11).

3.2.2 Bahan

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah Siak-siak

(Dianella ensifolia (L.) DC) . Bahan yang digunakan adalah etil asetat, aquadest,

asam asetat anhidrat, kloroform, kloroform amoniak, logam magnesium, larutan

FeCl3, HCl P, H2SO4 2N, norit, NaCl fisiologis, dan pereaksi Mayer.

3.3 Prosedur Penelitian

Untuk mendapatkan senyawa kimia yang terkandung di dalam fraksi etil

asetat ekstrak tanaman siak-siak dilakukan prosedur berikut.

29
3.3.1 Pengambilan Sampel

Sampel diambi di daerah sekitar Pekanbaru dengan cara mengambil semua

bagian atas tumbuhan Siak-siak di atas permukaan tanah (aerial part) dengan

meninggalkan beberapa sisa dari sampel tersebut agar sisa sampel tersebut dapat

berkembang biak kembali.

3.3.2 Penyiapan Sampel

Sampel Bagian Aerial part siak-siak disortasi basah kemudian ditimbang

sebanyak 6 Kg kemudian dikeringkan tanpa adanya cahaya matahari hingga kadar

air yang terdapat pada kulit batang siak-siak kering dan kemudian disortasi kering.

Setelah itu, kulit batang siak-siak dihaluskan menggunakan blender hingga

menjadi serbuk dan didapatkan sampel seberat 1,5 kg.

3.3.3 Uji Skrining Fitokimia

Uji pendahuluan kandungan metabolit sekunder dilakukan terhadap aerial

part tumbuhan Siak-siak, sebanyak 5 g sampel dipotong-potong sampai halus, lalu

sampel ditambahkan dengan metanol sebanyak 10 ml dalam tabung reaksi dengan

pemanasan di atas nyala Bunsen. Ekstrak selanjutnya di saring dan pada ekstrak

ini ditambahkan masing-masing 5 ml aquades dan kloroform (1:1) lalu dikocok

kuat dan biarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan air

digunakan untuk uji senyawa flavonoid, fenolik, dan saponin. Lapisan kloroform

digunakan untuk uji senyawa terpenoid dan steroid (Hanani, 2015). Sedangkan

untuk uji alkaloid memiliki prosedur tersendiri.

1. Uji Flavonoid

Beberapa tetes lapisan air dipindahkan ke dalam plat tetes. Tambahkan 1-2

butir logam magnesium dan beberapa tetes asam klorida pekat, tunggu beberapa

30
saat sampai bereaksi. Bila terjadinya warna jingga, merah muda sampai merah

menandakan adanya senyawa flavonoid.

2. Uji Fenolik

Beberapa tetes lapisan air pada plat tetes ditambah 1-2 tetes larutan besi

(III) klorida 1%. Bila terbentuk warna hijau-biru hitam, menandakan terdapat

senyawa fenolik.

3. Uji Saponin

Lapisan air beberapa ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi dikocok kuat.

Apabila terbentuk busa yang bertahan selama 5 menit, berarti menandakan positif

adanya saponin.

4. Uji Terpenoid dan Steroid

Lapisan kloroform disaring melalui pipet yang berisi norit dan kapas.

Hasil saringan dipipet 2-3 tetes dan dibiarkan mengering pada 3 lobang plat tetes.

Setelah kering, ditambahkan pereaksi Liebermann-Buchard (2 tetes asam asetat

anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat). Terbentuknya warna merah berarti positif

adanya terpenoid dan warna hijau-biru berarti positif adanya steroid.

5. Uji Alkaloid

Sampel aerial part tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

sebanyak 5 g dalam bentuk serbuk, ditambahkan 5 ml kloroform, digiling halus,

kemudian ditambahkan 5 ml kloroform-amoniak 0,05 M, diaduk kemudian

disaring dengan corong kecil yang didalamnya diletakkan kapas sebagai saringan.

Filtrat dimasukkan ke dalam sebuah tabung reaksi besar. Kemudian ditambahkan

1 ml asam sulfat 2 N, kocok selama 2 menit, biarkan hingga terbentuk dua lapisan

dan terjadi pemisahan. Ambil lapisan asam (atas) dan ditambahkan 1-2 tetes

31
pereaksi Mayer, jika terbentuk endapan putih menunjukkan hasil positif untuk

alkaloid.

3.3.4 Ekstraksi Sampel

Aerial part sampel tumbuhan Siak-siak yang telah dihaluskan ditimbang

1,5 Kg kemudian diekstraksi dengan cara Maserasi. Yaitu dengan merendam

sampel selama 5 hari dengan pengulangan sebanyak tiga kali menggunakan

Metanol hingga sampel terendam semuanya kemudian disaring dengan kertas

saring dan didapatkan ekstrak cair. Setelah itu ekstrak cair dipekatkan

menggunakan Rotary Evaporator Hingga terbentuk ekstrak kental dan hitung

rendemennya.

%Rendemen = ekstrak kental / Gram sampel x 100

3.3.5 Pengujian Ekstrak Metanol dengan KLT

Pengujian ekstrak total metanol untuk melihat kandungan senyawa

metabolit sekundernya menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dalam 5 ml

eluen. Plat KLT diberikan batas atas dan bawah, masing-masing 0,5 cm dari atas

dan bawah plat. Ekstrak kental yang telah didapat kemudian ditotolkan sebanyak

3 kali pada plat KLT. Selanjutnya dielusikan menggunakan eluen yang

memberikan pola pemisahan yang baik. Plat dikeluarkan dari bejana dan

dibiarkan mengering. Hasil elusi diamati di bawah lampu UV dengan panjang

gelombang 254 nm dan 366 nm.

3.3.6 Fraksinasi

Pengerjaan fraksinasi dimulai dengan mempersiapkan alat seperti corong

pisah dan statif. Pertama, ekstrak kental metanol dihomogenkan dengan aquadest

sampai terlarut sempurna. Selanjutnya, fraksinasi dilakukan dengan pelarut n-

32
heksana yang bersifat non polar dimana fraksi air dimasukkan ke dalam corong

pisah dan kemudian ditambahkan pelarut n-heksana sebanyak 200 ml, kemudian

dikocok searah jarum jam. Fraksinasi sampai ekstrak terfraksi sempurna yang

ditandai dengan telah berkurangnya intensitas kepekatan warna dari fraksi n-

heksana. Fraksi air dikeluarkan melalui katup bagian bawah sedangkan fraksi n-

heksan melalui bagian atas corong. Fraksi n-heksana dari hasil beberapa

pengulangan ini dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary evaporator untuk

mendapatkan fraksi kental n-heksana.

Selanjutnya, fraksi air difraksinasi dengan pelarut etil asetat sebanyak 200

ml. Fraksinasi dilakukan sebanyak tiga kali sampai ekstrak terfraksi sempurna.

Selanjutnya, fraksi air difraksinasi dengan pelarut Butanol sebanyak 200

ml. Fraksinasi dilakukan sebanyak tiga kali sampai ekstrak terfraksi sempurna.

Kemudian hasil beberapa kali fraksi tersebut di rotary evaporator sehingga

didapatkan fraksi kental etil asetat sebanyak Gram

3.3.7 Pemisahan zat mengunakan kromatografi kolom

Untuk memisahkan senyawa-senyawa yang ada di dalam fraksi etil asetat

tersebut dilakukan pemisahan dengan metoda kromatografi kolom. Kromatografi

kolom diisi dengan silika gel 60 (70-230 mesh) sebanyak 50 gram. Pengisian

kolom dilakukan dengan membuat bubur silika terlebih dahulu dengan pelarut n-

heksan, lalu dimasukkan ke dalam kolom dengan menggunakan corong, kemudian

dielusi sampai kerapatan silika di dalam kolom maksimum. Fraksi kental etil

asetat sebanyak 10 gram dilakukan preadsorpsi dengan silika gel dan dimasukkan

ke dalam kolom, jadi posisi serbuk fraksi etil asetat tanaman siak-siak berada di

atas bubur silika. Kemudian dielusi secara bergradien menggunakan kombinasi

33
campuran pelarut n-heksan 100%, perbandingan n-heksan: etil asetat (90:10),

perbandingan etil asetat: metanol sampai metanol 100% (perbandingan sesuai

dengan yang tertera pada masing-masing pelarut yang digunakan sebanyak 100

ml. Pemisahan dilakukan dengan bantuan gaya gravitasi. Hasil pemisahan

ditampung dalam wadah vial dan diberi nomor.

3.3.8 Pengujian Hasil Kromatografi Kolom dengan KLT

Untuk melihat hasil pemisahan dengan kromatografi kolom maka

dilakukan pengujian dengan KLT. Fraksi perbandingan pelarut yang diberi label,

ditotolkan pada plat KLT sesuai dengan nomor fraksi masing-masing. Selanjutnya

dielusi dengan eluen yang sesuai. Noda yang dihasilkan dilihat di bawah alat

penampak noda lampu UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Hasil

pengujian pola KLT dari fraksi tersebut memperlihatkan satu pola noda dominan

dan juga memperlihatkan pembentukan kristal di dasar vial. Fraksi tersebut

selanjutnya dilakukan pemurnian dengan teknik pencucian dan rekristalisasi.

3.3.9 Pemurnian dan Rekristalisasi

Kristal yang teradapat pada vial diambil kemudian dilakukan Rekristalisasi

dengan pelarut yang tidak melarutkan Kristal namun dapat melarutkan pengotor

dengan cara pencucian secara berulang ulang dengan menggunakan pelarut n-

heksana dan kemudian Kristal tersebut dilakukan identifikasi sampai didapatkan

senyawa murni yang dapat dimonitor pada plat KLT di bawah lampu UV λ 254

nm.

Setelah pencucian dilakukan rekristalisasi terhadap fraksi tersebut, untuk

mandapatkan kembali kristal setelah pencucian, yaitu dengan melarutkan kembali

kristal yang terdapat di dasar vial dengan pelarut yang dapat melarutkannya

34
sedikit mungkin penggunaannya (etil asetat) kemudian ditambahkan bertahap

pelarut yang sukar melarutkannya (n-heksana), lalu di saring dan biarkan

pelarutnya menguap hingga didapat senyawa yang murni. Senyawa ini kemudian

di beri label dan di lakukan pengujian KLT kembali di bawah lampu UV λ 254

nm.

3.3.10 Identifikasi Senyawa Isolat

Senyawa isolat yang telah murni, diidentifikasi lebih lanjut meliputi

pemeriksaan organoleptis, sifat fisika, dan sifat kimia dan dilakukan Analisis

senyawa secara spektroskopi menggunakan spektrofotometer ultraviolet dan

visible (UV-Vis), spektrofotometer FT-IR dan spektrofotometer NMR.

1. Pemeriksaaan organoleptis

Pemeriksaan dilakukan secara visual dengan mengamati sifat-sifat fisik

senyawa isolat yang dapat diketahui dengan bantuan indera seperti bentuk, warna

dan bau senyawa isolat. Bentuk senyawa dapat dilihat dari mikroskop dengan

perbesaran 10 x 10 (Anonim, 1995).

2. Pemeriksaan sifat fisika

Pemeriksaan ini meliputi pemeriksaan titik leleh dan sifat kelarutan dari

senyawa isolat. Pemeriksaan titik leleh menggunakan alat Stuart melting point

apparatus. Beberapa butir kristal dari senyawa, diletakkan di antara dua kaca

objek, kemudian diletakkan di bawah kaca pembesar dan diatur kenaikan

suhunya. Amati perubahan fisik zat, pencatatan suhu dilakukan saat kristal mulai

meleleh hingga meleleh sempurna. Senyawa yang murni jarak suhu Kristal

tersebut mulai meleleh hingga meleleh seluruhnya tidak lebih dari 2oC

35
 Pemeriksaan kelarutan dilakukan dengan cara melarutkan senyawa murni

dengan berbagai pelarut (Anonim, 1995). Pelarut yang digunakan yaitu n-heksana,

etil asetat, dan metanol.

3. Pemeriksaan sifat kimia

Pemeriksaan dilakukan dengan mereaksikan senyawa tersebut dengan

pereaksi tertentu yang yang menunjukkan golongan senyawa metabolit sekunder

(skrining fitokimia). Pemeriksaan dapat dilakukan dengan reaksi warna dan reaksi

pengendapan (Djamal, 1998).

4. Analisis Spektroskopi

Senyawa murni yang diperoleh dilakukan analisis spektroskopi dengan

menggunakan spektrofotometer ultraviolet dan visible (UV-Vis),

spektrofotometer FT-IR dan spektrofotometer NMR.

a. Spektrofotometer Ultraviolet Dan Visible (UV-Vis)

Identifikasi senyawa murni yang diperoleh dilakukan dengan analisis

spektroskopi dengan menggunakan spektrofotometer UV yang dilakukan dengan

cara senyawa isolat diambil ± 1mg, lalu dilarutkan dengan metanol p.a sampai

benar benar larut sempurna. Kemudian persiapkan spektrofotometer UV-VIS.

Lalu, dilakukan proses kalibrasi pelarut dengan metanol sebagai blanko.

Selanjutnya, dilakukan analisis sampel isolat pada panjang gelombang 200-400

nm. Setelah hasil didapatkan, data spektrum yang muncul diinterpretasikan.

b. Spektrofotometer Inframerah

Analisis lain yang dilakukan untuk senyawa murni isolat ini dilakukan

dengan mengambil data spektrum inframerah (IR) menggunakan teknik KBr pelet

yaitu padatan sampel digerus dalam mortir kecil bersamaan dengan padatan kristal

36
KBr kering dalam jumlah sedikit (0,5-2 mg cuplikan + 100 mg KBr kering).

Spektrum yang didapat selanjutnya diinterpretasikan.

c. Spektrofotometer NMR

Sampel berupa kristal murni yang akan diidentifikasi dilarutkan ke dalam

pelarut aseton, kemudian ditambahkan sedikit senyawa acuan. Larutan ini

ditempatkan dalam tabung gelas tipis dengan tebal 5 mm di tengah-tengah

kumparan frekuensi radio (rf) di antara dua kutub magnet yang sangat kuat

kemudian energi dari kumparan rf ditambah secara terus-menerus. Energi pada

frekuensi terpasang dari kumparan rf yang diserap cuplikan, direkam dan

memberikan hasil spektrum NMR.

37
 DAFTAR PUSTAKA

Anggarwulan E. & Solichatun. 2007, “kajian Klorofil dan Karotenoid

plantagmajor L. Dan Phaseloxux vulgaris L. Sebagai Bioindikator
Kualitas Udara”. Jurnal Biodiversitas. Vol 8, No 4: 279-282
Anonim 1979. Materia Medika Indonesia. Jilid III. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.

Anonim, 1980. Flora of China, vol.14. Science Press, Beijing, p. 35.

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia Edisi IV, Medan: Departemen Sumatera

Utara.

Anonim, 2000. Flora of China, vol. 24 Science Press, Beijing, 73–263.

Anonim, 2010, Prinsip-Prinsip Maserasi, Medan: Universitas Sumatera Utara.

Anonim, 2011, Ilmu Resep, Jakarta: K3S SMF.

Brensick, S., 2003, Inti Sari Kimia Organik, Jakarta: Hipokrates.

Djamal, R., 1998, Prinsip-Prinsip Dasar Isolasi dan Identifikasi, Padang:

Universitas Baiturrahman.

Djamal, R., 2011, Kimia Bahan Alam, Prinsip-prinsip Dasar Isolasi dan
Identifikasi, Padang: Universitas Baiturrahman Press.

Doloksaribu, R., 2011, Isolasi Senyawa Flavonoid dari Daun Tumbuhan

Harimonting (Rhodomyrtus tementosa W. Art), Sumatera Utara:
Universitas Sumatera Utara Institusional Respiratory.

Fansworth, N.R., 1966, Biological and Phytochemical Screening of Plants,

Journal Pharm Science, 55(1): 225-276.

Fessenden, R.J and Fessenden, J.S., 1986, Organic Chemistry 6th Ed, California:
Brooks Cole Publishing, Pacific Grove.

Gritter, R.J., Bobbit, J.M and Schwarting, A.E., 1991, Pengantar Kromatografi,
Terjemahan Padmawinata K dan Sudiro I, Bandung: Institut Teknologi
Bandung Press.

Hanani, E., 2015, Analisis Fitokimia, Jakarta: EGC.

Harborne, J.B., 1987, Phitochemical Method, London: Chapman and Hall ltd.

Harborne, J.B., 2006, Metode Fitokimia Penuntun: Cara Modren Menganalisis

Tumbuhan, Cetakan ke-2, Terjemahan Padmawinata, K dan Iwang, S.,
Bandung: Institut Teknologi Bandung.

38
Harmita, 2006, Buku Ajar Analisis Fisikokimia, Departemen Farmasi FMIPA,
Depok: Universitas Indonesia.

Hart, H., Craine, L.E and Hart, D.J., 2003, Kimia Organik Edisi 11, Jakarta:
Erlangga.

Hendrayana, S., 2006, Kimia Pemisahan Metode Kromatografi dan Elektroforesis

Modern, Bandung: PT. Remaja Rosdakarya.

Herwandi, D., 1991, Telaah Fitokimia Daun Dysoxylum gaudichaudianum (Juss.)

Miq-Meliaceae, Skripsi, Jurusan Farmasi, Bandung: Institut Teknologi
Bandung.

Lojanapiwatna, V., Chancharoen, K., Sakarin, K., Wiriyachitra, P., 1982.

Chemical Constituens Of Dianella ensifolia, J. Sci. Soc. Thail. 8, 95-102.

Mammone, T, , Neelam M, Lieve D, Dominique C, Hugo C, Ilse Sente, Katrin

VR, Mary M, Yoko N, Masamitsu I, Paolo U. Giacomoni, & Dan Y,
2010, Modification of skin discoloration by a topical treatment containing
an extract of Dianella ensifolia: a potent antioxidant, Journal of Cosmetic
Dermatology, 9, 89–95

Markham, K.R., 1988, Cara-Cara Mengidentifikasi Flavonoid, Terjemahan K.

Padmawinata, Bandung: Institut Teknologi Bandung Press.

Michael, H., Joanne, B., Simon, G., and Elizabeth M. Williamson, 2009,
Farmakologi dan Fitoterapi, Jakarta: EGC.

Nesretov, A, Jifu Zhao, David M, Carmen H, Wenwen M, Padmapriya A, Mei H,

and Qi J, 2008, 1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(2,4-dimethoxy-3-
methylphenyl)propane, a Novel Tyrosinase Inhibitor with Strong
Depigmenting Effects, Chem. Pharm. Bull. 56(9) 1292—1296

Noerdin, D., 1986, Elusidasi Struktur Senyawa Organik dengan Cara

Spektroskopi Ultralembayung dan Inframerah, Bandung: PT. Angkasa.

Noerono, S., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Yogyakarta: Universitas

Gadjah Mada Press.

Randrianasolo, R. Armandine R, Herilala LR, Hans CK, Amélie R,

Andrianambinina AR, Maonja FR, 2015, A new Dihydronaphtaquinone
from Dianella ensifolia, Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry
2015; 3(6): 140-144

Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi VI, Hal 191-
216, Diterjemahkan oleh Padmawinata K, Bandung: Institut Teknologi
Bandung.

Rohman, A., 2014, Spektroskopi Inframerah dan Kemometrika Untuk Analisi

Farmasi, Yogyakarta: Pustaka Pelajar.

39
Saifuddin A, Rahayu, Yuda Hilwan. 2011. Standarisasi Bahan Obat Alam. Graha
Ilmu. Yogyakarta.

Santoni, A, Sabariah, dan Efdi M, 2015, Isolasi dan elusidasi struktur senyawa
triterpenoid dari kulit batang ambacang, J. Ris. Kim. 9(1) 1-8

Sastrohamidjojo, H., 2013, Dasar-Dasar Spektroskopi, Yogyakarta: UGM Press.

Sharp, R.E., and Davies, W.J., 1989, Plants Under Stress, Cambridge University.

Silverstein, R.M., Webster, F.X and Kiemle, D.J., 2005, Spectrometric

Identification of Organic Compounds. 7th edition. State University of New
York, John Wiley & Sons, Inc.

Sjahid, L.R., 2008, Isolasi dan Identifikasi Flavonoid dari Daun Dewandaru
(Eugenia uniflora L.), Skripsi, Surakarta: Universitas Muhammadiyah

Stahl, E. and Michigan., 1969, Analisis Obat Secara Kromatografi dan

Mikroskopi, Terjemahan Padmawinata K, Bandung: Institut Teknologi
Bandung Press.

Sukandar, D., Hermanto, S dan Lestari, E., 2008, Uji Toksisitas Ekstrak Daun
Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) Dengan Metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT), Jurnal Valensi 1(2): 63-70.

Suvatti,c., 1978 Flora Of Thailand Vol.1, Royal Institute, Bangkok

Taiz, L. Dan E. Zeiger 1998, Plant Physicology. SinnuerAssociates, Massachuset

Tang B.Q, Li C.W, Sun J.B, Chang Y, Chan J.Y, Lee S.M.Y & Zeng B 2016: A
new cycloartane-type triterpenoid from the roots of Dianella ensifolia (L.)
DC, Natural Product Research

Tang B.Q, Li C.W, Sun J.B, Chang Y, Chan J.Y, Lee S.M.Y & Zeng B. 2017. A
new cycloartane-type triterpenoid from the roots of Dianella ensifolia (L.)
DC. Nat Prod Res. 31:966–971.

Tang B.Q, Huang S.S, Liang Y.E, Sun J.B, Ma Y, Zeng B, Lee S.M.Y & Lu J.L,
2017, Two new flavans from the roots of Dianella ensifolia (L.) DC,
Natural Product Research, 31:13, 1561-1565

Touchstone, J.C and Dobbins, M.F., 1983, Pratice of Thin Layer

Chromatography, John Wiley & Sons, Kanada.

Tuttolomondo, T, Mario L, Claudio L, Giuseppe B, Maria L G, Giuseppe V, and

Salvatore LB. 2014. Popular Uses of Wild Plant Species for Medicinal
Purposes in the Nebrodi Regional Park (North-Eastern Sicily, Italy).
Journal of Ethnopharmacology.

40
Vogel, A.I., 1978, Textbook of Pratical Organic Chemistry, Revised By Furniss,
B. S., et al, 4th ed, New York: Longman Group Ltd.

Zuhud E A. 2011. Bukti Kedahsyatan Sirsak Menumpas Kanker. Agromedia

Pustaka: Jakarta

41
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Gambar Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

Gambar 11. Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

42
 Lampiran 2. Skema Uji Skrining Fitokimia Tumbuhan Siak-siak (Dianella

ensifolia (L.) DC)

Sampel segar 0,5 g

Dimaserasi dengan Etanol dan
dipanaskan selama 15 menit

Ekstrak cair EtOH Residu

Ekstrak diuapkan
Ekstrak kental
EtOH
Ditambahkan CHCl3 dan air (1:1) masing-
masing sebanyak 5 ml dan dikocok

Lapisan Air Lapisan Kloroform

Flavonoid (Sianidin Test) Terpenoid-Steroid (LB)

Lapisan air + 1-2 butir Ambil Lapisan kloroform,
logam Mg + HCl (p), kemudian dimasukkan ke
terbentuk warna orange- dalam pipet tetes yang berisi
merah norit 1/3 pipet, filtrat jernih
diteteskan ke plat tetes dan
Fenolik biarkan mengering + reagen
Lapisan air + 2 tetes FeCl3 LB, reaksi positif jika
terbentuk warna biru gelap terbentuk warna merah
(terpenoid) dan biru-ungu
Saponin (steroid)

Lapisan air dikocok kuat,

terbentuk busa yang tidak
segera hilang

Gambar 12. Skema Uji Skrinning Fitokimia Tumbuhan Siak-siak (Dianella

ensifolia (L.) DC)

43
Lampiran 3. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Metanol dari aerial part

Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

Tumbuhan siak-siak Segar (6 kg)

- Disortasi basah
- Dikering anginkan
- Dirajang
- Ditimbang
Siak-siak Kering (1,5 kg)

- Dimaserasi dengan Metanol selama

5 hari 3 kali pengulangan
- Disaring

Residu Maserat Metanol

- Dipekatkan dengan rotary evaporator

Ekstrak kental Metanol

- Skrining Ekstrak Kental

- Cek KLT Ekstrak Kental

Fraksinasi

Gambar 13. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Metanol dari tumbuhan Siak-siak
(Dianella ensifolia (L.) DC)

44
 Lampiran 4. Skema Kerja Fraksinasi Etil Asetat tumbuhan siak-siak (Dianella

ensifolia (L.) DC)

Ekstrak kental
 Diencerkan dengan air 200 ml
dilarutkan kedalam corong pisah
diaduk sampai rata
 Ditambahkan pelarut n-heksan
200 ml
 Dikocok lalu diamkan hingga
terjadi pemisahan

Lapisan n-heksan Lapisan air

Dipekatkan dengan  Ditambahkan etil asetat 200 ml

rotary evaporator  Disari sebanyak 6 kali
 Kocok lalu diamkan
Fraksi n-heksan

Lapisan etil asetat Lapisan air

Dipekatkan dengan
rotary evaporator

Fraksi etil asetat

Gambar 14. Skema Kerja Fraksinasi Etil Asetat tumbuhan siak-siak (Dianella

ensifolia (L.) DC)

45
Lampiran 5. Skema Kerja Kromatografi Kolom dan Pemurnian Senyawa Fraksi
Etil Asetat Tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

10 g Fraksi etil asetat

Isolasi menggunakan
Kromatografi Kolom,

Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5 Fraksi dst.

Dipilih fraksi yang

terbentuk kristal

Kristal isolat
Pemurnian kristal,
uji kemurnian kristal,
KLT dan rekristalisasi
Kristal isolat murni

Analisa data struktur

senyawa :
- Spektrometer UV
- Spektrometer FT-IR
- NMR

Senyawa isolat yang

berhasil diisolasi

Lampiran 15. Skema kerja kromatografi kolom dan pemurnian senyawa fraksi
etil asetat tumbuhan Siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

46
Lampiran 6. Hasil skrining fitokimia tumbuhan siak-siak

(Dianella ensifolia (L.) DC)

Tabel 1. Hasil skrining fitokimia tumbuhan siak-siak (Dianella ensifolia (L.) DC)

Ekstrak Fraksi
Senyawa Pereaksi Sampel segar
Metanol Etil asetat
- -
(Tidak (Tidak
Alkaloid Mayer
Terbentuk Terbentuk
Endapan Putih) Endapan Putih)
+ +
(Terbentuk (Terbentuk
Flavonoid Sianidin Test
Kuning Kuning
Orange) Orange)
+ +
Fenolik FeCl3
(Biru) (Biru)
Dikocok
- -
sampai
Saponin (Tidak (Tidak
terbentuk
terbentuk Busa) terbentuk Busa)
busa
Liebermann- + +
Terpenoid Burchard (terbentuk (terbentuk
(LB) warna Merah) warna Merah)
- -
Liebermann-
(Tidak (Tidak
Steroid Burchard
terbentuk terbentuk
(LB)
warna Biru) warna Biru)

Keterangan :

+ = Terdapat Senyawa

- = Tidak Terdapat Senyawa

47