TEKNOLOGI ANTIBODY POLIKLONAL DAN MONOKLONAL

MAKALAH

Disusun untuk Memenuhi Tugas Mata Kuliah Bioteknologi

Yang dibimbing oleh Dr. Umie Lestari, M. Si. dan Indra Kurniawan Saputra, S.Si, M. Si.

Disusun Oleh:

Kelompok 7/Offering Kesehatan 2017

Dwita Novitasari 170342615560

Reni Krisdayana 170342615548

UNIVERSITAS NEGERI MALANG

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
JURUSAN BIOLOGI
Oktober 2019
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Para peneliti saat ini telah menggunakan transfer gen untuk meningkatkan
produktivitas ternak. Dengan memperkenalkan gen yang bertanggung jawab atas laju
pertumbuhan yang lebih cepat atau pola pertumbuhan yang lebih ramping, hewan dapat
dinaikkan ke pasar dengan lebih cepat. Proses ini dikenal sebagai perbaikan selektif.
Meskipun perbaikan selektif bukan tanpa kontroversi, itu menghasilkan peningkatan
pasokan makanan dengan penurunan biaya (Thieman, 2014).

Antibodi adalah protein pelindung yang dihasilkan oleh limfosit vertebrata dan
dapat mengenali serta menetralkan molekul asing yang dihasilkan oleh invasi organisme
virus, bakteri, parasit atau sesuatu agen menular lainnya (Tizzard. 2004). Antibodi
memiliki kemampuan untuk menolak atau mengabaikan bagian intrinsik molekul dari
organisme inangnya (kuby. 2007). Antibodi memiliki kemampuan berikatan khusus
dengan antigen serta mempercepat penghancuran dan penyingkiran antigen tersebut.

Antibodi, juga dikenal sebagai imunoglobulin, yang merupakan salah satu

komponen terpenting dari respon imun humoral yang mana melindungi terhadap infeksi.
Antibodi diklasifikasikan sebagai antibodi poliklonal dan antibodi monoklonal. Antibodi
tersebut memiliki struktur dan fungsi yang sama, tetapi berbeda satu sama lain
berdasarkan asal, produksi, dan spesifisitasnya. Antibodi monoklonal diproduksi oleh
satu klon, sedangkan antibodi poliklonal diproduksi oleh banyak klon (Büyükköroğlu
dan Şenel, 2018).

1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana teknologi antibody poliklonal dan pengujiannya?
2. Bagaimana teknologi antibody monoklonal dan pengujiannya?
1.3 Tujuan
1. Mengetahui teknologi antibody poliklonal dan pengujiannya
2. Mengetahui teknologi antibody monoklonal dan pengujiannya
 BAB II
PEMBAHASAN
2.1 Antibodi Poliklonal

Antibodi dibentuk oleh tubuh sebagai reaksi terhadap antigen yang masuk
dalam tubuh. Antibodi yang dibentuk sebagai reaksi terhadap salah satu jenis antigen dan
mempunyai susunan asam amino yang berbeda dengan antibodi yang dibentuk terhadap
antigen lain. Antibodi hanya dapat berikatan dengan antigen yang relevan. Antibodi
poliklonal diperoleh apabila antigen (protein dan atau karbohidrat) dalam tubuh
vertebrata menimbulkan sejumlah besar klon-klon limfosit yang berbeda beda sesuai
dengan jumlah epitop yang ada pada antigen tersebut. Klon-klon yang terstimulasi akan
berproliferasi dan berdiferensiasi yang kemudian menghasilkan antibodi yang terdapat
sebagian besar di dalam tubuh. Antibodi poliklonal memiliki reaktivitas multipel.
Antibodi poliklonal merupakan campuran kompleks antibodi dengan spesifitas, afinitas
dan isotop berbeda (Andriyani W.M, et al. 2015).
Antibodi adalah molekul protein yang dihasilkan oleh sel plasma yang disebut
globulin dan sekarang dikenal sebagai imunoglobulin (Baratawidjaja dan Rengganis
2012). Antibodi yang didapatkan dari imunisasi dikenal sebagai antibodi poliklonal.
Antibodi poliklonal merupakan antibodi yang dihasilkan oleh limfosit B yang berasal dari
banyak tipe klon karena tanggapan dari ikatan antigen dengan epitop limfosit B yang
berbeda-beda (Burgess, 1995). Kelinci dan mencit merupakan hewan laboratorium yang
paling umum digunakan sebagai produksi antibodi. (Koivunen dan Krogsrud, 2006).
Antibodi poliklonal diterapkan untuk melacak berbagai pencemaran pada bahan pangan
atau pakan serta hasil olahannya seperti aflatoksin (Wang et al., 2011;Liu et al., 2013).
Antibodi monoklonal maupun poliklonal lebih unggul dalam sejumlah aspek untuk
deteksi patogen melalui antisera yang biasanya dilakukan menggunakan metode ELISA
(Sugiani, Desi et al. 2015).
Antibodi poliklonal setelah diinjeksikan dapat diuji dengan metode ELISA,
Uji Enzyme Linked Imunnosorbent Assay (ELISA) digunakan untuk mengidentifikasi dan
mengukur antibodi atau antigen. Prinsip dasar ELISA adalah mengukur interaksi antara
antigen dengan antibodi menggunakan enzim sebagai indikatornya (Burgess, 1995).
Keberadaan antibodi menunjukkan adanya paparan antigen dalam tubuh inang yang
diperiksa (Tizard, 2004). Kelebihan metode ELISA antara lain mampu menguji sampel
dalam jumlah banyak dalam satu variasi sampel, dan pengujian dilakukan secara
 bersamaan. Model ELISA adalah konfigurasi sederhana untuk mengukur titer antibodi,
dan merupakan uji serologik yang cepat, sederhana dan relatif murah (Shetty et al., 2012).

(sumber : Thieman, 2014)

Salah satu penerapan teknologi antibody poliklonal yaitu Plasma Seperti

Manusia dari Sapi. Plasma manusia untuk pasien kekurangan pasokan dan dapat
diperoleh dari ternak yang dikloning untuk membawa gen manusia untuk faktor darah dan
gen antibodi. Kromosom buatan manusia yang membawa gen-gen ini telah berhasil
ditransfer dengan prosedur yang dijelaskan sebelumnya (Thieman, 2014).
Industri susu juga merupakan target untuk perbaikan genetik. Para peneliti
telah menggunakan transgenik untuk meningkatkan produksi susu, membuat susu lebih
kaya protein dan menurunkan kadar lemak, serta membawa gen manusia untuk laktoferin.
Gen ini bertanggung jawab atas kandungan zat besi yang lebih tinggi yang ditemukan
dalam ASI. Keturunan sapi tersebut juga membawa gen untuk laktoferin. Akibatnya,
dengan cara yang hampir sama dengan antibodi poliklonal manusia dapat diproduksi
dalam plasma ternak, sehingga memungkinkan anak pertama dari banyak sapi yang ada
mampu menghasilkan susu yang lebih cocok untuk dikonsumsi oleh anak-anak manusia
(Thieman, 2014).
2.1.1 Pengujian menggunakan antibodi poliklonal
 Pengobatan yang dilakukan disesuiakan dengan yang dituju, hal tersebut
dikarenakan antibody poliklonal bersifat tidak spesifik dalam jumlah banyak sehingga
kumpulan yang terbentuk akan bervariasi. Semisal pada pengujian produksi antibodi
poliklonal sebagai bahan pendeteksi ekspresi protein dari viral nervous necrosis (vnn)
pada ikan kerapu yaitu dengan menggunakan Metode ELISA memiliki sensitifitas dan
spesifitas tinggi dalam pengukuran antibodi hasil induksi oleh vaksin atau antigen.
Dalam penelitian, antibodi poliklonal memiliki peran dalam pengujian induksi
antibodi vaksin DNA VNN pada ikan menggunakan metode ELISA tidak langsung,
yaitu antibodi ikan kerapu yang divaksinasi berperan sebagai antibodi penangkap dan
antibodi poliklonal anti VNN dari kelinci sebagai antibodi pendeteksi. Hasil analisa
ELISA antibodi poliklonal anti VNN dari kelinci terhadap ikan yang divaksin DNA
VNN menunjukkan reaksi positif (nilai rasio S/P) lebih tinggi dibandingkan ikan yang
tidak divaksin. Hal ini mengindikasikan antibodi poliklonal merespons antigen
VNN dengan sangat baik kemudian dikonfirmasi uji dengan western blot
(Andriyani, W.M et al. 2015).

2.2 Antibodi Monoclonal

Antibodi monoklonal (MABs) adalah protein antibodi yang diproduksi dari klon sel
tunggal ("mono") dan protein-protein ini sangat spesifik untuk antigen tertentu. Antibodi
monoklonal bereaksi terhadap hanya satu target, penting dalam diagnostic dan aplikasi terapi
(Thieman, 2014).

Pada 1980-an, penggunaan sebuah antibodi sebagai perangkat penargetan mengarah

pada konsep "Magic Bullet," sebuah perawatan yang bisa secara efektif mencari dan
menghancurkan sel-sel tumor di mana pun mereka berada. Salah satu batasan utama dalam
penggunaan terapi antibodi adalah masalah memproduksi antibodi spesifik dalam jumlah
banyak. Awalnya, para peneliti melakukan skrining myeloma, yang merupakan tumor yang
mensekresi antibodi produksi antibodi yang bermanfaat. Tetapi mereka tidak memiliki
pemikiran memprogram myeloma untuk membuat antibodi dengan spesifikasinya. Situasi ini
berubah secara dramatis dengan perkembangan teknologi antibodi monoclonal. Gambar di
bawah mengilustrasikan prosedur untuk memproduksi monoklonal (dibuat dari satu klon sel)
antibodi (Mab).
 (sumber : Thieman, 2014).

Pada gambar ini, tikus diinokulasi dengan antigen (Ag) yang diinginkan antibodi.
Setelah tikus itu menghasilkan respons imun terhadap antigen, limpa-nya di kultur. Limpa
memiliki sel-sel penghasil antibodi, atau limfosit. Sel-sel limpa ini menyatu mengalami difusi
dengan sel myeloma khusus yang tidak lagi menghasilkan antibodi sendiri. Hasilnya sel
menyatu, atau hibridoma yaitu mempertahankan sifat kedua orang tua. Mereka tumbuh terus
menerus dan cepat dalam kultur seperti sel myeloma (kanker) dan menghasilkan antibody.
Ratusan hibridoma bisa diproduksi dengan fusi tunggal. Hibridoma kemudian secara
sistematis disaring untuk mengidentifikasi klon, yang menghasilkan sejumlah antibody besar
yang diinginkan. Setelah klon ini diidentifikasi, antibodi akan diproduksi dalam jumlah
banyak (Thieman, 2014)..

Produk antibodi monoklonal sekarang telah digunakan untuk mengobati kanker,

penyakit jantung, dan penolakan transplantasi, tetapi prosesnya tidak selalu mulus.
Keterbatasan awal untuk keberhasilan antibodi terapeutik adalah imunogenisitas. Metode
klasik untuk memproduksi Mab menggunakan sel hybridoma tikus memicu respons
kekebalan pada pasien manusia. Hibridoma tikus menghasilkan cukup banyak antigen "tikus"
untuk tetap membangkitkan respons kekebalan yang tidak diinginkan pada manusia. Pasien
dengan cepat menghilangkan Mab tikus, sehingga efek terapeutik menjadi singkat. Para
peneliti menyebut ini sebagai respon human antimouse antibody (HAMA). Solusinya adalah
menjadikan Mabs lebih manusiawi. Menghapus antigen tikus atau membuat sel chimeric
mahal dan memakan waktu, dan Mab yang dihasilkan masih memicu respons HAMA. Para
peneliti sedang berupaya memecahkan masalah ini dan memproduksi Mab di berbagai
organisme. Pada tahun 2010, ada 22 Mab terapi yang telah disetujui oleh FDA. Semua
kecuali tiga di antaranya telah direkayasa untuk mengurangi imunogenisitas, dan sebagian
besar memiliki beberapa urutan genetik manusia. Tikus transgenik yang memproduksi Mab
manusiawi sedang dipelajari dalam 33 percobaan saat ini untuk obat baru (Thieman, 2014)..
Pada 2007, FDA menyetujui antibodi monoklonal pertama yang diproduksi pada
hewan yang tidak mengaktifkan sistem kekebalan manusia untuk ditolak. Panitumab,
diproduksi dari tikus transgenik dengan gen kekebalan tubuh manusia, diproduksi oleh
Amgen di Thousand Oaks, California. Prosesnya melibatkan menonaktifkan mesin antibodi
tikus (protein antibodi rantai berat dan ringan) dan memperkenalkan gen yang setara dengan
manusia dari gen-gen penghasil antibodi ini dengan menggabungkan secara homolog ke
daerah yang tidak aktif (dihapus). Pekerjaan itu dilakukan dalam sel-sel ES tikus, diikuti oleh
pengenalan sel-sel ini ke dalam embrio tikus untuk menghasilkan hewan pendiri. Tikus
transgenik (xenomice) menghasilkan antibodi manusia sepenuhnya terhadap reseptor faktor
pertumbuhan epidermal (sebagai pengobatan untuk orang dengan kanker kolorektal lanjut),
yang dapat dimurnikan dan tidak menghasilkan respons HAMA (Thieman, 2014).

2.2.1 Pengobatan menggunakan antibodi monoclonal

Proyek Genom Manusia dan penemuan SNP sebagian bertanggung jawab untuk
bidang yang baru muncul yang disebut farmakogenomik. Farmakogenomik adalah
menyesuaikan obat dengan merancang terapi obat yang efektif dan strategi pengobatan
berdasarkan profil genetik spesifik dari pasien tertentu. Para peneliti telah mencari obat
"Magic Bullet" yang hanya menghancurkan sel kanker tanpa merusak sel normal. Jika obat
tersebut dirancang, pasien mungkin sembuh lebih cepat karena obat itu akan memiliki sedikit
atau tidak ada efek pada sel-sel normal dalam jaringan non-kanker (Thieman, 2014)..

Terdapat contoh yaitu kanker payudara. Kanker payudara adalah penyakit yang
menunjukkan warisan keluarga bagi sebagian wanita. Wanita dengan salinan gen yang rusak
yang disebut BRCA1 atau BRCA2 memiliki peningkatan risiko kanker payudara, tetapi
banyak kasus kanker payudara lainnya tidak menunjukkan cara pewarisan yang jelas. Jika
seorang wanita memiliki tumor payudara dianggap kanker, sepotong kecil jaringan dapat
digunakan untuk mengisolasi RNA atau DNA untuk SNP dan analisis microarray, yang
kemudian dapat berfungsi untuk menentukan gen mana yang terlibat dalam bentuk kanker
payudara wanita khusus ini. . Berbekal informasi genetik ini, seorang dokter dapat merancang
strategi perawatan obat berdasarkan gen yang terlibat yang spesifik dan paling efektif
terhadap kanker wanita ini. Wanita kedua dengan profil genetik berbeda untuk kanker
payudaranya mungkin menjalani perawatan yang berbeda (Thieman, 2014)..
Para ilmuwan di Genentech menggunakan strategi ini untuk mengembangkan
Herceptin, sejenis antibodi monoklonal disetujui oleh FDA pada tahun 1998. Herceptin
mengikat dan menghambat HER-2, sebuah protein yang diproduksi oleh gen reseptor faktor
pertumbuhan epidermal manusia, yang diekspresikan secara berlebihan pada sekitar 25%
hingga 30% dari kasus kanker payudara. Wanita dengan tumor HER-2-positif (overekspresi
HER-2) biasanya berkembang agresif kanker payudara dengan kemungkinan metastasis
(penyebaran) yang lebih besar dan prognosis yang lebih buruk untuk bertahan hidup.
Herceptin telah terbukti efektif pada beberapa wanita, tetapi pada yang lain tumor menjadi
kebal terhadap antibodi. Masalah serupa telah terjadi dengan obat farmakogenomik lain yang
dikembangkan untuk mengobati kanker lain (Thieman, 2014)..

Salah satu contoh farmakogenomik pertama yang sukses melibatkan obat bernama
Gleevec, yang diperkenalkan oleh Novartis pada tahun 2001 dan digunakan untuk mengobati
leukemia myelogenous kronis (CML). Gleevec menargetkan protein fusi BCR-ABL, yang
diciptakan oleh pertukaran DNA antara kromosom 9 dan 22 yang terjadi dalam CML; dalam
melakukannya, Gleevec telah terbukti menjadi cara yang relatif efektif untuk mengobati
penyakit. Gleevec dan obat-obatan terkait telah meningkatkan tingkat kelangsungan hidup
pasien CML dari 30% hingga hampir 90% (Thieman, 2014)..

Gambar di bawah menunjukkan produksi MAbs spesifik untuk protein dari sel kanker
hati manusia. Setelah tikus membuat antibodi terhadap antigen, suatu proses yang biasanya
memakan waktu beberapa minggu, limpa hewan dikeluarkan. Limpa adalah sumber kaya
limfosit B penghasil antibodi, yang biasa disebut sel B. Dalam cawan kultur, sel B dicampur
dengan sel kanker, yang disebut sel myeloma, yang dapat tumbuh dan membelah tanpa batas.
Dalam kondisi yang tepat, sejumlah sel B dan sel myeloma tertentu akan bergabung bersama
untuk membuat sel hybrid yang disebut hybridoma (Thieman, 2014)..
 (sumber : Thieman, 2014)
Sel hibridoma tumbuh dengan cepat dalam kultur cair karena mengandung gen
penghasil antibodi dari sel B. Sel-sel ini secara harfiah adalah pabrik untuk membuat
antibodi. Sel hibridoma mengeluarkan antibodi ke dalam media kultur cair yang mengelilingi
sel. Perawatan kimia digunakan untuk memilih hibridoma dan membuang sel-sel tikus dan
myeloma yang tidak digunakan, sehingga para peneliti memiliki populasi murni sel-sel yang
memproduksi antibodi. Hibridoma dapat ditransfer ke piringan kultur lain dan dibekukan
pada suhu ultralow sehingga stok sel yang permanen selalu tersedia. Antibodi dapat diisolasi
dari kultur hibridoma dalam batch besar dengan menumbuhkan sel hibridoma dalam kultur
batch menggunakan bioreaktor (Thieman, 2014)..

Antibodi monoklonal dapat disuntikkan ke pasien untuk mencari dan menargetkan

antigen tempat MAbs diproduksi. MAbs pada Gambar di atas akan berikatan dengan sel
kanker hati dan bekerja untuk menghancurkan tumor. Pada tahun 1986, FDA menyetujui
antibodi monoklonal pertama, OKT3, yang digunakan untuk mengobati penolakan
transplantasi organ. Pada 1990-an, MAbs dikembangkan untuk mengobati kanker payudara
(Herceptin) dan limfoma (Rituxan). Saat ini ada lebih dari selusin MAb yang digunakan di
seluruh dunia untuk mengobati kanker, penyakit kardiovaskular, alergi, dan kondisi lainnya.
Para ilmuwan bahkan membayangkan melampirkan bahan kimia atau molekul radioaktif ke
MAbs dengan harapan bahwa ini dapat menargetkan sel-sel yang rusak atau kanker dan
menggunakan muatan mereka untuk membunuh sel-sel ini. Strategi antibodi terapeutik
mungkin juga bermanfaat untuk mengobati orang yang kecanduan obat-obatan berbahaya,
seperti kokain dan nikotin. Di Amerika Serikat saja, lebih dari 13 juta orang
menyalahgunakan narkoba. Para ilmuwan percaya bahwa dimungkinkan untuk merangsang
produksi antibodi terhadap obat-obatan seperti kokain. Antibodi ini kemudian akan berikatan
dengan obat sebagai antigen, menjebak dan mencegah obat dari mempengaruhi sel-sel otak.
Antibodi monoklonal juga telah digunakan beberapa tahun dalam tes umum untuk kondisi
seperti radang tenggorokan, dan sebagian besar alat kehamilan di rumah menggunakan MAb
untuk mendeteksi hormon yang dihasilkan selama kehamilan. Monoklonal untuk pengobatan
penyakit masih belum hidup sampai awal hype, dan ada beberapa kemunduran di lapangan.
Sebagai contoh, pengobatan MAb pasien Alzheimer menghasilkan peradangan parah pada
beberapa orang karena respon antibodi antimouse manusia. Antibodi yang dimanusiakan
dapat meringankan beberapa masalah dengan MAbs. Semakin terlihat bahwa MAbs akan
terus menjadi alat yang berharga untuk pengobatan di abad kedua puluh satu. Pada bagian
berikutnya kami mempertimbangkan terapi gen, topik yang menjanjikan dan kontroversial
dari bioteknologi medis (Thieman, 2014)..
 BAB III

PENUTUP

3.1 Kesimpulan

1. Antibodi poliklonal diterapkan untuk melacak berbagai pencemaran pada bahan

pangan atau pakan serta hasil olahannya seperti aflatoksin. Salah satu penerapan
teknologi antibody poliklonal yaitu Plasma seperti manusia dari sapi.
2. Antibodi monoklonal (MABs) adalah protein antibodi yang diproduksi dari klon sel
tunggal ("mono") dan protein-protein ini sangat spesifik untuk antigen tertentu.
Antibodi monoklonal bereaksi terhadap hanya satu target, penting dalam diagnostic
dan aplikasi terapi. Antibodi monoclonal dapat dimanfaatkan sebagai pengobatan
kanker payudara dan kanker darah.
DAFTAR RUJUKAN

Andriyani, Wiwik Mukti., Murtini, Sri., dan Alimuddin. 2015. Produksi Antibodi Poliklonal
Sebagai Bahan Pendeteksi Ekspresi Protein Dari Viral Nervous Necrosis (Vnn)
Pada Ikan Kerapu. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur IPB 2015.

Baratawidjaja K.G. dan Rengganis, I. (2012). Imunologi Dasar Edisi 10. Jakarta: Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia.

Burgess, G.W. (1995). Teknologi ELISA dalam diagnosis dan penelitian. Edisi Indonesia.
Artama WT penerjemah. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.

Büyükköroğlu, G. dan Şenel,B. 2018. Engineering Monoclonal Antibodies: Production and

Applications. Journal of Omics Technologies and Bio-Engineering. Pages 353–389.
doi: 10.1016/B978-0-12-804659-3.00016-6
Koivunen, M.E and Krogsrud, R.L. (2006). Principles of Immunochemical Techniques
Used in Clinical Laboratories. Labmedicine. 37 (8): 490-497

Kuby. Immunology 6th Ed. New York: W.H Freeman Company. 2007

Liu B.H. Hsu, T.Y., Lu, C.C. and Yu, F.Y. (2013). Detecting aflatoxin B1 in foods and feeds
by using sensitive rapid enzyme-linked immunosorbent assay and gold nanoparticle
immunochromatographic strip. Food Control. 30 :184-189.

Sugiani, Desi., Lusiastuti, Angela Mariana., Bunyamin, M., dan Hessy Novita. 2015.
Pembuatan Antibodi Poliklonal (Pabs) Anti-Nila Dan Anti-Patin Untuk Deteksi
Penyakit Ikan Berbasis Serologis. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur
IPB 2015.

Thieman, W.J. dan Palladino, M.A. 2014. Introduction to Biotechnology. San Fransisco:
Pearson
Tizzard. An Introduction to Veterinary Immunology 7th Ed. Elsevier : Philadelphia. 2004.

Wang J.J., Liu, B.H., Hsu, Y.T. and Yu, F.Y. (2011). Sensitive Competitive Direct Enzyme-
Linked Immunosorbent Assay and Gold Nanoparticle Immunochromatographic
Strip For Detection Aflatoksin M In Milk. Food Control. 22: 64-969.