P3.

Uji APM (Angka Paling Mungkin)

Disusun oleh:
Nama : Faishal Khalish
NIM : 18613068
Kelas/Kelompok : B/2
Asisten : Puspita Ayu Negari

I. TUJUAN (5)

UJI KOLIFORM DAN IDENTIFIKASI BAKTERI

II. ALAT DAN BAHAN (5)

- Media cair laktosa (Lactose Broth/LB)

- Kit reagen uji biokimia
- Pepton Dilution Water atau NaCl steril 0,9%
- Tabung durham
- Tabung reaksi
- Labu erlenmeyer
- Gelas piala / becker glass
- Lampu spiritus / bunsen
- Spreader
- Rak Tabung Reaksi
- Mikropipet
- Blue tip
- Biosafety Cabinet (BSC)
- Autoklaf
- Inkubator

III. CARA KERJA (30)

Catatan:
Buat skema kerja (berdasarkan video yang diupload di GC)
A. Uji penduga/praduga
B. Uji konfirmasi
C. Uji identifikasi bakteri

A. Uji penduga/praduga

Siapkan juga 3 buah tabung reaksi berisi 9 ml NaCl 0,9% steril dan 9 buah tabung reaksi
berisi tabung durham terbalik yang telah diisi 3 ml media Lactose Broth (LB)
↓
Inokulasikan 1 ml sampel ke dalam tabung reaksi berisi 9 ml aquades steril lalu kocoklah
tabung tersebut sehingga diperoleh pengenceran sebesar 10-1
↓
Lakukan pengenceran dengan cara yang sama sehingga diperoleh pengenceran 10-1 dan
10-3
↓
Masukkan 1 ml sampel dari masing-masing pengenceran ke dalam 3 tabung reaksi yang
berisi media
↓
Inkubasi semua tabung reaksi pada suhu 37◦C selama 1 x 24 jam.

B. Uji konfirmasi
Jika hasil uji penduga positif maka dilanjutkan uji penegasan.

Siapkan juga 3 buah tabung reaksi berisi 9 ml NaCl 0,9% steril dan 9 buah tabung reaksi
berisi tabung durham terbalik yang telah diisi 3 ml media BGLBB
(Brilliant Green Lactose Bile Broth).
↓
Inokulasikan 1 ml sampel ke dalam tabung reaksi berisi 9 ml aquades steril lalu kocoklah
tabung tersebut sehingga diperoleh pengenceran sebesar 10-1
↓
Lakukan pengenceran dengan cara yang sama sehingga diperoleh pengenceran 10-1 dan
10-3
↓
Masukkan 1 ml sampel dari masing-masing pengenceran ke dalam 3 tabung reaksi yang
berisi media
↓
Inkubasi semua tabung reaksi pada suhu 37◦C selama 1 x 24 jam.

C. Uji identifikasi bakteri

Ambil 1 mL sampel kemudian tuang pada media uji biokimia yang terdapat pada kit
↓
Inkubasi pada suhu 37◦C selama 24

D. Uji kepastian
diberikan air disumuran/well
↓
Dipanaskan ose sampai lembara
↓
 Disiapkan bakteri media koloni
↓
Dimasukan didalam air garam
↓
Panaskan ose kemudian
↓
Ambil koloni kembali
↓
Masukkan kedalam tube dengan pipet sekali pakai dengan metode biokimia media
↓
Dimasukkan minyak parafin pengganti tutup
↓
Lakukan inkubasi dengan suhu 37◦C selama 24 jam
↓
Berikan reagen masing-masing tube
↓
Tunggu 10 menit untuk melihat reaksi perubahan
↓
Kocokkan pada tabel
↓
Perubahan warna dicatat dicocokan ditabel, kemudian didapatkan lesi/positif dari
percobaan/warna tersebut
IV. HASIL (20)
Uraikan hasil pengujian berikut ini:
Jelaskan hasil yang didapatkan
Hitung jumlah cemaran bakteri yang terdapat dalam sampel sertakan cara perhitungannya
 Pengenceran Hasil kultur bakteri Interpretasi hasil
Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
10-1 (X) 3 tabung yang berbusa dan
Kiri ke kanan (1,2,3) keruh

10-2(Y) 1 tabung di tabung ke 3 yang

Kiri ke kanan (1,2,3) berubusa dan keruh

10-3 (Z) Tidak ada tabung tabung

Kiri ke kanan (1,2,3) berbusa dan keruh

Terdapat tabung dengan hasil positif maka dilanjutkan uji konfirmasi

Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
10-1 (X) Positif terdapat bakteri
koliform
 Positif terdapat bakteri
koliform

Positif terdapat bakteri

koliform

10-2(Y) Positif terdapat bakteri

koliform

Jumlah cemaran bakteri:

a. 0.1 : 3
b. 0.01 : 1
c. 0.001 : 0
Maka total = 43

MPN sampel = Nilai APM dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah

MPN sampel = 43 x 0.01
MPN sampel = 0.43

Sehingga terdapat 43 bakteri dalam 100 ml

V. PEMBAHASAN (30)
1. Jelaskan mengenai jenis air dalam industri farmasi berdasarkan kriteria dan
penggunaanya!

2. Apa yang dimaksud dengan bakteri koliform? mengapa bakteri ini dijadikan sebagai
indikator pengujian cemaran air?

3. Mengapa APM disebut sebagai perhitungan bakteri secara tidak langsung?

4. Mengapa perlu memastikan keberadaan E. coli sebagai cemaran?adakah spesies
bakteri lain yang dapat mencemari air?

5. Apa tujuan digunakannya media selektif dalam percobaan ini? Apa yang dimaksud
dengan media selektif?

6. Sebutkan media selektif yang terdapat dalam percobaan ini!

VI. KESIMPULAN (5)

VII. PUSTAKA (5)

Yogyakarta,
Praktikan,

(
)

Sudah dikoreksi oleh Asisten

Tanggal :…
Nama :…