Mengukur Kadar Klorofil dengan Menggunakan Spektrofotometer

Measuring Chlorophyll Levels Using a Spectrophotometer

Nike Arami
nikearami.bio19@fkip.unsyiah.ac.id
Abstrak
Kadar klorofil pada jaringan tumbuhan tingkat tinggi lebih banyak terdapat pada jaringan daun, di
samping itu terdapat pula pada jaringan lain seperti pada batang dan tangkai bunga atau buah titik
kandungan klorofil pada daun tumbuhan sangat memegang peran yang penting dalam proses
fotosintesis. Kadar klorofil pada daun tumbuhan dapat diukur menggunakan spektrofotometer.
Praktikum ini bertujuan untuk menentukan kandungan atau kadar klorofil yang berfungsi dalam proses
fotosintesis dalam jaringan daun tumbuhan. Metode yang digunakan pada praktikum ini yaitu metode
eksperimen dan pengamatan secara langsung terhadap kadar klorofil daun belimbing wuluh pada daun
muda, dewasa, dan daun tua masing-masing sebanyak 0.5 gram.. Berdasarkan praktikum yang
dilakukan diperoleh hasil yaitu, Daun muda klorofil totanya (942,38 mg/l), klorofil a (499,08144
mg/l), klorofil b (27,3452 mg/l). Daun dewasa klorofil totalnya (466,62 mg/l), klorofil a (178,82 mg/l),
klorofil b (137, 222 mg/l). Daun tua klorofil totalnya (7.4704 mg/l), klorofil a (730,5486 mg/l),
klorofil b (707,5486 mg/l).
Kata kunci: daun, klorofil, fotosintesis
Abstract
Chlorophyll levels in higher plant tissues are more abundant in leaf tissue, in addition there are
also in other tissues such as stems and flower stalks or fruit. Chlorophyll content in plant leaves can
be measured using a spectrophotometer. This practicum aims to determine the content or levels of
chlorophyll which functions in the process of photosynthesis in plant leaf tissue. The method used in
this practicum is the experimental method and direct observation of the chlorophyll content of star
fruit leaves in young, mature, and old leaves of 0.5 grams each. ,38 mg/l), chlorophyll a (499,08144
mg/l), chlorophyll b (27,3452 mg/l). Mature leaves total chlorophyll (466.62 mg/l), chlorophyll a
(178.82 mg/l), chlorophyll b (137, 222 mg/l). Old leaves total chlorophyll (7.4704 mg/l), chlorophyll a
(730.5486 mg/l), chlorophyll b (707.5486 mg/l).
Keywords: eaves, chlorophyll, photosynthesis

1
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer
Pendahuluan
Bagian tanaman yang biasa digunakan
untuk proses fotosintesis dengan kandungan
klorofil dan posisi sangat penting adalah daun.
Daun merupakan salah satu organ tumbuhan
yang tumbuh dari batang, umumnya berwarna
hijau dan terutama berfungsi sebagai penangkap
energi dari cahaya matahari melalui
fotosintesis. Daun merupakan organ terpenting
bagi tumbuhan dalam melangsungkan hidupnya
karena tumbuhan adalah organisme autotrof
obligat, ia harus memasok kebutuhan energinya
2
sendiri melalui konversi energi cahaya menjadi
energi kimia (Ai, 2011, p.1)
Klorofil adalah pigmen berwarna hijau
yang terdapat dalam kloroplas. Pada tumbuhan
tingkat tinggi, kloroplas terutama terdapat pada
jaringan parenkim palisade dan parenkim spons
daun. Dalam kloroplas, pigmen utama klorofil
serta karotenoid dan xantofil terdapat pada
membran tilakoid. Klorofil berasal dari
proplastida yaitu plastida yang belum dewasa,
kecil dan hampir tidak berwarna dan sedikit
atau tanpa membran dalam. Proplastida
membelah saat embrio berkembang, dan
menjadi kloroplas ketika daun dan batang
terbentuk. Pada organ yang terkena cahaya
matahari, kloroplas muda akan aktif membelah
(Sumenda, 2011, p.1)
Klorofil merupakan faktor utama yang
mempengaruhi fotosintesis. Fotosintesis
merupakan proses perubahan senyawa
anorganik (CO2 dan H2O) menjadi senyawa
organik (karbohidrat) dan O2 dengan bantuan
cahaya matahari. Klorofil merupakan pigmen
utama yang terdapat dalam kloroplas. Kloroplas
(Gambar1) adalah organel sel tanaman yang
mempunyai membran luar, membran dalam,
ruang antar membran dan stroma. Permukaan
membran internal yang disebut tilakoid akan
membentuk kantong pipih dan pada posisi
tertentu akan bertumpukan dengan rapi
membentuk struktur yang disebut granum.
Seluruh granum yang terdapat pada kloroplas
disebut grana (Ai, 2011, p.166)
Fotosintesis yang terjadi di daun
membutuhkan dua bahan utama yaitu CO2 dan
H2O. Intensitas cahaya berperan penting dalam
penerimaan energi bagi tanaman melalui
fotosintesis dengan penyerapan langsung foton.
Oleh molekul-molekul pigmen seperti klorofil.
Klorofil merupakan pigmen hijau yang
ditemukan pada kebanyakan tumbuhan. Setiap
daun pada tumbuhan memiliki kandungan
klorofil yang berbeda. Klorofil sangat vital
dalam proses fotosintesis, karena membuat
tanaman mendapatkan energi dan cahaya.
Peningkatan jumlah klorofil akan meningkatkan
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer
kemampuan tanaman dalam menangkap cahaya
matahari dan ini akan semakin mempercepat
laju fotosintesis (Zakiya, 2018, p.49)
Warna pada organ tanaman berbeda-beda
disebabkan oleh kandungan pigmennya.
Tumbuhan menangkap cahaya menggunakan
pigmen yang disebut klorofil. Pigmen inilah
yang memberi warna hijau pada tumbuhan.
Klorofil terdapat dalam organel yang disebut
kloroplas. klorofil menyerap cahaya yang akan
digunakan dalam fotosintesis. Ada yang
berwarna jingga berarti memiliki pigmen
karotein, memiliki pigmen xantofil (kuning),
pigmen klorofil a (hijau biru), klorofil b (hijau
kuning), dan pigmen antosianin (merah) (Ai,
2012, p.28)
Metode/Cara Kerja
Waktu dan Tempat
Praktikum ini dilaksanakan pada hari
Kamis 17 November 2021, pukul 13.50 WIB di
Laboratorium Program Studi Pendidikan
Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu
Pendidikan Universitas Syiah Kuala.
Target/Objek/Populasi/Sampel
Target dari praktikum ini adalah untuk
menentukan kandungan atau kadar klorofil yang
berfungsi dalam proses fotosintesis dalam
jaringan daun tumbuh. Sampel pada praktikum
ini adalah kadar klorofil daun belimbing wuluh
pada daun muda, dewasa, dan daun tua masing-
masing sebanyak 0.5 gram.
Prosedur
Prosedur atau cara kerja dalam praktikum
ini adalah di sediakan alat dan bahan terlebih
dahulu, setiap daun ditimbang masing-masing
sebanyak 0.5 gram dan ditumbuk hingga halus
menggunakan penumbuk mortal. Ketika
ditumbuk ditambah etanol sebanyak 100 ml
sampai seluruh klorofil nya larut. Disaring daun
yang telah diekstrak menggunakan kertas saring
dan dimasukan ke dalam gelas kimia. lalu
dimasukkan kedalam kuvet. Setiap ekstrak daun
diukur absorbansi atau optical dencity (OD)
dengan menggunakan panjang gelombang 649
3
dan 669 nm. Kemudian dihitung kadar klorofil
total, kadar klorofil a, dan kadar klorofil b
menggunakan rumus. Kemudian hasil
pengamatan dan perhitungan dicatat dan dibuat
kesimpulan.
Data, Instrumen, dan Teknik Pengumpulan
Data.
Data pada pratikum ini berupa gambar di
sertai pembahasan dan objek yang diamati
disertai dengan deskripsi dan paparan dari
proses pratikum. Data instrumen diperoleh
pengamatan langsung (observasi).
Teknik Analisi Data
Teknik dalam menganalisis data berupa
secara deskriptif yang dibuat dan dijelaskan
dalam pembahasan.
Hasil dan Pembahasan
Pada pratikum mengukur kadar klorofil
dengan spektrofotometer ini digunakan 3 daun
belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) dengan
usia yang berbeda, yaitu daun muda, daun
dewasa, dan daun tua. Pada ketiga jenis daun ini
penampilan dari masing-masing daun berbeda,
daun muda berwarna hijau muda, daun dewasa
bewarna hijau tua, dan daun tua bewarna
kuning. Ketiga daun ini ditimbang masing-
masing 0,5 gram. Setelah ditimbang dihaluskan
dan ditambah etanol 100 ml, sehingga
klorofilya menjadi larut, kemudian disaring
menggunakan kertas saring dan ditampung
dalam gelas piala. Pada masing-masing ekstrak
daun, menghasilkan warna yang berbeda. Daun
muda menghasilkan warna hijau muda, daun
dewasa menghasilkan warna hijau tua, dan daun
tua menghasilkan warna kuning. Masing-
masing ekstrak daun dimasukkan ke dalam
kuvet dan diukur absorbansi atau optical
density (OD) pada panjang gelombang 649 dan
665 nm.
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer

Pada daun yang sudah tua kandungan

klorofil akan semakin menurun, pada daun
muda kandungan klorofil makin sedikit dan
akan meningkat seiring pertumbuhan daun
tersebut. Pada daun dewasa, kadar klorofil
semakin banyak. Klorofil pada daun muda
berupa protoklorofil dan daun menjadi hijau
setelah transformasi protoklorofil (Hayati,
2012)
Bagian tanaman yang biasa digunakan
untuk proses fotosintesis dengan kandungan
klorofil dan posisi sangat penting adalah daun.
Daun merupakan salah satu organ tumbuhan
yang tumbuh dari batang, umumnya berwarna
Gambar 1. Ekstrak klorofil pada 3 daun dengan
hijau dan terutama berfungsi sebagai penangkap
usia yang berbeda
energi dari cahaya matahari melalui
fotosintesis. Daun merupakan organ terpenting
Dari pengamatan yang telah dilakukan
bagi tumbuhan dalam melangsungkan hidupnya
pada pengukuran absorbansi atau optical
karena tumbuhan adalah organisme autotrof
density (OD) pada masing-masing daun dengan
obligat, ia harus memasok kebutuhan energinya
panjang gelombang berbeda menghasilkan nilai
sendiri melalui konversi energi cahaya menjadi
OD yang berbeda. Absorbansi pada masing-
energi kimia (Farida, 2014)
masing panjang gelombang berbeda.
Tumbuhan menangkap cahaya
Absorbansi paling tinggi adalah pada panjang
menggunakan pigmen yang disebut klorofil.
gelombang 649 dan paling rendah pada panjang
Pigmen inilah yang memberi warna hijau pada
gelombang 649. Pada semua panjang
tumbuhan. Klorofil terdapat dalam organel yang
gelombang yang di uji, pada daun dewasa
disebut kloroplas. klorofil menyerap cahaya
mendapatkan absorbansi yang palig
yang akan digunakan dalam fotosintesis.
besar/paling tinggi, karena daun ini memiliki
Meskipun seluruh bagian tubuh tumbuhan yang
klorofil paling banyak.
berwarna hijau mengandung kloroplas, namun
Pengukuran kadar klorofil pada daun yang
sebagian besar energi dihasilkan di daun. Di
telah diekstrak adalah kadar klorofil total, kadar
dalam daun terdapat lapisan sel yang disebut
klorofil a, dan kadar klorofil b. Kadar klorofil
mesofil yang mengandung setengah juta
pada masing-masing daun diukur dengan
kloroplas setiap milimeter perseginya. Cahaya
menggunakan rumus sebagai berikut: klorofil
akan melewati lapisan epidermis tanpa warna
total (mg/I)= 20,2 OD649 + OD : 665. Klorofil a
dan yang transparan, menuju mesofil, tempat
(mg/I) = 13,7 OD : 665 – 5,76 OD : 649.
terjadinya sebagian besar proses fotosintesis.
Klorofil b (mg/I)= 25,8 od : 645 – 7,7 OD: 665.
Permukaan daun biasanya dilapisi oleh kutikula
Setelah perhitungan (pada lampiran),
dari lilin yang bersifat anti air untuk mencegah
didapatkan bahwa pada daun muda klorofil
terjadinya penyerapan sinar matahari ataupun
totanya (942,38 mg/l), klorofil a (499,08144
penguapan air yang berlebihan
mg/l), klorofil b (27,3452 mg/l). Daun dewasa
Klorofil sebagaimana dikenal pada
klorofil totalnya (466,62 mg/l), klorofil a
umumnya berperan dalam proses fotosintesis.
(178,82 mg/l), klorofil b (137, 222 mg/l). Daun
Dalam proses ini, ada tiga fungsi utama dari
tua klorofil totalnya (7.4704 mg/l), klorofil a
klorofil yaitu dengan memanfaatkan energi
(730,5486 mg/l), klorofil b (707,5486 mg/l).
matahari, memicu fiksasi CO2 menjadi

4
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer
karbohidrat dan menyediakan dasar energetik
bagi ekosistem secara keseluruhan. Kekuatan
mesin fotosintetik ini luar biasa hebat, produk
yang dihasilkannya mampu memberikan
manfaat yang besar bagi kehidupan manusia.
Makin pekat suatu larutan zat yang
berwarna, makin banyak menyerap cahaya,
sehingga kelihatan makin gelap, adanya
hubungan antara penyerapan cahaya dengan
konsentrasi larutan, merupakan prinsip dasar
dari kegunaan spektofotometer. Konsentrasi
suatu larutan zat berwarna dapat pula diketahui
dengan mudah, berdasarkan harga
absorbansinya (OD = Optical Density), karena
konsentrasi berhubungan secara linear dengan
OD. Selain itu, dengan menggunakan
apektofotometer spektronik 21 D dapat pula
tebaca langsung konsentrasi suatu larutan yang
diukur (Rendy, 2015)
Sebagian besar klorofil terdapat dalam
daun namun klorofil juga dapat dijumpai pada
bagian-bagian tanaman yang berwarna hijau
seperti akar, batang, buah, biji dan bunga dalam
jumlah yang terbatas. Sebagian besar klorofil
terdistribusi dalam daun, namun persebarannya
juga tidak merata. Banyaknya klorofil pada
pangkal daun akan berbeda dengan ujung,
tengah serta kedua tepi daun. Perbedaan warna
daun juga menunjukan adanya perbedaan
jumlah klorofil. Warna hijau daun sangat
berkolerasi dengan kandungan klorofil.
Umumnya semakin hijau warna daun semakin
tinggi kandungan klorofilnya.
Klorofil berasal dari proplastida yaitu
plastida yang belum dewasa, kecil dan hampir
tidak berwarna dan sedikit atau tanpa membran
dalam. Proplastida membelah saat embrio
berkembang dan menjadi kloroplas ketika daun
dan batang terbentuk. Organ yang terkena
cahaya matahari, kloroplas muda akan aktif
membelah. Kloroplas terutama berfungsi adalah
sebagai tempat berlangsungnya fotosintesis.
Pigmen-pigmen pada membran tilakoid akan
menyerap cahaya matahari atau sumber cahaya
lainnya dan mengubah energi cahaya tersebut
5
menjadi energi kimia dalam bentuk adenosin
trifosfat (ATP) (Sumenda, 2011)
Tumbuhan tingkat tinggi, klorofil a dan
klorofil b merupakan pigmen utama
fotosintetik, yang berperan menyerap cahaya
violet, biru, merah dan memantulkan cahaya
hijau. Molekul klorofil adalah suatu derivat
porfirin yang mempunyai struktur tetrapirol
siklis dengan satu cincin pirol yang sebagian
tereduksi. Inti tetrapirol mengandung atom Mg
non-ionik yang diikat oleh dua ikatan kovalen
dan memiliki rantai samping. Sintesis klorofil
terjadi melalui fotoreduksi protoklorofilid
menjadi klorofilid a dan diikuti dengan
esterifikasi fitol untuk membentuk klorofil a
yang dikatalisis enzim klorofilase. Perubahan
protoklorofilid menjadi klorofilid a pada
tumbuhan angiospermae mutlak membutuhkan
cahaya. Selanjutnya klorofil jenis yang lain
disintesis dari klorofil a (Agurahe, 2019)
Simpulan dan Saran
Simpulan
Berdasarkan percobaan yang telah
dilakukan dapat disimpulkan bahwa, Klorofil
adalah pigmen berwarna hijau yang terdapat
dalam kloroplas. Pada tumbuhan tingkat tinggi,
kloroplas terutama terdapat pada jaringan
parenkim palisade dan parenkim spons daun.
Klorofil merupakan faktor utama yang
mempengaruhi fotosintesis. Fotosintesis
merupakan proses perubahan senyawa
anorganik (CO2 dan H2O) menjadi senyawa
organik (karbohidrat) dan O2 dengan bantuan
cahaya matahari. Daun muda klorofil totanya
(942,38 mg/l), klorofil a (499,08144 mg/l),
klorofil b (27,3452 mg/l). Daun dewasa klorofil
totalnya (466,62 mg/l), klorofil a (178,82 mg/l),
klorofil b (137, 222 mg/l). Daun tua klorofil
totalnya (7.4704 mg/l), klorofil a (730,5486
mg/l), klorofil b (707,5486 mg/l).
Saran
Sebaiknya dalam melakukan praktikum,
praktikan sudah memiliki pengetahuan dasar
tentang praktikum yang akan dilaksanakan.
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer

Praktikan juga dapat menjaga waktu dan tidak
membuang-buang waktu dalam melakukan
kegiatan praktikum.
Daftar Pustaka
Agurahe, L, Rampe, H, L., & Mantiri, F. R.
2019. Pematangan Dormansi Benih Pala
(Myristica Fragrans Houtt)
Menggunakan Hormon Giberalin. Jurnal
Pharmacon. 8:1. 30-40.
Ai, N, Banyo, N. 2011. Konsentrasi Klorofil
Daun Sebagai Indikator Kekurangan Air
pada Tanaman. Jurnal Ilmiah Sains. 11:2.
166-170.
Ai, N., 2012. Evolusi Fotosintesis pada
Tumbuhan. Jurnal Tumbuhan. 12:1. 18-
40.
Ai, S, A. 2011. Biomassa dan Kandungan
Klorofil Total Daun Jahe (Zingiber
officinale L) yang Mengalami Cekaman
Kekeringan. Jurnal Ilmiah Sains. 11:1. 1-
10.
Farida, R. 2014. Ekstraksi Antosianin Limbah
Kulit Manggis Metode Microwave
Assisted Extraction (Lama Ekstraksi dan
Rasio Bahan Pelarut). Jurnal Pangan dan
Agroindustri. 3:2. 11-20.
Hayati, E. K. 2012. Konsentrasi Total Senyawa
Antosianin Ekstrak Kelopak Bunga
Rosella (Hibiscus Sabdariffa L.)
Pengaruh Temperatur dan pH. Jurnal
Kimia. 6:2. 77-88.
Rendy, R.M. 2015. Kadar Total Pigmen
Klorofil dan Senyawa Antosianin Ekstrak
Kastuba (Euphorbia pulcherrima)
Berdasarkan Umur Daun. jurnal fkip. 1:2.
78-99.
Sumenda, L. 2011. Analisis Kandungan
Klorofil pada Daun Mangga (Mangifera
Indica L.) pada Tingkat Perkembangan
Daun yang Berbeda. Jurnal Bioslogos. 1
1. 101-111.
Sumenda, L., 2011. Analisis Kandungan
Klorofil Daun Mangga (Mangifera indica
L.) PADA Tingkat Perkembangan Daun
yang Berbeda. Jurnal Bioslogos. 1:1. 1-
10.
Zakiya, M., Manurung, T, F., Wulandari, R, S.
2018. Analisa Kandungan Klorofil Daun
Mangga (Mangifera indica L.) pada
Tingkat Perkembangan Daun yang
Berbeda. Jurnal Bioslogos. 1:1. 20-24.

6
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer

7
Nike Arami: Mengukur Kadar Klorofil dengan Spektrofotometer