BAB 18

PERSIAPAN SAMPEL: SOLVENT DAN EKSTRAKSI FASE PADAT

Teknik ekstraksi pelarut dan ekstraksi fase padat dan teknik terkait sangat berguna untuk
mengisolasi analit dari matriks sampel kompleks sebelum analisis kromatografi. Ekstraksi
pelarut juga berguna untuk penentuan spektrofotometri. Ekstraksi pelarut melibatkan distribusi
zat terlarut antara dua fase cair yang tidak dapat bercampur. Teknik ini sangat berguna untuk
pemisahan yang sangat cepat dan "bersih" dari zat organik dan anorganik. Ekstraksi fase padat
adalah teknik di mana gugus fungsi hidrofobik terikat pada permukaan partikel padat dan
bertindak sebagai fase ekstraksi. Mereka mengurangi kebutuhan untuk volume besar pelarut
organik.

A. Koefisien Distribusi
Suatu zat terlarut S akan mendistribusikan dirinya sendiri di antara dua fase (setelah
pengocokan dan membiarkan fase-fase terpisah) dan, dalam batas-batasnya, rasio konsentrasi
zat terlarut dalam dua fase akan konstan:
[ S ]1
K D=
[ S ]2
Dimana KD adalah koefisien distribusi dan subskrip mewakili pelarut 1 (misalnya, pelarut
organik) dan pelarut 2 (misalnya, air). Jika koefisien distribusi besar, zat terlarut akan
cenderung terpartisi secara kuantitatif dalam pelarut 1. Alat yang digunakan untuk ekstraksi
pelarut adalah corong pemisah. . Paling sering, zat terlarut diekstraksi dari larutan berair ke
dalam pelarut organik yang tidak bercampur. Setelah campuran dikocok selama sekitar satu
menit, fase dibiarkan terpisah dan lapisan bawah (pelarut yang lebih padat) ditarik keluar
dalam penyelesaian pemisahan. Banyak zat yang sebagian terionisasi dalam lapisan air
sebagai asam lemah. Ekstraksi sekarang menjadi tergantung pada pH larutan.

B. Rasio Distribusi
rasio distribusi, yang merupakan perbandingan konsentrasi semua spesies zat terlarut
dalam setiap fase yaitu :
[ HBz ] e
D=
[ HBz ] a +¿ ¿ ¿
 Persamaan ini memprediksi bahwa ketika [H+] sebuah K sebuah , D hampir sama dengan
K D , dan jika K D besar, asam benzoat akan terekstraksi secara kuantitatif ke dalam lapisan
eter; D maksimum pada kondisi tersebut. Sebaliknya, jika [H+] K sebuah , kemudian D
mengurangi ke K D [H+] sebuah / K sebuah , yang akan menjadi kecil, dan asam benzoat
akan tetap berada di lapisan air. Artinya, dalam larutan basa, asam benzoat terionisasi dan
tidak dapat diekstraksi, sedangkan dalam larutan asam, sebagian besar tidak terdisosiasi.
Kesimpulan ini adalah apa yang kita harapkan secara intuitif dari pemeriksaan
kesetimbangan kimia.
Efisiensi ekstraksi akan independen dari konsentrasi asli zat terlarut . Ini adalah salah satu
fitur menarik dari ekstraksi pelarut; itu berlaku untuk tingkat pelacak (misalnya, radioaktif)
dan tingkat makro yang serupa, suatu kondisi yang berlaku hanya selama kelarutan zat
terlarut dalam salah satu frasa tidak terlampaui dan tidak ada reaksi samping seperti
dimerisasi zat terlarut yang diekstraksi. jika konsentrasi ion hidrogen berubah, efisiensi
ekstraksi (D) akan berubah.

C. Persen Diekstraksi
Rasio distribusi D adalah konstanta yang tidak bergantung pada rasio volume. Namun,
fraksi zat terlarut yang diekstraksi akan tergantung pada rasio volume kedua pelarut. Jika
volume yang lebih besar dari pelarut organik digunakan, lebih banyak zat terlarut harus larut
dalam lapisan ini untuk menjaga rasio konsentrasi konstan dan untuk memenuhi rasio
distribusi. Fraksi zat terlarut yang diekstraksi sama dengan milimol zat terlarut dalam lapisan
organik dibagi dengan jumlah milimol zat terlarut. Milimol diberikan oleh molaritas kali
mililiter. Jadi, persen yang diekstraksi diberikan oleh :
[ S ]0 V 0
%E= ×100 %
[ S ]0 V 0 + [ S ] a V a

Di mana V Hai dan V sebuah adalah volume fase organik dan fase air, masing-masing.
Dapat ditunjukkan dari persamaan ini bahwa persen yang diekstraksi berhubungan dengan
rasio distribusi dengan :
 100 D
%E=
D+
( )
Va
V0
Karena itu,
100 D
%E=
D+1
Dalam hal volume yang sama, zat terlarut dapat dianggap ditahan secara kuantitatif
dalam fase air jika: D kurang dari 0,001. Ini pada dasarnya diekstraksi secara kuantitatif jika
D lebih besar dari 1000. Persen yang diekstraksi hanya berubah dari 99,5 menjadi 99,9%
ketika D meningkat dari 200 menjadi 1000.

D. Ekstraksi Pelarut Logam

Ekstraksi pelarut memiliki salah satu aplikasi terpenting dalam pemisahan kation logam.
Dalam teknik ini, ion logam, melalui kimia yang sesuai, terdistribusi dari fase berair ke fase
organik yang tidak dapat bercampur dengan air. Ekstraksi ion logam dengan pelarut berguna
untuk menghilangkannya dari matriks yang mengganggu, atau untuk secara selektif (dengan
kimia yang tepat) memisahkan satu atau sekelompok logam dari yang lain. Teknik ini banyak
digunakan untuk penentuan spektrofotometri ion logam karena reagen yang digunakan untuk
menyelesaikan ekstraksi sering membentuk kompleks berwarna dengan ion logam. Ini juga
digunakan dalam spektrofotometri serapan atom nyala untuk memasukkan sampel dalam
pelarut tidak berair ke dalam nyala api untuk meningkatkan sensitivitas, dan menghilangkan
efek matriks. Ada dua cara utama untuk melakukan ini yaitu :
1. Ekstraksi Kompleks Asosiasi Ion
Dalam satu metode, ion logam dimasukkan ke dalam molekul besar dan kemudian
bergabung dengan ion lain dari muatan yang berlawanan untuk membentuk pasangan ion,
atau ion logam berasosiasi dengan ion lain yang berukuran besar (seperti organic). Pelarut
organik terhalogenasi sering digunakan di masa lalu sebagai pelarut ekstraksi pilihan.
2. Ekstraksi Kelat Logam

Metode yang paling banyak digunakan untuk mengekstraksi ion logam adalah
pembentukan molekul kelat dengan agen pengkelat organik. zat pengkelat mengandung dua
atau lebih gugus pengompleks. Banyak dari reagen ini membentuk kelat berwarna dengan
ion logam dan membentuk dasar metode spektrofotometri untuk menentukan logam. Kelat
sering tidak larut dalam air dan akan mengendap, yang biasanya larut dalam pelarut organik
seperti metilen klorida.

3. Proses Ekstraksi Untuk Kelat Logam

Kebanyakan agen pengkelat adalah asam lemah yang terionisasi dalam air; proton yang
dapat terionisasi digantikan oleh ion logam ketika kelat terbentuk, dan muatan pada senyawa
organik menetralkan muatan pada ion logam. Dengan menambahkan agen pengkelat, HR, ke
fase organik. Ini mendistribusikan antara dua fase, dan dalam fase air itu berdisosiasi sebagai
asam lemah. Ion logam, M n +
, bereaksi dengan nR- untuk membentuk khelat MRn , yang
kemudian didistribusikan ke fase organik. Rasio distribusi diberikan oleh rasio konsentrasi
khelat logam dalam fase organik dengan konsentrasi ion logam dalam fase berair. Persamaan
berikut dapat diturunkan:

[ MR n ]o
D=
¿¿¿

Rasio distribusi tidak tergantung pada konsentrasi ion logam, asalkan kelarutan kelat
logam dalam fase organik tidak terlampaui. SDM sering berlebihan dan dianggap konstan.
Efisiensi ekstraksi dapat dipengaruhi hanya dengan mengubah pH atau konsentrasi reagen.
Peningkatan 10 kali lipat konsentrasi reagen akan meningkatkan efisiensi ekstraksi sama
dengan peningkatan pH satu unit (penurunan [H+]). Setiap efek lebih besar sebagai n
menjadi lebih besar. Dengan menggunakan konsentrasi reagen yang tinggi, ekstraksi dapat
dilakukan dalam larutan yang lebih asam. Kelat dari ekstrak logam yang berbeda pada nilai
pH yang berbeda. Beberapa dapat diekstraksi pada rentang pH yang luas, sedangkan yang
lain hanya dapat diekstraksi dari larutan basa. Setelah logam diekstraksi ke dalam pelarut
organik dan pelarut dipisahkan, logam tersebut dapat diekstraksi kembali ke dalam lapisan
berair, jika diinginkan, pada pH rendah yang sesuai. Dengan penyesuaian pH yang tepat,
selektivitas dapat dicapai dalam ekstraksi. Selain itu, penggunaan bahan penutup bahan
pengompleks yang mencegah satu ion logam bereaksi dengan bahan pengkelat, dapat
meningkatkan selektivitas.
 Untuk alasan toksisitas dan pembuangan, sebagian besar metode ekstraksi pelarut organik
untuk logam telah digantikan oleh resin fase padat yang memiliki fungsi pengkelat. Sebagai
alternatif, metode berbasis ICP digunakan memiliki sensitivitas tinggi dan sedikit interferensi
dan tidak memerlukan ekstraksi, seperti yang dijelaskan dalam. Prinsip ekstraksi pelarut,
terutama ekstraksi berurutan, adalah kunci untuk memahami cara kerja kromatografi, pada
dasarnya dengan proses partisi berurutan berkelanjutan yang sama.

E. Ekstraksi yang Dipercepat dan Berbantuan Microwave

Ekstraksi pelarut yang dipercepat adalah teknik untuk ekstraksi analit yang efisien dari
matriks sampel padat ke dalam pelarut. Sampel dan pelarut ditempatkan dalam bejana
tertutup dan dipanaskan hingga 50 hingga 200◦C . Tekanan tinggi memungkinkan pemanasan
di atas titik didih, dan suhu tinggi mempercepat pembubaran analit dalam pelarut. Kedua
waktu ekstraksi dan volume pelarut yang dibutuhkan sangat berkurang selama ekstraksi
atmosfer.
Di ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro (MAE), pelarut dipanaskan oleh energi
gelombang mikro. Senyawa analit dipartisi lagi dari matriks sampel ke dalam pelarut.
Kinetika ekstraksi dipengaruhi oleh suhu dan pilihan pelarut atau campuran pelarut.
Pemanasan atmosfer untuk ekstraksi terbatas pada titik didih pelarut. Suhu kapal tertutup
pada 175 psig biasanya mencapai urutan 150◦C, dibandingkan dengan titik didih 50 hingga
80◦C untuk pelarut yang umum digunakan. Campuran pelarut dapat digunakan asalkan salah
satunya menyerap energi gelombang mikro. Beberapa pelarut transparan terhadap gelombang
mikro, misalnya, heksana, dan tidak panas, tetapi campuran heksana dan aseton memanas
dengan cepat.
Ekstraksi gelombang mikro juga dapat dilakukan pada tekanan atmosfer. Siklus
pemanasan dan pendinginan digunakan untuk mencegah pendidihan pelarut. Teknik ini juga
mengurangi waktu ekstraksi secara substansial.

F. Ekstraksi Fase Padat

Ekstraksi cair-cair sangat berguna tetapi memiliki keterbatasan tertentu. Pelarut ekstraksi
terbatas pada pelarut yang tidak dapat bercampur dengan air (untuk sampel berair). Emulsi
cenderung terbentuk ketika pelarut dikocok, dan volume pelarut yang relatif besar digunakan
yang menghasilkan masalah pembuangan limbah yang substansial.
 Ekstraksi fase padat yang telah menjadi teknik yang banyak digunakan untuk
pembersihan sampel dan konsentrasi sebelum analisis kromatografi) khususnya. Dalam
teknik ini, jenis tertentu dari gugus fungsi organik secara kimiawi terikat pada permukaan
padat, misalnya, bubuk silika. Ada berbagai jenis fasa yang tersedia secara komersial dengan
polaritas yang berbeda. Fasa padat yang sama yang digunakan dalam kromatografi cair
kinerja tinggi digunakan untuk ekstraksi fasa padat kecuali dalam ukuran partikel yang lebih
besar.
Fase bubuk umumnya ditempatkan dalam kartrid kecil, mirip dengan jarum suntik
plastik. Sampel ditempatkan di dalam cartridge dan dipaksa masuk dengan menggunakan
plunger (tekanan positif) atau vakum (tekanan negatif), atau dengan sentrifugasi. Jejak
molekul organik dapat diekstraksi, dikonsentrasikan pada kolom, dan dipisahkan dari matriks
sampel. Kemudian mereka dapat dielusi dengan pelarut seperti metanol dan akhirnya
dianalisis, misalnya, dengan kromatografi.
Sifat fase ekstraksi, khususnya jenis ikatan fungsional kelompok, dapat bervariasi untuk
memungkinkan ekstraksi berbagai kelas senyawa. mengilustrasikan fase terikat berdasarkan
gaya van der Waals, ikatan hidrogen (tarik dipolar), dan gaya tarik elektrostatik.
Ketika partikel silika terikat dengan fase hidrofobik, mereka menjadi "tahan air" dan
harus dikondisikan untuk berinteraksi dengan sampel air. Hal ini dicapai dengan melewatkan
metanol atau pelarut serupa melalui unggun sorben. Pelarut menembus ke dalam lapisan
terikat dan memungkinkan molekul air dan analit berdifusi ke dalam fase terikat. Setelah
pengkondisian, air dilewatkan untuk menghilangkan kelebihan pelarut sebelum
menambahkan sampel. Polistirenadivinilbenzena atau pendukung berbasis polimer lainnya
juga umum digunakan, terutama untuk fase SPE berbasis penukar ion. SPE berbasis
kelompok chelating (iminodiacetate, 8-hydroxyquinoline) banyak digunakan untuk ekstraksi
online atau off-line dan prakonsentrasi logam jejak, misalnya dari air laut.
Setelah pengkondisian, analit dan konstituen sampel lainnya diadsorpsi pada unggun
ekstraksi sorben. Langkah pembilasan menghilangkan beberapa konstituen yang tidak
diinginkan, sementara elusi menghilangkan analit yang diinginkan, mungkin meninggalkan
konstituen lain di belakang, tergantung pada kekuatan relatif interaksi dengan fase padat atau
kelarutan dalam pelarut yang dielusi. Prosedur tersebut digunakan untuk penentuan senyawa
organik dalam air minum dalam metode resmi Badan Perlindungan Lingkungan (EPA).
1. Kartrid SPE
Kartrid SPE digunakan untuk isolasi dan konsentrasi obat dari sampel biologis
dan biasanya diproses dalam batch 12 hingga 24 menggunakan manifold vakum. Ada
sistem penanganan cairan otomatis untuk meningkatkan efisiensi. Kartrid SPE umumnya
dianggap untuk sekali pakai dan sekali pakai. Namun, biaya dapat menjadi masalah yang
signifikan jika sejumlah besar sampel akan diproses. Aturan praktis yang baik adalah
bahwa kemasan SPE tipikal dapat mempertahankan sekitar 5% dari massanya tanpa
terobosan yang signifikan (misalnya, kemasan 500mg dapat diharapkan memberikan
kapasitas untuk ~25mg senyawa yang tertahan).
2. Tips SPE Pipet
Ujung pipet SPE menyediakan cara yang nyaman untuk memproses sejumlah
kecil sampel dan dapat digunakan untuk menahan bahan yang tidak diinginkan, atau lebih
umum, untuk secara selektif mempertahankan analit dan kemudian mengelusinya dengan
pelarut.
3. Disk SPE
Disk berbasis fiberglass, yang lebih kaku, juga tersedia. Disk area penampang
yang lebih besar dengan kedalaman lapisan yang lebih pendek memungkinkan laju aliran
yang lebih tinggi untuk sampel volume besar dengan konsentrasi analit yang rendah,
biasanya ditemui dalam analisis lingkungan. Disk kurang rentan terhadap penyaluran
ditemukan dengan kartrid dikemas. Mereka cenderung menyumbat jika sampel
mengandung partikel, sehingga prefilter mungkin harus digunakan. Kartrid disk (disk
yang dimuat dalam tong plastik) juga tersedia yang beroperasi seperti kartrid biasa.
4. Piring SPE 96-SUMUR
Kromatografi cair dikombinasikan dengan spektrometri massa banyak digunakan
untuk analisis obat yang cepat dan selektif, dan sampel dapat dijalankan dalam 1 sampai
3 menit Jadi, cara pembersihan sampel yang lebih cepat diperlukan untuk memproses
sampel dalam jumlah besar. Pelat 96-Sumur dengan sumur kecil (disebut pelat mikrotiter)
banyak digunakan untuk memproses sampel dalam jumlah besar dalam instrumen
otomatis. Penggunaan prosedur SPE yang optimal memerlukan penyelidikan fase diam
yang berbeda, massanya, volume pengkondisian, beban sampel, pelarut pencuci dan
elusi, dan ukuran sampel.