Praktikum Mikrobiologi KD 1

“Pewarnaan Gram Bakteri pada Yakult”

A. TUJUAN
1. Siswa dapat melakukan teknik pewarnaan gram dengan baik dan benar.
2. Siswa dapat menentukan klasifikasi gram dari bakteri dalam Yakult.

B. ALAT DAN BAHAN

Alat utk per kelompok: Alat utk 1 kelas: Bahan:
1. Kawat ose (1 buah) 1. Mikro pipet (1 buah) 1. Crystal violet /
2. Pembakar spirtus (1 buah) 2. Gelas ukur 10 ml (1 buah) gentian violet
3. Kaca objek (1 buah) 3. Tabung reaksi (1 buah) 2. Safranin
4. Penutup kaca objek (1 buah) 4. Rak tabung reaksi (1 buah) 3. Lugol/iodin
5. Penjepit kayu (1 buah) 5. Tissue (1 gulung) 4. Alkohol 95%
6. Beaker glass 250 ml (1 buah) 6. Korek api (1 buah) 5. Yakult
7. Mikroskop (1 buah) 7. Pipet tetes (5 buah) 6. Aquades (botol
semprot)

C. LANGKAH KERJA
Pengenceran:
1. Sterilkan mikropipet dan tabung reaksi dengan cara rendam keduanya dalam aquades yg telah
dididihkan
2. Gunakan mikropipet utk mengambil yakult sebanyak 1ml dan masukan ke dalam tabung reaksi
3. Tambahkan 9 ml aquades dan kocok hingga homogen
4. Bakteri uji siap digunakan
Persiapan preparat :
1. Nyalakan bunsen dengan korek api
2. Bersihkan kaca objek dengan tissue
3. Sterilkan (lewatkan) kaca objek diatas bunsen pd kedua sisinya
4. Sterilkan kawat ose diatas bunsen hingga kemerahan lalu diamkan sebentar
5. Gunakan ose yg telah disterilkan untuk mengambil bakteri uji (yakult)
6. Sebarkan bakteri yg telah diambil menggunakan ose ke kaca objek
7. Setelah itu sterilkan ose lagi dan kembalikan ke rak
8. Kemudian fiksasi (lewatkan) kaca objek di atas bunsen agar bakteri kering
9. Setelah kering, mulailah proses pewarnaan
Pewarnaan:
1. Teteskan cristal violet ke atas kaca objek lalu tunggu selama 1 menit
2. Setelah 1 menit bersihkan sisa crystal violet yg berlebih menggunakan aquades
3. Kemudian ambil lugol/ iodin, lalu teteskan ke kaca objek dan tunggu selama 1 menit
4. Setelah 1 menit bersihkan sisa iodin yg berlebih menggunakan aquades
5. Ambil larutan alkohol lalu teteskan ke atas kaca objek selama 5 detik
6. Kemudian bersihkan lagi dengan aquades
7. Ambil larutan safranin kemudian teteskan ke atas kaca objek dan tunggu selama 1 menit
8. Setelah 1 menit bersihkan larutan Safranin menggunakan aquades dan keringkan sisa aquades
pada kaca objek dengan tissue.
9. Tutup kaca objek dengan cover glass dan amati dengan mikroskop.
D. HASIL PENGAMATAN
Nama bakteri Yakult : ...................................................
NO PERLAKUAN HASIL PENGAMATAN
1 Minuman yakult Warna :
Wujud :
Tekstur :
2 Yakult + aquades (pengenceran) Warna :
Wujud :
Tekstur :
3 Bakteri uji setelah difiksasi (dikeringkan) Warna :
Wujud :
Tekstur :
4 Bakteri uji + crystal violet Warna :
Wujud :
Tekstur :
5 Bakteri uji + iodin Warna :
Wujud :
Tekstur :
6 Bakteri uji + alkohol Warna :
Wujud :
Tekstur :
7 Bakteri uji + safranin Warna :
Wujud :
Tekstur :
8 Penampakan Mikroskop Gambar:

E. KESIMPULAN
........................................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................................
........................................................................................................................................................................