PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI II

Dosen Pengampu : Endah Kartikawati, M.Sc

Asisten dosen : Ugas Setiaji, S.Farm
Intan Kartika Kusdianti

1. Pengenalan alat dan bahan (zoom)

2. Pembuatan media dan sterilisasi alat (zoom dan laboratorium)
Pembuatan media MHA dengan perhitungan
3. Inokulasi bakteri (zoom dan laboratorium)
4. Pewarnaan gram bakteri (laboratorium)
Berikut merupakan prosedur pewarnaan Gram:
ALAT BAHAN
 Mikroskop  Alcohol 95%
 Jarum ose  Aquades
 Cawan petri  Carbol fuchin
 Bunsen  Crystal violet
 Kapas  Tinta cina
 Pipet tetes  Lugol’s iodine
 Beaker gelas  Safranin
 Gelas piala  Tissue
 Cover glass  Alcohol 70%
 Kertas saring  Biakan murni bakteri
 Objek glass

NO CARA KERJA
1 Buat preparat ulas (smear) yang telah difiksasi dari bakteri gram
positif misal Strapilococcus aureus dan gram negatif misal
Escherichia coli
2 Teteskan Kristal violet sebagai pewarna utama pada kedua preparat,
usahakan semua ulasan terwarnai dan tunggu selama ±1 menit
3 Cuci dengan akuades mengalir
4 Teteskan mordant (lugol’s iodine) lalu tunggu ±1menit
5 Cuci dengan akuades mengalir
6 Beri larutan pemucat (ethanol 96%/aseton) setetes demi setetes hingga
etanol yang jatuh berwarna jernih. Jangan sampai terlalu banya
(overdecolorize)
7 Cuci dengan akuades mengalir
8 Teteskan counterstrain (safranin) dan tunggu selama ±45 detik
9 Cuci dengan akuades mengalir
 10 Keringkan preparat dengan kertas tissue yang ditempelkan disisi ulasan
(jangan sampai merusak ulasan) lalu biarkan mongering di udara

5. Mini project (laboratorium)

JUDUL : Aktifitas Antimikrobia Ekstrak ...Terhadap Bakteri E.coli dan SA

Oleh : (kelompok uji masing masing)

Alat : (menyesuaikan kebutuhan di dalam lab)

Bahan : sedian bakteri gram positif dan negatif, MHA, antibiotik
Metode : Difusi kyrbi and bauer (Sumuran dan cakram)

1. Dosis ekstrak : 50%, 25%, 12.5%

Dosis antibiotik : murni
2. Kelompok 1 : cakram dengan bakteri uji E.coli
Kelompok 2 : sumuran dengan bakteri uji SA
Kelompok 3 : cakram dengan bakteri uji SA
Kelompok 4 : sumuran dengan bakteri uji E.coli
3. Kontrol positif dalam lobang/cakram antibiotik
4. Kontrol negatif dalam lobang/cakram DMSO 10%

Yang disiapkan oleh praktikan per kelompok:

1. Kertas coklat 1 gulung
2. Tisue kering 1
3. Tisue basah 1

Yang disiapkan oleh praktikan per individu:

1. Masker 2
2. Sarung tangan 2
3. handsanitazer