M.16.06.3.0027 Protokol Validasi Metode Analisis Uji Potensi Antibiotik Gentamicin Rev 02

PT MARIN LIZA PROTOKOL VALIDASI METODE Halaman :
FARMASI ANALISIS UJI POTENSI ANTIBIOTIK

GENTAMICIN DALAM SEDIAAN SALEP 1 dari 9
GENTAMICIN 0,1%
Divisi/Departemen : Seksi : No. Dokumen : M.16.06.3.0027 Revisi ke : 02
Quality and Development / Validasi Tgl. Berlaku : Pengganti No. : M.16.06.3.0027
Quality Assurance Tanggal : 23 Mei 2017
LEMBAR PENGESAHAN
Disusun oleh :
TANDA
NAMA JABATAN TANGGAL
TANGAN
Muthia Primawardani, ST. Staff Validasi
Diperiksa oleh :
TANDA
TANGAN
Manager Research and
apt.Nida El Ibady, S.Si.
Development
Manager Quality Control
apt. Alia Prima C, S.Si.
PT. Marin Liza Farmasi
Senior Manager Quality and
apt.Feby Pramutadi, S.Si., MBA.
Development
Diperiksa dan disetujui oleh :
TANDA
TANGAN
apt.Vivi Fitri N., S.Farm. Manager Quality Assurance
GENTAMICIN 0,1%
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................1

DAFTAR ISI ...................................................................................................2
1. TUJUAN …..………........................................................................................3
2. RUANG LINGKUP..........................................................................................3
3. PENANGGUNG JAWAB................................................................................3
4. ALAT DAN BAHAN.......................................................................................3
5. PARAMETER PENGUJIAN...........................................................................4
6. PROSEDUR......................................................................................................4
7. REFERENSI.....................................................................................................9
8. LAMPIRAN......................................................................................................9
9. RIWAYAT .......................................................................................................9
10. DISTRIBUSI…………………………………………………………………..9
GENTAMICIN 0,1%
1. TUJUAN
1.1 Untuk membuktikan melalui pengujian laboratorium bahwa performa karakteristik metode
penetapan kadar potensi antibiotik Gentamicin dalam sediaan semi solid dapat secara
konsisten memberikan hasil yang akurat.
1.2 Untuk mencatat informasi dan data yang diperlukan dalam menetapkan spesifikasi performa
metode untuk penetapan kadar potensi antibiotik Gentamicin.
2. RUANG LINGKUP
Metode analisis yang divalidasi adalah metode analisis uji potensi antibiotik dengan
menggunakan metode lempeng silinder untuk penetapan kadar sediaan semi solid yang
mengandung Gentamicin Sulfat setara dengan 0,1% Gentamicin yang diproduksi oleh
PT Marin Liza Farmasi.
3. PENANGGUNG JAWAB
3.1 Tim Validasi
3.1.1 Merencanakan validasi
3.1.2 Menyiapkan protokol validasi
3.1.3 Memastikan bahwa status kalibrasi semua peralatan dan instrument yang digunakan
untuk validasi telah diperbarui
3.1.4 Memastikan bahwa semua bahan yang digunakan untuk validasi termasuk reagensia
dan baku pembanding belum kadaluwarsa.
3.1.5 Melaksanakan validasi metode analisis berdasarkan protokol yang telah disetujui.
3.2 Manager Departemen Research and Development dan Quality Control

Bertanggung jawab mengkaji dan memeriksa protokol sebelum validasi dilaksanakan.
3.3 Manager Departeman Quality Assurance

Bertanggung jawab mengkaji, memeriksa dan menyetujui protokol validasi.
4. ALAT DAN BAHAN

4.1 Alat yang digunakan pada proses validasi yaitu:
4.1.1 Corong Pisah
4.1.2 Labu Ukur 100 ml Steril
4.1.3 Pipet Ukur 10 ml Steril
4.1.4 Pipet Ukur 5 ml Steril
4.1.5 Pipet Tetes Steril
4.1.6 Cawan timbang Steril
4.1.7 Silinder Baja Steril
4.1.8 Cawan Petri Ө 10 cm Steril
4.1.9 Gelas Ukur 25 ml Steril
GENTAMICIN 0,1%
4.1.10 Kontainer 15 L
4.1.11 Magnetic Stirer
4.1.12 Unit Spektrofotometer
4.1.13 Inkubator
4.1.14 Finn Pipette (20µL - 100µL)
4.1.15 Finn Pipette (100µL - 1000µL)
4.1.16 Mikro pipet
4.1.17 Oven
4.1.18 Autoclave
4.2 Bahan :
4.2.1 Working Standard Gentamicin sulfat
4.2.2 Plasebo Salep Gentamicin
4.2.3 Kalium dihydrogen phosphate
4.2.4 Kalium hydrogen phosphate
4.2.5 NaCl Fisiologis
4.2.6 Media A1
4.2.7 Biakan Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
4.2.8 NaOH 5 N
4.2.9 HCl 5 N
4.2.10 H3PO4 18 N
4.2.11 KOH 10 N
5. PARAMETER PENGUJIAN
Parameter pengujian yang dilakukan untuk validasi adalah :
Tabel 1. Kriteria Penerimaan Pengujian Validasi Gentamicin
No. Parameter Indikator Kriteria Penerimaan
1. Akurasi Persen rekoveri (Perolehan kembali) 70,0-130,0%
SBR ≤ 30%
2. Presisi dan Presisi antara Simpangan baku relatif Tidak lebih dari 30%
3. Linearitas dan Rentang Hubungan yang linear antara respon Garis regresi y = ax + b
analisis dan konsentrasi analit dalam Koefisien korelasi > 0,98
rentang penggunaan metode analisis
4. Spesifisitas Daya hambat Plasebo tidak boleh memberikan
daya hambat
5. Ketegaran (Robustness) Memenuhi persyaratan akurasi dan % Rekoveri 70,0-130,0%
presisi perbedaan waktu dan frekuensi SBR ≤ 30%
ekstraksi
6. PROSEDUR
6.1 Prosedur untuk sampel parameter validasi
Metode analisis untuk penetapan kadar/potensi Gentamicin
GENTAMICIN 0,1%
Persyaratan kadar = 90%-135%

Metode pengujian = Potensi Antibiotik
Konsentrasi Sampel = 7 tingkat konsentrasi dalam rentang 70,0 % - 130,0 %.
Replikasi = Tiap replikasi dianalisis sekurang-kurangnya triplo.
Analisis dilakukan oleh analis yang berbeda pada hari yang berbeda di laboratorium yang
sama.
6.1.1 Akurasi
Dilakukan dengan 9 (Sembilan) penentuan dari 3 (tiga) tingkat konsentrasi masing-
masing dilakukan 3 (tiga) kali pengulangan yaitu 80%, 80%, 80%, 100%, 100%,
100%, 120%, 120% dan 120%.
6.1.2 Presisi
Dilakukan dengan mengamati 7 pengujian pada konsentrasi 100%.
6.1.3 Presisi antara
Dilakukan dengan mengamati pengujian presisi yaitu 7 kali pengujian untuk
konsentrasi 100% menggunakan 2 analis di hari yang berbeda.
6.1.4 Linearitas dan Rentang
Dilakukan dengan mengamati 7 pengujian dengan berbagai konsentrasi yaitu
konsentrasi 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120% dan 130%.
6.1.5 Spesifisitas
Dilakukan dengan mengamati pengujian pada plasebo. Plasebo tidak boleh
memberikan daya hambat.
6.1.6 Robustness
Parameter Robustness dilakukan dengan menguji sampel 100% dengan perbedaan
sebagai berikut:
a. Perbedaan waktu ekstraksi yaitu 1 menit, 3 menit, dan 5 menit.
b. Perbedaan frekuensi ekstraksi, yaitu 1 kali ektraksi, 2 kali ekstrasi, dan 3 kali
ekstraksi.
6.2 Persiapan Pembuatan Larutan dan Media

6.2.1 Larutan Dapar Phosphat (D3) pH 8
Timbang Kalium dihydrogen fosfat 7,322 gram dan Kalium hydrogen fosfat 234,22
gram, larutkan dengan aquadest hingga 14.000 ml dan atur pH hingga 8,0 ± 0,1 dengan
penambahan H3PO4 18 N atau KOH 10 N.
6.2.2 Larutan NaCl fisiologis
Timbang NaCl 13,5 gram larutkan dengan aquadest hingga 1.500 ml.
6.2.3 Media 11
Timbang 162,0 gram media A1 larutkan dengan aquadest hingga 6.000 ml. Atur pH
hingga 8,3 ± 0,1 dengan penambahan HCl 5 N atau NaOH 5 N setelah sterilisasi.
Ketiga larutan tersebut disterilkan dalam Autoclave pada 121o C selama 15 menit.
GENTAMICIN 0,1%
6.3 Pembuatan Suspensi Bakteri

6.3.1 Inokulasikan Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 pada media A11.
6.3.2 Inkubasi selama 24 jam pada suhu 30-35oC.
6.3.3 Buat suspensi bakteri Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 yang telah berusia 24
jam dengan NaCl fisiologis steril atur hingga transmitan 25 % pada λ 580 nm dengan
NaCl fisiologis sebagai blanko.
6.4 Pembuatan Lempeng Agar

6.4.1 Buatlah lapisan 1 Media 11 dengan cara tuangkan 11 ml media tersebut ke dalam
cawan petri steril , biarkan hingga memadat.
6.4.2 Campurkan suspensi bakteri 25% transmitan yang sudah didapat ke dalam media 11
steril pada suhu ±45oC dengan perbandingan 1,5 : 100, kocok hingga homogen
(Lapisan 2).
6.4.3 Isikan 10 ml Lapisan 2 ke dalam cawan petri yang berisi 11 ml media 11 yang sudah
memadat. Biarkan dingin dan mengeras.
6.5 Pembuatan Sampel Variasi Konsentrasi

6.5.1 Pembuatan Plasebo
a. Siapkan bahan-bahan sebagai berikut:
Tabel 2. Pembuatan Plasebo
Nama Bahan Formula Satuan
Emulgade 1000 NI 0,250 g
BHT 0,025 g
Parafin Liquid #1 0,500 g
Parafin Liquid #2 0,750 g
Aqua DM 0,100 ml
Vasseline Jerman 48,300 g
b. Lakukan penimbangan bahan-bahan sesuai dengan Tabel 2. Variasi penimbangan
bahan.
c. Campur semua bahan hingga homogen, sesuai dengan Catatan Pengolahan Bets No.
002/GEN-0,1/CPB/PR (Rev. 1)
6.5.2 Pembuatan sampel variasi konsentrasi
Sampel variasi konsentrasi dibuat dengan variasi penimbangan bahan dan penambahan
Plasebo sebagai berikut :
Tabel 3. Pembuatan Sampel Variasi Konsentrasi (U)
Konsentrasi (U) Gentamicin sulfat Plasebo yang ditambahkan Jumlah Replikasi
0 NA 1g 1
70 29,66 mg 1g 2
80 33,90 mg 1g 3
90 38,13 mg 1g 2
100 42,37 mg 1g 7
110 46,61 mg 1g 2
120 50,84 mg 1g 3
130 55,08 mg 1g 2
GENTAMICIN 0,1%
6.6 Preparasi Larutan Standar

6.6.1 Larutan Standar 1.000 µg/ml
a. Timbang 42,37 mg standar Gentamicin sulfat (~25 mg Gentamicin) ke dalam labu
ukur 25 ml, larutkan dan encerkan dengan larutan dapar phosphat (D3) hingga tanda
batas (Standar A : 1.000 µg/ml).
b. Pipet 10 ml larutan Standar A ke dalam labu ukur 100 ml, encerkan dengan larutan
dapar phosphat (D3) (Standar B : 100 µg/ml).
6.6.2 Pembuatan Larutan Standar S1, S2, S3, S4, dan S5.
Tabel 4. Pemipetan Larutan Standar
Konsentrasi Volume Standar B Ad larutan dapar
No Standar
Standar (100 µg/ml) phosphate (D3) steril
1. S1 4,45 µg/ml 4,45 ml 100 ml
2. S2 6,67 µg/ml 6,67 ml 100 ml
3. S3 10,0 µg/ml 10,0 ml 100 ml
4. S4 15,0 µg/ml 15,0 ml 100 ml
5. S5 22,5 µg/ml 22,5 ml 100 ml
6.7 Preparasi Sampel

6.7.1 Timbang Gentamicin sulfat sesuai dengan Tabel 3. Pembuatan sampel variasi
konsentrasi (U) (Misal 70% ~ 29,66 mg), masukkan ke dalam labu ukur 25 ml,
larutkan dengan larutan dapar phosphate (D3) steril hingga tanda batas, homogenkan.
(Larutan A)
6.7.2 Pipet 1 ml Larutan A, masukkan ke dalam corong pisah, tambahkan 1 g placebo,
ekstraksi menggunakan 50 ml Chloroform dan 25 ml larutan dapar phosphate (D3)
steril, lakukan ekstraksi selama 3 menit. Tampung fasa dapar hasil ekstraksi ke dalam
labu ukur 100 ml.
6.7.3 Lakukan ekstrasi sebanyak tiga kali.
6.7.4 Tambahkan larutan dapar phosphate (D3) steril ke dalam labu ukur 100 ml yang berisi
fasa dapar hasil ekstraksi hingga tanda batas, homogenkan.
6.7.5 Ulangi langkah 6.7 poin 6.7.1 sampai 6.7.4 untuk sampel konsentrasi 80%, 90%,
100%, 110%, 120%, 130% dan placebo sesuai dengan replikasi yang diperlukan.
6.8 Penyuntikkan ke dalam cawan Petri

6.8.1 Ke dalam setiap cawan petri yang berisi lempeng agar, jatuhkan 6 buah silinder baja
pada permukaan lempeng agar dengan ketinggian ± 12 mm dan radius 2-3 cm.
6.8.2 Suntikkan dengan mikropipet larutan standar sebanyak 80 µL, dengan pola sebagai
berikut :
S2
S3 S3 S3
S2 S2
GENTAMICIN 0,1%
S3
Lakukan triplo.
6.8.3 Suntikkan dengan mikropipet larutan uji konsentrasi (U) sesuai dengan Tabel 3.
Pembuatan Sampel Variasi Konsentrasi (U) sebanyak 80 µL, dengan pola sebagai
berikut :
U70
S3 S3
U70 U70
S3
Lakukan triplo.
6.8.4 Lakukan langkah 6.8 poin 6.8.3 untuk larutan uji konsentrasi 80%, 90%, 100%, 110%,
120%, 130%, dan larutan Plasebo.
6.8.5 Inkubasikan cawan-cawan tersebut dalam inkubator pada temperatur 32 - 35ºC selama
16-18 jam.
6.8.6 Setelah waktu inkubasi tercapai, ambil semua silinder, ukur diameter hambatan dengan
antibiotic zonescale.
6.9 Penentuan Karakteristik Performa Metode Analisis

6.9.1 Linearitas
Garis regresi : y = a + bx
Keterangan :
a = perpotongan dengan sumbu y
b = kemiringan (slope) garis regresi
∑ ( x i−x ) ( y i− y )
Koefisien korelasi, r = 1
[∑ ( i ) ( i ) ]2
x −x y − y
Keterangan :
xi = pengukuran individual dalam n pengukuran
x = nilai rata – rata pengukuran
yi = nilai individual sebenarnya dalam nilai n nilai sebenarnya
= nilai rata – rata sebenarnya.
6.9.2 Presisi
Kedekatan hasil analisis pada konsentrasi 100%. Presisi metode analisis, dinyatakan
dengan simpangan baku relatif (%SBR).
6.9.3 Presisi antara
Pengujian pada konsentrasi 100% oleh 2 analis yang berbeda, di hari yang berbeda
GENTAMICIN 0,1%
menggunakan fasilitas dan laboratorium yang sama. Kriteria penerimaan dinyatakan

dengan simpangan baku relatif (%SBR) antara analis pertama dan analis kedua.
6.9.4 Akurasi
Akurasi metode analisis menyatakan kedekatan antara nilai yang dapat diterima
dengan baik sebagai nilai konvensional sebenarnya atau nilai pembanding yang dapat
diterima dengan nilai yang diperoleh yaitu nilai hasil analisis.
Akurasi metode analisis dinyatakan dengan rekoveri hasil analisis.
Rekoveri dinyatakan dengan rumus :
Hasil Analisis
Rekoveri = x 100%
Hasil Sebenarnya
6.9.5 Robustness
Memenuhi persyaratan akurasi dan presisi perbedaan waktu inkubasi sampel dan
perbedaan usia suspensi bakteri. Robustness metode analisis untuk masing-masing
uji dinyatakan dengan simpangan baku relatif (%SBR).
6.9.6 Rentang
Memenuhi persyaratan akurasi dan presisi dalam rentang analisis yang dinyatakan
dengan simpangan baku relatif.
7. REFERENSI
7.1 Farmakope Indonesia Edisi VI, 2020.
7.2 Validasi Metode Analisis Mikrobiologi : Marlia Singgih Wibowo, School of Pharmacy ITB,
2015.
8. LAMPIRAN
8.1 M.16.06.3.0027-F01.02 Lembar Kerja Persiapan Validasi Metode Analisis Uji Potensi
Antibiotik Gentamicin dalam Salep Gentamicin 0,1%.
8.2 M.16.06.3.0027-F02.02 Lembar Kerja Pengujian Validasi Metode Analisis Uji Potensi
Antibiotik Gentamicin dalam Salep Gentamicin 0,1%.
8.3 M.16.06.3.0027-F03.02 Catatan Perhitungan Potensi Antibiotik Gentamicin
9. RIWAYAT
Tanggal No. No. Change
No. No. Protokol Catatan Revisi
Berlaku Revisi Control
1. 05 Aug 2016 00 M.16.06.3.0004 NA Protokol pertama kali diterbitkan
Perubahan prosedur uji dan
2. 23 Mei 2017 01 M.16.06.3.0027 PP-RD052017007
prosedur ekstraksi
3 02 M.16.06.3.0027 Review ulang Protokol
10. DISTRIBUSI
10.1 HRIS
GENTAMICIN 0,1%

M.16.06.3.0027 Protokol Validasi Metode Analisis Uji Potensi Antibiotik Gentamicin Rev 02

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

M.16.06.3.0027 Protokol Validasi Metode Analisis Uji Potensi Antibiotik Gentamicin Rev 02

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PT MARIN LIZA PROTOKOL VALIDASI METODE Halaman :

FARMASI ANALISIS UJI POTENSI ANTIBIOTIK

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................1

3.2 Manager Departemen Research and Development dan Quality Control

3.3 Manager Departeman Quality Assurance

4. ALAT DAN BAHAN

Persyaratan kadar = 90%-135%

6.2 Persiapan Pembuatan Larutan dan Media

6.3 Pembuatan Suspensi Bakteri

6.4 Pembuatan Lempeng Agar

6.5 Pembuatan Sampel Variasi Konsentrasi

6.6 Preparasi Larutan Standar

6.7 Preparasi Sampel

6.8 Penyuntikkan ke dalam cawan Petri

6.9 Penentuan Karakteristik Performa Metode Analisis

menggunakan fasilitas dan laboratorium yang sama. Kriteria penerimaan dinyatakan

Anda mungkin juga menyukai