MAKALAH SITOHISTOLOGI

JAMINAN MUTU UNTUK IMUNOHISTOKIMIA

Dosen Pengajar :
Risa Wahyuningsih, S.ST., M.Si

Disusun oleh :
Muhammad Ridha
NIM : P07134218145

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLTEKKES KEMENKES BANJARMASIN JURUSAN ANALIS
KESEHATAN
PRODI TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS
PROGRAM SARJANA TERAPAN
2021
 KATA PENGANTAR

Alhamdulillah puji dan syukur kehadirat Allah SWT penulis ucapkan, karena
berkat karunia-Nya penyusunan makalah ini dapat selesai tepat pada waktu yang
ditentukan. Makalah yang berjudul “Jaminan Mutu untuk Imunohistokimia” ini
diajukan untuk memenuhi tugas mata kuliah Sitohistologi.
Dengan penuh rasa hormat dan tulus hati, penulis haturkan rasa terima kasih
yang sebesar-besarnya kepada Ibu Risa Wahyuningsih, S.ST., M.Si. selaku dosen
mata kuliah Sitohistologi.
Makalah ini masih banyak kekurangannya sehingga penulis mengharapkan
saran dan komentar yang dapat dijadikan masukan sebagai penyempurnaan dari
makalah ini.

Banjarabaru, 7 April 2021

Penulis

1
 DAFTAR ISI

Halaman
KATA PENGANTAR……………………………………………………………..1

DAFTAR ISI............................................................................................................2

BAB I PENDAHULUAN........................................................................................3

A. Latar Belakang................................................................................................3

B. Rumusan Masalah...........................................................................................4

C. Tujuan.............................................................................................................4

BAB II PEMBAHASAN.........................................................................................5

A. Pengertian Imunohistokimia...........................................................................5

B. Sistem Manajemen dalam Penjaminan Mutu Imunohistokimia.....................5

BAB III KESIMPULAN........................................................................................17

DAFTAR PUSTAKA…………………………………………………………….18

2
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Imunohistokimia (IHC) telah menjadi teknik laboratorium yang banyak dan
umum digunakan yang memainkan peran utama selama proses perawatan pasien
mulai dari diagnosis hingga stratifkasi prognostik hingga memandu pilihan
pengobatan. Meskipun digunakan secara luas, IHC masih memiliki beberapa
kelemahan, terutama karena faktor pra-analitis dan analitis (Vyberg dan Nielsen
2016; Gambella et al. 2017). Meskipun ada banyak potensi kekritisan pada fase
pra-analisis, yang paling relevan adalah: fiksasi (fiksatif, iskemia dingin, waktu
dan suhu fiksasi) dan prosedur pemrosesan jaringan (Torlakovic et al. 2017). Fase
analitik, di sisi lain, hadir dengan titik kritis berbeda yang membutuhkan
standarisasi yang tepat: pengambilan antigen, waktu inkubasi, beragam klon
antibodi primer, sistem deteksi variabel, dan sistem pewarnaan otomatis
(Torlakovic et al.2017).
Kelemahan utama, bagaimanapun, adalah lebih sering daripada tidak,
pengendalian internal tidak ada dalam sampel. Dalam skenario yang sering terjadi
ini, diperlukan kontrol positif eksternal (Torlakovic et al. 2017). Kontrol eksternal
terdiri dari bagian eksternal yang diperoleh dari jaringan yang diketahui
imunereaktif dan diwarnai secara bersamaan dalam proses yang sama seperti
bagian jaringan yang dianalisis. Kritik yang relevan untuk penggunaan slide
tambahan sebagai kontrol adalah: memakan waktu dan tidak hemat biaya; tidak
ada jaminan untuk prosedur pra-analitis dan pemrosesan jaringan yang sama atau
bahwa kedua slide diperlakukan sama selama prosedur IHC yang sama
(Torlakovic et al. 2017).
Kendali mutu dan jaminan mutu adalah ukuran kinerja penting yang
dilakukan selama operasi laboratorium diagnostik sehari-hari. Ada beberapa
elemen penting untuk jaminan mutu dalam imunohistokimia: staf yang terlatih dan

3
 berpengalaman dengan pendidikan berkelanjutan dan pengembangan profesional;
pemeriksaanan harian dari semua slide yang disiapkan oleh laboratorium;
penggunaan reagen yang berkualitas baik dan berkarakteristik baik; serta titer
antibodi yang sesuai, pengambilan (retrieval) antigen, prosedur inkubasi dan
deteksi.
Imunohistokimia adalah teknik yang sangat berguna untuk memastikan
distribusi jaringan dan sitolokalisasi interaksi antigen-antibodi spesifik dalam
sampel histologis. Dengan demikian, IHC telah menjadi teknik standar diagnostik
tambahan di banyak laboratorium patologi untuk identifikasi protein tertentu atau
mikroorganisme dalam sampel jaringan yang difiksasi dengan formalin dan
tertanam parafin. Di era pengobatan yang dipersonalisasi ini, ahli patologi diminta
untuk "mengukur" tingkat ekspresi penanda prognostik dan prediktif
menggunakan teknik yang bisa dibilang "non-kuantitatif" ini. Namun, sampai saat
itu, tanggung jawab untuk merumuskan dan melaksanakan program manajemen
mutu (Quality Management/QM) tetap menjadi tanggung jawab laboratorium
patologi individu. Terlepas dari pentingnya QM, peraturan pemerintah dan
sebagian besar pedoman yang diterbitkan gagal memberikan panduan khusus
tentang pembentukan sistem yang kuat untuk QM dari teknik IHC. Hal ini
kemungkinan besar karena ada banyak metode untuk mencapai pemenuhan
terhadap peraturan ini dan badan pengatur secara adil menahan diri dari pedoman
penerbitan yang dapat ditafsirkan sebagai pembatasan. Oleh karena itu, penulis
akan berfokus pada prinsip-prinsip dan beberapa praktik khusus yang terlibat
dalam QM laboratorium IHC. QM di IHC melibatkan program kendali mutu
(Quality Control/QC), jaminan mutu (Quality Assurance/QA), dan peningkatan
mutu (Quality Improvement/QI).

B. Rumusan Masalah
1. Apa itu imunohistokimia?
2. Bagaimana sistem manajemen dalam penjaminan mutu imunohistokimia?

4
C. Tujuan
1. Untuk mengetahui pengertian dari imunohistokimia.
2. Untuk mengetahui sistem manajemen dalam penjaminan mutu
imunohistokimia.
BAB II
PEMBAHASAN

A. Pengertian Imunohistokimia
Imunohistokimia adalah proses untuk mendeteksi antigen (protein,
karbohidrat, dsb) pada sel dari jaringan dengan prinsip reaksi antibodi yang
berikatan terhadap antigen pada jaringan. Nama imunohistokimia diambil dari
nama “immune” yang menunjukkan bahwa prinsip dasar dalam proses ini ialah
penggunaan antibodi dan “histo” menunjukkan jaringan secara mikroskopis.
Imunohistokimia seringkali digunakan untuk mengukur dan mengidentifikasi
proses proliferasi sel dan apoptosis sel. Imunohistokimia juga sering digunakan
untuk penelitian dasar dalam rangka mengetahui distribusi dan lokasi biomarker
ataupun protein terekspresi pada berbagai macam jaringan pada tubuh (Ramos-
Vara, 2005). Hasil interaksi antara antigen dan antibodi biasanya dilihat dengan
konjugasi antibodi dengan enzim seperti peroksidase (Bintari, 2016).
Imunohistokimia merupakan pemeriksaan imunopatologik yang sangat
potensial untuk memeriksa antigen secara lokal di jaringan yang menggunakan
antibodi spesifik. Hal ini disebabkan adanya ikatan spesifik antara antigen dengan
antibodi. Pemeriksaan imunohistokimia mempunyai kemampuan yang tinggi
untuk memisahkan, menyeleksi, dan bersifat spesifik (Ambari, 2003).

B. Sistem Manajemen dalam Penjaminan Mutu Imunohistokimia

Manajemen mutu dalam imunohistokimia melibatkan pelaksanaan program
kendali mutu (QC) dan jaminan mutu (QA), serta peningkatan mutu (QI) di

5
laboratorium. Hal ini bertujuan untuk menjaga mutu slide pengujian
imunohistokimia agar hasil interpretasi yang tepat dapat dicapai. Adapun ukuran
mendasar dari mutu IHC dalam patologi bedah diagnostik adalah apakah tes
mendeteksi antigen yang diinginkan saat ada (sensitivitas) tetapi tetap negatif jika
antigen tidak ada (spesifisitas).
Komponen kunci dari kendali mutu mencakup pengoptimalan variabel pra-
analitik (seperti fiksasi dan pemrosesan jaringan yang tepat) dan variabel analitik
(seperti teknik pengambilan epitop, titrasi dan validasi antibodi, sistem deteksi dan
kendali jaringan yang tepat). Sementara itu, langkah-langkah jaminan mutu
mencakup pengetahuan tentang pola reaktivitas dan pemilihan panel yang tepat,
pendidikan berkelanjutan dari ahli patologi dan staf teknis, tinjauan slide harian,
praktik konsultasi internal dan eksternal yang kuat, dan partisipasi dalam program
penilaian kualitas eksternal.
Beberapa hal-hal yang menjadi pertimbangan dan perhatian dalam menjamin
mutu dalam IHC, yaitu:
1. Fiksasi dan Pemrosesan Jaringan
Spesimen harus diperiksa dan difiksasi sesegera mungkin setelah tiba di
laboratorium patologi bedah. Penundaan dengan pendinginan, tetapi tidak akan
mencegah proteolisis yang dapat menyebabkan hasil IHC negatif palsu karena
degradasi antigen atau pewarnaan latar belakang yang tinggi akibat pengikatan
nonspesifik. Fiksasi yang tertunda juga dapat menyebabkan difusi antigen.
Namun, efek merusak dari waktu iskemik dingin bervariasi di antara penanda
yang berbeda yang telah dievaluasi secara formal. Sementara fiksasi tertunda
dapat mempengaruhi pewarnaan IHC pada antigen membran dalam waktu 1
jam, penanda lain tampaknya jauh lebih stabil (hingga 12 jam).
Fiksasi yang tidak memadai dan protokol pemrosesan jaringan variabel
adalah 2 faktor penting yang bertanggung jawab atas hasil IHC yang tidak dapat
diandalkan dan tidak konsisten. Banyak yang telah ditulis mengenai panjang
minimum fiksasi formalin, terutama untuk penanda prediktif dan prognostik,

6
 seringkali dengan data pendukung yang terbatas. Meskipun fiksasi dalam pH
netral 10%, formalin dengan buffer fosfat selama minimal 6 jam (hingga 24
jam) telah direkomendasikan, hal ini tidak mungkin dilakukan untuk banyak
laboratorium volume tinggi.
Penggunaan larutan fiksatif atau prosedur alternatif seperti demineralisasi
setelah fiksasi formalin harus divalidasi secara independen, karena ekstrapolasi
dari data yang diperoleh menggunakan jaringan fiksasi formalin tidak dapat
diandalkan. Faktor lain yang harus diingat saat mengoptimalkan uji IHC adalah
protokol pemrosesan jaringan yang berbeda yang digunakan di beberapa
laboratorium untuk jenis spesimen tertentu, seperti preparasi blok sel dari
spesimen sitologi, biopsi jaringan kecil atau besar, dan spesimen berlemak yang
membutuhkan fiksasi formalin dalam waktu lama. Karena mempertahankan
jaringan kontrol positif untuk semua tes IHC dengan menggunakan spesimen
yang diproses secara alternatif tidak praktis, kompromi yang rasional adalah
untuk memvalidasi beberapa penanda yang umum digunakan (yaitu, sitokeratin,
protein S-100, LCA) pada jaringan yang diproses dengan cara yang sama.

2. Antibodi dan Evaluasi Sistem Deteksi

Data pada antibodi individu dapat dikumpulkan dari laporan tes
kecakapan eksternal atau berbasis web sumber daya. Faktor kunci yang
dipertimbangkan dalam laporan tes kemampuan eksternal adalah dengan
mengukur keakuratan antibodi dalam pengaturan diagnostik khusus untuk yang
akan digunakan. Apakah antiserum poliklonal dan antibodi monoclonal sudah
siap dipakai, dan apakah preparasi antibodi sudah sesuai. Antiserum poliklonal
mungkin mengandung beberapa klon antibodi afinitas tinggi yang diarahkan ke
banyak epitop antigen target yang berbeda, sehingga meningkat sensitivitas.
Namun, adanya beberapa antibodi dalam antiserum meningkatkan potensi
aktivitas silang dengan antigen lain dan pewarnaan nonspesifik atau latar
belakang. Interaksi yang tidak diinginkan ini dapat diminimalisasikan dengan

7
 menggunakan langkah-langkah pemblokiran protein tambahan dari protokol
IHC. Berbeda dengan antiserum poliklonal, antibodi monoclonal dapat bereaksi
dengan epitop individu dan akibatnya menunjukkan peningkatan spesifisitas
dibandingkan sebagian besar antibodi poliklonal. Oleh karena itu, pewarnaan
nonspesifik biasanya tidak menjadi masalah. Sebaliknya, kerugian utama
menggunakan monoklonal antibodi adalah hilangnya sensitivitas. Ini biasanya
bisa terjadi ditangani selama pengoptimalan pengujian.

3. Standarisasi Protokol
Tujuan standardisasi adalah untuk meningkatkan presisi, atau
reproduktifitas run-to-run, yang dapat dievaluasi dengan menggunakan bagian
kontrol standar yang dijalankan dari hari ke hari. Standardisasi membutuhkan
kepatuhan pada prosedur laboratorium tertulis yang menentukan klon antibodi
dan lot yang digunakan, pengenceran antibodi yang optimal, teknik
pengambilan antigen dan lama waktunya, sistem deteksi yang digunakan,
kontrol jaringan yang direkomendasikan, dan pola imunoreaktivitas yang
diharapkan beberapa hal, otomatisasi sangat meningkatkan run-to-run
standarisasi uji IHC untuk alasan yang jelas. Sebuah konsekuensi dari memiliki
protokol standar adalah penggunaan itu fiksatif atau sediaan alternatif harus
dioptimalkan dan divalidasi secara terpisah. Protokol alternatif ini atau studi
validasi harus didokumentasikan secara eksplisit di manual prosedur. Selain
komponen yang disebutkan, hal lain yang penting untuk didokumentasikan
dalam manual prosedur mencakup prinsip dan signifikansi klinis dari uji
tersebut, persyaratan yang menangani specimen tertentu (fiksasi), bagaimana
hasil diinterpretasikan, keterbatasan dalam metodologi pengujian (termasuk
hal hal yang mengganggu substansi), referensi literatur terkait, dan korektif
tindakan ketika kontrol jaringan gagal, termasuk tindakan rencanakan jika
pengujian gagal walaupun sudah menerapkan tindakan korektif.

8
4. Optimisasi Pewarnaan Antibodi
Pengoptimalan adalah "proses di mana laboratorium menguji secara serial
dan memodifikasi prosedur komponen dengan titik akhir menghasilkan
pengujian kualitas tinggi yang konsisten." Ini memerlukan pengujian serial dan
modifikasi beberapa faktor, termasuk protokol pengambilan antigen (durasi,
teknik, pH, buffer), konsentrasi antibodi, waktu dan suhu inkubasi antibodi
primer, jenis sistem deteksi dan kondisi inkubasi, dan waktu inkubasi
kromogen.
Rekomendasi yang umum adalah awalnya membandingkan antigen yang
berbeda teknik pengambilan menggunakan sejumlah terbatas titrasi antibodi
yang mengelompokkan pengenceran yang direkomendasikan pabrikan dalam
apa yang disebut pendekatan "papan catur". Beberapa sumber daya tambahan
yang sangat baik yang merinci aspek teknis dan teoritis tentang pengoptimalan
uji IHC tersedia untuk referensi. Terlepas dari itu metode optimasi digunakan di
laboratorium, prosedur harus didasarkan pada alasan yang kuat dan
didokumentasikan dengan jelas.
Pengambilan (retrieval) antigen merupakan langkah penting dalam
pengujian IHC jaringan terfiksasi formalin. 2 metode pengambilan antigen yang
paling umum digunakan adalah energi panas dan proteolisis. Kami lebih
memilih metode yang diinduksi panas karena pengambilan antigen proteolitik
lebih sensitif terhadap perbedaan durasi fiksasi jaringan. Mempersiapkan
larutan protease dari banyak reagen berbeda dengan tingkat aktivitas enzim
yang berbeda juga memperkenalkan sumber variabilitas tambahan pada proses
tersebut. Selain itu, hasil dari organisasi pengujian profisiensi eksternal
umumnya menunjukkan bahwa metode pengambilan antigen enzimatik
menghasilkan lebih banyak variabilitas run-to-run daripada pengambilan epitop
yang diinduksi panas.
Efisiensi pengambilan epitop yang diinduksi panas dipengaruhi oleh
beberapa faktor, tetapi yang paling penting tampaknya adalah suhu inkubasi,

9
 durasi perlakuan panas, dan pH dan buffer yang digunakan (yaitu, sitrat pada
pH 6,0, EDTA pada pH 8, Tris-HCl pada pH 10, antara lain). Oleh karena itu,
protokol pengambilan antigen yang diinduksi panas harus dioptimalkan
sehubungan dengan variabel-variabel ini.
Sudah jelas bahwa antigen yang diinginkan harus ada di jaringan, tetapi
sensitivitas analitik yang diinginkan dari pengujian dan penggunaan klinis yang
dimaksudkan juga harus dipertimbangkan. Idealnya, jaringan yang digunakan
untuk optimasi pengujian harus positif lemah untuk antigen yang diinginkan
pastikan bahwa pengujian tersebut cukup sensitif untuk mendeteksi tingkat
ekspresi yang rendah. Karena ekspresi antigen spesifik jaringan mungkin secara
nyata diatur dalam sel neoplastik yang berdiferensiasi buruk, penggunaan
jaringan normal dengan tingkat antigen target yang relatif tinggi mungkin tidak
sesuai untuk mengoptimalkan pengujian dengan sensitivitas yang memadai
untuk digunakan dalam pengaturan diagnostik. Hanya menggunakan jaringan
normal non-neoplastik yang sangat positif untuk pengoptimalan pengujian
dapat menghasilkan pengujian dengan sensitivitas analitik yang tidak memadai
untuk mendeteksi jaringan positif lemah dan menghasilkan pengujian negatif
palsu. Selain itu, jaringan yang digunakan untuk pengoptimalan harus
mengandung jenis sel negatif yang diketahui untuk menilai spesifisitas protokol
pewarnaan.

5. Validasi Pengujian IHC

a. Gambaran umum
Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA)
mengamanatkan bahwa karakteristik kinerja tes IHC yang digunakan dalam
pengujian pasien divalidasi untuk menyatakan bahwa hasilnya akurat dan
dapat direproduksi. Memverifikasi bahwa uji IHC memenuhi persyaratan
untuk penggunaan yang dimaksudkan dan bekerja seperti yang diharapkan
dipenuhi selama proses validasi klinis, “di mana parameter IHC pengujian,

10
termasuk keakuratan, keandalan, dan reproduktifitasnya ditetapkan." Karena
penentuan "sensitivitas analitik" atau antigen yang dapat dideteksi minimum
tidak dapat dilakukan tanpa standar yang berisi tingkat antigen yang
diketahui, hal ini tidak berlaku untuk IHC diagnostik rutin. Yang jelas,
bagaimanapun, adalah bahwa laboratorium harus mendefinisikan ekuivalen
dengan “batas toleransi” atau “kisaran yang dapat dilaporkan” untuk setiap
antibodi. Untuk tujuan praktis, ini dapat dinyatakan sebagai pola pewarnaan
yang diharapkan (jenis sel mana yang harus positif dan mana yang harus
negatif) dan proporsi yang dapat diterima dari kasus positif yang diamati dan
diharapkan (sensitivitas) dan kasus negatif (spesifisitas). Sementara validasi
"teknis" hanya menunjukkan bahwa pewarnaan IHC benar-benar berfungsi,
validasi "klinis" memastikan bahwa pengujian tersebut berfungsi seperti
yang diharapkan saat digunakan dalam pengaturan klinis diagnostik. Oleh
karena itu, jaringan yang digunakan sebagai kontrol positif dan negatif
selama validasi harus mencerminkan tujuan penggunaan antibodi dalam
praktik diagnostik. Idealnya, jaringan dengan rentang imunoreaktivitas yang
relatif luas harus digunakan untuk validasi.
Akurasi ditentukan dengan perbandingan uji tes dengan hasil antibodi
yang sebelumnya divalidasi berjalan pada jaringan yang sama. Jika tidak ada
uji IHC internal yang divalidasi sebelumnya untuk perbandingan, hasil
pewarnaan IHC yang dilakukan pada sampel jaringan yang sama dapat
dibandingkan dengan hasil dari laboratorium eksternal. Meskipun demikian
telah direkomendasikan bahwa kesesuaian juga dapat divalidasi dengan
menghubungkan hasil dengan uji non-imunohistokimia yang telah divalidasi
sebelumnya (seperti hibridisasi in situ, sitometri, atau studi molekuler,
sitogenetik, atau mikrobiologi).
Presisi, atau reproduktifitas uji, dinilai dengan melakukan validasi
selama beberapa proses untuk menilai variabilitas harian dan pada instrumen
yang berbeda di laboratorium. Setiap perubahan signifikan pada prosedur

11
 IHC, termasuk perubahan faktor pra-analitik, mengharuskan pengujian
divalidasi ulang.
b. Verifikasi lot reagen baru
Lot reagen baru, terutama antibodi primer dan komponen sistem
deteksi, harus dievaluasi sebelum digunakan untuk tujuan diagnostik klinis.
Proses ini tidak perlu seluas validasi uji formal, namun harus
didokumentasikan dalam manual prosedur. Sebagian besar laboratorium
menjalankan bagian seri dalam jumlah terbatas dari sampel jaringan kontrol
positif dan negatif yang diketahui membandingkan kinerja antara lot lama
dan baru. Meskipun beberapa ahli patologi merekomendasikan untuk
menjalankan pengenceran serial dari lot baru selain operasi paralel, pabrikan
melakukan tes QC berkala yang dirancang untuk mengurangi variabilitas lot-
ke-lot pada sebagian besar antibodi yang tersedia secara komersial. Setiap
perubahan konsentrasi antibodi dapat dikonfirmasi dengan meninjau dan
membandingkan lembar data dengan lembar pensiunan. Dalam keadaan ini,
seperti untuk setiap perubahan besar dalam protokol IHC, validasi ulang
pengujian diperlukan.

6. Kendali Mutu (QC) Harian

Inti dari setiap program QM untuk IHC adalah tinjauan dan analisis slide
QC harian rutin. Selain mengidentifikasi kesalahan analitik yang jelas seperti
penggunaan antibodi yang salah (pola pewarnaan yang tidak terduga dalam
kontrol dan jaringan pasien) atau kontaminasi reagen (dapat dikenali sebagai
gumpalan granular kromogen tidak dalam bidang fokus bagian jaringan),
analisis cermat dari kontrol QC harian memungkinkan deteksi dini dari
penurunan sensitivitas atau spesifisitas pengujian. Kebijakan dan prosedur
harus menjelaskan bagaimana kinerja pengujian IHC dipantau dan tindakan
korektif yang harus diambil bila diperlukan. Selain itu, penyelesaian masalah

12
selanjutnya harus didokumentasikan saat muncul. Catatan QC harus disimpan
di laboratorium IHC setidaknya selama 2 tahun.
Ada 2 jenis kontrol khusus yang harus diperhitungkan dalam setiap proses
IHC: kontrol positif untuk mengkonfirmasi sensitivitas analitik dari uji (bahwa
uji mendeteksi antigen) dan kontrol "jaringan" negatif untuk mengkonfirmasi
spesifisitas analitik uji ( bahwa uji negatif jika tidak ada antigen).
a. Jaringan kontrol positif
Kontrol positif diperlukan baik dalam fase validasi (Fitzgibbons et al.
2014) dan dalam pengujian IHC rutin (Hewitt 2011). Pengendalian positif
harus dilakukan secara rutin sehingga kepositifannya menjamin kesesuaian
seluruh prosedur. Kontrol positif dapat berupa 'internal' dan 'eksternal'.
Kontrol internal mengacu pada komponen normal yang mengekspresikan
antigen, yang ada di dalam sampel jaringan yang menjalani analisis.
Sedangkan kontrol eksternal terdiri dari bagian eksternal yang diperoleh dari
jaringan yang diketahui imunereaktif dan diwarnai secara bersamaan dalam
proses yang sama seperti bagian jaringan yang dianalisis.
Jaringan kontrol positif jelas harus diketahui mengandung antigen
target dan harus diperbaiki, diproses, dan ditanamkan dengan cara yang
sama seperti sampel pasien yang diuji. Dengan cara ini, pola pewarnaan
yang diharapkan di bagian kontrol memverifikasi bahwa semua langkah
dalam pengujian, dari fiksasi hingga pewarnaan ulang, bekerja seperti yang
diharapkan. Jaringan yang digunakan sebagai kontrol positif juga harus
mencerminkan tujuan penggunaan antibodi dalam praktik diagnostik. Blok
jaringan dengan tingkat pewarnaan antigen yang rendah lebih disukai untuk
memastikan sensitivitas analitik yang memadai dari uji tersebut, karena
hilangnya sensitivitas analitik tingkat signifikan mungkin tidak terdeteksi
menggunakan jaringan dengan imunoreaktivitas yang intens, sehingga
mengarah ke interpretasi negatif palsu dari sampel jaringan pasien.

13
 Bagian kontrol harus dipasang pada setiap slide jaringan pasien untuk
memastikan bahwa tes IHC bekerja pada slide tertentu (terutama mengingat
kejadian, meskipun jarang, kesalahan pemipetan pada platform pewarnaan
otomatis). Dalam hal ini, komponen jaringan normal yang diketahui
mengekspresikan antigen yang diinginkan (yaitu, CD31 dan CD34 dalam sel
endotel) secara khusus bermanfaat untuk digunakan sebagai kontrol positif
internal. Dalam kasus ini, protokol pengujian harus menyatakan dengan jelas
bagaimana kontrol ini diinterpretasikan. Kontrol bertumpuk masih dapat
diterima, asalkan setiap ahli patologi yang menafsirkan noda IHC dari proses
tertentu memiliki akses ke slide kontrol yang sesuai. Penting juga untuk
diingat bahwa bagian kontrol yang dipotong sebelumnya dan disimpan pada
kondisi ambien selama beberapa hari dapat kehilangan antigenisitas.
b. Jaringan kontrol negatif
Jaringan yang diketahui negatif untuk antigen yang diinginkan dan
diproses dengan cara yang sama seperti sampel uji digunakan sebagai
kontrol jaringan negatif, yang menilai spesifisitas antibodi primer dengan
memverifikasi tidak adanya reaktivitas silang. Dengan memilih blok kontrol
"positif" yang juga berisi jenis sel yang diketahui negatif untuk antigen
target, kedua kontrol ini dapat dinilai pada slide kontrol positif. Jika tidak
memungkinkan, kontrol jaringan positif dan negatif yang terpisah dapat
digabungkan dalam satu blok. Protokol mana pun yang dipilih, itu harus
didokumentasikan dalam manual prosedur.
Jika kontrol jaringan negatif menilai spesifisitas antibodi primer,
kontrol reagen negatif memverifikasi spesifisitas komponen lain dari
pengujian dengan memantau pewarnaan latar belakang nonspesifik dalam
sampel pasien. Kontrol reagen negatif hanyalah bagian terpisah dari jaringan
pasien yang tunduk pada seluruh protokol uji IHC tetapi dengan "reagen
primer negatif" (biasanya antibodi yang tidak relevan, serum preimun, atau
buffer pengenceran) menggantikan antibodi primer.

14
7. Pemantauan Reagen Pengujian
a. Untuk analisis di laboratorium harus dipilih reagen tingkat analitis. Beberapa
zat organik dengan tingkat chemically pure harus diuji untuk setiap lot
sebelum dipakai dalam penggunaan rutin, sedangkan zat kimia practical
grade, commercial grade atau technical grade tidak boleh digunakan di
laboratorium.
b. Reagen yang sudah jadi (komersial) direkomendasikan sebagai pilihan
utama. Reagen buatan sendiri dipilih bila tidak tersedia reagen
jadi/komersial.
Reagen yang sudah ada harus ditangani secara cermat dengan
mempertimbangkan:
a. Perputaran pemakaian dengan menggunakan kaidah :
1) Pertama masuk -pertama keluar (FIFO-first in-first out), yaitu bahwa
barang yang lebih dahulu masuk persediaan harus digunakan lebih
dahulu.
2) Masa kadaluarsa pendek dipakai dahulu (FEFO-first expired first out).
Hal ini adalah untuk menjamin barang tidak rusak akibat penyimpanan
yang terlalu lama.
b. Tempat penyimpanan.
c. Suhu/kelembaban.
d. Sirkulasi udara.
e. Incompatibility/bahan kimia yang tidak boleh bercampur.

8. Pemantauan Jaminan Mutu (QA)

Program QA termasuk, tetapi tidak terbatas pada menetapkan kebijakan
dan prosedur untuk QC harian dan menyelesaikan masalah analitik saat muncul.
Aktivitas QA lainnya termasuk:
a. Meninjau kegagalan pengujian (mengapa pewarnaan berulang dipesan);

15
 b. Memantau waktu turn-around;
c. Penilaian kualitas eksternal (uji profisiensi);
d. Tinjauan atau audit intramural retrospektif;
e. Melaksanakan program surveilans untuk tes IHC yang jarang dipesan;
f. Pemantauan dan peninjauan prospektif dari tes IHC yang baru-baru ini
divalidasi (terutama untuk antibodi yang baru-baru ini dijelaskan atau yang
divalidasi pada sejumlah kasus).
Keseluruhan program QM dan manual prosedur laboratorium juga harus
ditinjau setiap tahun, dengan perhatian khusus pada perubahan dalam
persyaratan peraturan badan perizinan dan akreditasi. Hasil tinjauan tahunan ini
dan revisi atau amandemen yang dibuat pada program QM dan prosedur
manual IHC juga harus didokumentasikan.

9. Audit Pelaporan Patologi

Pelaporan hasil IHC yang memadai adalah aspek lain dari uji IHC yang
harus dipertimbangkan untuk tujuan QA. Untuk laporan patologi bedah yang
dikeluarkan untuk memandu keputusan perawatan pasien, sangat penting untuk
mendokumentasikan hasil dari setiap pewarnaan yang dilakukan bersama
dengan ringkasan singkat yang mengintegrasikan data ini dengan diagnosis
patologis. Ketika pedoman sederhana ini digunakan, indikasi untuk penggunaan
diagnostik (penentuan histogenesis, subklasifikasi, prediksi respons terapeutik,
identifikasi mikroorganisme) dan implikasi hasil dikomunikasikan dengan jelas
kepada dokter.

10. Peningkatan Mutu (QI)

Tujuan utama QI adalah penilaian keseluruhan kinerja laboratorium dan
evaluasi teknik baru, teknologi (yaitu, platform pewarnaan atau sistem deteksi)
dan reagen (yaitu, antibodi), termasuk pendidikan berkelanjutan untuk staf
medis dan teknis. Tinjauan tahunan tentang seberapa sering setiap noda IHC

16
 dipesan dapat mengungkapkan bahwa beberapa noda telah menjadi usang dan
mungkin dihentikan. Rekomendasi QI lain yang berguna adalah
membandingkan sensitivitas dan spesifisitas tes IHC individu dengan hasil yang
dilaporkan oleh laboratorium lain, hasil tes profisiensi eksternal, atau dalam
literatur peer-review yang dipublikasikan.

BAB III
PENUTUP

Kesimpulan
Imunohistokimia adalah proses untuk mendeteksi antigen (protein, karbohidrat, dsb)
pada sel dari jaringan dengan prinsip reaksi antibodi yang berikatan terhadap antigen
pada jaringan. Manajemen mutu dalam imunohistokimia melibatkan pelaksanaan
program kendali mutu (QC) dan jaminan mutu (QA), serta peningkatan mutu (QI) di
laboratorium. Beberapa hal yang menjadi pertimbangan dalam sistem manajemen
dalam penjaminan mutu imunohistokimia yaitu Fiksasi dan Pemrosesan Jaringan,
Antibodi dan Evaluasi Sistem Deteksi, Standarisasi Protokol, Optimisasi Pewarnaan
Antibodi, Validasi Pengujian IHC, Kendali Mutu (QC) Harian, Pemantauan Reagen
Pengujian , Pemantauan Jaminan Mutu (QA), Audit Pelaporan Patologi, serta
Peningkatan Mutu (QI)

17
 DAFTAR PUSTAKA

1. Ambari, E. 2003. Deteksi Antigen Toxoplasma dengan Teknik

Imunohistokimia pada Abotus Spontan. Tesis. Fakultas Kedokteran:
Semarang
2. Cates, Justin and Troutman, Ashley. 2014. Quality Management of the
Immunohistochemistry Laboratory: A Practical Guide. Appl
Immunohistochem Mol Morphol.
3. Direktur Bina Pelayanan Penunjang Medik. 2008. Pedoman Praktik
Laboratorium Kesehatan yang Benar (Good Laboratory Practice). Depkes
RI: Jakarta.
4. Ramos-Vara. 2005. Technical Aspects of Immunohistochemistry. Vet.
Pathol. Vol 42: 405-426.
5. Torlakovic EE. 2017. Evolution of quality assurance for clinical
immunohistochemistry in the era of precision medicine. part 3: technical
validation of immunohistochemistry (IHC) assays in clinical IHC
laboratories. Appl Immunohistochem Mol Morphol 25:151–159.
6. Vyberg M, Nielsen S (2016) Profciency testing in immunohistochemistry
—experiences from nordic immunohistochemical quality control
(NordiQC). Virchows Arch 468:19–29.

18