LAPORAN AKHIR

PRAKTIKUM METODE PEMISAHAN

CABAI (Capsicum frutescens)

Kelas:
Kelompok:
1. Amalia Venturini (1513015085)
2.Arief Risky Nugroho (1513015097)
3. Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi (1513015105)
4. Gina ArdianPutri Oktafiani (1513015063)

LABORATORIUM KIMIA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MULAWARMAN
SAMARINDA
2016
 LEMBAR PENGESAHAN

Sampel :Cabai
Praktikum :MetodePemisahan Kimia
Asisten : 1. Dina Sofia
2.WulanMaulida
DosenPengampu : 1. Akhmad Jaizzur Rija’i, S.Farm.,M.Si
2. M. Arifuddin, M.Si., Apt.
3. Viriyanata Wijaya, S.Farm., M.Farm., Apt.

Praktikan
a. Amalia Venturini (1513015085)
b. Arief Risky Nugroho (1513015097)
c. Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi (1513015105)
d. Gina ArdianPutri Oktafiani (1513015063)

Samarinda, 2016

Diperiksaoleh Ketua

Dina Sofia Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi

Mengetahui

Viriyanata Wijaya, S.Farm., M.Farm., Apt.

 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI.................................................................................................................1
Bab I Pendahuluan.......................................................................................................3
Bab II Tinjauan Pustaka.............................................................................................4
II. 1 Uraian Tumbuhan.......................................................................................................4
II. 1. 1 Klasifikasi.......................................................................................................4
II. 1. 2 Morfologi..................................................................................................................4
II. 1. 2. 1 Batang...................................................................................................................5
II. 1. 2. 2 Daun......................................................................................................................5
II. 1. 2. 3 Bunga....................................................................................................................5
II. 1. 2. 4 Buah......................................................................................................................5
II. 1. 2. 5 Biji.........................................................................................................................6
II. 1. 2. 6 Akar......................................................................................................................6
II. 1. 3 Senyawa Kimia........................................................................................................6
II. 2 Ekstraksi.......................................................................................................................7
II. 2. 1 Pengertian................................................................................................................7
II. 2. 2 Metode Ekstraksi.....................................................................................................7
II. 2. 2. 1 Jenis- Jenis Ekstraksi..........................................................................................7
II. 3 Fraksinasi.....................................................................................................................9
II. 4 Metoda Pemisahan....................................................................................................10
II. 4. 1 Kromatografi Lapis Tipis.....................................................................................13
II. 4. 2 Kromatografi Cair Vakum...............................................................................…14
II. 4. 3 Kromatpgrafi Konvensional.............................................................................…16
II. 4. 4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif..................................................................18
II. 4. 5 Kromatografi Lapis Tipis Sentrifugal (KROMATOTRON)............................19
II. 4. 6 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi...................................................................21
Bab III Metodologi.....................................................................................................24
Bab IV Alat dan Bahan.............................................................................................27
IV. 1 Alat...................................................................................................................................... 27
IV. 2 Bahan................................................................................................................................. 27
Bab V Prosedur Percobaan.......................................................................................28
V. 1 Ekstraksi............................................................................................................................ 28
V. 2 Fraksinasi.......................................................................................................................... 28
V. 3 Kromatografi Lapis Tipis..............................................................................................28
V. 4 Kromatografi Konvensional........................................................................................ 28
V. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi.........................................................................29
Bab VI Pembahasan...................................................................................................30
VI. 1 Ekstraksi........................................................................................................................... 30
VI. 2 Fraksinasi......................................................................................................................... 31
VI. 3 Kromatografi Lapis Tipis............................................................................................ 32
VI. 4 Kromatografi Konvensional.......................................................................................33
VI. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi.......................................................................33
Bab VII Kesimpulan dan Saran...............................................................................34
VII. Kesimpulan........................................................................................................................ 34
VII. Saran.................................................................................................................................... 34

1
Daftar Pustaka............................................................................................................35
Lampiran.......................................................................................................................... .39

2
 Bab I Pendahuluan

Cabai merupakan salah satu komoditas sayuran penting dan bernilai ekonomi
tinggi di Indonesia. Tanaman ini dikembangkan baik di dataran rendah maupun
dataran tinggi. Menurut Badan Pusat Statistik (2009), produktivitas cabai nasional
Indonesia tahun 2008 adalah 6.44 ton ha-1. Angka tersebut masih sangat rendah jika
dibandingkan dengan potensi produksinya. Menurut Purwati et al. (2000) potensi
produktivitas cabai nasional dapat mencapai 12 ton ha-1 (Syukur, 2010).

Tanaman Cabai (Capsicum frutescens) yang merupakan tanaman perdu

dengan rasa buah pedas ini sangat familiar di kehidupan kita. Mayoritas penduduk
Indonesia merupakan penggemar dari tanaman tersebut. Tanaman ini kerap
dibudidayakan di pekarangan rumah sebagai tanaman sayur atau tumbuh liar pada
tanah kosong. Tumbuhan ini berasal dari Amerika Tropik, menyukai daerah kering,
dan ditemukan pada ketinggian 0,5-1250 mdpl. Perdu setahun dengan banyak
percabangan dan tinggi sekitar 50-100 cm ini, memiliki batang yang berbuku-buku
dengan bagian atas bersudut. Daun tunggal bulat telur, ujung meruncing, pangkal
menyempit, tepi rata, dan berwarna hijau, bertangkai dan tidak berselingan.
(Dalimartha, 2000)

Cabai dengan rasa pedas, dengan sifat panas, digunakan untuk dapat
meningkatkan nafsu makan, menyembuhkan batuk berdahak, migraine, serta
melegakan rasa hidung tersumbat pada sinusitis. Memiliki kandungan kimia pada
buahnya berupa kapsaisin, karotenoid, alkaloid, resin, vitamin khususnya A dan C.
Kapsaisin terkandung pada buah cabai yang memberikan rasa pedas, dapat berkhasiat
untuk melancarkan aliran darah serta pematirasa kulit. Sedangkan pada biji cabai
mengandung solanine, solamargine, solasodine, solasomine, dan steroid saponin atau
kapsisidin yang dapat berkhasiat sebagai antibiotik (Dalimartha, 2000).

3
 Bab II Tinjauan Pustaka

II. 1 Uraian Tumbuhan

II. 1. 1 Klasifikasi

Cabai rawit (Capsicum frutescens L.) merupakan salah satu tanaman

hortikultura dari famili Solanaceae yang memiliki nilai ekonomi tinggi (Cahyono,
2003). Cabai rawit digunakan sebagai bumbu masakan dan bahan obat (Heyne, 1987).
Menurut Rukmana (2002), secara umum buah cabai rawit mengandung zat gizi antara
lain lemak, protein, karbohidrat, kalsium, fosfor, besi, vitamin A, B1, B2, C dan
senyawa alkaloid seperti capsaicin, oleoresin, flavanoid dan minyak esensial.
Kandungan tersebut banyak dimanfaatkan sebagai bahan bumbu masak, ramuan obat
tradisional, industri pangan dan pakan unggas. Selain maanfaatnya, juga harus
diketahui klasifikasi tumbuhan cabai rawit ini.

Berikut klasifikasinya :

Kingdom Plantae (Tumbuhan), Subkingdom Tracheobionta (Tumbuhan

berpembuluh), Super Divisi Spermatophyta (Menghasilkan biji), Divisi
Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga), Kelas Magnoliopsida (berkeping dua /
dikotil), Sub Kelas Asteridae, Ordo Solanales, Famili Solanaceae (suku terung-
terungan), Genus Capsicum, Spesies Capsicum frutescens L.

II. 1. 2 Morfologi

C. frutescens L. adalah tumbuhan berupa terna, hidup mencapai 2 atau 3 tahun.

Bunga muncul berpasangan di bagian ujung ranting dalam posisi tegak, mahkota
bunga berwarna kuning kehijauan atau hijau keputihan dengan bentuk seperti bintang.
Buah muncul berpasangan pada setiap ruas, rasa cenderung sangat pedas, bentuk buah
bervariasi mulai dari bulat memanjang atau setengah kerucut, warna buah setelah
masak biasanya merah dengan posisi buah tegak. Spesies ini kadang-kadang disebut
cabai burung (Undang, 2015).

4
II. 1. 2. 1 Batang

Batang tanaman cabai rawit memiliki struktur yang keras dan berkayu,
berwarna hijau gelap, berbentuk bulat, halus dan bercabang banyak. Batang utama
tumbuh tegak dan kuat. Percabangan terbentuk setelah batang tanaman mencapai
ketinggian berkisar antara 30-45 cm. cabang tanaman beruas-ruas, setiap ruas
ditumbuhi daun dan tunas (cabang).

II. 1. 2. 2 Daun

Daun berbentuk bulat telur dengan ujung runcing dan tepi daun rata (tidak
bergerigi/berlekuk) ukuran daun lebih kecil dibandingkan dengan daun tanaman cabai
besar. Daun merupakan daun tunggal dengan kedudukan agak mendatar, memiliki
tulang daun menyirip dan tangkai tunggal yang melekat pada batang/cabang. Jumlah
daun cukup banyak sehingga tanaman tampak rimbun.

II. 1. 2. 3 Bunga

Bunga tanaman cabai rawit merupakan bunga tunggal yang berbentuk bintang.
Bunga tumbuh menunduk pada ketiak daun dengan mahkota bunga berwarna putih.
Penyerbukan bunga termasuk penyerbukan sendiri (self pollinated crop), namun dapat
juga terjadi secara silang, dengan keberhasilan sekitar 56%.

II. 1. 2. 4 Buah

Buah cabai rawit akan terbentuk stelah terjadi penyerbukan. Buah memiliki
keanekaragaman dalam hal ukuran, bentuk, warna dan rasa buah. Buah cabai rawit
dapat berbentuk bulat pendek dengan ujung runcing/berbentuk kerucut. Ukuran buah
bervariasi, menurut jenisnya cabai rawit yang kecil-kecil memiliki ukuran panjang
antara 2-2,5 cm dan lebar 5 mm. sedangkan cabai rawit yang agak besar memiliki
ukuran yang mencapai 3,5 cm dan lebar mencapai 12 mm.

Warna buah cabai rawit bervariasi buah muda berwarna hijau/putih sedangkan
buah yang telah masak berwarna merah menyala/merah jingga (merah agak kuning)
pada waktu masih muda, rasa buah cabai rawit kurang pedas, tetapi setelah masak
menjadi pedas.
(Undang, 2015)

5
II. 1. 2. 5 Biji

Biji cabai rawit berwarna putih kekuningan-kuningan, berbentuk bulat pipih,

tersusun berkelompok (bergerombol) dan saling melekat pada empulur. Ukuran biji
cabai rawit lebih kecil dibandingkan dengan biji cabai besar. Biji-biji ini dapat
digunakan dalam perbanyakan tanaman (perkembangbiakan).
(Undang, 2015)

II. 1. 2. 6 Akar

Perakaran cabai rawit terdiri atas akar tunggang yang tumbuh lurus ke pusat
bumi dan akar serabut yang tumbuh menyebar ke samping. Perakaran tanaman tidak
dalam sehingga tanaman hanya dapat tumbuh dan berkembang dengan baik pada
tanah yang gembur, porous (mudah menyerap air) dan subur.
(Undang, 2015)

II. 1. 3 Senyawa Kimia

Pada buah cabai terkandung beberapa vitamin. Salah satu vitamin dalam buah
cabai adalah vitamin C (asam askorbat) (Rachmawati,2009). Menurut Warisno(2010)
cabai rawit banyak mengandung vitamin A dibandingkan cabai lainnya. Cabai rawit
segar mengandung 11.050 SI vitamin A, sedangkan cabai rawit kering mengandung
mengandung 1.000 SI. Sementara itu, cabai hijau segar hanya mengandung 260
vitamin A, cabai merah segar 470, dan cabai merah kering 576 SI. Kandungan
vitamin A pada cabai rawit bermanfaat untuk kesehatan mata dan untuk
menyembuhkan sakit tenggorokan.

Cabai mengandung kurang lebih 1,5% rasa pedas. Rasa pedas tersebut
disebabkan oleh senyawa kapsaisin dan dihidrokapsaisin. Kandungan kapsaisin pada
cabai bersifat sebagai pembangkit selera makan. Kapsaisin menstimulus hormon
ebdophrin yang memberi efek nikmat, sehingga ketika seseorang menyantap makanan
berbumbu cabai cenderung menambah porsi makannya (Dwijoseputro G. 1994).

Kandungan Gizi Dalam Tiap 100 Gram Cabai Rawit Kering.

Kalori (kal) - ; Protein (g) 15,00 ; Lemak (g) 11,00 ; Karbohidrat (g) 33,00 ; Kalsium
(g) 150,00 ; Fosfor (mg) - ; Vitamin A (Si) 1.000,00 ; Zat besi (mg) 9,00 ; Vitamin B1

6
(mg) 0,50 ; Vitamin C (mg) 10,00 ; Air (g) 8,00 ; Bagian yang dapat dimakan (Bdd,
%) 90,00 (Dwijoseputro G. 1994).

II. 2 Ekstraksi

II. 2. 1 Pengertian

Ekstraksi adalah tekhnik penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga
terpisah dari kandungan atau bahan yang tidak larut dalam pelarut cair. Hasil yang
didapatkan dari proses ekstraksi dinamakan ekstrak atau sediaan kental yang
diperoleh dari mengekstraksi zat aktif yang dimiliki simplisia menggunakan pelatur
yang sesuai, kemudian dimaserasi dan diperlakukan sedemikian rupa sampai hasil
yang diinginkan. Cairan penyari yang biasa digunakan untuk ekstraksi adalah air,
etanol, dan etanol air atua eter (Dirjen POM, 2000).

II. 2. 2 Metode Ekstraksi

II. 2. 2. 1 Jenis-Jenis Ekstraksi

Ekstraksi dengan pelarut dapat dilakukan dengan cara dingin dan cara panas.
Jenis-jenis ekstraksi tersebut sebagai berikut:

1. Ekstraksi secara dingin

a. Maserasi

Maserasi, merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan dengan cara

merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada
temperatur kamar dan terlindung dari cahaya.

Metode maserasi digunakan untuk menyari simplisia yang mengandung

komponen kimia yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin,
tiraks dan lilin (Sudjadi, 1988).

Keuntungan dari metode ini adalah peralatannya sederhana. Sedang

kerugiannya antara lain waktu yang diperlukan untuk mengekstraksi sampel cukup
lama, cairan penyari yang digunakan lebih banyak, tidak dapat digunakan untuk
bahan-bahan yang mempunyai tekstur keras seperti benzoin, tiraks dan lilin.
(Sudjadi, 1988)

7
b. Soxhletasi

Soxhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan, cairan

penyari dipanaskan sehingga menguap, uap cairan penyari terkondensasi menjadi
molekul-molekul air oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia dalam
klongsong dan selanjutnya masuk kembali ke dalam labu alas bulat setelah melewati
pipa sifon (Sudjadi, 1988).

Keuntungan metode ini adalah dapat digunakan untuk sampel dengan tekstur
yang lunak dan tidak tahan terhadap pemanasan secara langsung. Digunakan pelarut
yang lebih sedikit. Pemanasannya dapat diatur (Sudjadi, 1988). Kerugian dari metode
ini adalah karena pelarut didaur ulang, ekstrak yang terkumpul pada wadah di sebelah
bawah terus-menerus dipanaskan sehingga dapat menyebabkan reaksi peruraian oleh
panas. Jumlah total senyawa-senyawa yang diekstraksi akan melampaui kelarutannya
dalam pelarut tertentu sehingga dapat mengendap dalam wadah dan membutuhkan
volume pelarut yang lebih banyak untuk melarutkannya. Bila dilakukan dalam skala
besar, mungkin tidak cocok untuk menggunakan pelarut dengan titik didih yang
terlalu tinggi, seperti metanol atau air, karena seluruh alat yang berada di bawah
komdensor perlu berada pada temperatur ini untuk pergerakan uap pelarut yang
efektif (Sudjadi, 1988).

Metode ini terbatas pada ekstraksi dengan pelarut murni atau campuran
azeotropik dan tidak dapat digunakan untuk ekstraksi dengan campuran pelarut,
misalnya heksan : diklormetan = 1 : 1, atau pelarut yang diasamkan atau dibasakan,
karena uapnya akan mempunyai komposisi yang berbeda dalam pelarut cair di dalam
wadah (Sudjadi, 1988).

c. Perkolasi

Perkolasi adalah cara penyarian dengan mengalirkan penyari melalui serbuk

simplisia yang telah dibasahi.Keuntungan metode ini adalah tidak memerlukan
langkah tambahan yaitu sampel padat (marc) telah terpisah dari ekstrak. Kerugiannya
adalah kontak antara sampel padat tidak merata atau terbatas dibandingkan dengan
metode refluks, dan pelarut menjadi dingin selama proses perkolasi sehingga tidak
melarutkan komponen secara efisien (Harborne, 1987).

8
2. Ekstraksi secara panas

a. Metode refluks

Keuntungan dari metode ini adalah digunakan untuk mengekstraksi sampel-

sampel yang mempunyai tekstur kasar dan tahan pemanasan langsung..

Kerugiannya adalah membutuhkan volume total pelarut yang besar dan sejumlah
manipulasi dari operator (Harborne, 1987).

b. Metode destilasi uap

Destilasi uap adalah metode yang popular untuk ekstraksi minyak-minyak

menguap (esensial) dari sampel tanaman. Metode destilasi uap air diperuntukkan
untuk menyari simplisia yang mengandung minyak menguap atau mengandung
komponen kimia yang mempunyai titik didih tinggi pada tekanan udara normal
(Harborne, 1987).

Pelarut yang baik untuk ekstraksi adalah pelarut yang mempunyai daya
melarutkanyang tinggi terhadap zat yang diekstraksi. Daya melarutkan yang tinggi ini
berhubungan dengan kepolaran pelarut dan kepolaran senyawa yang diekstraksi.
Terdapat kecenderungan kuat bagi senyawa polar larut dalam pelarut polar dan
sebaliknya (Harborne, 1987).

II. 3 Fraksinasi

FraksinasiFraksinasi adalah proses pemisahan suatu kuantitas tertentu dari

campuran (padat, cair, terlarut,suspensi atau isotop) dibagi dalam beberapa jumlah
kecil (fraksi) komposisi perubahan menurutkelandaian. Pembagian atau pemisahan ini
didasarkan pada bobot dari tiap fraksi, fraksi yang lebihberat akan berada paling dasar
sedang fraksi yang lebih ringan akan berada diatas. Fraksinasibertingkat biasanya
menggunakan pelarut organik seperti eter, aseton, benzena, etanol,diklorometana, atau
campuran pelarut tersebut. Asam lemak, asam resin, lilin, tanin, dan zat warnaadalah
bahan yang penting dan dapat diekstraksi dengan pelarut organik (Adijuwana dan Nur
1989).

9
 Fraksinasi merupakan suatu proses yang bertujuan memisahkan komponen
kimia dari suatu ekstrak menjadi fraksi-fraksi yang lebih spesifik, misalnya
berdasarkan kepolarannya, sifat asam basa dan lain sebagainya.

Fraksiansi cair-cair adalah proses pemisahan zat terlarut di dalam 2 macam zat
pelarut yang tidak saling bercampur atau dengan kata lain perbandingan konsentrasi
zat terlarut dalam pelarut organik, dan pelarut air. Hal tersebut memungkinkan karena
adanya sifat senyawa yang dapat larut air dan ada pula senyawa yang larut dalam
pelarut organik. Satu komponen dari campuran akan memiliki kelarutan dalam kedua
lapisan tersebut (biasanya disebut fase) dan setelah beberapa waktu dicapai
keseimbangan biasanya dipersingkat oleh pencampuran kedua fase tersebut dalam
corong pisah (Khopkar, 2008).

Fraksinasi padat cair adalah proses pemisahan untuk memperoleh komponen

zat terlarut dari campurannya dalam padatan dengan menggunakan pelarut yang
sesuai. Dapat juga didefenisikan sebagai dispersi komponen kimia dari ekstrak yang
telah dikeringkan dalam suatu pelarut yang sesuai berdasarkan kelarutan dari
komponen kimia dan zat-zat yang tidak diinginkan seperti garam-garam tidak dapat
larut. Operasi ekstraksi ini dapat dilakukan dengan mengaduk suspensi padatan di
dalam wadah dengan atau tanpa pemanasan (Roy, 1991).

Fraksinasi bertingkat umumnya diawali dengan pelarut yang kurang polar dan
dilanjutkan denganpelarut yang lebih polar. Tingkat polaritas pelarut dapat ditentukan
dari nilai konstanta dielektrik pelarut. Empat tahapan fraksinasi bertingkat
dengan menggunakan empat macam pelarut yaitu:1. ekstraksi aseton; 2. fraksinasi n-
heksan;3. fraksinasi etil eter;4. fraksinasi etil asetat (Lestari dan Pari 1990).

II. 4 Metoda Pemisahan

Metode pemisahan merupakan suatu cara yang digunakan untuk memisahkan

atau memurnikan suatu senyawa atau skelompok senyawa yang mempunyai susunan
kimia yang berkaitan dari suatu bahan, baik dalam skala laboratorium maupun skala
industri. Metode pemisahan bertujuan untuk mendapatkan zat murni atau beberapa zat
murni dari suatu campuran, sering disebut sebagai pemurnian dan juga untuk
mengetahui keberadaan suatu zat dalam suatu sampel (analisis laboratorium).

(Lukum,2005).

10
 Berdasarkan tahap proses pemisahan, metode pemisahan dapat dibedakan
menjadi dua golongan, yaitu metode pemisahan sederhana dan metode pemisahan
kompleks.

1. Metode Pemisahan Sederhana

Metode pemisahan sederhana adalah metode yang menggunakan cara satu

tahap. Proses ini terbatas untuk memisahkan campuran atau larutan yang relatif
sederhana.

2. Metode Pemisahan Kompleks

Metode pemisahan kompleks memerlukan beberapa tahapan kerja, diantaranya

penambahan bahan tertentu,pengaturan proses mekanik alat, dan reaksi-reaksi kimia
yang diperlukan. Metode ini biasanya menggabungkan dua atau lebih metode
sederhana. Contohnya, pengolahan bijih dari pertambangan memerlukan proses
pemisahan kompleks (Lukum, 2005).

Keadaan zat yang diinginkan dan dalam keadaan campuran harus diperhatiakn
untuk menghindari kesalahan pemilihan metode pemisahan yang akan menimbulkan
kerusakan hasil atau melainkan tidak berhasil. Beberapa faktor yang perlu
diperhatikan antara lain : Keadaan zat yang diinginkan terhadap campuran, apakah zat
ada di dalam sel makhluk hidup, apakah bahan terikat secara kimia, dan sebagainya.

Kadar zat yang diinginkan terhadap campurannya, apakah kadarnya kecil atau
besar. Sifat khusus dari zat yang diinginkan dan campurannya, misalnya zat tidak
tahan panas, mudah menguap, kelarutan terhadap pelarut tertentu, titik didih, dan
sebagainya. Standar kemurnian yang diinginkan. Kemurnian 100% memerlukan tahap
yang berbeda dengan 96%. zat pencemar dan campurannya yang mengotori beserta
sifatnya. Nilai guna zat yang diinginkan, harga, dan biaya proses pemisahan.
(Lukum,2005)

Suatu zat dapat dipisahkan dari campurannya karena mempunyai perbedaan

sifat. Hal ini dinamakan dasr pemisahan. Beberapa dasar pemisahan campuran antara
lain sebagai berikut :

11
1. Ukuran partikel

Bila ukuran partikel zat yang diinginkan berbeda dengan zat yang tidak
diinginkan (zat pencmpur) dapat dipisahkan dengan metode filtrasi (penyaringan).
jika partikel zat hasil lebih kecil daripada zat pencampurnya, maka dapat dipilih
penyring atau media berpori yang sesuai dengan ukuran partikel zat yang diinginkan.
Partikel zat hasil akan melewati penyaring dan zat pencampurnya akan terhalang.

2. Titik didih

Bila antara zat hasil dan zat pencampur memiliki titik didih yang jauh berbeda
dapat dipishkan dengan metode destilasi. Apabila titik didih zat hasil lebih rendah
daripada zat pencampur, maka bahan dipanaskan antara suhu didih zat hasil dan di
bawah suhu didih zat pencampur. Zat hasil akan lebih cepat menguap, sedangkan zat
pencampur tetap dalam keadaan cair dan sedikit menguap ketika titik didihnya
terlewati. Proses pemisahan dengan dasar perbedaan titik didih ini bila dilakukan
dengan kontrol suhu yang ketat akan dapat memisahkan suatu zat dari campuranya
dengan baik, karena suhu selalu dikontrol untuk tidak melewati titik didih campuran.
(Lukum,2005)

3. Kelarutan

Suatu zat selalu memiliki spesifikasi kelarutan yang berbeda, artinya suatu zat
selalu memiliki spesifikasi kelarutan yang berbeda, artinya suatu zat mungkin larut
dalam pelarut A tetapi tidak larut dalam pelarut B, atau sebaliknya. Secara umum
pelarut dibagi menjadi dua, yaitu pelarut polar, misalnya air, dan pelarut nonpolar
(disebut juga pelarut organik) seperti alkohol, aseton, methanol, petrolium eter,
kloroform, dan eter.

Dengan melihat kelarutan suatu zat yang berbeda dengan zat-zat lain dalam
campurannya, maka kita dapat memisahkan zat yang diinginkan tersebut dengan
menggunakan pelarut tertentu (Lukum,2005).

4. Pengendapan

Suatu zat akan memiliki kecepatan mengendap yang berbeda dalam suatu
campuran atau larutan tertentu. Zat-zat dengan berat jenis yng lebih besar daripada
pelarutnya akan segera mengendap. Jika dalam suatu campuran mengandung satu atau

12
beberapa zat dengan kecepatan pengendapan yang berbeda dan kita hanya
menginginkan salah satu zat, maka dapat dipisahkan dengan metode sedimentsi tau
sentrifugsi. Namun jika dalm campuran mengandung lebih dari satu zat yang akan
kita inginkan, maka digunakan metode presipitasi. Metode presipitasi biasanya
dikombinasi dengan metode filtrasi (Lukum,2005).

5. Difusi

Dua macm zat berwujud cair atau gas bila dicampur dapat berdifusi (bergerak
mengalir dan bercampur) satu sama lain. Gerak partikel dapat dipengaruhi oleh
muatan listrik. Listrik yang diatur sedemikian rupa (baik besarnya tegangan maupun
kuat arusnya) akan menarik partikel zat hasil ke arah tertentu sehingga diperoleh zat
yang murni. Metode pemisahan zat dengan menggunakan bantuan arus listrik disebut
elektrodialisis. Selain itu kita mengenal juga istilah elektroforesis, yaitu pemisahan zat
berdasarkan banyaknya nukleotida (satuan penyusun DNA) dapat dilakukan dengan
elektroforesis menggunakan suatu media agar yang disebut gel agarosa.
(Lukum,2005)

6. Adsorbsi

Adsorbsi merupakan penarikan suatu zat oleh bahan pengadsorbsi secara kuat
sehingga menempel pada permukaan dari bahan pengadsorbsi. Penggunaan metode
ini diterapkan pada pemurnian air dan kotoran renik atau organisme (Lukum,2005).

II. 4. 1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau
alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya.
Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan
dengan kromatografi.

Kromatografi lapis tipis digunakan untuk pemisahan senyawa secara cepat, dengan
menggunakan zat penjerap berupa serbuk halus yang dipaliskan serta rata pada lempeng kaca.
Lempeng yang dilapis, dapat dianggap sebagai “kolom kromatografi terbuka” dan pemisahan
dapat didasarkan pada penyerapan, pembagian atau gabungannya, tergantung dari jenis zat
penyerap dan cara pembuatan lapisan zat penyerap dan jenis pelarut. Kromatografi lapis tipis
dengan penyerap penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Harga Rf
yang diperoleh pada kromatografi lapis tipis tidak tetap, jika dibandingkan dengan yang

13
diperoleh pada kromatografi kertas. Oleh karena itu pada lempeng yang sama di samping
kromatogram zat yang di uji perlu dibuat kromatogram zat pembanding kimia, lebih baik
dengan kadar yang berbeda-beda (Dirjen POM, 1979).

Prinsip kerjanya yaitu memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara

sampel dengan pelarut yang digunakan. Teknik ini biasanya menggunakan fase diam dari
bentuk plat silika dan fase geraknya disesuaikan dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan.
Larutan atau campuran larutan yang digunakan dinamakan eluen Semakin dekat kepolaran
antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.
(Rohman,2009)

Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan

kromatografi kertas adalah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih
sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat
(Adnan, 1997).

II. 4. 2 Kromatografi Cair Vakum

Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode fraksinasi

yaitu dengan memisahkan crude extract menjadi fraksi-fraksinya yang lebih
sederhana. Pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fasa diam dan aliran
fasa geraknya dibantu dengan pompa vakum. Fasa diam yang digunakan dapat berupa
silika gel atau alumunium oksida (Ghisalberti, 2008).

Kromatografi kolom cair dapat dilakukan pada tekanan atmosfer atau pada
tekanan lebih besar dari atmosfer dengan menggunakan bantuan tekanan luar
misalnya gas nitrogen. Untuk keberhasilan praktikan di dalam bekerja dengan
menggunakan kromatografi kolom vakum cair, oleh karena itu syarat utama adalah
mengetahui gambaran pemisahan cuplikan pada kromatografi lapis tipis.
(Harris, 1982).

Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa

metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai absorben dan
berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat : metanol (elusi gradien) dan
menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan eluen (Helfman, 1983).

Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan komponen-komponen

campuran dimana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa gerak yang

14
membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan secara selektif. Bila fasa
gerak berupa gas, disebut kromatografi gas, dan sebaliknya kalau fasa gerak berupa
zat cair, disebut kromatografi cair (Hendayana, 1994).

Adapun cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi

dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT 10-40 μm) dalam keadaan
vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut
yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penjerap lalu divakumkan lagi.
Kolom dipisah sampai kering dan sekarang siap dipakai (Hostettman, 1986).

Kromatografi ialah cara pemisahan berdasarkan perbedaan kecepatan zat-zat

terlarut yang bergerak bersama-sama dengan pelarutnya pada permukaan suatu benda
penyerap. Cara ini umum dilakukan pada pemisahan zat-zat berwarna (bahasa
Yunani: chromos = warna) (Kennedy, 1990).

Kromatografi vakum cair merupakan salah satu jenis dari kromatografi kolom.
Kromatografi kolom merupakan suatu metode pemisahan campuran larutan dengan
perbandingan pelarut dan kerapatan dengan menggunakan bahan kolom.
Kromatografi kolom lazim digunakan untuk pemisahan dan pemurnian senyawa.
(Schill, 1978)

Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan dalam
KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom terbagi menjadi dua macam,
yaitu(Sarker et al., 2006):

a. Cara Basah

Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan melarutkan fasa diam
dalam fase gerak yang akan digunakan. Campuran kemudian dimasukkan ke dalam
kolom dan dibuat merata. Fase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan fase
diam yang tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan.

b. Cara kering

Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara memasukkan
fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi. Fase diam tersebut
selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan digunakan.Preparasi sampel saat akan

15
dielusi dengan KCV juga memiliki berbagai metode seperti preparasi fasa diam.
Metode tersebut yaitu cara basah dan cara kering.
(Canell, 1998).

Preparasi sampel cara basah dilakukan dengan melarutkan sampel dalam

pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak dalam KCV. Larutan dimasukkan
dalam kolom kromatografi yang telah terisi fasa diam. Bagian atas dari sampel
ditutupi kembali dengan fasa diam yang sama. Sedangkan cara kering dilakukan
dengan mencampurkan sampel dengan sebagian kecil fase diam yang akan digunakan
hingga terbentuk serbuk. Campuran tersebut diletakkan dalam kolom yang telah terisi
dengan fasa diam dan ditutup kembali dengan fase diam yang sama.
(Sarker et al., 2006).

II. 4. 3 Kromatografi Konvensional

Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi klasik yang masih

banyak digunakan. Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan senyawa-
senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan adsorpsi dan partisi. Kemasan
adsorben yang sering digunakan adalah silika gel G-60, kieselgur, Al2O3, dan Diaion.

Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom sebagai

alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran. Alat tersebut
berupa pipa gelas yang dilengkapi suatu kran dibagian bawah kolom untuk
mengendalikan aliran zat cair, ukuran kolom tergantung dari banyaknya zat yang
akan dipindahkan. Secara umum perbandingan panjang dan diameter kolom sekitar
8:1 sedangkan daya penyerapnya adlah 25-30 kali berat bahan yang akan dipisahkan.
Teknik banyak digunakan dalam pemisahan senyawa-senyawa organic dan
konstituen-konstituen yang sukar menguap sedangkan untuk pemisahan jenis logan-
logam atau senyawa anorganik jarang dipakai (Yazid, 2005).

Pelarut (fase gerak) dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang
disebabkan oleh gaya berat atau didorong dengan tekanan. Pita, senyawa linarut
bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda, memisah dan dikumpulkan
berupa fraksi ketika keluar dari alas kolom. Kromatografi kolom konvensional
memiliki berbagai keterbatasan dalam penggunannya, kromatografi kolom vakum

16
dapat meningkatkan laju pengelusian dan mempersingkat waktu kontak linarut
dengan penjerap.

Metode pemisahan kromatografi kolom ini memerlukan bahan kimia yang

cukup banyak sebagai fasa diam dan fasa bergerak bergantung pada ukuran kolom
gelas. Untuk melakukan pemisahan campuran dengan metode kromatografi kolom
diperlukan waktu yangcukup lama, bias berjam-jam hanya untuk memisahkan satu
campuran. Selain itu, hasil pemisahan kurang jelas artinya kadang-kadang sukar
mendapatkan pemisahan secara sempurna karena pita komponen yang satu
bertumpang tindih dengan komponen lainnya. Masalah waktu yang lama disebabkan
laju alir fasa gerak hanya dipengaruhi oleh gaya gravitasi bumi, ukuran diameter
partikel yang cukup besar membuat luas permukaan fasa diam relative kecil sehingga
tempat untuk berinteraksi antara komponen-komponen dengan fasa diam menjadi
terbatas. Apabila ukuran diameter partikel diperkecil supaya luas permukaan fasa
diam bertambah menyebabkan semakin lambatnya aliran fasa gerak atau fasa gerak
tidak mengalir sama sekali. Selain itu fasa diam yang sudah terpakai tidak dapat
digunakan lagi untuk pemisahan campuran yang lain karena sukar meregenerasi fasa
diam (Hendayana, 2006)

Untuk memisahkan campuran, kolom yang telah dipilih sesuai campuran diisi
dengan bahan penyerap seperti alumina dalam keadaan kering atau dibuat seperti
bubur dengan pelarut. Pengisian dilakukan dengan bantuan batang pengaduk untuk
memanfaatkan adsorben dan gelas wool pada dasar kolom. Pengisian harus
dilakukan secara hat-hati dan sepadat mungkin agar rata sehingga terhindar dari
gelembung-gelembung udara, untuk membantu homogenitas biasanya kolom
setelah diisi divibrasi diketok-ketok. Sejumlah cuplikan yang dilarutkan dalam sedikit
pelarut, dituangkan melalui sebelah atas kolom dan dibiarkan mengalir ke dalam
adsorben. Komponen-komponen dalam campuran diadsorpsi dari larutan secara
kuantitatif oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada permukaan atas kolom.
Dengan penambahan pelarut secara terus-menerus, masing-masing komponen akan
bergerak turun melalui kolom dan pada bagian atas kolom akan terjadi
kesetimbangan baru antara bahan penyerap, komponen campuran dan eluen.
Kesetimbangan dikatakan tetap apabila suatu komponen yang satu dengan yang

17
lainnya bergerak ke bagian bawah kolom dengan waktu atau kecepatan berbeda-
beda sehingga terjadi pemisahan (Yazid, 2005).

II. 4. 4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Salah satu metode pemisahan yang memerlukan biaya paling murah dan
memakai peralatan sangat sederhana ialah kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP).
Walaupun KLTP dapat memisahkan dalam jumlah gram,sebagian besar pemakaian
hanya dalam jumlah miligram. KLT preparatif dilakukan dengan menggunakan
lapisan tebal (sampai 1 mm) sebagai pengganti lapisan penyerap yang tipis.
(Nasution, 2010)

Kromatografi Lapis Tipis merupakan teknik pemisahan cara lama yang

digunakan secara luas, terutama dalam analisis campuran yang rumit dari sumber
alam. Tetapi dalam kuantisasi belakangan ini kromatografi lapis tipis digantikan oleh
“HPLC” (High Performance Thin-layer Chromatography) atau Kromatografi Lapis Tipis
Kinerja Tinggi (Munson, 2010).

Meski banyak terdapat metode seperti yang telah disebutkan di atas,

terdapat metode lain yang pembiayaannya paling murah dan memakai peralatan
paling dasar yaitu Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP). adsorben yang paling
banyak digunakan yaitu silika gel yang dipakai untuk pemisahan campuran lipofil
maupun senyawa hidrofil. ketebalan adsorben yang paling sering digunakan ialah 0,5
– 2 mm. pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran plat sudah tentu mengurangi
jumlah bahan yang dapat dipisahkan dengan KLTP. Ukuran partikel dan porinya
kurang lebih sama dengan ukuran tingkat mutu KLT (Hostettmann, 2006).

Pada kromatografi lapis tipis preparatif, cuplikan yang akan dipisahkan

ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi pelat lapisan besar dan dikembangkan
secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga campuran akan terpisah menjadi
beberapa pita. Pita ditampakkan dengan cara yang tidak merusak jika senyawa itu
tanwarna, dan penyerap yang mengandung senyawa pita dikerok dari pelat kaca.
Kemudian cuplikan dielusi dari penyerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna
untuk memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni untuk telaah

18
pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan analisis, untuk meneliti bahan alam yang
lazimnya berjumlah kecil dan campurannya rumit dan untuk memperoleh cuplikan
yang murni untuk mengkalibrasi kromatografi lapis tipis kuantitatif (Nasution, 2010).

Proses isolasi kromatografi lapis tipis preparatif terjadi berdasarkan

perbedaan daya serap dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen
kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen, oleh karena daya serap
adsorben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak dengan
kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan pemisahan.
(Nasution, 2010)

Adsorben yang paling banyak digunakan dalam kromatografi lapis tipis adalah
silika gel dan aluminium oksida. Silika gel umumnya mengandung zat tambahan
Kalsium sulfat untuk mempertinggi daya lekatnya. Zat ini digunakan sebagai
adsorben universal untuk kromatografi senyawa netral, asam dan basa. Aluminum
iksida mempunyai kemampuan koordinasi dan oleh karena itu sesuai untuk
pemisahan senyawa yang mengandung gugus fungsi yang berbeda. Aluminium
oksida mengandung ion alkali dan dengan demikianbereaksi sebagai basa dalam
suspensi air. Disamping kedua adsorben yang sangat aktif ini dalam hal tertentu
dapat digunakan “kieselgur” yang kurang aktif sebagai lapis sorpsi (Munson, 2010).

Pengembangan plat KLTP biasanya dilakukan dalam bejana kaca yang dapat
menampung beberapa plat. Keefisienan pemisahan dapat ditingkatkan dengan cara
pengembangan berulang. Harus diperhatikan bahwa semakin lama senyawa
berkontak dengan penyerap maka semakin besar kemungkinan penguraian.
(Nasution, 2010)

II. 4. 5 Kromatografi Lapis Tipis Sentrifugal (KROMATOTRON)

Komatotron atau sentrifugal kromatografi merupakan alat kromatografi

menggunakan alat yang disebut kromatotron, teknik pemisahannya menggunakan
gaya sentrifugal dan gravitasi. dalam teknik ini digunakan silika gel for TLC yang
berflourecent. prinsip pemisahan dengan kromatotron sama dengan kromatografi yang
lainnya, tetapi pemisahan sung lebih cepat, karena ada gaya berlangsentrifugal

19
yangakan mempercepat proses penyerapan pelarut yang membawa komponen yang
dipisahkan (Atun, 2014).

Sentrifugal kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografipreparatif yang

menggunakan gaya sentrifugal untuk pemisahansistem multi-komponen. Sebuah
instrumen yang biasa digunakan dalam teknik ini diberi nama sebagai kromatotron.
(Naval, 2011)

Ciri khas penyiapan kromatotron adalah sentrifugal dipercepat, radial,

kromatografi lapis tipis. Sampel yang akan dipisahkan digunakan, sebagai larutan,
dekat dari pusat disk yang berputar dilapisi dengan lapisan tipis dari sorben. Elusi
dengan bentuk pelarut band dari komponen terpisah yang berputar melingkar keluar
dari tepi rotor bersama-sama dengan pelarut. Sebuah sistem pengumpulan baru
membawa eluat untuk satu output tabung (Naval, 2011).

Keuntungannya adalah cara kerja sederhana. Cepat pemisahan biasanya

selesai dalam 30 menit. Tidak perlu mengerok pita. Pemakaian pelarut tidak boros.
Rotor yang sudah dilapisi dapat diregenerasi. Pencemar yang terekstraksi dari
penjerap lebih sedikit daripada yang terekstraksi pada KLT preparatif. Penotolan
sampel mudah. Dapat dilakukan pengembangan landaian bertahap. Kemungkinan
oksidasi senyawa yang peka lebih kecil daripada pada cara KLT preparatif. Perolehan
kembali senyawa yang dipisah lebih besar daripada KLT preparatif. Sedangkan
kerugiannya adalah fase diam yang dapat dipilih terbatas. Rotor yang sudah dilapisi
tidak ada dalam perdagangan. Daya pisah terbatas. Cara pendeteksian terbatas. Sistem
pengumpul mungkin tercemar.

Pemisahan dengan kromatografi radial menggunakan plat kaca yang berbentuk

bundar dilapisi dengan bubur silika gel 60 PF254 dan akuades dingin. Ketebalan
silika gel yang dipakai sesuai dengan banyaknya sampel yang akan dipisahkan yaitu:
1 mm, 2 mm dan 4 mm. Perbandingan antara silika gel dengan akuades dingin yang
ditetapkan yaitu untuk 1 mm (45 ;90), 2 mm(65:130) dan 4 mm (115:200) (Illias,
2014).

Pembuatan plat kaca dilakukan dengan mencampurkansilika gel dan akuades

dingin sesuai perbandingan yang telah ditentukan. Bubur tersebut diratakan pada pelat
kaca, pada bagian pinggir atau tepi plat diberi selotip agar bubur silika gel tidak

20
tumpah kemudian bubur diratakan dengan suatu alatdengan cara memutar plat pada
satu arah secara perlahan. Setelah plat selesai dibuat, plat dapat dikeringkan selama 24
jam atau dapat dikeringkan dalam oven pada suhu 60-70C (Illias, 2014).

Plat kromatografi radial (kromatotron) yang telah dibuat dipasang pada poros
listrik dan diputar pada 800 rpm. Ketebalanfasa diam 1-4 mm dan sampel yang dapat
dipisahkan sebanyak 0,1-1 g. Pada awal pemisahan pelarut yang digunakan mulai
dari kepolaran rendah kemudian ditingkatkan kepolaran secara bergradien. Rotor
terdapat dalam ruang yang tertutup dengan plat kaca kuarsa. Penutup ini
memungkinkan kita mengamati bercak tak berwarna tetapi dapat menyerap sinar UV
dengan memakai lampu UV. Hasil pemisahan kromatografi radial ditampung
didalam Vial (Illias, 2014).

II. 4. 6 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Multi eluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang
memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda
(Ibnu, 2008).

Dalam multi eluen, setelah pengembang tunggal menaik,kromatogram

diangkat dari chamber dan dikeringkan, biasanya selama 5-10 menit. Kromatogram
tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar dari pelarut yang sama dalam arah
yang sama untuk jarak yang sama.Proses ini, yang dapat diulang berkali-kali,
meningkatkan resolusikomponen dengan nilai RF bawah 0,5. Beberapa pengembang
dilakukandengan pelarut yang berbeda dalam arah yang sama, masing-masingyang
menjalankan jarak yang sama atau berbeda, disebut elusi bertahap. Sebuah fase
kurang polar dapat digunakan pertama, diikuti oleh faseyang lebih polar, atau
sebaliknya. Pemindahan material nonpolar kebagian atas lapisan, meninggalkan zat
terlarut polar terganggu darimana dia berasal. Setelah kering, zat terlarut polar
dipisahkan olehpengembang dengan eluen (Fried,1999).

KLT 2 arah atau 2 dimensi ini bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel
ketika komponen-komponen solute mempunyai karakteristik kimiayang hampir
sama, karenanya nilai Rf juga hampir sama sebagaimana dalam asam-asam amino.
Selain itu, 2 sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan secara

21
berurutan sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit yang
mempunyai tingkat polaritas yang berbeda (Ibnu, 2008).

Sampel ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satusystem fase

gerak sehingga campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu sisi.
Lempeng diangkat, dikeringkan dan diputar 90°, dan diletakkan dalam bejana
kromatografi yang berisi fase gerak kedua, sehingga bercak yang terpisah pada
pengembangan pertama terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu
dikromatografi lagi (Ibnu, 2008).

Zat identifikasi oleh 2D-TLC juga sering dilakukan dalam penyelidikan

phytopharmaceuticals, yang biasanya memiliki komposisi yang kompleks. Dari sudut
pandang logis, 2D-KLT menggunakan pelarutyang sama dalam dua arah harus sistem
yang terbaik. Namun, ini tidak biasanya menyebabkan informasi tambahan, karena
semua zat akan berbaring pada diagona. Metode 2D-KLT hanya menjadi menarik jika
reaksi telah terjadi antara dua eluen, dan penyimpangan dari garis diagonal dapat
diamati setelah elusi kedua (Hahn, 2007).

Dalam hal untuk mendapatkan resolusi yang baik, penting untuk memilih dua
campuran pelarut yang berbeda, meskipun dengan kekuatan pelarut yang sama ini
cukup sulit tetapi penting (Wall, 2005).

Secara singkat pengerjaan KLT dua dimensi ialah sebagai berikut: Sampel
ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satu sistem fase gerak sehingga
campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu sisi. Lempeng
diangkat, dikeringkan dan diputar 90°, dan diletakkan dalam bejana kromatografi
yang berisi fase gerak kedua,sehingga bercak yang terpisah pada pengembangan
pertama terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu dikromatografi lagi.
(Rohman, 2009).

Keberhasilan pemisahan akan tergantung pada kemampuan untuk

memodifikasi selektivitas eluen kedua dibandingkan dengan selektivitas dari eluen
pertama (Satari, 1999).

22
 Pemisahan 2-D yang terbaik TLC adalah ketika semua komponen dipisahkan
dan didistribusikan pada seluruh permukaan dari pelatkromatografi. Estimasi
pemisahan ini dapat dibuat dengan sebuah fungsiobjektif. Umumnya, kesepakatan
yang baik antara evaluasi visual dari kromatogram dan evaluasi komputer
menggunakan fungsi objektif adalah melihat. Di sisi lain, fungsi yang diperlukan yang
dapat memprediksi nilai Rf dari satu komponen fungsi komposisi dari fase gerak. Ada
progra muntuk simulasi kromatogram yang sebanding dengan yang diperolehdengan
percobaan kromatogram (Satari, 1999).

23
 Bab III Metodologi

Ekstraksi dengan metode maserasi diawali dengan preparasi sampel cabai

terlebih dahulu. Sampel cabai yang telah didapatkan kemudian dicuci hingga bersih
dan dipotong-potong menjadi 2-4 kali lebih kecil kemudian dihaluskan dengan
bantuan blender dan dikeringkan. Proses pengeringan diawali dengan mengangin-
anginkan sampel, kemudian sampel di oven dengan menggunakan suhu 50 oC hingga
kering. Sampel yang telah dikeringkan kemudian ditampung ke dalam toples serta
ditambahkan pelarut berupa methanol. Proses maserasi berlangsung selama 3 hari,
atau hingga pelarut telah jenuh. Dilakukan pengulangan atau re-maserasi hingga 3
kali, bertujuan agar senyawa yang terkandung pada sampel dapat terekstrak sempurna.
Hasil maserasi kemudian disaring menggunakan corong buchner dan kertas saring,
lalu diuapkan pelarut yang terkandung pada larutan hasil maserasi dengan
menggunakan bantuan alat rotary evaporator. Hasil ekstraksi atau ekstrak cair yang di
dapat kemudian ditampung di dalam mangkuk untuk diuapkan menjadi ekstrak semi
solid.

Ekstrak yang berupa semisolid kemudian di fraksinasi menggunakan 3 jenis

pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda, dari non polar-polar, diantaranya n-
heksan, etil asetat, dan etanol. Fraksinasi yang dilakukan menggunakan metode
ekstrasi cair-padat (ECP) dengan bantuan magnetic stirrer. Metode tersebut
digunakan karena disaat ekstrak basah dilarutkan ke dalam air, ekstrak basah tersebut
tidak dapat terlarut sempurna. Ekstrak semisolid yang didapat kemudian ditimbang
sebanyak 10 gram dan diletakkan ke dalam erlenmeyer, ditambahkan pelarut pertama
yaitu n-heksan dan dimasukkan bola magnet untuk membantu proses pengadukan.
Setelah dilakukannya proses pengadukan, ditunggu beberapa saat hingga terdapat
endapan. Bagian yang terlarut ditampung pada botol selai, sedangkan bagian yang
mengendap dilarutkan kembali dengan n-heksana hingga hasil pengadukan
menunjukkan warna pelarut yang tidak lagi keruh, hal tersebut menandakan jika
ekstrak tidak dapat lagi terlarut dalam n-heksana melainkan harus dilarutkan
menggunakan pelarut dengan tingkat kepolaran yang lebih tinggi. Dilakukan hal yang
sama dengan menggunakan pelarut lainnya seperti etil asetat dan etanol. Hasil fraksi
yang didapat kemudian ditampung di dalam botol selai dan diangin-anginkan.

24
 Hasil fraksi yang didapatkan kemudian diuji kandungan senyawa metabolit
yang terkandung di dalamnya menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Plat KLT yang akan digunakan mula-mula diaktifkan dengan cara di oven selama 15
menit dengan suhu 150 oC. Setelah plat KLT siap, kemudian dipotong-potong dengan
ukuran 7 cm. Plat KLT yang telah dipotong, diberi batas atas dan bawah dengan
ukuran 1 cm pada bagian bawah dan 0,5 cm pada bagian atas. Kemudian disiapkan
hasil fraksi n-heksana, etil asetat, dan etanol yang akan di totol pada plat KLT,
diencerkan sedikit fraksi dengan pelarut yang dapat melarutkan di dalam botol vial.
Ditotol fraksi dengan menggunakan pipa kapiler pada batas bawah plat KLT. Setelah
itu, dimasukkan plat KLT pada chamber (gelas) yang berisi eluen n-heksana dan etil
asetat dengan perbandingan dimulai dari yang non-polar hingga polar. Digunakan
eluen berupa n-heksan:etil asetat (9:1), (8:2), (7:3), dan (5:5). Setelah eluen terelusi
hingga batas atas plat KLT, plat KLT disinari dengan UV portable pada panjang
gelombang 254 nm dan 366 nm. Hasil noda dengan perbandingan eluen terbaik akan
dilanjutkan pada kromatografi kolom konvensional.

Proses pemisahan dengan menggunakan metode Kromatografi Kolom

Konvensional (KKK), diawali dengan mempersiapkan alat dan bahan yang akan
digunakan. Kolom dengan diameter 2 cm disiapkan, dijepit pada statif dan klem, dan
dibersihkan bagian dalamnya dengan dialiri dengan etanol. Dimasukkan sedikit kapas
yang telah dibentuk bulat kecil ke dalam kolom, untuk dapat menahan silika gel yang
akan dimasukkan. Ditimbang silika gel sebanyak 10 g, dilarutkan dengan eluen
berupa n-heksana:etil asetat (9:1), kemudian dimasukkan ke dalam kolom, dirapatkan
dan jangan sampai terbentuk celah atau retakan. Disiapkan imprek, dengan
menimbang 2 g fraksi n-heksana dan digerus bersamaan dengan silika gel hingga
berbentuk serbuk. Imprek yang telah disiapkan dimasukkan ke dalam kolom secara
perlahan dan jangan sampai membuat keretakan pada silika gel yang telah
dimasukkan sebelumnya. Kemudian ditambahkan eluen n-heksana:etil asetat (9:1) ke
dalam kolom secukupnya, dibuka keran kolom secara perlahan, dan ditampung cairan
hasil partisi menggunakan botol vial. Botol vial yang mengandung kromatogram
kemudian diuapkan pelarutnya hingga kering.

Hasil partisi kemudian diuji kemurniannya dengan menggunakan

Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi (KLT 2D). Disiapkan plat KLT berukuran 5x5
cm, diberi batas bawah pada 2 sisinya secara berurutan, dan batas atas pada 2 sisi

25
lainnya. Digunakan 2 macam eluen yang berbeda tingkat kepolarannya atau 2 sistem
untuk melihat apakah masih terdapat zat pengotor di bawah maupun di atas nilai Rf
yang didapat. Digunakan eluen pertama berupa n-heksana:etil asetat (7:3) dan
kloroform:etil asetat (7:3). Di elusi menggunakan eluen pertama hingga batas atas,
kemudian di elusi lagi menggunakan eluen ke dua hingga batas atas pula. Hasil elusi
dengan 2 sistem eluen kemudian disinari dengan sinar UV 254 nm dan 366 nm.

26
 Bab IV Alat dan Bahan

IV. 1 Alat

Peralatan yang digunakan dalam praktikum ini adalah Toples, batang

pengaduk, timbangan analitik, rotary evaporator, mangkok, waterbath, blender,
oven, corong pisah, gelas kimia, magnetic stirrer, statif dan klem, gelasukur,
pipetukur 1mL, pipetukur 5mL, propipet, botol semprot, lampu UV 254nm dan UV
366 nm, pipa kapiler, cutter, chamber, penggaris, penutup chamber, pinset, hotplate,
pipet tetes, kolom kromatografi, cawan porselen, mortir stamper, spatel.

IV. 2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah serbuk cabai rawit, ekstrak
cabai rawit, methanol, plastic wrap, n-heksan, etilasetat, n-butanol, aquades, kertas
saring, etanol, plat KLT, kloroform, H 2SO4, silica gel GF 60 254, FeCl3 1%,
Aluminium foil, Pereaksi Dragendroff, Pereaksi Lieberman Burchard.

27
 Bab V Prosedur Percobaan

V. 1 Ekstraksi (Maserasi)

Disiapkan alat dan bahan, rendam serbuk cabai dalam larutan methanol,
tunggu rendaman tersebut selama 3 hari hingga jenuh, kemudian ekstrak tersebut
disaring menggunakan kertas saring dan corong, setelah itu, ekstrak diuapkan
menggunakan rotary evaporator, Ekstraksi dilakukan sebanyak 3 kali, dan Hitung
rendemen ekstrak.

V. 2 Fraksinasi

Ditimbang ekstrak kering sampel 3-5 gram, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer,

kemudian ditambahkan dengan pelarut dimulai dari pelarut non polar yaitu n-heksan,
setelah itu diaduk menggunakan magnetic stirrer, yang larut n-heksan dipisahkan,
kemudian yang larut n-heksan dipisahkan dengan endapannya, kemudian larutan n-
heksan diuapkan hingga diperoleh fraksi etanol. Dilanjutkan dengan langkah yang
sama dengan pelarut etil asetat dan etanol. Fraksi ekstrak yang diperoleh dari
beberapa pelarut dihitung rendemennya.

V. 3 Kromatografi Lapis Tipis

Dibuat eluen, Di cari perbandingan eluen yang sesuai dengan sifat dari
ekstrak, dan eluen yang di dapat dengan perbandingan n-heksan:etil asetat (9:1).
Dimasukkan ke dalam chamber. Setelah didapat perbandingan eluen yang tepat,
ekstrak hasil fraksi diencerkan, kemudian setelah diencerkan ditotol kan ekstrak di
plat KLT menggunakan pipa kapiler, kemudian plat tersebut di masukkan ke dalam
chamber, lihat noda yang terdapat di plat, jika tidak terlihat secara visual, gunakan
pereaksi H2SO4 10%, dan sinar UV 254 nm dan 366 nm. Setelah didapat hitung nilai
Rf.

V. 4 Kromatografi Konvensional

Persiapkan kolom, gerus silica gel dengan ekstrak cabai hingga terbentuk
serbuk, kemudian dibuat bubur silica gel sebagai fase diam, masukkan bubur silica

28
tersebut kedalam kolom, dan dilanjutkan dengan memasukkan serbuk cabai, dan buat
eluen yang sesuai dengan perbandingan sebelumnya n- heksan:etil asetat (9:1). Dan
masukkan ke dalam kolom. Kemudian buka kran kolom untuk menghasilkan isolat
yang ditampung dalam botol vial dan hitung berapa vial yang didapat.

V. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Dibuat 2 sistem dengan eluen berbeda, yang pertama eluen non polar dengan
perbandingan n-heksan:etil asetat (7:3) dan yang kedua eluen polar kloroform:etil
asetat (7:3). Setelah itu dimasukkan ke chamber masing- masing. Hasil isolat dari
KKK yang berbentuk Kristal diencerkan menggunakan pelarut non polar, kemudian
totolkan larutan disatu spot tersebut diatas plat KLT dengan ukuran 5cm x 5cm,
masukkan plat tersebut dalam chamber disistem pertama dan lihat noda yang terlihat,
keluarkan plat tersebut dan diangin-anginkan plat. Dan masukkan kembali plat
dengan arah yang berbeda ke dalam sistem kedua dan lihat noda. Lihat noda dengan
sinar UV 254 nm dan UV 366 nm. Hitung nilai Rf.

29
 Bab VI Pembahasan

VI. 1 Ekstraksi

Ekstraksi adalah teknik pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan

distribusi zat terlarut diantara dua pelarut yang saling bercampur. Metode ekstraksi
yang dilakukan pada percobaan kali ini adalah menggunakan metode maserasi.
Digunakannya metode maserasi dikarenakan proses ekstraksi dengan metode
maserasi sudah mampu mengekstrak sample dengan sempurna. Pada ekstraksi
dengan metode maserasi ini menggunakan pelarut metanol hal ini dikarenakan
metanol sifatnya yang diketahui adalah sebagai pelarut semipolar sehingga
diharapkan dapat menarik semua senyawa metabolit sekunder yang ada dalam
simplisia (Agoes, 2007).

Setiap 1x24 jam pelarut diganti dengan yang baru hingga pelarut sudah terlihat
bening atau tidak pekat lagi. Pergantian pelarut bertujuan untuk menarik senyawa
yang belum tertarik dengan pelarut yang sebelumnya. Selanjutnya ekstrak dipekatkan
dengan alat rotary evaporator tujuan dari pemekatan adalah memekatkan
konsentrasi larutan sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi yang lebih
tinggi.
Rendemen merupakan perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan
simplisia awal. Perhitungan rendemen dilakukan bertujuan untuk mengetahui metode
ekstraksi apa yang paling baik untuk simplisia tersebut dan untuk mengetahui baik
atau tidak cara pengerjaan ekstraksi yang dilakukan. Hasil rendemen untuk sampel
buah cabai adalah 6,85 % yang berarti bahwa jumlah bahan dan jumlah pelarut yang
digunakan dalam proses ekstraksi dapat mempengaruhi rendemen ekstrak yang
dihasilkan. Semakin tinggi jumlah pelarut yang digunakan, maka kemampuan pelarut
untuk mengekstrak suatu bahan semakin tinggi karena kontak antara bahan dengan
pelarut semakin besar.

30
 Sampel Metode Berat simplisia Berat ekstrak Rendemen (%)
(g) (g)

Buah cabai Maserasi 278,57 19,1 6,85%

VI. 2 Fraksinasi

Metode fraksinasi pada kali ini adalah proses lanjutan dari proses
ekstraksi. Fraksinasi pada kali ini menggunakan metode cair-padat pada sampel
buah cabai. Penggunaan pelarut pada metode ini yang pertama digunakan dua pelarut
yaitu air dan n-hexan, hal ini bertujuan untuk menarik senyawa yang terkandung di
dalam ekstrak yang memiliki kepolaran yang tinggi dan senyawa yang memiliki
kepolaran rendah karena air merupakan pelarut yang sangat polar dan n-hexan pelarut
yang sangat non polar. Kemudian pelarut n-hexan diganti dengan pelarut yang lebih
sedikit lebih polar yaitu etil asetat yang kemudian diganti dengan pelarut yang lebih
polar lagi yaitu butanol. Pergantian secara bertahap bertujuan agar senyawa kimia
dapat dipisahkan terlebih dahulu antara polar dan non polar, kemudian secara
bertahap senyawa yang lebih polar dari n-hexan akan ditarik dengan pelarut-pelarut
selanjutnya, hingga senyawa tidak dapat lagi ditarik oleh (Rohman, 2009).

Hasil yang didapatkan dengan menggunakan sampel n-hexan pada buah cabai
sebanyak 6,6g menghasilkan rendemen 34,55%. Pada pelarut etil asetat pada sampel
buah cabai sebanyak 60,3g menghasilkan rendemen 1,57%. Pada pelarut butanol pada
sampel buah cabai sebanyak 0,3g menghasilkan rendemen 1,57%.

Sampel n-hexan (g) Etil asetat (g) Butanol (g)

Buah cabai 6,6 0,3 0,3

Rendemen 34,55% 1,57% 1,57%

31
VI. 3 Kromatografi Lapis Tipis

Pelaksanaan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silica

atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang
keras. Jel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk kromatografi
lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat berpendar flour
dalam sinar ultra violet. Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang
sesuai. Percobaan ini menggunakan teknik kromatografi lapis tipis dengan suatu plat
tipis (aluminium) dan dalam KLT adsorbens yang digunakan berupa slika gel (SiO2)
yang tidak mengikat molekul air, sehingga noda yang tercipta lebih terfokus dan
tajam. Aluminium yang fungsinya untuk sebagai tempat berjalannya adsorbens.
(Sudjadi, 1986).

Dalam percobaan ini menggunakan sampel fraksinasi N-Heksan sampel cabe,

dengan beberapa perbandingan eluen, namun dari sekian banyak eluen yang
digunakan hanya pada perbandingan N-heksan:Etilasetat (9:1) totolan pada KLT
terlihat dengan bantuan sinar UV 254 dan UV 366. Prinsip UV 254, lempeng akan
berflouresensi sedangkan sampel akan tampak berwarna gelap. Penampakan noda
pada lampu UV 254 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan
indikator fluoresensi yang terdapat pada lempeng. Jika noda tetap tak terlihat
dilakukan dengan penyemprotan menggunakan H2SO4 10%, Prinsip H2SO4 10%
berdasarkan kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak gugus
kromofor dari zat aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan bergeser ke
arah yang lebih panjang (UV menjadi VIS) sehingga noda menjadi tampak oleh mata.
Kemudian setelah ditotol, diukur jarak tempuh noda untuk melihat hasil nilai Rf.

Jarak Jarak
Nama Nilai
Fraksi Eluen Tempuh Tempuh
Sampel Rf
Noda Eluen

N-Heksan :
Cabe N-Heksan 3cm 4,5cm 0,66
EtilAsetat (9:1)

32
 Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan maka nilai Rf yang didapat
adalah 0,66. NilaiRf yang baik yang menunjukkan pemisahan yang cukup baik adalah
berkisar antara 0,2-0,8.
(Sudjadi, 1986).

VI. 4 Kromatografi Konvensional

Hasil kromatogram yang didapat dengan menggunakan eluen N-hexsan (9:1)

agar meminimalkan kontaminasi kolom dari pelarut dan bahan-bahan lain yang dapat
mengganggu aktivitas dari pemisahan komponen. Hasil yang diperoleh dari
kormatografi konvensional yaitu untuk vial 1-10 berwarna bening yang
mengindikasikan pelarut saja yang berisi. Vial 11-24 berwarna kuning bening. Vial
25- 48 berwarna kuning agak pekat Vial 49-52 berwarna orange kekuningan. Vial 53-
62 berwarna orange kecoklatan. Dan vial 63-72 berwarna coklat karena digunakan
nya pelarut metanol. Perbedaan warna ini kemungkinan mmenunjukkan perbedaan
senyawa yang terkandung pada setiap vial. Panjang kolom adalah 10cm dengan fase
diam yang menyerap atau mengabsorbsi komponen kimia dari sampel fase yang tidak
larut dalam fase cair yaitu silica gel dan fase gerak nya adalah cairan (pelarut) yang
mengalir membawa komponen campuran sepanjang kolom.

VI. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Pada kromatografi lapis tipis 2 dimensi dibuat 2 sistem dengan eluen

berbeda, yang pertama eluen non polar dengan perbandingan n-
heksan:etilasetat (7:3) dan yang kedua eluen polar kloroform:etilasetat (7:3).

Pelarut yang sesuai adalah pelarut kloroform:etilasetat (7:3) karena dapat

menarik dua noda pada dua arah yang berbeda dan menghasilkan noda yang
tunggal yang dapat dilihat menggunakan sinar UV 254 nm dan UV 366 nm. Plat
yang digunakan berupa aluminium. perbandinga eluen pada profil KLT dimana
akan memperpanjang lintasan noda (Rf) dengan menunjukan senyawa tunggal
pada sampel.

33
 Bab VII Kesimpulan dan Saran

VII. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan yang di lakukan dapat disimpulkan bahwa:

a. Ekstrak cabai yang dihasilkan yaitu 19,1 gram.

b. Rendemen ekstrak cabai yaitu sebesar 6,85%.

c. Fraksi n-heksana yang didapat yaitu sebesar 6,6 gram dengan rendemen sebesar
34,55%, fraksi etil asetat sebesar 0,3 gram dengan rendemen sebesar 1,57%, dan
fraksi n-butanol sebanyak 0,3 gram dengan rendemen sebesar 1,57%.

d. Hasil kromatogram yang didapat yaitu untuk vial 1-10 berwarna bening yang
mengindikasikan pelarut saja yang berisi. Vial 11-24 berwarna kuning bening.
Vial 25- 48 berwarna kuning agak pekat. Vial 49-52 berwarna orange
kekuningan. Vial 53-62 berwarna orange kecoklatan. Dan vial 63-72 berwarna
orange kecoklatan.

e. Pelarut yang digunakan adalah kloroform:etilasetat (7:3) karena dapat

menarik dua noda pada dua arah yang berbeda dan menghasilkan noda
yang tunggal yang dapat dilihat menggunakan sinar UV 254 nm dan UV 366
nm

VII. Saran

Diharapkan pada praktikum pemisahan kimia selanjutnya dilakukan dengan

sungguh-sungguh hingga didapatkan senyawa murni dari suatu simplisia. Dan setiap
proses diperhatikan dengan baik dan dijaga dengan baik.

34
 Daftar Pustaka

Adijuwana, Nur M.A. 1989. Teknik Spektroskopi dalam Analisis Biologi. Universitas
IPB. Bogor.

Adnan, M. 1997. Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan. Andi

Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.

Agoes. Goeswin. 2007. Tenologi Bahan Alam. ITB Press. Bandung

Atun Sri. 2014. Metode Isolasi dan Identifikasi Struktur Senyawa Organik Bahan
Alam. Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur. Volume 8. Nomor 2. Hal
53-6.

Cahyono, B. 2003. Cabai Rawit. Kanisius. Yogyakarta.

Cannel, R. J. P. 1998. Natural Products Isolation. Humana Press. New Jersey.

Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid II. Trubus Agriwidya;
Jakarta.
Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan RI.
Jakarta

Ditjen POM.2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Depkes.RI

Hal.10-11. Jakarta.

Dwijoseputro G. 1994. Pengantar Fisiologi Tumbuhan. Gramedia. Jakarta.

Fried, Bernard &Sherma, Joseph. 1999. Thin Layer Chromatography, 4thEdition,

Revised and Expanded. Marcel Dekker. Inc8. New York.

Ghisalberti, E.L. 2008. Detection and Isolation of Bioactive Natural Products in

Bioactive Natural Products: Detection, Isolation, and Structural
Determination. Taylor & Francis Group Inc. , U.S.A.

35
Hahn Deinstrop, Elke. 2007. Applied Thin-Layer Chromatography,Best Practiceand
Avoidanceof Mistakes. Second, Revised and Enlarge Edition. WILEY-VCH.
Jerman.

Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Edisi Ke Dua. ITB. Bandung.

Harris, et.al. 1982. An Introduction To Chemical Analysis. Savders College

Publishing Philadelpia. Japan.

Heftmann, E. 1983. Steroids Dalam Kromatografi. Fundamentals and Aplication.

Amsterdam.

Hendayana, Sumar, dkk. 1994. Kimia Analitik Instrumentasi Ikip Semarang Press:
Semarang.

Hendayana, Sumar. 2006. Kimia Pemisahan. PT. Remaja Rosdakarya. Bandung.

Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid Iii. Yayasan Sarana Wana Jaya.
Jakarta.

Hostettmenn, K, dkk. 1986. Cara Kromatografi Preparatif. ITB. Bandung.

Hostettmenn, K., dkk. 2006. Cara Kromatografi Preparatif. ITB. Bandung

Ibnu Gholib Gandjar, Abdul Rahman. 2008. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar.
Yogyakarta.

Illias Et Al. 2014. Preparation Of Pre-Coated Rp-Rotors And Universal

Chromatorotors, Chromatographich Separation Devices And Methods For
Centrifugal Preparative Chromatography. United States Journal Patent
Application Publication. Vol 1. No 8

Kennedy, John. 1990. Analytical Chemistry Principles. Sounders College Publishing:

New York.

Khopkar, S.M., 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press. Jakarta.

Lestari SB, Pari G. 1990. Analisis kimia beberapa jenis kayu Indonesia. Jurnal
Penelitian Hasil HutanPusat Penelitian dan Pengembangan Hasil HutanVII
(3) : 96-100.

36
Lukum, Astin P. 2005. Bahan Ajar Dasar Dasar Kimia Analitik. Universitas Negeri
Gorontalo. Gorontalo.

Munson, James,W., 2010. Analisis Farmasi. Airlangga University Press. Surabaya

Nasution, A. Rosa. 2010. Isolasi Senyawa Triterpenoid atau Streoid. Universitas

Sumatra Utara: Sumatra Utara.

Naval Kulkarni Et Al. 2011. Centrifugal Thin Layer Chromatography. Asian Journal
of Pharmacy And Life Science. Vol 7. No 4.

Rani Rachmawati. 2009. Pengaruh suhu dan lama penyimpanan terhadap kandungan
vitamin c pada cabai rawit putih (Capsicum frustescens). Jurnal Biologi XIII
(2) : 36 – 40.

Rohman, Abdul. 2009. Kimia FarmasiAnalisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.

Rohman. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Graha Ilmu. Yogyakarta.

Roy J. Gritter, James M. Bobbit, Arthur E. S., 1991. Pengantar Kromatografi.

Penerbit ITB. Bandung.

Rukmana, R.H 2002. Usaha Tani Cabai Rawit. Kanisius. Yogyakarta.

Sarker,SD., Latif,Z and Gray .Al.2006. Natural Product Isolation. Humana Press inc .
Totowa New Jersey.

Satari, RR. 1999. Penelitian Produk Alam Laut Indonesia. ArahdanProspek.Jakarta.

Schill, Goran. 1978. Separation Methods. Swedish Phasma Centrical Press.

Stockholm.

Sudjadi. 1986. Metode Pemisahan. Kanisius. Yogyakarta.

Sudjadi. 1988. Metode Pemisahan. Kanisius. Yogyakarta.

Syukur, M., dkk. 2010. Evaluasi Daya Hasil Cabai Hibrida dan Daya Adaptasinya di
Empat Lokasi dalam Dua Tahun. J. Agron. Indonesia 38 (1) : 43-51.

37
Undang, dkk. 2015. Identifikasi Spesies Cabai Rawit (Capsicum spp.) Berdasarkan
Daya Silang dan Karakter Morfologi. Jurnal Agron. Indonesia 43 (2) : 118 –
125.

Wall, Peter E. 2005. Thin-Layer Chromatography, A Modern Practical Approach.

RS.C7. UK.

Warisno. K. D. 2010. Peluang Usaha dan Budidaya Cabai. PT Gramedia Pustaka

Utama. Jakarta.

Yazid, Estien. 2005. Kimia Fisika Paramedis. Andi. Yogyakarta.

38
 LAMPIRAN
Tabel V. 1 Hasil ekstraksi

Sampel Metode Berat simplisia (g) Berat Rendemen (%)

ekstrak (g)
Buah cabai Maserasi 278,57 19,1 6,85%

Tabel V. 2 Rendemen Ekstrak dan Fraksi Buah Cabai

Sampel n-hexan (g) Etil asetat (g) Butanol (g)

Buah cabai 6,6 0,3 0,3
Rendemen 34,55% 1,57% 1,57%

Tabel V.3 Fraksi Buah Cabai dan Nilai Rf

Jarak Jarak
Nama
Fraksi Eluen Tempuh Tempuh NilaiRf
Sampel
Noda Eluen

N-Heksan :
Cabe N-Heksan EtilAsetat 3cm 4,5cm 0,66
(9:1)

39
 (a) (b)
Gambar V.1: ekstraksi dengan metode maserasi (a). hasil ekstraksi (b)

(a) (b)
Gambar V.2 Kromatografi lapis tipis fase diam silika gel 60 GF 254, fase gerak n-
hexan:etil asetat (9:1) dilihat dengan (a) sinar UV λ 366 nm (b)
sinar UV λ 254 nm

40
Gambar V.3 Kromatografi kolom konvensional buah cabai menggunakan silica gel
60 GF254 dengan pelarut n-hexan:etil asetat (9:1)

II

I
(a) (b)
Gambar V.4 Kromatografi lapis tipis dua dimensi, fase diam silika gel 60 GF 254,
pelarut kloroform: etilasetat (7:3) sinar uv 254nm (a) sinar uv
366nm(b)

41