Dasar-Dasar Mikroskopi 3

9/13/16
Bernadus Irawan
Akademi Analis Kesehatan Nasional
Surakarta
Dasar-dasar Mikroskopi
dan
Perawatan Dasar Mikroskop
AAK Nasional Surakarta
Click to edit Master subtitle style
Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta
Daftar Isi
A.
B.
C.
D.
E.
F.
G.
H.
9/13/16
Teori Dasar Mikroskop

Jenis Mikroskop dan Metode
Observasi
Komponen Mikroskop Cahaya
Pemilihan Mikroskop
Bahan Rendaman / Imersi
Mikrometer
Perawatan Dasar Mikroskop
Pemindahan dan penyimpanan
Mikroskop
A. Teori Dasar Mikroskop
Mikroskop Monokuler
Mikroskop Binokuler
Mikroskop ?
Berasal dari 2 kata yaitu :
Mikroskop : Merupakan
a) Mikros ;Kecil
alat bantu dalam melihat
b)Scope ;Melihat suatu benda dalam ukuran
Kecil
9/13/16
Prinsip Dasar Mikroskop

Mikroskop memiliki 3 prinsip dasar,yaitu :
1. Perbesaran / Magnification
2. Resolusi / Resolution
3. Kontras / Contrast
9/13/16
1. Perbesaran /
Magnification
9/13/16
2. Resolusi / Resolution
Resolusi merupakan kemampuan bagian optik
dari sebuah mikroskop untuk membedakan 2 garis
atau titik dari sebuah obyek yang diamati.
Semakin besar resolusi,maka semakin kecil jarak
antara 2 garis atau titik dapat dibedakan,maka
semakin baik pula mikroskop .
9/13/16
Kontras disini merupakan kemampuan
sebua sistem optik dari mikroskop dalam
membedakan intensitas cahaya dan
intensitas warna dari sebuah obyek atau
lebih pada sebuah bidang lapang
pandang,sehingga obyek tersebut dapat
dilihat dengan jelas.
9/13/16
9/13/16
10
Prinsip Dasar Sistem Optik
9/13/16
11
B. Jenis Mikroskop dan

Metode Observasi
9/13/16
12
Jenis Mikroskop Berdasarkan Sistem

Pencahayaan
1.
2.
3.
9/13/16
SEM ( Scaning Elektron Mikroskop )/

Mikroskop Pindai Elektron ( MEP )
TEM ( Transmition Elektron Mikroskop )
Mikroskop transmisi elektron ( MTE )
Compound Light Mikroscope ( Mikroskop
Cahaya )
13
B .1 SEM ( Scaning Elektron Mikroskop )/

Mikroskop Pindai Elektron ( MEP )
Mikroskop jenis ini memiliki ciri khas :

Resolusi tinggi ( hingga I nm)
Menggunakan Elektrostatistik dan elektro magnetik
sebagai sumber cahaya.
Pembesaran tinggi hingga 40.000 X
Memiliki Kemampuan pengamatan 3D
9/13/16
14
B.2 TEM ( Transmition Elektron

Mikroskop ) Mikroskop transmisi elektron
( MTE )
Memiliki cara kerja mirip proyektor slide,dimana elektron
ditembakkan / ditembuskan ke dalam obyek pengamatan dan
pengamat mengamati hasil proyeksinya melalui layar.
Menggunakan Elektro statik dan Elektro Magnetik Sebagai
sumber sistem cahaya.
Memiliki resolosi tinggi hingga 0.5 nm
memiliki perbesaran hingga 500.000 X
Kemampuan pengamatan 2D
9/13/16
15
B.3 Compound Light

Mikroscope ( Mikroskop
Cahaya )

Perbesaran rendah ( Kurang dari 2000 X )
Resolusi rendah
Kemampuan pengamatan 2D dan 3D
9/13/16
16
9/13/16
copyright 2006 www.brainybetty.com
17
9/13/16
18
9/13/16
19
9/13/16
20
9/13/16
21
9/13/16
22
9/13/16
23
9/13/16
24
9/13/16
25
9/13/16
26
9/13/16
27
Video Brightfield
VIDEO\BRIGHTFIELD\Nikon (30 frames s
econd_ 1 spf) feeding process.mp4
VIDEO\BRIGHTFIELD\Nikon Ink injection
into yolk sac artery of 72 hour-old ch
ick embryo.mp4
9/13/16
28
9/13/16
29
Video
VIDEO\DARKFIELD\amoeba01.mpg
VIDEO\DARKFIELD\dileptus01df20x.mp
g
9/13/16
30
9/13/16
31
video
VIDEO\PHASE_CONTRAST\actinophrys
03pc20x.mpg
VIDEO\PHASE_CONTRAST\PH_DIC_amo
eba01ob.mpg
9/13/16
32
9/13/16
33
video
VIDEO\DIFFERENTIAL_INTERF_CONTRAST\
Nikon Movement of organelles in pla
nt cells.mp4
VIDEO\DIFFERENTIAL_INTERF_CONTRA
ST\DIC_echiniscus.mpg
9/13/16
34
9/13/16
35
video
VIDEO\FLUORESCENCE\Nikon
Complexity
of
ureteric
bud
branching
and
nephron
formation.mp4
VIDEO\FLUORESCENCE\FLR_GFP_
Golgi_DsRed_Mito.m1v
9/13/16
36
9/13/16
37
Video
VIDEO\POLARIZATION\POL_cholesterol
02.mpg
VIDEO\POLARIZATION\POL_glutamicaci
d01.mpg
9/13/16
38
9/13/16
39
9/13/16
40
9/13/16
Akademi
Analis Kesehatan Nasional Surakarta
41
9/13/16
42
9/13/16
43
9/13/16
44
9/13/16

Surakarta
45
9/13/16

Surakarta
46
9/13/16
47
9/13/16
48
9/13/16
49
9/13/16
50
9/13/16
51
9/13/16
52
9/13/16
53
Bagian-bagian Mikroskop
1. Eyepiece / oculars (lensa okuler) Untuk
memperbesar bayangan yang dibentuk
lensa objektif
2. Revolving nosepiece (pemutar lensa
objektif) Untuk memutar lensa objektif
sehingga mengubah perbesaran.
3. Observation tube (tabung pengamatan/
tabung okuler), tabung penghubung
antara lensa okuler dan lensa objektif
4. Stage (meja objek). Preparat / sediaan
spesimen diletakkan di sini
5.
Condenser (condenser) Untuk mengumpulkan cahaya

supaya tertuju ke lensa objektif
6.
Objective lense (lensa objektif) Memperbesar spesimen
7.
Brightness adjustment knob (pengatur kekuatan lampu)

Untuk memperbesar dan memperkecil cahaya lampu
8.
Main switch (tombol on-off)
9.
Diopter adjustmet ring (cincin pengatur diopter) Untuk

menyamakan focus antara mata kanan dan kiri
10. Interpupillar distance adjustment knob (pengatur jarak

interpupillar)
11. Specimen holder (penjepit spesimen)
12. Illuminator (sumber cahaya)
13. Vertical feed knob (sekrup pengatur
vertikal)
Untuk
menaikkan
atau
menurunkan object glass
14. Horizontal feed knob (sekrup pengatur
horizontal) Untuk menggeser ke kanan /
kiri objek glas
15. Coarse focus knob (sekrup fokus kasar)
untuk Menaik turunkan meja benda (untuk
mencari fokus) secara kasar dan cepat
17.Fine focus knob (sekrup fokus
halus) untuk Menaik turunkan
meja benda secara halus dan
lambat
18. Observation tube securing
knob
(sekrup
pengencang
tabung okuler)
19.Condenser adjustment knob
(sekrup pengatur kondenser)
Untuk
menaik-turunkan
kondenser
Prosedur Operasi
1. Menyalakan lampu tekan tombol on (8) atur
kekuatan lampu dengan memutar bagian (7)
2. Menempatkan spesimen pada meja benda
a. Letakan objek glas diatas meja benda (4)
kemudian jepit dengan (11). Jika meja benda
belum turun, diturunkan dengan sekrup
kasar (15)
b. Cari bagian dari objek glas yang terdapat
preparat ulas (dicari dan diperkirakan
memiliki gambar yang jelas) dengan
memutar sekrup vertikal dan horizontal (13)
Prosedur Operasi
3. Memfokuskan
a. Putar Revolving nosepiece (2) pada
perbesaran objektif 4x lalu putar sekrup
kasar (15) sehingga meja benda bergerak ke
atas untuk mencari fokus b.Setelah fokus
perbesaran 4 x 10 didapatkan, maka putar
(2) pada perbesaran selanjutnya yaitu
perbesaran objektif 10x. kemudian putar
sekrup halus (16) untuk mendapatkan
fokusnya
Prosedur Operasi
Catatan:
Setelah
mendapatkkan
fokus pada perbesaran tetentu, misal
40 x, dan ingin memutar objektif ke
perbesaran 100 x, maka meja benda
tidak perlu diturunkan dan tidak
perlu khawatir bahwa lensa objektif
akan menggesek cover glass karena
terdapat sisa jarak A yang lebih kecil
antara cover glass dengan lensa
objektif (lihat tabel diatas).
Prosedur Operasi
Berikut adalah tabel yang menunjukan
jarak antara spesimen dengan lensa
objektif jika fokus telah didapatkan
Perbesaran
objektif
4x
10x
40x
60x
Jarak A
(mm)
29
6,3
0,53
0,29
D. Pemilihan Mikroskop
Dalam
memilih
jenis
mikroskop,harus
memperhatikan beberapa hal berikut :
1.
2.
3.
4.
9/13/16
Jenis Spesimen yang akan diamati

Metode Observvasi
Perbesaran yang dibutuhkan
Bugdet yang tersedia
63
9/13/16
64
Apakah Imersi ?
Imersi atau perendaman merupakan teknik
yang digunakan untuk meningkatkan resolusi
( Resolution) dan Kecerahan ( Brigthness ) dari
bayangan yang dibentuk oleh mikroskop.
Dalam meningkatan resolusi dan kecerahan
bayangan pada mikroskop dapat dicapai dengan
merendam lensa obyektif dan sampel dalam
cairan transparan yang memiliki indeks bias
tinggi,sehingga meiningkatkan angka/indeks
celah ( Numerical Aperture ) dari lensa obyektif
9/13/16
65
9/13/16
66
Jenis Media Imersi
9/13/16
Media
Indeks Bias
Udara
1.0003
Air
1.333
Minyak Silikon
1.404
Gliserin
1.4695
Minyak Parafin
1.480
Minyak Kayu Cedar
1.515
Minyak Kayu Sintetis
1.515
Anisol
1.5178
Bromonapthalen
1.6585
Methylene Iodide
1.740
67
Minyak Imersi / Oil Immersion

MinyakImersimerupakancairanminyak
yang
transparandanmemilikikarakteristikoptikdanvisk
ositaskhusus
yang
diperlukandalampengamatanmikroskopis.
CairanInimemilikinilaiindeks bias / n = ( suhu 23
0
C)
9/13/16
68
Jenis Minyak Imersi

Banyak tipe minyak imersi yang
beredar
dipasaran,diantaranya
adalah :
1) Type A
Digunakan untuk
pemakaian normal,viscositas rendah
( 150 cSt )
2) Type B
Digunakan untuk
pemakaian normal,viscositas tinggi (
1.250 cSt )
9/13/16
69
Jenis Minyak Imersi

3) Type 300
Minyak imersi tipe ini digunakan

dalam proses hematologi otomatis yang
mensyaratkan ada sifat fisik dan sifat
optik yang akurat,maka minyak imersi ini
ideal untuk mendapatkan pencitraan
bayangan yang sangat baik dan
pengolahan mekanis.
Minyak Imersi ini dirancang dan
diproduksi untuk memenuhi persyaratan
ketat dari peralatan yang digunakan,yang
meliputi viskositas khusus dan kontrol
yang konsisten.
Viscositas ; Medium ( 300 cSt )
9/13/16
70
Jenis Minyak Imersi

4) Type 37

pada lingkungan suhu > 23 0C 37 0C.
Mnyak Imersi ini dibuat khusus untuk
suku lingkungan normal manusia.
Minyak ini dapat dicampur dengan
tipe B ( 23 0C ).
Viscositas ; Tinggi ( 125000 cSt @ 37
0
C)
Indeks Bias : 1.515 ( 37 0 C )
9/13/16
71
Jenis Minyak Imersi

5) Type NVH
Minyakimersitipeinidigunakanpadami
kroskopjenisinverted,horizontaldanmi
ring,danuntukjenislensaobyektifLong
Working
Distance
ataulensaobyetiffokusJauh,sertajaraksa
mpeldenganlensaobyektifatausampelde
ngankondesoradalahrelatifjauh. (
Viscositas ; Extra Tinggi ( 21.000 cSt
9/13/16
72
Jenis Minyak Imersi

4) Type 37

pada lingkungan suhu > 23 0C 37 0C.
Mnyak Imersi ini dibuat khusus untuk
suku lingkungan normal manusia.
Minyak ini dapat dicampur dengan
tipe B ( 23 0C ).
Viscositas ; Tinggi ( 125000 cSt @ 37
0
C)
Indeks Bias : 1.515 ( 37 0 C )
9/13/16
73
9/13/16
74
Mikrometer Mikroskop
Cahaya
1) Mikrometer Obyektif /
Stage Micrometer
2) Mikrometer Okuler /
Eyepiece Micrometer
9/13/16
75
1) Mikrometer Okuler /
Eyepiece Mikrometer
Merupakan Mikrometer yang dipasang

di lensa okuler,dan digunakan sebagai
alat ukur obyek yang diamati.
Pada mikrometer jenis ini tidak
memiliki satuan,hanya berupa garis
garis dan angka.
9/13/16
76
2) Mikrometer Obyektif /
Stage Micrometer
Merupakan Mikrometer yang dipasang
di meja preparat ,dan digunakan
sebagai alat ukur pembanding atau
referensi terhadap mikrometer okuler.
Mikrometer ini juga serin disebut
Mikrometer Kalibrasi.
Perbesaran
9/13/16
77
Perbedaan Mikrometer Obyektif

dengan mikrometer Okuler
Mikrometer Okuler
Mikrometer Obyektif
1. Tidak memiliki satuan besaran

jarak ( mm , Mikron)
1. Memiliki satuan ukur absolut

( mm , Mikron)
2. Hanya Memiliki garis sumbu

ukur atau skala, baik dalam
bentuk garis lurus,persegi empat
atau lingkaran,
2. Memiliki garis sumbu ukur atau

skala, baik dalam bentuk garis
lurus,persegi empat atau
lingkaran,yang dibagi dalam
satuan yang lebih kecil. ( mikron
meter )
3. Angka yang tertera hanya

angka-angka tanpa satuan
3. Angka yang tertera memiliki

satuan
9/13/16
78
9/13/16
79
9/13/16
80
9/13/16
81
9/13/16
82
Kalibrasi
Menurut ISO 17025 : 2005 Kalibrasi
merupakan kegiatan untuk menentukan
kebenaran konvensional nilai penunjukkan
ALAT UKUR dan BAHAN UKUR dengan
cara membandingkan terhadap STANDAR
UKUR yang mampu telusur ke STANDAR
NASIONAL
dan
atau
STANDAR
INTERNASIONAL untuk satuan ukuran
atau bahan acuan tersertifikasi.
9/13/16
83
Kapan melakukan
Kalibrasi ?
a) Ganti Lensa Obyektif / Lensa Okuler
b) Adanya perpindahan Mikroskop ( adanya
getaran )
c) Setelah 5 tahun dikalibrasi.
9/13/16
84
Perhitungan Kalibrasi Linier

Kemungkinan yang terjadi pada
kalibrasi Mikrometer Obyektif :
1) Total panjang skala ukur Mikrometer
Okuler lebih pendek dari total
panjang skala Mikrometer Obyektif.
Okuler sama dengan panjang skala
mikrometer obyektif.
Okuler lebih panjang dari total
9/13/16
85
9/13/16
86
9/13/16
87
G. Perawatan dasar
Mikroskop
9/13/16
88
Masalah Utama pada

Mikroskop
9/13/16
89
a) Jamur
Jamur
bukan
saja
merusak lensa, tetapi juga
dapat
menyebabkan
bayangan
obyek
yang
dihasilkan
tidak
baik
bahkan sulit di identifikasi.
9/13/16
90
Bagaimana Jamur dapat merusak lensa ?
Uap air diudara yang bercampur

dengan
akar
jamur
akan
mengakibatkan timbulnya asam.
Jamur pertama merusak bagian
pelapis
lensa
yang
berfungsi
memantulkan
cahaya
dan
kemudianbaru merusak bagian
9/13/16
91
9/13/16
92
Pencegahan timbulnya Jamur

1) Menjaga mikroskop tetap bersih
dan kering
2) Tempat menyimpan mikroskop
jauh dari sumber air
3) Tempatkan mikroskop pada tempat
yang berventilasi baik.
4) Simpan mikroskop ditempat yang
sejuk dan kering.
5) Tempat menyimpan mikroskop
diberikan lampu dan silica gel.
9/13/16
93
b) Cairan Imersi
Cairan imersi yang digunakan terutama pada
imersi jenis minyak dapat merusak pelapis dan
bagian lensa bila tidak dibersihkan.
Umumnya pada minyak imersi dapat membeku
dan menutupi permukaan lensa apabila tidak
segera dibersihkan.
9/13/16
94
c) Debu
Minyak pelumas yang digunakan dapat
menarik debu sekitar dan membuat
pergerakan
sistem
mekanik
pada
mikroskop menjadi tidak lancar.
Debu pada lensa dapat menimbulkan
bayangan yang tidak diperlukan.
Debu dapat pula membiaskan cahaya dan
membuat gambar kelihatan buram.
9/13/16
95
Pembersihan Lensa
Obyektif
Bersihkan Ujung lensa Obyektif
1.
2.
9/13/16
Setelah minyak imersi digunakan ,bersihkan dengan segera lensa

obyektif.
Jangan sampai minyak imersi membeku dan berdampak pada
fokus bayangan.
96
9/13/16
97
9/13/16
98
Lampiran
LAMPIRAN_Panduan Perawatan
Mikroskop Olympus CX21.pdf
9/13/16
99
TERIMA
Terima
KASIH
Kasih

Dasar-Dasar Mikroskopi 3

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Dasar-Dasar Mikroskopi 3

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

9/13/16

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Teori Dasar Mikroskop

A. Teori Dasar Mikroskop

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Prinsip Dasar Mikroskop

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Prinsip Dasar Sistem Optik

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

B. Jenis Mikroskop dan

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Jenis Mikroskop Berdasarkan Sistem

SEM ( Scaning Elektron Mikroskop )/

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

B .1 SEM ( Scaning Elektron Mikroskop )/

Mikroskop jenis ini memiliki ciri khas :

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

B.2 TEM ( Transmition Elektron

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

B.3 Compound Light

Mikroskop jenis ini memiliki ciri khas :

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional

Akademi Analis Kesehatan Nasional

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Condenser (condenser) Untuk mengumpulkan cahaya

Objective lense (lensa objektif) Memperbesar spesimen

Brightness adjustment knob (pengatur kekuatan lampu)

Main switch (tombol on-off)

Diopter adjustmet ring (cincin pengatur diopter) Untuk

10. Interpupillar distance adjustment knob (pengatur jarak

Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta

Jenis Spesimen yang akan diamati