SUDAN BLACK B

• Sudan Black B (SBB) adalah pewarna larut lemak yang memiliki

afinitas sangat tinggi terhadap lemak dan lipid netral.
• Pewarnaan SBB berguna untuk membedakan leukemia myeloid
akut (AML) dari leukemia limfoid akut (ALL).
• Mirip dengan pola pewarnaan Myeloperoxidase (MPO) leukosit
dan monosit. Ini memiliki beberapa keunggulan dibandingkan
MPO
• SBB dapat digunakan untuk pewarnaan apusan yang berumur
lebih dari 2 minggu.
• SBB mewarnai butiran azurofilik dan spesifik pada
neutrofil, sedangkan MPO hanya menodai butiran azurofilik.
• Hanya ada sedikit memudar dari cat SBB dari waktu ke
waktu.
PRINSIP PEWARNAAN SUDAN BLACK B

• SBB adalah pewarna yang larut dalam lemak, karena itu akan mewarnai
lipid seperti sterol, lemak netral, dan fosfolipid berupa butiran
azurofilik dan sekunder dari butiran mielositik dan lisosom sel monositik.
• Selama pewarnaan, pewarna meninggalkan pelarut karena kelarutannya
yang tinggi dalam lipid daripada pelarut.
• Pada pemeriksaan mikroskopis, berbagai tingkat pigmen berwarna hitam
terlihat pada reaksi positif.
 PENGECATAN SUDAN BLACK B

-Larutan A :

Phenol : 12 gr Ethanol 70% : 25 ml

-Larutan B :
Na2HPO4 . 2H2O : 0,225 gr Aquadest : 75 ml
-Larutan C :

Sudan Black B : 0,45 gr Ethanol 70 % : 150 ml

Larutan Kerja :
• Campurkan larutan A + B (1 : 1)
• Tambahkan larutan C, 3 bagian
• Campuran ini harus netral atau sedikit alkalis
CARA KERJA :

• Preparat yang sudah kering difiksasi dengan uap formalin dalam

staning jar selama 5 – 10 menit.
• Cuci dengan aquadest, keringkan.
• Rendam preparat dengan larutan kerja dalam petri tertutup selama
30 menit.
• Buang sisa cat, rendam dengan alcohol 70% selama 2 menit sambil
digoyang goyang.
• Cuci dengan air mengalir, lakukan counter stain dengan safranin 1%
selama 10-30 detik
• Cuci dengan air mengalir, keringkan (jangan di mounting).
 PERSYARATAN

• Sampel: Darah utuh antikoagulan segar atau apusan sumsum tulang dapat digunakan.
• Fiksatif: 40% uap larutan formaldehida
• SBB 0,3 g dalam 100 ml etanol absolut
• Buffer fenol: Larutkan 16 g kristal fenol dalam 30 ml etanol absolut. Tambahkan ke dalam
100 ml air suling yang telah dilarutkan 0,3 g Na2HPO4.12H2O
• Solusi pewarnaan SBB yang berfungsi: Tambahkan 40 ml buffer ke 60 ml larutan SBB
(Komposisi pewarna yang berfungsi mungkin sedikit berbeda pada produk yang berbeda.)
• Counterstain: May–Grunwald–Giemsa atau pewarnaan Leishman.
 PROSEDUR PEWARNAAN SUDAN BLACK B

• Fixasi apusan kering dalam uap formalin, formaldehida atau fiksatif formalin-etanol selama 10 menit.
• Cuci dengan lembut dalam air selama 5-10 menit.
• Tempatkan slide dalam larutan pewarna yang berfungsi selama 1 jam dalam stoples Coplin dengan penutup.
• Keluarkan dan isi slide dengan alkohol 70% selama 30 detik. Tip alkohol 70% off dan banjir lagi. Ulangi ini
tiga kali.
• Bilas dengan air keran yang mengalir dan keringkan dengan udara.
• Counterstain tanpa fiksasi lebih lanjut dengan pewarnaan Leishman atau pewarnaan May-Grunwald-Giemsa.
• Keringkan udara dan periksa secara mikroskopis.
HASIL DAN INTERPRETASI

• Produksi pigmen hitam dan granular menunjukkan reaksi positif.

• Lipid hadir dalam butiran azurofilik dan sekunder sel myelocytic. Oleh karena itu, ini adalah SBB
positif. Pewarnaan menjadi lebih intens saat sel matang dari myeloblast ke bentuk matang. Basofil
umumnya tidak positif tetapi mungkin menunjukkan pewarnaan metakromatik merah/ungu terang
pada granula.
• Lipid hadir dalam butiran lisosom sel monositik. Sel monositik menunjukkan reaksi yang
bervariasi, dari negatif hingga positif lemah.
• Sel limfoid adalah SBB negatif. Namun, pada ALL, kurang dari 3% sel blast menunjukkan reaksi
positif.
 HASIL

Positif : jika banyak sel yang terdapat granula yang ditandai dengan adanya bercak hitam
TERIMAKASIH