Bioprinting 3D jaringan dan organ

Pembuatan aditif, atau dikenal sebagai pencetakan tiga dimensi (3D), mendorong inovasi
besar di banyak bidang, seperti teknik, manufaktur, seni, pendidikan, dan kedokteran.
Kemajuan terbaru telah memungkinkan pencetakan 3D bahan biokompatibel, sel dan
komponen pendukung ke dalam jaringan hidup fungsional 3D yang kompleks. Bioprinting
3D sedang diterapkan pada pengobatan regeneratif untuk mengatasi kebutuhan akan jaringan
dan organ yang sesuai untuk transplantasi. Dibandingkan dengan pencetakan non-biologis,
bioprinting 3D melibatkan kerumitan tambahan, seperti pemilihan bahan, jenis sel, faktor
pertumbuhan dan diferensiasi, dan tantangan teknis yang berkaitan dengan kepekaan sel
hidup dan konstruksi jaringan. Mengatasi kompleksitas ini membutuhkan integrasi teknologi
dari bidang teknik, ilmu biomaterial, biologi sel, fisika, dan kedokteran. Bioprinting 3D telah
digunakan untuk pembentukan dan transplantasi beberapa jaringan, termasuk kulit berlapis,
tulang, cangkok vaskular, splints trakea, jaringan jantung dan struktur kartilago. Aplikasi lain
termasuk mengembangkan model jaringan 3D bioprinted throughput tinggi untuk penelitian,
penemuan obat dan toksikologi.

Penemuan pencetakan woodblock, dan perkembangan selanjutnya dari mesin cetak skala
industri di abad ke-15, memfasilitasi reproduksi teks dan gambar yang cepat dan penyebaran
informasi. Percetakan memiliki efek revolusioner pada masyarakat, yang mempengaruhi
pendidikan, politik, agama, dan bahasa di seluruh dunia. Selama beberapa dekade terakhir,
teknologi pencetakan telah maju dari pencetakan dua dimensi (2D) ke proses tambahan di
mana lapisan materi yang berturut-turut didistribusikan untuk membentuk bentuk 3D1,2.
Produksi struktur 3D dengan geometri kompleks dengan pencetakan sedang diterapkan untuk
memungkinkan pembuatan prototipe dan manufaktur yang cepat di industri dan untuk
produksi produk konsumen yang dipersonalisasi di rumah, seperti komponen sepeda,
perhiasan dan komponen listrik3. Selain aplikasi di sektor manufaktur dan konsumen,
pencetakan 3D mengubah sains dan pendidikan. Misalnya, arkeolog dan antropolog
menghasilkan replika artifak langka atau fosil yang dapat dipegang, dibagikan, dan
didistribusikan4. Sama seperti Watson dan Crick memodelkan struktur DNA menggunakan
model bola-dan-tongkat, pencetakan 3D sekarang digunakan untuk memodelkan molekul
kompleks dan interaksi protein, dan untuk menyesuaikan alat laboratorium yang
disesuaikan5-7.

Pencetakan 3D memberdayakan siswa untuk merancang, memvisualisasikan, memegang dan

menguji ide-ide mereka di ruang nyata.

Pencetakan 3D pertama kali dijelaskan pada tahun 1986 oleh Charles W. Hull. Dalam
metodenya, yang dinamai 'sterolithography', lapisan tipis dari material yang dapat
disembuhkan dengan sinar ultraviolet secara berurutan dicetak dalam lapisan untuk
membentuk struktur 3D yang solid9. Proses ini kemudian diterapkan untuk menciptakan
cetakan resin korban untuk pembentukan scaffolds 3D dari bahan biologis. Pengembangan
sistem berbasis air bebas pelarut memungkinkan pencetakan langsung bahan biologis ke
dalam scaffolds 3D yang dapat digunakan untuk transplantasi dengan atau tanpa sel bibit.
Langkah selanjutnya adalah 3D bioprinting sebagai bentuk rekayasa jaringan, dimungkinkan
oleh kemajuan terbaru dalam pencetakan 3D

teknologi, biologi sel, dan ilmu material. Pengembangan terkait adalah penerapan pencetakan
3D untuk menghasilkan perangkat medis seperti stent dan splints untuk digunakan di klinik.

Dalam 3D bioprinting, lapisan-oleh-lapisan posisi yang tepat dari bahan biologis, biokimia
dan sel-sel hidup, dengan kontrol spasial penempatan komponen fungsional, digunakan untuk
membuat struktur 3D. Ada beberapa pendekatan untuk bioprinting 3D, termasuk biomimikri,
self-assembly otonom dan blok bangunan mini-tissue. Para peneliti sedang mengembangkan
pendekatan ini untuk membuat konstruksi manusia fungsional fungsional 3D dengan sifat
biologis dan mekanik yang cocok untuk pemulihan klinis fungsi jaringan dan organ. Salah
satu tantangan penting adalah untuk menyesuaikan teknologi yang dirancang untuk mencetak
plastik cair dan logam untuk pencetakan bahan biologis hidup yang sensitif. Namun,
tantangan utama adalah mereproduksi mikro-arsitektur yang rumit

komponen matriks ekstraseluler (ECM) dan berbagai jenis sel dalam resolusi yang cukup
untuk merekapitulasi fungsi biologis.

Di sini kami meninjau penerapan 3D bioprinting ke jaringan dan rekayasa organ. Kami
pertama mempertimbangkan strategi utama untuk mencetak konstruksi jaringan. Selanjutnya,
kami menggambarkan berbagai jenis bioprinter dan pengaruhnya pada struktur jaringan
cetak. Akhirnya, kami membahas proses bertahap pencetakan jaringan, keterbatasan
teknologi saat ini dan tantangan untuk penelitian masa depan.
Pendekatan bioprinting 3D

Bioprinting 3D didasarkan pada tiga pendekatan sentral: biomimikri, self-assembly otonom

dan blok bangunan mini-tissue. Kami membahas ini secara lebih rinci di bawah ini.

Biomimikri.
Rekayasa yang diilhami secara biologis telah diterapkan pada banyak masalah teknologi,
termasuk penerbangan12, penelitian material13, metode-budaya sel14 dan nanoteknologi14.
Penerapannya pada 3D bioprinting melibatkan pembuatan reproduksi identik
komponen seluler dan ekstraseluler dari jaringan atau organ15. Hal ini dapat dicapai dengan
mereproduksi komponen fungsional seluler spesifik jaringan, misalnya, meniru pola
percabangan pohon vaskular atau pembuatan jenis dan gradien biologis yang akurat secara
fisiologis. Agar pendekatan ini berhasil, replikasi jaringan biologis pada skala mikro
diperlukan. Dengan demikian, pemahaman tentang lingkungan mikro, termasuk pengaturan
spesifik dari jenis sel fungsional dan pendukung, gradien faktor larut atau tidak larut,
komposisi ECM serta sifat kekuatan biologis di lingkungan mikro diperlukan. Pengembangan
basis pengetahuan ini akan menjadi penting untuk keberhasilan pendekatan ini dan dapat
ditarik dari penelitian dasar di bidang teknik, pencitraan, biomaterial, biologi sel, biofisika
dan kedokteran.

Self-assembly otonom.

Pendekatan lain untuk mereplikasi jaringan biologis adalah dengan menggunakan

perkembangan organ embrio sebagai panduan. Komponen seluler awal dari jaringan yang
berkembang menghasilkan komponen ECM mereka sendiri, pensinyalan sel yang tepat dan
organisasi dan pola otonom untuk menghasilkan mikro-arsitektur dan fungsi biologis yang
diinginkan16,17. Versi ‘perancah bebas’ dari pendekatan ini menggunakan perakitan sendiri

spherid seluler yang menjalani fusi dan organisasi seluler untuk meniru jaringan yang sedang
berkembang. Self-assembly otonom bergantung pada sel sebagai penggerak utama
histogenesis, mengarahkan komposisi, lokalisasi, sifat fungsional dan struktural
jaringan18,19. Hal ini memerlukan pengetahuan yang mendalam tentang mekanisme
perkembangan genesis dan organogenesis jaringan embrio serta kemampuan untuk
memanipulasi lingkungan untuk mendorong mekanisme embrio dalam jaringan bioprinted.

Jaringan mini.

Konsep mini-jaringan relevan untuk kedua strategi di atas untuk bioprinting 3D. Organ dan
jaringan terdiri dari blok bangunan fungsional yang lebih kecil, 20,21 atau jaringan mini. Ini
dapat didefinisikan sebagai komponen struktural dan fungsional terkecil dari suatu jaringan,
seperti nefron ginjal. Mini-jaringan dapat dibuat dan dirangkai menjadi konstruk yang lebih
besar dengan desain rasional, perakitan mandiri atau kombinasi keduanya. Ada dua strategi
utama: pertama, cell-assembling cell spheres (mirip dengan jaringan mini) dirangkai menjadi
jaringan makro menggunakan desain dan organisasi yang terinspirasi secara biologi20,21;
reproduksi kedua, akurat, resolusi tinggi dari unit jaringan dirancang dan kemudian diizinkan
untuk merakit diri menjadi jaringan makro fungsional. Contoh pendekatan ini termasuk
perakitan blok bangunan vaskular untuk membentuk jaringan vaskular bercabang22,23 dan
penggunaan 3D bioprinting untuk secara akurat mereproduksi unit jaringan fungsional untuk
menciptakan 'organ-on-a-chip', yang dipelihara dan dihubungkan oleh jaringan mikrofluida
untuk digunakan dalam penyaringan obat dan vaksin atau seperti dalam model penyakit in
vitro24-26.

Kombinasi dari strategi di atas kemungkinan diperlukan untuk mencetak struktur biologis 3D
yang kompleks dengan berbagai komponen dan properti fungsional, struktural dan mekanik.
Langkah-langkah utama dalam proses bioprinting adalah pencitraan dan desain, pilihan
bahan dan sel, dan pencetakan struktur jaringan (Gbr. 1).

Konstruksi cetak kemudian ditransplantasikan, dalam beberapa kasus setelah periode

pematangan in vitro, atau dicadangkan untuk analisis in vitro.
Pencitraan dan desain digital
Persyaratan penting untuk mereproduksi arsitektur jaringan dan organ fungsional kompleks
dan heterogen adalah pemahaman komprehensif tentang komposisi dan pengaturan
komponen mereka. Teknologi pencitraan medis adalah alat yang sangat diperlukan yang
digunakan oleh insinyur jaringan untuk memberikan informasi tentang struktur dan fungsi 3D
di tingkat seluler, jaringan, organ dan organisme. Ini

teknologi termasuk sebagian besar modalitas pencitraan noninvasif, yang paling umum
adalah computed tomography (CT) dan magnetic resonance imaging (MRI). Alat bantu
komputer dan alat bantu komputer (CAD-CAM) dan pemodelan matematika juga digunakan
untuk mengumpulkan dan mendigitalkan informasi tomografi dan arsitektur kompleks untuk
jaringan.

Pencitraan CT, digunakan untuk diagnostik dan prosedur intervensi, didasarkan pada
penyerapan variabel sinar-X oleh jaringan yang berbeda. Sumber sinar-X berputar di sekitar
objek, dan ketika sinar X-ray menembus tubuh, sensor mengukur intensitas dan sudut
pancaran yang ditransmisikan, dan merekam data sebagai kompilasi piksel yang mewakili
volume kecil (voxel) jaringan27. Modalitas pencitraan ini menghasilkan irisan aksial
arsitektur jaringan yang sangat berdekatan, setelah perenderan permukaan dan pengeditan
stereolithografi, sepenuhnya menggambarkan volume jaringan.

Pendekatan kedua, MRI, juga dapat memberikan resolusi spasial yang tinggi pada jaringan
lunak, dengan keuntungan dari peningkatan resolusi kontras, yang berguna untuk pencitraan
jaringan lunak dalam jarak dekat satu sama lain, tanpa paparan radiasi pengion. MRI
menggunakan resonansi magnetik nuklir: medan magnet yang kuat menyebabkan sebagian
kecil inti dalam jaringan yang dicitrakan untuk menyesuaikan diri dengan medan magnet28.
Perubahan status energi inti menghasilkan sinyal frekuensi radio, yang dapat diukur dengan
koil penerima. Kontras dari struktur biologis dapat sangat meningkat dengan penggunaan
agen kontras seperti barium29 atau iodine30 untuk CT scan dan oksida besi31, gadolinium32
atau metalloproteins33 untuk scan MRI. Agen-agen ini melemahkan sinar-X atau
meningkatkan sinyal resonansi magnetik yang biasanya digunakan untuk menyoroti struktur,
seperti pembuluh darah, yang jika tidak akan sulit untuk digambarkan dari sekitarnya.

Setelah data pencitraan mentah diperoleh dari modalitas pencitraan ini, data harus diproses
menggunakan rekonstruksi tomografi untuk menghasilkan gambar penampang 2D.
Representasi anatomi 3D dapat diproduksi untuk analisis atau modifikasi lebih lanjut. Proses
ini telah digambarkan sebagai transformasi 'analitik anatomi' menjadi 'anatomi sintetis '34.
Salah satu metode untuk menghasilkan model 3D berbasis komputer dari arsitektur organ
atau jaringan adalah dengan menggunakan CAD-CAM dan teknik pemodelan matematika35.
Representasi anatomi 3D menghasilkan pandangan anatomi organ sementara
mempertahankan informasi gambar-voxel yang dapat digunakan untuk rendering volume,
representasi volumetrik dan representasi gambar 3D. Gambar atau model yang direkonstruksi
dapat dilihat dalam berbagai cara, termasuk sebagai tumpukan kontur, seperti model rangka
kabel, model yang diarsir atau model padat dengan pencahayaan, transparansi, dan
reflektifitas yang bervariasi.
Jika tujuannya adalah untuk menghasilkan reproduksi akurat dari organ atau jaringan yang
dicitrakan, penampang 2D atau representasi 3D dapat digunakan secara langsung untuk
aplikasi bioprinting. Sebagai alternatif, salinan langsung dari organ pasien sendiri mungkin
tidak diinginkan (karena penyakit atau cedera) peninjauan ulang mungkin tidak layak secara
ekonomi untuk produksi skala besar. Dalam situasi ini, model berbasis komputer dapat
sepenuhnya atau sebagian berkontribusi terhadap desain struktur anatomi, analisis dan
simulasi37. Selain itu, pemodelan komputer dapat membantu memprediksi sifat mekanik dan
biokimia konstruksi jaringan fabrikasi37–39. Sampai saat ini, data CT dan MRI telah paling
sering digunakan dalam pengobatan regeneratif untuk memberikan pengukuran dimensi
jaringan yang spesifik untuk membantu rancangan konstruksi bioprint.

Model jaringan atau organ yang lengkap dihubungkan dengan sistem bioprinting yang
dikontrol secara numerik untuk pembuatan prototipe dan manufaktur. Hal ini dicapai dengan
membalikkan rekonstruksi 2D ke 3D, sehingga model 3D-render dibagi menjadi irisan
horizontal 2D tipis (dengan ukuran dan orientasi yang dapat disesuaikan) yang diimpor ke
dalam sistem bioprinter. Informasi anatomi dan arsitektur yang terkandung dalam potongan
horizontal 2D menyediakan perangkat bioprinting dengan instruksi pengendapan lapis demi
lapis. Variasi dalam teknologi bioprinting yang tersedia juga memengaruhi desain jaringan
dan organ. Beberapa sistem bioprinting menyimpan manik material yang terus menerus untuk
membentuk struktur 3D. Sistem lain menyimpan banyak material dalam ruang yang disela
atau didefinisikan pendek. Desain jaringan harus mempertimbangkan kemampuan dan sifat
sistem bioprinting, yang akan kita bahas selanjutnya.

Strategi bioprinting jaringan

Teknologi utama yang digunakan untuk deposisi dan pemodelan

bahan biologis adalah inkjet40–43, microextrusion44–46 dan pencetakan dengan bantuan

laser47–49 (Gbr. 2). Fitur yang berbeda dari teknologi ini (Tabel 1) harus dipertimbangkan
mengingat faktor terpenting dalam 3D bioprinting, yaitu resolusi permukaan, viabilitas sel
dan bahan biologis yang digunakan untuk pencetakan.
Inkjet bioprinting.

Printer inkjet (juga dikenal sebagai printer drop-on-demand) adalah jenis printer yang paling
umum digunakan untuk aplikasi nonbiologis dan biologis. Volume cairan yang terkendali
dikirim ke lokasi yang telah ditentukan. Printer inkjet pertama yang digunakan untuk aplikasi
bioprinting adalah versi modifikasi dari printer 2D berbasis tinta yang tersedia secara
komersial50,51. Tinta dalam kartrid diganti dengan bahan biologis, dan kertas diganti dengan
tahap elevator yang dikontrol secara elektronik untuk memberikan kontrol terhadap sumbu
z40,50 (dimensi ketiga selain sumbu x dan y). Sekarang, bioprinter berbasis inkjet dirancang
khusus untuk menangani dan mencetak bahan biologis pada peningkatan resolusi, presisi dan
kecepatan. Printer inkjet menggunakan thermal43 atau akustik50,52,53 gaya untuk
mengeluarkan tetesan cairan ke substrat, yang dapat mendukung atau membentuk bagian dari
konstruksi akhir.
Thermal inkjet printer berfungsi dengan memanaskan kepala cetak secara elektrik untuk
menghasilkan pulsa tekanan yang memaksa tetesan dari

nozzle. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa pemanasan lokal ini, yang dapat
berkisar dari 200 ° C hingga 300 ° C, tidak memiliki dampak yang berarti baik pada stabilitas
molekul biologis, seperti DNA52,53, atau pada viabilitas atau fungsi pasca-pencetakan. sel
mamalia42,54. Telah ditunjukkan bahwa durasi pemanasan singkat (~ 2 μs) menghasilkan
kenaikan suhu keseluruhan hanya 4–10 ° C di head55 printer. Kelebihan printer thermal
inkjet termasuk kecepatan cetak tinggi, biaya rendah dan ketersediaan luas. Namun, risiko
mengekspos sel dan bahan untuk stres termal dan mekanik, directionality droplet rendah,
ukuran tetesan non-seragam, penyumbatan sering nozzle dan enkapsulasi sel tidak dapat
diandalkan menimbulkan cukup
kerugian untuk penggunaan printer ini dalam 3D bioprinting.

Banyak printer inkjet mengandung kristal piezoelektrik yang menciptakan gelombang akustik
di dalam kepala cetak untuk memecah cairan menjadi tetesan secara berkala. Menerapkan
tegangan ke bahan piezoelektrik menginduksi perubahan bentuk yang cepat, yang pada
gilirannya menghasilkan tekanan yang diperlukan untuk mengeluarkan tetesan dari nozzle56.
Printer inkjet lainnya menggunakan kekuatan radiasi akustik yang terkait dengan bidang
ultrasound untuk mengeluarkan tetesan cairan dari antarmuka udara-cair57,58. Parameter
ultrasound, seperti pulsa, durasi dan amplitudo, dapat disesuaikan untuk mengontrol ukuran
tetesan dan laju pengeluaran. Keuntungan dari printer inkjet akustik termasuk kemampuan
untuk menghasilkan dan mengontrol ukuran tetesan seragam dan directionality ejeksi serta
untuk menghindari paparan sel terhadap tekanan panas dan tekanan59-61. Selain itu,
tegangan yang ditimbulkan pada sel-sel di dinding ujung nozzle dapat dihindari dengan
menggunakan sistem ejeksi tanpa pelana kolam-terbuka58. Ini mengurangi potensi hilangnya
viabilitas dan fungsi sel, dan menghindari masalah penyumbatan nozzle. Ejector akustik
dapat dikombinasikan sebagai beberapa ejector dalam format susunan yang dapat
disesuaikan, memfasilitasi pencetakan simultan dari beberapa sel dan jenis material62. Meski
begitu, tetap ada beberapa kekhawatiran mengenai frekuensi 15-25 kHz yang digunakan oleh
bioprinter inkjet piezoelektrik dan potensinya untuk menginduksi kerusakan membran sel dan
lisis43. Inkjet bioprinters juga memiliki keterbatasan pada viskositas material (idealnya di
bawah 10 centipoise) karena gaya berlebihan yang diperlukan untuk mengeluarkan tetesan
menggunakan solusi pada viskositas yang lebih tinggi63.

Salah satu kelemahan umum dari bioprinting inkjet adalah bahwa bahan biologis harus dalam
bentuk cair untuk memungkinkan pembentukan tetesan; sebagai akibatnya, cairan yang
dicetak harus kemudian membentuk struktur 3D yang solid dengan struktur dan
fungsionalitas struktural. Kelompok kami64 dan lain-lain65 telah menunjukkan bahwa
pembatasan ini dapat diatasi dengan menggunakan bahan yang dapat berikatan silang setelah
pengendapan dengan pencetakan menggunakan mekanisme kimia, pH atau ultraviolet.
Namun, persyaratan untuk pengaitan silang sering memperlambat proses bioprinting dan
melibatkan modifikasi kimia dari bahan ECM yang terjadi secara alami, yang mengubah sifat
kimia dan materialnya. Selain itu, beberapa mekanisme pengikatan silang memerlukan
produk atau kondisi yang beracun bagi sel, yang menghasilkan penurunan viabilitas dan
fungsionalitas66.

Keterbatasan lain yang dihadapi oleh pengguna teknologi bioprinting berbasis inkjet adalah
kesulitan dalam mencapai kerapatan sel yang relevan secara biologi. Seringkali, konsentrasi
sel yang rendah (kurang dari 10 juta sel / ml) 42 digunakan untuk memfasilitasi pembentukan
tetesan, menghindari penyumbatan nosel dan mengurangi tegangan geser60. Konsentrasi sel
yang lebih tinggi juga dapat menghambat beberapa mekanisme silang hidrogel67.

Terlepas dari kekurangan ini, bioprinter berbasis inkjet juga menawarkan keuntungan,
termasuk biaya rendah, resolusi tinggi, kecepatan tinggi dan kompatibilitas dengan banyak
bahan biologis. Keuntungan lain dari pencetakan inkjet adalah potensi untuk
memperkenalkan gradien konsentrasi

sel, bahan atau faktor pertumbuhan di seluruh struktur 3D dengan mengubah kepadatan atau
ukuran drop68,69. Karena ketersediaan printer inkjet 2D standar, para peneliti di banyak
laboratorium dapat dengan mudah mengakses, memodifikasi, dan bereksperimen dengan
teknologi bioprinting berbasis inkjet 3D. Bioprinters inkjet komersial juga relatif hemat biaya
karena komponen mereka yang sederhana dan tersedia desain dan perangkat lunak kontrol.
Penerapan luas teknologi ini oleh banyak kelompok telah mempercepat kemajuan dalam
kapasitas bioprinter inkjet untuk secara akurat menyimpan dengan resolusi tinggi dan ukuran
tetesan terkendali presisi dengan kepadatan seluler yang seragam. Ukuran tetesan dan tingkat
deposisi dapat dikontrol secara elektronik, dan dapat berkisar dari <1 pl hingga> 300 pl
dalam volume70,71 dengan laju 1–10.000 tetesan per detik58. Pola tetes tunggal, masing-
masing mengandung satu atau dua sel, dalam garis ~ 50 μm lebar, telah dicetak61. Kemajuan
di masa depan akan terus menyesuaikan teknologi ini untuk menangani dan menyimpan
bahan-bahan lain yang relevan secara biologis, dengan cara yang memfasilitasi pencetakan
keduanya dan menyediakan komponen biologis, struktural dan fungsional yang penting dari
jaringan. Kompleksitas tambahan, seperti persyaratan untuk beberapa jenis dan bahan sel,
juga harus ditangani.

Contoh penting dari pendekatan bioprinting inkjet termasuk regenerasi skin72 fungsional dan
kartilago73 in situ. Kecepatan pencetakan tinggi dari pendekatan ini memungkinkan deposisi
sel dan secara langsung

bahan langsung ke kulit atau lesi kartilago. Aplikasi ini mencapai ikatan silang cepat dari
bahan yang mengandung sel melalui reaksi kimia biokompatibel atau photoinitiator dan
silang silang.

melalui pemaparan material terhadap sinar ultraviolet. Pendekatan inkjet memfasilitasi

pengendapan baik sel primer atau jenis sel induk dengan kepadatan seragam di seluruh
volume lesi, dan mempertahankan viabilitas sel dan fungsi yang tinggi setelah pencetakan.
Studi-studi ini menunjukkan potensi bioprinting berbasis inkjet untuk meregenerasi struktur
fungsional.
Konstruksi kartilago berlapis juga telah dibuat secara in vitro menggunakan kombinasi
electrospinning dan inkjet bioprinting74. Teknik bioprinting electrospinning-inkjet hybrid
memungkinkan pembuatan konstruksi berlapis yang mendukung fungsi sel dan
mempertahankan sifat mekanik dan struktural yang sesuai. Bioprinters inkjet juga telah
digunakan untuk membuat konstruksi tulang75, matang in vitro sebelum implantasi ke tikus.
Konstruksi ini terus matang in vivo dan membentuk jaringan sangat termineralisasi dengan
kepadatan yang sama seperti jaringan tulang endogen.

Bioprinting mikroekstrusi. Printer 3D non-biologis yang paling umum dan terjangkau

menggunakan microextrusion. Bioprinters mikroekstrusi biasanya terdiri dari sistem
penanganan dan dispensing yang dikendalikan suhu dan panggung, dengan satu atau
keduanya mampu bergerak sepanjang sumbu x, y dan z, sumber cahaya fiberoptik untuk
menerangi area pengendapan dan / atau untuk aktivasi photoinitiator, kamera video untuk
perintah dan kontrol xyz, dan humidifier piezoelektrik. Beberapa sistem menggunakan
beberapa kepala cetak untuk memfasilitasi pengeluaran serial beberapa bahan tanpa
retooling20,76. Hampir 30.000 printer 3D

terjual di seluruh dunia setiap tahun, dan lembaga akademis semakin membeli dan
menerapkan teknologi microextrusion dalam penelitian jaringan dan rekayasa organ77.
Printer industri jauh lebih mahal tetapi memiliki resolusi, kecepatan, pengendalian spasial
yang lebih baik dan lebih banyak fleksibilitas dalam materi yang dapat mereka cetak.

Printer microextrusion berfungsi dengan mengekstraksi bahan yang dikendalikan secara

robotik, yang diendapkan ke substrat oleh kepala microextrusion. Mikroekstrusi
menghasilkan manik-manik material yang terus menerus daripada tetesan cair. Manik-manik
kecil dari bahan disimpan dalam dua dimensi,

seperti yang diarahkan oleh perangkat lunak CAD-CAM, panggung atau kepala
microextrusion dipindahkan sepanjang sumbu z, dan lapisan yang diendapkan berfungsi
sebagai fondasi untuk lapisan berikutnya. Berbagai material kompatibel dengan printer
microextrusion, termasuk material seperti hidrogel, biokompatibel

kopolimer dan sel sphero38. Metode yang paling umum untuk mengekstraksi bahan biologis
untuk aplikasi bioprinting 3D adalah pneumatik 65,78–80 atau mekanis (piston atau sekrup)
44,81,82 sistem pengeluaran. Sistem dispensing mekanis mungkin memberikan lebih banyak
kontrol langsung atas aliran material karena penundaan volume gas terkompresi dalam sistem
pneumatik. Sistem berbasis sekrup mungkin memberikan kontrol spasial lebih banyak dan
dianggap bermanfaat untuk pengeluaran hidrogel dengan viskositas yang lebih tinggi,
meskipun sistem pneumatik juga dapat disesuaikan untuk membuang bahan viskositas
tinggi78. Printer yang digerakkan secara pneumatik memiliki keuntungan karena memiliki
komponen mekanisme penggerak yang lebih sederhana, dengan gaya yang dibatasi hanya
oleh kemampuan tekanan udara dari
sistem. Mekanisme yang digerakkan secara mekanis memiliki lebih kecil dan lebih banyak
komponen kompleks, yang memberikan kontrol spasial yang lebih besar tetapi sering pada
kemampuan kekuatan maksimum yang berkurang.
Metode microextrusion memiliki berbagai sifat cairan yang kompatibel dengan proses,
dengan berbagai bahan biokompatibel yang dijelaskan dalam literatur. Bahan dengan
viskositas mulai dari 30 mPa / s hingga> 6 × 107 mPa / s (ref. 77) memiliki

telah terbukti kompatibel dengan bioprinters mikroekstrusi, dengan bahan viskositas tinggi
sering memberikan dukungan struktural untuk
konstruksi dicetak dan bahan viskositas rendah menyediakan
lingkungan yang sesuai untuk menjaga kelangsungan dan fungsi sel.

Untuk bioprinting mikroekstrusi, peneliti sering mengeksploitasi bahan yang dapat secara
termal terhubung silang dan / atau memiliki sifat penipisan. Beberapa bahan biokompatibel
dapat mengalir pada suhu kamar, yang memungkinkan ekstrusi mereka bersama dengan
komponen biologis lainnya, tetapi silang menjadi bahan stabil pada suhu tubuh83,84. Sebagai
alternatif, bahan yang mengalir pada suhu yang sesuai secara fisiologis (35–40 ° C), tetapi
crosslink pada suhu kamar bisa
juga berguna untuk aplikasi bioprinting76,85. Bahan dengan
sifat penipisan geser umumnya digunakan untuk mikroekstrusi

aplikasi. Perilaku material non-newtonian ini menyebabkan penurunan viskositas sebagai

respons terhadap peningkatan laju geser86. Yang tinggi

laju geser yang hadir di nosel selama biofabrikasi memungkinkan bahan ini mengalir melalui
nosel, dan pada saat pengendapan, laju geser menurun, menyebabkan peningkatan tajam
dalam viskositas. Itu

resolusi tinggi dari sistem microextrusion memungkinkan bioprinter untuk membuat struktur
yang dirancang secara akurat menggunakan perangkat lunak CAD dan memfasilitasi pola
dari berbagai tipe sel.

Keuntungan utama teknologi bioprinting mikroekstrusi adalah kemampuan untuk

mendepositkan kepadatan sel yang sangat tinggi. Mencapai kepadatan sel fisiologis di organ-
organ yang direkayasa jaringan adalah tujuan utama untuk bidang bioprinting. Beberapa
kelompok telah menggunakan solusi yang hanya terdiri dari sel untuk membuat konstruksi
jaringan 3D dengan pencetakan microextrusion87. Spheroids sel multiseluler disimpan dan
diizinkan untuk merakit sendiri

ke dalam struktur 3D yang diinginkan 20,88,89. Jaringan spheroids dianggap memiliki sifat
material yang dapat mereplikasi sifat mekanik dan fungsional dari jaringan ECM. Bergantung
pada sifat viskoelastik dari blok-blok pembangun, agregat sel yang diperhitungkan menyatu
satu sama lain, membentuk suatu konstruksi makroskopis yang kohesif. Salah satu
keuntungan dari strategi spheroid swa-perakitan adalah jaringan yang berpotensi dipercepat
organisasi dan kemampuan mengarahkan formasi kompleks
struktur. Pendekatan ini menunjukkan janji dalam memungkinkan pembangkitan pohon
vaskular bercabang intraorganik dalam jaringan tebal 3D atau konstruksi organ dengan
memodelkan spheroid jaringan vaskular yang merakit sendiri, dalam organ bioprint 3D.
Teknologi paling umum digunakan untuk perancah

kurang bioprinting jaringan spheroid adalah mikroekstrusi mekanik. Viabilitas sel setelah
bioprinting mikroekstrusi lebih rendah dibandingkan dengan bioprinting berbasis inkjet;
tingkat kelangsungan hidup sel berada di kisaran 40-86%, dengan laju menurun dengan
meningkatnya tekanan ekstrusi dan meningkatkan nosel gauge76,80. Penurunan viabilitas
sel-sel yang disimpan oleh microextrusion kemungkinan hasil dari tegangan geser yang
ditimbulkan pada sel-sel dalam cairan kental. Dispensing pressure mungkin memiliki efek
yang lebih substansial pada viabilitas sel daripada diameter nosel90. Meskipun viabilitas sel
dapat dipertahankan dengan menggunakan tekanan rendah dan ukuran nosel yang besar,
kekurangannya mungkin kehilangan resolusi dan kecepatan cetak yang besar.
Mempertahankan kelangsungan hidup yang tinggi sangat penting untuk mencapai fungsi
jaringan. Meskipun banyak penelitian melaporkan pemeliharaan viabilitas sel setelah
pencetakan, penting bagi para peneliti untuk menunjukkan bahwa sel-sel ini tidak hanya
bertahan hidup, tetapi juga melakukan fungsi esensial mereka dalam membangun jaringan.

Peningkatan resolusi cetak dan kecepatan merupakan tantangan bagi banyak pengguna
teknologi bioprinting mikroekstrusi. Printer microextrusion nonbiologis mampu 5 μm dan
200 μm resolusi pada kecepatan linier 10-50 μm / s (ref. 75). Apakah parameter ini dapat
dicocokkan menggunakan bahan yang relevan secara biologis sambil mempertahankan tinggi

viabilitas sel dan fungsi belum terlihat. Penggunaan bahan biokompatibel yang ditingkatkan,
seperti hidrogel yang berikatan silang dinamis91,92, yang secara mekanis kuat selama
pencetakan dan yang mengembangkan sifat mekanik sekunder setelah pencetakan mungkin
membantu menjaga kelangsungan dan fungsi sel setelah pencetakan. Single-phase, dual-
phase dan continuous-gradation scaffolds juga sedang dirancang menggunakan prinsip yang
sama. Selain itu, peningkatan dalam sistem nozzle, syringe atau kontrol motor dapat
mengurangi waktu cetak serta memungkinkan pengendapan beragam material secara
bersamaan82.

Bioprinters mikroekstrusi telah digunakan untuk membuat berbagai jenis jaringan, termasuk
aorta valves93, branched vascular trees94 dan in vitro pharmokinetic95 serta model tumor96.
Meskipun waktu fabrikasi dapat lambat untuk struktur kompleks resolusi tinggi, konstruksi
telah dibuat yang berkisar dari ukuran jaringan yang relevan secara klinis ke jaringan mikro
dalam ruang mikofluida.
Bioprinting bantuan laser. Bioprinting Laser-assisted (LAB) adalah
berdasarkan prinsip transfer ke depan yang diinduksi oleh laser97,98.
Awalnya dikembangkan untuk mentransfer logam, transfer maju diinduksi laser

teknologi telah berhasil diterapkan pada bahan biologis, seperti peptida, DNA, dan sel-sel99-
102. Meskipun kurang umum daripada inkjet atau microextrusion bioprinting, LAB semakin
banyak digunakan
untuk aplikasi jaringan dan organ-rekayasa. Perangkat LAB yang khas terdiri dari sinar laser
berdenyut, sistem pemfokusan, 'pita' yang memiliki dukungan transpor donor biasanya
terbuat dari kaca yang ditutupi dengan lapisan penyerap energi laser (misalnya emas atau
titanium) dan lapisan bahan biologis (misalnya, sel dan / atau hidrogel) disiapkan dalam
larutan cair, dan substrat penerima menghadap pita. Fungsi LAB menggunakan pulsa laser
terfokus pada lapisan penyerap pita untuk menghasilkan gelembung tekanan tinggi yang
mendorong bahan yang mengandung sel ke arah substrat pengumpul.
Resolusi LAB dipengaruhi oleh banyak faktor, termasuk
fluence laser (energi yang dikirim per satuan luas), permukaan
tegangan, keterbasahan substrat, celah udara antara
pita dan substrat, dan ketebalan dan viskositas dari
lapisan hayati103. Karena LAB bebas dari semburan, masalah
tersumbat dengan sel atau bahan yang mengganggu bioprinting lainnya

teknologi dihindari. LAB kompatibel dengan berbagai viskositas (1-300 mPa / s) dan dapat
mencetak sel mamalia dengan efek yang dapat diabaikan pada viabilitas sel dan fungsi 104-
106. LAB dapat menyimpan sel pada kepadatan hingga 108 sel / ml dengan resolusi
mikroskopik sel tunggal per tetes menggunakan denyut pengulangan pulsa laser 5 kHz,
dengan kecepatan hingga 1,600 mm / s (ref 49).

Meskipun keuntungan ini, resolusi tinggi LAB membutuhkan kinetika gelasi cepat untuk
mencapai kesetiaan bentuk tinggi, yang menghasilkan laju aliran keseluruhan yang relatif
rendah107. Persiapan setiap pita individu, yang sering diperlukan untuk setiap sel cetak atau
jenis hidrogel, memakan waktu dan dapat menjadi memberatkan jika beberapa jenis sel dan /
atau bahan
harus disetorkan bersama. Karena sifat lapisan sel pita,

sulit untuk secara akurat menargetkan dan memposisikan sel. Beberapa tantangan ini dapat
diatasi dengan menggunakan teknologi pemindaian pengenalan sel untuk mengaktifkan sinar
laser untuk memilih satu sel per pulsa. Prosedur ‘bidik-dan-tembak’ ini dapat memastikan
bahwa setiap droplet tercetak berisi sejumlah sel yang telah ditentukan. Namun, pencetakan
sel statistik dapat dicapai dengan menggunakan pita dengan konsentrasi sel yang sangat
tinggi, menghindari kebutuhan untuk penargetan sel khusus49. Akhirnya, residu metalik
hadir dalam konstruksi bioprint akhir, karena penguapan lapisan penyerap laser logam selama
pencetakan. Pendekatan untuk menghindari kontaminasi ini termasuk penggunaan lapisan
menyerap non-logam dan memodifikasi proses pencetakan untuk tidak memerlukan lapisan
yang dapat diserap108,109. Tingginya biaya sistem ini juga menjadi perhatian bagi jaringan
dasar -

penelitian teknik, meskipun seperti halnya dengan sebagian besar teknologi pencetakan 3D,
biaya ini menurun dengan cepat.
Penerapan LAB untuk membuat konstruksi kulit selularized menunjukkan potensi untuk
mencetak kepadatan sel yang relevan secara klinis dalam membangun jaringan berlapis,
tetapi tidak jelas apakah sistem ini dapat ditingkatkan untuk ukuran jaringan yang lebih
besar110. In vivo LAB telah digunakan untuk menyimpan nano-hydroxyapatite pada model
defek mouse calvaria 3D111.

Dalam penelitian ini, diameter 3 mm, lubang kalvarial 600 μm diisi sebagai bukti konsep.
Laser 3D printing telah digunakan untuk membuat alat-alat medis, seperti splint trakea yang
disesuaikan, nonseluler, dan terurai yang ditanamkan ke pasien muda dengan
tracheobronchomalacia11 lokal. Penelitian selanjutnya mungkin menggunakan bahan yang
dapat langsung diintegrasikan ke dalam jaringan pasien. Selain itu, menggabungkan sel-sel
pasien sendiri dapat memfasilitasi penerapan jenis konstruk ini untuk berkontribusi baik
struktural maupun fungsional
komponen jaringan.
Bahan dan perancah

Awalnya, teknologi pencetakan 3D dirancang untuk aplikasi nonbiologi, seperti pengendapan

logam, keramik dan polimer termoplastik, dan umumnya melibatkan penggunaan pelarut
organik, suhu tinggi atau zat pengikat silang yang tidak kompatibel dengan sel hidup dan
bahan biologis. Oleh karena itu, salah satu tantangan utama dalam bidang bioprinting 3D
adalah menemukan material yang tidak hanya kompatibel dengan bahan biologis dan proses
pencetakan tetapi juga dapat memberikan sifat mekanik dan fungsional yang diinginkan
untuk konstruksi jaringan.

Bahan yang saat ini digunakan dalam bidang pengobatan regeneratif untuk perbaikan dan
regenerasi sebagian besar didasarkan pada polimer turunan alami (termasuk alginat, gelatin,
kolagen, chitosan, fibrin dan asam hialuronat, sering diisolasi dari jaringan hewan atau
manusia) atau molekul sintetis (polietilena glikol). ; PEG112–115). Keuntungan dari polimer
alami untuk 3D bioprinting dan aplikasi rekayasa jaringan lainnya adalah kesamaan mereka
dengan ECM manusia, dan bioaktifitasnya. Keuntungan dari polimer sintetik adalah bahwa
mereka dapat disesuaikan dengan sifat fisik khusus untuk menyesuaikan aplikasi tertentu.
Tantangan dalam penggunaan polimer sintetis termasuk biokompatibilitas yang buruk,
produk degradasi beracun dan hilangnya sifat mekanik selama degradasi. Meski begitu,
hidrogel sintetis, yang keduanya hidrofilik dan penyerap, menarik untuk aplikasi aplikasi
regeneratif-bioprinting 3D karena kemudahan mengendalikan sifat fisiknya selama sintesis.

Karena berbagai bahan biologis untuk aplikasi medis meningkat, daftar sifat yang diinginkan
untuk bahan cetak menjadi lebih spesifik dan kompleks (Kotak 1). Material harus ada

mekanisme pengikatan silang yang sesuai untuk memfasilitasi deposisi bioprinter, harus
biokompatibel untuk transplantasi dalam jangka panjang, dan harus memiliki karakteristik
pembengkakan yang sesuai dan stabilitas jangka pendek. Stabilitas jangka pendek diperlukan
untuk mempertahankan sifat mekanis awal, memastikan bahwa struktur jaringan seperti pori-
pori, saluran dan jaringan tidak runtuh. Sebagai jaringan bioprinted berkembang in vivo,
mereka
harus setuju untuk renovasi, memfasilitasi pembentukan struktur yang didorong oleh
persyaratan seluler dan fisiologis. Yang terpenting, material harus mendukung keterikatan
seluler, proliferasi

dan function64. Kami sekarang membahas secara lebih rinci atribut kunci dari printability,
biocompatibility, kinetika degradasi dan produk samping, sifat struktural dan mekanik, dan
bahan biomimikri.

Printability. Sifat penting dari bahan yang cocok adalah bahwa ia dapat secara akurat dan
tepat disimpan dengan spasial yang diinginkan dan

kontrol temporal. Beberapa jenis teknologi bioprinting, seperti inkjet, memiliki keterbatasan
pada viskositas material, sedangkan yang lain, seperti microextrusion, mungkin memerlukan
material untuk memiliki mekanisme pengikatan silang spesifik atau sifat-sifat penipisan
geser. Memproses parameter, seperti pengukur nosel, menentukan tegangan geser di mana
sel-sel terpapar90 serta waktu yang diperlukan untuk material yang akan disimpan
untuk membentuk struktur 3D64. Sebagai contoh, pencetakan inkjet membutuhkan

bahan dengan waktu pengikatan cepat untuk memfasilitasi pelapisan struktur 3D yang rumit.
Microextrusion, bagaimanapun, dapat menggabungkan bahan yang sangat kental untuk
mempertahankan bentuk 3D setelah pengendapan, dengan persilangan akhir yang terjadi
setelah fabrikasi.
Pemilihan material juga dapat dipengaruhi oleh kemampuan

dari bahan untuk melindungi viabilitas sel selama proses pencetakan. Pencetakan inkjet
termal dan LAB keduanya melibatkan pemanasan lokal dari bahan untuk menyimpan sel.
Bahan dengan konduktivitas termal rendah116 atau kemampuan untuk melindungi sel selama
pengiriman dapat meningkatkan viabilitas dan fungsi sel setelah mencetak117. Meskipun
viabilitas sel pasca-cetak dapat bervariasi secara nyata berdasarkan spesifikasi printer, sifat
material, resolusi dan jenis sel, studi bioprinting inkjet biasanya mengutip viabilitas sel lebih
dari 85%, studi pencetakan mikroekstraf melaporkan rentang kelangsungan hidup 40–80%
dan laporan studi LAB viabilitas lebih dari 90% 42,54,80,104.

Biokompatibilitas. Dengan munculnya rekayasa jaringan, tujuan untuk biokompatibilitas

telah berubah dari membutuhkan bahan yang ditanamkan untuk hidup berdampingan dengan
jaringan endogen tanpa menimbulkan efek lokal atau sistemik yang tidak diinginkan di host,
untuk bahan yang ditanamkan yang diharapkan secara pasif memungkinkan atau secara aktif
menghasilkan efek yang diinginkan dalam itu

host118. Biokompatibilitas dalam bioprinting mencakup harapan kontribusi aktif dan

terkontrol pada komponen biologis dan fungsional dari konstruk. Ini bisa termasuk interaksi
dengan endogen
jaringan dan / atau sistem kekebalan tubuh, mendukung sel yang sesuai
kegiatan dan fasilitasi sistem sinyal molekuler atau mekanis, yang semuanya penting untuk
transplantasi dan fungsi yang berhasil.
Kinetika degradasi dan produk sampingan. Sebagai perancah material

menurunkan, sel-sel yang tertanam mengeluarkan protease dan kemudian menghasilkan

protein ECM yang menentukan jaringan baru119. Kinetika degradasi bahan harus dipahami
dan dikendalikan. Ada beberapa aspek degradasi yang harus diperhatikan. Yang pertama
adalah kemampuan untuk mengendalikan laju degradasi, idealnya sesuai dengan tingkat
degradasi dengan kemampuan sel untuk mengganti bahan dengan protein ECM mereka
sendiri. Ini menantang karena material dengan karakteristik fungsional dan mekanis yang
sesuai untuk jaringan tertentu mungkin tidak sesuai dengan kemampuan komponen seluler
untuk menggantikan material setelah degradasi. Degradasi produk sampingan juga penting
karena mereka sering mendefinisikan biokompatibilitas bahan yang bisa terdegradasi.

Produk degradasi harus tidak beracun, mudah dimetabolisme dan dengan cepat dibersihkan
dari tubuh. Produk beracun dapat mencakup protein dan molekul kecil tetapi juga pH
nonfisiologis, suhu atau faktor lain yang dapat merusak kelangsungan hidup dan fungsi sel.
Sebagai contoh, beberapa polimer berat molekul besar yang awalnya inert dapat dipecah
menjadi oligomer atau monomer yang dapat dikenali oleh sel dan menyebabkan peradangan
dan efek merugikan lainnya. Karakteristik pembengkakan dan kontraktil dari material sangat
khusus

perhatian dalam pembuatan produk rekayasa jaringan. Bahan yang terlalu bengkak berpotensi
menyebabkan penyerapan cairan dari

jaringan sekitarnya, dan kontraksi dapat mengakibatkan penutupan pori-pori atau pembuluh
yang penting untuk migrasi sel dan pengiriman nutrisi. Selain itu, penting untuk memahami
tanggapan ini ketika menerapkan beberapa bahan dengan pembengkakan atau perilaku
kontraktil yang berbeda karena ini berpotensi mengakibatkan hilangnya integritas lapisan
atau deformasi dari konstruk akhir.
Sifat-sifat struktural dan mekanis. Jika suatu materi sangat penting

untuk pemeliharaan struktur 3D, dalam menahan atau memproduksi kekuatan tertentu atau
sebagai titik penahan untuk pengungkit mekanis, maka pemeliharaan properti ini sangat
penting untuk fungsi lanjutan dari konstruk. Bahan harus dipilih secara hati-hati berdasarkan
sifat mekanik yang diperlukan dari konstruk, dan persyaratan struktural yang berbeda akan
diperlukan untuk beragam jenis jaringan mulai dari skin64.102 dan liver120 sampai bone121.
Salah satu pendekatan untuk mengatasi keterbatasan ini adalah penggunaan material
pengorbanan yang dapat memberikan sifat struktural dan mekanis yang diperlukan selama
periode waktu tertentu. Bahan pengorbanan ini dapat digunakan pada saat pencetakan untuk
memungkinkan terjadinya pengikatan silang yang cukup dalam konstruk122,123 atau secara
alternatif dapat dimasukkan ke dalam konstruk, berfungsi sampai bahan yang dihasilkan
secara endogen dapat cukup menjalankan fungsi ini. Dengan pendekatan ini, perawatan harus
dilakukan untuk mendesain material dengan sifat-sifat struktural dan degradasi khusus sambil
menghindari respons benda asing potensial atau produk sampingan degradasi beracun dalam
konstruk.
Bahan biomimikri. Pentingnya biomimikri untuk biokompatibilitas baru-baru ini telah
dipelajari. Kemampuan untuk menggabungkan komponen biomimetik ke dalam konstruksi
bioprint dapat memiliki efek aktif pada perlekatan, migrasi, proliferasi dan fungsi sel endogen
dan eksogen. Telah diketahui bahwa material memiliki pengaruh besar pada perlekatan
sel104,124,125 serta ukuran sel dan bentuk126, dan prinsip-prinsip ini mungkin berguna
dalam mengontrol proliferasi dan diferensiasi sel dalam
perancah. Penambahan ligan permukaan ke bahan memiliki

potensi untuk meningkatkan perlekatan sel dan proliferasi pada substrat material125.
Kehadiran fitur nano seperti pegunungan, langkah-langkah dan alur juga mempengaruhi
lampiran sel, proliferasi dan perakitan sitoskeletal127.128. Lingkungan 3D dalam konstruksi
jaringan direkayasa dapat mempengaruhi bentuk sel dan mempengaruhi proses
diferensiasi129,130. Karakteristik nano bahan dapat mempengaruhi adhesi sel, orientasi sel,
motilitas sel, tampilan antigen permukaan, kondensasi sitoskeletal dan modulasi jalur sinyal
intraseluler yang mengatur aktivitas transkripsi dan ekspresi gen131.

Pendekatan biomimikri untuk membuat materi dengan fungsi fisiologis tertentu

membutuhkan pemahaman tentang yang terjadi secara alami
komposisi spesifik jaringan dan lokalisasi komponen ECM dalam jaringan yang menarik.
Kemajuan terbaru dalam metode dekellularisasi jaringan132 dapat memberikan perancah
ECM utuh untuk analisis terperinci komposisi ECM, lokalisasi, dan fungsi biologis.

Proses ini melibatkan lisis dan penghilangan komponen seluler dari jaringan, biasanya
melalui perfusi dengan air deionisasi atau detergen ringan, sambil meninggalkan di belakang
ECM spesifik jaringan. Kemampuan untuk mereproduksi perancah ECM identik
menggunakan pendekatan bioprinting akan berguna dalam rekayasa jaringan dan pengobatan
regeneratif.

Tantangan dalam jaringan decellularization termasuk keseimbangan antara penghapusan

lengkap komponen seluler dan pemeliharaan vaskular halus dan struktur jaringan lainnya.
Selain itu, beberapa toksisitas telah diamati ketika sel-sel tumbuh pada dekellularized

perancah jaringan, berpotensi karena retensi deterjen dekellularization dalam ECM133. Pada
mamalia, ada lebih dari 300 protein ECM serta beberapa enzim pengubah ECM, faktor
pertumbuhan pengikat ECM dan protein terkait ECM lainnya134. Protein yang paling
melimpah dan dipahami adalah kolagen, proteoglikan, dan glikoprotein. Protein ini
memberikan kekuatan dan fungsi pengisian ruang, mengikat faktor pertumbuhan, mengatur
kompleks protein, meningkatkan adhesi sel, berpartisipasi dalam pensinyalan seluler dan
mungkin memiliki fungsi tambahan. Pendekatan 'perancah bebas' untuk bioprinting mungkin
merupakan konsep yang menarik lainnya tentang konsep material

biomimikri. Ketika sel memproduksi dan menyimpan ECM jaringan, spheroid seluler yang
dirakit sendiri dapat menghasilkan lingkungan ECM yang paling cocok untuk fungsi mereka
sendiri. Mendesain mekanisme ECM dinamis ini ke dalam materi menawarkan kontrol lebih
lanjut terhadap sel
tingkah laku. Salah satu tantangannya adalah mengembangkan metode untuk
menggabungkan bahan-bahan ini ke dalam konstruksi menggunakan teknologi bioprinting,
memastikan bahwa bahan-bahan tersebut memiliki waktu degradasi dan produk samping
yang sesuai, dan bahwa bahan-bahan ini memiliki efek biologis struktural dan fungsional
yang dipahami dengan baik dan dapat dikontrol dalam konstruksi.
Sumber sel

Pemilihan sel untuk pencetakan jaringan atau organ sangat penting untuk memperbaiki fungsi
dari konstruksi yang dibuat. Jaringan dan organ terdiri dari beberapa tipe sel dengan fungsi
biologis spesifik dan esensial yang harus direkapitulasi dalam jaringan transplantasi.
Selain jenis sel fungsional utama, sebagian besar jaringan

juga mengandung tipe sel yang memberikan fungsi pendukung, struktural atau penghalang,
terlibat dalam vaskularisasi atau menyediakan ceruk untuk pemeliharaan dan diferensiasi sel
induk. Opsi saat ini untuk sel cetak melibatkan baik pengendapan beberapa jenis sel utama ke
dalam pola yang dengan setia mewakili jaringan asli atau sel punca pencetakan yang dapat
berproliferasi dan berdiferensiasi menjadi jenis sel yang dibutuhkan. Sel yang dipilih untuk
pencetakan harus secara dekat meniru keadaan fisiologis sel in vivo dan diharapkan untuk
mempertahankan fungsi in vivo mereka di bawah kondisi yang dioptimalkan135.
Setiap jenis sel yang dipilih untuk pencetakan harus dapat diperluas

ke dalam jumlah yang cukup untuk dicetak. Kontrol yang tepat dari proliferasi sel in vitro dan
in vivo penting untuk bioprinting. Terlalu sedikit proliferasi dapat mengakibatkan hilangnya
viabilitas dari konstruk yang ditransplantasikan, sedangkan proliferasi terlalu banyak dapat
menyebabkan hiperplasia atau apoptosis. Upaya untuk mengontrol proliferasi sel dalam
konstruksi transplantasi penting untuk mencapai rasio fisiologis sel fungsional dan
pendukung. Selain itu, waktu proliferasi seluler penting. Awalnya, tingkat proliferasi seluler
yang tinggi mungkin diinginkan untuk mengisi konstruk, tetapi dalam jangka panjang,
proliferasi harus dipertahankan pada tingkat yang sesuai untuk mencapai homeostasis
jaringan, meskipun tanpa hiperplasia. Beberapa pendekatan untuk memecahkan masalah ini
melibatkan transfeksi virus136 atau penggunaan molekul kecil137.138 untuk menginduksi
proliferasi sel dan mencegah penuaan. In vivo, stem sel endogen berfungsi untuk
menggantikan sel yang berdiferensiasi berbeda setelah pergantian atau cedera sel normal.
Untuk membangun bioprinted untuk mempertahankan fungsi jangka panjang, setelah
transplantasi, jaringan bioprint harus mampu mempertahankan homeostasis sel,
memperbaharui diri dan merespon kerusakan jaringan atau cedera. Peningkatan pemahaman
tentang sifat dan komposisi sel induk endogen dan ceruk mereka akan bermanfaat dalam
jaringan rekayasa yang dapat mempertahankan fungsi jangka panjang mereka setelah
transplantasi.

Seperti halnya jaringan atau organ yang ditransplantasi, penolakan konstruksi bioprinting
oleh sistem imun host adalah masalah potensial yang dapat diatasi dengan menggunakan
sumber autologus sel atau dengan menggunakan strategi induksi toleransi. Sumber sel
autologus dapat diperoleh dari biopsi, dari pembangkitan dan diferensiasi sel induk autologus
atau melalui pendekatan pemrograman ulang. Namun, jika seorang pasien sudah sakit atau
memiliki kelainan genetik atau metabolik, mungkin tidak mungkin bagi pasien untuk
menjalani prosedur bedah invasif, dan jenis sel yang terisolasi mungkin tidak menghasilkan
fungsi yang diinginkan dalam konstruksi bioprint.

Banyak jenis sel primer yang sulit diisolasi dan dibudidayakan, dan jangka hidup mereka
yang terbatas adalah batasan untuk fungsi jangka panjang dari setiap konstruksi
bioprinted139. Sel punca adalah jenis sel yang menjanjikan untuk aplikasi rekayasa jaringan
karena kemampuannya untuk berproliferasi dalam keadaan yang tidak dapat dibedakan tetapi
multipoten (pembaruan diri) dan kemampuan mereka untuk menghasilkan beberapa fenotip
sel khusus jaringan fungsional. Sel punca embrionik dan sel punca pluripotent induksi
mampu memperbarui diri tak terbatas dan telah menunjukkan umur panjang mereka dengan
mempertahankan keadaan terdiferensiasi mereka selama lebih dari 80 passages140. Kapasitas
sel induk berpotensi majemuk untuk menghasilkan sejumlah besar sel menyoroti potensi sel-
sel ini untuk bioprinting (dan lainnya) aplikasi terapeutik; pekerjaan lebih lanjut untuk
memastikan keamanan sel-sel ini akan menjadi manfaat besar bagi lapangan. Tipe-tipe sel
induk lainnya - seperti sel induk dewasa dari sumsum tulang141–143 dan sel-sel induk fat144
atau perinatal dari cairan amniotik75 atau plasenta145 - diduga memiliki potensi diferensiasi
multipoten yang lebih terbatas tetapi dianggap lebih aman untuk transplantasi klinis dan
memiliki potensi untuk aplikasi autologus. Dengan protokol yang mapan untuk isolasi,
ekspansi dan diferensiasi, mesenchymal stromal cells (MSCs) mungkin juga menjadi sumber
sel yang menjanjikan untuk konstruksi bioprint. Jumlah MSC yang relevan secara klinis telah
berhasil dihasilkan secara in vitro untuk uji klinis, dan kemajuan di masa depan dalam teknik
kultur sel cenderung memanfaatkan populasi sel punca lain untuk aplikasi klinis bioprinting
kemungkinan yang realistis.

Sel-sel yang digunakan untuk aplikasi bioprinting harus cukup kuat untuk bertahan hidup
proses bioprinting dan menahan tekanan fisiologis setelah ditransplantasikan, termasuk
kekuatan fisik seperti tegangan geser dan tekanan serta stressor biologis termasuk keberadaan
racun, enzim dan pH nonfisiologis. Banyak studi bioprinting yang diterbitkan

menggunakan garis sel yang dikenal mampu proliferasi substansial dan sangat kuat, seperti
fibroblas atau garis sel yang berubah. Meskipun sel-sel ini cocok untuk studi bukti-konsep,

penting untuk menyadari bahwa teknologi bioprinting mungkin harus disesuaikan untuk
memasukkan tipe sel yang lebih sensitif terhadap kekuatan seperti tegangan geser atau
kondisi budaya serta waktu yang diperlukan untuk menyiapkan konstruk. Kemajuan dalam
teknik kultur sel serta dalam pemrograman ulang dan metode diferensiasi diarahkan akan
menjadi penting untuk menyediakan populasi sel yang sangat proliferatif, fungsional,
nonimmunogenic dan kuat yang cocok untuk aplikasi bioprinting.
Pandangan

Banyak tantangan yang dihadapi bidang bioprinting 3D terkait dengan aspek teknis, materi
dan seluler spesifik dari bioprinting
proses (Kotak 2 dan Tabel 2). Meskipun bidang ini pada tahap awal, telah berhasil
menciptakan beberapa jaringan pada skala manusia yang mendekati fungsi yang diperlukan
untuk transplantasi (Gambar 3).

Tantangan teknologi termasuk kebutuhan untuk peningkatan resolusi, kecepatan dan

kompatibilitas dengan bahan-bahan yang relevan secara biologis. Ketika kita beralih dari
modifikasi teknologi yang sudah ada sebelumnya dan mulai merancang bioprinter 3D untuk
menangani komponen biologis tertentu, berbagai bahan yang kompatibel dapat diperpanjang,
dan metode
untuk menyimpan bahan dan sel dengan presisi dan spesifisitas yang meningkat
bisa dikembangkan. Kecepatan fabrikasi harus ditingkatkan menjadi

pembuatan konstruksi ukuran yang relevan secara klinis. Salah satu cara untuk mencapai hal
ini adalah dengan menghasilkan blok-blok jaringan fungsional miniatur yang dapat
diskalakan ke ukuran yang relevan secara klinis dengan menggunakan perancah makro untuk
bergabung dengan blok. Komersialisasi mungkin memerlukan teknologi robot otomatis
terukur yang menggabungkan masing-masing komponen

jalur produksi biofabrikasi88. Ini mungkin termasuk tidak hanya perangkat bioprinting tetapi
juga pembuatan bahan, sel dan komponen pendukung lainnya.
Saat ini, bahan yang digunakan untuk pencetakan dipilih

baik karena kompatibilitasnya dengan pertumbuhan dan fungsi sel atau karena karakteristik
ikatan silang atau ekstrusi mereka. Untuk alasan ini, banyak penelitian yang diterbitkan
menggunakan berbagai bahan terbatas, termasuk kolagen, asam hyaluronic, alginat,
kopolimer yang dimodifikasi dan acrylates photocured. Parameter physiochemical utama
yang menentukan printability dari hidrogel adalah sifat reologi
dan mekanisme pengikatan silang146. Bahan yang berguna untuk bioprinting harus
biokompatibel, mudah dimanipulasi oleh teknologi bioprinter yang akan dibagikan dalam
struktur 3D yang kompleks, dan menjaga viabilitas dan fungsi sel, dengan demikian
memberikan dukungan struktural dan mekanis pada struktur. Hampir semua jaringan manusia
memiliki kombinasi dan gradien kompleks komponen ECM, masing-masing

dengan pengaruh biologis dan mekanis tertentu. Sangat mungkin bahwa dengan
mereproduksi lingkungan biomaterial dari jaringan atau organ yang menarik, banyak sifat
mekanik dan fungsional yang diinginkan juga akan direproduksi. Sepertinya tidak ada
material tunggal

akan memiliki semua properti yang diperlukan untuk merekapitulasi fungsi jaringan. Salah
satu pendekatan yang menarik adalah pengembangan materi adaptif fungsional yang
memprogram ulang bentuk, properti, atau fungsi sesuai permintaan, berdasarkan rangsangan
eksternal. Bahan-bahan seperti itu mengubah fungsi mereka sebagai respons terhadap
rangsangan dari tubuh saat organ matang, sebagai respons terhadap isyarat-isyarat fisiologis,
atau mengikuti rangsangan yang diberikan secara eksternal yang dirancang untuk mengubah
jaringan 91,147.

Salah satu pendekatan untuk meningkatkan pemahaman tentang lingkungan material yang
diperlukan adalah dengan menganalisis komposisi dan distribusi protein ECM di
scaffolds132.148.149 jaringan dekellularized. Kemampuan untuk membuat gambar,
memetakan, dan mereproduksi struktur 3D kompleks yang tersusun dari protein ECM yang
relevan secara biologi akan menjadi kemajuan besar bagi bidang ini. Selain menggunakan
jaringan dekellularized untuk mendapatkan pemahaman yang lebih besar tentang komposisi
ECM fisiologis,
ECM berasal dari jaringan decellularized dapat berfungsi sebagai biomaterial yang berguna
untuk aplikasi bioprinting. Pendekatan lain mungkin termasuk kombinasi serat polimer
termoplastik kaku dengan konstruksi hidrogel lembut150. Selain itu, bahan struktural dapat
dimodifikasi dengan faktor alam atau sintetis untuk mempengaruhi perilaku biologis
sekitarnya. Pendekatan ini dapat memenuhi persyaratan fungsional sel serta persyaratan
struktural dari jaringan 3D.

Bioprinting membutuhkan sumber sel yang tersedia, mudah berkembang dalam budaya,
nonimmunogenic dan yang dapat mereproduksi semua fungsi jaringan atau sistem organ.
Secara potensial, kombinasi berbagai sumber sel matang dan / atau multipoten dapat
diterapkan untuk mereproduksi fenotipe sel yang dibutuhkan secara efisien untuk jaringan
tertentu. Misalnya, populasi sel punca yang berasal dari komponen fungsional dari jaringan
bunga dapat digunakan untuk menghasilkan blok bangunan fungsional dari konstruk,
sedangkan MSC yang berasal dari sumsum tulang atau jaringan kehamilan dapat secara
efisien menghasilkan jaringan ikat yang membentuk komponen struktural dari organ. Selain
itu, kemajuan terbaru dalam penerapan molekul kecil151 terhadap kultur sel menunjukkan
bahwa kita sedang menuju masa depan di mana kita memiliki kontrol lebih langsung atas
proliferasi sel dan diferensiasi, dengan beberapa penelitian sekarang menggambarkan
diferensiasi sel yang diarahkan menggunakan molekul kecil152-154.

Bidang bioprinting juga menghadapi tantangan lain yang dimiliki oleh semua peneliti di
bidang rekayasa jaringan dan pengobatan regeneratif. Memastikan vaskularisasi yang cukup
dari konstruk direkayasa sangat penting untuk kelangsungan hidup jangka panjang dari setiap
konstruksi jaringan bioprinted. Beberapa penelitian telah menunjukkan generasi pohon
vaskular bercabang untuk membangun organ bioprinted94,155,156. Sebuah tantangan
dengan pendekatan ini adalah kompatibilitas proses dengan bahan

dan sel dan komponen lain dari sistem pencetakan. Selain itu, waktu yang diperlukan untuk
perakitan dan pematangan jaringan pembuluh darah perfusi di seluruh membangun jaringan
mungkin lebih lama dari waktu kelangsungan sel. Bioreaktor dapat membantu
mempertahankan viabilitas konstruk jaringan dan waktu ‘beli’ yang diperlukan untuk fusi
jaringan pasca proses, remodelling dan maturasi. Pemrosesan bioreaktor dapat digunakan
dalam kombinasi dengan faktor-faktor yang mempromosikan angiogenesis dan persarafan157
serta faktor-faktor yang dapat mempertahankan atau mempertahankan viabilitas sel158.
Selain itu, bioreaktor memiliki peran penting dalam menjaga parameter lingkungan mikro
seperti suhu, pH, nutrisi dan konsentrasi gas serta pengaturan rangsangan mekanis
spesifik159. Parameter-parameter ini akan membutuhkan desain dan teknik untuk setiap jenis
jaringan spesifik dan tujuan perkembangan.

Pendekatan alternatif untuk paradigma bioprinting-transplantation adalah bioprinting in vivo,

di mana sel dan bahan secara langsung disimpan pada atau pada pasien. Saat ini, pendekatan
ini telah digunakan di laboratorium kami untuk bioprint kulit langsung ke luka atau
membakar cacat dan oleh orang lain untuk bioprint tulang ke cacat calvaria pada tikus111.
Dengan meningkatnya kecepatan dan resolusi bioprinters 3D, pendekatan ini dapat menjadi
layak untuk regenerasi in vivo jaringan segera setelah cedera atau selama
operasi. Satu arah yang menarik adalah integrasi potensial dari bioprinter 3D menjadi alat
bedah robotik minimal invasif. Alat bedah robotik gabungan dan bioprinter 3D mungkin
dapat mengangkat dan mengganti jaringan selama operasi yang sama atau mungkin
diterapkan untuk mempercepat
penyembuhan jaringan yang dikeluarkan oleh intervensi bedah.

Struktur jaringan 3D-bioprinted sedang dikembangkan tidak hanya untuk transplantasi tetapi
juga untuk digunakan dalam penemuan obat, analisis bahan kimia, biologi dan toksikologi,
dan penelitian dasar. Ketika kita maju menuju jaringan cetak dengan kompleksitas yang
meningkat, dimulai dengan jaringan 2D seperti kulit, melalui tabung berongga seperti
pembuluh darah, ke organ nontubular berongga seperti kandung kemih, dan akhirnya ke
organ padat seperti ginjal (Gbr. 4) , kita harus mengatasi semakin banyak
tantangan yang sulit, termasuk persyaratan sel dan material,

pematangan jaringan dan fungsionalitas, dan vaskularisasi dan persarafan yang tepat.
Penelitian multidisiplin akan diperlukan untuk memenuhi tantangan ini dan mewujudkan
potensi bioprinting 3D untuk mengubah bidang kedokteran regeneratif.