USULAN PENELITIANSKRIPSI

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUNOREGANO (Origanum vulgare)

20%, 40%, 60% TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL PADA TIKUS WISTAR
(Sprague dawley) Candidiasis YANGDIPAPARCandida albicans

Disusun Oleh:

Tri Utomo

G1G014047

KEMENTERIAN RISET TEKNOLOGI DAN PENDIDIKAN TINGGI

UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN

FAKULTAS KEDOKTERAN

JURUSAN KEDOKTERAN GIGI

PURWOKERTO

2018

i
 USULAN PENELITIANSKRIPSI

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUNOREGANO (Origanum vulgare)

20%, 40%, 60% TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL PADA TIKUS WISTAR
(Sprague dawley) Candidiasis YANGDIPAPARCandida albicans

Diajukan guna melengkapi tugas akhir dan memenuhi salah satu syarat untuk
menyelesaikan S1 Kedokteran Gigi dan mencapai gelar Sarjana Kedokteran
Gigi

Oleh:
Tri Utomo
G1G014047

KEMENTERIAN RISET TEKNOLOGI DAN PENDIDIKAN TINGGI

UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
JURUSAN KEDOKTERAN GIGI
PURWOKERTO
2018

ii
 LEMBAR PENGESAHAN

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUNOREGANO (Origanum vulgare)

20%, 40%, 60% TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL PADA TIKUS WISTAR
(Sprague dawley) Candidiasis YANGDIPAPARCandida albicans

LEMBAR PENGESAHAN
Oleh:
Tri Utomo
G1G014047

Diajukan sebagai pedoman pelaksanaan penelitian studi akhir pada

Jurusan Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran
Universitas Jenderal Soedirman

Disetujui dan Disahkan

Pada Bulan Desember =2018

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. drg. A. Haris B. W., M.Kes., A.P., S.IP., S.E Drg. Amilia Ramadhani, M.Sc

NIP. 19700503 199903 1001 NIP. 19810725 200812 2 002

iii
 DAFTAR ISI
BAB I
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
A. Latar Belakang ............................................................................................. 1
B. Rumusan Masalah ........................................................................................ 4
C. Tujuan Penelitian ......................................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ....................................................................................... 5
E. Keaslian Penelitian ....................................................................................... 7
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................................ 8
A. Landasan Teori ............................................................................................. 8
1. Oregano oil .............................................. Error! Bookmark not defined.
2. Nystatin .................................................................................................. 12
3. Candida albicans ....................................................................................... 8
4. Patogenesis Candidiasis Peroral ............................................................... 8
5. Sel Neutrofil ........................................................................................... 10
6. Histologi .................................................. Error! Bookmark not defined.
B. Kerangka Teori........................................................................................... 17
BAB III
METODE PENELITIAN ................................................................................... 18
A. Kerangka Konsep ....................................................................................... 18
B. Hipotesis..................................................................................................... 19
C. Lokasi dan Waktu Penelitian ..................................................................... 20
1. Lokasi Penelitian .................................................................................... 20
2. Waktu penelitian..................................................................................... 20
D. Variabel Penelitian ..................................................................................... 20
1. Variabel Bebas ....................................................................................... 20
2. Variabel Terikat ...................................................................................... 20
3. Variabel Terkendali ................................................................................ 21
E. Definisi Operasional................................................................................... 22
F. Populasi dan Sampel Penelitian ................................................................. 23

IV
 III

G. Sumber Data ........................................................................................... 25

H. Instrumen Penelitian ............................................................................... 25
1. Alat penelitian ........................................................................................ 25
2. Bahan Penelitian ..................................................................................... 25
I. Cara Pengumpulan Data ............................................................................. 26
1. Perijinan dan Pengajuan Ethical Clearance ............................................ 26
2. Tahap Persiapan ..................................................................................... 26
3. Pembuatan Ekstrak Daun Oregano Oil .................................................. 26
4. Pembuatan serial konsentrasi dari ekstrak daun Oregano ...................... 27
5. Tahap Persiapan Candida allbicans ....................................................... 28
6. Tahap Perlakuan Hewan Coba ............................................................... 28
7. Pemeriksaan Histologi ............................................................................ 29
J. Alur Penelitian ........................................................................................... 30
K. Analisis Data .......................................................................................... 31
L. Jadwal Penelitian........................................................................................ 31
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 31
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Kandidiasis oral adalah suatu infeksi fungal yang mengenai bagian

mukosa oral. Lesi ini disebabkan oleh jamur Candida albicans. Candida

albicans merupakan salah satu komponen dari mikroflora oral dan sekitar

30-50% orang sebagai karier organisme ini. Tedapat beberapa tipe spesies

kandida yang terdapat di kavitas oral, diantaranya adalahCandida albicans

Candida tropicalis, Candida krusei, dari tiga tipe tersebut Candida albicans

adalah yang paling sering terdapat pada kavitas oral. Candida albicans

merupakan fungi yang menyebabkan infeksi opurtunistik pada manusia

(Hakim dan Ramadhian, 2015).

Prevelensi nasional masalah gigi dan mulut menurut data laporan

Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) tahun 2007 adalah 23,4 % sedangkan

pada tahun 2013 meningkat menjadi 25,9%. Pada kasus penyakit gigi dan

mulut yang banyak terjadi di Indonesia, diantaranya adalah karies gigi,

penyakit periodontal, serta kandidiasis oral (Depkes, 2013).

Kandidiasis oral disebabkan oleh Candida albicans dan gaya hidup

yang tidak sehat menjadi factor pemicu terjadinya kandidiasis. Penyebab

kandidiasis di rongga mulut yang paling tinggi adalah diantaranya

penggunaan gigi tiruan dan faktor pemicu lain seperti xerostomia, diabetes

militus, antibiotik kortikosteroid, perokok berat dan faktor sistemis yang

1
 2

berpengaruh yaitu usia, malnutrisi serta penderita imunosuppresif seperti

HIV (Wongsohardjono dan Subagyo, 2011).

Pada fase infeksi jamur tubuh akan merespon terhadap sel leukosit,

salah satunya adalah neutrofil. Neutrofil merupakan sel yang berperan

dalam proses fagositosis pada kondisi perandangan akut. Neutrofil akan

memproduksi enzim mieloperoksidase yang berfungsi untuk menghacurkan

antigen (Cao dan Smith, 1989).

Terapi kausatif yang diberikan untuk menghambat pertumbuhan

jamur Candida albicans dapat dilakukan dengan pemberian obat standar

berupa Nystatin. Pengobatan kandidiasis pada bagian oral dan kulit dapat

diberikan Nystatin topikal dan untuk infeksi yang sudah berkembang

menjadi infeksi sistemik dapat diberikan Nystatin oral, namun obat tersebut

memiliki efek samping berupa mual, muntah, dan iritasi pada kulit

sedangkan pemberian bahan alami yang tidak memiliki efek samping untuk

menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans adalah Oregano

(Mardjono, 2008).

Oregano tanaman ini memiliki komponen utama berupa thymol

dan carvacol. Thymol memiliki sifat sebagai fungisida alami dengan

kemampuan antiseptik sehingga senyawa ini membantu untuk

meningkatkan sistem kekebalan tubuh dan bekerja sebagai perisai terhadap

racun serta membantu mencegah kerusakan jaringan serta mendorong

penyembuhan. Carvacol memiliki sifat yang sangat efektif melawan

berbagai infeksi jamur seperti Candida albicans, Staphylococcus dan jamur

 3

Aspergillus. Terdapat bahan lain dari Oregano , yaitu Rosmaniric acid,

Narigin, dan Beta-charyophilin (E-BCP) yang berguna untuk menurunkan

pertumbuhan jamur kandida yang akan meningkat pada saat terjadi infeksi.

Rosmaniric acid dan narigin merupakan antioksidan yang dapat mencegah

radikal bebas dan berperan sebagai antihistamin alami. Beta-charyophilin

merupakan senyawa yang dapat menghambat peradangan akut (Arcla-

Lozano, 2011).

Penelitian sebelumnya yang dilakukan Chami dkk (2004) beberapa

minyak alami dari tanaman terhadap aktivitas antifungal menunjukkan

bahwa kandungan Oregano paling efektif dalam menghambat jamur.

Tanaman ini juga bersifat fungistatik dan fungicidal yang memiliki

kandungan berupa carvacol yang efektif terhadap beberapa strain Candida

albicans seperti Candida albicans laboratorium, Candida albicans

ATCC1020231. Penelitian tersebut menunjukkan bahwa kandungan

carvacol adalah obat yang dapat mengobati kandidisis oral.

Berdasarkan latar belakang tersebut, peneliti ingin meneliti

perbandingan efektifitas Oregano dengan ekstrak 30%, 60%, 90%

danNystatin 10% secara invivo terhadap aktivitas sel neutrofil pada tikus

Wistar yang dipapar jamur Candida albicans secara sublingual.

 4

B. Rumusan Masalah

Rumusan masalah penelitian ini apakah terdapat pengaruh

pemberian Oregano 30%, 60%, 90% terhadap jumlah neutrofil pada tikus

Wistar jantan yang dipapar Candida albicans secara sublingual ?

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

Mengetahui pengaruh Oregano3 0%, 60%, 90% terhadap jumlah

sel neutrofil pada tikus Wistar yang dipapar dengan Candida albicans

secara sublingual.

2. Tujuan Khusus

a. Membandingkan pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Oregano

(Origanum vulgare) konsentrasi 30% dan konsentrasi 60% terhadap

jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis

b. Membandingkan pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Oregano

(Origanum vulgare) konsentrasi 30% dan konsentrasi 90% terhadap

jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis

c. Membandingkan pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Oregano

(Origanum vulgare) konsentrasi 60% dan konsentrasi 90% terhadap

jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis

d. Membandingkan pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Oregano

(Origanum vulgare) kelompok perlakuan dan kelompok kontrol

negatif terhadap jumlah neutrofil pada tikus wistar model candidiasis

 5

e. Mengetahui konsentrasi paling efektif dari pengaruh pemberian ekstrak

etanol daun Oregano (Origanum vulgare) dari setiap kelompok

perlakuan terhadap jumlah neutrofil pada tikus Wistar model

kandidiasis.

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat Teoritis

Manfaat teoritis dari penelitian ini memberikan informasi mengenai

Oregano 20%, 40%, 60% terhadap jumlah sel neutrofil pasca dipapar

Candida albicans.

2. Manfaat Praktis

a. Bagi Jurusan Kedokteran Gigi

Mengembangkan pengetahuan dan menjadi dasar penelitian

selanjutnya mengenai bahan alami ekstrak daun Oregano (Origanum

vulgare) terhadap proses infeksi dan inflamasi

b. Bagi Peneliti

Sebagai penambah pengetahuan mengenai pengaruh pemberian

ekstrak daun Oregano (Origanum Vulgare) terhadap jumlah neutrofil

pada tikus model kandidiasis.

 6

c. Bagi Masyarakat

Sebagai sumber informasi mengenai ekstrak duan Oregano

(Origanum vulgare) yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan pengganti

dalam membantu menghambat penyakit kandidiasis yang disebabkan

oleh Candida albicans.

 7

E. Keaslian Penelitian

Keaslian penelitian dapat dilihat pada tabel 1.1

Tabel 1.1 Keaslian Penelitian

No. Hasil Penelitian Persamaan Perbedaan
Sebelumnya
1. Judul: Antifungal Persamaan Penelitian
treatment with dengan penelitian sebelumnya
carvacol and ini adalah sama- melakukan untuk
eugenol of oral sama melihat minimum
candidiasis in menggunakan inhibitory
immunosuppressed bahan carvarcol concentration
rats sedangkan
Peneliti: Chami N., penelitian ini
Chami F., Bennis melihat perubahan
S., Trouillas J., jumlah sel neutofil.
Remmal A.
Tahun : 2010
Dipublikasikan:
Iran Biomed J,
2010
July;14(3):121-6.
2. Judul: Recent Persamaan Penelitian
mouse and rat dengan penelitian sebelumnya
methods for the ini sama-sama di melakukan
study of injeksi sublingual penelitian untuk
exprimental oral melihat jumlah
candidiasis koloni candida
Peneliti: Costa A., sedangkan
Pereira C., penelitian ini
Junqueira J., Jorge melihat perubahan
A jumlah sel neutrofil
Tahun: 2013
Dipublikasikan:
Virulence 4:5,
391-399; July 1,
2013
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Landasan Teori

1. Candida albicans

Candida albicans bagian dari flora normal yang bersifat patogen

invasif. Infeksi Candida albicans merupakan infeksi jamur

opportunistik yang paling umum. Infeksi ini dapat bervariasi dari

infeksi membran mukosa superficial sampai penyakit invasif seperti

kandidiasis. Infeksi Candida albicans dapat juga terjadi di rongga mulut

yang dikenal dengan oral kandidiasis. Beberapa contoh penemuan

diklinis yang berkaitan dengan infeksi Candida albicans antara lain

pseudomembran kandidiasis, oral kandidiasis, kronik atrofik

kandidiasis. Daerah di rongga mulut yang paling sering terjadi adalah

lidah, mukosa bukal dan palatum (Lestari 2010).

Jamur Candida albicans dapat menyebabkan penyakit infeksi

kandidiasis dan akan mengakibatkan sistem pertahanan host karena

memiliki beberapa factor virulen yang terlibat dalam patogesisnya.

Peran faktor virulensi dari Candida albicans penting untuk pengobatan

infeksi kandida yang lebih efektif dengan adanya peningkatan resistensi

terhadap obat antijamur (Lestari, 2010).

8
 9

2. Patogenesis Kandidiasis

Jamur Candida albicans merupakan mikroorganisme endogen pada

rongga mulut, traktus gastrointestinal, traktus genitalia dan kadang-

kadang pada kulit. Secara mikroskopis ciri-ciri Candida albicans berupa

yeast dimorfik yang dapat tumbuh sebagai sel yeast, sel hifa atau

pseudohyphae. Candida albicans dapat ditemukan di manusia sekitar

40-80% pada manusia normal, yang dapat sebagai mikroorganisme atau

patogen (Hidalgo dan Jose, 2010).

Infeksi Candida albicans pada umumnya merupakan infeksi

opportunistik, dimana penyebab infeksinya dari flora normal host atau

dari mikroorganisme penghuni sementara ketika host mengalami

kondisi immunocompromised. Dua faktor penting pada infeksi

opportunistik adalah adanya paparan agent penyebab dan kesempatan

terjadinya infeksi. Faktor predisposisi meliputi penurunan imunitas

yang diperantarai oleh sel, perubahan membran mukosa dan kulit serta

adanya benda Selain host mengalami kondisi immunocompromised, C.

albicans juga mengandung faktor virulensi yang dapat berkontribusi

terhadap kemampuannya untuk menyebabkan infeksi. Faktor virulensi

Utama meliputi permukaan molekul yang memungkinkan adheren

organisme padapermukaan sel host, asam protease dan fosfolipase yang

terlibat dalam penetrasi dan kerusakan dinding sel, serta kemampuan

untuk berubah bentuk antara sel yeast dengan sel hifa (Hedayati dan

Ghazal, 2010).
 10

Gejala yang disebabkan oleh dari kandidiasis biasanya berupa

hyperemia, eritema yang besar yang kadang-kadang disertai dengan

deskuamasi epitel, papula yang akan membesar yang akan menjadi

nodula.

3. Sel Neutrofil

Neutrofil adalah sel yang memiliki ukuran sekitar 14 μm,

granulanya berbentuk butiran halus tipis dengan sifat netral sehingga

terjadi percampuran warna asam (eosin) dan warna basa (metilen biru),

sedangkan [pada granula yang menghasilkan warna ungu atau merah

muda yang samar (Nugraha, 2015). Neutrofil berfungsi sebagai garis

pertahanan tubuh terhadap zat asing terutama terhadap jamur. Bersifat

fagosit dan dapat masuk ke dalam jaringan yang terinfeksi (Kiswari,

2014). Neutrofil adalah jenis sel leukosit yang paling banyak yaitu

sekitar 50-70% diantara sel leukosit yang lain. Nilai normal sel darah

putih manusia adalah adalah 4,5-11 ribu/mm3. Dan nilai normal sel

darah putih untuk tikus jenis Wistar jantan berkisar antara 6,1-10,5 x

103 /μl darah (Widman, 1995).

Ada dua macam netrofil yaitu neu trofil batang (stab) dan neutrofil

segmen polimorfonuklear (Kiswari, 2014). Perbedaan dari keduanya

yaitu neutrofil batang merupakan bentuk muda dari neutrofil segmen

sering disebut sebagai neutrofil tapal kuda karena mempunyai inti

 11

berbentuk seperti tapal kuda. Seiring dengan proses pematangan,

bentuk intinya akan bersegmen dan akan menjadi neutrofil segmen.

Sel neutrofil mempunyai sitoplasma luas berwarna pink pucat dan

granulahalus berwarna ungu (Riswanto, 2013).

Gambar 2.1 Neutrofil Batang Pewarnaan Giemsa

Pembesaran 1000 x (Sumber: Adianto, 2013)

Neutrofil segmen mempunyai granula sitoplasma yang tampak

tipis (pucat), sering juga disebut neutrofil polimorfonuklear karena inti

selnya terdiri atas 25 segmen (lobus) yang bentuknya bermacam macam

dan dihubungkan dengan benang kromatin. Jumlah neutrofil segmen

yaitu sebanyak 36, dan bila lebih dari 6 jumlahnya maka disebut dengan

neutrofil hipersegmen (Kiswari, 2014).

 12

Gambar 2.2 Neutrofil Segmen Pewarnaan Giemsa

Pembesaran 1000 x (Sumber: Adianto, 2013)

Peningkatan jumlah neutrofil disebut netrofilia. Neutrofilia dapat

terjadi karena respon fisiologik terhadap stress, misalnya karena olah

raga, cuaca yang ekstrim, perdarahan atau hemolisis akut, melahirkan,

dan stres emosi akut. Keadaan patologis yang menyebabkan netrofilia

diantaranya infeksi akut, radang atau inflamasi, kerusakan jaringan,

gangguan metabolik, apendisitis dan leukemia mielositik. Sedangkan

penurunan jumlah neutrofil disebut dengan neutropenia, neutropenia

ditemukan pada penyakit virus, hipersplenisme, leukemia,

granolositosis, anemia, pengaruh obat-obatan (Riswanto, 2013)

4. Nystatin

Nystatin adalah obat antijamur yang digunakan untuk mengatasi

infeksi yang disebabkan oleh jamur. Nystatin akan mengikat jamur

atau ragi yang sensitif aktivitas anti jamur tergantung dari adanya

ikatan dengan sterol pada membran sel jamur atau ragi terutama sekali
 13

ergosterol. Akibat terbentuknya ikatan antara sterol dengan antibiotik

ni akan terjadi perubahan sehingga sel akan kehilangan berbagai

molekul kecilnya (Mardjono, 2008).

Faktor pemicu terjadinya kandidiasis akibat pengunaan gigi palsu,

mengonsumsi obat isap korticosteroid, setelah mengonsumsi

antibiotik, merokok, penderita diabetes, penderita anemia. Untuk

mengatasi infeksi yang terjadi pada mulut dan tenggorokan

menggunakan Nystatin jenis obat cair, sedangkan untuk infeksi yang

terjadi pada kulit, menggunakan Nystatin topikal.Nystatin berfungsi

menghentikan pertumbuhan dan membunuh jamur Candidayang

menyebabkan infeksi (Mardjono, 2008).

5. Oregano

Origanum vulgare merupakan tanaman yang berasal dari

tanaman aromatik yang aromatik dianggap menarik karena rasa dan

sifat medisnya sebagai bahan konsumsi manusia, bahan makanan

hewan dan penggunaan tanaman hias (Arcila-Lozano, 2011).

a. Taksonomi

Penyebutan nama untuk Oregano berbeda-beda di setiap daerah

bergantung pada bahasanya. Dalam bahasa Inggris disebut dengan

flower oregano, sedangkan di negara Mediterania disebut daun

Oregano dan untuk daerah asia dan Indonesia disebut juga daun
 14

Oregano (Paddock, 2008). Sementara itu, taksonomi dari Oregano

adalah sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Lamiales

Famili : Lamiaceae

Genus : Origanum

Species : Origanum vulgare

b. Morfologi

Tanaman Oregano adalah tanaman berbunga 3 bulan sekali

yang dapat tumbuh hingga mencapai 20 sampai 50 cm dan hidup

didataran rendah/suhu panas 30-35%. Daun Oregano memilki beberapa

kuntum. Bunga Oregano sendiri biasanya berwarna hijau dan aroma

bunga lembut. Bunga ini halus dan memilki 5 sampai 6 kelopak. Bagian

yang sering digunakan adalah daun dari Oregano tersebut (Paddock,

2008). Secara umum tanaman Oregano dapat terlihat seperti gambar

2.1
 15

Gambar 2.1 Tanaman Oregano

Sumber : (Paddock, 2008)

Oregano adalah tumbuhan yang berasal dari luar negeri yang sudah

dikembangbiakan di Indonesia dan bagian yang digunakan adalah daun

dari tumbuhan tersebut yang telah terbukti memiliki antioksidan,

antibakteri, antijamur, antispasmodic dan analgesik, mengidentifikasi

carvacrol yang diduga bertanggung jawab terhadap aktivitas biologs

ini. Penggunaan tanaman Oregano sebagai antimikroba harus

mempertimbangkan komposisi yang dapat menyebabkan yang hasilnya

berbeda seperti genotipe, lingkungan, tahap perkembangan danpraktek

budaya (Arcila-Lozano, 2011).

Oregano mengandung beberapa senyawa seperti carvacrol dan

thymol yang merupakan senyawa fenolik. Senyawa ini berfungsi untuk

menghambat atau membunuh bakteri yang membahayakan (Dadalioglu

dan Evrendilek, 2012). Pada beberapa peneltian yang dilakukan Chami

dkk (2004) ditemukan bahwa Oregano efektif terhadap jenis jamur dan

ragi termasuk Candida albicans yang dapat menjadi agen infeksius

apabila terjadi perubahan lingkungan tubuh. Secara in vitro, bahan

 16

alami ini dapat menghambat germinasi dan pertumbuhan mycelial

sehingga dari efeknya dapat diketahui bahwa daun Oregano memiliki

pengaruh sebagai anti- Selain itu juga kaya terhadap asam rosmarinic

poyphenol yang menunjukkan aksi anti-inflmasi fungal (Manohar, dkk.,

2013).

Penelitian yang dilakukan Osakabe, dkk. (2004), menunjukkan

adanya penyembuhan gejala yang signifikan serta menurunkan jumlah

neutrofil dan eosinofil yang memproduksi reactive oxygen species yang

membahayakaan serta radikal bebas. Oregano juga memiliki

perlindungan sebagai anti-oksidan yang efektif terhadap kerusakan

selular akibat radikal bebas. Radikal bebas adalah faktor dari inflamasi

yang penyakit degeneratif termasuk arthritis, kanker dan kerusakan hati.

Uji laboratorium yang dilakukan Kulsic, menunjukkan adanya efek

perlindungan yang kuat terhadap oksidasi kolesterol LDL sebagai

faktor kunci dari kerusakan hati. Beberapa penelitian juga menemukan

anti-mutagenik dan anti-karsinogenik yang berfungsi sebagai upaya

preventif dan perawatan dari kanker(Arcila-Lozano, 2011).

.
 17

6. Kerangka Teori

Candidiasis

Etiologi Penatalaksanaan

Candida albicans Terapi Alternatif Terapi

Konvensional
Can

Oregano
Nystatin

Thymol Carvacol Mengandung

Nystatin A1

Menghambat Menghambat
PGE 1 PGE 2

Fungistatik Fungisidal

Menghambat
pertumbuhan Menurunkan
dari jamur Jumlah Neutrofil
Candida
albicans

Keterangan:
Faktor Pemicu

Fokus Penelitian

Kondisi yang menghambat

Gambar 2.2 Kerangka teori

 BAB III

METODE PENELITIAN

A. Kerangka Konsep

Kerangka konsep pada penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 3.1

sebagai berikut.

Variabel Terkendali

a. Minuman dan makanan standar tikus

b. Cara pemeliharaan
c. Dosis dan teknik pemberian ekstrak daun
Oregano oil
d. Jumlah dan teknik inokulasi Candida
albicans
e. Waktu pengambilan sampel.

Variabel Bebas Variabel Terikat

a. Ekstra daun
Oregano 30%, Hitung jumlah neutrofil
60%, 90%
b. Kontrol sehat
c. Kontrol sakit

Variabel Tidak Terkendali

1. Sistem imun tubuh
2. Faktor hormonal

Keterangan :

: Dilakukan analisis

: Tidak dilakukan analisis

Gambar 3.1 Kerangka Konsep

18
 19

B. Hipotesis

Hipotesis pada peneletian ini adalah:

1. Pemberian ekstrak etanol daun Oregano (Origanum vulgare)

konsentrasi 30%, 60%, dan 90% berpengaruh terhaadap kadar jumlah

neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis.

2. Jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis lebih tinggi pada

pemberian ekstrak etanol daun Oregano (Origanum vulgare)

konsentrasi 30% dibandingkan konsentrasi 60%.

3. Jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis lebih tinggi pada

pemberian ekstrak etanol daun Oregano (Origanum vulgare)

konsentrasi 30% dibandingkan konsentrasi 90%.

4. Jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis lebih tinggi pada

pemberian ekstrak etanol daun Oregano (Origanum vulgare)

konsentrasi 60% dibandingkan konsentrasi 90%.

5. Jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis kelompok

perlakuan lebih rendah dibandingkan kelompok control negatif.

6. Konsentrasi efektif pemberian ekstrak etanol daun Oregano (Origanum

vulgare) terhadap jumlah neutrofil pada tikus Wistar model kandidiasis

adalah konsentrasi 60%.

 20

C. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian jenis eksperimental laboratoris.

Penelitian ini berupa perlakuan atau intervensi terhadap suatu variabel

sehingga diharapkan terjadi pengaruh terhadap variabel yang lain dengan

rancangan penelitian The post test only control group design, yaitu dengan

melakukan pengukuran atau observasi setelah perlakuan diberikan.

D. Lokasi dan Waktu Penelitian

Lokasi dan waktu penelitian ini dapat diuraikan sebagai berikut.

1. Lokasi Penelitian

Tempat penelitian ini di Laboratorium Pusat Antar Universitas

Fakultas Kedokteran Gigi UGM.

2. Waktu penelitian

Waktu pelaksanaan penelitian ini adalah bulan Januari 2019

E. Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak daun Oregano

2. Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah hitung sel neutrofil pada

tikus wistar jantan setelah pemberian Oregano 20%, 40%, 60%.

 21

3. Variabel Terkendali

a. Minuman dan makanan standar tikus

b. Cara pemeliharaan

c. Dosis dan teknik pemberian ekstrak daun Oregano

d. Jumlah dan teknik inokulasi Candida albicans

e. Waktu pengambilan sampel.

 22

F. Definisi Operasional

Definisi operasional dapat dilihat pada table 3.2

Table 3.2 Definisi Operasional

No. Variabel Definisi Operasional Cara Skala
Pengukuran
1 Oregano Merupakan suatu senyawa Pengukuran Rasio
yang berasal dari tumbuhan banyaknya
yang dibeli dipasaran yang di dosis
ambil dari tumbuhan yang menggunaka
mempunyai kandungan berupa n timbangan
thymol dan carvacol sehingga analitik, dan
peneleti ingin melihat pengambilan
perbadingan kosentrasi 20%, serta
40%, 60% yang paling efektif pengukuran
untuk menghambat pelarut
pertumbuhan jamur candida menggunaka
albicans n pipet
2 Nystatin Merupakan obat anti jamur Pengukuran Rasio
yang digunakan untuk banyaknya
mengatasi infeksi jamur dosis
dengan konsentrasi 10% menggunaka
n timbangan
analitik, dan
pengambilan
serta
pengukuran
pelarut
menggunaka
n pipet
3 Induksi Kondisi Candidiasis terjadi Pengukuran Nominal
Candida dengan mengiduksi jamur dilakukan
albican Candia albicans pada bagian dengan
sublingual dengan dosis 0,5 melihat
mcFarland sesuai uji baku Bagian sub
jamur setara dengan lingual dan
8
kepadatan 1 x 10 yaitu dilakukan
sebanyak 0.1 ml selama 7 hari swab pada
jaringan
yang rusak
dan
pemeriksaan
histologi
Neutrofil Neutrofil adalah salah satu Pengukuran
Nominal
jenis sel darah putih yang ada dilakukan
di dalam tubuh manusia. dengan
Tubuh membutuhkan melihat pada
neutrophil untuk melawan pemeriksaan
 23

infeksi, sekaligus melindungi histologi

tubuh dari ancaman penyakit

4,

G. Populasi dan Sampel Penelitian

1. Kriteria Inklusi

a. Umur tikus 2-3 bulan

b. Berat badan 150-200 gram

c. Tikus dalam keadaan sehat secara fisik dan memiliki tingkah laku

normal

d. Tikus setelah perlakuan mengalami kandidiasis

2. Kriteria Eksklusi

Kriteria eksklusi pada peneletian ini adalah tikus mati selama penelitian

3. Besar sampel penelitian

Kelompok tikus dibedakan menjadi 6 kelompok. Jumlah sampel dari

tiap kelompok dihitung menggunakan Rumus Federer, sebagai berikut.

(t-1) (n-1) ≥ 15

(5-1) (n-1) ≥ 15

4(n-1) ≥ 15

4n-4 ≥ 15

4n ≥ 19

n ≥5

Keterangan :
 24

t : jumlah perlakuan dalam penelitian

n : sampel

Berdasarkan perhitungan sampel di atas, dapat diambil kesimpulan

bahwa minimal sampel pada masing-masing kelompok adalah ≥ 5 ekor

tikus dengan penambahan sebesar ±10% untuk kriteria drop out sehingga

sampel yang diperlukan sebanyak 6 ekor tikus pada masing-masing

kelompok. Penelitian ini menggunakan 4 kelompok perlakuan dan 2

kelompok kontrol sehingga sampel per kelompok harus lebih atau sama

dengan 6. Penelitian ini menggunakan 6 ekor tikus per kelompok,

sehingga jumlah tikus yang dibutuhkan dalam penelitian ini adalah 36 ekor

tikus. Penenntuan tikus pada masing-masing kelompok perlakuan dengan

teknik simple random sampling yaitu cara pengambilan sampel yang

memberikan kesempatan yang sama untuk diambil kepada setiap elemen

populasi.

4. Pengelompokan Sampel

a. kelompok kontrol sehat tanpa diberikan perlakuan.

b. kelompok kontrol negatif dengan dipapar Candida albicans tanpa

perlakuan.

c. kelompok perlakuan 1 dengan pemberian ekstrak daun Oregano oil

dengan konsentrasi 20% selama 7 hari setelah dipapar jamur Candida

albicans.
 25

d. kelompok perlakuan 2 dengan pemberian ekstrak daun Oregano oil

dengan konsentrasi 40% selama 7 hari setelah dipapar jamur Candida

albicans.

e. kelompok perlakuan 3 dengan pemberian ekstrak daun Oregano oil

dengan konsentrasi 60% selama 7 hari setelah dipapar jamur Candida

albicans.

f. kelompok perlakuan 4 dengan Nystatin 10% per oral selama 7 hari

setelah dipapar jamur Candida albicans.

H. Sumber Data

Sumber data yang digunakan adalah sumber data primer yang diperoleh

langsung melalui prosedur penelitian.

I. Instrumen Penelitian

1. Alat penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang

pemeliharaan, kandang perlakuan, tempat makan dan minum, sonde

lambung, pinset , timbangan, scalpel dan gunting bedah, disposible syring

2,5 cc, object glass dan cover glass , mikroskop binokuler, saringan, papan

fiksasi.

2. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah masker, sarung

tangan, povidon iodine 10%, tikus putih galur wistar jantan, minuman dan
 26

makanan standar tikus yang beredar di pasar, daun oregano kemudian

dibentuk dalam sediaan ekstrak dengan konsentrasi 75%, minyak emersi

Aquades steril, ethylenediamine tetra acetic Acid (EDTA) 10%

J. Cara Pengumpulan Data

1. Perijinan dan Pengajuan Ethical Clearance

Permohonan dan pengajuan ethical clearance pada komisi etik

penelitian kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman,

Purwokerto.

2. Tahap Persiapan

Hewan coba tikus wistar jantan diadaptasikan terhadap lingkungan

kandang di laboratorium Universitas Gadjah Mada selama 1 minggu,

diberi makan standar dan air minum setiap hari secara adlibitum

(sesukanya). Selanjutnya tikus ditimbang dan dikelompokkan secara acak.

3. Pembuatan Ekstrak Daun Oregano

Pertama yang dilakukan adalah uji determinasi untuk melihat

kandungan dan manfaat dari daun Oregano selanjutnya daun Oregano 0,5

kg, dicuci dan di angin-anginkan hingga kering. Daun Oregano dihaluskan

menggunakan blander. Sediaan Serbuk daun Oregano dimaserasi

menggunakan etanol 96% sampai 24 jam. Hasil maserasi disaring dengan

menggunakan kertas saring. Hasil maserat dievaporasi dalam rotary

evaporator dalam suhu 40-50°C hingga didapat ekstrak kering daun

Oregano (Rahmawati, 2009).

 27

4. Pembuatan serial konsentrasi dari ekstrak daun Oregano

Ekstrak kering daun Oregano kemudian dibuat larutan stock dan

dibuat konsentrasi larutan yang diujikan dengan tahapan sebagai berikut

1. Larutan stock dibuat dengan melarutkan 5 gram ekstrak daun sirih

kering dalam 1000 ml air sehingga didapatkan konsentrasi 5000 ppm.

2. Untuk menentukan banyaknya larutan stock yang dibutuhkan dihitung

dengan persamaan

V1 x M1 = V2 x M2

Keterangan :

V1 : volume awal (volume larutan stock yang dibutuhkan)

M1 : konsentrasi awal (konsentrasi larutan ekstrak)
V2 : volume kedua (volume larutan ekstrak daun oregano yang
diujikan)
M2 : konsentrasi kedua (konsentrasi ekstrak daun oregano yang
diinginkan (Brady, 1994).
Berdasarkan persamaan diatas, dilakukan perhitungan dan didapat

bahwa untuk mendapatkan konsentrasi 0,01% larutan yang diujikan

dibutuhkan jumlah larutan stock, untuk mendapatkan konsentrasi 0,1%

dibutuhkan 20 ml larutan stock dan untuk mendapatkan konsentrasi 0,5%.

Untuk mendapatkan konsentrasi 0,5% dibutuhkan 100 ml larutan stock.

 28

5. Tahap Persiapan Candida allbicans

Stok Candida albicans didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi

Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Gadjah Mada. Pengenceran Candida

albicans dilakukan sampai 8-10 untuk mendapatkan konsentrasi. Pada

serial pengenceran ini, masing-masing tabung dikocok.

6. Tahap Perlakuan Hewan Coba

Kelompok I adalah kelompok kontrol (tikus tidak diberi perlakuan).

Kelompok II, tikus dipapar dengan Candida albicans secara sub lingual

sebanyak 0,9 cc / 200 gr BB pada hari pertama (Barid, 2008). Kelompok

III, tikus dipapar dengan Candida albicans pada hari pertama lalu tikus

diberi ekstrak daun Oregano 20%peroral sebanyak 3 ml / 200 gr BB

menggunakan sonde lambung dari hari ke-2 sampai hari ke-7.).

Kelompok IV, tikus dipapar dengan Candida albicans pada hari pertama

lalu tikus diberi ekstrak daun Oregano 40%peroral sebanyak 3 ml / 200

gr BB menggunakan sonde lambung dari hari ke-2 sampai hari ke-7.).

Kelompok V, tikus dipapar dengan Candida albicans pada hari pertama

lalu tikus diberi ekstrak daun Oregano 60%secaraperoral sebanyak 3 ml /

200 gr BB menggunakan sonde lambung dari hari ke-2 sampai hari ke-

7.). Kelompok VI, tikus dipapar dengan Candida albicans pada hari

pertama lalu tikus diberi Nystatain 10% secara peroral sebanyak 3 ml /

200 gr BB menggunakan sonde lambung dari hari ke-2 sampai hari ke-7.

Untuk melihat apakah injeksi candida albicans berhasil atau tidak dengan
 29

melihat bagian sub lingual apakah sudah muncul bintik-bintik putih atau

tidak.

7. Pemeriksaan Jumlah Neutrofil

Pemeriksaan Preparat histologi ini menggunakan mikroskop cahaya

untuk mengamati secara mikroskopik preparat sel neutrofil. Mula-mula

dilakukan perbesaran 100 kali kemudian digunakan perbesaran 400 kali.

Setiap preparat lidah tikus diamati melalui lima lapang pandang yang

berbeda. Pada setiap lapang pandang diamati perubahan-perubahan yang

terjadi. Setiap preparat digeser minimal lima kali lapang pandang

kemudian skor dijumlah dan dibagi lima, maka hasil dari lima kali

pergeseran itu adalah data dari satu preparat. Cara pemberian skor

sebagai berikut: apabila tidak terjadi perubahan histologi sel neutrofil,

maka diberi skor 0 (nol), jika terjadiperubahan histoplogi kurang dari

30% lapang pandang, maka diberi skor 1 (satu) dan dianggap perubahan

tingkat ringan. Apabila perubahan yang terjadi adalah 30-50%, dianggap

perubahan histopatologi tingkat sedang diberi skor 2 (dua). Dikatakan

mengalami perubahan histologi tingkat berat apabila pada satu lapang

pandang terjadi perubahan histologi lebih dari 50% dan diberi skor 3

(tiga).
 30

K. Alur Penelitian

Populasi tikus wistar

K1 K2 K3 K4 K5 K5
(6 tikus) (6 tikus) (6 tikus) (6 tikus) (6 tikus) (6 tikus)

Dipapar dengan Dipapar Dipapar Dipapar Dipapar

Candida dengan dengan dengan dengan
albicans di Candida Candida Candida Candida
sublingual pada albicans di albicans albicans albicans
hari pertama sublingual sublingual sublingual sublingual
pada hari pada hari pada hari pada hari
pertama pertama pertama pertama

Pemberian Pemberian Pemberian Pemberian

ekstrak Oregano ekstrakOregano ekstrakOregano ekstrakNystatin
oilper oral 20% oil per oral 40% oil per oral 60% hari per oral
hari ke-2 sampai hari ke-2 hari ke-2 10% ke-2
ke-7 sampai ke-7 sampai ke-7 sampai ke-7

Pada hari ke 10 dilakukan pengambilan jaringanyang rusak dengan cara swab di

sublingual

Pemeriksaan Histolgi

Data

Analisis data

Gambar 3. 2 Skema alur penelitian

 31

L. Analisis Data

Data yang diperoleh dianalisa dengan menggunakan uji normalitas

menggunakan saphiro wilk (N<50) dan uji homogenitas menggunakan levene

testapabila data normal dan homogen maka dilajutkan menggunakan

ujiparametrik One Way Anova (p<0,05), apabila data tidak normal maka

dilakukan uji non parametrik menggunakan Wilcoxonuntuk mengetahui perbedaan

pada masing-masing kelompok yang dibandingkan. Selanjutnya dilakukan uji post

hoc least significant difference (LSD) untuk melihat keefektifan dari beberapa

dosis.

M. Jadwal Penelitian

Uraian Kegiatan Bulan ke

No 1 2 3 4 5 6

1. Penyusunan proposal

2. Pencarian dan pengum-

pulan data

3. Analisa data

4. Penyusunan hasil
 32

DAFTAR PUSTAKA

Arcla-Lozano, C., 2011, Oregano: properties, composition and biological activity,

Arch Latinoam Mar 54(1):100-101.

Cao, C.F., dan Smith, Q.T.,1989, Crevicular Fluid Myeloperoxidase at Healthy,

Periodontitis Sites, Journal Clinical Pharmacology and Therapeutic, 56(5) :
483-493.

Chami, N., Bennis, S., dan Remmal, A., 2004. Antifungal treatment with carvacol
and eugenol of oral candidiasis in I mmunosuppressed rats, Brazilian Journal
Of Infectious Diseases.

Dadaliogllu, I., Evrendilek, G. A, 2012, Chemical compositions and antibacteral

effects oils of Turkish oregano (Origanum minutilorum), bay laurel (Laurus
nobilis), Spanish lavender (Lavandula stoechas L) and fennel (Foeniculum
vulgare) on common foodborne pathogens, Journal Agric Food Chemistry
52(26):8255-8260.

Depkes RI. 2013. Pusat Data dan Informasi Kementerian Kesehatan RI.

Hakim, L ., dan Ramadhian M., 2015. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 4. Fakultas

Kedokteran Lampung.

Hedayati, T., Ghazal S., 2010 Candidiasis in Emergency Medicine, Medscape.

Hidalgo JA, Jose AV, 2010 Candidiasis, Medscape.

Kiswari, 2014., Hematologi dan Transfusi. Jakarta : Erlangga

Lestari, P., 2010. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 7. Fakultas Kedokteran Gigi

Jember

Manohar, V., 2013, Antifungal activities of origanum oil against Candida

albicans, Mol Cell Biochem 228(1-2):111-117.

Mardjono, M. 2008. Farmakologi dan Terapi.Edisi 5.Fakultas Kedokteran

Universitas Indonesia.

Nugraha, G., 2015., Panduan Pemeriksaan Laboratorium Hematologi. Jakarta

.
Paddock C., 2008, Himalayan Oregano Efeective Against MRSA. Medical.
 33

Riswanto, 2013, Pemeriksaan Laboratorium Hematologi. Yogyakarta

Widmann, F.K. 1995. Tinjauan Klinis Atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium.

Edisi 9. Alih Bahasa Bagian Patologi Klinik FKUI/RSCM. “Clinical
Intrepetation of Laboratory Test”. Jakarta: EGC

WongsoHardjono S., dan Subagyo G., 2011, Kandidiasis Di Mulut Akibat

Khemoterapi Dan Penatalaksanaannya. Fakultas Kedokteran Gigi UGM