DOSIS INFEKSI DAN DOSIS MEMATIKAN

(Infective And Lethal Dose)

Pendahuluan
Seperti diketahui bahwa perhitungan partikel virus dapat kita lakukan baik secara fisika
(yakni dengan melihat dan menghitung partikel virus tersebut menggunakan elektron mikroskop)
atau berdasarkan pada konsep kimia (misalnya uji aglutinasi sel darah merah =
Haemagglutination (HA) test) dan uji biologi.
Pada uji biologis kita juga mengenal istilah dosis infeksi dan dosis mematikan. Istilah ini
digunakan untuk menyatakan adanya efek (akibat yang ditimbulkan) oleh virus baik pada sel
ataupun jaringan dari induk semang (host) yang peka (susceptible).
Infeksi diartikan sebagai suatu kesatuan yang meliputi :
1) masuknya bahan asing (agen) kedalam host yang peka
2) agen memperbanyak diri
3) agen keluar dari sel pertama,
4) agen tersebut mengadakan invasi baru kedalam sel yang lain/sel berikutnya host yang
sama.
Pada saat agen berada didalam sel maka akan selalu terjadi gangguan/kerusakan fungsi
sel tersebut. Apabila kerusakan/gangguan fungsi ini menyebabkan terjadinya perubahan fungsi
fisiologis dari inang, maka kita menyatakan inang tersebut menderita sakit. Oleh karena itu sakit
selalu dimulai dengan adanya infeksi, akan tetapi tidak semua infeksi menyebabkan terjadinya
sakit. Tergantung pada virulensi dari agen maka hewan yang sakit dapat berakhir dengan
kematian. Baik derajat infeksi atau derajat kematian yang disebabkan oleh adanya infeksi suatu
mikroorganisme ini dapat kita hitung secara kuantitatif yang kita kenal dengan dosis infeksi dan
dosis mematikan.
Tergantung pada host yang digunakan untuk pengujian maka satuan yang digunakan
didalam menyatakan derajat infeksi atau derajat kematian tersebut pun berbeda. Dengan
demikian kita kenal misalnya Embryo Infective Dose (EID); Chicken Infective Dose (CID); Chicken
Lethal Dose (CLD); Tissue Culture Infective Dose (TCID) dan lain sebagainya.
 PERCOBAAN INFECTIVE DOSE 50% (ID50) PADA TELUR EMBRIO TERTUNAS

Bahan dan Alat

1. Virus vaksin aktif Lasota
2. Larutan fisiologis PBS
3. Antibiotik: Penisilin dan Streptomisin
4. Telur Embrio Tertunas (TET) umur 9 hari sebanyak 35 butir
5. Tabung reaksi steril dengan penutup
6. Alat suntik 1 ml
7. Alat teropong telur
8. Kapas, alkohol, kolodium
9. Pipet 1 dan 5 ml.

Prosedur
1. Siapkan larutan inokulum yakni dengan menambahkan antibiotik penisilin sebanyak
10.000 IU, dan Streptomisin sebanyak 10.000 µg untuk setiap 1 ml larutan PBS
2. Susunlah satu deret tabung reaksi steril sebanyak 10 buah, beri nomor 1 s/d 10.
3. Pipet larutan inokulum masing-masing 0,9 ml dari tabung 1 s/d tabung ke 10.
4. Pipet 0,1 ml virus vaksin aktif Lasota, masukkan pada tabung ke satu.
5. Lakukan homogenisasi dengan cara menghisap dan meniup atau dengan menggunakan
alat mixer.
6. Dengan menggunakan pipet 1 ml pindahkan 0,1 ml dari tabung ke satu ke tabung ke dua.
Lakukan cara nomor 5 diatas.
7. Pindahkan 0,1 ml dari tabung ke dua ke tabung ke tiga. Lakukan cara no 5 diatas.
8. Hal yang sama lakukan sampai pada tabung no 10. Cara pengenceran seperti ini disebut
pengenceran “desimal” karena terjadi pengenceran kelipatan sepuluh. Dengan demikian
dapat dituliskan, berturut-turut dari tabung pertama pengenceran sebagai berikut: 10-1, 10-
2
, 10-3, 10-4, .......... dan seterusnya sampai 10-10.
9. Siapkan telur embrio tertunas untuk inokulasi (lihat prosedur inokulasi ke ruang alantois).
10. Lakukan penyuntikan ke ruang alantois dengan dosis 0,1 ml, masing-masing sebanyak 5
butir telur dimulai dari kontrol, pengenceran 10 -10, 10-9 dan seterusnya sampai
pengenceran 10-4
 11. Telur tersebut kemudian dieramkan dalam inkubator dengan temperatur 37 oC. adakan
pengamatan setiap hari sampai hari ke empat. Pada hari ke lima semua telur dimasukkan
dalam lemari es 4 oC agar embrio mati.
12. Lakukan uji aglutinasi cepat dari cairan alantois setiap telur pada gelas objek (lihat
prosedur melakukan uji ini). Catat dan hitung hasil yang didapat menggunakan cara Reed
dan Muench.

Perhitungan
Untuk memudahkan pemahaman penggunaan cara Reed dan Muench dalam menghitung
hasil percobaan. Tabel berikut digunakan sebagai contoh.

Contoh penghitungan infeksi 50% menggunakan cara Reed dan Muench.

Log 10 Hasil Individu Hasil Kumulatif Rasio Persenta
Pengenceran Positif Negatif Positif Negatif Total Positif se Positif
-4 5 0 21 0 21 21/21 100
-5 5 0 16 0 16 16/16 100
-6 5 0 11 0 11 11/11 100
-7 4 1 6 1 7 6/7 86
-8 2 3 2 4 6 2/6 33
-9 0 5 0 9 9 0/9 0
-10 0 5 0 14 14 0/14 0

Dari tabel diatas terlihat bahwa infeksi 50% terletak diantara log pengeceran -7 dan log
pengenceran -8. Untuk mendapatkan nilai yang sebenarnya, maka kita lebih dahulu mencari nilai
proporsi. Proportion Distance disingkat PD menggunakan rumus berikut:

% 𝑡𝑒𝑝𝑎𝑡 𝑑𝑖𝑎𝑡𝑎𝑠 50%−50%

PD =
% 𝑡𝑒𝑝𝑎𝑡 𝑑𝑖𝑎𝑡𝑎𝑠 50%−% 𝑡𝑒𝑝𝑎𝑡 𝑑𝑖𝑏𝑎𝑤𝑎ℎ 50%

Dengan demikian nilai PD untuk contoh diatas didapatkan nilai sebagai berikut:

86−50 36
PD = = = 0,68
86−33 53
 Nilai ini adalah nilai yang harus kita tambahkan dari log 10-7. Dengan demikian maka log
10 yang dapat menginfeksi 50% adalah:

Log 10 ID50 = -7,00 - (0,68 x 1,0) = -7,68

Ini berarti apabila contoh sediaan asal telah kita encerkan sebanyak 10 7,68 kali lalu kita
suntikkan pada hewan percobaan (dalam hal ini telur berembrio) maka terjadi infeksi 50% dari
jumlah hewan percobaan tersebut (nilainya 1 ID 50). Dengan perkataan lain, kembali pada contoh
diatas maka titer virus asal yang kita dapat adalah 107,68 ID50 setiap 0,1 ml atau 108,68 (dibulatkan
108,7 ID50 setiap 1 ml). Pernyataan titer didalam 0,1 ml adalah volume inokulum, apabila
inokulumnya adalah 0,2 maka nilai mililiter otomatis dikalikan dengan 5 atau dengan penambahan
log 0,7. Jadi misalnya contoh diatas bila digunakan inokulum 0,2 ml maka titernya adalah
107,7/0,2 ml atau 5x107,7 ID50/ml atau 108,4 ID50/ml.

DOSIS MEMATIKAN
(Lethal Dose)

Prinsip cara penghitungannya sama saja dengan percobaan mencari infeksi 50%. Hanya
disini yang diamati adalah terjadinya kematian dari hewan percobaan. Dengan demikian kita
bekerja menggunakan mikroorganisme patogen.
 PENUNTUN PRAKTIKUM VIROLOGI

Laporan Praktikum XI
Embryo Infective Dose 50% ( EID50 )

Kerjakan laporan sesuai tugas seperti yang diminta dalam video minggu ini