Perangkat mikrofluida origami tiga dimensi untuk kromatografi kertas: Aplikasi untuk menghitung

Tartrazine dan Indigo carmine dalam sampel makananan

Abstrak

Di sini, kami melaporkan kromatografi kertas tiga dimensi (3D-PC) sebagai platform kromatografi mikro.
Metode ini didasarkan pada penerapan perangkat mikrofluida origami untuk pemisahan, ditambah
dengan metode kolorimetri untuk penentuan simultan. Fabrikasi perangkat mikrofluida adalah
pendekatan pencetakan yang lancar. Dua pewarna makanan azo, Tartrazine (E102) dan Indigo carmine
(E132), dipilih sebagai model analit, sedangkan buffer karbonat-bikarbonat digunakan sebagai fase
gerak. Perangkat kromatografi mikro kami dikaitkan dengan dua keuntungan besar termasuk
membutuhkan volume fase gerak yang sangat kecil (~ 12 μL) dan waktu pemisahan sangat cepat (~ 35
detik). Di bawah kondisi optimal, metode ini menyediakan rentang linier yang dapat diterima dari 0 g L –
1
–18,0 g L – 1 (R2 = 0,997) untuk E102 dan 0,070 g L – 1–10,0 g L – 1 untuk E132 dan batas deteksi (3σ /
kemiringan) dievaluasi masing-masing sebagai 0,620 dan 0,060 g L – 1. Metode yang diusulkan berhasil
diterapkan dalam pemisahan dan kuantifikasi zat warna ini dalam produk makanan komersial seperti
jelly, permen, dan empat jenis sampel minuman tanpa persiapan sampel sebelum dianalisis. Nilai
pemulihan rata-rata untuk analisis sampel nyata berada dalam kisaran 100,14% -102,38% untuk E132
dan E102 masing-masing. Standar deviasi relatif antar perangkat berada pada kisaran 1,5% -11,8%.
Secara total, kromatografi μPAD kami kecil (1,0 cm × 1,0 cm × 0,5 cm), portabel, murah, tidak
memerlukan pengguna khusus, memerlukan volume sampel rendah (0,5 μL), dan dapat melakukan
pemisahan menggunakan 12 μL fase gerak berair dalam waktu yang sangat singkat.

Introduction

Di antara teknik analisis, kromatografi planar (baik kertas maupun kromatografi lapis tipis) tetap menjadi
metode pemisahan yang menarik karena keuntungan yang tak terbantahkan termasuk kemudahan,
hemat biaya, persiapan sampel minimum yang diperlukan, kemungkinan menganalisis beberapa sampel
pada waktu yang bersamaan, dan relatif konsumsi pelarut lebih sedikit dibandingkan dengan metode
pemisahan lainnya [1]. Selain itu, fase diam baru digunakan untuk setiap pemisahan dalam kromatografi
planar, sehingga sampel yang tidak dibersihkan dapat diterapkan ke fase diam tanpa memerlukan
langkah pembersihan sampel [2]. Karena kelebihan ini, kromatografi kertas masih digunakan di
laboratorium yang berbeda, misalnya untuk pemantauan kendali mutu makanan dan obat [3–5].

Secara umum, miniaturisasi instrumen analitik menyebabkan pengurangan konsumsi sampel / reagen,
risiko kontaminasi, biaya per analisis, dan waktu analisis, juga meningkatkan sensitivitas, selektivitas,
dan keandalan dibandingkan dengan sistem tradisional [6]. Aspek-aspek ini telah didorong ke arah
miniaturisasi dalam kromatografi [7-10], meskipun di sebagian besar studi miniaturisasi ini, teknologi
canggih dan memakan waktu telah digunakan untuk fabrikasi instrumen.

Saat ini, teknologi microfluidic paper-based devices (μPAD) telah banyak digunakan di hampir setiap
bidang ilmu pengetahuan karena beberapa keunggulan kertas seperti biaya rendah, fleksibilitas dan
kekuatan mekanik, mudah ditumpuk, disimpan, diangkut, sehingga dapat dengan mudah didapat.
dimodifikasi dan berpola, sangat tersedia, biokompatibel, dan memiliki aliran yang digerakkan oleh
kapiler tanpa membutuhkan gaya eksternal, dan kemampuan beradaptasi dengan berbagai metode
deteksi [11-14]. Melakukan kromatografi kertas pada μPADs telah dilaporkan oleh Murphy et al. untuk
pemisahan asam askorbat dan dopamin [15]. Namun, kromatografi kertas pada μPAD 2-dimensi
mungkin memiliki resolusi rendah sehingga sulit untuk memilih tempat untuk analisis pasca.

Dalam esai ini, kami memperkenalkan μPAD berbasis origami 3 dimensi untuk kromatografi kertas.
Saluran mikro hidrofilik dibuat dengan menumpuk lapisan kertas (dalam cetakan kaca tanpa
menggunakan lem), masing-masing memiliki zona hidrofilik kecil dengan ukuran dan bentuk yang sama.
Jadi, kromatografi dikembangkan pada kedalaman kertas, bukan pada permukaan kertas. Panjang
saluran dapat divariasikan dengan memvariasikan jumlah lembar kertas. Pada akhir kromatografi,
dengan membuka lipatan lapisan kertas, bintik-bintik diamati pada lembaran kertas yang berbeda. Jadi,
resolusi ukuran ketebalan kertas tercapai.

Pendekatan ini, yang sangat cepat dan membutuhkan volume fase gerak yang sangat kecil, digunakan
untuk menganalisis dua zat pewarna aditif makanan. Pewarna ditambahkan secara luas ke berbagai
produk makanan, serta obat-obatan, kosmetik, dan farmasi untuk membuatnya lebih menarik secara
visual. Konsumsi pewarna makanan masih menimbulkan serangkaian keraguan tentang toksisitasnya
[16]. Baru-baru ini, perhatian yang meningkat telah diberikan pada bahan tambahan yang digunakan
dalam makanan, yaitu pewarna Azo seperti Tartrazine (E102) dan Indigo carmine (E132) [17,18].

Berbagai teknik analitik telah dikembangkan dan digunakan untuk menentukan individu dan campuran
pewarna makanan sintetis dalam berbagai matriks [19,20] seperti enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA) [21], teknik elektroanalitik [22,23], spektrofotometri [ 24], metode kolorimetri [25],
elektroforesis kapiler [26], kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) [27,28], dan kromatografi lapis tipis
(KLT) [29]. Beberapa teknik ini memungkinkan mencapai sensitivitas dan resolusi tinggi pewarna
makanan, meskipun secara ekonomi mahal dan biasanya memerlukan beberapa langkah ekstraksi dan
sampel sebelum perlakuan yang memakan waktu. Semua langkah ini memiliki potensi untuk
mempengaruhi hasil analitis dengan hilangnya sebagian kecil analit dan peningkatan pelarut beracun
dan konsumsi tenaga kerja [30,31].

Di sini, penerapan TLC μPAD 3 dimensi yang dirancang, sebagai perangkat analitik yang murah, portabel,
dan dapat dibuang untuk pemisahan dan penghitungan cepat dua pewarna azo, Tartrazine (E102) dan
Indigo carmine (E132), sebagai analit model, dilaporkan.

Materia dan Metoda

Chemical

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini memiliki kemurnian tertinggi yang tersedia: pewarna
makanan sintetis Tartrazine (E102) dari Acros, natrium bikarbonat dari Interchem INC, Glisin dari AnalaR,
etanol dan aseton dari Panreac, serta asam asetat dan asam borat dari BDH. Kertas kromatografi
Whatman grade 2 (ukuran pori 8 μm dan ketebalan nominal 190 μm), dimetil sulfoksida (DMSO), dan
asam N-sikloheksil-3-aminopropanesulfonat (CAPS.) Dibeli dari Sigma-Aldrich. Semua reagen lainnya
(Indigo carmine (E132), sodium carbonate, KNO3, NaOH, n-hexane, methanol, acetonitrile, ammonia,
isopropyl alcohol, phosphoric acid, dan 1-propanol) memiliki kualitas analitik dan dibeli dari Merck.
Semua larutan disiapkan dalam air deionisasi.

Peralatan
Perangkat yang digunakan dalam metode ini terdiri dari printer (HP laserjet1320), mikropipet Merk
(Wertheim), oven (Memmert), dan pemindai desktop flatbed (Canon, CanoScan LiDE 700F). Pengukuran
pH dilakukan dengan Metrohm 780 pH-meter menggunakan elektroda kaca gabungan. Terakhir,
digunakan cetakan kaca untuk menampung μPAD, yang dibuat di toko kaca lokal.

Sistem HPLC (Knauer Azura) terdiri dari pompa biner, injektor manual, degasser, dan detektor UV-vis,
yang dikontrol oleh perangkat lunak ClarityChrom, digunakan

Larutan

Larutan stok pewarna makanan (10,0 g L – 1 E132 dan 100,0 g L – 1 E102) disiapkan dengan melarutkan
jumlah yang sesuai dalam air suling ganda. Campuran biner analit yang diperlukan serta buffer dibuat
setiap hari. Konsentrasi pewarna dalam campuran berkisar antara 0,010 hingga 30,0 g L – 1 untuk E102
dan 0,010 hingga 10,0 g L – 1 untuk E132.

Sampel asli adalah produk komersial yang biasanya dijual di toko grosir lokal (Shiraz, Iran). Mereka
termasuk bubuk jelly padat, dan permen (Farmand; Iran), minuman ringan seperti limun & Aloe Vera
(Parto Baran Asia, Iran), minuman jus apel (Golden Max, Iran), air berkarbonasi (Khoshgovar. Iran), dan
berkarbonasi minuman jeruk (Pepsi Persia, Iran). Untuk menyiapkan larutan encer dari sampel permen,
sampel tersebut digiling dalam mortar dan 15 g bagian bahan yang diarde dilarutkan dalam air deionisasi
dalam labu ukur 100 mL (25 ° C). Larutan sampel jelly dibuat dengan melarutkan 25 g sampel 100 mL air
deionisasi, secara langsung dan tanpa penggilingan.

Pelabelan makanan di Iran tidak menunjukkan secara tepat jenis dan jumlah pewarna sintetis yang
ditambahkan, oleh karena itu, untuk mempelajari pemulihan, sampel komersial (4 minuman dan 2
larutan bahan makanan padat) dibubuhi campuran E102 dan E132 dengan jumlah yang sesuai.
Kemudian, setelah paling sedikit 24 jam, sampel dianalisis tanpa pengenceran atau metode pembuatan
lainnya. Setiap percobaan diulang tiga kali untuk larutan campuran warna standar dan sampel nyata.

Desain dan fabrikasi perangkat berbasis kertas

Di antara berbagai teknik [32-34], kami memilih pencetakan laser sebagai strategi yang mudah, cepat,
hemat biaya dan ramah lingkungan untuk fabrikasi μPAD [35-37]. Sebagai langkah pertama untuk
fabrikasi μPAD, kertas dicuci untuk menghilangkan kontaminan potensial yang ada di permukaan dan di
dalam kertas. Metode pencucian mirip dengan yang kami laporkan sebelumnya [35,36].

Pola perangkat yang diinginkan (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1) digambar di AutoCAD 2015
dan kemudian dicetak dengan laser pada kertas filter yang telah dicuci sebelumnya. Setiap kotak hitam
(1,0 cm2) mewakili lapisan perangkat origami. Area hitam yang dicetak membuat kertas menjadi
hidrofobik; menyimpan kertas cetakan dalam oven 200 ° C selama 40 menit menyebabkan partikel tinta
meleleh dan menyumbat pori-pori kertas [37]. Lingkaran putih (diameter 3,0 mm) menunjukkan saluran
hidrofilik (kolom kromatografi). Perlu dicatat bahwa pola kertas dengan pencetakan laser sisi ganda
awalnya disarankan oleh Dey et al. [38]. Dengan modifikasi prosedur dalam kelompok penelitian kami,
kami dapat menggunakan pencetakan satu sisi untuk hidrofobisasi dan pola kertas [36].

Prosedur analitis untuk pemisahan campuran pewarna makanan dengan μPAD

Prosedurnya ditunjukkan secara skematis pada Gambar 1. Saluran hidrofilik 3 dimensi dibuat
menggunakan 23 lapis kertas. Alikuot 0,5 μL dari larutan analit (campuran E102 dan E132 atau larutan
individualnya) disuntikkan ke lapisan kedua dan setelah kertas dikeringkan, kertas dilipat menjadi
origami 3D μPAD. Ukuran μPAD yang dihasilkan adalah 1.0 × 1.0 × 0.5 cm. Setelah itu, μPAD dipasang di
antara dua pelat kaca persegi panjang yang dihubungkan dengan baut dan mur. Melalui pori yang
tertanam di tengah pelat kaca, fase gerak diterapkan dengan mikropipet. Pengembangan kromatografi
dilakukan pada suhu lingkungan.

Untuk semua percobaan, setelah menyelesaikan proses pemisahan, μPAD dipaparkan ke udara hingga
kering. ΜPAD yang tidak terlipat dipasang pada selembar kertas menggunakan pita perekat dua sisi.
Kemudian dipindai oleh pemindai digital beberapa kali berturut-turut (minimal 3 kali) dan gambar digital
disimpan dalam format JPG. Kemudian, gambar rata-rata dihitung [39] menggunakan perangkat lunak
MATLAB. Nilai rata-rata elemen warna RGB atas piksel di seluruh lingkaran di setiap lembar digunakan
sebagai sinyal analitik. Untuk mengabaikan efek timbal balik dari lapisan yang berdekatan, yang
dilampirkan secara langsung, nilai warnanya diringkas. Kromatogram diperoleh dengan memplot
intensitas warna di atas nomor lapisan.

Kondisi kromatografi HPLC

Untuk mengevaluasi hasil perangkat kami, HPLC sebagai teknik yang paling umum digunakan untuk
penentuan pewarna sintetis dalam bahan makanan [20] digunakan. Pemisahan dicapai dengan
menggunakan Eurosfer 100-5 C18 Kolom 250 × 4,6 mm (Knauer), dan elusi isokratik dengan air: metanol
(1: 1). Laju aliran diatur pada 1,0 mL menit -1, dan volume injeksi adalah 10 μL. Panjang gelombang
deteksi detektor, yang sesuai dengan penyerapan maksimum pewarna, ditetapkan pada 427 nm dan 608
nm untuk Tartrazine dan Indigo carmine, masing-masing. Sentrifugasi larutan dilakukan selama 20 menit
pada 3000 rpm dan supernatan disaring melalui membran nilon berukuran pori 0,22 μm sebelum
diinjeksikan ke kolom HPLC. Setiap percobaan diulang tiga kali untuk larutan campuran warna standar
dan sampel nyata.

Result and discus

Struktur origami tiga dimensi diperoleh dengan melipat n lapis kertas sepanjang jarak tersebut. Lapisan-
lapisan tersebut dipasang rapat dengan mengikatnya di antara dua lembar cetakan kaca dan
dikencangkan dengan sekrup (Gbr. S1 dan S2, informasi pendukung). Dalam hal ini, lingkaran hidrofilik
yang bertumpuk membentuk kolom kromatografi dengan tinggi 190n (dalam μm). Sebelum melipat
lapisan kertas, larutan sampel diinjeksikan pada lingkaran hidrofilik lapisan kedua dan biarkan
mengering. Setelah mengencangkan dua lapisan cetakan kaca, fase gerak diinjeksikan pada zona
hidrofilik lapisan pertama. Spotting sampel pada lapisan kedua sebelum pelipatan dilakukan sesuai
prosedur yang dilakukan dalam KLT konvensional, yaitu sampel terlihat pada jarak tertentu dari tepi
kertas. Juga, jika sampel ditambahkan setelah pelipatan, analit akan menembus ke lapisan berikutnya
selama penguapan pelarut dan ini akan menyebabkan pelebaran pita dan efisiensi pemisahan yang lebih
rendah. Selain itu, dengan adanya lapisan spacer ini, dispersi fluida fase gerak menjadi lebih homogen
[40].

Sebelum dilakukan pemisahan kromatografi, keterbasahan permukaan μPADs ditentukan oleh sudut
kontak permukaan-cair. Area putih μPAD menunjukkan sudut kontak kecil (31,59 °) menunjukkan
keterbasahan tinggi, sedangkan sudut kontak besar (90 °) menunjukkan keterbasahan rendah (atau
hidrofobisitas tinggi) dari bagian hitam dari pola yang dicetak (Gbr. S3, mendukung informasi).

TLC berbasis 3D μPAD digunakan untuk pemisahan dan kuantisasi E102 dan E132 sebagai analit model.
Namun, dapat diterapkan untuk memisahkan pewarna yang larut dalam air lainnya dengan memilih fase
gerak yang tepat. Gambar μPAD sebelum dan sesudah pemisahan kromatografi dari masing-masing
anlyte dan campurannya diberikan pada Gambar. 2. Kromatogram yang dihasilkan juga diberikan dalam
Gambar ini. Seperti yang ditunjukkan, Indigo carmine (pewarna biru) berhenti setelah melewati
beberapa lapisan pertama, sedangkan Tartrazine (pewarna kuning) lebih terkonsentrasi di tengah jalur
kolom. Intensitas warna pada lapisan kedua dan kedelapan masing-masing dapat digunakan untuk
kuantitasi Indigo carmine dan Tartrazine. Perlu dicatat bahwa gambar dan plot yang ditunjukkan pada
Gambar. 2 diperoleh setelah pengoptimalan. Pada bagian berikut, langkah-langkah pengoptimalan akan
dijelaskan.
Optimasi kondisi eksperimental

Biasanya, jumlah fasa gerak serta waktu pemisahan berhubungan dengan diameter saluran. Kami
mencoba menggunakan diameter saluran sekecil mungkin. Dengan demikian, saluran dengan diameter
1, 3, 5, 7, dan 9 mm diperiksa. Seperti yang diharapkan, dengan mengurangi lebar saluran, jumlah fase
gerak untuk mengisi seluruh volume saluran berkurang dan pada saat yang sama waktu yang dibutuhkan
untuk mengisi saluran juga berkurang. Namun untuk diameter 1 mm membutuhkan injeksi fasa gerak
dan larutan sampel yang sangat presisi agar tidak keluar dari bagian hidrofilik. Untuk menurunkan
ketidaktepatan dalam percobaan, diameter saluran 3 mm digunakan untuk penelitian selanjutnya.
ΜPAD dengan ukuran ini membutuhkan fase gerak 12,0 μL dan dibutuhkan waktu 35 detik untuk fase
gerak dari lapisan pertama ke lapisan terakhir.
Setelah fase gerak tiba ke lapisan terakhir μPAD, perangkat dibuka dan dikeringkan [3]. Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar. 3, setelah pengembangan kromatografi terjadi perubahan intensitas warna.
Namun, setelah sekitar 10 menit, intensitas warna tetap konstan. Jadi, dalam esai ini, μPAD dipindai 10
menit setelah pengembangan kromatografi.

Komposisi pelarut merupakan salah satu faktor paling berpengaruh yang harus diperhatikan dalam
optimalisasi sistem pemisahan [2,41]. Perlu diketahui bahwa sebelum dilakukan pemisahan
kromatografi pada μPAD dilakukan dengan cara konvensional (kromatografi kertas curah). Telah diamati
bahwa pemisahan yang lebih baik dicapai dengan menggunakan larutan encer daripada pelarut organik.
Ini adalah kabar baik bagi kami karena sistem fabrikasi mikrofluida berdasarkan pencetakan laser tidak
bekerja dengan baik untuk pelarut non-air [42].

Kemudian, pengaruh pH dan jenis buffer pada efisiensi pemisahan untuk campuran E102 dan E132
dipertimbangkan. Untuk melakukannya, buffer Britton-Robinson dengan nilai pH 2.0-12.0 digunakan.
Konsentrasi buffer dalam fase gerak adalah 0,10 M. Gambar dan kromatogram yang dihasilkan untuk
campuran analit pada pH yang berbeda ditunjukkan pada Gambar. 4. Untuk memilih pH optimum,
bentuk puncak dan pemisahan puncak dipertimbangkan. Oleh karena itu, pH 10,0 dipilih untuk analisis
selanjutnya karena pemisahan puncak terbesar diamati pada pH ini. Selain itu, bentuk puncak terlihat
lebih bagus. Setelah itu, pengaruh jenis buffer diperiksa. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 4 (III),
Britton-Robinson dan buffer karbonat-bikarbonat bekerja serupa. Namun, kromatogram dari yang
terakhir mewakili pemisahan puncak yang lebih baik. Jadi, selanjutnya, buffer karbonat-bikarbonat
dengan pH 10.0 digunakan.

Selain pemilihan fasa gerak, pengaruh konsentrasi garam sebagai faktor yang mempengaruhi efisiensi
fasa gerak dipelajari dengan menggunakan KNO3 sebagai garam anorganik netral. Hasilnya ditunjukkan
pada Gambar. 5 untuk konsentrasi garam yang berbeda. Seperti yang terlihat, pada konsentrasi garam
rendah, intensitas puncak Indigo carmine sangat besar sedangkan pada Tartrazine sangat kecil. Dengan
meningkatkan konsentrasi garam hingga 0,50 M, peningkatan intensitas puncak Tartrazin dapat diamati.
Setelah itu, tidak ada perbaikan lebih lanjut dalam bentuk dan intensitas puncak yang diamati.

Analisis kuantitatif pewarna makanan

Kondisi optimal digunakan untuk analisis kuantitatif pewarna makanan dengan 3D μPAD. Mengenai
ruang warna RGB, di antara kombinasi tunggal (R, G atau B), biner (R + G, R + B atau B + G) dan tersier (R
+ G + B), kombinasi biner R + B ( RB) memberikan kurva kalibrasi terbaik dan selanjutnya hasil yang
diperoleh oleh ruang warna ini dijelaskan. Dalam metode TLC berbasis pencitraan, intensitas warna
diukur pada jarak tertentu dari titik bercak [43]. Di sini, kami mengukur intensitas warna pada lapisan
kertas tertentu. Gbr. 6 menunjukkan secara skematis lapisan kertas (lapisan ke-2 dan ke-8 untuk E132
dan E102, masing-masing) yang digunakan untuk menurunkan kurva kalibrasi. Selain itu,
membandingkan dengan kromatografi kertas konvensional dan KLT yang mengalami pelebaran puncak
karena kelambatan difusi dalam fase gerak [44], menerapkan bintik-bintik yang terpisah menggunakan
pola origami dapat menghilangkan masalah analisis kuantitatif [42,45].

Untuk mendapatkan kurva kalibrasi dengan μPAD yang dirancang, beberapa larutan standar dari
campuran dua warna disiapkan. Perbandingan konsentrasi E102 dan E132 dalam campuran dijaga 1: 1
dan konsentrasi divariasikan hingga 10,0 g L – 1 (batas ekstrim kelarutan E132 dalam media berair).
Juga, beberapa campuran dengan konsentrasi E132 10,0 g L – 1 tetapi dengan jumlah E102 yang lebih
besar disiapkan. Gambar dari μPAD yang tidak dilipat dan masing-masing kromatogram untuk beberapa
campuran biner pewarna ditunjukkan pada Gbr. 7. Kurva kalibrasi diberikan pada Gbr. 8.

Diobservasi hubungan linier antara intensitas warna dan konsentrasi Tartrazine pada kisaran 0,70 g L –
1– 18,0 g L – 1 (R2 = 0,997) dengan batas deteksi 0,67 g L – 1 (berdasarkan persamaan 3σ / kemiringan, σ
adalah simpangan baku). Dalam kasus Indigo carmine, hubungan logaritmik diamati dalam kisaran
konsentrasi 0,07 g L – 1–10,0 g L – 1 dengan batas deteksi (3σ / slope) 0,06 g L – 1.

Reproduksibilitas dan ketepatan metode yang diusulkan dinilai dengan menganalisis hasil larutan
standar dalam sehari dan antar hari untuk tiga konsentrasi E132 (1.0, 3.0, dan 10.0 g L − 1) dan E102
(0.70, 5.0, dan 15,0 g L − 1). Untuk menentukan pengulangan intra hari dilakukan lima kali pengukuran
berturut-turut (n = 5) selama sehari, sedangkan pengukuran penentuan pengulangan antar hari
dilakukan dalam lima hari berturut-turut (n = 5). Nilai deviasi standar relatif (RSD) yang diperoleh
ditunjukkan pada Tabel 1. Gambar dari μPAD yang tidak terlipat dan kromatogram terkait untuk setiap
konsentrasi ditunjukkan pada Gambar. S5 – S10 informasi pendukung.

Nilai RSD, yang bergantung pada konsentrasi, berada dalam kisaran 3–10%, yang dapat diterima untuk
analisis kuantitatif dengan kromatografi kertas. Karena untuk setiap analisis digunakan μPAD yang
terpisah, hasil eksperimen intra dan antar hari sangat mirip. Jadi, data yang diberikan dapat dianggap
sebagai reproduktifitas antar perangkat juga.

Analisis sampel nyata

Untuk mengevaluasi penerapan metodologi ini untuk sampel makanan nyata, enam matriks makanan
komersial yang berbeda, yang tidak memiliki pewarna hijau (campuran biru E132 dan kuning E102)
(sampel analit bebas), dipilih. Untuk produk makanan padat, mereka dilarutkan dalam air (Aloe Vera
jelly 15% W / V dan permen (25% W / V). Untuk sampel cair termasuk air berkarbonasi, minuman
berkarbonasi, minuman jus apel, dan Lemonade-Aloe Minuman vera, tidak ada pengenceran atau
persiapan lain yang dilakukan. Kurva kalibrasi diperoleh dalam bahan makanan ini sesuai dengan
metode kalibrasi pencocokan matriks yang dijelaskan, sebelumnya [46]. Gambar μPAD yang tidak
terlipat dan kurva kalibrasi terkait untuk setiap sampel nyata ditampilkan di Gambar S11 dan S12 dari
informasi pendukung.

Untuk menilai akurasi assay, pendekatan spike dan recovery dilakukan (Recovery% = (found value /
spiked) × 100). Selain itu, hasil yang diperoleh dengan metode ini dibandingkan dengan hasil HPLC.
Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2 dan 3. Pertama, tidak ada pewarna makanan yang terdeteksi dalam
sampel tidak berduri, yang berarti analit ini tidak ada atau berada di bawah batas deteksi. Hasil
pemulihan yang ditunjukkan pada Tabel 2 dan 3 menunjukkan bahwa metode yang diusulkan cukup
andal untuk pemisahan dan penentuan dua pewarna Azo (E 132 & E102) pada staf makanan yang
berbeda tanpa perlakuan awal. Nilai perolehan kembali dari 85,23% menjadi 110,48% dengan rata-rata
perolehan 100,14% untuk Indigo carmine (E132) dan dari 92,84% menjadi 110,03% dengan rata-rata
102,38% untuk Tartrazine (E102). Ketepatan metode yang dilaporkan sebagai RSD berada pada kisaran
3,05% -11,86% untuk Indigo carmine (E132) dan 1,53% -10,47% untuk Tartrazine (E102). Nilai RSD untuk
analisis sampel nyata lebih besar dari pada solusi standar. Namun, ada yang sebanding dengan metode
analisis kuantitatif sebelumnya dengan perangkat berbasis kertas [47].

Seperti semua orang tahu, langkah-langkah perlakuan awal sampel sebelum analisis HPLC membantu
melindungi kolom dan memperpanjang masa pakai injektor dan kolom. Namun, langkah-langkah ini
dapat mengakibatkan hilangnya sebagian kecil analit [30]. Untuk alasan ini, nilai pemulihan rata-rata
metode HPLC (masing-masing 85,23% dan 83,44% untuk E132 dan E102) lebih rendah daripada yang
diukur dengan metode yang diusulkan (masing-masing 100,14% dan 102,38% untuk E132 dan E102).
Namun, hasil yang lebih tepat diperoleh dengan HPLC.
Kesimpulan

Singkatnya, platform pemisahan miniatur memberikan analisis yang cepat dan hemat biaya, yang
membutuhkan jumlah pelarut yang sangat rendah. Metode kromatografi kertas yang menerapkan
teknik mikrofluida berbasis kertas origami ini melakukan pemisahan melintasi lebar kertas. Dalam hal
ini, ketinggian kolom kromatografi dapat dengan mudah diatur dengan mengubah jumlah lapisan kertas.
Penggabungan perangkat dengan analisis gambar digital memungkinkan penghitungan analit setelah
pemisahan. Metode ini berhasil digunakan untuk pemisahan campuran E132 dan E102 dalam berbagai
produk makanan termasuk air berkarbonasi, minuman berkarbonasi, dan minuman Lemonade-Aloe
Vera, jeli, jus apel dan permen dengan perolehan dalam kisaran ~ 85-110%.

Fitur yang menarik dari perangkat ini adalah untuk membuka lapisan kertas setelah pengembangan
kromatografi, yang memungkinkan pemrosesan pasca tempat yang terpisah. Perangkat miniatur ini
sangat cepat dibandingkan dengan TLC konvensional sambil mempertahankan fitur kromatografi kertas
lainnya dibandingkan dengan metode kromatografi canggih.

Reproduksibilitas perangkat kami tidak sebaik metode analisis yang canggih. Namun, ini lebih unggul
daripada banyak metode analitik mengenai konsumsi reagen dan pelarut, kecepatan, biaya,
kesederhanaan, keterampilan personel, dan operasi.

Penelitian di masa depan dapat dilanjutkan dengan memodifikasi permukaan kertas secara kimiawi,
yang memungkinkan interaksi spesifik antara analit dan fase diam dan mengembangkan metode yang
murah dan mudah tersedia untuk pembuatan perangkat yang memiliki kemampuan beradaptasi yang
baik dengan berbagai pelarut. Karena proses pemisahan yang sangat cepat oleh μPAD 3D dan
membutuhkan jumlah pelarut yang sangat rendah, ini dapat menjadi pilihan yang baik untuk pemisahan
rutin sebagai alternatif dari kromatografi kertas konvensional.