Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di:https://www.researchgate.net/publication/23191593

Penentuan kadar kreatinin serum dengan metode Jaffe dan cara kalibrasi untuk
menghilangkan masalah gangguan matriks

ArtikeldiKimia Klinik dan Kedokteran Laboratorium · Februari 2008

DOI: 10.1515/CCLM.2008.224 · Sumber: PubMed

KUTIPAN BACA
65 21.254

3 penulis, termasuk:

P. Sedlak

5PUBLIKASI 74KUTIPAN

LIHAT PROFIL

Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah olehP. Sedlakpada 02 Februari 2019.

Pengguna telah meminta peningkatan file yang diunduh.

 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
Clin Chem Lab Med 2008;46(8):1127–1133 - 2008 oleh Walter de Gruyter•Berlin•New York. DOI 10.1515/CCLM.2008.224
Penentuan kadar kreatinin serum dengan metode Jaffe dan cara
kalibrasi untuk menghilangkan masalah gangguan matriks
Vratislav Chromý1,*, Kateřina Rozkošná2dan
Pavel Sedlák3
1Institut Kimia, Fakultas Sains, Universitas Masaryk,
Brno, Republik Ceko
2Departemen Riset Diagnostik, Pliva-Lachema
Diagnostika, Brno, Republik Ceko
3Departemen Biokimia Klinis, Rumah Sakit Kota,
áslav, Republik Ceko
Abstrak
Latar belakang: Kalibrasi metode Jaffe untuk kreatinin
serum menggunakan satu standar berbasis serum yang
dilengkapi dengan standar kompensasi matriks buatan
Zat pengganggu Jaffe memungkinkan kalibrasi dua titik
dengan hasil yang sebanding dengan metode enzimatik.
metode: Spektrofotometri digunakan.
Hasil: Prosedur Jaffe mengkompensasi interferensi
serum/plasma dengan mengurangkan jumlah konstan
kreatinin yang kurang mengkompensasi kreatinin pada
anak-anak. Kalibrasi dua titik dengan sepasang standar
serum primer yang disertifikasi oleh prosedur
pengukuran referensi (pengenceran isotop, spektrometri
massa) atau dengan sepasang standar sekunder yang
terkait dengan bahan primer dapat memberikan hasil
yang sesuai dengan penentuan enzimatik. Kalibrasi
semacam itu terdiri dari penyeimbang absorbansi yang
sesuai dengan kromogen pengganggu Jaffe selain
kreatinin yang ada dalam standar di jalur kalibrasi,
sementara kalibrasi dua titik yang menggabungkan satu
standar dengan salin/air fisiologis selalu sangat
mendistorsi jalur kalibrasi. Kami menghitung/
menyiapkan matriks serum buatan yang mampu
mengkompensasi kromogen yang mengganggu Jaffe
dalam standar serum. Kesimpulan: Kalibrasi dua titik
metode Jaffe untuk kreatinin serum yang
menggabungkan hanya satu standar serum dengan
standar pencocokan larutan kreatinin memungkinkan
pengganggu hadir matriks memberikan hasil yang
sebanding dengan penentuan enzimatik, asalkan standar
tersebut dibuktikan/dikaitkan dengan prosedur
pengukuran referensi.
Clin Chem Lab Med 2008;46:1127–33.
* Penulis koresponden: Prof. Dr. Vratislav Chromý, Institut
Kimia, Fakultas Sains, Universitas Masaryk, Komenského
2, Brno, Republik Ceko Telepon:q420-549494555, Email:
vrch@chemi.muni.cz Diterima 18 Februari 2008; diterima
10 April 2008
2007/88
Kata kunci:matriks serum buatan untuk kalibrasi
metode Jaffe; kompensasi interferensi serum dalam
metode Jaffe; kreatinin serum Jaffe.
pengantar
Sebagian besar metode kimia untuk mengukur kreatinin
masih didasarkan pada reaksi dengan basa pikrat (Jaffe
1886). Kreatinin bereaksi dengan ion pikrat dalam media
basa untuk menghasilkan adukan merah jingga (1).
Reaksinya tidak spesifik dan banyak senyawa diketahui
menghasilkan kromogen mirip Jaffe, termasuk protein,
glukosa, asam askorbat, badan keton, piruvat, guanidin,
sefalosporin (2) dan bilirubin, yang terakhir adalah
interferensi negatif (3). Tingkat interferensi yang
disebabkan oleh senyawa-senyawa yang ada dalam
serum ini (yaitu, oleh matriks serum) juga tergantung
pada kondisi reaksi spesifik yang dipilih. Metode manual
secara tradisional merupakan metode kesetimbangan
dengan waktu reaksi sekitar 15 menit pada suhu kamar.
Uji kinetik dikembangkan untuk analisis dengan
spesifisitas yang lebih baik, karena beberapa adukan mirip
Jaffe dengan pikrat terbentuk dengan cepat selama 20 detik
pertama setelah pencampuran reagen dan sampel (seperti
asetoasetat) dan beberapa bereaksi lambat dalam 80-100
detik setelah pencampuran (seperti protein) dan
pengukuran kinetik antara 20-60 atau 20-80 detik sebagian
besar dikaitkan dengan reaksi kreatinin-pikrat (4).
Spesifisitas reaksi juga dipengaruhi oleh konsentrasi
pikrat/alkali. Reaksi Jaffe adalah orde satu semu
sehubungan dengan konsentrasi pikrat hingga 30 mmol/
L dan konsentrasi hidroksida lebih dari 0,5 mol/L (4). Ion
besi / besi diketahui mengkatalisis reaksi oksidasi. Sistem
dengan ferricyanide digunakan dalam reaksi Jaffe untuk
mengkatalisis oksidasi interferensi bilirubin menjadi
biliverdin (3). Demikian pula, ion tembaga/ tembaga dan
Cu(II)-tartrat juga digunakan sebagai katalis dalam reaksi
Jaffe sebagai pengganti ferisianida (5).
Beberapa metode enzimatik telah dikembangkan untuk
mengukur kreatinin, tetapi juga tidak bebas interferensi (4):
interferensi bilirubin biasanya diselesaikan dengan
menambahkan ferricyanide ke dalam reagen, interferensi
potensial yang disebabkan oleh asam askorbat dapat diatasi
dengan memasukkan askorbat oksidase dan Pengaruh
intermediet creatine dan urea biasanya diselesaikan pada
urutan enzim pertama dengan preinkubasi dengan
creatininase. Prosedur pengukuran referensi (RMP)
menggunakan pengenceran isotop dengan spektrometri
massa (ID-MS) (6) digunakan untuk pengujian kreatinin
dalam kalibrator Bahan Referensi Standar (SRM).
Namun demikian, reaksi kinetik Jaffe dengan apa yang disebut
pengukuran jendela (pengukuran waktu reaksi yang dipilih)
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
1128 Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe

urin dalam 20-80 detik) masih tetap menjadi metode utama serum dengan hasil yang sebanding dengan metode
untuk kreatinin serum dan urin (4), meskipun diketahui enzimatik.
melebih-lebihkan "kreatinin plasma/serum sebenarnya
sekitar 20% pada nilai fisiologis", yang sekarang tidak
diragukan lagi diketahui disebabkan oleh nonspesifisitas Bahan dan metode
reaksi Jaffe dan dengan demikian masih ada masalah yang
interferensi selalu hadir dalam matriks serum (4, 7, 8). Peralatan
Pengganggu serum utama dalam reaksi Jaffe adalah protein
Spektrofotometer Shimadzu UV-160 (Shimadzu, Tokyo, Jepang)
(9), yang kandungannya berbeda secara signifikanwlihat (10)
dengan lampu tungsten, sel kuarsa jalur cahaya 10"0,01 mm dan
xpada orang dewasa dan pada anak-anak. Sayangnya, waktu
pengubah rak sel 6 posisi yang dipanaskan hingga 258C atau 37 "0,1"
reaksi yang direkomendasikan untuk prosedur Jaffe (4) 8C oleh perangkat Peltier (Shimadzu), dengan panjang gelombang
memiliki fase jeda dan waktu reaksi terlalu pendek untuk 492"0,4 nm digunakan. Spektrofotometer Shimadzu hanya
digunakan bahkan untuk rangkaian kecil sampel kreatinin digunakan untuk prosedur Jaffe manual dengan reagen satu bagian
yang dibuat pada alat analisis yang biasanya telah diatur untuk mendapatkan data yang diberikan pada Gambar 1 dan Tabel 1.
sebelumnya untuk diukur dalam interval 60-180 detik. Sebuah Hitachi 911 Automatic Analyzer (Hitachi Ltd., Tokyo,
Beberapa produsen diagnostik in vitro (alat analisis, Jepang) dengan kisi difraksi cekung digunakan. Semua analisis
dilakukan pada 37"0.28C pada panjang gelombang 505"2 nm dan
standar, penganalisis, dll.) memecahkan masalah
570 nm (tambahan) dalam sel reaksi 6 mm dengan penghitungan
interferensi dalam prosedur berbasis Jaffe mereka dalam
ulang otomatis absorbansi hingga 10 mm. Penganalisis Hitachi
perangkat lunak penganalisis dengan mengurangkan
digunakan untuk semua Jaffe otomatis dan pengukuran enzimatik
konstanta 26mmol/L kreatinin sebagai ''nilai rata-rata (11) yang melibatkan reagen dua bagian. Data diberikan dalam Gambar 2
senyawa Jaffe-positif dalam matriks serum dari konsentrasi dan Tabel 2 dan 3.
kreatinin yang dihasilkan yang diperkirakan dengan metode
kompensasi Jaffe''. Menurut Junge et al. (12), '' offset 21m
mol/L kreatinin sesuai dengan perbedaan antara metode
Jaffe dan enzimatik yang dimodifikasi''. Wuyts dkk. (9)
membandingkan prosedur kompensasi/tanpa kompensasi
Jaffe untuk kreatinin serum dengan metode enzimatik
secara lebih rinci dan menemukan perbedaan besar pada
anak-anak yang terutama disebabkan oleh protein yang
mengganggu.
Sementara kalibrasi kreatinin urin dengan larutan
kreatinin tampaknya tanpa kesulitan (tidak ada protein
atau jejak protein), peningkatan pengukuran kreatinin
serum/plasma masih menjadi fokus program analisis dan
fungsi ginjal (9, 12). Menurut Myers et al. (13),
''standarisasi kalibrasi tidak benar untuk gangguan
analitis (bias nonspesifisitas) dan masalah nonspesifisitas
Gambar 1Kurva laju kalibrasi dengan standar serum dan larutan
yang terkait dengan beberapa metode rutin harus
kreatinin.
ditangani''. Prosedur Jaffe manual satu-reagen (MJ), pengukuran waktu antara 60
dan 168 detik dan suhu 378C. Garis penuh dengan kotak hitam:
Untuk didefinisikan secara eksplisit, setiap jalur kalibrasi harus kalibrasi dua titik dengan SRM 967 LI–LII, perpanjangan garis ke
memiliki setidaknya dua titik kalibrasi. Kalibrasi dua titik reaksi sumbu x memotong sumbu y/x yang menunjukkan efek matriks
Jaffe dengan dua standar serum dengan nilai kreatinin yang keseluruhan sebagai mAU/kreatinin. Garis putus-putus dengan
lingkaran putih: kalibrasi dua titik dengan LyoC-ASM; perpanjangan
sebenarnya (standar yang dibuktikan oleh RMP atau terkait
garis ke sumbu x memotong sumbu y/x menunjukkan ASM sebagai
dengan SRM) secara otomatis mengkompensasi zat pengganggu
mAU/kreatinin. Garis penuh dengan segitiga hitam: kalibrasi tiga titik
Jaffe yang menerapkannya sebagai penyeimbang offset/bias dengan larutan kreatinin 50, 100 dan 300
nonspesifisitas ke dalam persamaan/garis kalibrasi. Sayangnya, mperempuan jalang.

banyak produsen diagnostik memasok pelanggan mereka

dengan hanya satu standar/kalibrator multiguna berbasis serum
Tabel 1Efek keseluruhan dari SRM 967 LIqmatriks LII (seperti kreatinin,m
dan pengguna terpaksa menggabungkan standar tersebut perempuan jalang).
dengan air/garam fisiologis untuk mencapai kalibrasi dua titik
yang sangat mendistorsi jalur kalibrasi Jaffe menghilangkan Waktu reaksi, s Suhu,8C
offset absorbansi yang tidak dapat dihindari.
25 37

Kami menguji beberapa pendekatan dalam kalibrasi kreatinin 20–80 31 34

serum (14) menggunakan metode kinetik Jaffe yang dimodifikasi 30–180 33 37
60–168 32 38
dengan Cu(II)-tartrat sebagai katalis untuk oksidasi bilirubin (5).
60–150sebuah - 36sebuah
Kami yakin kami menemukan prosedur kalibrasi dua titik
Rata-rata 32 36
sederhana yang menggabungkan satu standar serum dengan Jangkauan 31–33 34–38
matriks serum buatan (ASM) yang mengkompensasi interferensi Manual JP (Reagen Jaffe dan prosedur oleh Pliva-Lachema
Jaffe yang ada pada matriks standar. Kalibrasi tersebut dapat Diagnostika)-prosedur satu-reagen.sebuahProsedur JP-dua-reagen
digunakan untuk orang dewasa dan anak-anak otomatis.
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe 1129

Bahan:

Kreatinin berasal dari Sigma-Aldrich (Munich, Jerman; C4255,

anhidratG99%,Mrs113.12). Untuk serum manusia, serum pasien dan
serum pool digunakan dalam penelitian ini. Penjelasan lebih rinci
tentang serum yang digunakan diberikan dalam legenda untuk
Gambar 2 dan di catatan kaki untuk Tabel 2 dan 3. Sera dari
kelompok 30 anak yang digunakan untuk membandingkan metode
enzimatik dan Jaffe (Tabel 3) dibuat dari sampel yang dikumpulkan di
rumah sakit anak sebelum analisis kreatinin serum (yaitu, kelompok
ini juga mengandung sampel Jaffe-uncompensated). Sera dari
kelompok 18 anak (10 sampel, usia 1-5 tahun dan 8 sampel, usia 6-10
tahun) yang digunakan untuk analisis, disajikan pada Gambar 2,
hanya berisi sampel yang dianalisis terlebih dahulu dengan prosedur
Jaffe terkompensasi dan hanya berisi sampel dengan kreatinin )18m
mol/L, semua sampel yang lebih rendah dipotong oleh program
perangkat lunak penganalisis yang diatur untuk menghindari hasil
negatif.

Gambar 2Kreatinin dalam serum anak-anak, perbandingan Jaffe

dan metode enzimatik. Reagen
Prosedur Jaffe otomatis dua reagen, JP (tidak terkompensasi)
Bahan kimia kelas reagen digunakan selama penelitian ini.
dan JR (reagen kreatinin enzimatik dan prosedur dengan
kompensasi Roche Diagnostics) vs. EP. Pengukuran waktu 60– Saline fisiologis (PS) dibuat dengan melarutkan 9 g NaCl dalam
168 dan 60–150 detik, masing-masing, suhu 378C. Kelompok air suling dalam labu ukur 1000 mL. Larutan stok kreatinin 1000
serum yang sama (ns18) dari penganalisis rumah sakit anak- mmol/L dibuat dengan melarutkan 113,12 mg kreatinin dalam
anak, dipilih oleh prosedur JR kompensasi mereka (10 sampel, labu ukur 1000 mL dalam PS dan selanjutnya diencerkan dengan
usia 1-5 tahun ditambah 8 sampel, usia 6-10 tahun). JP PS untuk mendapatkan konsentrasi yang diinginkan.
enzimatik / tidak terkompensasi masing-masing dikalibrasi
dengan sepasang LyoC-PS dan LyoC-ASM. Lingkaran: JP vs. EP.
Kotak: kompensasi JR vs. EP. Nilai rata-rata/rata-rata kreatinin KalibratorKami menggunakan Institut Nasional Standar dan
ditemukan (mmol/L): EP 52.9/31–85; EP 51.4/27–83; JR 34.5/18– Teknologi SRM 967 sebagai standar kreatinin primer selama
63. penelitian ini (15): serum manusia beku level I (LI) disertifikasi
untuk kreatinin 66,5"1,9 dan level II (LII) untuk 346,2"7,3m
Meja 2Eksperimen pendahuluan. Pengaruh kalibrasi pada uji perempuan jalang.
kreatinin serum dengan metode Jaffe (mperempuan jalang).
Kalibrator Lyonorm (LyoC) dan matriks serum buatannya (ASM)
Mode kalibrasi/konsentrasi Kreatinin ditemukan Kami mengkalibrasi ulang/mengatur ulang konsentrasi kreatinin
kalibrator,mperempuan jalang dalam standar/kalibrator serum multiguna manusia universal Pliva-
Kolam rendah Kolam tinggi
Lachema (Pliva-Lachema Diagnostika, Brno, Republik Ceko) terhadap
Dua titik/PS-LI (66.5) 74 208 SRM menggunakan prosedur Jaffe otomatis (JP) menjadi 331"12m
Dua titik/PS-LII (346,2) Dua titik/LI- 123 330 perempuan jalang. Kami menentukan bahwa jumlah total
LII (66,5 dan 346,2) Solusi tiga titik/ 86* 323* pengganggu Jaffe yang ada dalam matriks serum LyoC sesuai
kreatininsebuah 125 362 dengan 38"2mmol/L kreatinin dan kami menyiapkan ASM
Dua titik/ASM-LyoC (325.0)b 85* 328* pencocokan LyoC sebagai larutan yang mengandung 38mmol/L
Prosedur JP-dua-reagen otomatis. Kedua kolam berisi campuran kreatinin. Sepasang LyoC-ASM dan/atau LyoC-PS digunakan untuk
yang sama dari 20 serum pria/wanita dewasa. *Mungkin kalibrasi dua titik masing-masing untuk metode Jaffe dan enzimatik.
kreatinin serum sejati bebas dari gangguan.sebuahSolusi kreatinin Sebagai contoh, kami juga menyiapkan dan menggunakan ASM
50, 100 dan 300mperempuan jalang.bASM berisi 38.0 berdasarkan glukosa dan larutan albumin serum sapi, masing-
mmol/L kreatinin. masing (lihat Hasil).

Tabel 3Perbandingan metode Jaffe dan enzimatik (seperti kreatinin,mperempuan jalang).

Prosedur Dewasa Anak-anak

1: JP-ER 2: JP-EP 3: JR-EP 4: JP-EP 5: JP-EP

Rata-rata, Y 77 219 209 40 35

Jangkauan 45–150 103–659 100–629 8–47 6–50
Rata-rata, X 81 217 205 35 38
Jangkauan 47–144 97–649 104–659 7–44 8–49
Kalibrasi dua titik otomatis menggunakan prosedur dua reagen yang menggabungkan metode Jaffe dan enzimatik. Untuk orang dewasa,
prosedur 1: serum dari kelompok 100 laki-laki/perempuan (usia 20-70 tahun) dengan kadar kreatinin normal/meningkat. Kedua kalibrasi
dengan SRM LI–LII (rs0,993; kamus0,996x–3,6). Prosedur 2: serum dari kelompok 60 laki-laki/perempuan (usia 17-64 tahun) dengan kadar
kreatinin yang meningkat secara signifikan. Kalibrasi EP dengan LyoC-PS, JP dengan LyoC-ASM (rs0,991, ys1,007x–4.7). Prosedur 3: serum yang
sama seperti pada 2. Kalibrasi EP dengan SRM LI–LII, data kompensasi JR dengan mengurangkan 26mmol/L kreatinin diambil dari laboratorium
rumah sakit (rs0,992; kamus0.979xq0,5). Untuk anak-anak, serum dari kelompok 30 anak (20 sampel, usia 1-5 tahun dan 10 sampel, usia 6-10
tahun). Prosedur 4: kedua kalibrasi dengan SRM LI-LII (rs0,960, ys0.989x–4.5). Prosedur 5: Kalibrasi EP dengan LyoC-PS (rs0,967; kamus0,988xq
2.4), kalibrasi JP dengan LyoC-ASM.
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
1130 Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe
Reagen Jaffe, Pliva (JP)Kit analitis reagen dua bagian
digunakan, dengan Creatinine Liquid 500, Cat. 10010227 (Pliva-
Lachema Diagnostika) (Reagen; R1: NaOH 0,24 mol/L; R2: asam
pikrat 26 mmol/L). JP digunakan baik dalam prosedur manual
maupun otomatis. Dalam kit ini, Cu(II)-tartrat digunakan untuk
mengkatalisis oksidasi bilirubin (5). Data kinerja (serum): batas
deteksi 2.33mmol/L, batas rendah kuantifikasi 7.09mmol/L,
rentang kerja 7.09–3000mmol/L, bias
– 2.54% dan –1.01% (untuk 80 dan 334mmol/L kreatinin, masing-
masing), presisi (intra-/inter-assay): 1,8%/2,16%, korelasi dengan
kreatinin enzimatik Pliva (ns96, rs0,999, ys1,008x–6,4m
perempuan jalang).
Reagen Jaffe, Roche (JR)Kit analitik reagen dua bagian
digunakan, dengan metode CREA, Creatinin Jaffe, pengosongan
laju dan kompensasi, Cat. 11875418 (Roche Diagnostics,
Mannheim, Jerman) (Reagen; R1: NaOH 0,8 mol/L; R2: asam
pikrat 25 mmol/L; lihat prosedur Jaffe otomatis Roche). Data
kinerja (serum): rentang kerja 18–2210mmol/L, batas rendah
kuantifikasi 18mmol/L, presisi (inter-/intra-assay): 0,7%/2,3%,
korelasi dengan enzim kreatinin Roche (ns50, rs0,998, kamus
1,014x–0,07mperempuan jalang).
Kreatinin enzimatik, Pliva (EP) Analisis reagen dua bagian-
kit ical digunakan, dengan Creatinine Enzymatic Liquid 204, Cat.
10010231 (Pliva-Lachema Diagnostika) (Reagen; R1: Good's
buffer pH 7,5, 25 mmol/L, creatinaseG12 kU/L, sarcosine oxidase
G8 kU/L, askorbat oksidaseG2 kU/L, katalase G200 kU/L,
indikator N-etil-N-sulfopropil-m-toluidin (ESPMT) 0,47 mmol/L,
deterjen -1%, gentamisin -0,1%; R2: Good's buffer pH 7,5, 100
mmol/L, kreatininaseG300 kU/L, peroksidaseG20 kU/L, 4-
aminoantipyrine 2,95 mmol/L, deterjen -0,5%, natrium azidaG
0,1%). Data kinerja (serum): batas deteksi 1,50mmol/L, batas
rendah kuantifikasi 4.60mmol/L, rentang kerja 4,6–5700mmol/L,
bias
– 3,60% dan –2,20% (untuk 90 dan 360mmol/L kreatinin, masing-
masing), presisi (intra-/inter-assay): 1,75%/3,14%, korelasi
dengan kreatinin enzimatik lainnya (ns98, rs0,999, ys1,051x–14.9
mperempuan jalang).
Kreatinin enzimatik, Roche (ER)Kit analitis reagen dua bagian
digunakan, dengan Kreatinin plus, Cat. 11775642 (Diagnostik
Roche) (Reagen; R1: N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-
aminopropanesulphonic acid (TAPS) buffer pH 8.1, 30 mmol/L,
creatinaseG333mkucing/L, sarcosine oxidase G133mkucing/L,
askorbat oksidaseG33mcat/L, indikator 3- hydroxy-2,4,6-
triiodobenzoic acid (HTIB) 5,9 mmol/L, detergen dan stabilizer;
R2: TAPS buffer pH 8.0, 50 mmol/L, kreatininaseG500mkucing/L,
peroksidaseG16.7mcat/L, 4-aminoantipyrine 2.0 mmol/L,
potassium hexacyanoferrate 163 mmol/L, deterjen dan
stabilizer). Data kinerja (serum): rentang kerja 2,7–2652mmol/L,
batas rendah kuantifikasi 2,7mmol/L, presisi (inter-/intra-assay):
0,8%/2,1%, korelasi dengan metode HPLC (ns64, rs0,999, ys
0,989xq0,036 mg/dL).
Prosedur
Semua pengukuran yang dilakukan secara manual dilakukan dalam
rangkap tiga dengan reagen Jaffe (MJ) satu bagian pada 258C dan 37
8C, masing-masing dan hanya digunakan untuk perhitungan/
penentuan zat pengganggu Jaffe dalam standar dan dalam dua jenis
serum kontrol (lihat Gambar 1 dan Tabel 2).
Prosedur manual Jaffe, Pliva (MJ)Prosedur Jaffe manual, Pliva
(MJ), hanya digunakan dalam mode satu reagen. Reagen MJ
dibuat dari JP dengan mencampurkan 4 bagian R1 dengan
1 bagian R2, lihat reagen Jaffe JP. Dalam sel yang dipanaskan sampai
suhu yang dipilih, campurkan 1,00 mL reagen MJ dengan 0,050 mL
sampel dan segera daftarkan kurva laju terhadap reagen pikrat
dengan PS pada 492 nm. Hitung selisihnyaDSEBUAHs(SEBUAH2
-SEBUAH1) untuk waktu reaksi antara 20–80 dan 60–168 detik,
masing-masing.
Prosedur Jaffe otomatisProsedur Jaffe otomatis hanya
digunakan dalam mode dua reagen dengan kedua metode Jaffe/
enzimatik. Analisis, yang dilakukan dalam rangkap dua,
digunakan untuk semua data yang disajikan pada Tabel 2 dan 3
dan pada Gambar 2. Penganalisis diprogram sesuai untuk
prosedur dua reagen JP dan JR, masing-masing, dengan panjang
gelombang 505 dan 570 nm, masing-masing.
Prosedur Jaffe otomatis, Pliva (JP)Campur 0,015 mL sampel
dengan 0,240 mL R1 dan inkubasi selama 5 menit, tambahkan
0,060 mL R2 dan setelah 60 detik baca absorbansi A1dan setelah
168 s membaca absorbansi A2, pengukuran waktu reaksi antara
60 dan 168 detik.
Prosedur Jaffe otomatis, Roche (JR) Campur 0,006 mL
sampel dengan 0,250 mL R1 dan inkubasi selama 5 menit,
tambahkan 0,125 mL R2 dan setelah 60 detik baca absorbansi A1
dan setelah 150 s baca absorbansi A2, pengukuran waktu reaksi
antara 60 dan 150 detik. Kalibrator JR dan Roche yang
dikosongkan dan dikompensasi hanya digunakan di
laboratorium rumah sakit yang memberi kami serum pasien
bersama dengan nilai kreatininnya.
Prosedur enzimatik otomatis, Pliva (EP)Campurkan 0,018 mL
sampel dengan 0,81 mL R1, inkubasi selama 5 menit dan baca
absorbansi pertama (A1), tambahkan 0,270 mL R2, inkubasi
selama 10 menit dan baca absorbansi kedua (A2) dan hitung
selisihnya. Panjang gelombang: 546 nm.
Prosedur enzimatik otomatis, Roche (ER)Campurkan 0,006 mL
sampel dengan 0,65 mL R1, inkubasi selama 5 menit dan baca
absorbansi pertama (A1), tambahkan 0,20 mL R2, inkubasi
selama 5 menit dan baca absorbansi kedua (A2) dan hitung
selisihnya. Panjang gelombang: 546 nm.
Hasil
Eksperimen pendahuluan
Garis kalibrasi dan persamaan pada Gambar 1 diperoleh
dengan prosedur manual JP-satu-reagen dan digunakan
untuk menghitung jumlah zat pengganggu serum/
matriks (Tabel 1) yang ada dalam standar yang
digunakan. Gambar 1 menunjukkan efek keseluruhan zat
pengganggu dalam sepasang SRM baik sebagai bias
nonspesifisitas absorbansi/kreatinin. Dibandingkan
dengan kurva yang dibuat dengan larutan kreatinin,
kurva SRM digeser ke absorbansi yang lebih tinggi yang
disebabkan oleh kromogen positif selain kreatinin yang
ada dalam matriks SRM. Semua jalur kalibrasi yang
menggabungkan standar serum dan/atau standar
dengan air atau PS sebagai nol akan mendistorsi kurva
kalibrasi, distorsi yang bergantung pada standar dan
mode kalibrasi yang dipilih. Gambar 1 juga menunjukkan
bahwa sepasang LyoC-ASM memungkinkan penentuan
kreatinin serum dengan akurasi yang sebanding dengan
SRM,
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe 1131

Dalam percobaan pendahuluan kami (Tabel 2), kami menguji Kreatinin ditentukan dengan metode Jaffe dan
berbagai mode standar/kalibrasi pada dua kumpulan serum enzimatik
dengan tingkat kreatinin rendah/tinggi menggunakan prosedur
otomatis JP-tworeagen. Metode Jaffe dikalibrasi baik dengan
Kalibrasi dua titik metode Jaffe dengan sepasang SRM
sepasang SRM (15) atau dengan standar sekunder LyoC yang
dan/atau dengan LyoC-ASM yang kami gunakan dalam
dipasangkan dengan ASM-nya atau dengan larutan kreatinin
percobaan pendahuluan mengkompensasi efek matriks
murni. Kalibrasi dengan kreatinin murni dan juga dengan
serum (Tabel 2). Kami juga memverifikasi secara lebih
standar serum yang dikombinasikan dengan PS/air yang
rinci dengan dua prosedur enzimatik, EP/ER, pada dua
digunakan untuk menetapkan nol akan selalu mendistorsi garis
kelompok serum dewasa, yang pertama dengan
kalibrasi dan melebih-lebihkan kreatinin serum yang
kreatinin normal/meningkat, yang kedua dengan tingkat
sebenarnya, estimasi yang terlalu tinggi menjadi utama dalam
kreatinin yang sangat meningkat (Tabel 3, prosedur 1
sampel serum dengan kreatinin rendah.
dan 2, lihat catatan kaki). Jelas bahwa prosedur enzimatik
dapat dikalibrasi dua titik baik dengan sepasang SRM
dan dengan satu standar sekunder (seperti LyoC) yang
Interferensi seperti Jaffe dalam standar
dilengkapi dengan PS. Metode Jaffe dapat dikalibrasi baik
dengan sepasang standar serum atau dengan satu
Garis kalibrasi pada Gambar 1, dibangun dengan sepasang
standar yang dilengkapi dengan ASM-nya. Rerata/
SRM (LI dan LII) memungkinkan estimasi efek keseluruhan
rentang konsentrasi kreatinin dan juga garis/hubungan
dari interferensi yang ada matriks sebagai perpotongannya
regresi yang ditemukan tidak menunjukkan perbedaan
dengan sumbu y/x atau perhitungan keseluruhan (Tabel 1)
yang mencolok.mmol/L kreatinin dari semua sampel
atau bahkan efek matriks individu menggabungkan
(Tabel 3, prosedur 3). Kami terkejut dengan hasil yang
persamaan yang sesuai untuk SRM dengan orang-orang
sangat baik yang kami temukan dengan metode Jaffe
untuk solusi kreatinin. Kami menghitung efek matriks
terkompensasi (11) pada orang dewasa.
individu berikut (seperti kreatinin,mmol/L): SRM-LI ;13, SRM-
LII ;23, LyoC ;38, dan dua serum kontrol, rendah ;9 dan tinggi
;40. Seperti yang diharapkan, efek matriks yang lebih tinggi
selalu ditemukan dalam standar/kontrol multiguna yang
Perhatian khusus diberikan pada analisis serum dari anak-
umumnya dibubuhkan ke tingkat yang lebih tinggi. Matriks
anak (Tabel 3, prosedur 4 dan 5). Hasil yang dicapai oleh Jaffe tak
SRM keseluruhan juga dapat ditemukan oleh penganalisis
terkompensasi dan kreatinin enzimatik berkorelasi erat dan data
menggunakan prosedur dua reagen: penganalisis Hitachi
regresi cukup dapat diterima. Terbukti kalibrasi dua titik, baik
dikalibrasi dua titik dengan sepasang SRM, kemudian
dengan sepasang SRM dan/atau dengan sepasang LyoC-ASM,
beberapa larutan kreatinin dengan konsentrasi yang
masing-masing, digunakan untuk uji Jaffe tanpa kompensasi
diketahui (10–60mmol/L) dianalisis sebagai ''sampel tidak
pada orang dewasa yang berfungsi dengan baik bahkan pada
diketahui''. Perpotongan nol antara dua garis lurus yang
anak-anak. Dalam percobaan kedua kami dengan sampel dari
dicetak oleh penganalisis sebagai kreatinin yang ditemukan/
anak-anak, kami mencoba membandingkan prosedur
diketahui dalam ''sampel tidak diketahui'' berhubungan
kompensasi (JR) dan tanpa kompensasi (JP) dengan kreatinin
dengan pengganggu yang ada dalam matriks SRM. Matriks
enzimatik (Gambar 2). Untuk perbandingan tersebut, kami
yang sesuai dengan pencocokan absorbansi ;36mmol/L menggunakan serum di mana kreatinin dianalisis terlebih
kreatinin juga dapat disimulasikan dengan larutan glukosa dahulu dengan prosedur Jaffe terkompensasi di laboratorium
(;280 mmol/L) atau dengan albumin serum sapi (;109 g/L). rumah sakit, yang berarti kelompok ini hanya mengandung
Namun, ASM dengan kreatinin adalah yang terbaik karena serum dengan kreatinin )18
laju reaksi yang sama. Protein (9) adalah pengganggu utama mperempuan jalang. Grafik korelasi yang membandingkan
dalam metode Jaffe. Sangat mudah untuk menghitung uji Jaffe enzimatik dan terkompensasi menunjukkan
bahwa offset rata-rata 21mmol/L Jaffeserum-kreatinin kompensasi berlebih pada kreatinin sekitar ;16mmol/L pada
ditemukan oleh Junge et al. (12) sesuai dengan gangguan anak-anak. Korelasi antara prosedur EP/JP cukup baik dan
yang disebabkan oleh ;64 g/L protein (sebagai albumin sapi). kalibrasi dua titik yang digunakan memungkinkan hasil yang
jauh lebih baik pada anak-anak, dibandingkan dengan
metode Jaffe terkompensasi.
Pengukuran waktu reaksi

Kami tidak dapat mengkonfirmasi efek positif dari waktu Diskusi

reaksi pada kompensasi interferensi serum dalam
metode kinetik Jaffe (Tabel 1). Semua pengganggu
matriks, bahkan ketika diukur pada waktu yang berbeda,
terletak dalam kisaran yang sangat sempit. Efek matriks
yang lebih besar ditemukan pada 378C disebabkan oleh
peningkatan kecepatan reaksi suhu dari beberapa
pengganggu. Lebih-lebih lagi,DSebuah diukur dalam
umumnya direkomendasikan 20-80 s (4) rendah. Dalam
hal ini, lebih mudah untuk membaca absorbansi dalam
;60–180 s, di manaDA kira-kira 50% lebih tinggi dan
pengaturan waktu mana yang juga sesuai untuk
sebagian besar penganalisis otomatis.
SRM yang digunakan dalam penelitian ini didasarkan pada dua
SRM beku yang dimaksudkan (15) ''terutama untuk digunakan
dalam mengevaluasi keakuratan prosedur penentuan kreatinin
dalam serum manusia dan untuk digunakan dalam memvalidasi
bahan referensi sekunder''. Kami menggunakan SRM sebagai
standar utama untuk semua prosedur yang dibandingkan, untuk
validasi kreatinin dalam LyoC standar sekunder dan juga untuk
perhitungan/penentuan efek Jaffe-matrix pada beberapa bahan
serum lainnya. Kreatinin dalam SRM, yang disertifikasi oleh RMP
(6), seharusnya bebas dari gangguan yang disebabkan oleh Jaffe-
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
1132 Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe
seperti konstituen serum, sedangkan absorbansi yang
ditemukan oleh prosedur Jaffe dengan SRM dan/atau
dengan sampel serum juga harus mencakup efek kromogen
seperti Jaffe selain kreatinin sebagai penyeimbang
absorbansi.
Penelitian kami membuktikan bahwa kalibrasi dua titik
metode Jaffe menggunakan sepasang standar serum dengan
nilai kreatinin sejati dan/atau standar sekunder yang
dipasangkan dengan matriks buatannya menghasilkan hasil
yang sebanding dengan metode enzimatik. Kalibrasi dua titik
tersebut menghormati offset absorbansi alami dan tidak dapat
dihindari yang mewakili bias Jaffe nonspesifik dan
menggabungkannya ke dalam persamaan/garis kalibrasi. Setiap
kalibrasi yang menggabungkan standar serum dengan PS/air
menutup garis kalibrasi secara tidak benar ke nol yang
mengakibatkan peningkatan kreatinin serum yang salah.
Sesuai dengan Wuyts et al. (9), kami mengkonfirmasi bahwa
kesalahan/bias nonspesifik terbesar dalam metode Jaffe
disebabkan oleh protein. Interval referensi (10) untuk protein
serum total sangat bervariasi pada orang dewasa dan variasinya
pada bayi baru lahir bahkan lebih besar ("15% dan "35% dari nilai
rata-rata, masing-masing). Selain itu, serum anak-anak dan
terutama serum balita hanya dapat mengandung sebagian kecil
kreatinin dibandingkan dengan orang dewasawlihat (10)x.Dalam
hal ini, tidak mungkin untuk menemukan konstanta kompensasi
universal untuk metode Jaffe berkompensasi yang valid untuk
orang dewasa/anak-anak. Sementara metode Jaffe
terkompensasi (11) yang diterapkan pada orang dewasa
menghasilkan kreatinin serum dengan baik sebanding dengan
prosedur enzimatik, penerapannya pada anak-anak
mengkompensasi kreatinin dengan buruk pada anak-anak dan
filter cut-out yang diterapkan pada prosedur Jaffe terkompensasi
bahkan melarang penentuan tingkat kreatinin yang sangat
rendah dalam anak usia 1-5 tahun. Faktanya, kompensasi
berlebih yang kami temukan pada kadar kreatinin pada anak-
anak harus lebih besar lagi, karena kelompok uji kami hanya
mengandung serum terpilih dari anak-anak dengan kadar
kreatinin )18mperempuan jalang. Tanpa penganalisis semacam
itu membuat koreksi, banyak kadar kreatinin pada anak-anak
yang ditemukan dengan prosedur Jaffe kompensasi seharusnya
menjadi negatif. Kedua jenis kalibrasi dua titik yang kami
gunakan dalam penelitian ini untuk metode Jaffe tanpa
kompensasi berfungsi dengan baik untuk orang dewasa dan
anak-anak. Sayangnya, penyebaran kadar kreatinin serum pada
anak-anak akan selalu besar karena umumnya sangat rendahD
Sebuah diukur dengan sampel anak-anak.
Kalibrasi harian dengan sepasang SRM mahal dan tidak
umum. Kami menggunakan SRM dalam penelitian kami hanya
untuk membandingkan berbagai prosedur kreatinin, untuk
menentukan/menghitung penyeimbangan offset/bias
nonspesifisitas yang disebabkan oleh zat pengganggu Jaffe
dalam standar serum dan untuk menyiapkan matriks serum
buatan yang cocok.
Sejauh ini, banyak perusahaan yang memproduksi diagnostik
hanya menawarkan satu jenis standar/kalibrator berbasis serum
multiguna yang tidak mencukupi untuk kalibrasi dua titik
metode Jaffe, dan kami berharap penelitian kami akan
membantu memecahkan masalah kalibrasi yang masih terkait
dengan prosedur Jaffe. Sayangnya, konsentrasi kreatinin di
semua kalibrator serbaguna biasanya disetel terlalu tinggi.
Untuk laju filtrasi glomerulus serum kreatinin yang andal dan
untuk pengobatan ginjal kronis
penyakit, akan lebih cocok untuk mengkalibrasi kreatinin
serum/plasma dengan standar di mana kadar kreatinin
berkisar antara 50 dan 150mperempuan jalang. Ini juga
akan lebih nyaman untuk kalibrasi standar serum untuk
anak-anak dan orang dewasa.
Ucapan Terima Kasih
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Drs. Ludmila
Malášková dan Miroslava Beňovská, Departemen Biokimia Klinis,
Rumah Sakit Fakultas, Brno-Bohunice, Republik Ceko, untuk
serum pasien yang dianalisis dengan metode analisis Roche
berbasis Jaffe, rateblanked, dan kompensasi. Kami juga ingin
mengucapkan terima kasih kepada Dr. Jan Havli, Departemen
Genomics Fungsional dan Proteomik, Institut Biologi
Eksperimental, Fakultas Sains, Universitas Masaryk, Brno, atas
saran dan bantuannya selama persiapan naskah. VC ingin
mengucapkan terima kasih kepada PLIVA-Lachema Diagnostika,
Barr Group, Brno, Republik Ceko, atas dukungan finansial untuk
pekerjaan ini.
Referensi
1. Vasiliades J. Reaksi basa natrium pikrat dengan kreatinin:
kinetika dan mekanisme pembentukan kompleks asam
pikrat non kreatinin. Clin Chem 1976; 22: 1664–71.
2. Spencer K. Tinjauan analitik dalam biokimia klinis: estimasi
kreatinin. Ann Clin Biochem 1986;23: 1–25.
3. Knapp ML, Mayne PD. Pengembangan metode Jaffe kinetik
otomatis yang dirancang untuk meminimalkan gangguan
bilirubin dalam uji kreatinin plasma. Clin Chim Acta
1987;168:239–46.
4. Lamb E, DJ Newman, Harga CP. Tes fungsi ginjal. Dalam:
Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, editor. Buku teks kimia
klinis Tietz, edisi ke-4. St. Louis, Missouri: WB Saunders
Company, 2006:797–801.
5. Fischer J, Chromý V. Reagen untuk penentuan kinetik
fotometrik kreatinin menekan gangguan bilirubin. Paten
Cekoslowakia, Sertifikat Penulis 1982:228836.
6. Welch MJ, Cohen A, Hertz HS, Ng KJ, Schafer R, Van Der Lijn
P, dkk. Penentuan kreatinin serum dengan spektrometri
massa pengenceran isotop sebagai kandidat metode
definitif. Kimia Anal 1986;58:1681–5.
7. Carobene A, Ferrero C, Ceriotti F, Modenese A, Besozzi
M, De Giorgi E, dkk. Pengujian kecakapan pengukuran
kreatinin: penetapan nilai target ID GC-MS yang disesuaikan
dengan matriks. Clin Chem 1997;43:1342–7.
8. Lawson N, Lang T, Broughton A, Prinsloo P, Turner C,
Marenah C. Tes kreatinin: saatnya beraksi? Ann Clin
Biochem 2002;39:599–602.
9. Wuyts B, Bernard D, Van Den Noortgate N, Van Den Walle J,
Van Vlem B, De Smet R, dkk. Evaluasi ulang formula untuk
memprediksi klirens kreatinin pada orang dewasa dan anak-
anak, menggunakan metode kreatinin terkompensasi. Clin
Chem 2003;49:1011–4.
10. Roberts WL, McMillin QA, Burtis CA, Bruns DE. Informasi
referensi untuk laboratorium klinis. Dalam: Burtis CA,
Ashwood ER, Bruns DE, editor. Buku teks kimia klinis Tietz,
edisi ke-4. St. Louis, Missouri: WB Saunders Company,
2006:2264, 2292–3.
11. KREATIF. Metode kreatinin Jaffe, dikosongkan dan
dikompensasi. Praha, Republik Ceko: Diagnostik Roche, Cat.
Nomor 11875418.
 Artikel dalam pers - bukti tidak dikoreksi
Chromý et al.: Kalibrasi penentuan kreatinin serum dengan metode Jaffe 1133

12. Junge W, Wilke B, Halabi A, Klein G. Penentuan interval
referensi untuk kreatinin serum, ekskresi kreatinin dan
bersihan kreatinin dengan metode enzimatik dan modifikasi
Jaffe. Clin Chim Acta 2004;344: 137–48.
13. Myers GL, Miller WG, Coresh J, Fleming J, Greenberg
N, Greene T, dkk. Rekomendasi untuk meningkatkan
pengukuran kreatinin serum: laporan dari kelompok kerja
laboratorium program pendidikan penyakit ginjal Nasional.
Clin Chem 2006;52:5–18.
14. Chromý V, Rozkošná K, Sedlák P. Serum Jaffe creatinine, cara
mengkalibrasi dan menghilangkan masalah matriks serum
wabstrakx.Kongres Nasional VIII Masyarakat Biokimia Klinis
Ceko (dengan partisipasi internasional), České Budějovice,
23–25 September, 2007. Klin Biochem Metab
2007;15(Suppl):S7-4, P-6.
15. Institut Standar dan Teknologi Nasional. Bahan referensi
standar 967. Gaithersburg, MD: Institut Nasional Standar
dan Teknologi. Tanggal penerbitan sertifikat: 24 Januari
2007.

Lihat statistik publikasi