PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI

METODE LOWRY

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

Oleh
Ni PutuCandraMahayani

NIM 1313031015

Ni Made Willy Larashati Anastasia

NIM 1313031016

I GustiAyuDewiApriyanti

NIM 1313031022

I Putu Pandu Setiawan

NIM 1313031028

JURUSAN PENDIDIKAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PENDIDIKAN GANESHA
SINGARAJA
2016

PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI

METODE LOWRY
I.

TUJUAN
1. Membuat kurva hubungan antara konsentrasi protein standar dengan absorbansinya.
2. Menentukan kadar protein yang terdapat dalam putih telur dengan menggunakan
metode Lowry.

II.

DASAR TEORI
Protein tersusun atas asam-asam amino yang dihubungkan dengan ikatan peptida.
Asam amino merupakan molekul organik dengan massa molekul rendah (antara 100-200
Da) yang mengandung setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-COOH) dan satu gugus
amino (-NH2). (Tika,2010). Telur merupakan salah satu sumber protein hewani yang
banyak dikonsumsi masyarakat. Dalam protein (albumin) telur ini terkandung beberapa
asam

amino

seperti

tirosin

dan

triptofan

(Wirahadikusumah,

1989).

Komposisiputihtelurkandungan total protein 10-11% dasarbasah, ovalbulmin 70% dari

total protein, canalbumin 9% dari total protein, ovoummucoid 13% dari total protein.
Sedangkankuningtelurterdiriatashipovitelindanhipotellenin.
Penentuan konsentrasi protein/asam amino merupakan proses rutin yang digunakan
dalam analisis kimia. Salah satu tujuan dari penentuan konsentrasi protein/asam amino ini
adalah untuk mengetahui nilai gizi dari suatu bahan makanan. Ada beberapa metode yang
biasa digunakan dalam rangka menentukan konsentrasi protein, salah satunya adalah
metode Lowry. Pemilihan metode yang baik dan tepat untuk suatu pengukuran tergantung
pada beberapa faktor, seperti banyaknya material atau sampel yang tersedia, waktu yang
tersedia untuk melakukan pengukuran, alat spektrofotometer yang tersedia untuk
melakukan pengukuran (Redhana, 2004).
Reagen pendeteksi gugus-gugus fenolik, seperti reagen Folin-Ciocalteu telah
digunakan dalam penentuan konsentrasi protein oleh Lowry (1951) yang kemudian
dikenal dengan metode Lowry. Dalam bentuk yang paling sederhana, reagen FolinCiocalteu dapat mendeteksi residu tirosin (dalam protein) karena kandungan fenolik dalam
residu tirosin yang mampu mereduksi reagen fosfotungstat dan fosfomolibdat menjadi
tungstat dan molibdenum yang berwarna biru.Reagen fosfotungstat dan fosfomolibdat ini
merupakan konstituen utama reagen Folin-Ciocalteu. Hasil reduksi ini menunjukkan

puncak absorpsi yang lebar pada daerah merah dari spektrum sinar tampak (600-800 nm)
(Tika, 2010).
Sensitivitas dari metode Folin-Ciocalteu ini mengalami perubahan yang cukup
signifikan apabila digabung dengan ion-ion Cu2+ (metode Biuret). Kompleks Cu-protein
yang dihasilkan oleh reagen Biuret akan menyebabkan reduksi pula pada fosfotungstat dan
fosfomolibdat dalam reagen Folin-Ciocalteu. Kira-kira 75% dari reduksi yang terjadi
diakibatkan oleh adanya kompleks Cu-protein tersebut, sementara residu-residu tirosin dan
triptofan mereduksi 25% sisanya (Tika, 2010). Reagen Folin-Ciocalteu merupakan suatu
komposisi kompleks yang diperoleh dengan cara pemanasan refluks dari Na-tungstat dan
Na-molibdat dengan asam ortofosfat. Selain itu, disertakan pula komponen-komponen lain
untuk meningkatkan kestabilan reagen yang dalam kondisi normal berwarna kuning pucat
(Tika, 2010).
Pada saat menentukan konsentrasi protein dalam suatu sampel, harus dilakukan
pula pengukuran terhadap beberapa larutan protein standar yang memiliki rentang
konsentrasi tertentu di mana konsentrasi sampel protein berada di dalam rentang tersebut
(Tika, 2010). Protein dimasukkan pertama kali ke dalam tabung reaksi, kemudian
ditambahkan air. Seluruh tabung harus mempunyai volume akhir yang sama dan dilakukan
pengadukan atau pencampuran yang baik setelah penambahan zat atau reagen. Reagen
penghasil warna selalu ditambahkan terakhir dan biasanya diperlukan selang waktu
tertentu untuk terjadinya reaksi yang sempurna (Redhana, 2010).
Pengukuran yang dilakukan terhadap larutan protein standar dan sampel
menggunakanspektrofotometer. Melalui pengukuran ini akan diperoleh absorbansi dari
larutan standar dan sampel. Spektrosfotometri merupakan salah satu metode analisis
instrumental yang didasarkan pada interaksi energi dan materi. Spektrofotometri
mempunyai aplikasi yang cukup luas pada analisis secara kuantitatif. Hasil pengukuran
secara kuantitatif menggunakan metode ini mempunyai akurasi yang tinggi, walaupun
tidak seakurat metode instrumentasi serapan atom atau sinar gamma. Prinsip dasar
pengukuran secara kuantitatif adalah menggunakan hukum Lambert-Beer (Tika, 2010).
Langkah-langkah umum dalam analisis dengan spetrofotometer adalah: 1) pembentukan
molekul yang dapat menyerap cahaya pada daerah UV atau tampak; 2) pembuatan
spektrum dan pemilihan panjang gelombang; 3) pembuatan kurva kalibrasi; dan 4)
pengukuran absorbansi cuplikan (Muderawan, 2009).

Hukum Lambert-Beer menjabarkan pengurangan eksponensial dari intensitas

radiasi yang diteruskan karena peningkatan aritmatik dari kadar zat penyerap, sehingga
diperoleh persamaan berikut (Tika, 2010).
log

I0
1
A log T log
I
T

Io/I disebut optical density (OD) atau absorbansi (A), sedangkan I/I o disebut
transmitan (T), yaitu proporsi radiasi yang diteruskan. Bila T dikalikan dengan 100%
disebut persen transmitansi (%T). Dengan menggunakan notasi-notasi yang merupakan
penggabungan Hukum Beer dengan Hukum Bouguer, maka Hukum Beer dapat dituliskan
sebagai berikut:
A= bC
Dimana merupakan absorptivitas molar yang nilainya tergantung pada panjang
gelombang dan jenis zat, b merupakan tebal medium penyerap yang biasanya dinyatakan
dalam sentimeter (cm), C merupakan konsentrasi molar. Selanjutnya konsentrasi molar
larutan protein dapat dihitung melalui persamaan berikut:
y = mx + b
dimana: y = absorbansi
x = konsentrasi
m = kemiringan
b = intersep
III.

ALAT DAN BAHAN

3.1 Alat
Tabel 1. Daftar Alat
No

Nama Alat
2+

1
2
3
4
5
6
7

Spektoronik 20
Gelaskimia
Batangpengaduk
Gelasukur 5 mL
Pipettetes
Pipet volume 5 mL
Tabungreaksi

Jumlah
1
3
1
2
2
1
1

3.2 Bahan
Tabel 2. Daftar Bahan
No

Nama Bahan

Jumlah

1
2
3
4
5
7
8
IV.

Kertas Saring
Na2CO3
NaOH 0,1 N
CuS5H2O 0,5%
Na-tartarat
Larutan BSA
Larutan Albumin Telur

Secukupnya
Secukupnya
Secukupnya
Secukupnya
Secukupnya
Secukupnya
Secukupnya

PROSEDUR KERJA DAN HASIL PENGAMATAN

Tabel 3. Prosedur Kerja dan Hasil Pengamatan

No
1

ProsedurKerja
Reagen

biuret -

HasilPengamatan
Reagen A dibuat dari 5 gram Na2CO3 yang

dibuatdenganmencampurkanreagen

dilarutkan dalam 250 mL larutan NaOH 0,1 N

A sebanyak 50 mL danreagen B -

Reagen A tidakberwarna

sebanyak 1 mL

Reagen B dibuatdari 0,26 gram CuSO4. 5H2O dan

Na-tartarat yang dilarutkandalam 50 mLaguades

-

Reagen B berwarnabiru

Larutan/reagen

buretdibuat

dengan

mencampurkan reagen A (250 mL) dan reagen B

sebanyak 5 mL.
2

albumin -

Larutan

telurdibuatdenganmelarutkan 10 mL

10 mL albumin telurdalam 90 mLaquades

albumin

mL -

Albumin

mL

setelahditambahaquadeslarutanmenjadikeruh

telurkedalam

aquades,

10

90

telurberwarnakuning,

daricampuraninidiencerkanlagiseban -

Campurandiambilsebanyak

yak 10 mL (pengenceransampai 100

mLdandiencerkansampai 100 Ml

kali)
3

Reagen buret berwarna biru

Larutan albumin telurdibuatdenganmelarutkan

Larutan

protein

standar

dicampurdengan
hinggavolumenyamenjadi
Hal

(BSA)
air
1,0mL.
yang

samajugadilakukanpadalarutansampe
l protein.

10

Larutan BSA dibuat dengan 0,03 gram BSA dan

dilarutkan dalam 100 mL aquades
Penambahan
Fenomena Tabung
1
2
3
4 5 6 7 8
(mL)
Standar
0, 0, 0, 1,
- 0,1 0,2
(BSA)
4 6 8 0
Standar
1,
- - - protein
0
Aquades
1 0,9 0,8 0, 0, 0, - 0,
6

Larutan berwarna bening

Sebanyak

mL reagen

Biuret

dimasukkankedalammasingmasingtabung

yang

berisilarutanstandardansampel.
Kemudiancampuraninidiinkubasisela
ma 10 menitpadasuhukamar.
3

Setelah 10 menit, sebanyak 0,5 mL

reagenfenol

(fenolik-ciocelteu)

ditambahkankedalammasingmasingtabungreaksikemudiandikoco
k. Tabung-tabunginidiinkubasiselama
30

menitpadasuhukamar.

Penambahan
(mL)
Reagen
buret
Larutan

Fenomena Tabung
2
3
4 5 6

berwarna

5
bening.

Larutan

tersebut

diinkubasi selama 10menit

Penambahan
(mL)
Reagen

1
0,

Fenomena Tabung
3
4 5 6

0,

0,

0,

0,5

0,5

0,

0,

fenol
5
5 5 5 5 5
Larutan berwarna biru tua. Larutan tersebut
diinkubasi selama 30menit pada suhu kamar

Waktuinkubasidimulaisetelahpenamb
ahanreagenfenolikciocelteukedalamtabungterakhir.
Absorbansidarimasing-

Tabung
1
2
3
4
5
6
7
8

masinglarutantersebutdiukurdengans
pektronik
20+denganpanjanggelombang

700

nm.

V.

Absorbansi
0,525
0,435
0,485
0,450
0,440
0,320
0,290
0,240

ANALISIS DAN PEMBAHASAN

Dalam praktikum ini dilakukan analisis kadar protein dalam sampel larutan
kuning telur dengan menggunakan metode Lowry. Prinsip metode Lowry adalah
menentukan konsentrasi protein yang didalamnya terdapat asam amino yang
mengandung gugus fenolik seperti tirosin dan triptofan dengan menggunakan reagen
pendeteksi gugus-gugus fenolik, yaitu reagen Folin-Ciocalteu.Dimana salah satu residu
dari asam amino yang memiliki gugus fenolik adalah asam amino tirosin dan triptopan.
Langkah pertama yang dilakukan adalah menyiapkan reagen Folin-Ciocalteu
dan reagen Biuret. Setelah larutan Biuret disiapkan selanjutnya dilakukan pembuatan
larutan

sampel

protein

dengan

melarutkan

sebanyak

10

mL

albumin

telurdalamaquadessampai volume 100 mL.kemudiansebanyak 10 mL larutan albumin

telurtersebutdiencerkanlagidenganmenggunakanaqaudessampai 10 kali pengenceran
(volume 100 mL). Setelah dilakukan pengenceran larutan albumin telur berubah dari
bening tidak berwarna menjadi keruh. Tujuan dari pengenceran ini yaitu untuk
memperkecil konsentrasi sampel. Oleh karena itu, dengan adanya pengenceran, larutan
sampel yang diukur akan mempunyai absorbansi diantara kurva kalibrasi, sehingga
konsentrasi protein yang terkandung dalam kuning telur dapat diketahui.
Langkah selanjutnya yaitu memasukan larutan standar BSA dan larutan albumin
ke dalam tabung reaksi, larutan standar BSA yang diisi pada masing-masing tabung
berbeda-beda, sesuai dengan prosedur kerja. Pengisian tabung dengan volume berbedabeda ini bertujuan untuk memberi variasi konsentrasi larutan standar protein (BSA),
sehingga konsentrasi masing-masing tabung berbeda satu dengan lainnya. Pembuatan
larutan standar dengan konsentrasi yang berbeda-beda ini bertujuan untuk
mempermudah pembuatan kurva kalibrasi.
Konsentrasi dari masing-masing tabung dapat dihitungdengan persamaan berikut:
V1M1 = V2M2
Keterangan : V1 = volume putih telur sebelum pengenceran
M1 = konsentrasi putih telur sebelum pengenceran
V2 = volume putih telur setelah pengenceran
M2 = konsentrasi putih telur setelah pengenceran
Konsentrasi dari masing-masing tabung dapat dihitungdengan persamaan berikut:
V1M1 = V2M2
Keterangan : V1 = volume putih telur sebelum pengenceran
M1 = konsentrasi putih telur sebelum pengenceran
V2 = volume putih telur setelah pengenceran
M2 = konsentrasi putih telur setelah pengenceran
Konsentrasi larutan standar protein putih telur adalah 300 g/mL
Tabung 1 : M2 =

Tabung 2 : M 2

V1 M1 0 mL x 300 g/mL
=
= 0 g/mL
V2
1,0 mL

V1 M 1 0,1 mL x 300g/mL

30g/mL
V2
1,0 mL

Tabung 3 : M 2

V1 M 1 0,2 mL x 300g/mL

60g/mL
V2
1,0 mL

Tabung 4 : M 2

V1 M 1 0,4 mL x 300g/mL

120g/mL
V2
1,0 mL

Tabung 5 : M 2

V1 M 1 0,6 mL x 300g/mL

180g/mL
V2
1,0 mL

Tabung 6 : M 2

V1M 1 0,8 mL x 300g/mL

240g/mL
V2
1,0 mL

Tabung7 : M2 =

V1 M1 1,0 mL x 300 g/mL

=
=300 g/mL
V2
1,0 mL

Langkah selanjutnya, masing-masing tabung diisi dengan reagen Biuret. Setelah

ditambahkan reagen Biuret terjadi perubahan warna larutan, warna larutan menjadi
bening kebiruan. Hal ini disebabkan karena terbentuknya kompleks Cu2+ dengan asam
amino pada larutan albumin.Kompleks yang terbentuk adalah sebagai berikut.
O

NH

HN
CHR
O

Cu2+

C
HN
CHR

RHC
C

NH
RHC

Gambar 1. Struktur Kompleks Cu2+

Pada saat larutan ditambahkan reagen Biuret, larutan diaduk kemudian
diinkubasi pada suhu kamar selama 10 menit. Tujuan larutan diinkubasi adalah agar
reaksi berlangsung sempurna dan tidak terjadi penggumpalan pada larutan protein.
Setelah itu Folin-Ciocalteu dimasukan sebanyak 0,5 mL kedalam masingmasing

tabung.

Setelah

Ciocalteutampakterjadiperubahanpadalarutan,

penambahan

reagen

Folin-

dimanalarutanpadatabungberwarnabiru

tua. Reagen Folin-Ciaocalteu dapat mendeteksi residu tirosin dalam larutan protein
karena kandungan fenolik dalam residu tirosin mampu mereduksi reagen FolinCiaocalteu yang terdiri dari fosfotungstat dan fosfomolibdat menjadi tungstat dan
molibdenum yang berwarnabiru.Warna ini dapat menyerap cahaya pada daerah sinar
tampak, sehingga transmitansi dan absorbansinya dapat diukur. Warna yang
ditimbulkansetelahpenambahanreagenFolin-Ciocalteumengindikasikan

terbentuknya

tungstat dan molibdenum.Dengan reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

H 2N
O

O
Mo

OH

HO

H2N

OH

WO42- +
tungstat
(ion berwarna biru)

3-

OH

CH2

CH2
PW12O 40 +
kuning pucat
(ion f osfotungstat)

OH

+ H3PO4

MoO2 +
molibdenum
(berwarna biru)

H2N

CH 2

HO
OH
12
OH
kuning pucat
(f osfomolibdat)

H 2N

OH

CH 2

3-

OH

+ H 3PO4

HO

Gambar 2.Residu Tirosin Mereduksi Reagen Folin-Ciaocalteu yang Terdiri Dari

Fosfotungstat dan Fosfomolibdat Menjadi Tungstat dan Molibdenum yang
BerwarnaBiru
Dimana

kompleks

Cu-protein

yang

dihasilkan

oleh

reagen

Biuret

jugamenyebabkan reduksi pada fosfotungstat dan fosfomolibdat. Adanya ion-ion

Cu2+darireagen Biuretmenyebabkan sensitifitas dari reagen Folin-Ciocalteu ini
mengalami perubahan yang cukup signifikan. Hal inidapatdilihat dariwarna yang
dihasilkankepekatannya meningkat dari tabung 1-8.

Langkahselanjunya, setelah penambahan reagen Folin-Ciocalteu, kemudian

larutan diinkubasi selama 30 menit. Waktu inkubasi dimulai setelah penambahan
reagen Folin-Ciocalteu ke dalam tabung terakhir. Selanjutnya dilakukan pengukuran
absorbansi masing-masing larutan. Pada metode ini digunakan alat spektronik 20 +
untuk menganalisis absorbansi larutan sampel dan larutan standar. Berdasarkan hasil
pengukuran, diperoleh nilai absorbansi sampel sebagai berikut.
Tabel 4. Absorbansi Larutan pada Tiap Tabung
Tabung
Tabung 1
Tabung 2
Tabung 3
Tabung 4
Tabung 5
Tabung 6
Tabung 7
Tabung 8 (sampel)

Absorbasi (A)
0,535
0,435
0,485
0,450
0,440
0,320
0,290
0,240

Berdasarkan data di atas, dapat dibuat kurva kalibrasi sebagai berikut.

f(x) = - 0x + 0.52
R = 0.83

Absorbansi (A)

20
0

60
40

80

100
140
180
220
260
300
120
160
200
240
280
320

Konsentrasi g/mL

Gambar 3. Kurva Hubungan Antara Absorbansi dengan Konsentrasi Larutan Standar

Protein (BSA)

Persamaan garis yang diperoleh dari kurva di atas adalah y =-0,0007x + 0,5164,
dimana y adalah absorbansi (A) dan x adalah konsentrasi (C), sehingga persamaan di
atas juga dapat ditulis sebagai berikut.
y = -0,0007x + 0,5164
A = -0,0007C + 0,5164
Berdasarkan pengukuran dengan spektronik 20+, diperoleh absorbansi sampel yaitu
sebesar 0,24. Konsentrasi sampel dapat ditentukan atau dihitung dengan cara
mensubstitusikan nilai absorbansi sampel ke dalam persamaan garis di atas, sehingga
diperoleh:
y

= mC + b

0,24

= -0,0007C + 0,5164

-0,0007C= 0,24 0,5164

-0,0007C= 0,24 0,5164
C

= 394,86 g/mL

Jadi, kadar protein dalam sampel setelah diencerkan (pada tabung 8) adalah 394,86.
Untuk kadar protein sebelum pengenceran dapat ditentukan dengan rumus sebagai
berikut:
V1.M1 = V2.M2, dimana
V1 = Volume sampel sebelum pengenceran
M1 = Kadar sampel sebelum pengenceran
V2 = Volume sampel setelah pengenceran
M2 = Kadar sampel setelah pengenceran
V1.M1

= V2.M2

0,1 mL x M1 = 1,0 mL x394,86 g/mL

1,0 mL x 394,86 g/mL
0,1 mL

M1 =
= 3948,6 g/mL
= 3,948 mg/mL
Konsentrasi tersebut adalah hasil pengenceran 10 kali, sehingga kadar protein pada
sampel putih telur awal adalah:

3,948 g/mL 100 mL

1 mL

M 394,8mg/mL

Sehingga kadar protein dalam sampel albumin telur tersebut adalah 394,8 mg/mL.
VI.

SIMPULAN
Berdasarkan data hasil pengamatan dan pembahasan di atas, maka dapat
disimpulkan sebagai berikut.

1. Kurva hubungan antara absorbansi (A) dengan konsentrasi ( g/mL) adalah

mendekati linear dengan R2 = 0,8269, dengan persamaan garis dari kurva adalah y
= -0,0007x + 0.5164.
2. Kadar protein dalam sampel albumin telur adalah sebesar 394,8 mg/mL.
VII.

DAFTAR PUSTAKA
Muderawan, I Wayan. 2009. Analisis Instrumen. Singaraja:UNDIKSHA PRESS

Redana, I Wayan. 2004. Buku Ajar Biokimiajilid I. Singaraja: IKIP NegeriSingaraja.

Redana, I Wayan&Siti Maryam. 2003. PenuntunPraktikumBiokimia. Singaraja: IKIP
NegeriSingaraja.
Tika,

Nyoman.

2010.

UniversitasPendidikan Ganesha

PenuntunPraktikumBiokimia.

Singaraja:

LAMPIRAN 1. GAMBAR

Gambar 1. Reagen B

Gambar 2. Reagen Biuret

Gambar 3. Larutan Standar BSA

Gambar 5. Spektrofotometer

Gambar 4. Proses Inkubasi

Gambar 6. Larutan Albumin Telur