PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS

BASIL TAHAN ASAM (BTA)

Rabu, 26 Agustus 2015

Ruang Rapat, BLK Provinsi Jawa Barat
1
Tujuan Pembelajaran Umum:

Setelah menyelesaikan sesi ini

peserta latih mampu melaksanakan
Pembuatan sediaan yang berkualitas
dan Pemeriksaan mikroskopis BTA
serta melaporkannya sesuai skala
IUATLD.

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 2
Tujuan Pembelajaran Khusus:

Setelah mempelajari materi ini, peserta

diharapkan mampu:
 Memilih spesimen dahak yang berkualitas
 Menyiapkan peralatan pembuatan sediaan
 Membuat sediaan dahak sesuai standar
 Melaksanakan pewarnaan metode ZN
 Membaca sediaan dahak
 Melaporkan hasil pembacaan BTA dengan
skala IUATLD
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 3
 Sediaan
Dahak yang
Baik

•Ditemukan leukosit
•Ukuran 2X3 cm, letak di tengah
•Ketebalan baik, rata, bersih
•Pewarnaan baik
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB 4
Nasional 2015
Kualitas Pemeriksaan Sediaan BTA

Menentukan

Kualitas Program Penanggulangan

Tuberkulosis

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 5
ALUR PEMERIKSAAN SEDIAAN
DAHAK
PEMBUATAN SEDIAAN APUSAN DAHAK
PENGERINGAN
FIKSASI

PEWARNAAN PEWARNAAN BTA

PEMANASAN
PENCUCIAN
DEKOLORISASI
PENCUCIAN
PEWARNAAN LATAR
PENCUCIAN
PENGERINGAN

PEMBACAAN SEDIAAN
PENILAIAN KUALITAS
HASIL MIKROSKOPIS BTA

PENCATATAN DAN PELAPORAN

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 6
1. PEMBUATAN SEDIAAN DAHAK
 Pemilihan spesimen dahak yang
berkualitas
 Peralatan Pemeriksaan sediaan dahak
 Pemberian identitas sediaan
 Cara pembuatan sediaan
 Prinsip pewarnaan Ziehl Neelsen

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 7
PERALATAN
 Kaca sediaan yang baru dan bersih
(frosted end slide)
 Bambu/lidi
 Lampu spritus/ bunsen
 Wadah pembuangan lidi bekas
 Desinfektan (lisol 5%, Alkohol 70%,
Hipoclorit 0,5%)

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 8
PEMBERIAN IDENTITAS
SEDIAAN

 Tulis pada bagian

frosted kasar
 Kode:
XX / YY / ZZZ . A
(sesuai tata cara
penomoran sediaan)

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 9
CARA MEMBUAT SEDIAAN

 Ambil dengan lidi

(berserabut ujungnya)
spesimen dahak pada
bagian yang purulen ±
sebesar biji kacang hijau

 Sebarkan secara spiral

kecil-kecil dahak pada
permukaan kaca sediaan
dengan ukuran 2 x 3
cm,bentuk oval

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 10
 PENGERINGAN

 Keringkanpada
temperatur kamar

 Masukkan lidi bekas

ke dalam wadah
berisi desinfektan

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 11
 FIKSASI

 Dengan pinset kaca

sediaan dijepit dan
fiksasi 2-3 kali
melewati api
(berwarna biru)
 Pastikan apusan
menghadap ke atas

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 12
 PENILAIAN KETEBALAN

Letakkan sediaan yg kering 4-5 cm di atas

kertas koran dan lakukan penilaian sbb:

Terlalu tebal Baik Terlalu tipis

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015
13
Pengiriman sediaan dari PS
ke PRM

Bila anda di PS:

Sediaan yang telah difiksasi disimpan
dalam kotak sediaan, kemudian dikirim
ke PRM disertai form TB 05

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 14
PEWARNAAN SEDIAAN
METODE
ZIEHL-NEELSEN

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 15
 Prinsip pewarnaan ZN
 M. tuberculosis mempunyai lapisan
dinding lipid (Mycolic acid) yang tahan
terhadap asam.
 Proses pemanasan mempermudah
masuknya Carbol Fuchsin ke dalam
dinding sel.
 Dinding sel tetap mengikat zat warna
Carbol Fuchsin walaupun didekolorisasi
dengan asam alkohol.
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 16
Peralatan Pewarnaan Ziehl
Neelsen

 Rak pewarnaan
 Pinset/ Penjepit kayu
 Air mengalir/ botol semprot air
 Sulut api
 Rak pengering
 Pengatur waktu/timer
 Pipet tetes

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 17
Reagensia Pewarnaan Zehl
Neelsen

 Carbol Fuhsin 1%
 Asam Alkohol 3%
 Methylen Blue 0,1%

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 18
Pewarnaan

 Atur sediaan diatas

rak, diberi jarak,
jangan terlalu rapat

 Tuangkan Carbol Fuchsin

1% hingga menutupi
seluruh permukaan
sediaan

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 19
Pemanasan

 Panaskan sediaan
dengan api sampai
keluar uap (jangan
sampai mendidih),
biarkan selama
minimal 10 menit

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 20
 Pencucian
 Buang Carbol Fuchsin 1% sambil dibilas dengan
air mengalir, secara perlahan dimulai dari bagian
kaca sediaan frosted.

 Jangan membilas langsung diatas sediaan.

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 21
 Dekolorisasi
 Tuangkan Asam alkohol
3%, diamkan selama 3
menit.
 Bila sisa warna merah
tampak jelas, ulangi
dekolorisasi sebanyak 1
kali.
 Bilas dengan air
mengalir sampai tidak
tersisa asam alkohol.
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 22
Pewarnaan Latar

 Tuangkan
methylene blue
0,1% hingga
menutupi
seluruh sediaan
dan biarkan
selama 1 menit.

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 23
 Pencucian
 Bilas Methylene Blue 0,1%
satu persatu secara
perlahan dengan air
mengalir dari arah kaca
sediaan frosted.
 Jangan membilas langsung
diatas sediaan.

 Keringkan sediaan pada

rak pengering

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 24
2. PEMBACAAN SEDIAAN DAHAK
 Kualitas Sediaan Dahak
 Pemindaian 100 LP
 Skala IUATLD

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 25
PENGGUNAAN MIKROSKOP

•Gunakan lensa objektif 10X

untuk menentukan fokus ,
menemukan lapang pandang &
menentukan kualitas sediaan

•Teteskan minyak imersi 1 tetes

Putar lensa objektif 100X

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 26
 Karakteristik BTA

 Morfologi BTA;
Batang merah,
ukuran 0,2-0,4
x 1-4 µm,
tidak runcing.

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 27
 KUALITAS SEDIAAN DAHAK

Sediaan Dahak yang berkualitas

harus memenuhi 6 persyaratan;
 Kualitas Dahak (Mikroskopis)

 Ukuran

 Kerataan

 Ketebalan

 Pewarnaan

 Kebersihan

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 28
 Kualitas Dahak (Mikroskopis)
Spesimen dahak berkualitas baik
jika ditemukan :

 Leukosit > 25 per LP 10x10 →

Makrofag pada pembesaran →

10x100

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 29
Ukuran Sediaan
BAIK Tersebar rata dalam bentuk
spiral atau lingkaran kecil-kecil
Berukuran 2x3 cm

JELEK Ukuran terlalu kecil

Tidak rata

JELEK Ukuran terlalu besar

Tidak rata

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 30
Kerataan
Baik
Sediaan harus rata
tidak boleh ada daerah kosong

Terlalu tebal sehingga terkelupas

Difiksasi sebelum kering
Pencucian langsung pada apusan

Tidak rata, Tipis

Tidak diratakan dengan
membuat spiral-spiral kecil

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 31
 Ketebalan
Sebelum Pewarnaan

Terlalu tebal Baik Terlalu tipis

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015
32
Ketebalan
Setelah Pewarnaan

Baik : sel lekosit tidak tampak

bertumpuk (one layer cells)

Jelek : Sel lekosit tampak

bertumpuk

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 33
 Pewarnaan
Baik : BTA dan latar belakang
dapat dibedakan dengan jelas,
dan tidak tampak sisa zat warna

Endapan kristal Dekolorisasi Kurang

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 34
 Kebersihan

Sediaan yang baik,

tampak bersih

Sediaan tampak kurang bersih,

terlihat endapan kristal, sisa
zat warna dan kotoran/debris

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 35
Kualitas Pewarnaan Ziehl Neelsen
yang baik

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 36
 Enam Unsur Penilaian Sediaan Dahak
Ukuran
100

80
60
Kebersihan Ketebalan
40
20
0

Kualitas Spesimen Kerataan

Pewarnaan
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 37
Pembacaan sediaan dahak
 Pembacaan mulai dari ujung kiri ke
ujung kanan (atau sebaliknya)
minimal 100 lapang pandang, pada
garis horisontal terpanjang

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 38
 SKALA IUATLD
 Negatif : Tidak ditemukan BTA minimal dalam
100 lapang pandang
 Scanty : 1-9 BTA dalam 100 lapang pandang
(Tuliskan jml BTA yang ditemukan)
 1+ : 10–99 BTA dalam 100 lapang pandang
 2+ : 1 – 10 BTA setiap 1 lapang pandang
(periksa minimal 50 lapang pandang)
 3+ : ≥ 10 BTA dalam 1 lapang pandang
(periksa minimal 20 lapang pandang)
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 39
 Pelaporan hasil pemeriksaan

 Catat hasil pemeriksaan pada Register Lab

(TB 04)
 Catat hasil pemeriksaan pada Form TB 05
bagian bawah
 Beri tanggal dan tandatangani Form TB 05
Pusat Pelatihan Mikroskopis TB
Nasional 2015 40
Penyimpanan sediaan dahak
 Hilangkan minyak imersi dengan cara
menempelkan permukaan yang berisi
minyak dengan tissue atau dengan
xylol

 Simpan sediaan dalam kotak sediaan

secara berurutan sesuai dengan nomor
register lab TB 04

Pusat Pelatihan Mikroskopis TB

Nasional 2015 41