BAB I

PENDAHULUAN

MicroRNAs (miRNAs) adalah kelompok kecil RNA non-coding dengan

panjang 20 sampai 25 nukleotida dengan fungsi selular (generasi sel, diferensiasi,
multiplikasi, karsinogenesis, dan apoptosis). Beberapa peneliti berpendapat
bahwa ekspresi menyimpang dari miRNAs dalam jaringan hati terkait dengan
patogenesis penyakit hati; hepatitis virus, karsinoma hepatoseluler, dan fatty
liver. Analisis miRNAs pada sirkulasi bermanfaat untuk mendiagnosis etiologi
atau progresi penyakit hati dan terapeutik.1
Ratusan target gen miRNA ada di genom manusia, dan miRNAs mungkin
mengontrol hingga 60% dari mRNA manusia. Sebanyak 1881 prekursor dan
2588 miRNAs manusia dewasa terdaftar di miRbase versi 21.0 (http://www.
Mirbase.org).2
Biopsi liver merupakan gold standart diagnosis etiologi penyakit hati,
peradangan hati, fibrosis hati, dan kanker hati. Diagnostik fibrosis hati terbaru
antara lain menggunakan AST to Platelet Ratio Index (APRI), Fibrosis-4 (FIB-4),
FibroTest, FibroMeter, USG, MRI untuk pengukuran liver stiffness. miRNA
sirkulasi merupakan metode yang spesifik, berulang, dan mudah untuk
mendiagnosis penyakit hati. Pada Makalah ini memaparkan tentang miRNA yang
sudah terdeteksi pada keadaan sirosis hati.1,2

1
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
1. Micro RNA (MiRNA)

Teori konservatif bahwa DNA ditranskripsi menjadi RNA yang

diterjemahkan menjadi protein untuk memediasi fungsi biologis telah ditetapkan
dan menjadi patokan sejak beberapa dekade yang lalu. Yang mengejutkan,
sekuensing genom dan transkriptom telah mengungkapkan bahwa sebagian besar
RNA dalam genom mamalia tidak mengkode protein apa pun, dan oleh karena
itu, ditetapkan sebagai RNA nonkode (ncRNA). ncRNA sangat heterogen dalam
ukuran, berfungsi sebagai microRNA (miRNA) dan nonkoding RNA panjang
(lncRNA), dan memainkan peran penting dalam perkembangan penyakit pada
manusia.1

MicroRNAs (miRNAs) adalah RNA untai tunggal, non-protein kecil, dengan

panjang ~ 22 nukleotida, yang ditranskripsi oleh RNA polimerase II dan III.
MiRNA pertama kali dideskripsikan tahun 1993 dalam C. elegans dan
didemonstrasikan mampu mengatur ekspresi gen pasca transkripsi melalui
pengikatan pada 3 'atau 5' daerah yang tidak diterjemahkan (UTR) dari mRNA
target mereka. Oleh karena itu, miRNA dapat mengatur beragam aspek biologis,
termasuk proliferasi sel, diferensiasi, kematian sel, serta pengembangan organ
dan pemeliharaan fisiologi organ. Karena fungsi fisiologisnya yang luas, miRNA
secara intensif dipelajari dalam dekade terakhir dan lebih dari 1800 miRNA telah
diidentifikasi sejauh ini pada manusia. Dalam data silico meramalkan bahwa
lebih dari 45.000 situs target miRNA hadir dalam DNA manusia dan bahwa
ekspresi lebih dari 60% dari semua gen pengkode protein diatur oleh miRNA.2

Setelah transkripsi, pri-miRNA dengan panjang 500 -3000 nukleotida yang

dihasilkan diproses dalam nukleus oleh apa yang disebut "kompleks
mikroprosesor" menjadi miRNA prekursor (pra-miRNA, dengan panjang sekitar
70 nukleotida ). Pra-miRNA dilepaskan dalam sitoplasma melalui exportin-5 di

2
inti sel. Di dalam sitoplasma, pre-miRNA dibelah oleh endonuklease RNase III,
menjadi miRNA beruntai ganda dengan panjang ~ 22 nukleotida.2

Setelah diurai dan dipilah, miRNA untai tunggal yang sudah matang terikat
pada Argonaute yang merupakan bagian dari “RNA-induced silencing complex”
(RISC). Selain itu, memilih untai didasarkan pada protein yang berbeda seperti
DICER, TRBP, PACT (pengaktif protein protein kinase tergantung dsRNA), atau
Xrn-1/2. Namun, mekanisme yang tepat dan interaksi protein-protein ini selama
pemilihan untaian penuntun sebagian besar tidak diketahui, untaian penuntun
tampaknya memiliki ikatan yang lebih lemah dan bias pada ujung 5'-akhir serta
jumlah purin yang lebih besar daripada untaian penumpang yang menunjukkan C
-bias di ujung 5'-akhir dan kelebihan pirimid. Oleh karena itu sifat termodinamika
dapat memainkan peran penting dalam pemilihan untai panduan. RISC dapat
menginduksi represi pasca-transkripsi atau translasi mRNA melalui pengikatan
miRNA yang dimuat ke UTR 3 'atau 5' dari mRNA targetnya. Sebaliknya, untuk
menyelesaikan pengikatan komplementer yang menginduksi degradasi mRNA
target, pengikatan komplementer parsial menyebabkan represi translasional.2

3
 Gambar 1. Biogenesis MicroRNAs (miRNAs).

miRNA memiliki ekspresi spesifik pada sel dan jaringan. Mereka mengontrol
spektrum luas dari proses biologis termasuk proliferasi sel, diferensiasi,
perkembangan, metabolisme, apoptosis, sekresi, dan infeksi virus. Deregulasi
dalam tingkat ekspresi miRNA telah dikaitkan dengan banyak progres seperti
kanker, diabetes, gangguan sistem saraf, penyakit kardiovaskular, asma, dan
penyakit autoimun.3

Pengenalan akan mRNA oleh miRNA berdasarkan pada "wilayah benih"

miRNA, yang terdiri dari 2-8 nukleotida molekul matang. Urutan miRNA
disimpan dalam repositori publik - miRBase, mendaftar semua yang dikenal,
miRNA referensi. Studi terbaru menunjukkan bahwa gen miRNA individu dapat
menimbulkan banyak molekul miRNA dewasa dengan panjang yang bervariasi,
bernama isomiRs. IsomiRs dapat berasal dari spesifisitas yang tidak sempurna
dari Drosha dan pembelahan Dicer dari prekursor mikroRNA, terutama karena
motif struktural asimetris yang terdapat pada prekursor atau dari pemangkasan
atau perluasan miRs dewasa. Variasi urutan dari banyak isomiRs terdiri dari
penambahan atau penghapusan nukleotida pada ujung 5 ' bila dibandingkan
dengan referensi miRNA, yang menghasilkan perubahan "wilayah benih" miRNA
dan, sebagai konsekuensinya, mengarah pada pengenalan dan regulasi set target
gen yang berbeda.4

Begitu miRNA mengikat gen targetnya, salah satu dari dua mekanisme aksi
terjadi: (I) degradasi atau destabilisasi mRNA; atau (II) represi translasi.
Berdasarkan mekanisme ini, beberapa algoritma untuk prediksi in-silico target
untuk miRNA, termasuk miRanda, Pictar, TargetScan, RNA22, PITA, dan
miRdb dikembangkan. Algoritma prediksi ini memperhitungkan parameter
berikut: (I) lokasi miRNA; (II) pemasangan pasangan Watson Crick; (III) sifat
termodinamika miRNA: pengikatan mRNA.3

4
 miRNA memiliki beberapa fitur berbeda dibandingkan dengan jenis RNA
fungsional lainnya. Pertama, sebagian besar miRNA diketahui dikodekan sebagai
transkrip polikistronik, menunjukkan bahwa anggota keluarga miRNA yang sama
dapat berevolusi secara bersamaan dan berkembang dengan cara yang sama.
Kedua, telah diketahui bahwa sejumlah besar miRNA sangat dikonservasi secara
berurutan di antara organisme yang berbeda dan miRNA yang dikonservasi
spesies silang memiliki sekuens “benih” khusus dalam terminal 5 'mereka;
konservasi seperti itu menunjukkan bahwa molekul-molekul ini berpartisipasi
dalam proses seluler penting. Ketiga, miRNA cenderung menargetkan dan
mengatur seperangkatbeberapa mRNA alih-alih hanya substrat mRNA tertentu.
Keempat, bukti eksperimental langsung mendukung gagasan bahwa jalur miRNA
adalah mekanisme pengaturan kuno yang berkembang sebelum perbedaan
organisme multisel dan uniseluler.5

Sebagian kecil miRNA ditemukan dimodulasi dalam mekanisme pengaturan

ritme sirkadian. miR-219 ditargetkan oleh kompleks CLOCK dan BMAL1 dan
miR-132 diinduksi oleh intensitas cahaya melalui mekanisme yang bergantung
pada MAPK / CREB untuk mengontrol ekspresi gen yang berhubungan dengan
jam dan untuk mengurangi efek dari cahaya. Mekanisme pengaturan serupa juga
diamati oleh Xu dan rekan, di mana miR-96 dan miR-182 dilaporkan terlibat
dalam regulasi ritme sirkadian dengan memodulasi ekspresi adenylyl cyclase VI
di retina. Yang dan rekannya menggunakan Drosophila untuk menyelidiki jam
sirkadian yang dapat mengatur ekspresi miRNA dan menemukan bahwa sejumlah
miRNA, seperti miR-263a dan miR-263b, menunjukkan perubahan kuat harian
dalam kelimpahan baik dalam lalat tipe liar maupun yang dipelihara di kondisi
gelap gulita.5

Pada inflamasi kronis, yang berasal dari respons imun abnormal, memiliki
mekanisme kompleks yang melibatkan perubahan ekspresi gen dalam sel imun.
Peran yang muncul dari miRNAs dalam kekebalan bawaan dan adaptif sangat
menunjukkan hubungan dengan regulasi penyakit inflamasi. Sampai saat ini, ada
beberapa miRNA termasuk miR-29, miR-133a, mir-155, miR-221, miR-223 atau

5
miR-652, dengan peran fungsional yang diketahui dalam penyakit inflamasi
spesifik seperti rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, kanker , penyakit
inflamasi usus, penyakit rainflamasi ang kulit, dan penyakit inflamasi saluran
napas. Baru-baru ini, peran miRNAs dalam inflamasi hati dan fibrogenesis hati
juga dikemukakan oleh beberapa penelitian.3

Pada tahun 2008, miRNA ditemukan secara pada plasma atau serum.
Selanjutnya, kehadiran miRNA dalam saliva dan urin dilaporkan. MiRNA
ekstraseluler seperti ini ditemukan stabil, bahkan di lingkungan yang kaya RNase,
karena mereka diselimuti vesikel seperti eksosom, mikrovesikel, badan apoptosis,
dan ektosom, atau terkait dengan protein pengikat RNA, termasuk nukleofosmin
1, atau lipoprotein densitas tinggi. Setelah penemuan miRNA ekstraseluler dalam
cairan tubuh, sejumlah besar makalah telah melaporkan bahwa kadar beberapa
miRNA ekstraseluler berubah seiring dengan kondisi patofisiologis yang berbeda.
Contohnya termasuk miR-141 dan miR-375 pada kanker prostat, miR-29a dan
miR-92a pada kanker kolorektal, miR-499 pada infark miokard. Contoh yang
paling terkenal adalah miR-122 spesifik-hati, yang merupakan biomarker sensitif
dari berbagai jenis cedera hati.6

2. Patogeneisis Penyakit Hepar

Peradangan hati kronis adalah beban kesehatan utama di seluruh dunia, yang
kelanjutannya dapat berkembang menjadi fibrosis hati, sirosis hati, karsinoma
hepatoseluler, dan akhirnya kematian. Dari sudut pandang patofisiologis, fibrosis
hati mewakili hasil respons penyembuhan luka terhadap cedera hati kronis atau
berulang. Cedera hati berhubungan dengan kematian sel hati dan regenerasi sel
parenkim berturut-turut untuk menggantikan sel nekrotik atau apoptosis. Jika
cedera hati berlanjut, regenerasi hati mungkin gagal, dan hepatosit digantikan
oleh matriks ekstraseluler (ECM). Sementara pada tahap awal, bahan fibrotik
hanya terletak di sekitar saluran portal (dalam hal virus hepatitis) atau pericentral
(dalam kasus penyakit hati yang diinduksi alkohol), pada tahap selanjutnya,
menjembatani kumpulan kolagen terjadi. Sel stellate hati (HSCs) mewakili

6
sumber utama produksi ECM di hati yang cedera. Quiescent HSCs terletak di
ruang Disse dan merupakan tempat penyimpanan utama vitamin A. Selama
cedera hati, HSC menjadi teraktivasi dan memperoleh sifat kontraktil, pro-
inflamasi, dan fibrogenik. HSC yang teraktivasi seperti itu mengeluarkan ECM
dalam jumlah yang luar biasa dan pada tahap lanjut fibrosis hati, hati dapat
mengandung hingga enam kali lebih banyak ECM daripada normal.3

HSC yang teraktivasi menjadi kontraktil dan mengeluarkan berbagai protein

ECM dan mediator bioaktif, termasuk transformasi faktor pertumbuhan-β1 (TGF-
β1), faktor pertumbuhan turunan trombosit (PDGF) dan faktor pertumbuhan
jaringan ikat (CTGF). Pada gilirannya, proliferasi HSC dan sintesis kolagen akan
dipercepat. TGF-β1 adalah sitokin yang paling fibrogenik dan meningkat setelah
aktivasi HSC. Pada HSC yang teraktivasi, TGF-β1 menginduksi upregulasi gen
yang kuat dan konsisten untuk kolagen dan komponen ECM lainnya. Ini juga
mengatur ekspresi matrix metalloproteinases (MMPs) dan penghambatnya
(penghambat jaringan metalloproteinase, TIMP), yang memodulasi reaksi
inflamasi dengan mempengaruhi fungsi sel T.7

Salah satu fitur kunci dalam pengembangan fibrosis hati adalah adanya
peningkatan myofibroblast di hati. Myofibroblast dicirikan oleh bentuk
stellatenya, ekspresi dari beberapa protein spesifik, seperti alpha-smooth muscle
actin (α-SMA), dan produksi berlebihan protein matriks ekstraseluler, termasuk
fibronektin dan kolagen tipe I, III, dan IV. Sel HSC bertransdiferensiasi setelah
cedera pada myofibroblast, dan dapat dianggap sebagai asal utama myofibroblast.
Selama inisiasi dan perkembangan proses fibrosis hati, hati mengalami berbagai
jenis stres termasuk hipoksia, stres oksidatif, dan stres retikulum endoplasma
(ER). HSC akan merespons dengan mengaktifkan ke dalam myofibroblast, yang
ditandai dengan perubahan gen dan ekspresi microRNA.8

Cedera hati kronis dan fibrosis hati berhubungan dengan respon inflamasi
lokal dan sistemik, mengisyaratkan bahwa tipe sel hati selain HSC juga terlibat
dalam fibrogenesis. Hepatosit yang menjadi terluka, melepaskan spesies oksigen

7
reaktif (ROS) dan mediator inflamasi dan dengan demikian menginduksi
rekrutmen sel inflamasi ke hati. Sel-sel inflamasi, baik limfosit atau sel
polimorfonuklear, mengaktifkan HSC untuk mengeluarkan kolagen. HSC-
teraktivasi sendiri mengeluarkan kemokin inflamasi, mengekspresikan molekul
adhesi sel, dan memodulasi aktivasi limfosit dan sel Kupffer yang memainkan
peran utama dalam peradangan hati dengan melepaskan mediator pro-inflamasi.
Oleh karena itu, fibrosis dimediasi oleh lingkaran setan dimana sel-sel inflamasi
dan fibrogenik diaktifkan dan saling menstimulasi.3

Beberapa miRNA juga telah dikaitkan dengan regulasi jalur stres oksidatif,
termasuk anggota keluarga miR-200. Dari keluarga miRNA ini, terutama miR-
200c telah terbukti menunjukkan ekspresi yang meningkat setelah paparan H2O2.
MiRNA ini akan mengarah pada deregulasi homeobox 1 (Zfhx1a, atau ZF1, atau
TCF8) pengikat jari E-box jari seng, baik pada mRNA dan tingkat protein, yang
menyebabkan penuaan seluler dan menghambat proliferasi sel. Menariknya, loop
penghambatan ditemukan antara miR-200c dan Zeb1, karena daerah promotor
miR-200c berisi dua situs pengikatan Zeb1 yang dikonservasi. MiRNA lain yang
terkait dengan stres oksidatif ismiR-21. Sel yang terpapar dengan ROS akan
meningkatkan regulasi miR-21, yang dapat langsung berinteraksi dengan 3′UTR
dari gen kematian sel 4 (PDCD4) terprogram, penekan tumor yang dikenal dan
apoptosis-regulator , dengan demikian mencegah kematian sel. Stres oksidatif
yang dimediasi oleh regulasi miR-21 dapat diinduksi oleh aktivasi NF-kB melalui
lima situs pengikatan NF-kB di wilayah promotor 5 miR-21. Pengaturan atas
miR-21 akan menjadi efek hilir dari aktivitas oksidase NADPH, karena hal ini
menginduksi translokasi NF-κB ke nukleus dan selanjutnya mengikatnya ke
promotor miR-21.8

Dari sudut pandang klinis, fibrosis hati merupakan konsekuensi umum dari
penyakit hati kronis. Saat ini, fibrosis hati masih belum cukup dapat diobati dan
sering berkembang menjadi sirosis hati yang merupakan faktor risiko utama
untuk pengembangan karsinoma hepatoseluler. Meskipun ada kemajuan terbaru,
misalnya, dalam pengobatan hepatitis virus, strategi farmakologis dalam

8
pengobatan atau pencegahan sirosis hati masih kurang dan prognosis pasien
dengan sirosis hati tetap buruk. Dengan demikian, pemahaman yang lebih baik
tentang mekanisme yang mendasari peradangan hati, hepatofibrogenesis dan
perkembangan sirosis hati sangat dibutuhkan.3

3. MiRNA dan Penyakit Sirosis Hepar

Sirosis hepar merupakan salah satu kondisi penyebab mortalitas non-

neoplastik paling umum di seluruh dunia, didefinisikan sebagai perkembangan
histologis nodul regeneratif yang dikelilingi oleh jaringan ikat fibrosa sebagai
respons terhadap penyakit hati kronis. Meskipun prevalensi sirosis yang tepat
tidak diketahui, diperkirakan 800.000 kematian setiap tahun di seluruh dunia
terjadi karena sirosis hepatis.9

Sirosis hati adalah jalur patologis akhir umum dari kerusakan hati yang
timbul dari berbagai macam penyakit hati kronis. Etiologi sirosis bervariasi
secara geografis, dengan alkoholisme, infeksi virus hepatitis C kronis, dan
penyakit nonalkohol fatty liver (NAFLD) menjadi penyebab paling umum di
negara-negara barat, sedangkan hepatitis B kronis adalah penyebab utama sirosis
hati di wilayah Asia-Pasifik. Sirosis hati memiliki banyak penyebab lain,
termasuk penyakit yang diturunkan seperti hemochromatosis dan penyakit
Wilson, sirosis bilier primer, kolangitis sklerosis primer, dan hepatitis autoimun.
Beberapa kasus bersifat idiopatik atau kriptogenik. Dalam beberapa dekade
terakhir, NAFLD telah menjadi penyebab utama sirosis di negara-negara Barat
seperti Amerika Serikat, dengan prevalensi setinggi 30% pada populasi umum.10

Seiring berkembangnya ilmu medis dan kemajuan besar dalam mengobati

penyakit hati kronis, penilaian akurat sirosis yang tidak bergejala menjadi penting
untuk pengelolaan individual yang optimal dari aktivitas penyakit pada pasien.
Namun, kurangnya metode yang akurat, dapat direproduksi dan mudah
diterapkan untuk sirosis yang bahkan belum bergejala, telah menjadi batasan
utama untuk manajemen klinis dan tujuan penelitian. Biopsi hati, standar emas
untuk penilaian fibrosis, masih memiliki beberapa keterbatasan termasuk

9
morbiditas dan mortalitas, variabilitas pengamat, dan variasi pengambilan
sampel. Oleh karena itu, mengembangkan metode noninvasif dan nyaman yang
dapat diandalkan untuk mengevaluasi perubahan histologis akan menjadi
kemajuan besar dalam diagnosis sirosis hati. Saat ini, diagnosis sirosis hati
noninvasif terutama bergantung pada kombinasi pencitraan dan penanda
serologis, tetapi tidak satupun dari mereka yang benar-benar memuaskan. Dengan
demikian identifikasi penanda prediktif dan prognostik yang akurat dan divalidasi
untuk sirosis hati diperlukan untuk meningkatkan diagnosis, membimbing terapi
yang ditargetkan secara molekuler dan memantau aktivitas dan respons
terapeutik. Oleh karenanya penggunaan miRNA saat ini semakin sering dipelajari
dan diteliti mengenai manfaatnya pada diagnosis hingga terapi sirosis hepatis.9

Mempertimbangkan bahwa satu miRNA dapat memiliki beberapa target

mRNA dan setiap target dapat diatur oleh miRNA yang berbeda, miRNA mampu
mengatur proses biologis sel esensial. Sebaliknya, deregulasi berbagai profil
miRNA dikaitkan dengan berbagai penyakit hati akut dan kronis termasuk
hepatitis virus, steatohepatitis, fibrosis hati, sirosis, dan karsinoma hepatoseluler
(HCC). Karena miRNA sangat stabil dalam cairan tubuh, seperti sampel serum,
miRNA telah dipelajari secara ekstensif dalam beberapa tahun terakhir untuk
mengembangkan potensi mereka sebagai biomarker untuk penyakit hati.2

Sejak ditemukan pada tahun 1993, miRNA telah dipelajari secara intensif
mengenai peran fisiologisnya dalam homeostasis organ, perkembangan jaringan,
dan regenerasi. MiRNA hati yang paling penting, miR-122 meliputi sekitar 70%
dari semua miRNA pada hati. Penurunan regulasi menyebabkan penurunan kadar
kolesterol plasma, peningkatan oksidasi asam lemak hati, serta pengurangan asam
lemak hati dan sintesis kolesterol. Lebih jauh, penghambatan miR-122 mengarah
pada peningkatan regulasi hemochromatosis (Hfe), hemojuvelin (Hjv), reseptor
protein morfogenetik tulang tipe 1A (Bmpr1a), dan hepcidin antimicrobial
peptide (Hamp), yang mengontrol kadar zat besi sistemik. Namun, tingkat hati
miR-122 hampir konstan, mereka dikaitkan dengan ekspresi gen sirkadian di hati
karena knockdown dari miR-122 telah mengakibatkan disregulasi banyak

10
mRNA, yang terakumulasi secara sirkadian. Selain itu, profil ekspresi miRNA
dikaitkan dengan proliferasi hepatosit dan regenerasi hati. Secara in vitro, faktor
nuklir 4 hepatosit nuklir (HNF4α) diidentifikasi sebagai gen target miR-24 dan
miR-34a. Downregulation HNF4α menghasilkan supresi sitokrom P450 dan
pengurangan populasi HepG2 dalam fase S. Wawasan menarik tentang peran
miRNA dalam pengembangan hati disediakan oleh Hand et al. KO kondisional
DICER1 dalam sel yang diturunkan hepatoblas menyebabkan penurunan regulasi
miR-122, miR-192, dan miR-194 yang signifikan. Namun AfpCre; Mutan
dicer1flox / flox tidak menunjukkan fenotipe yang berubah secara langsung
setelah lahir, mereka berkembang pada kerusakan hepatosit progresif usia 2-4
bulan, seperti yang terlihat oleh peningkatan kadar AST dan ALT, peningkatan
massa hati disertai dengan peningkatan proliferasi dan apoptosis. Contoh-contoh
yang diberikan menunjukkan beragam peran miRNA dalam mempertahankan
homeostasis hati dan karenanya menyoroti keterlibatan miRNA dalam penyakit
hati akut dan kronis.2

Selain miR-122, miRNA-132 telah muncul sebagai mediator inflamasi pada

penyakit hati kronis. Up-regulasi miR-132 ditemukan di banyak lokasi di hepar
dan juga dalam sel Kupffer yang diisolasi dari tikus setelah pemberian etanol
kronis. Selain miR-132, induksi pada ekspresi miR-155 dilaporkan dalam sel
Kupffer setelah pemberian alkohol, dan TNF telah diidentifikasi sebagai target
miR-155 untuk meningkatkan proses inflamasi hati. Selain itu, pada model tikus
dengan NASH, miR-155 meningkat dan ekspresi miR-155 tinggi dikaitkan
dengan pengembangan HCC pada tikus ini dengan mengatur level C / EBP β.
Tingkat hati miR-155 juga meningkat pada pasien dengan HCV dan terbukti
mempromosikan progresi HCC melalui pensinyalan Wnt. Peningkatan ekspresi
miR-155 juga didapatkan pada monosit perifer dari pasien dengan infeksi HCV
yang resisten terhadap terapi kronis sedangkan tidak ada peningkatan yang
ditemukan pada pasien yang menanggapi pengobatan. Tidak seperti miR-155,
miR-146a adalah regulator negatif dari pensinyalan TLR; miR-146a meredam
respons pro-inflamasi melalui TRAF6 dan IRAK-1. Konsisten dengan peran

11
pengatur negatifnya dalam miR-146a, tikus yang kekurangan miR-146a
mengembangkan hiperinflamasi dan fenotip myeloproliferative karena
hiperaktivasi NF-κB.3

Sirosis hati merupakan tahap akhir yang umum terjadi pada sebagian besar
penyakit hati kronis dan dikaitkan dengan morbiditas dan mortalitas yang besar.
Namun, opsi perawatan terbatas. Dalam konteks ini, miRNA disarankan sebagai
target baru yang menjanjikan untuk pengembangan alat inovatif untuk modulasi
penyakit ini. Aktivasi dan trans-diferensiasi sel-sel stelata hati pada saat paparan
hati terhadap racun, atau rangsangan buruk lainnya, merupakan proses kunci
dalam pengembangan fibrosis hati atau sirosis. HSC adalah jenis sel utama yang
terlibat dalam pengembangan fibrosis hati dengan mengeluarkan molekul ECM
seperti collagen, laminin, proteoglikan, dan fibronektin. Setelah aktivasi, HSC
berubah menjadi sel mirip myofibroblast yang menghasilkan ECM yang
mengarah ke fibrosis hati. Dengan menggunakan pendekatan berbasis susunan,
ditunjukkan bahwa seluruh panel miRNA dideregulasi dalam HSC aktif jika
dibandingkan dengan HSC yang dorman. Sementara misalnya, miR-29c *, miR-
501, miR-349, miR-325-5p, miR-328, miR-143, dan miR-193 menampilkan
peningkatan regulasi yang signifikan, miR-341, miR-20b-3p, miR -15b, miR-16,
miR-375, miR-122, miR-146a, miR-92b, dan miR-126 ditemukan mengalami
penurunan regulasi.2

Studi tentang mekanisme molekuler yang mendasari perkembangan sirosis

telah menyoroti peran penting dari molekul yang mengatur transisi epitel-
mesenkimal (EMT), termasuk dua faktor pertumbuhan multifungsi dari
transformasi superfamili faktor pertumbuhan β (TGFβ), protein morfogenik
tulang 7 (BMP7) dan TGFβ1. Sementara TGFβ1 adalah faktor pro-fibrotik yang
mapan untuk menginduksi EMT dan fibrosis, BMP7 bertentangan dengan efek
TGFβ1 untuk membalikkan EMT dan fibrosis. Telah diketahui pula bahwa MiR-
22 menghambat ekspresi BMP7 dalam hepatosit, melalui pengikatan langsung
dan penghambatan pada 3-UTR BMP7 mRNA. Ekspresi antisense miR-22 secara

12
signifikan melemahkan tingkat fibrosis hati, hipertensi portal dan retensi natrium
yang disebabkan oleh CCl4, mungkin melalui peningkatan regulasi BMP7 .11

Analisis berbasis microarray pada ekspresi miRNA pada HSC teraktivasi dari
tikus dan tikus mengungkapkan seluruh panel miRNA yang dideregulasi selama
aktivasi dan transdifferensiasi sel-sel ini. Sebagai contoh, dalam HSC yang
diaktifkan dari tikus, 12 miRNA (miR-874, miR-29c *, miR-501, miR-349, miR-
325-5p, miR-328, miR-138, miR-143, miR- 207, miR-872, miR-140, miR-193)
menampilkan peningkatan regulasi yang signifikan, sementara 9 miRNAs (miR-
341, miR-20b-3p, miR-15b, miR-16, miR-375, miR-122 , miR-146a, miR-92b,
dan miR-126) menjadi deregulasi.3

Analisis ROC mengungkapkan sensitivitas dan spesifisitas miR-138 dari

89,3% dan 71,43% untuk prediksi fibrosis tahap awal dan masing-masing 89,3%
dan 93,02% untuk prediksi fibrosis stadium akhir, yang menunjukkan bahwa
analisis miRNA yang bersirkulasi mungkin membantu mendeteksi bahkan tahap
awal fibrosis hati. Selain miRNA ini, beberapa kelompok menunjukkan bahwa
kadar miR-34a, salah satu miRNA yang diselidiki terbaik dalam konteks penyakit
hati kronis, meningkat pada pasien dengan fibrosis hati.12

Pada proses fibrosis hati dan sirosis, hipoksia pada sel-sel hati dapat
disebabkan oleh gangguan aliran darah hati, kerusakan mikro-pembuluh darah,
dan deposisi ECM yang berlebihan di ruang sinusoidal. Hipoksia seluler
mengarah pada aktivasi beberapa Hypoxia Inducible Factors (HIFs), keluarga
faktor transkripsional yang berfungsi sebagai regulator utama untuk pemeliharaan
homeostasis seluler ketika dihadapkan dengan kadar oksigen rendah. Pada kadar
oksigen seluler normal, faktor yang diinduksi hipoksia yang bergantung pada
oksigen HIF-1α (HIF-1α) dihidroksilasi oleh anggota keluarga prolyl hydroxylase
(PHD), yang menyebabkan degradasi cepat protein ini. Penurunan kadar oksigen
seluler menyebabkan hilangnya fungsi PHD, dan akumulasi serta translokasi
HIF-1α / HIF-2α ke nukleus. Dalam nukleus, kompleks faktor transkripsi HIF
fungsional terbentuk yang terdiri dari HIF-α, HIF-1β, dan beberapa elemen

13
responsif hipoksik. HIF mengatur proses tertentu seperti angiogenesis,
metabolisme zat besi, glikolisis, dan kontrol pH. Peran penting HIF-1α selama
aktivasi HSC yang diinduksi hipoksia dikonfirmasi secara in vitro dengan
menghambat aktivasi HSC karena pembungkaman HIF-1α, dan berkurangnya
ekspresi gen aktivasi pada HSC yang kekurangan HIF-1α yang menjalani
hipoksia. Diketahui pula, MiRNA dapat bertindak faktor deregulasi dan
peningkatan regulasi dari jalur-jalur HIF. Misalnya, ekspresi miR-210 secara
langsung diatur oleh HIF-1α karena dapat mengikat elemen responsif hipoksia
(HRE) yang terletak di bagian atas situs awal transkripsi miR-210, yang
mengarah pada peningkatan transkripsi.8

Selain miRNA, RNase III (Dicer), enzim kunci dalam pemrosesan miRNA,
tampaknya berperan dalam aktivitas HSC. Pada suatu penelitian lain yang
menghambat ekspresi Dicer, mereka mampu mengurangi proliferasi HSC dan
menurunkan ekspresi gen terkait fibrosis (mis., Kolagen tipe I, α-SMA, dan
penghambat jaringan metalloproteinases). Selama penghambatan Dicer, ada
penurunan ekspresi miR-138, -143, -140, dan -122 yang secara signifikan
menurun dan mereka lebih lanjut menjelaskan target mereka sebagai PTEN, Ras
GTPase protein seperti protein aktif 1 (RASAL 1), asil-Coa sintetase lama-
anggota keluarga rantai 1 (ACSL 1), dan p27, masing-masing. Studi ini
menekankan pentingnya regulasi miRNA yang diperantarai Dicer dan
pengaruhnya terhadap fibrogenesis.13

4. Jenis MiRNA pada Sirosis Hepar

Selain miR-122, seluruh panel miRNA lain dengan ekspresi tinggi dalam
hepatosit, termasuk miR-125b dan miR-22 terderegulasi pada sampel hati dari
pasien dengan fibrosis hati atau sirosis. Selain itu, tingkat ekspresi miR-150 dan
miR-194 yang lebih rendah telah dikaitkan dengan hepatofibrogenesis.
Deregulasi anggota keluarga miR-29, serta miR-19b, baru-baru ini terkait dengan
inflamasi hati kronis dan fibrogenesis pada model tikus yang berbeda dari sirosis
hati dan spesies berbeda termasuk manusia. Selain itu, miR-21, keluarga miR-34,

14
anggota miR-199-serta keluarga miR-200 meningkat pada penyakit hati fibrosis
pada tikus dan manusia. IL-6 / Stat3 mengikat ke daerah promoter 5 'dari miR-21
dan meningkatkan ekspresi miR-21 pada hepatosit manusia dan HSC.3

4.1 Keluarga miRNA-29

Keluarga miR-29 terdiri dari miR-29a, miR-29b, miR-29c yang hanya

berbeda dua atau tiga basa. Deskripsi pertama miR-29 pada penyakit fibrotik
disampaikan oleh van Rooij et al., yang menerangkan bahwa terjadi deregulasi
miR-29 fibrosis jantung. Mengenai fibrosis hati, Ogawa et al. memberikan bukti
pertama bahwa miR-29b dideregulasi pada HSC tikus yang diaktifkan dan
mengatur ekspresi kolagen melalui interaksinya dengan Col1A1 3'UTR. Ekspresi
berlebihan miR-29b menekan ekspresi Col1A1 dan mencegah regulasi kolagen di
TGF-β1 yang distimulasi HSC. Dengan menggunakan profil miRNA yang tidak
bias pada ekstrak RNA dari tikus yang diobati dengan CCl4 didapatkan bahwa
ketiga anggota keluarga miR-29 berderugulasi secara konsisten dengan tingkat
fibrosis hati.3

4.2 miR-133a

Perubahan pada miR-133a, anggota dari cluster miR-1 / miR-133, baru-baru

ini dijelaskan dalam penyakit inflamasi dan sepsis serta dalam pengaturan
remodeling vaskular dan jantung. Selain itu, ditunjukkan bahwa penempatan
miR-1 / miR-133 ke dalam otot rangka meningkatkan regenerasi otot dan
mencegah pembentukan bekas luka. Pada fibrosis hati, ekspresi miR-133a tidak
bervariasi ketika level dibandingkan antara hati penuh dari hewan yang diobati
dan kontrol CCl4. Namun, miR-133a secara signifikan dideregulasi pada HSC
manusia dan murine selama fibrogenesis serta pada fibroblas jantung jantung
fibrotik. Pengobatan primer HSC murine dan manusia atau fibroblas dengan

15
TGF-β menghasilkan penurunan regulasi signifikan miR-133a dalam sel-sel ini.
Pada gilirannya, overekspresi miR-133a menyebabkan penurunan ekspresi
kolagen, menunjukkan peran langsung miR-133a dalam aktivasi fibroblast / HSC
selama fibrosis organ. miR-133a digambarkan sebagai penanda serum potensial
untuk pengembangan dan perkembangan sirosis hati.3

4.3 miR-150

Analisis microarray yang dilakukan pada HSC yang diisolasi dari ligasi
duktus empedu (BDL) pada tikus, mengungkapkan penurunan regulasi yang
signifikan dari miR-150. Dalam sel-sel ini, overekspresi miR-150 dikaitkan
dengan proliferasi dan apoptosis sel. Selain itu, ekspresi berlebih dari miR-150
dalam sel HSC manusia menurunkan ekspresi α-SMA, salah satu penanda
aktivasi sel stellata bersama dengan kolagen yang berbeda melalui menghambat
target proto-onkogen c-myb. Studi lain mengungkapkan regulasi miR-150 saat
menstimulasi HSC manusia dengan TGF-β1 dalam cara yang tergantung dosis
dan tergantung waktu. Data ini menunjukkan peran miR-150 sebagai miRNA
anti-fibrotik dengan menghambat aktivasi HSC selama penyakit hati kronis.11

4.4 miR-34a

Keluarga miR-34 terdiri dari miR-34a, miR-34b, dan miR-34c. Bagian

pertama dari bukti peran miR-34a dalam fibrosis hati berasal dari fibrosis hati
yang disebabkan oleh dimetilnitrosamin (DMN) pada tikus di mana terjadi
peningkatan regulasi keluarga miR-34. Gen target langsung miR-34a, ASCL1
disupresi selama pengembangan fibrosis hati. Analisis microarray
mengidentifikasi ekspresi miR-34a yang ditingkatkan regulasinya dalam jaringan
hati yang terpapar etanol dibandingkan dengan jaringan normal. Ekspresi miR-
34a yang berlebihan meningkatkan proliferasi, migrasi dan transformasi sel hati
pada pemberian etanol. Efek ini dimediasi melalui gen target langsung, CASP2

16
dan SIRT1 yang mungkin terlibat dalam remodeling jaringan selama
perkembangan penyakit dari hati normal melalui sirosis menuju ke HCC.
Aktivasi p53 meningkatkan ekspresi miR-34a dengan mengatur RXRα secara
negatif pada hati fibrotik manusia. Target transkripsi hulu dari miR-34 adalah
penekan tumor p53 yang dapat memediasi penangkapan siklus sel. Selain itu,
tingkat serum miR-34a secara signifikan lebih tinggi pada pasien CHC dan
NAFLD, menunjukkan biomarker diagnosis baru dan noninvasive.7

4.5 miR-199 / miR-200

Keluarga miR-199 terdiri dari miR-199a dan miR-199b yang hanya berbeda
satu nukleotida. Analisis microarray mengidentifikasi ekspresi yang lebih tinggi
dari miR-199a-5p, miR-199b dan miR-199b * pada tikus yang diberikan dengan
CCl4 dan jaringan hati hepatitis C kronis manusia dibandingkan dengan kontrol.
Menariknya regulasi miR-199 menunjukkan perkembangan cedera hati kronis
menjadi fibrosis hati dan sirosis lanjut. Sejalan, sel-sel LX-2 yang diobati dengan
TGF-β menunjukkan peningkatan regulasi dari berbagai anggota keluarga miR-
199. Sebuah fenotipe yang serupa juga dijelaskan oleh Pottier dan rekannya yang
menunjukkan bahwa miR-199a-5p secara kritis terlibat dalam pengembangan
fibrosis jantung dan paru-paru dengan deregulasi Stathmin1.4

4.6 miR181a

Ekspresi miR-181a dan miR-181b dalam serum dari 22 pasien dengan sirosis
hati telah dievaluasi oleh Wang et al. Sementara miR-181a tidak menunjukkan
perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol, miR-181b
secara signifikan memiliki kadar lebih tinggi pada pasien dengan sirosis hati.
Selain itu, penulis menunjukkan, secara in vitro, bahwa TGF-β1 menginduksi
ekspresi miR-181b dalam sel stellate hati-T6 (HSC-T6). Pada gilirannya, miR-
181b mempromosikan proliferasi HSC-T6 dengan menargetkan regulator siklus
sel p27. Dengan demikian, TGF-β1 dapat menginduksi ekspresi miR-181b dan

17
mempromosikan proliferasi sel-sel stelata hati, yang merupakan mediator penting
dari fibrosis hati. Oleh karena itu, miR-181b adalah biomarker diagnostik
potensial untuk sirosis hati.14

4.7 miR101

miR-101 ditranskripsi dari intron kedelapan gen RCL1 pada manusia. miR-
101 telah diidentifikasi sebagai penekan tumor dengan secara langsung
menargetkan EZH2 dan c-Myc pada berbagai jenis kanker termasuk HCC. Level
miR-101 berkurang baik dalam HSC dan hepatosit dalam model fibrosis hati
yang diinduksi CCl4. Kehilangan miR-101 menyebabkan peningkatan kadar
TGF-b-RI dan faktor seperti Kruppel 6 (KLF6) di HSC dan hepatosit. Baik TGF-
b-RI dan KLF6 sangat terkait dengan jalur pensinyalan TGF-b. TGF-b-RI
membentuk kompleks heteromer dengan TGFR-bII untuk mentransduksi sinyal
yang menghasilkan aktivasi Smads hilir. KLF6 membentuk kompleks dengan
Smad3-AP1-KLF6 untuk mengatur ekspresi gen fibrogenik secara transkripsi.
Data ini mendukung pendapat bahwa deregulasi miR-101 mungkin merupakan
salah satu mekanisme yang mendasari inisiasi dan / atau perkembangan fibrosis
hati. Selain itu, overekspresi miR-101 menghambat proliferasi / migrasi yang
diinduksi TGF-b di HSC dan mencegah apoptosis yang diinduksi TGF-b pada
hepatosit. Pengamatan ini lebih lanjut menunjukkan peran antifibrotik miR-101
dalam memediasi fibrosis hati.1

4.8 miR-146

miR-146 juga diketahui dideregulasi selama aktivasi HSC yang diinduksi

TGF-β, sementara overekspresi miR-146a dalam HSCs mengarah ke regulasi
peningkatan inhibitor jaringan metalloproteinase 3 (TIMP-3) dan deregulasi IL-6
mRNA. Dalam penelitian lain, overekspresi miR-146a menyebabkan
penghambatan proliferasi HSC yang diaktifkan. Ini akan menjadi hasil dari
pengikatan langsung ke daerah promotor dari SMAD4 mRNA, yang mengatur
ekspresi gen yang dimediasi TGF-β1, sehingga sel tidak sensitif terhadap
stimulasi TGF-β1, menunjukkan pentingnya dalam respon inflamasi, dan

18
hubungannya dengan fibrosis hati. Selain itu, miR-146a diketahui memiliki peran
dalam respons inflamasi selama cedera reperfusi hati, karena miR-146 secara
negatif mengatur reseptor terkait kinase 1 (IRAK1) dan faktor terkait terkait
reseptor Toll-like 6 (TRAF6), memimpin untuk penurunan produksi sitokin pro-
inflamasi, dan dengan menghambat jalur pro-inflamasi NF-κB. MiR-126 juga
dapat mengatur jalur NF-κB dengan menekan ekspresi alpha NF-κB inhibitor
(IκBα), sehingga mengarah ke aktivasi NF-κB.8

Gambar 2. Gambaran miRNAs yang memodulasi berbagai tahap fibrosis hati.

MiRNA dapat menjadi kandidat untuk terapi mendatang yang menargetkan

penyakit hati. Beberapa percobaan baru-baru ini telah dilaporkan mengenai
kemungkinan pengobatan fibrosis hati dengan miRNA. MicroRNA-214
berpartisipasi dalam pengembangan fibrosis hati dengan memodulasi reseptor
faktor pertumbuhan epidermal dan jalur pensinyalan TGF-β. Dengan
menggunakan faktor pertumbuhan yang diturunkan platelet-c tikus transgenik,
LNA-anti-miR-214 menunjukkan efek pencegahan dari fibrosis hati.

19
Penghambatan miR-21 juga mengurangi fibrosis hati melalui penurunan
bersamaan sel progenitor hati CD24 + dan sel stroma yang terkait kanker dengan
S100 A4 +. Terapi asam nukleat baru untuk kanker juga telah muncul sebagai
aplikasi klinis potensial. MicroRNA-34a, 83 let-7,84 andmiR-1685 telah
didokumentasikan dengan baik sebagai miRNA penekan tumor. MicroRNA-34
adalah miRNA penekan tumor yang representatif yang bekerja melalui jalur p53.
Mirna Therapeutics (Austin, TX, USA) telah mempromosikan pengembangan
MRX34, yang merupakan liposom nanopartikel khusus yang identik dengan miR-
34a. Penerapan MRX34 untuk beberapa model kanker tikus, termasuk kanker
prostat dan kanker paru-paru, dilakukan secara praklinis. Selain itu, menurut hasil
yang menjanjikan menggunakan model HCC tikus, Mirna Therapeutics sedang
mengembangkan uji klinis untuk HCC yang tidak dapat direseksi dan tumor hati
metastatic.15

Seperti yang diterangkan sebelumnya, keluarga miR-29 memiliki

kemampuan antifibrotik yang kuat terhadap fibrosis hati dengan menekan
produksi ECM, mengurangi proliferasi HSC, menghalangi kaskade pensinyalan
fibrogenik, dan menginduksi apoptosis HSC. Oleh karena itu logis untuk
mengobati fibrosis hati dengan meningkatkan ekspresi miR-29 di hati. Memang,
ada bukti signifikan yang menunjukkan bahwa miR-29 dapat digunakan sebagai
target terapi karena penekanan karakteristik fibrogenik setelah diekspresikan
berlebih pada HSC. Ekspresi miR-29a / b yang menggunakan sistem yang
diinduksi adenovirus atau estradiol (E2) berhasil mengurangi fibrosis hati pada
fibrosis hati yang diinduksi CCl4 pada tikus. Selanjutnya, pengurangan yang
signifikan dalam pertumbuhan tumor diamati dalam xenografts HCC ditransfeksi
dengan miR-29b pada tikus telanjang, lebih lanjut mendukung peran terapi miR-
29 pada berbagai penyakit hati. Selain itu, miR-101 adalah antifibrotik lain yang
bisa secara terapi efektif melawan fibrosis hati. miR-101 telah terbukti menekan
proliferasi dan migrasi HSC atau apoptosis hepatosit dengan mengurangi
pensinyalan TGF-b secara in vitro. Selain itu, ekspresi miR-101 yang dimediasi
oleh virus lenti menunjukkan efek antifibrotik yang nyata pada model fibrosis

20
hati yang diinduksi CCl4 dengan menekan KLF6 dan TGF-b-RI di kedua
hepatosit dan HSC.1

DAFTAR PUSTAKA

1. Teng K, Ghoshal K. Review Role of Noncoding RNAs as Biomarker and

Therapeutic Targets for Liver Fibrosis. Gene Expr. 2015;16:155–62.

2. Schueller F, Roy S, Vucur M, Trautwein C, Luedde T, Roderburg C. The Role

of miRNAs in the Pathophysiology of Liver Diseases and Toxicity. Int J Mol
Sci. 2018;19(261).

3. Roy S, Benz F, Luedde T, Roderburg C. The role of miRNAs in the regulation

of inflammatory processes during hepatofibrogenesis. 2015;4(6):24–33.

4. Wojcicka A, Swierniak M, Kornasiewicz O, Gierlikowski W, Maciag M,

Kolanowska M, et al. The International Journal of Biochemistry Next
generation sequencing reveals microRNA isoforms in liver cirrhosis and
hepatocellular carcinoma ଝ. Int J Biochem Cell Biol [Internet]. Elsevier Ltd;
2014;53(2014):208–17.

5. Cai Y, Yu X, Hu S, Yu J. A Brief Review on the Mechanisms of miRNA

Regulation The Interplay of miRNAs with. Genomics Proteomics Bioinforma.
Beijing Institute of Genomics; 2009;7(4):148.

6. Yamaura Y, Tatsumi N, Takagi S, Tokumitsu S, Fukami T, Tajiri K, et al.

Serum microRNA profiles in patients with chronic hepatitis B, chronic
hepatitis C, primary biliary cirrhosis, autoimmune hepatitis, nonalcoholic
steatohepatitis, or drug-induced liver injury. Clin Biochem [Internet]. Elsevier
Inc. on behalf of The Canadian Society of Clinical Chemists; 2017;

7. Kim K, Park K. Small RNA- and DNA-based gene therapy for the treatment of
liver cirrhosis , where we are ? World J Gastroenterol. 2014;20(40):14696–
705.

21
8. Lambrecht J, Mannaerts I, Grunsven LA Van. The role of miRNAs in stress
responsive hepatic stellate cells during liver fibrosis. Front Physiol.
2015;6(209):1–12.

9. Chen Y, Zhu J, Wu H, Fan J, Zhou J, Hu J, et al. Circulating microRNAs as a

Fingerprint for Liver Cirrhosis. PLoS One. 2013;8(6):1–9.

10. Zhou W, Zhang Q, Qiao L. Pathogenesis of liver cirrhosis. World J

Gastroenterol. 2014;20(23):7312–24.

11. Li B, Li F. MiR-22 Suppresses BMP7 in the Development of Cirrhosis.

2015;100039:1026–36.

12. Loosen SH, Schueller F, Trautwein C, Roy S, Roderburg C, Loosen SH, et al.
Role of circulating microRNAs in liver diseases. World J Gastroenterol.
2017;9(12):586–94.

13. Kitano M, Bloomston PM. Hepatic Stellate Cells and microRNAs in

Pathogenesis of Liver Fibrosis. J Clin Med. 2016;5(38).

14. Creczynski-pasa B, Schiavon LL. Circulating miRNAs in nontumoral liver

diseases. Pharmacol Res [Internet]. Elsevier Ltd; 2017;17

15. Murakami Y, Kawada N. MicroRNAs in hepatic pathophysiology. Hepatol

Res. 2017;(March 2016):60–9.

22