Metode Pembuatan Liposom

Secara umum metode pembuatan liposom antara lain thin film hydration, reverse phase
evaporation, ethanol injection, polyol dilution, freeze-thaw, double emulsions, proliposome method,
French press extrusion, detergent removal, dan high-pressure homogenization (Akbarzadeh et al.,
2013; Monteiro et al., 2014; Mozafari, 2005). Dari semua metode pembuatan tersebut, metode yang
paling sering digunakan yaitu : thin film hydration, reverse phase evaporation, ethanol injection
(Yang et al., 2012).

a. Thin Film Hydration

Metode thin film hydration merupakan metode yang paling sederhana jika dibandingkan
dengan semua metode yang telah disebutkan diatas. Metode ini menggunakan pelarut organik
mudah menguap, seperti kloroform, eter dan metanol yang digunakan untuk melarutkan lipid.
Setelah lipid dilarutkan, pelarut diuapkan dengan teknik rotary evaporation (rotavapor) dengan
menggunakan tekanan yang rendah hingga terbentuklah lapisan tipis (thin film) di bagian bawah
dinding. Selanjutnya ditambahkan buffer untuk menghidrasi lapisan lipid tersebut pada suhu diatas
titik leleh campuran atau pada titik leleh maksimal campuran tersebut sehingga terbentuklah
liposom dengan multi lamellar vesicles (MLV). Perbedaan ukuran MLV yang terbentuk bergantung
dari waktu hidrasi, metode resuspensi, komposisi dan konsentrasi lipid, dan volume cairan
penghidrasi (Monteiro et al., 2014). Namun metode pembuatan ini memiliki keterbatasan yaitu
memiliki kemampuan enkapsulasi yang rendah dan sulit untuk menghasilkan liposom dengan
ukuran nano. Oleh karena itu digunakan tambahan metode yaitu sonikasi atau ekstrusi sehingga
didapat vesikel dengan ukuran ULV (Monteiro et al., 2014).

b. Reverse-phase Evaporation

Metode ini dapat menghasilkan liposom dengan cara membentuk emulsi water-in-oil dari
fosfolipid dan buffer. Langkah pertama, fosfolipid dilarutkan dalam pelarut organik untuk
membentuk lapisan tipis (thin film), kemudian pelarut dihilangkan dengan penguapan (evaporasi).
Lapisan tipis tersebut diresuspensi dengan dietil eter, dilanjutkan dengan penambahan air.
Selanjutnya, dilakukan sonikasi selama waktu tertentu sehingga membentuk emulsi yang homogen.
Pelarut organik tersebut dihilangkan dengan metode rotary evaporation tekanan rendah sehingga
menghasilkan fase intermediet yang viskus seperti gel yang memiliki ukuran LUV. Metode ini
dapat digunakan untuk mengenkapsulasi makromolekul berukuran besar dengan nilai efisiensi
enkapsulasi sebesar (20 – 68%). Kelemahan metode ini adalah bahan yang dienkapsulasi terkena
paparan dari pelarut organik dan disonikasi dengan kecepatan tinggi yang dapat menimbulkan
panas, sehingga dapat merusak molekul yang sensitif terhadap panas (Monteiro et al., 2014).
c. Ethanol Injection

Pada metode ini, lipid yang telah dilarutkan ke dalam etanol segera diinjeksikan dalam
larutan buffer, dimana secara spontan akan terbentuk SUV dengan diameter 30 nm. Ukuran dari
liposom dapat ditingkatkan dengan meningkatkan konsentrasi lipid. Metode pembuatan ini memiliki
keuntungan dengan tidak menggunakan perlakuan fisik maupun kimia yang memungkinkan
terjadinya kerusakan lipid. Namun, konsentrasi dari vesikel yang dihasilkan sangat sedikit dan
dibutuhkan langkah tambahan khusus untuk menghilangkan etanol dari produk akhir (Monteiro et
al., 2014).

DAPUS

Akbarzadeh, A., Sadabady, R.R., Davaran, S., Joo, S.W., Zarghami, N., Hanifehpour, Y., Samiei,
M., Kouhi, M., Koshki, K.N., 2013. Liposome: classification, preparation, and applications.
Nanoscale Research Letters, p.1-9.

Mozafari, M. R. 2005. Liposomes: an overview of manufacturing techniques.Cellular and

Molecular Biology Letters, 10(4), 711.

Monteiro, N., Martins, A., Reis, R. L., & Neves, N. M. 2014. Liposomes in tissue engineering and
regenerative medicine. Journal of The Royal Society Interface, 11(101), 20140459.

Yang, S., Chen, J., Zhao, D., Han, D., & Chen, X. 2012. Comparative study on preparative methods
of DC-Chol/DOPE liposomes and formulation optimization by determining encapsulation
efficiency. International journal of pharmaceutics, 434(1), 155- 160.
METODE
Persiapan liposom Doxil
Langkah pembuatannya meliputi pembentukan kandungan liposom amonium sulfat, pengurangan
ukuran liposom, pembuatan amonium gradien sulfat dan pemuatan obat aktif. Produk disaring
melalui filter steril 0,2 µm dan diisi ke dalam vial individu yang memiliki 2 mg /mL konsentrasi
doksorubisin.

Studi fisikokimia
Metode HPLC: Analisis HPLC dari Doxil® dilakukan dengan menggunakan sistem HPLC seri
Agilent 1100/1200 yang dilengkapi dengan Detektor UV, kolom BDS Hypersil C18 (250 mm x 4,6
mm, 5 µ). fase gerak yang digunakan yaitu Campuran natrium lauril sulfat dalam air dan asetonitril
(1: 1) yang mengandung asam ortofosfat digunakan , suhu oven kolom diatur pada 50 ° C dan
deteksi UV dilakukan pada panjang gelombang 254 nm. Konsentrasi hydrogenated soy
phosphatidylcholine dan kolestrol dalam produk diuji pada sistem HPLC pada panjang gelombang
210 nm menggunakan Waters Symmetry C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 µ) dan campuran metanol, air,
dan tetrahidrofuran ((90: 6: 4). Konsentrasi DSPE-MPEG2000 ditentukan pada Sistem HPLC yang
dilengkapi dengan detektor RI dan Ultrasphere 5 OCTYL (150 mm x 4,6 mm, 5 µ) kolom
menggunakan campuran metanol dan air (95: 5) yang mengandung amonium asetat sebagai fase
gerak.

Pengukuran ukuran partikel

Pengukuran ukuran partikel dilakukan menggunakan Unicomp Model 380 / ZL S&S Potential /
Submicron Particle Sizer (Particle Sizing Systems, New Port Richly, FL, USA). Pengukuran
dilakukan pada suhu 23 ° C dengan sudut hamburan 90 °. Selama penelitian, viskositas cairan dijaga
pada 0,933 dengan indeks bias dari 1,333. Titik setel intensitas ditetapkan ke 300 kHz.

Potensi Zeta: Potensi zeta dari PEGADRIA dan DOXIL® diukur menggunakan Nicomp 380 ZLS
Particle Sizing System. Potensi zeta diukur pada suhu 23 ° C pada sudut hamburan 14,7 derajat, 18,9
derajat sudut serat eksternal, dan panjang gelombang laser 632,8 nm. Satu mL sampel uji
diencerkan dengan 9 mL air untuk injeksi.

Pelepasan obat in vitro

Pelepasan Doxil® secara in vitro diukur dalam PBS buffer dengan pH 6,5 menggunakan Alat
Pemutar Botol Electro Lab ERB-40A pada suhu 37 ° C. Media Buffer PBS disolusi dengan
melarutkan 1,79 g natrium hydrogen fosfat dehidrasi, 1,36 g kalium dihidrogen ortofosfat, dan 7,02
g natrium klorida dalam 1L air. PH yang diinginkan adalah disesuaikan dengan asam klorida encer
atau natrium hidroksida encer. sampel uji disiapkan dengan mencampurkan 0,5 mL sampel uji dalam
50 mL media disolusi yang mengandung 0,5 g dari Dowex® 50WX4 (H +, 200-400 mesh) dalam
tabung Polypropylene. 1 mL sampel ditarik (titik waktu awal) dan diganti dengan 1 mL media
disolusi. Tabung sampel ditempatkan di Bottle Rotating aparatur dan aparatur segera dimulai.
Setelah peralatan berhenti sesuai waktu yang ditentukan, sampel dari media ditarik. Konsentrasi
Doxil dalam sampel yang ditarik dianalisis dengan HPLC.

Pelepasan obat in vitro dengan sonikasi

Pelepasan in vitro dari Doxil® diukur dalam buffer PBS (pH 6,5) menggunakan SONICS, Vibracell
(VC-505) Probe Sonicator yang dipertahankan pada suhu 37°C. PBS buffer disiapkan seperti
dijelaskan di atas. Persiapan sampel dilakukan dengan mencampurkan 2,5 mL sampel dengan 250
mL media disolusi yang mengandung 2,5 g Dowex® 50WX4(H +, 200-400 mesh) dalam gelas
kimia. 1 mL sampel ditarik (titik waktu awal) dan diganti dengan 1 mL media disolusi. konsentrasi
Doxil dalam sampel yang ditarik dianalisis dengan HPLC.

Pelepasan obat in vitro dalam plasma manusia

Pelepasan in vitro dari Doxil® diukur dalam 50% penggunaan plasma manusia Electro Lab ERB-
40A Bottle Rotating Apparatus yang dipertahankan pada suhu 37 ° C. Media disolusi dibuat dengan
mencampurkan plasma manusia dan air (50:50) diikuti dengan sentrifugasi pada 5000 rps selama 10
menit dan penyaringan. Sampel uji dibuat dengan mencampurkan 0,5 mL sampel uji dalam 50 mL
media disolusi dalam tabung Polypropylene. 1 mL sampel ditarik (awal titik waktu) dan diganti
dengan 1 mL media disolusi. konsentrasi dalam sampel yang ditarik pada setiap titik waktu yang
ditentukan dianalisis dengan HPLC.
(Ali et al, 2016 )

DAPUS
Ali S.M., Sheikh S., Ahmad A., Ahmad M.U., Chen P., Paithankar M. Bioequivalence study of pegylated doxorubicin
hydrochloride liposome (PEGADRIA) and DOXIL® in ovarian cancer patients: physicochemical
characterization and pre-clinical studies. J. Nanomed. Nanotechnol. 2016;7:361.