LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

Morfologi dan pewarnaan bakteri

Asteria Seli ,godwin Pargaulan Siahaan, Indah puspita,

Wiwik Hendarini

Jurusan Fakultas Farmasi – Sains dan Teknologi Nasional

Juni 2020

ABSTRAK
Bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu basil (tongkat), kokus, dan spirilum. Bakteri
yang berbentuk tongkat maupun kokus dibagi menjadi beberapa macam. Pada bentuk
basil pembagiannya yaitu basil tunggal, diplobasil, dan tripobasil. Sedangkan pada
kokus dibagi monokokus (satu buah bakteri berbentuk kotak), diplococcus, sampai
staphylococcus (bentuknya mirip buah anggur. Khusus pada spirul hanya dibagi 2
yaitu setengah melengkung dan tidakmelengkung.

ada di alam ini mempunyai morfologi,

PENDAHULUAN
Bakteri juga dapat dibedakan melalui
teknik pewarnaan gram. Teknik
pewarnaan gram tersebut dapat
menghasilkan warna merah dan ungu.
Bakteri gram negatif ditandai dengan
pewarnaan ungu sedangkan yang positif
berwarna merah (jawetz, 2005).
Hal ini bertujuan untuk memberikan
warna pada bakteri pada akhirnya dapat
diidentifikasi dengan mudah. Selain itu,
ada endospore yang bisa diwarnai.
Endospora adalah organisme yang
dibentuk dalam kondisi yang stres
karena kurang nutrisi, yang memiliki
kemungkinan untuk tetap berlanjut di
lingkungan sampai kondisi menjadi baik
(Jawetz, 2005).Mikroorganisme yang
1
struktur dan sifat-sifat yang khas begitu
pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup
hampir tidak berwarna dan kontras
dengan air, dimana sel-sel bakteri yang
ada di suspensikan. Salah satu cara unutk
mengamati bentuk sel bakteri sehingga
mudah di identifikasi adalah dengan cara
metode pengenceran atau pewarnaan.
Hal tersebut berfungsi untuk
mengetahuisifat fisiologisnya  yaitu
mengetahui reaksi dinding sel bakteri
melalui serangkaian pengecetan atau
pewarnaan (Dwidjoseputro, 1998).
Bakteri memiliki beberapa bentuk
yaitu basil (tongkat), coccus, spirilum.
Bakteri yang berbentuk tongkat maupun
kokus dibagi menjadi beberapa macam.
Pada bentuk basil pembagiannya yaitu
basil tunggal, diplobasil, dan 3. Pipet
tripobasil.Sedangkan pada coccus dibagi 4. Objek glass(kaca presparat dan
menjadi monococcus, diplococcus,
penutup)
sampai stophylococcus. Khusus pada
spirilum hanya dibagi dua yaitu setengah 5. Tabung reaksi
melengkung dan melengkung 6. Jarum oase
(Dwidjoseputro.1998).
7. Mikroskop
Pewarna gram atau metode gram
adalah salah satu teknik pewarnaan yang 8. Kipas angin
paling penting dan luas yang digunakan 9. Cover glass
untuk mengidentifikasikan bakteri.
10. Sarung tangan
Dalam proses ini, olesan bakteri yang
sudah erfiksasi dikenai larutan-larutan 11. Masker
berikut :zat pewarna kristal violet, Bahan
larutan iodium, larutan alkohol, dan zat 1. Aquades
pewarna tandinganberupa zat warna
safranin. Metode ini diberi nama 2. Alkohol 95 % + 70 %
berdasarkan penemunya, ilmuan 3. Biakan murnisatu jenis bakteri
Denmark Hans Christian Gram (1853- 4. Zat warna Kristal violet
1938) yang mengembangkan teknik ini
5. Nigrosin
pada tahun 1884, untuk membedakan
antara pneumokokus dan klebsiella 6. Larutan logol’s
pneumonieae. Bakteri yang terwarnai 7. Tissue
dengan metode ini dibagi menjadi dua
8. Crystal violet
kelompok, yaitu bakteri gram positif dan
bakteri gram negatif. Bakteri gram 9. Safranin
positif akan mempertahankan zat 10. Methylen
pewarna kristal violet dan karenanya
11. Media Na
akan tampak berwarna ungu tua dibawah
mikroskop. Adapun gram negatif akan Cara Kerja
kehilangan zat pewarna kristal violet Pewarnaan Negatif
setelah dicuci denan alkohol, dan a.Bersihkan gelas objek dengan
sewaktu diberi zat pewarna alkohol 70% sehingga bebas lemak.
tandingannya yaitu dengan zat pewarna
b.Teteskan larutan nigrosin di atas
air safranin akan tampak berwarna
gelas objek.
merah. Perbedan warna ini disebabkan
oleh perbedaan dalam struktur kimiawi c.Ambil sedikit biakan bakteri dengan
dindingselnya ( pelezar M J 1989). jarum ose dan letakkan dalam tetesan
larutan nigrosin tersebut.
METODOLOGI
Alat dan bahan d.Ratakan tetesan nigrosin dengan
Alat memakai gelas objek lain, kerjakan
1. Medium dalam tabung slant
sesuai dengan Gambar.
2.   Lampu bunsen

2
e.Biarkan preparat mengering. h. Tetesi dengan larutan
f.Amati dibawah mikroskop dengan Gram D selama 30 detik,
perbesaran 1000x dengan cuci dengan air dan
menggunakan minyak imersi. keringkan dengan kertas
g.Gambar dan catatlah apa yang hisap
terjadi. i. Amati dibawah mikroskop
Pewarnaan Sederhana dengan perbesaran 1000x
a) Buat preparat kering olesan dengan menggunakan
bakteri
b) Tetesan larutan kristal violet minyak imersi
diatas preparat olesan tersebut j. Gambar dan catatlah apa
sebanyak 12 tetes, biarkan 1-2 yang di amati.
menit. Pewarnaan Spora
c) Cuci dengan air mengalir
sampai sisa cat tercuci habis, a) Buat preprat olesan bakteri
kemudian keringkan dengan b) Tutuplah preparat olesan tadi
hati-hati memakai kertas hisap. dengan sepotong kertas hisap
d) Amati dibawah mikroskop c) Letakkan preparat diatas
pada perbesaran 1000x dengan pembakar spirtus sambil di
menggunakan minyak imersi tetesi dengan larutan malachite
e) Gambar dan catatlah apa yang green selama 5-10 menit, jaga
diamati. jangan sampai larutan kering
d) Angkat kertas hisap dan cuci
Pewarnaan Gram preparat dengan air mengalir
a. Siapkan preparat oleskan e) Teteskan safranin selama 30-
bakteri 45 detik
b. Teteskan larutan Gram A f) Cuci kembali dengan air
sebanyak 3-3 tetes, biarka mengalir dan keringkan
selama 1 menit dengan hati-hati memakai
kertas hisap
c. Cuci dengan air mengalir, g) Amati di bawah mikroskop
kemudia keringkan dengan pada pembesaran 1000x
kertas hisap dengan menggunakan minyak
d. Teteskan larutan Gram B, imersi
biarkan selama 1 menit h) Gambar dan catatlah apa yang
di amati
e. Cuci dengan air dan
keringkan - Morfologi bakteri
Secara harafiah, morfologi berarti
f. Tetesi dengan larutan
'pengetahuan tentang bentuk'
Gram C selama 30 detik
(morphos). Morfologi dalam cabang
g. Cuci dengan air dan ilmu biologi adalah ilmu tentang
keringkan bentuk organisme, terutama hewan
dan tumbuhan dan mencakup

3
bagian-bagiannya. Morfologi bakteri 2.Bentuk bulat / kokus
dapat dibedakan menjadi dua yaitu: 3.Bentuk spiral / spirilium
Pembahasan
a.Morfologi Makroskopik Pewarnaan sederhana yaitu pewarnaan
dengan menggunakan satu macam zat
Populasi bakteri tumbuh sangat warna dengan tujuan hanya untuk
cepat ketika mereka disertakan melihat bentuk sel bakteri dan untuk
dengan gizi dan kondisi lingkungan mengetahui morfologi dan susunan
yang memungkinkan mereka untuk selnya . pewarnaan ini dapat
berkembang. Melalui pertumbuhan menggunakan pewarnaan basa pada
ini, berbagai jenis bakteri kadang- umumnya antara lain kristal violet ,
metylen blue , karbol , fuchsin , dan
kadang akan menghasilkan koloni
safranin(lay ,1994).
yang khas dalam penampilan. Pada pewarnaan sederhana, sampel
Beberapa koloni mungkin akan yang digunakan adalah bakteri
berwarna, ada yangberbentuk Micrococcus aureus. Untuk pewarnaan
lingkaran, sementara yang lain tidak bakteri secara langsung, digunakan
teratur. Karakteristik koloni (bentuk, larutan pewarna yaitu kristal violet.
ukuran, warna, dll) yang diistilahkan Hasil yang didapatkan setelah diamati
dengan mikroskop dengan perbesran
sebagai "koloni morfologi". 40x-100x didapatkan dari bakteri
Morfologi koloni adalah cara para Micrococcus aureus . adalah bakteri
ilmuwan dapat mengidentifikasi pewarna sederhana . Hal ini ditandai
bakteri. Morfologi koloni dapat dengan terbentuknya warna ungu pada
ditinjau dari berbagai aspek: pewarnaan tahap akhir bentuk sel
- Shape : Bentuk coccus,susunan selnya diplococcus dan
struktur bamkteri dinding sel tebal .
-Edge : Tepi;pinggir
Pewarnaan negatif yaitu
-Elevation : Ketinggian
pewarnaan yang ditujukan terhadap
-Size : Ukuran bakteri yang sulit diwarnai, dimana
-Surface : Permukaan bakterinya tidak diwarnai melainkan
latar belakangnya, metode pewarnaan
-Consistency : Kekentalan ; kepadatan negatif merupakan suatu metode
-Odor : Bau perwarnaan umum, dimana digunakan
larutan zat warna yang tidak meresap ke
-Opacity :Transparansi
dalam sel-sel bakteri melainkan melatar 
-Chromogenesis :Pigmentasi belakangi sehingga kelihatan atau
b.Morfologi mikroskopik nampak sebagai bentuk-bentuk kosong
Morfologi mikroskopik adalah tak berwarna(negatif) (Lay.1994).
karakteristik bakteri yang dilihat Pada pewarnaan negatif, sampel
melalui pengamatan dibawah yang digunakan adalah bakteri Bacillus
mikroskop. Bentuk bakteri sangat subtilis. Untuk pewarnaan bakteri secara
langsung, digunakan larutan pewarna
bervariasi, tetapi secara umum ada 3
yaitu asam seperti eosin atau nigrosin.
tipe, yaitu : Pewarna asam memiliki negatif charge
1.Bentuk batang / basil. kromogen pada permukaan bakteri. Oleh
karena itu, sel tidak bewarna

4
mudah dilihat dengan latar belakang
berwarna.
Hasil yang didapatkan setelah diamati
dengan mikroskop dengan perbesran
400x didapatkan dari bakteri Bacillus
subtilis adalah bakteri negatif . Hal ini
ditandai dengan terbentuknya warna
hitam pada pewarnaan tahap akhir
bentuk sel coccus,susunan selnya
staphilococcus dan struktur bakteri
dinding sel peptidoglikan .
            Pewarnaan gram merupakan
pewarnaan yang digunakan untuk
mengelompokan bakteri gram positif dan
gram negatif. Bakteri gram positif akan
mempertahankan zat warna crystal violet
dan akan tampak berwarna ungu tua di
bawah mikroskop. Adapun bakteri gram
negatif akan kehilangan zat warna
crystal violet setelah dicuci dengan
alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna
air fucsin atau safranin akan tampak
berwarna merah. Perbedaan zat warna
ini disebabkan oleh perbedaan dalam
struktur kimiawi dinding selnya.
Pewarna yang digunakan dalam
pewarnaan gram antara lain : crystal
violet, alkohol, safranin, dan iodine
(Lay.1994).
Pada pewarnaan gram,
sampel yang digunakan adalah
bakteri Micrococcus aureus . Untuk
pewarnaan bakteri secara langsung,
digunakan empat larutan pewarna
yaitu Carbol gentian violet, Iodium,
Alkohol, safranin. Hasil yang
didapatkan setelah diamati dengan
mikroskop dengan perbesran 100x
didapatkan dari bakteri Micrococcus
aureus. adalah bakteri gram positif.
Hal ini ditandai dengan terbentuknya
warna ungu pada pewarnaan tahap
5
akhir menggunakan Safranin pada
bakteri Micrococcus aureus dan
berbentuk coccus,susunan sel
diplococcus ,dan struktur bakteri
dinding sel tebal .
     Pewarnaan spora merupakan
pewarnaan dengan menggunakan
malachite green dan safranin, yang
dalam hasil pewarnaannya akan muncul
warna hijau pada sporanya, serta warna
merah pada sel vegetatifnya yaitu pada
Bacillus subtitulis (Lay.1994).
Pada pewarnaan endospora , sampel
yang digunakan adalah bakteri
Micrococcus aureus. Untuk pewarnaan
bakteri secara langsung, digunakan
larutan pewarna yaitu kristal violet.
Hasil yang didapatkan setelah diamati
dengan mikroskop dengan perbesran
100x didapatkan dari bakteri
Micrococcus aureus . adalah bakteri
pewarnaan endospora . Hal ini ditandai
dengan terbentuknya warna hijau toska
pada pewarnaan tahap akhir bentuk sel
coccus,susunan selnya diplococcus dan
struktur bakteri dinding sel
peptidoglikan .
         Prinsip pewarnaan sederhana
didasarkan pada zat warna yang
digunakan hanya terdiri dari satu zat
yang dilarutkan dalam bahan pelarut
yang merupakan suatu cara yang cepat
untuk melihat morfologi bakteri secara
umum(Dwidjoseputro.1998).
Prinsip pewarnaan negatif yaitu
suatu metode pewarnaan tidak langsung
dimana digunakan larutan zat warna
yang tidak meresap kedalam sel bakteru
melainkan ke dalam latar belakangnya
(Lay.1994)
Prinsip pewarnaan gram
didasarkan pada perbedaan struktur
dinding sel bakteri ; sehingga
menyebabkan perbedaan reaksi dengan
 permeabilitas zat warna dan penambahan staphilococcus dengan struktur bakteri
larutan pencuci (Dwidjoseputro.1998). dinding sel peptidoglikan .
Kesimpulan Bakteri gram postif merupakan bakteri
Dari praktikum pewarnaan dan cara-cara yang mampu menahan kompleks
pewarnaan dapat diambil kesimpulan pewarna primer carbol gentian violet
sebagai berikut : sampai akhir pewarnaan, sehinga bakteri
-     Dalam praktikum kali ini digunakan 4 tetap berwarna ungu/biru, karena bakteri
macam metode pewarnaan, yaitu: garam postif memilki diniding sel berupa
Pewarnaan Sederhana (pada pewarnaan petidoglikan yang tebal. Sedangkan
ini bakteri berwarna ungu), pewarnaan bakteri Gram negatif adalah bakteri yang
negative (pada pewarnaan ini bakteri tidak tahan terhadap alkohol sehingga
berwarna merah menyala dengan ujung warna cat pertama dilunturkan dan
kepala orange dengan dasar hitam bakteri mengikat warna kontras sehingga
pekat), pewarnaan gram pada pewarnaan tampak merah
ini bakteri yang didapat dominan violet, DAFTAR PUSTAKA
jadi termasuuk dalam bakteri garam Buku penuntun praktek
positif), pewarnaann spora (pada mikrobiologiFakutas Farmasi ISTN
pewarnaan spora yang terbentuk
berwarna hijau). Waluyo. L.2004. Mikrobiologi Umum.
Bakteri terbagi atas dua yaitu: UMM Press. Malang
a.   Bakteri gram positif yaitu bakteri
yang mengikat zat warna utama dengan Martinko JM, Madigan MT (2005).
kuat sehingga tidak dapat dilunturkan Brock Biology of Microorganisms
oleh peluntur dan tidak dapat diwarnai (edisi ke- 11th ed.). Englewood
Cliffs, N.J: Prentice Hall. ISBN 0-
lagi oleh zat warna lawan. (pada 13-144329-1
pengamatan kali ini bakteri bewarna
violet).
b.   Bakteri gram negative yaitu bakteri yang
bersifat kebalikan dari gram positif
(yang pada kali ini bakteri tampak
berwarna merah).
-     Zat warna yang digunakan dalam
pewarnaan kali ini adalah: crystal violet,
safranin, lugol’s lodin, dan malachite
green.
Pada pewarnaan sederhana, pewarnaan
gram dan pewarnaan endospora bakteri
dengan menggunakan baketri
Micrococcus aureus membentuk sel
coccus /bulat dan mempunyai susunan
diplococcus dan struktur bakteri dinding
sel tebal sedangkan pewarnaan negatif
dengan mengunakan bakteri Bacillus
subtilis bentuk sel bulat dan susunan sel

6
 2. Micrococcus luteus

1 . Bacillus sp.

4. Escherichia coli

3.Staphylococcus aureus