Laporan Praktikum Biokimia

Disusun Oleh :
Fransisca Sekar Kirana
NIM : 11211330000069

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2021
 KATA PENGANTAR

Alhamdulillah dengan mengucap syukur atas rahmat dan kasih sayang Allah
SWT penyusunan Laporan Praktikum Biokimia ini dapat diselesaikan dengan baik.
Adapun laporan ini saya susun untuk memenuhi tugas praktikum biokimia.

Dalam penyusunan laporan ini, saya mengucapkan terimakasih yang sebesar-

besarnya kepada semua pihak yang telah membantu terselesaikannya laporan ini.
Saya selaku penyusun menyadari bahwa laporan praktikum ini belum dapat
dikatakan sempurna. Untuk itu, saya dengan sangat terbuka menerima kritik dan
saran dari pembaca sekalian. Semoga laporan praktikum ini bermanfaat untuk kita
semua.

Ciputat, 10 oktober 2021

Penulis

2
 Daftar Isi
Kata Pengantar ................................................................................................... 2
Daftar Isi .............................................................................................................. 3
Praktikum 1 Uji Hubl Pada Listin .................................................................... 5
I. Tujuan Praktikum ........................................................................................................... 5
II. Dasar Teori ..................................................................................................................... 5
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................... 6
IV. Cara Kerja ...................................................................................................................... 6
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum .................................................................................. 6
VI. Pertanyaan ...................................................................................................................... 6
VII. Kesimpulan .................................................................................................................... 7
Praktikum 2 Uji Kolesterol (Lieberman-Burchard) ....................................... 8
I. Tujuan Praktikum ........................................................................................................... 8
II. Dasar Teori ..................................................................................................................... 8
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................... 8
IV. Cara Kerja ...................................................................................................................... 8
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum .................................................................................. 9
VI. Pertanyaan .................................................................................................................... 10
VII. Kesimpulan .................................................................................................................. 10
Praktikum 3 Uji Biuret ..................................................................................... 11
I. Tujuan Praktikum ......................................................................................................... 11
II. Dasar Teori ................................................................................................................... 11
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................. 11
IV. Cara Kerja .................................................................................................................... 11
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum ................................................................................ 11
VI. Pertanyaan .................................................................................................................... 12
VII. Kesimpulan .................................................................................................................. 12
Praktikum 4 Uji Hopkins Cole ........................................................................ 13
I. Tujuan Praktikum ......................................................................................................... 13
II. Dasar Teori ................................................................................................................... 13
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................. 13
IV. Cara Kerja .................................................................................................................... 13
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum ................................................................................ 13
VI. Pertanyaan .................................................................................................................... 14
VII. Kesimpulan .................................................................................................................. 14
Praktikum 5 Xantoprotein ............................................................................... 15
I. Tujuan Praktikum ......................................................................................................... 15
II. Dasar Teori ................................................................................................................... 15
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................. 15
IV. Cara Kerja .................................................................................................................... 15
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum ................................................................................ 15
VI. Pertanyaan .................................................................................................................... 16
VII. Kesimpulan .................................................................................................................. 16

3
 Praktikum 6 Uji Fosfat ..................................................................................... 17
I. Tujuan Praktikum ........................................................................................................... 17
II. Dasar Teori ..................................................................................................................... 17
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................... 17
IV. Cara Kerja ....................................................................................................................... 17
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum .................................................................................. 18
VI. Kesimpulan ..................................................................................................................... 18
Praktikum 7 Uji Kreatinin Fosfat (Reaksi Jaffe) .......................................... 19
I. Tujuan Praktikum ........................................................................................................... 19
II. Dasar Teori ..................................................................................................................... 19
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................... 19
IV. Cara Kerja ....................................................................................................................... 19
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum .................................................................................. 20
VI. Pertanyaan ...................................................................................................................... 21
VII. Kesimpulan ..................................................................................................................... 21
Praktikum 8 Uji Kalsium ................................................................................... 22
I. Tujuan Praktikum ........................................................................................................... 22
II. Dasar Teori ..................................................................................................................... 22
III. Alat dan Bahan ............................................................................................................... 22
IV. Cara Kerja ....................................................................................................................... 22
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum .................................................................................. 23
VI. Kesimpulan ..................................................................................................................... 23
Daftar Pustaka..................................................................................................... 24

4
 PRAKTIKUM 1
Uji Hubl Pada Lestin

I. Tujuan Praktikum
Membuktikan bahwa asam lemak yang terdapat pada molekul lesitin ada yang
merupakan asam lemak tidak jenuh.

II. Dasar teori

Lesitin merupakan ester kolin dari asam fosfatidat (ester fosfat digliserida).
Karakteristik lesitin berupa senyawa menyerupai lilin lunak, bersifat higroskopis dan tidak
berwarna. Larut dalam kloroform, eter, alkohol panas, karbontetraklorida dan benzen.
Dalam alkohol mudah membentuk kristal bila alkoholnya didinginkan dan bila diteteskan
pada gelas objek akan terlihat bentuk-bentuk seperti serat mielin (myelin form).

Lesitin merupakan ester kolin dari asam fosfatidat (ester fosfat digliserida). Di jaringan
otak asam fosfatidat ditemukan dalam jumlah yang tidak banyak, yang lebih banyak
ditemukan adalah lesitin yang umumnya terikat pada asam lemak jenuh (seperti asam
palmitat atau stearat) atau tidak jenuh (seperti oleat, linoleat, linolenat dan arakidonat).
Asam-asam lemak ini di alam terdapat dalam konfigurasi L.

Lesitin (Fosfatidilkolin)

Lesitin merupakan fosfogliserida yang terbanyak ditemukan di alam baik pada binatang
maupun tumbuh-tumbuhan karena merupakan konstituen sel dan sering ditemukan
bersama-sama dengan fosfatidil inositol dalam membran sel dan mitokondria. Terdapat
perbedaan dari jenis asam lemak yang terdapat dalam pelbagai jaringan. Di otak. lesitin
mengandung campuran asam lemak jenuh (asam palmitat atau stearat) dan asam lemak
tidak jenuh (asam oleat, linoleat, linolenat dan arakidonat).
Ikatan rangkap akan mengadisi Iodium sehingga ikatan rangkap hilang dan warna iodium
dari larutan akan hilang.

Ekstraksi lesitin :
Tambahkan lk. 500 ml eter pada 250 garam jaringan otak sapi/kambing kemudian
diblender sampai hancur setelah itu tutup baik-baik, kemudian simpan pada cool room
selama 72 jam. Eter dalam keadaan dingin akan mengekstraksi lesitin, sefalin dan
kolesterol. Saring dan kemudian tambahkan 2 bagian aseton pada filtrat untuk
mengendapkan lesitin. Saring dan filtratnya akan digunakan untuk test kolesterol atau
lipid.

5
III. Alat dan Bahan
• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- Lesitin
- Kloroform
- Larutan Hubl

IV. Cara Kerja

Ambil sebagian kecil lesitin hasil ekstraksi dan dilarutkan dalam 2 ml kloroform.
Kemudian pada tabung itu teteskan larutan Hubl. Hitung berapa banyak tetesan hubl
yang dibutuhkan sampai membentuk warna oranye atau kuning tua.

V. Hasil dan Pembahasan Praktikum

Reaksi positif ketidakjenuhan asam lemak ditandai dengan timbulnya warna merah pada
asam lemak, lalu warna kembali lagi ke warna awal kuning bening. Warna merah yang
kembali pudar menandakan bahwa terdapat banyak ikatan rangkap pada rantai
hidrokarbon asam lemak. Pada uji ketidakjenuhan, pereaksi iod huble akan mengoksidasi
asam lemak yang mempunyai ikatan rangkap pada molekulnya menjadi berikatan
tunggal. Warna merah muda yang hilang selama reaksi menunjukkan bahwa asam lemak
tak jenuh telah mereduksi pereaksi iod huble. Penetesan larutan hubl dilanjutkan hingga
warna sampel Sudah berubah menjadi orange dan tidak kembali lagi menjadi kuning, ini
menunjukkan bahwa semua ikatan rangkap dalam suatu larutan telah terurai. Semakin
banyak dibutuhkan larutan hubl untuk membuat sampel menjadi orange maka semakin
tidak jenuh lemak yang berada dalam suatu larutan.

VI. Pertanyaan
1. Asam lemak apa yang positif pada uji Hubl ?
Jawab: asam lemak tidak jenuh
2. Sebutkan contoh asam lemaknya ?
Jawab : asam oleat, asam linoleat, asam linolenat dan asam arakidonat
3. Apakah lesitin positif dengan uji Hubl ? Jelaskan alasannya ?
Jawab : Lesitin positif pada uji hubl dikarenakan terdapat lesitin yang terikat dengan
asam lemak tidak jenuh , seperti asam oleat, linoleat, linolenat dan arakidonat.
Melalui percobaan juga didapatkan bahwa lesitin positif dalam uji hubl yang ditandai

6
 dengan pudarnya warna orange/merah pada awal penetesan dan dibutuhkan banyak
tetesan untuk mengubah warna lesitin menjadi orange yang tetap.

VII. Kesimpulan
Pada lesitin terdapat asam lemak tidak jenuh yang ditunjukkan dengan kembalinya warna
dari oren menjadi kuning ketika awal penetesan dan dibutuhkannya banyak larutan hubl
untuk mengubah warnanya menjadi orange.

7
 PRAKTIKUM 2
Uji Kolesterol (Lieberman-Burchard)

I. Tujuan praktikum
Mengidentifikasi kolesterol yang terdapat pada jaringan saraf

II. Dasar teori

LIPID
Yang ditemukan di jaringan saraf bermacam-macam. Lipid jaringan saraf dapat
diklasifikasi sebagai :
2. fosfatida atau fosfolipid
3. glikolipid
4. lipid yang tidak dapat tersaponifikasi antara lain kolesterol.
Jaringan saraf merupakan jaringan yang berbeda dengan jaringan tubuh lainnya karena
tidak mengandung kolesterol dalam bentuk ester atau triasilgliserol kecuali bila terjadi
keadaan degeneratif tertentu pada jaringan saraf. Dari total lipid dari substantia alba
diketahui mengandung 50% fosfatida, 25% glikolipid dan 25% kolesterol bebas

III. Alat dan bahan

• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- aseton
- alkohol-eter
- kloroform
- Asam asetat anhidrid
- asam sulfat pekat

IV. Cara kerja

Pada sebuah tabung reaksi bersih dan kering larutkan sebagian kecil kolesterol dalam 2
ml kloroform kemudian tambahkan 10 tetes asam asetat anhidrid disusul dengan 3 tetes
asam sulfat pekat, melalui dinding tabung. Larutan akan berubah warna menjadi merah,
kemudian biru dan akhirnya timbul warna kehijau-hijauan.

8
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum
Gambar Penambahan Kolesterol Aquades
Belum diberi Jernih Jernih
tambahan

Ditambahkan Berubah Tetap jernih

kloroform menjadi keruh

Ditambahkan Keruh dan Tetap jernih

asam asetat terbentuk
segmen

Asam sulfat terbentuknya Tetap jernih

pekat warna
merah/pink
kemudian
menjadi biru-
ungu dan
akhirnya
menjadi hijau
tua.

Mekanisme yang terjadi dalam uji ini adalah ketika ditambahkan kloroform maka akan
terjadi pelarutan asam lemak. Selanjutnya dengan penambahan asam asetat akan terjadi
pengendapan protein agar terjadi pemisahan antara kolesterol dan protein. Terakhir
ditambahkan asam sulfat ditambahkan ke dalam campuran yang berisi kolesterol, maka
molekul air berpindah dari gugus C3 kolesterol, kolesterol kemudian teroksidasi
membentuk 3,5-kolestadiena. Produk ini dikonversi menjadi polimer yang mengandung
kromofor yang menghasilkan warna hijau. Warna hijau ini menandakan hasil yang
positif. Reaksi positif uji ini 110 ditandai dengan adanya perubahan warna dari
terbentuknya warna merah/pink kemudian menjadi biru-ungu dan akhirnya menjadi hijau
tua.

9
VI. Pertanyaan
1. Bagaimana hasilnya jaringan saraf normal akan positif pada uji Lieberman-
Burchard?
Jawab : pada hasil positif ditandai dengan akan terjadinya perubahan warna dari
merah/pink menjadi biru kemudian hijau
2. Jaringan saraf apa yang akan positif pada uji Lieberman-Burchard?
Jawab : jaringan saraf yang akan positif dengan uji Lieberman-Burchard adalah
jaringan saraf yang mengalami degenarasi atau kelainan
3. Apakah jaringan saraf yang normal mengandung kolesterol?
Jawab : Tidak, karena jika terdapat kolesterol pada saraf akan terjadi degeneratif
sehingga terjadi kelainan.
4. Apa fungsi kloroform dalam uji Lieberman-Burchard ?
Jawab : Untuk melarutkan lemak, dikarenakan lemak tidak larut dalam air.
5. Apa fungsi asam assetat dalam uji Lieberman-Burchard ?
Jawab : Untuk pengendapan protein, memisahkan protein agar tidak mengganggu
molekul lain yang akan di uji.

VII. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum didapatkan bahwa terdapat kolesterol pada jaringan saraf
yang ditandai dengan perubahan warna dari merah menjadi biru kemudian hijau.

10
 PRAKTIKUM 3
Uji Biuret

I. Tujuan Praktikum
Menguji adanya ikatan peptida pada jaringan saraf, otot dan hormon.

II. Dasar Teori

Uji ini merupakan uji umum untuk protein. Warna yang terbenrtuk berasal dari
pembentukan kompleks koordinasi antara ion Cu++ dengan gugus -C=O dan –NH ikatan
peptida dalam larutan alkalis.

III. Alat dan bahan

• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- NaOH 10 %
- Larutan CuSO4

IV. Cara kerja

Siapkan 2 ml masing-masing sampel ( jaringan saraf, hormon, Blanko), lalu tambahkan 2
ml NaOH 10%, kemudian tambahkan setetes-demi setetes larutan CuSO4 (maksimal 1-3
tetes). Bila terbentuk warna ungu/lembayung menunjukkan adanya ikatan
peptida/protein.

V. Hasil dan pembahasan praktikum

Sampel Blanko Jar Saraf Otot Hormon
(aquades)

Sebelum
uji

berwarna berwarna
Tidak
putih/keruh keruh
berwarna/bening

11
 Setelah uji
biuret

Berwarna biru berwarna ungu berwarna ungu Berwarna ungu

Pada uji biuret, ion Cu2+ dari pereaksi biuret dalam suasana basa akan bereaksi dengan
polipeptida atau ikatan peptida sehingga membentuk senyawa kompleks berwarna ungu
atau violet. Pada aquades terjadi perubahan warna menjadi biru dikarenakan ion cu2+
tidak bereaksi dengan polipeptida. Sementara pada jaringan saraf, otot dan hormone
terjadi perubahan warna menjadi ungu dikarekan adanya ikatan cu2+ dengan polipeptida.
Warna ungu yang berbeda menunjukkan sedikit atau banyaknya ikatan polipeptida dalam
suatu larutan. Semakin banyak ikatan polipeptida maka warnya akan semakin ungu.

VI. Pertanyaan
1. Komponen jaringan saraf yang positif pada uji ini apa ? Jelaskan alasannya ?
jawab : komponen saraf yang positif pada uji biuret adalah protein channel dan
neurotransmitter, karena terdapat beberapa neurotransmitter yang mempunyai ikatan
peptide seperti oksitosin
2. Berikan contoh komponen jaringan saraf yang positif pada uji ini ?
Jawab : protein channel dan neurotransmitter
3. Berikan contoh komponen otot yang positif pada uji ini ?
Jawab : Aktin,myosin, trombin, protrombin
4. Berikan contoh hormon yang positif pada uji ini ?
Insulin, hormon tiroid, hormon steroid, eicosanoid, thyrotropin-releasing hor-
mone (TRH), adrenocorticotropic hormone (ACTH), parathyroid hormone (PTH),
growth hormone (GH), Follicle-stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone
(LH) dan chorionic gonadotropin (CG)

VII. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum diketahui bahwa terdapat ikatan peptide pada jaringan saraf,
otot dan juga horman yang ditandai dengan terbentuknya perubahan warna menjadi ungu
dnegan uji biuret.

12
 PRAKTIKUM 4
Uji Hopkins Cole

I. Tujuan Praktikum
Menguji keberadaan residu/asam amino triptofan pada jaringan saraf

II. Dasar Teori

Bila terdapat residu triptofan pada protein yang diuji maka akan berkondensasi dengan
asam glioksilat membentuk kompleks berwarna ungu.

III. Alat dan Bahan

• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- Pereaksi Hopkins-Cole
- H2SO4 pekat

IV. Cara Kerja

Campurkan 1 ml larutan yang diperiksa dan 2 ml pereaksi Hopkins-Cole, kemudian
tambahkan dengan hat-hati (melalui dinding tabung yang dimiringkan) H2SO4 pekat.
Setelah beberapa saat akan terlihat cincin ungu pada perbatasan kedua cairan.

V. Hasil dan Pembahasan Praktikum

Dalam uji ini digunakan asam glioksilat dan asam sulfat pekat. Penambahan asam sulfat
pekat bertujuan untuk menghidrolisis larutan protein untuk membebaskan asam amino
triptofan. Asam amino triptofan dapat bereaksi dengan asam glioksilat menghasilkan
senyawaan yang mengandung produk siklik berwarna lembayung. Pada sampel terbentuk
cincin berwana ungu/lembayung yang menunjukkan bahwa pada sampel terdapat asam
amino triptofan.

13
VI. Pertanyaan
1. Apa yang terbentuk bila jaringan saraf dan hormon di uji hopkins cole ? jelaskan
mengapa ?
Jawab : Akan terbentuk cincin berwarna ungu dikarenakan pada jaringan saraf dan
hormone terdapat asam amino triptofan pada jaringan saraf dan hormon yang akan
bereaksi dengan asam glioksilat.

VII. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum dapat diketahui bahwa jaringan saraf dan hormone
mengandung asam amino triptofan yang ditandai dengan terbentuknya cincin berwarna
ungu melalui reaksi uji Hopkins-cole.

14
 PRAKTIKUM 5
Xantoprotein
I. Tujuan Praktikum
Menguji keberadaan residu nitrasi inti benzen pada jaringan saraf.

II. Dasar Teori

Uji ini didasarkan pada nitrasi inti benzen yang terdapat pada molekul protein (tirosin,
fenilalanin dan triptofan). Pada uji ini terbentuk senyawa nitro yang berwarna kuning dan
dalam lingkungan alkalis akan terionisasi dengan bebas, dan terlihat warnanya menjadi
lebih tua atau jingga.

III. Alat dan Bahan

• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- HNO3 pekat
- NaOH pekat
-
IV. Cara Kerja
Campurkan 1 ml larutan yang diperiksa dengan 1 ml HNO3 pekat. Perhatikan
terbentuknya endapan berwarna putih (hal ini menjadi dasar dari uji Heller untuk
protein). Panaskan hati-hati, maka endapan akan larut kembali dan warna larutan akan
berubah menjadi kuning. Kemudian dinginkan dibawah keran dan setetes demi setetes
ditambahkan alkali pekat (NaOH). Perhatikan perubahan warna yang terjadi.

V. Hasil dan Pembahasan Praktikum

Uji ini bertujuan untuk membedakan antara asam-asam amino aromatik dengan yang
tidak mempunyai cincin aromatik.Prinsip reaksi dalam uji ini adalah nitrasi cincin
aromatik menggunakan asam nitrat pekat menghasilkan senyawa berwarna kuning. Asam
amino tirosin, fenilalanin dan triptofan mengandung gugus aromatik yang aktif sehingga
dapat dengan mudah dinitrasi. Pada pengujian ditambahkan larutan HNO3 lalu terjadi
reaksi sebagai berikut

15
 Kemudian di panaskan sehingga endapan larut kembali dan larutan menjadi berwarna
kuning. Setelah didinginkan, ditambahkan NaOH, sehingga terbentuk warna kuning
kecoklatan pada larutan sampel jaringan saraf.

VI. Pertanyaan
1. Apa yang terbentuk bila jaringan saraf di Xantoprotein ? jelaskan mengapa ?
Jawab : Apabila jaringan saraf di xantroprotein akan terbentuk warna kuning
kecoklatan dikarenakan terjadi nitrasi cincin aromatik oleh asam nitrat pekat pada
molekul asam amino tirosin, fenilalanin dan triptofan yang terkandung pada jaringan
saraf.
2. Sebutkan asam amino yang positif dengan reaksi ini?
Jawab: asam amino yang positif melalui reaksi xantoprotein adalah asam amino yang
mempunyai memiliki inti benzene/gugus aromatik, seperti triptofan, Tirosin dan fenil
analin

VII. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum didapatkan bahwa pada jaringan saraf terdapat keberadaan
residu inti benzene yang ditandai dengan terbentuknya larutan berwarna kuning
kecoklatan melalui reaksi xantoprotein

16
 PRAKTIKUM 6
Uji Fosfat
I. Tujuan Praktikum
Untuk mengetahui adanya fosfat dalam tulang.

II. Dasar teori

Jumlah Fosfat di dalam urin bervariasi, sesuai dengan jumlah yang diserap di usus. Pada
umumnya ekskresi kira-kira 1.1 g/24 jam, sebagian besar dalam bentuk fosfat inorganik,
sedangkan fosfat organik hanya sekitar 14% fosfat total.
Fosfot inorganik di dalam urin terutama berasal dari makanan, baik dalam bentuk fosfat
saja atau berikatan seperti dalam bentuk: fosfoprotein, nukleoprotein, nukleotida atau
fosfolipid.
Jumlah fosfat yang diserap di usus dipengaruhi oleh keadaan dalam lumen usus, misal bila
keadaan dalam lumen alkalis dan terdapat ion kalsium atau magnesium akan terbentuk
kasium atau magnesium fosfat yang tidak larut sehinggan fosfat makanan tidak diserap di
usus. Pada urin bentuk tersebut membentuk batu fosfat dalam ginjal atau saluran urin.
Jumlah fosfat urin meningkat pada beberapa penyakit: hiperparatiroidism, beberapa
penyakit tulang seperti osteomalacia, rickets. Sebaliknya penurunan fosfat terjadi pada
hipoparatiroidism, penyakit ginjal dan masa kehamilan.
Fosfat bereaksi dengan asam molibdat membentuk asam fosfomolibdat, yang selanjutnya
dapat direduksi oleh hidrokinon memberikan warna biru (Ortofosfat).

III. Alat dan Bahan

• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- Sampel : serbuk tulang dan akuades
- Larutan urea 10%
- Pereaksi molibdat spesial
- FeSO4 spesial

IV. Cara Kerja

1. Serbuk tulang sedikit lalu tambahkan 0,5 mL akuades. Lalu tambahkan 1 mL urea
10% , 5 mL molibdat spesial dan FesO4 spesial.
2. Blanko: Akuades 0,5 mL, Lalu tambahkan 1 mL urea 10% , 5 mL molibdat spesial
dan FesO4 spesial.
3. Perhatikan hasilnya, Positif bila berwarna biru menunjukkan adanya ortofosfat.

17
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum
Sampel Ekstrak serbuk tulang Akuades/Blanko

Hasil

Pada serbuk tulang terbentuk warna Pada aquades terbentuk warna biru yang
biru pekat tidak pekat
Pada ekstrak serbuk tulang terbentuk warna biru yang pekat menunjukkan terdapat
banyak ortofosfat pada ekstrak serbuk tulang. Sebaliknya, pada aquades warna biru yang
terbentuk tidak pekat dikarenakan mengandung sedikit ortofosfat

VI. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum diketahui bahwa pada tulang terdapat banyak fosfat yang
ditandai dengan terbentuknya warna biru pekat setelah dilakukan uji fosfat. Sedangkan
akuades hanya memiliki sedikit fosfat ditunjukkan dengan warna biru yang tidak pekat
setelah dilakukan uji fosfat.

18
 PRAKTIKUM 7
Uji Kreatinin Fosfat (Reaksi Jaffe)
I. Tujuan Praktikum
untuk mengetahui kadar kreatinin urin.

II. Dasar Teori

Kreatinin (anhidrida kreatin) banyak terdapat di dalam jaringan otot. Kreatin fosfat
merupakan cadangan ikatan fosfat berenergi tinggi di dalam otot, otak dan darah.
Kreatinin terutama dibentuk di dalam otot dan dieksresikan melalui ginjal.
Reaksi Jaffe yaitu pembentukan warna merah, jika kreatinin beraksi dengan larutan
asam pikrat alkalis (kreatinin pikrat). Intensitas warna yang terbentuk dibandingkan
terhadap intensitas warna yang terbentuk oleh larutan standar kreatinin dengan
menggunakan spektrofotometer.
Kreatinin dapat di deteksi baik pada darah/plasma dan urin. Pemeriksaan kreatinin
akan terganggu dengan keberadaan protein, sehingga sampel harus bebas protein. Asam
pikrat jenuh digunakan untuk mempercepat pembentukan warna.
Kadar kreatinin darah normal 1-2 mg/dL, dalam plasma/serum kira-kira 1 mg/dL, dan
malalui urin 1-1,8 g/24 jam
Kreatinin lebih mudah diekskresikan oleh ginjal daripada urea atau asam urat.
Kenaikan kadar kreatinin di dalam darah sampai 4 mg/dL atau lebih menunjukkan
kerusakan ginjal yang berat.
Sebagian besar kreatinin terdapat dalam jaringan otot, terdapat hubunga antara jumlah
kreatinin yang dikeluarkan dengan jumlah jaringan otot dalam tubuh.
Kreatinin menurun pada penyakit yang berhubungan dengan atrofi dan kelemahan
otot, dan bila katabolisme kreatin di jaringan otot meningkat, eksresi di urin juga
meningkat.
Koefisien kreatinin laki-laki antara 20-26 mg/KgBB/24 jam dan wanita 14-22
mg/KgBB/24 jam.

III. Alat dan Bahan

• Alat
- Tabung reaksi
- pipet volumetrik
- spektrovotometer + kuvet
• Bahan
- urin 24 jam
- standar kreatinin 0,006 mg/Ml
- akuades
- 10 mL asam pikrat jenuh dan 2 mL NaOH 10% (larutan pikrat alkalis)

IV. Cara Kerja

1. Siapkan 10 ml sampel urin masukan ke dalam tabung reaksi, lalu tambahkan 5 ml
asam pikrat alkalis (dibuat duplo).
2. Siapkan 10 ml standar kreatinin, lalu tambahkan 5 ml asam pikrat alkalis

19
 3. Blanko, siapkan 10 akuades, lalu tambahkan 5 ml asam pikrat alkalis
4. Campur hingga homogen dan diamkan 15 menit
5. Lalu dibaca menggunakan spektrofotometri pada λ = 520 nm
Perhitungan :
Kadar kreatinin (mg/dL) =
(mg/dL) = ( Ru-Rb/Rs-Rb) x ( mL urin 24 jam/1) x (1/1000)

Koefisien kreatinin:= mg kreatinin/Volume urin 24 jam/KgBB

Keterangan : Rs = Absorban standar

Ru = Absorban sampel
Rb = Absorban blanko

V. Hasil dan Pembahasan Praktikum

Diketahui:
Ru = 0,223
Rs = 0,197
Rb = 0,005
Vol Urin = 1,2 L
BB = 65 Kg

Perhitungan :
Kadar kreatinin (mg/dL) = ( Ru-Rb/Rs-Rb) x ( mL urin 24 jam/1) x (1/1000)
= (0,223 – 0,005 / 0,197 – 0,005) x (1200) x (1/1000)
= (0,218/0,192) x 1,2
= 1,14 x 1,2
= 1, 37 mg/dL
Koefisien kreatinin = mg kreatinin/Volume urin 24 jam/KgBB
= 1,37/ 65
= 0,02

20
VI. Pertanyaan
1. Berapa kadar kreatinin normal laki-laki dan perempuan ?
Jawab : Kadar kreatinin darah normal 1-2 mg/dL, dalam plasma/serum kira-kira 1
mg/dL, dan malalui urin 1-1,8 g/24 jam
2. Bagaimana hasil pengukuran kadar kreatinin Ru ?
Jawab :
Kadar kreatinin (mg/dL) = ( Ru-Rb/Rs-Rb) x ( mL urin 24 jam/1) x (1/1000)
= (0,223 – 0,005 / 0,197 – 0,005) x (1200) x (1/1000)
= (0,218/0,192) x 1,2
= 1,14 x 1,2
= 1, 37 mg/dL
3. Apakah kadar Ru normal ?
Jawab : Normal, dikarenakan kadar kreatin 1,37 mg/dL masih termasuk ke dalam
batas normal untuk kadar kreatin.

VII. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum melalui uji Kreatinin Fosfat (Reaksi Jaffe) dapat diketahui
bahwa kadar kreatinin pada sampel yang berupa urin adalah normal yaitu 1,37 mg/dL.

21
 PRAKTIKUM 8
Uji Kalsium
I. Tujuan Praktikum
Untuk mengetahui adanya kalsium dalam tulang.

II. Dasar Teori

Kalsium di dalam tubuh penting untuk pemebntukan tulang dan gigi, iritabilitas saraf,
kontraksi otot dan pemebekuan darah.
Kalsium darah biasanya dalam keadaan keseimbangan dinamis dengan kalsium di dalam
tulang. Pengendapan dan pengeluaran kalsium pada/dari tulang diatur secara hormonal oleh
hormon paratiroid dan calcitonin
Di dalam plasma dan serum. Kalsium terikat dalam 3 bentuk: terikat pada protein,
terionisaasi dan terikat pada senyawa lain seperti sitrat.
Kalsium akan mengendap dengan pemberian garam oksalat (amonium oksalat), secara
kwalitatif membentuk endapan putih.
III. Alat dan Bahan
• Alat
- tabung reaksi
- pipet tetes
• Bahan
- serbuk tulang dan kalsium
- Amonium oksalat 5%

IV. Cara kerja

1. Ambil serbuk tulang sedikit tambahkan 1 mL akuades. Lalu tambahkan 1-5 tetes
amonium oksalat 5%.
2. Balnko: ambil 1 mL Akuades, Lalu tambahkan 1-5 tetes amonium oksalat 5%.
3. Perhatikan endapan yang terbentuk, Hasil positif terdapat kalsium bila menunjukan
endapan putih

22
V. Hasil dan Pembahasan Praktikum

Pada uji kalsium suatu larutan sampel apabila ditambahkan ammonium oksalat
membentuk endapan berwarna putih maka larutan sampel tersebut mengandung kalsium.
Pada percobaan didapati bahwa pada ekstrak serbuk tulang menghasilkan endapan putih,
tetapi pada aquades tidak terbentuk endapan berwarna putih. Melalui percobaan ini dapat
diketahui bahwa ekstra serbuk tulang mengandung kalsium sementara aquades tidak
mengandung kalsium.

VI. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum uji kalsium diketahui bahwa ekstra serbuk tulang
mengandung kalsium yang ditandai dengan terbentuknya endapan sedangkan aquades
tidak mengandung kalsium yang ditunjjukan dengan tidak terbentuknya endapan.

23
 DAFTAR PUSTAKA

1. Murray RK. Harper's Illustrated Biochemistry. 26th ed. Boston, united State of
America: Lange Medical Books/McGraw Hill; 2003. II.
2. Hapsari AF, Wulandari E, Rachmawati NM, Brilliantina L, Harriyati Z,
Widjajakusumah MD. Hapsari AF, Suri AA, editors. Buku Panduan Praktikum
Modul Neuroscience & Movement. 2020;:36–46.
3. Hanum GR. Buku Ajar Biokimia Dasar. Sidoarjo, Indonesia: Umsida Press; 2018.
IV.
4. Simamora A. Protein. In: Buku Ajar Blok 3 Biologi Sel 1 Asam amino, Peptida,
dan Protein [Internet]. Jakarta, Indonesia: Fakultas Kedokteran UKRIDA; 2015
[cited 2021Nov9]. p. 36–9. Available from:
https://scholar.google.co.id/scholar?as_ylo=2017&q
=uji+hopkins+cole&hl=id&as_sdt=0,5#d=gs_qabs &u=%23p%3DtIHvKojLu7AJ
V.
5. Anwar R. Biosisntesis, Sekresi dan Mekanisme Kerja Hormon [Internet]. 2005
[cited 2021Nov9]; Available from:
https://www.academia.edu/download/36898100/pele
pasan_dan_sintesis_hormon.pdf

24