Panduan Praktik Mikrobiologi Lingkungan

Panduan Praktek
Mikrobiologi Lingkungan
Pelindung/Penasehat
Direktur Poltekkes Kemenkes Kupang
Dr. R. H Kristina, SKM., M.Kes
Ketua Program Studi Sanitasi
Karolus Ngambut, SKM., M.Kes
Tim Penyusun:
1. Byantarsih Widyaningrum, SKM., M.Si
2. Dr. Kusmiyati, SKM., MPH
3. Ragu Theodolfi, SKM., M.Sc
4. Erika Maria Resi, SKM., M.Si
PRODI SANITASI POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES KUPANG

Jl. Piet A. Tallo, Liliba – Kupang Nusa Tenggara Timur
Telp. (0380) 8800195
Email: keslingkpg@gmail.com
http://www.poltekkeskupang.ac.id/prodi/jurusan-kesehatan-lingkungan.html
Page | ii
SAMBUTAN DIREKTUR
Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Kupang adalah lembaga

pendidikan tinggi milik Kementerian Kesehatan RI yang menyelenggarakan Program
Pendidikan Diploma III Bidang Kesehatan yang terdiri dari: Jurusan Keperawatan
Kupang, Kesehatan Lingkungan, Kebidanan, Farmasi, Kesehatan Gigi, Gizi dan Analis
Kesehatan, Prodi D-IV Keperawatan / Program Profesi Ners, Prodi Keperawatan Ende,
Prodi Keperawatan Waingapu, Prodi Keperawatan Waikabubak. Program pendidikan
yang diselenggarakan Poltekkes Kemenkes Kupang diarahkan untuk menghasilkan
lulusan yang professional, memadai dalam jumlah dan mutu serta jenis yang sesuai
untuk pemenuhan kebutuhan pelayanan kesehatan masyarakat. Salah satu unsur
penting dalam penyelenggaraan pendidikan adalah kurikulum pendidikan yang sesuai
dengan Kerangka Kualifikasi Nasional Indonesia yang sesuai dengan Peraturan
Presiden Nomor 8 tahun 2012 tentang Kerangka Kualifikasi Nasional Indonesia (KKNI)
dan Peraturan Menteri Pendidikan dan Kebudayaan RI Nomor 73 tahun 2013 tentang
penerapan KKNI dalam Pendidikan Tinggi.
Sebagai pendidikan vokasi, proses pembelajaran lebih diutamakan pada
kegiatan Praktikum baik di laboratorium, bengkel kerja maupun kegiatan praktikum di
lapangan. Dalam menunjang pembelajaran praktikum yang berkualitas, maka semua
mata kuliah wajib memiliki Panduan Praktikum sebagai acuan bagi Tenaga Pendidik
(Dosen) dan Mahasiswa dalam proses pembelajaran. Panduan praktikum merupakan
seperangkat prosedur pembelajaran praktikum yang wajib diberikan oleh tenaga
pendidik, instruktur dan mahasiswa sehingga proses pembelajaran menjadi lebih
maksimal.
Kami mengucapkan terima kasih kepada Bapak/Ibu Tenaga Pendidik pada
Program Studi Sanitasi Poltekes Kemenkes Kupang yang telah berkarya dalam
menghasilkan Panduan Praktikum ini. Teruslah berkarya dalam mengemban amanah
mendidik calon tenaga kesehatan di bidang Sanitasi. Kiranya karya dan usaha
Bapak/Ibu semunya dianugerahi berkat yang melimpahi dari Tuhan Yang Maha Kuasa
Kupang, Agustus 2019

Direktur
Dr. R. H. Kristina, SKM., M.Kes

NIP. 19631027 198603 2 001
Page | iii
PENGANTAR KETUA PROGRAM STUDI
Dalam menghadapi tuntutan kebutuhan masyarakat, kurikulum di Prodi Sanitasi

Poltekkes Kemenkes Kupang, saat ini mengalami perkembangan dengan mengikuti
kebijakan pemerintah, yakni kurikulum pendidikan tinggi (KPT), yang pada hakekatnya
merupakan penguat, penyempurna dan koreksi terhadap kebijakan kurikulum
sebelumnya yang berbasis tujuan dan bersifat sentralistik. Tujuan dari KPT adalah
memandirikan atau memberdayakan Institusi dalam mengembangkan kompetensi,
yang sesuai dengan kondisi lingkungannya. Tuntutan pada globalisasi maka kurikulum
harus mengacu pada standar Kerangka Kualifikasi Nasional Indonesia (KKNI) yang
merupakan kerangka penjenjangan kualifikasi kompetensi yang dapat menyandingkan,
menyetarakan, dan mengintegrasikan antara bidang pendidikan dan bidang pelatihan
kerja serta pengalaman kerja dalam rangka pemberian pengakuan kompetensi kerja
sesuai dengan struktur pekerjaan di berbagai sektor.
Program Studi Diploma III Sanitasi sebagai salah satu pendidikan vokasi bidang
sanitasi di Provinsi Nusa Tenggara Timur dalam proses pembelajarannya menerapkan
sistem pembelajaran Praktikum dengan bobot SKS yang lebih besar dibandingkan
dengan pembelajaran teori. Kegiatan pembelajaran praktikum dilakukan di
Laboratorium, Bengkel Kerja (Workshop) dan juga kegiatan di lapangan. Dalam
menunjang proses pembelajaran, maka Tenaga Pendidik (Dosen) wajib menyusun
Panduan Praktikum. Panduan praktikum merupakan acuan bagi Tenaga Pendidik itu
sendiri dan juga mahasiswa dalam mencapai kompetensi yang akan dicapai. Dengan
adanya panduan praktikum ini, diharapkan proses pembelajarannya menjadi lebih
maksimal dan kompetensi pembelajaran dapat tercapai.
Ucapan terima kasih dan penghargaan yang setinggi-tingginya bagi semua
Tenaga Pendidik yang telah menyusun panduan praktikum demi menyukseskan
proses pembelajaran di Prodi Sanitasi Poltekkes Kemenkes Kupang. Kiranya Tuhan
Yang Maha Esa senantiasa memberkati Bapak/Ibu sekalian.
Kupang, Agustus 2019

Ketua Program Studi,
Karolus Ngambut, SKM., M.Kes

NIP. 19740501 200003 1 001
Page | iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ………………………………………………………………… ii

SAMBUTAN DIREKTUR . ………………………………………………………… iii
SAMBUTAN KETUA PROGRAM STUDI …………………………………......... iv
DAFTAR ISI .................................................................................................... v
PENGENALAN ALAT-ALAT LABORATORIUM MIKROBIOLOGI ……………. 1

STERILISASI ALAT-ALAT LABORATORIUM …………………………………… 12
PEMBUATAN DAN STERILISASI MEDIA ……………………………………….. 18
PEMERIKSAAN BAKTERI COLIFORM PADA SAMPEL AIR
MENGGUNAKAN METODE MOST PROBABLE NUMBER (MPN) ………….. 26
PEMERIKSAAN MAKANAN/MINUMAN MENGGUNAKAN METODE ANGKA

LEMPENG TOTAL (ALT) ………………………………………………………….. 38
PEMERIKSAAN JAMUR PADA TANAH …………………………………………. 48

PEMERIKSAAN BAKTERI ESCHERICIA COLI PADA SAMPEL MAKANAN .. 53
PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT) PADA SAMPEL USAP
ALAT MAKAN ……………………………………………………………………….. 72
PEMERIKSAAN BAKTERI VIBRIO CHOLERA PADA SAMPEL USAP

DUBUR (RECTAL SWAB) …………………………………………………………. 81
PEMERIKSAAN SAMPEL UDARA ……………………………………………….. 87

DAFTAR PUSTAKA ………………………………………………………………… 97
LAMPIRAN …………………………………………………………………………... 98
Page | v
PENGENALAN ALAT-ALAT LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN PRAKTIKUM :
Mahasiswa mampu mengenal dan menjelaskan fungsi macam-macam alat
Laboratorium Mikrobiologi.
A. PENDAHULUAN
Sebelum kita bekerja atau melakukan praktikum di laboratorium
mikrobiologi ada baiknya kita terlebih dahulu mengenal alat alat Laboratorium
Mikrobiologi beserta fungsinya. Sebagai seorang analis sangat penting mengenal
peralatan apa saja yang akan kita butuhkan saat bekerja atau praktik di dalam
laboratorium. Misalkan saat kita sedang melakukan analisis (dengan mengacu
pada suatu metode tertentu) maka kita harus mengenali alat apa saja yang kita
perlukan agar saat melakukan analisis kita tidak terhenti di tengah jalan karena
alat yang kita butuhkan tidak ada, Jika sudah terjadi hal seperti itu maka sangat
disayangkan sekali waktu dan tenaga kita.
Praktikum mikrobiologi merupakan praktikum yang berhubungan dengan
mikroba sehingga memerlukan beberapa alat yang mendukung pelaksanaannya
seperti autoclave, mikroskop, dan lainnya.
B. ALAT DAN BAHAN

1. Mikroskop stereo (Zoom Stereo Microscope)
1
Mikroskop ini berfungsi untuk melihat objek yang membutuhkan
perbesaran tidak terlalu besar. Di Laboratorium Mikrobiologi, mikroskop
stereo biasanya digunakan untuk mengamati secara detail bentuk koloni
dan jamur.
2. Colony counter
Alat ini berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang tumbuh

setelah diinkubasi di dalam cawankarena adanya kaca pembesar. Selain
itu alat tersebut dilengkapi dengan skala/ kuadran yang sangat berguna
untuk pengamatan pertumbuhan koloni sangat banyak. Jumlah koloni pada
cawan Petri dapat ditandai dan dihitung otomatis yang dapat di-reset.
3. Timbangan digital / neraca digital
Neraca digital berfungsi untuk menimbang media dan juga sample atau
contoh uji saat preparasi.
2
4. Inkubator (Incubator)
Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada

suhu yang terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu dan
pengatur waktu.
5. Oven
Oven berfungsi untuk sterilisasi kering. alat-alat yang disterilkan

menggunakan oven antaralain peralatan gelas seperti cawan petri, tabung
reaksi, dll. serilisasi kerning dengan oven dilakukan dengan cara
memanaskan dengan suhu 180oC selama 1 jam.
6. Autoklaf (Autoclave)
3
Autoklaf adalah alat pemanas tertutup yang digunakan untuk
mensterilisasi suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan
tinggi (1210C, 15 lbs) selama kurang lebih 15 menit. Penurunan tekanan
pada autoklaf tidak dimaksudkan untuk membunuh mikroorganisme,
melainkan meningkatkan suhu dalam autoklaf. Suhu yang tinggi inilah yang
akan membunuh microorganisme. Autoklaf terutama ditujukan untuk
membunuh endospora, yaitu sel resisten yang diproduksi oleh bakteri, sel
ini tahan terhadap pemanasan, kekeringan, dan antibiotik. Pada spesies
yang sama, endospora dapat bertahan pada kondisi lingkungan yang dapat
membunuh sel vegetatif bakteri tersebut[1]. Endospora dapat dibunuh pada
suhu 100 °C, yang merupakan titik didih air pada tekanan atmosfer normal.
Pada suhu 121 °C, endospora dapat dibunuh dalam waktu 4-5 menit,
dimana sel vegetatif bakteri dapat dibunuh hanya dalam waktu 6-30 detik
pada suhu 65 °C.Perhitungan waktu sterilisasi autoklaf dimulai ketika suhu
di dalam autoklaf mencapai 121 °C. Jika objek yang disterilisasi cukup tebal
atau banyak, transfer panas pada bagian dalam autoklaf akan melambat,
sehingga terjadi perpanjangan waktu pemanasan total untuk memastikan
bahwa semua objek bersuhu 121 °C untuk waktu 10-15 menit.
Perpanjangan waktu juga dibutuhkan ketika cairan dalam volume besar
akan diautoklaf karena volume yang besar membutuhkan waktu yang lebih
lama untuk mencapai suhu sterilisasi. Performa autoklaf diuji dengan
indicator biologi, contohnya Bacillus stearothermophilus.
7. Hot plate stirrer dan Stirre bar
Hot plate stirrer dan Stirrer bar (magnetic stirrer) berfungsi untuk
menghomogenkan suatu larutan dengan pengadukan. Pelat (plate) yang
4
terdapat dalam alat ini dapat dipanaskan sehingga mampu mempercepat
proses homogenisasi. Pengadukan dengan bantuan batang magnet Hot
plate dan magnetic stirrer seri SBS-100 dari SBS® misalnya mampu
menghomogenkan sampai 10 L, dengan kecepatan sangat lambat sampai
1600 rpm dan dapat dipanaskan sampai 425oC.
8. Termometer (thermometer)
Termometer adalah batang kaca yang panjangnya 300 mm,

diameter 6-7 mm berisi air raksa dan gas, serta dilengkapi dengan skala
derajat Celcius. Berfungsi untuk mengukur suhu suatu larutan atau ruang
inkubator. Prinsip kerjanya yaitu mengukur suhu sesuai laju air raksa di
dalam thermometer.
9. Cawan Petri (Petri Dish)
Cawan petri berfungsi untuk membiakkan (kultivasi) mikroorganisme.

Medium dapat dituang ke cawan bagian bawah dan cawan bagian atas
sebagai penutup. Cawan petri tersedia dalam berbagai macam ukuran,
diameter cawan yang biasa berdiameter 15 cm dapat menampung media
sebanyak 15-20 ml, sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira cukup
diisi media sebanyak 10 ml.
5
10. Gelas ukur (Graduated Cylinder)
Berguna untuk mengukur volume suatu cairan, seperti labu erlenmeyer,

gelas ukur memiliki beberapa pilihan berdasarkan skala volumenya.
11. Beaker Glass
Beaker glass merupakan alat yang memiliki banyak fungsi. Di

dalam mikrobiologi, dapat digunakan untuk preparasi media media,
menampung akuades dll.
12. Labu Erlenmeyer (Erlenmeyer Flask)
Berfungsi untuk menampung larutan, bahan atau cairan yang. Labu

Erlenmeyer dapat digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-
bahan komposisi media, menampung akuades, kultivasi mikroba dalam
6
kultur cair, dll. Terdapat beberapa pilihan berdasarkan volume cairan yang
dapat ditampungnya yaitu 25 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml, 300 ml, 500 ml,
1000 ml, dsb.
13. Tabung reaksi (Reaction Tube / Test Tube)
Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan untuk uji-uji

biokimiawi dan menumbuhkan mikroba.Tabung reaksi dapat diisi media
padat maupun cair. Tutup tabung reaksi dapat berupa kapas, tutup metal,
tutup plastik atau aluminium foil. Media padat yang dimasukkan ke tabung
reaksi dapat diatur menjadi 2 bentuk menurut fungsinya, yaitu media agar
tegak (deep tube agar) dan agar miring (slants agar). Untuk membuat agar
miring, perlu diperhatikan tentang kemiringan media yaitu luas permukaan
yang kontak dengan udara tidak terlalu sempit atau tidak terlalu lebar dan
hindari jarak media yang terlalu dekat dengan mulut tabung karena
memperbesar resiko kontaminasi. Untuk alas an efisiensi, media yang
ditambahkan berkisar 10-12 ml tiap tabung.
14. Ose / Jarum Inokulum (inoculating loop)
Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan untuk

ditanam/ditumbuhkan ke media baru. Jarum inokulum biasanya terbuat dari
7
kawat nichrome atau platinum sehingga dapat berpijar jika terkena panas.
Bentuk ujung jarum dapat berbentuk lingkaran (loop) dan disebut ose atau
inoculating loop/transfer loop, dan yang berbentuk lurus disebut inoculating
needle/Transfer needle. Inoculating loop cocok untuk melakukan streak di
permukaan agar, sedangkan inoculating needle cocok digunakan untuk
inokulasi secara tusukan pada agar tegak (stab inoculating).
15. Lampu Bunsen (Pembakar Spiritus)
Salah satu alat yang berfungsi untuk menciptakan kondisi yang

steril adalah pembakar Bunsen. Api yang menyala dapat membuat aliran
udara karena oksigen dikonsumsi dari bawah dan diharapkan kontaminan
ikut terbakar dalam pola aliran udara tersebut.Ssterilisasi jarum Ose atau
yang lain, bagian api yang paling cocok untuk memijarkannya adalah
bagian api yang berwarna biru (paling panas). Lampu Bunsen dapat
menggunakan bahan bakar gas, alkohol, spiritus.
8
16. Mortar dan Penumbuk /Pastle
Mortar dan penumbuk (pastle) digunakan untuk menumbuk atau

menghancurkan materi cuplikan, misal : daging, roti atau tanah sebelum
diproses lebih lanjut.
C. PROSEDUR KERJA
1. Amati berbagai alat alat-alat yang ada di Laboratorium Mikrobiologi!
2. Gambarlah alat-alat yang saudara amati!
3. Tulislah fungsi dari alat-alat tersebut!
9
D. HASIL PRAKTIKUM DAN PEMBAHASAN
NO NAMA ALAT/GAMBAR FUNGSI ALAT
10
E. KESIMPULAN
F. SARAN
Cataan Dosen Hasil Penilaian

a.
b.
Mengetahui
Penanggung jawab Laboratorium/lapangan, Dosen/Instruktur Praktikum/praktik,
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
11
STERILISASI ALAT-ALAT LABORATORIUM
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN PRAKTIKUM :
Mahasiswa mampu melakukan dengan benar sterilisasi alat-alat
laboratorium untuk pemeriksaan/uji mikrobiologis
A. PENDAHULUAN
Mikroorganisme luar yang tidak dikehendaki dalam suatu kultur dapat
masuk melalui kontak langsung dengan permukaan atau tangan orang yang
melaksanakan praktikum (praktikan) yang tercemar, tersentuhnya media atau
permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang belum disterilkan, ataupun
melalui aliran udara. Untuk mencegah hal tersebut, perlu digunakan teknik aseptis
yang sekaligus akan dapat pula melindungi dari infeksi diri dan melindungi orang-
orang di sekeliling praktikan dari pencemaran di laboratorium.
Selama bekerja untuk mendapatkan kultur murni di laboratorium
mikrobiologi, selalu dilakukan secara aseptis dengan maksud untuk menjaga
keadaan sekitarnya tetap steril dan mencegah terjadinya kontaminasi sehingga
didapatkan kultur yang bebas dari kontaminan. Kultur murni adalah biakan yang
hanya terdiri dari populasi mikrobia yang berasal dari satu jenis mikrobia. Setelah
diperoleh kultur murin, ada tiga syarat yang sangat penting, yaitu :
1. Semua bahan yang akan digunakan untuk menyentuh kultur harus
disterilisasi terlebih dahulu.
2. Semua media yang digunakan untuk menumbuhkan sel – sel harus steril.
3. Masuknya kontaminan ke dalam kultur yang tumbuh harus dicegah.
Steril merupakan suatu keadaan bebas dari segala macam bentuk kehidupan
mikrobia. Peristiwa masuknya mikrobia lain ke dalam suatu biakan murni dan
tumbuh di dalam biakan tersebut disebut kontaminasi. Jasad penyebab
kontaminasi disebut kontaminan. Untuk menciptakan sebuah kondisi steril perlu
dilakukan suatu usaha untuk membebaskan bahan – bahan, alat – alat dari semua
bentuk kehidupan mikrobia (fungi, bakteri dan virus). Di dalam praktik, terutama
praktik di laboratorium alat – alat serta media pertumbuhan mikrobia yang
diperlukan selalu dalam keadaan steril sehingga alat dan bahan – bahan tersebut
12
harus disterilisasi terlebih dahulu, dengan maksud agar tidak terjadi pertumbuhan
mikrobia lain yang tidak diinginkan.
Selama sterilisasi akan terjadi proses kematian mikrobia. Kecepatan
kematian mikrobia tergantung pada jenis mikrobia dan faktor – faktor lingkungan.
Beberapa hal yang perlu diperhatikan pada waktu sterilisasi ialah macam dan sifat
bahan, jenis alat yang akan disterilisasikan serta faktor hidrasi selama sterilisasi.
Sterilisasi pada prinsipnya meliputi 3 (tiga) cara yaitu secara mekanik (dengan
penyaringan), secara fisik (dengan pemanasan) dan secara kimia (dengan
desinfektan).
Sterilisasi secara fisik dapat menggunakan beberapa jenis alat seperti
autoklaf dan oven. Autoklaf merupakan alat sterilisasi yang menggunakan prinsip
pemanasan dengan tekanan uap. Sterilisasi menggunakan autoklaf biasanya
diterapkan pada media pertumbuhan dan larutan pengencer. Sterilisasi dengan
menggunakan oven biasa diterapkan pada peralatan laboratorium berupa botol –
botol/tabung reaksi/Erlenmeyer yang dipergunakan sebagai wadah. Prinsip
sterilisasi dengan oven adalah pemanasan kering tanpa tekanan uap air.
B. ALAT DAN BAHAN

Alat :
- Handsprayer - Pipet Ukur - LAF / Enkas
- Erlenmeyer - Gelas Beker - Tabung Reaksi
- Oose - Cawan Petri - Ball Pipet / Katup
Karet
- Pinset - Jarum Preparat - Bunsen / Lampu
Spiritus
Bahan :
- Akuades - Alkohol - Korek Api
- Kertas Coklat - Spiritus - Tisu
- Karet Gelang - Serbet/lap - Alkohol
Tangan
- Sanitiser - Etiket Tempel/ - Kapas
kertas label
13
C. PROSEDUR KERJA
1. Sterilisasi panas kering
a. Pemijaran/membakar
Jarum ose atau jarum inokulasi dapat disterilkan dengan pemijaran
dengan cara:
1) Jarum ose atau jarum inokulasi dipegang tangkainya kemudian
ujungnya dikenakan pada lidah api Bunsen sampai membara
2) Dinginkan terlebih dahulu sebelum digunakan untuk memindahkan
biakan. Pendinginan kira-kira suhu mencapai 40-45oC.
b. Dengan memakai udara panas

Sterilisasi dengan cara ini memakai oven. Alat –alat dari gelas seperti
pipet dan cawan petrin cocok disterilkan dengan cara ini.
Cara kerja:
1) Alat-alat dari gelas dicuci dan dikeringkan.
2) Untuk tabung-tabung gelas harus ditutup dengan kapas.
3) Bungkus alat-alat tersebut dengan kertas tahan panas kemudian
masukkan kedalam oven yang masih dingin. Oven ditutup dan
disambungkan kesumber panas. Kemudian atur suhunya. Jika
menggunakan suhu 180 oC waktu yang dibutuhkan adalah 1 jam
sedangkan untuk suhu 160 oC membutuhkan waktu 2 jam.
4) Matikan sumber panas sampai keadaan oven benar-benar dingin.
setelah dingin, barulah alat-alat bisa dikeluarkan dari oven dan
disimpan ditempat yang aman.
2. Sterilisasi panas lembab

Sterilisasi dengan cara ini biasanya menggunakan uap air panas
bertekanan. Alatnya disebut denga autoklaf. Suhu yang digunakan adalah
121oC dengan tekanan 15 psi (pound per square inchi) atau tekanan 1,5
but selama 15-30 menit.
Caranya :
a. Autoklaf diisi air sampai batas tertentu (dibawah tempat meletakan
bahan). Letakan semua bahan (medium) yang akan disteril.
b. Hidupkan pemanas
14
c. Autoklaf ditutup, eratkan dengan sekrup, dan katup pengeluaran udara
tetap terbuka.
d. Setelah banyak uap yang keluar (sisa udara dalam ruang autoklaf), katup
tersebut ditutup.
e. Perhatikan pada pencatat suhu, bila suhu suda mencapai 121 oC, 15 psi
atau 1,5 but mulai dihitung waktunya 15-30 menit.
f. Matikan pemanas, dan Autoklaf boleh dibuka apabila pencatat tekanan
menunjukkan angka 0 (nol).
15
D. HASIL PRAKTIKUM DAN PEMBAHASAN
16
E. KESIMPULAN
F. SARAN

c.
d.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
17
PEMBUATAN DAN STERILISASI MEDIA
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN PRAKTIKUM :
Mahasiswa mampu melakukan dengan benar pembuatan dan sterilisasi
media pertumbuhan untuk pemeriksaan/uji mikrobiologis.
A. PENDAHULUAN
Medium pertumbuhan adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat
makanan (nutrient) untuk menumbuhkan jasad. Dengan medium pertumbuhan,
kita juga dapat mempelajari sifat dan aktifitas jasad misalnya dengan melihat
perubahan dari medium; kita dapat jasad atau isolat murni dan lain-lainnya.
Untuk membuat medium diperlukan bahan-bahan baik berupa bahan jadi
maupun bahan alami. Pada dasarnya ada tiga kelompok bahan yaitu :
a. Bahan dasar :
1) Air sebagai bahan pelarut.
2) Agar (berasal dari tumbuhan laut) yang tidak terurai oleh jasad renik,
membeku pada suhu 15-200 C dan mencair pada suhu 450 C.
3) Gelatin yaitu protein yang dapat diurai oleh jasad renik dan sifatnya seperti
agar.
4) Silika–gel yaitu bahan yang mengandung Na-silikat khusus untuk
menumbuhkan jasad yang bersifat ototrof-obligat.
b. Unsur dan nutrient yang sumbernya dari alam.
1) Sumber karbon dan energi : karbohidrat, lemak, asam organik.
2) Sumber nitrogen : peptone, protein.
3) Garam-garam kimia : K, Na, Fe, Mg.
4) Vitamin.
5) Bahan alami : sari buah, ekstrak sayuran, susu
c. Bahan tambahan.
Yaitu bahan yang sengaja ditambahkan dengan tujuan tertentu :
indikator, antibiotik.
18
Macam-macam Medium
Banyak jenis medium yang digunakan untuk menumbuhkan jasad renik.
Akan tetapi pada dasarnya dapat dibedakan berdasarkan kriteria tertentu seperti
berikut :
1. Berdasarkan fase ( sifat fisik)
a. Medium Padat, yang mengandung 12-15 gr agar per liter, misal medium
Nutrien Agar (NA)
b. Medium Semi Padat, dengan kandungan agar kurang dari 0,5 % per liter.
c. Medium Cair, medium tanpa agar, misalnya Nutrien Broth (NB).
2. Berdasarkan komposisi
a. Medium Sintesis, yang komposisi zat kimianya diketahui, misal Glukose
Agar (GA).
b. Medium Semi-sintesis, yang sebagian komposisi zat kimianya diketahui,
misal Potato Dextrosa Agar (PDA).
c. Medium Non-sintesis, yang komposisi semua zat kimianya tidak diketahui.
3. Berdasarkan fungsi.
a. Medium Umum, yang terdiri dari peptone dan ekstrak khamir (yeast-
extract) untuk menumbuhkan banyak jenis jasad.
b. Medium Selektif, yang ke dalamnya ditambahkan zat tertentu sehingga
bersifat selektif hanya merangsang pertumbuhan satu jenis dan jenis
lainnya mati. Contoh : medium dengan penambahan kristal violet untuk
menumbuhkan bakteri gram negatif, sedangkan bakteri gram positif mati.
c. Medium Diferensial, yang mengandung suatu komponen menyebabkan
pertumbuhan jasad tertentu dengan perubahan khusus yang tidak dapat
dilakukan oleh jasad lain. Contoh : medium dengan indikator yang dapat
berubah warna pada kondisi pH tertentu akibat aktivitas jasad pada
mediumnya ; medium mengandung glukose akan dirombak oleh satu jasad
fermentasi produknya asam, dan asam inilah yang mengubah kondisi
medium menjadi asam dan merubah warna indikator dan akhirnya warna
medium juga berubah. Jasad non fermentatif tidak membentuk asam, dan
medium tidak berubah warna.
d. Medium Uji (Assay-medium), yang komposisinya tertentu untuk menguji
apakah jasad yang ditumbuhkan memenfaatkan zat yang ada dalam
medium itu, misal adanya vitamin, asam amino.
19
e. Medium Diperkaya (Enrichment-medium), yang berisi komponen kompleks
misalnya darah, serum, kuning telur, untuk menumbuhkan jasad heterotrof.
Misal Loefler serum untuk menumbuhkan bakteri basil difteri.
B. ALAT DAN BAHAN

1. ALAT
a. Inkubator
b. Autoclave
c. Timbangan
d. Oven
e. Kompor gas
f. Waterbath
g. Rak tabung
h. Tabung reaksi
i. Erlenmeyar
j. Becker glass
k. Pipet 10 ml
l. Gelas ukur
m. Gelas pengaduk
n. Kertas pH
o. Spidol
p. Kapas
q. Lampu spiritus
r. Tali rami
s. Tabung durham
t. Aluminium foil
2. BAHAN
a. Media Lactose Broth (LB)
b. Media BGLB
c. Media EMBA (Eosin Methylin Blue Agar)
20
C. PROSEDUR KERJA
1. Cara pembuatan media LB1 (Single Strength Lactose Broth)
a. Timbang Laktose broth sesuai kebutuhan (Takaran Media dapat dilihat
pada label kemasan).
Single Strength Lactose Broth berarti konsentrasinya hanya 1 kali.
Sehingga konsentrasi yang dibuat hanya dikalikan 1 atau denga kata lain
sesuai dengan konsentrasi pada takaran label kemasan.
Misalnya : dalam label tertera 13 per 1000 ml. Artinya bahwa tiap 13 gram
media pada kemasan harus diencerkan dengan 1000 ml aquadest atau
dengan kata lain jika kita ingin membuat 1000 ml larutan LB maka kita
harus menimbang sebanyak 13 gram media LB. Karena yang akan dibuat
adalah LB1, maka media yang ditimbang untuk 1000 ml LB1 adalah 13 x
1 = 13 gram.
Misalnya kita ingin membuat 20 ml larutan LB1, maka perhitungannya
menjadi :
Jumlah media yang ditimbang = 13 gr x 20 ml x 1 kons.= 0,26 gr
1000 ml
b. Masukkan dalam beker glass

c. Ukur aquadest sesuai kebutuhan dengan gelas ukur
d. Tuang dalam becker glass sambil diaduk sampai larut sempurna
e. Ukur pH (seharusnya 6,9 ± 0,2)
f. Siapkan tabung reaksi yang telah diberi tabung durham dalam kaadaan
terbalik.
g. Isi masing-masing tabung dengan 10 ml larutan yang telah dibuat.
h. Tutup dengan kapas dan tutup dengan kertas aluminium foil, ikat denga tali
rami, sterilkan dengan autoclave suhu 121oC selama 15-30 menit.
2. Cara pembuatan media LB3 (Triple Strength Lactose Broth)

a. Timbang Laktose broth sesuai kebutuhan (Takaran Media dapat dilihat
pada label kemasan).
Triple Strength Lactose Broth berarti konsentrasinya hanya 3 kali.
Sehingga konsentrasi yang dibuat hanya dikalikan 1 atau denga kata lain
sesuai dengan konsentrasi pada takaran label kemasan.
21
dengan kata lain jika kita ingin membuat 1000 ml larutan LB maka kita
harus menimbang sebanyak 13 gram media LB. Karena yang akan dibuat
adalah LB1, maka media yang ditimbang untuk 1000 ml LB1 adalah 13 x 3
= 13 gram.
Misalnya kita ingin membuat 25 ml larutan LB3, maka perhitungannya

menjadi :
Jumlah media yang ditimbang = 13 gr x 25 ml x 3 kons. = 0,975 gr
1000 ml
b. Masukkan dalam becker glass

terbalik.
3. Cara pembuatan media BGLB

a. Timbang BGLB sesuai kebutuhan (Takaran Media dapat dilihat pada label
kemasan).
dengan kata lain jika kita ingin membuat 1000 ml larutan BGLB maka kita
harus menimbang sebanyak 40 gram media BGLB.
Misalnya kita ingin membuat 70 ml larutan BGLB , maka

perhitungannya menjadi :
Jumlah media yang ditimbang = 40 gr x 70 ml = 2,8 gram
1000 ml
22
b. Masukkan dalam becker glass
terbalik.
4. Cara pembuatan media EMBA (Eosin Methylin Blue Agar)

a. Timbang EMBAsesuai kebutuhan (Takaran Media dapat dilihat pada label
kemasan).
Misalnya : dalam label tertera 50 gram per 1000 ml. Artinya bahwa tiap 50
gram media pada kemasan harus diencerkan dengan 1000 ml aquadest
atau dengan kata lain jika kita ingin membuat 1000 ml larutan MC maka
kita harus menimbang sebanyak 7 gram media MC.
Misalnya kita ingin membuat 140 ml larutan Media EMBA, maka

perhitungannya menjadi :
Jumlah media yang ditimbang = 50 gr x 140 ml = 7 gram
1000 ml
b. Masukkan dalam erlenmeyer.

d. Panaskan diatas api/waterbath supaya larut
f. Tutup dengan kapas dan tutup dengan kertas aluminium foil, ikat denga tali
23
D. HASIL DAN PEMBAHASAN
24
E. KESIMPULAN
F. SARAN

c.
d.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
25
PEMERIKSAAN BAKTERI COLIFORM PADA SAMPEL AIR
MENGGUNAKAN METODE MOST PROBABLE NUMBER (MPN)
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
1. Mahasiswa mampu memilih peralatan dan bahan yang digunakan dalam
praktikum dengan benar.
2. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pengambilan dan pengiriman sampel
air dengan benar.
3. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan MPN Coliform pada
sampel air dengan benar.
A. PENDAHULUAN
Penggunaan air khususnya air minum harus memenuhi syarat antara lain
memenuhi syarat mikrobiologis. Hal ini sehubungan dengan air minum merupakan
media pembawa penyakit terutama penyakit perut. Kita semua sudah maklum
bahwa air merupakan lingkungan amat mudah tercemar, tidak terkecuali benda-
benda tinja. Sumber air yang mengandung bakteri coliform diklasifikasikan dengan
air yang kualitasnya rendah. Hal ini disebabkan oleh pernyataan bahwa adanya
bakteri coliform di dalam air atau bahan lain, berarti air mengandung bakteri
pathogen yang berasal dari usus atau yang keluar bersama tinja.
Di dalam sumber air tidak hanya terdapat bakteri coliform, akan tetapi
banyak jasad renik lain yang termasuk indigenus maupun kontaminan dari suatu
sumber. Jasad renik yang berada di dalam air ada yang dapat beradaptasi dan
terus hidup pada lingkungan air, tetapi ada sebagian organisme dalam air tidak
dapat melangsungkan kehidupannya dan segara mati.
Untuk mengetahui kualitas air secara mikrobiologis, air dari suatu sumber
harus diuji. Sedangkan sebagian besar jasad renik di dalam air tidak dapat
ditumbuhkan pada media laboratorium. Satu hal yang sangat menguntungkan
bahwa dalam pemeriksaan air tidak perlu semua jasad renik dalam air itu harus
diuji. Jasad renik yang harus diuji dan diketahui karena merupakan faktor penentu
dari kualitas air adalah bakteri coliform.
26
Pemeriksaan air secara mikrobiologis diperlukan contoh air minimal 100
ml. Contoh air itu harus segera dibawa ke laboratorium dalam keadaan dingin
(letakkan di dalam termos es dan diisi dengan gumpalan es). Apabila contoh air
tidak segera dilakukan pengujian (setelah 1 jam), maka contoh air itu boleh
disimpan dalam tempat dingin misalnya refrigerator, akan tetapi tidak boleh lebih
dari 24 jam.
Persyaratan lain yang harus disertakan pada contoh air yang akan diuji
adalah keterangan lengkap yang ditulis pada label adalah sebagai berikut:
1. Nama dan alamat pengirim contoh air.

2. Waktu dan tanggal pengambilan contoh air.
3. Alasan perlu diadakannya pemeriksaan.
4. Jenis sumber air (mata air, sumur, sungai, kran dsb).
5. Diolah atau tidak; kalau diolah desinfektan apa yang dipakai dan
caranya bagaimana; berapa dosis yang digunakan.
6. Alat transportasinya.
Botol untuk mengambil contoh air yang akan diperiksa secara mikrobiologis
harus berukuran besar dan mulut lebar, minimal 250 ml volumenya. Botol harus
dalam keadaan steril dan sebelum disteril ditutup dahulu dengan kertas dan disteril
dengan oven pada suhu 170-1800 C selama 1 jam.
Perlu diperhatikan bahwa air yang mengandung chlor harus diambil
dengan botol yang sudah berisi larutan Natrium Thio Sulfat 10% sebanyak 0,1 ml
untuk menetralkan sisa chlor sebanyak 15 mg/L air. Jadi sebelum menambahkan
larutan itu sisa chlor dalam air harus dihitung dahulu. Pemeriksaan sisa chlor harus
dilakukan di tempat pengambilan contoh air. Untuk itu contoh diambil dengan botol
yang lain dan bersih yang tidak diberi larutan tersebut.
1. PENGAMBILAN SAMPEL/CONTOH AIR

a. ALAT DAN BAHAN
1) Alat :
a) Botol sampel steril.
b) Bunsen.
27
2) Bahan :
a) Sampel air yang berasal dari sumur, sungai, kran, es balok.
b) Alkohol.
c) Kapas.
d) Korek api.
e) Kertas label.
b. PROSEDUR KERJA
1) Pengambilan contoh air dari kali/sungai.
a) Ambil air dari bagian yang mengalir dan dekat dengan permukaan
air, hindari pengambilan contoh air yang tidak mengalir.
b) Apabila sungainya lebar dan lurus, air diambil dari tepi dengan jarak
paling sedikit 1 meter dari tepi sungai.
c) Bersihkan tangan dengan alkohol.
d) Pegang bagian bawah botol. Buka mulut botol dan lalukan pada api
bunsen.
e) Benamkan botol dalam air sungai + 20 cm, mulut botol menghadap
ke atas.
f) Isilah botol itu sampai penuh dan diangkat ke udara. Buang
sebagian air dalam botol itu (+ 1/3 bagian) sehingga sisanya (+ 2/3
bagian) masih memenuhi syarat contoh air untuk diperiksa secara
mikrobiologis.
g) Lewatkan mulut botol pada api bunsen.
h) Segera botol itu ditutup dengan penutup yang sudah disediakan
(steril).
i) Beri label, dan beri keterangan lengkap.
2) Pengambilan contoh air dari sumur gali, mata air dan reservoir atau
sejenisnya.
a) Air diambil dengan botol yang diberi pemberat. Botol, tali dan
pemberatnya masih dalam keadaan steril (belum dibuka) sebelum
akan dipergunakan.
28
b) Bukalah pembungkus pada tempatnya. Pegang botol pada bagian
bawah yang masih ada pembungkusnya, sehingga tangan tidak
menyentuh botol.
c) Tali dipegang, botol diturunkan pelan-pelan dan biarkan masuk
sedalam minimal 10 cm dari permukaan air.
d) Setelah botol terisi penuh, angkat botol itu ke atas. Buang sebagian
air dalam botol itu (+ 1/3 bagian) sehingga sisanya (+ 2/3 bagian)
masih memenuhi syarat contoh air untuk diperiksa secara
mikrobiologis.
e) Lewatkan mulut botol pada api bunsen.
f) Segera botol itu ditutup dengan penutup yang sudah disediakan
(steril).
g) Usahakan saat mengambil air , botol di tengah sumber.
h) Beri label dan beri keterangan lengkap.
3) Pengambilan contoh air dari pipa (kran) dan sumur pompa.

a) Pilih air yang berasal dari pipa parsiil yang berhubungan langsung
dengan pipa induk. Ambil air dari kran yang sering digunakan.
Jangan mengambil air dari alat tambahan yang dipasang dari kran
itu. Jangan pula mengambil air dari kran yang bocor.
b) Bersihkan kran yang kotor dengan menggunakan kain lap sebelum
mengambil contoh dengan kain lap.
c) Kran dibuka sepenuhnya dan biarkan air mengalir 2-3 menit dan
segera ditutup.
d) Kran dipanaskan sampai cukup panas dengan api bunsen.
e) Kran dibuka kembali sepenuhnya dan biarkan air mengalir selama
1 menit.
f) Putar kran perlahan sehingga air mengalir perlahan.
g) Buka tutup botol dan lewatkan mulut botol pada api bunsen.
h) Isilah botol sampai penuh dan tuang sebagian contoh air dalam
botol itu (+ 1/3 bagian) sehingga sisanya (+ 2/3 bagian) masih
memenuhi syarat contoh air untuk diperiksa secara mikrobiologis.
i) Lewatkan mulut botol pada api bunsen.
29
j) Segera botol itu ditutup dengan penutup yang sudah disediakan
(steril).
k) Beri label dan beri keterangan lengkap.
2. PENGIRIMAN SAMPEL
Banyak parameter kualitas air berubah dengan cepat pada waktu
pengiriman sampel ke laboratorium. Pengetahuan lapangan dapat membantu
mengatasi keadaan sampel. Bilamana sampel tidak dapat diperiksa ditempat,
maka hams ditempatkan di dalam kotak yang kuat dan dikirim ke laboratorium
secepat mungkin.Untuk Pemeriksaan Bakteriologis jika waktu pengiriman
lebih lama 3 jam maka media khusus “holding media” harus
dipergunakan. Temperatur ideal untuk penyimpanan sampel 4° — 10° C
di daerah beriklim panas, pada waktu kotak dikirim kantong-kantong berisi
campuran pendingin harus diletakkan disekitar sampel. Untuk menjamin
bahwa setiap sampel mempunyai keterangan yang memadai dan jelas,
maka harus dilengkapi dengan suatu fomulir detail. Formulir ini harus berisi
semua informasi tentang dimana dan bilamana sampel diambil, termasuk
keterangan tentang sampel dan nama orang yang mengirim.
3. PEMERIKSAAN BAKTERI COLIFORM PADA SAMPEL AIR BERSIH

MENGGUNAKAN METODE MOST PROBABLE NUMBER (MPN)
a. UJI DUGA (PRESUMTIF TEST)

1) ALAT DAN BAHAN
a) Alat :
- Tabung reaksi steril.
- Tabung durham steril
- Rak tabung reaksi.
- Pipet ukur 10 ml dan 1 ml steril.
- Bunsen.
- Bulp/pipet filer/penghisap.
- Inkubator.
b) Bahan :
- Sampel air.
- Media LB 1 dan LB 3 steril.
30
- Alcohol.
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) PROSEDUR KERJA
a) Siapkan alat dan bahan.
b) Bersihkan (aseptiskan) meja kerja dan tangan praktikan
menggunakan alkohol.
c) Nyalakan bunsen.
d) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 10 ml sampel air ke dalam
5 tabung yang berisi media LB 3 steril dengan menggunakan pipet
ukur steril.
e) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 1 ml sampel air ke dalam
5 tabung yang berisi media LB 1 steril dengan menggunakan pipet
ukur steril.
f) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 0,1 ml sampel air ke
dalam 5 tabung yang berisi media LB 1 steril dengan menggunakan
pipet ukur steril.
g) Beri label pada masing-masing tabung sesuai dengan ml sampel
yang dimasukkan yaitu : 10 ml, 1 ml dan 0,1 ml.
h) Inkubasikan piaraan di dalam inkubator dengan suhu 370 C selama
2 x 24 jam.
i) Amati piaraan itu setiap 24 jam. Amati juga gas yang terbentuk
dalam tabung durham. Timbulnya gas dalam 24 jam menunjukkan
uji positif, dan apabila terbentuknya gas setelah waktu 24 jam
menunjukkan hasil yang meragukan. Apabila setelah 2 x 24 jam
tidak terbentuk gas, maka uji dikatakan hasilnya negatif.
j) Untuk hasil yang positif dan meragukan maka perlu dilanjutkan ke
uji penetapan/penegasan (Confirmed Test).
Catatan : Dalam setiap pengerjaan penanaman (inokulasi)
sampel haruslah dilakukan seaseptis mungkin yaitu selalu didekatkan
dan dilewatkan pada api bunsen.
31
SKEMA UJI DUGA
Sampel
@ 10 ml @ 1 ml @ 0,1 ml
LB 3 @ 5 ml LB 1 @ 10 ml LB 1 @ 10 ml
Inkubasikan dalam Inkunbator selama 2 x 24 jam suhu 37 0 C
b. UJI PENETAPAN/PENEGASAN (CONFIRMED TEST)

1) ALAT DAN BAHAN
a. Alat :
- Tabung reaksi steril
- Rak tabung reaksi
- Jarum ose
- Bunsen
- inkubator
b. Bahan :
- Hasil uji duga positif/meragukan.
- Media BGLB steril.
- Alkohol.
32
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) CARA KERJA
c) Nyalakan bunsen.
d) Bakar jarum ose sampai merah membara. Dinginkan sebentar.
e) Inokulasikan (masukkan) 2-3 mata ose spesimen dari hasil uji duga
positif/meragukan ke dalam 10 ml media BGLB steril.
f) Beri label pada tabung sesuai dengan label hasil uji duga
positif/meragukan.
g) Inkubasikan piaraan dalam inkubator pada suhu 37o C selama 2 x
24 jam
h) Amati gelembung gas yang terjadi. Apabila terdapat gelembung
gas dalam tabung durham maka hasilnya positif.
i) Tulis hasil yang positif dan cocokkan dengan tabel kombinasi MPN
untuk mendapatkan angka kuman (jumlah Coliform) (Tabel MPN
terlampir).
j) Untuk pemeriksaan dengan hasil positif maka bisa dilanjutkan
dengan uji lengkap (Complete Test).
SKEMA UJI PENEGASAN
1-2 mata ose
Uji Duga Positif BGLBB @ 10 ml
33
c. UJI LENGKAP (COMPLETE TEST)
1) Alat dan Bahan
a) Alat :
- Cawan petri steril.
- Jarum ose.
- Bunsen.
- Inkubator.
b) Bahan :
- Spesimen dari Uji penegasan dengan hasil positif.
- Media MC steril.
- Media LB 1 steril.
- Alkohol.
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) Cara Kerja
c) Nyalakan bunsen.
d) Buat piaraan jasad renik E coli dari uji penegasan positif pada
media agar cawan MC dengan cara : piaraan tuang (pour plate),
piaraan sebaran (spread plate), piaraan goresan (streak plate),
atau penanaman langsung (direct plate).
e) Inkubasikan piaraan itu dalam inkubator dengan suhu 37 0 C
selama 2 x 24 jam.
f) Amati pertumbuhan koloni pada permukaan agar itu adakah
koloni typikal. Apabila tampak koloni typikal maka uji dinyatakan
hasilnya positif.
g) Buat piaraan cair dalam media LB 1 dari koloni typikal tersebut
dengan cara : mengambil dengan jarum ose steril 2 koloni typikal
pada agar MC dan segera dimasukkan ke dalam media LB 1 yang
sudah disediakan.
34
h) Inkubasikan piaraan itu dalam inkubator dengan suhu 370 C
selama 2 x 24 jam.
i) Amati gas dalam tabung durham setiap 24 jam. Apabila terbentuk
gas maka hasilnya positif.
SKEMA UJI LENGKAP

Piaraan Goresan (Streak Plate) :
1 ose
Uji Penegasan Positif Media MC

atau
Piaraan Tuang (Pour Plate):
1 ml 15-20 ml
Uji Penegasan Positif MC cair + 40-500 C

Kolo LB 1
Inkubasikan dalam inkubator

selama 2 x 24 jam dengan suhu370
35
C
B. HASIL DAN PEMBAHASAN
36
C. KESIMPULAN
D. SARAN

e.
f.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
37
PEMERIKSAAN MAKANAN/MINUMAN
MENGGUNAKAN METODE ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
2. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pengambilan dan pengiriman sampel
makanan/minuman dengan benar.
3. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan ALT pada sampel
makanan/minuman dengan benar.
B. PENDAHULUAN
Pemeriksaan adanya mikroba pada makanan maupun minuman dapat
dilakukan menggunakan metode Angka Lempeng Total (ALT). Metode Angka
Lempeng Total (ALT) merupakan metode kuantitatif untuk mengetahui jumlah
mikroba yang ada pada suatu sampel. Menurut Rizal (2006) metode ALT
merupakan metode perhitungan jumlah koloni mikroba aerob mesofilik. Metode
ALT dapat digunakan dengan cara tuang, cara tetes, dan cara sebar.
Dalam pemeriksaan tersebut diketahui perkembangan banyaknya bakteri
dengan mengatur sampel, di mana total bakteri tergantung atas formasi bakteri di
dalam media tempat tumbuhnya dan masing-masing bakteri yang dihasilkan akan
membentuk koloni yang tunggal.
1. PENGAMBILAN SAMPEL/CONTOH MAKANAN/MINUMAN

a. ALAT DAN BAHAN
1) Alat:
a) Wadah sampel steril.
b) Bunsen.
c) Termos es.
d) Alat pengambil sampel (sendok/penjepit makanan/pisau)
38
2) Bahan:
a) Sampel makanan dan minuman.
b) Alkohol.
c) Kapas.
d) Korek api.
e) Kertas label.
f) Es batu.
g) Formulir
h) Alat tulis
b. CARA KERJA
1) Siapkan alat dan bahan.
2) Siapkan formulir pengambilan sampel yang berisi tentang lokasi (nama
tempat pengolahan makanan/TPM), alamat TPM, tanggal pengambilan,
nama petugas yang mengambil sampel, dan keperluan pemeriksaan
laboratorium.
3) Secara aseptis (dekat dengan api bunsen), makanan/minuman
dimasukan dalam wadah sampel steril dengan cara sesuai
keperluaannya yaitu :
a) Makanan dimasukkan bersama dalam 1 wadah (dicampurkan) untuk
pemeriksaan total
b) Makanan dimasukkan dalam wadah masing-masing untuk
pemeriksaan tiap jenis makanan.
4) Kita meminta sampel pada TPM (Tempat Pengelolaan Makanan)
dengan cara membeli makanan/minuman tersebut seperti pembeli biasa
sebanyak 1 porsi.
5) Makanan tersebut dimasukkan kedalam botol/kantung plastik steril
sesuai keperluaannya.
6) Pengambilan makanan dari piring dengan menggunakan sedok steril
dan untuk makanan yang ukurannya besar digunakan pisau pemotong
agar makanan tersebut mudah masuk kedalam wadah.
a) Pisau dengan sendok sebelum digunakan dalam keaadaan
terbungkus dan bila diperlukan dipanaskan diatas api bunsen
39
beberapa saat dan tunggu sampai pisau kembali dingin baru bisa
dipakai.
b) Untuk botol, mulut botol juga harus dipanaskan pada api bunsen.
c) Untuk kantung plastik (plastik gula), kantung plastik diatasnya dilipat
beberapa lipatan kemudian dihekter.
7) Untuk membawa atau mengirim sampel kelaboratorium, perlu
diperhatikan beberapa hal sbb :
8) Sampel harus sampai di laboratorium dalam waktu kurang dari 24 jam.
9) Bila tidak memungkinkan sampel dibungkus dengan aluminium foil dan
ditempatkan pada suhu < 4oC.
10) Gunakan termos es yang dilengkapi dengan es batu untuk membawa
sampel.
11) Beri etiket : jenis sampel, tanggal pengambilan dan pengiriman, waktu,
lokasi, jenis pemeriksaan dan nama petugas pengambilan. Tapi jika
tidak memungkinkan, beri kode yang sesuaikan dengan formulir
pemeriksaan.
12) Sampel yang sudah diambil seger dikirimkan ke laboratorium
2. PENGIRIMAN SAMPEL
Banyak parameter kualitas air berubah dengan cepat pada waktu
pengiriman sampel ke laboratorium. Pengetahuan lapangan dapat membantu
mengatasi keadaan sampel. Bilamana sampel tidak dapat diperiksa ditempat,
maka hams ditempatkan di dalam kotak yang kuat dan dikirim ke laboratorium
secepat mungkin.Untuk Pemeriksaan Bakteriologis jika waktu pengiriman
lebih lama 3 jam maka media khusus “holding media” harus
dipergunakan. Temperatur ideal untuk penyimpanan sampel 4° — 10° C
di daerah beriklim panas, pada waktu kotak dikirim kantong-kantong berisi
campuran pendingin harus diletakkan disekitar sampel. Untuk menjamin
bahwa setiap sampel mempunyai keterangan yang memadai dan jelas,
maka harus dilengkapi dengan suatu fomulir detail. Formulir ini harus berisi
semua informasi tentang dimana dan bilamana sampel diambil, termasuk
keterangan tentang sampel dan nama orang yang mengirim.
40
3. PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN PADA SAMPEL MAKANAN/MINUMAN
MENGGUNAKAN METODE ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
a. PREPARASI/PENYIAPAN SAMPEL
1) ALAT DAN BAHAN
a) Timbangan Analitik
b) Mortal pastel
c) Sampel makanan
d) Alat pemotong/sendok
e) Alcohol.
f) Kapas.
g) Kertas label.
h) Korek api.
2) CARA KERJA
c) Nyalakan bunsen.
d) Lakukan homogenisasi sampel:
- Untuk makanan padat: timbang sampel sebanyak 10 gram
dengan menggunakan timbangan analitik yang dialasi wadah
steril sambil di dekatkan pada api. Haluskan sampel
menggunakan mortal dan pastel (ulikan) steril hingga halus,
sambil diencerkan dengan 90 ml akuades steril untuk
mendapatkan pengenceran 10 kali (pengenceran 10-1).
- Untuk makanan cair/minuman: pipet sebanyak 10 ml kemudian
diencerkan dengan 90 ml akuades steril untuk mendapatkan
pengenceran 10 kali (pengenceran 10-1).
e) Diamkan ± 10 menit untuk proses pengendapan
41
b. PEMERIKSAAN ALT SAMPEL MAKANAN/MINUMAN
Prinsip :
1. Bahan diencerkan mulai dari 10 -1, 10-2, dan seterusnya dengan

perkiraan jumlah kuman yang ada didalam bahan atau specimen.
2. Dari tiap pengenceran diambil 1 cc untuk dimasukkan kedalam petridis
steril yang sudah diberi kode pengenceran.
3. Tiap petridis yang sudah diisi specimen, dituangi PCA (Plate Count
Agar) steril dengan merata.
4. Setelah membeku, bungkus dengan kertas dan inkubasikan pada
suhu 37oC selama 48 jam dengan posisi terbalik.
5. Hitung jumlah koloni yang tumbuh pada media agar tersebut dengan
Counter. Apabila perhitugan tidak dapat dilakukan pada akhir 48 jam,
dapat ditunda sampai 24 jam dengan syarat didinginkan pada suhu
5oC.
Cara Analisis:
1. Pilih cawan petri dengan pengenceran tertentu yang menunjukkan

pertumbuhan koloni antara 30-300 buah.
2. Keloni yang tumbuh berdekatan dan bergabung merupakan kumpulan
koloni besar dihitung 1 koloni.
3. Deretan atau rantai koloni yang terlihat sebagai satu garis tebal dihitung
1 koloni.
4. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari 2 angka yaitu satuan dan
persepuluhan.
5. Jika angka persepuluhan sama atau lebih besar dari 5, bualat menjadi
persatuan.
Cara Kerja :
1. Lakukan pengenceran sampel dengan menggunakan buffer phospat

steril.
42
2. Untuk mendapatkan pengenceran 10x, 100x, 1000x dst, siapkan 6
tabung reaksi steril yang masing-masing berisi 9 ml larutan pengencer
dan diberi kode pengenceran 10x, 100x, 1000x, 10.000x dst.
3. Dengan pipet ukur steril ambil 1 ml specimen sampel dan masukkan
kedalan petridish steril. Beri kode pengenceran 10x.
4. Kemudian ambil 1 ml lagi untuk dimasukan pada slah stu tabung reaksi
steril dengan kode pengenceran 10x. Homogenkan.
5. Dan seterusnya sampai pengenceran 106 kali.
6. Sebagai kontrol, petridish steril diisi 1 ml larutan pengencer.
7. Semua petridish yang sudah diisi dengan spesimen dituangi denga
PCA secukupnya (15-20 ml).
8. Setelah beku bungkus dengan kertas dan inkubasikan pada suhu 37oC
selama 48 jam dengan posisi terbalik.
Contoh perhitungan :
a. Kontrol :1 koloni
b. Pengenceran 10-1 : 276 koloni
c. Pengenceran 10-2 : 105 koloni
d. Pengenceran 10-3 : 32 koloni
-4
e. Pengenceran 10 : 30 koloni
Rata-Rata KK = (Jlh koloni per cawan yang memenuhi syarat – Kontrol) x Faktor
Pengencer
Jlh cawan yang memenuhi syarat perhitungan
Jumlah kuman = (276-1) x 10 + (105-1) x 100 + (32-1) x 1000 + (30-1) x 10.000

4 cawan
= 72.500 koloni/ cm2
KK/cm2 = Rata-Rata Kaloni

L. Usapan x Jlh Alat yang di usap
43
SKEMA PEMERIKSAAN AGKA KUMAN UNTUK SAMPEL USAP ALAT
MAKAN
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml kontrol
-1
10
sampe
l
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml 1 ml 1 ml
kontrol
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
15-20 ml PCA
Keterangan :
1. Kontrol diisi 1 ml aquades steril atau buffer phospat steril.

2. Media PCA steril dituang sebanyak 15-20 ml pada masing-masing petridis
tersebut.
44
3. Homogenkan dengan cara menggoyangkan petridish atau dengan
menggerakan petridis membentuk angka 8.
4. Biarkan agar membeku.
5. Bungkus dengan kertas payung.
6. Inkubasi dalam inkubator dalam posisi terbalik dengan suhu 37 oC selama
48 jam.
45
C. HASIL DAN PEMBAHASAN
46
D. KESIMPULAN
E. SARAN

g.
h.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
47
PEMERIKSAAN JAMUR PADA TANAH
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
2. Mahasiswa mampu melakukan pemeriksaan Jamur pada tanah dengan
benar.
A. PENDAHULUAN
Jamur adalah semua anggota yang termasuk kelompok fungi dan
beberapa jenis organisme yang dianggap berkaitan seperti jamur lender dan
jamur belah. Arti kedua berkaitan dengan sanitasi dan menjadi sinonim bagi
kapang. Kelompok fungi terutama Basidiomycetes yang biasanya muncul dari
permukaan tanah atau substrat tumbuhnya. Pengertian ini berkaitan dengan nilai
ekonomi jamur sebagai bahan pangan, sumber racun atau bahan pengobatan.
Jamur yang tergolong Basidiomycetes dijumpai dalam tanah tahap
miselium dan dapat dikenali dari pembentukan buah atau badan buah yang
dihasilkannya pada permukaan tanah atau yang melapuk. Berkaitan dengan
kemampuannya memanfaatkan selulosa, jamur tanah membentuk kolonisasi
tertentu. Penilaian ini bertujuan untuk menginventarisasi jamur tanah yang
tumbuh pada tanah dan mengamati bentuk atau pada kolonisasi jamur pada
tanah.
B. ALAT DAN BAHAN

1. ALAT
a. Beaker gelas
b. Tabung erlemeyer
c. Autoclave
d. Cawan Petri
e. Hot plate ( pemanas listrik)
f. Pengaduk
48
2. BAHAN
a. Sampel Tanah
b. PDA
C. PROSEDUR KERJA
1. Pembuatan Media PDA (Potato Dextros Agar)
a. Timbang media PDA 5,46 gram diperoleh dari :
39 gr
X 20 ml x 7 cawan petri x 1 spl
1000 ml aquadest
b. Media PDA dilarutkan kedalam 140 ml aquadest kemudian

dihomogenkan di hot plate (pemanas listrik)
c. Disterilisasikan kedalam autclave dengan suhu 1210C selama 15
menit dengan tekanan 15 psi
d. Kemudian media PDA yang sudah disterilkan dituangkan kedalam
cawan petri steril sebanyak 20 ml tiap-tiap cawan
e. Media siap digunakan untuk penanaman.
2. Cara Pemeriksaan
a. Timbang sampel tanah sebanyak 10 gram
b. Larutkan pada buffer phosphat 90 ml
c. Buat pengenceran bertingkat dari 101 sampai 106, caranya :
1) Siapkan 6 tabung masing-masing diisi 9 ml buffer phosphat
2) Ambil 1 ml larutan sampel masukkan ke tabung pertama, campur
sampai homogen. Setelah homogen ambil 1 ml masukkan ke
tabung 102 campur sampai homogen. Setelah homogen masukkan
ke tabung 103 campur homogeny demikian seterusnya sampai
tabung 106
d. Setelah selesai masing-masing pengenceran diambil 1 ml masukkan
ke cawan petri dengan kode label yang sama.
e. Masing – masing tuangi PDA sebanyak 18 – 29 ml, goyang sebentar
biar rata.
49
f. Biarkan sampai beku
g. Inkubasi selama 7 x 24 jam pada suhu 37 0C dengan posisi cawan
terbalik.
3. Kriteria Pembacaan Hasil

Koloni jamur yang dihitung adalah 30 koloni sampai 300 koloni/petridish.
Contoh soal :
1. Kontrol : 2 koloni
2. 101 : 17 koloni
3. 102 : 25 koloni
3
4. 10 : 31 koloni
5. 104 : 56 koloni
6. 105 : 78 koloni
7. 106 : 124 koloni
Perhitungan :
Angka Kuman = (31 – 2) 103 + (56 – 2) 104 + (78 -2) 105 + (124 – 2) 106
4
50
D. HASIL DAN PEMBAHASAN
51
E. KESIMPULAN
F. SARAN

i.
j.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
52
PEMERIKSAAN BAKTERI ESCHERICIA COLI PADA SAMPEL MAKANAN
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
a. Mahasiswa mampu memilih peralatan dan bahan yang digunakan dalam
b. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan MPN E. coli pada
sampel makanan dengan benar.
c. Mahasiswa mampu membedakan koloni tipikal dan atipikal dengan benar.
A. PENDAHULUAN
Standar analisis untuk mengetahui adanya bakteri golongan coli adalah
melalui beberapa tahap yaitu :
1. Uji duga (presumtived)
2. Uji penegasan (confirmed test)
3. Uji lengkap (completed test)
Uji duga dengan media LB (Lactosa Broth) bertujuan menduga adanya
bakteri coli yang mempunyai sifat mampu memfermentasi laktosa dengan
menghasilkan gas dan asam lakta. Bakteri coli yang diduga meliputi semua bakteri
gram negatif tidak membentuk spora, selnya berbentuk batang pendek, bersifat
fakultatif anaerob, membentuk gas dalam waktu 24 jam pada suhu 37 oC. Apabila
terbentuk gas dalam waktu 24 jam, maka uji duga dinyatakan positif. Apabila gas
terbentuk setelah 24 jam ke 2 (48 jam), uji dinyatakan meragukan. Sedangkan
pada gas yang tidak terbentuk selama 48 jam maka uji dinyatakan negatif. Jika uji
negatif, maka pemeriksaan lanjutan tidak diperlukan lagi karena hampir bisa
dipastikan bahwa didalam sampel yang diperiksa tidak terdapat coli.
53
Pada uji penegasan dengan menggunakan media Ec. Broth dibutuhkan
untuk memberikan penegasan bahwa hasil benar-benar positif. Pada uji lengkap
dengan media EMBA (Eosin Metillin Blue) atau EA (Endo Agar) dilakukan dengan
membuat piaraan dari jasad renik yang tumbuh dalam media yang digunakan
dalam uji penegasan dengan hasil positif. Terdapat 3 tipe koloni tumbuh pada agar
yaitu:
1. Koloni tipikal, berwarna merah tampak gelap pada bagian tengah dengan
atau tanpa kilap logam.
2. Koloni atipikal, tidak tampak adanya bagian gelap pada bagian tegah koloni
setelah diinkubasi selama 24 jam berwarna Hijau metalit.
3. Koloni yang tidak termasuk dalam keduanya dan merupakan indikator uji
negatif.
Terdapat 2 seri tabung yang digunakan yaitu seri 5 1 1 (untuk makanan
terolah) dan seri 5 5 5 atau 3 3 3 untuk makanan belum terolah.
Seri tabung dapat digambarkan sebagai berikut :
1. Seri 7 tabung (5 1 1 ) untuk makanan atau minuman terolah
LB3 @ 5 ml LB1 10 ml LB110 ml
2. Seri 5 tabung (5 5 5) atau 3 tabung (3 3 3) untuk bahan makanan/air belum

terolah
LB3 5 ml LB1 10 ml LB1 10 ml
54
Atau
LB3 5 ml LB1 10 ml LB1 10 ml
B. PROSEDUR KERJA
1. PENGAMBILAN SAMPEL MAKANAN
a. Alat dan bahan
1) Wadah contoh (kantung plastik) untuk wadah sampel.
2) Sarung tangan steril/ bersih
3) Sendok steril
4) Pisau pemotong steril
5) Petridish steril
6) Formulir pengambilan sampel
7) Kertas selotip
8) Sabun desinfektant
9) Termos es dan es batu
b. Cara kerja
1) Siapkan alat dan bahan
2) Siapkan formulir pengambilan sampel yang berisi, tentang lokasi
(nama tempat pengolahan makanan/TPM), alamat TPM, tanggal
55
pengambilan, nama petugas yang mengambil sampel, dan
keperluan pemeriksaan laboratorium.
3) Makanan dimasukan dalam botol/ kantong plastik steril dengan cara
sesuai keperluaannya yaitu :
- Makanan dimasukkan bersama dalam 1 wadah (dicampurkan)
untuk pemeriksaan total
- Makanan dimasukkan dalam wadah masing-masing untuk
pemeriksaan tiap jenis makanan.
4) Meminta ijin kepada pemilik TPM (Tempat Pengelolaan Makanan)
dengan cara membeli makanan tersebut seperti pembeli biasa
sebanyak 1 porsi.
5) Makanan tersebut dimasukkan kedalam botol/kantung plastik steril
sesuai keperluaannya.
6) Pengambilan makanan dari piring dengan menggunakan sedok steril
dan untuk makanan yang ukurannya besar digunakan pisau
pemotong agar makanan tersebut mudah masuk kedalam wadah.
7) Pisau dengan sendok sebelum digunakan dalam keaadaan
terbungkus dan bila diperlukan dipanaskan diatas api bunsen
beberapa saat dan tunggu sampai pisau kembali dingin baru bisa
dipakai.
8) Untuk botol, mulut botol juga harus dipanaskan pada api bunsen.
9) Untuk kantung plastik (plastik gula), kantung plastik diatasnya dilipat
beberapa lipatan kemudian dihekter.
10) Untuk membawa atau mengirim sampel kelaboratorium, perlu
diperhatikan beberapa hal sbb :
56
- Sampel harus sampai di laboratorium dalam waktu kurang dari
24 jam.
- Bila tidak memungkinkan sampel dibungkus dengan aluminium
foil dan ditempatkan pada suhu < 4oC.
- Gunakan termos es untuk membawa sampel.
11) Beri etiket : jenis sampel, tanggal pengambilan dan pengiriman,
waktu, lokasi, jenis pemeriksaan dan nama petugas pengambilan.
Tapi jika tidak memungkinkan, beri kode yang sesuaikan dengan
formulir pemeriksaan.
12) Sampel yang sudah diambil seger dikirimkan ke laboratorium
13) Masukkan dalam termos es yang sudah diberi es batu.
14) Untuk Sampel kemasan kaleng :
- Ambil/pilih kemasan yang kalengnya menggelembung.
- Beri etikel : jenis sampel, tanggal pengambilan dan pengiriman,
waktu, lokasi, jenis pemeriksaan dan nama petugas
pengambilan.
2. PREPARASI/PENYIAPAN SAMPEL
a. ALAT DAN BAHAN
1) Timbangan Analitik
2) Mortal pastel
3) Sampel makanan
4) Alat pemotong/sendok
5) Alcohol.
6) Kapas.
7) Kertas label.
8) Korek api.
57
b. CARA KERJA
1) Siapkan alat dan bahan.
2) Bersihkan (aseptiskan) meja kerja dan tangan praktikan
3) Nyalakan bunsen.
4) Lakukan homogenisasi sampel:
a) Untuk makanan padat: timbang sampel sebanyak 10 gram
dengan menggunakan timbangan analitik yang dialasi
wadah steril sambil di dekatkan pada api. Haluskan sampel
menggunakan mortal dan pastel (ulikan) steril hingga halus,
sambil diencerkan dengan 90 ml akuades steril untuk
b) Untuk makanan cair/minuman: pipet sebanyak 10 ml
kemudian diencerkan dengan 90 ml akuades steril untuk
5) Timbang sampel sebanyak 10 gram dengan menggunakan
timbangan analitik yang dialasi wadah steril sambil di dekatkan
pada api
6) Haluskan sampel menggunakan mortal dan pastel (ulikan) steril
hingga halus, sambil diencerkan dengan 90 ml akuades steril
untuk mendapatkan pengenceran 10 kali
7) Diamkan ± 10 menit untuk proses pengendapan.
3. PEMERIKSAAN SAMPEL MAKANAN

a. UJI DUGAAN (PRESUMTIVE TEST) SERI TABUNG = 5 1 1 atau 7
Tabung (makanan terolah)
1) ALAT DAN BAHAN

a) Alat :
- Tabung reaksi steril.
- Rak tabung reaksi.
- Pipet ukur 10 ml dan 1 ml steril.
- Bunsen.
- Bulp/pipet filer/penghisap.
58
- Inkubator.
a. Bahan :
- Sampel makanan
- Media LB 1 dan LB 3 steril.
- Alcohol.
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) CARA PEMERIKSAAN
a) Beri label pada tabung reaksi yang berisi media LB3 dan LB1
sesuai dengan ml sampel yang akan diinokulasi
b) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 10 ml sampel ke
dalam 5 tabung yang berisi media LB 3 steril dengan
menggunakan pipet ukur steril.
c) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 1 ml sampel ke
d) Inokulasikan (masukkan) masing-masing 0,1 ml sampel ke
e) Lalu homogenkan dengan cara memutar tabung reaksi hingga
f) Inkubasikan piaraan di dalam inkubator dengan suhu 370 C
selama 2 x 24 jam.
g) Amati piaraan itu setiap 24 jam. Amati juga gas yang terbentuk
dalam tabung durham. Timbulnya gas dalam 24 jam
menunjukkan uji positif, dan apabila terbentuknya gas setelah
waktu 24 jam menunjukkan hasil yang meragukan. Apabila
setelah 2 x 24 jam tidak terbentuk gas, maka uji dikatakan
hasilnya negatif.
h) Untuk hasil yang positif dan meragukan maka perlu dilanjutkan
ke uji penetapan/penegasan (Confirmed Test).
59
Catatan : Dalam setiap pengerjaan penanaman (inokulasi)
sampel haruslah dilakukan seaseptis mungkin yaitu selalu
didekatkan dan dilewatkan pada api bunsen.
SKEMA PEMERIKSAAN TAHAP UJI DUGA
10 gram sampel makanan padat dihancurkan dengan

Mortal atau dibelender lalu di encerkan dengan
aquadest steril 90 ml sampai volume mencapai 100 ml
(pengenceran 10 x)
Di pipet sesuai dengan ml sampel yang diinokulasi kedalam tiap

media LB
UJI DUGA
@ 10 ml @ 1 ml @ 0,1 ml
LB3 @ 5 ml LB1@ 10 ml LB1 @ 10 ml
b. UJI PENETAPAN/PENEGASAN (CONFIRMED TEST)

1) ALAT DAN BAHAN
a) Alat :
- Tabung reaksi steril
- Rak tabung reaksi
- Jarum ose
- Bunsen
- inkubator
b) Bahan :
- Hasil uji duga positif/meragukan.
- Media EC Broth steril.
- Alkohol.
60
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) CARA KERJA
c) Nyalakan bunsen.
d) Bakar jarum ose sampai merah membara. Dinginkan sebentar.
e) Inokulasikan (masukkan) 2-3 mata ose spesimen dari hasil uji
duga positif/meragukan ke dalam 10 ml media EC Broth steril.
f) Beri label pada tabung sesuai dengan label hasil uji duga
positif/meragukan.
g) Inkubasikan piaraan dalam inkubator pada suhu 44o C – 44,5 o
C selama 1 x 24 jam
h) Amati gelembung gas yang terjadi. Apabila terdapat
gelembung gas dalam tabung durham maka hasilnya positif.
i) Tulis hasil yang positif dan cocokkan dengan tabel kombinasi
MPN untuk mendapatkan angka kuman (jumlah E. coli).
j) Untuk pemeriksaan dengan hasil positif maka bisa dilanjutkan
dengan uji lengkap (Complete Test).
SKEMA UJI PENEGASAN
1-2 mata ose
Uji Duga Positif EC Broth @ 10 ml
Inkubasikan dalam Inkunbator selama 1 x 24 jam suhu 44 0 C – 44,50 C
61
c. UJI LENGKAP (COMPLETE TEST)
1) ALAT DAN BAHAN
a) Alat :
- Cawan petri steril.
- Jarum ose.
- Bunsen.
- Inkubator.
b) Bahan :
- Uji penegasan dengan hasil positif.
- Media EMBA steril.
- Media LB 1 steril.
- Alkohol.
- Kapas.
- Kertas label.
- Korek api.
2) CARA KERJA
c) Nyalakan bunsen.
d) Buat piaraan jasad renik E coli dari uji penegasan positif pada
media agar cawan EMBA dengan cara : piaraan tuang (pour
plate), piaraan sebaran (spread plate), piaraan goresan
(streak plate), atau penanaman langsung (direct plate).
e) Inkubasikan piaraan itu dalam inkubator dengan suhu 440 C –
44,50 C selama 1 x 24 jam.
f) Amati pertumbuhan koloni pada permukaan agar itu adakah
koloni typikal. Apabila tampak koloni typikal maka uji
dinyatakan hasilnya positif (koloni E.coli berwarna Hijau
Metalit/Hijau Mengkilat).
g) Buat piaraan cair dalam media LB 1 dari koloni typikal tersebut
dengan cara : mengambil dengan jarum ose steril 2 koloni
62
typikal pada agar EMBA dan segera dimasukkan ke dalam
media LB 1 yang sudah disediakan.
h) Inkubasikan piaraan itu dalam inkubator dengan suhu 370 C
selama 2 x 24 jam.
i) Amati gas dalam tabung durham setiap 24 jam. Apabila
terbentuk gas maka hasilnya positif.
SKEMA UJI LENGKAP

Piaraan Goresan (Streak Plate) :
1 ose
Uji Penegasan Positif Media MC

atau
Piaraan Tuang (Pour Plate):
1 ml 15-20 ml
Uji Penegasan Positif MC cair + 40-500 C

Kolo LB 1
Inkubasikan dalam inkubator

63
selama 2 x 24 jam dengan suhu370
C
d. ANALISIS PENGHITUNGAN BAKTERI Eshericia coli (E. coli)
MENGGUNAKAN CARA MPN
Cara menghitung mikroba dengan metode MPN tidak

digunakan media agar, tetapi media cair (broth). Tidak semua jenis
mikroba bisa dihitung dengan cara ini. Mikroba yang dapat dihitung
dengan cara MPN adalah bakteri yang dapat tumbuh dalam media cair
tertentu dan mengubah senyawa dalam media itu dengan indikator
tertentu pula sebagai hasil perombakan medianya. Bakteri yang
berasal dari sampel ditumbuhkan dalam media cair di tabung reaksi.
Sampel boleh diencerkan dalam beberapa tingkat. Banyaknya media
untuk menanam sampel 3 buah atau 5 buah tabung untuk satu jenis
pengenceran. Apabila memakai 3 tabung, metode MPN itu disebut seri
3 tabung dan apabila 5 tabung disebut cara MPN 5 tabung.
Di dalam tabung media cair untuk menanam sampel diberi
tabung durham dengan posisi terbalik. Tabung itu berfungsi sebagai
tempat penampung gas yang dihasilkan oleh bakteri dalam sampel
setelah ditanam dalam media cair itu. Ini adalah salah satu indikator
adanya jasad renik yang tumbuh dalam media itu yang asalnya dari
sampel.
Pengenceran yang dibuat harus dapat menghasilkan
pertumbuhan bakteri yang berasal dari satu sel dalam beberapa tabung
dan tabung lainnya tidak mengandung satu sel pun. Dengan kata lain,
setelah inkubasi ada beberapa tabung yang ditumbuhi baktaeri dengan
tanda adanya gas di dalam tabung durham dan lainnya tidak. Tabung
yang berisi gas dikatakan hasil positif, sedangkan yang tidak ada gas
dikatakan hasil negatif.
Media yang disediakan atau yang berada di dalam tabung harus
mengandung zat yang dapat dirombak oleh bakteri yang ada di dalam
sampel dan menghasilkan indikator tertentu sebagai hasil perubahan.
Seperti misalnya dalam pemeriksaan air terhadap bakteri coliform,
media yang disediakan adalah ”Lactosa cair”. Media itu akan
difermentasi oleh bakteri coliform menghasilkan gas dan media itu akan
berubah warna.
64
Banyaknya bakteri coli atau yang sering disebut ”angka coli” dari
sampel air dapat dilakukan antara lain dengan menggunakan metode
Most Probable Number (MPN) atau Prakiraan Terdekat Jumlah (PTJ).
Adapun dasar dari metode ini adalah piaraan cair bakteri coli dalam
contoh air dengan media yang mengandung bahan yang dapat
difermentasi oleh bakteri asam organik. Metode tersebut merupakan
metode standart dalam menentukan angka coli (coliform group)
sebagai jasad indikator pencemaran air oleh air buangan rumah
tangga. Angka coli yang diperoleh dapat untuk mengetahui tingkat
kontaminasi air oleh bahan buangan yang berasal dari tinja atau hewan
berdarah panas.
Bakteri coli adalah diartikan sebagai bakteri dengan sifat-sifat :
selnya berbentuk batang (pendek), aerob atau fakultatif anaerob, tidak
membentuk spora, gram negatif dan dapat memfermentasi laktosa
dengan menghasilkan gas dalam waktu 2 x 24 jam pada suhu 370C.
Untuk mengetahui hasil MPN, tabung yang dipergunakan untuk
fermentasi berbeda-beda. Adapun patokan yang dapat dipergunakan
adalah sebagai berikut:
a. Seri 5 : 1 : 1
7 tabung dengan susunan : 5 x 10 ml
1 x 1 ml
1 x 0,1 ml
Artinya : 5 tabung LB 3 @ 5ml masing-masing diisi 10 ml contoh.
1 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 1 ml contoh.
1 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 0,1 ml contoh.
65
b. Seri 3 tabung (3 : 3 : 3)
9 tabung dengan susunan : 3 x 10 ml
3 x 1 ml
3 x 0,1 ml
3 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 1 ml contoh.
3 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 0,1 ml contoh.
c. Seri 5 tabung (5 : 5 : 5)
15 tabung dengan susunan 5 x 10 ml
5 x 1 ml
5 x 0,1 ml
5 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 1 ml

contoh.
5 tabung LB 1 @ 10 ml masing-masing diisi 0,1

ml contoh.
Besarnya volume contoh air yang diinokulasikan ke dalam

masing-masing tabung yaitu : 10 ml, 1 ml, 0,1 ml disebut porsi 10,
1 dan 0,1 ml. Akan tetapi sebenarnya volume contoh yang
diinokulasikan ke dalam media dapat menggunakan porsi lain,
sebagai contoh :
100 ml, 10 ml dan 1 ml
0,1 ml, 0,001 dan 0,001 ml
Hal ini berarti contoh yang telah ditentukan MPN nya masih
harus dibagi atau dikalikan dengan factor pengenceran. Di samping
66
itu, apabila digunakan lebih dari 3 pengenceran , nilai MPN tetap
dihitung hanya 3 pengenceran.
Seri tabung yang lebih baik digunakan untuk menentukan MPN

adalah seri 5 tabung. Sedangkan pengenceran contoh tergantung
dari keadaannya apakah kira-kira contoh itu mengandung banyak
coli atau hanya sedikit. Apabila diperkirakan berjumlah banyak lebih
baik contoh itu diencerkan dengan kelipatan 10.
Contoh :
1. Dicoba menggunakan seri 3 tabung.

2. Contoh air dari sumber tertentu dipersiapkan.
3. Persiapkan akuades steril dalam tabung-tabung reaksi.
4. media cair laktosa dengan tabung dirham di dalamnya yang
sudah steril.
5. Persiapkan 12 tabung laktosa cair dan kelompokkan menjadi 4
seri tabung.
6. Lakukan pengenceran seperti pada gambar.
7. Inokulasikan tiap kelompok tabung dengan volume 10 ml, 1 ml,
0,1 ml dan 0,01 ml.
8. Inkubasikan piaraan itu pada suhu 37 0C selama 2 x 24 jam
dalam inkubator.
9. Amati setiap tabung dalam setiap kelompok , apakah hasilnya
positif (ada gas dalam tabung durham) atau hasilnya negatif,
tanpa ada gas dalam tabung durham.
10. Tulis semua hasil pengamatan itu seperti pada skema berikut :
Jumlah ml sampel yang
diinokulasikan ke dalam media
Kombinasi MPN yang digunakan
laktosa cair
10 ml 1 ml 0,1 0,01 ml
ml
3 3 2 1 4 2 1
67
11. Kombinasi MPN untuk menentukan angka coli dimulai dari
pengenceran terakhir yang semua tabung dalam kelompok
hasilnya positif, kemudian diikuti banyaknya hasil positif dari
pengenceran berikutnya. Apabila pengenceran berikutnya
(setelah 2 pengenceran) hasilnya juga positif, maka banyaknya
hasil positif itu ditambahkan pada hasil positif sebelumnya
(pengenceran ke-3). MPN dihitung untuk 100 ml contoh air.
Apabila akan ditentukan tiap 1 ml maka harus dibagi 100.
Dari contoh ini, dengan kombinasi MPN 3 2 1, didapatkan MPN
sesuai MPN dalam tabel. Karena digunakan seri 3 tabung, maka
nilai MPN yang diperoleh sesuai dengan tabel MPN seri 3
tabung. Akan tetapi sebenarnya tabel MPN ada beberapa
macam disesuaikan dengan banyaknya tabung yang
digunakan. (Lampiran).
Dari MPN yang telah diperoleh dari tabel, kita dapat

menentukan nilai MPN sebenarnya yaitu :
Dari kombinasi MPN didapatkan : 3 2 1, maka :
MPN tabel =150
MPN sebenarnya = MPN tabel x 1
Penganceran tabung yang

di tengah dari
kombinasi MPN
= 150 x 1
10-1
=150 x 10
= 1,5 x 103
68
Contoh lain :
Jumlah ml contoh yang diinokulasi Kombinasi MPN yang digunakan

ke dalam media laktosa cair
10 ml 1 ml 0,1 ml 0,01 ml
3 1 0 1 3 1 1
0 2 0 0 0 2 2
Setelah dilihat pada tabel MPN kemudian dicari MPN sebenarnya, maka
didapatkan :
Kombinasi MPN MPN tabel MPN sebenarnya
3 1 1 75 7,5 x 10
0 2 2 6,2 0,6 x 10
Cara lain untuk menentukan MPN sebenarnya adalah sbb:
Apabila porsi yang digunakan adalah :
a. 100 ml, 10 ml, dan 1 ml, MPN sebenarnya adalah MPN tabel kali 0,1
b. 1 ml, 0,1 ml, dan 0,01 ml, MPN sebenarnya adalah MPN tabel kali 10
c. 0,1 ml, 0,01 ml, dan 0,001 ml, MPN sebenarnya adalah MPN tabel kali 100
69
70
D. KESIMPULAN
E. SARAN

k.
l.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
71
PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
PADA SAMPEL USAP ALAT MAKAN
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
a. Mahasiswa mampu memilih peralatan dan bahan yang digunakan dalam
b. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pengambilan sampel usap alat makan
dengan benar.
c. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan ALT pada sampel usap
alat makan dengan benar.
A. PENDAHULUAN
Kontaminasi makanan dapat terjadi setiap saat, salah satunya dari
peralatan makanan yang digunakan tidak memenuhi syarat kesehatan. Di
Indonesia peraturan telah dibuat dalam bentuk Permenkes RI No.
1096/Menkes/Per/VI/2011, bahwa untuk persyaratan peralatan makanan tidak
boleh bakteri lebih dari 0 koloni/cm2.
Peranan peralatan makanan dalam pedagang makanan merupakan
bagian yang tak terpisahkan dari prinsip-prinsip penyehatan makanan (Food
hygiene). Setiap peralatan makan (piring, gelas, sendok) harus selalu dijaga
kebersihannya setiap saat digunakan. Alat makan (piring, gelas, sendok) yang
kelihatan bersih belum merupakan jaminan telah memenuhi persyaratan
kesehatan, karena didalam alat makan (piring, gelas, sendok) tersebut tercemar
bakteri E.coli yang menyebabkan alat makan (piring, gelas, sendok) tersebut tidak
memenuhi kesehatan. Untuk itu pencucian peralatan sangat penting diketahui
secara mendasar, dengan pencucian secara baik akan menghasilkan peralatan
yang bersih dan sehat pula. Dengan menjaga kebersihan peralatan makan (piring,
gelas, sendok,dll.), berarti telah membantu mencegah pencemaran atau
kontaminasi makanan yang dikonsumsi (Djajadinigrat, 1989 dalam Pohan, 2009).
72
B. ALAT DAN BAHAN
1. Kapas lidi steril
2. Plastik steril
3. Sarung tangan steril
4. Lampu bunsen
5. Korek api
6. Gunting kecil
7. Termos es dan es batu
8. Kapas dan alkohol
9. Alat tulis
10. Blangko/formulir pengambilan sampel
11. Media transpor (cairan buffer dalam botol sebanyak 10 ml)
C. KETENTUAN ALAT MAKAN YANG DIAMBIL SEBAGAI SAMPEL

1. Diutamakan pada alat makan yang siap digunakan. Tapi jika tidak
mungkin, dapat diambil yang baru selesai dicuci.
2. Alat makan (diambil 4-5 buah secara acak untuk tiap jenis alat).
D. PROSEDUR KERJA
1. CARA MENGUSAP ALAT MAKAN
a. Siapkan sarung tangan steril dari karet. Sebelumnya basahi tangan
dengan dengan alkohol.
b. Alat makan minum yang akan diperiksa masing-masing diambil secara
acak dari tempat penyimpanan.
c. Persiapkan formulir pemeriksaan dengan membagi alat makan minum
dalam kelompok-kelompok.
d. Persiapkan lidi kapas steril, kemudian buka tutup botol yang telah diisi
buffer phospat steril dan masukkan lidi kapas kedalamnya.
e. Lidi kapas steril dalam botol ditekan-tekan kedinding botol untuk
membuang airnya. Stelah itu diangkat dan diusapkan pada setiap alat
makan minum. Usapkan sampai 1 kelompok alat selesai diusap.
1) Cangkir/gelas : diusap mengellingi permukaan luar dan dalam
bagian bibir setinggi 6mm, dengan pengusapan melingkar
sebanyak 3 kali.
73
2) Sendok : permukaan bagian dalam dan luar diusap sebanyak kali.
3) Garpu : permukaan bagian luar dan dalam alat penusuk diusap 3
kali.
4) Piring dan mangkok besar : permukaan dalam tempat makan
diletakkan dengan atau tanpa menggunakan alat bantu plastik steril
dengan lubang besar 5 x 10 cm2 diusap dengan cara menyilang
(diagonal) siku-siku antara garis usapan yang stu dengan garis
usapan yang kedua.
5) Alat masak : setiap uasapan seluas 50 cm 2 dan dianggap 1
kelompok setelah silakukan seluas permukaan sebanyak 5 kali.
f. 1 lidi kapas digunakan untuk 1 kelompok alat makan yang diperiksa.
g. Untuk setiap selesai mengusap 1 alat dari 1 kelompok alat makan, lidi
kapas selalu dimasukkan dahulu kedal buffer phospat, diputar-putar
lalu ditekan-tekan ke dinding botol.
h. Setelah semua kelompok alat makan minum selesai diusap, lidi kapas
dimasukkan kedalam botol dipanaskan dengan bunsen kemudian
ditutup kembali.
i. Hasil usapan alat dikirim ke laboratorium dengan menempelkan etiket
yang berisi keterangan sbb. :
1) Nama alat yang diusap
2) Lokasi pengambilan
3) Nomor kode sesuai dengan nomor yang ada di formulir
4) Tanggal pengambilan
5) Jenis pemeriksaan yang diminta
6) Nama pengirim/ petugas pengambil
2. PEMERIKSAAN ALT SAMPEL USAP ALAT MAKAN
Prinsip :
1. Bahan diencerkan mulai dari 10 -1, 10-2, dan seterusnya dengan

perkiraan jumlah kuman yang ada didalam bahan atau specimen.
2. Dari tiap pengenceran diambil 1 cc untuk dimasukkan kedalam petridis
steril yang sudah diberi kode pengenceran.
74
3. Tiap petridis yang sudah diisi specimen, dituangi PCA (Plate Count
Agar) steril dengan merata.
4. Setelah membeku, bungkus dengan kertas dan inkubasikan pada
suhu 37oC selama 48 jam dengan posisi terbalik.
5. Hitung jumlah koloni yang tumbuh pada media agar tersebut dengan
Counter. Apabila perhitugan tidak dapat dilakukan pada akhir 48 jam,
dapat ditunda sampai 24 jam dengan syarat didinginkan pada suhu
5oC.
Cara Analisis:
1. Pilih cawan petrin dengan pengenceran tertentu yang menunjukkan

pertumbuhan koloni antara 30-300 buah.
2. Keloni yang tumbuh berdekatan dan bergabung merupakan kumpulan
koloni besar dihitung 1 koloni.
3. Deretan atau rantai koloni yang terlihat sebagai satu garis tebal
dihitung 1 koloni.
4. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari 2 angka yaitu satuan dan
persepuluhan.
5. Jika angka persepuluhan sama atau lebih besar dari 5, bualat menjadi
persatuan.
Cara Kerja :
1. Lakukan pengenceran sampel dengan menggunakan buffer phospat

steril.
2. Untuk mendapatkan pengenceran 10x, 100x, 1000x dst, siapkan 6
tabung reaksi steril yang masing-masing berisi 9 ml larutan pengencer
dan diberi kode pengenceran 10x, 100x, 1000x, 10.000x dst.
3. Dengan pipet ukur steril ambil 1 ml specimen sampel dan masukkan
kedalan petridish steril. Beri kode pengenceran 10x.
4. Kemudian ambil 1 ml lagi untuk dimasukan pada slah stu tabung reaksi
steril dengan kode pengenceran 10x. Homogenkan.
75
5. Dan seterusnya sampai pengenceran 106 kali.
6. Sebagai kontrol, petridish steril diisi 1 ml larutan pengencer.
7. Semua petridish yang sudah diisi dengan spesimen dituangi denga
PCA secukupnya (15-20 ml).
8. Setelah beku bungkus dengan kertas dan inkubasikan pada suhu 37oC
selama 48 jam dengan posisi terbalik.
Contoh perhitungan :
a. Kontrol :1 koloni
b. Pengenceran 10-1 : 276 koloni
c. Pengenceran 10-2 : 105 koloni
-3
d. Pengenceran 10 : 32 koloni
e. Pengenceran 10-4 : 30 koloni
Rata-Rata KK = (Jlh koloni per cawan yang memenuhi syarat – Kontrol) x Faktor
Pengencer
Jlh cawan yang memenuhi syarat perhitungan
Jumlah kuman = (276-1) x 10 + (105-1) x 100 + (32-1) x 1000 + (30-1) x 10.000

4 cawan
= 72.500 koloni/ cm2
KK/cm2 = Rata-Rata Kaloni

L. Usapan x Jlh Alat yang di usap
Keterangan :
1. Standar maksimum untuk jumlah koloni usap alat makan : 100 koloni/
cm2 .
2. Untuk usap alat masak : 500 koloni/50 cm2 atau 10 koloni/cm2.
76
SKEMA PEMERIKSAAN AGKA KUMAN UNTUK SAMPEL USAP ALAT
MAKAN
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml kontrol
-1
10
sampe
l
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml 1 ml 1 ml
kontrol
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
15-20 ml PCA
Keterangan :
7. Kontrol diisi 1 ml aquades steril atau buffer phospat steril.

8. Media PCA steril dituang sebanyak 15-20 ml pada masing-masing petridis
tersebut.
9. Homogenkan dengan cara menggoyangkan petridish atau dengan
menggerakan petridis membentuk angka 8.
10. Biarkan agar membeku.
77
11. Bungkus dengan kertas payung.
12. Inkubasi dalam inkubator dalam posisi terbalik dengan suhu 37 oC selama
48 jam.
78
E. HASIL DAN PEMBAHASAN
79
F. KESIMPULAN
G. SARAN

m.
n.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
80
PEMERIKSAAN BAKTERI VIBRIO CHOLERA PADA SAMPEL USAP DUBUR
(RECTAL SWAB)
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
2. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pengambilan sampel usap dubur
(rectal swab) dengan benar.
3. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan pemeriksaan bakteri
Vibrio cholera pada sampel usap dubur dengan benar
A. PENDAHULUAN
Menurut Depkes R.I (Th 1990 h. 2 & 12) pengambilan tinja secara langsung
sebagai bahan specimen untuk pemeriksaan bakteri infeksi, saluran pencernaan
lebih baik dari pada pengambilan swab. Pengambilan recta swab lebih praktis dari
pada mengambil dengan segera specimennya, tidak menunggu buang air besar,
tidak menimbulkan masalah baik pada waktu pengiriman maupun bila specimen
tidak dapat segera diperiksa atau dikirim ke laboratorium.
Dengan adanya pengambilan sampel rectal swab pada penjamah

makanan akan diketahui kondisi kesehatannya, apakah sebagai carier penyakit
cholera atau tidak, disamping itu juga untuk meningkatkan kesehatan penjamah
atau karyawan lain yang menjadi karier agar bebas dari penyakit (menular melalui
makanan).
Kolera merupakan penyakit saluran pencernaan akut, yang disebabkan

oleh enterotoksin bakteri Vibrio cholera. Penyakit ini dapat ditularkan melalui
makanan atau minuman yang terkontaminasi secara langsung atau tidak langsung
oleh tinja atau muntahan orang yang terinfeksi. Beberapa strain tertentu dapat
bertahan dalam air atau dalam jangka waktu yang lama.
81
B. PROSEDUR KERJA
1. PENGAMBILAN SAMPEL USAP DUBUR (RECTAL SWAB)
1) ALAT DAN BAHAN
1) Media transport Cary & Blair atau dalam botol Mc. Cartney yang
berisikan kira-kira ½ - ¾ botol yang steril (alkali pepton stril 1% 9
ml).
2) Kapas lidi steril (lidi waten), yaitu lidi yang pada ujungnya dililiti
kapas.
3) Sarung tangan steril/bersih.
4) Spidol huruf kecil
5) Formulir pengambilan untuk sampel pemeriksaan laboratorium.
6) Gunting kecil
7) Kertas cellotape
8) Lampu sepiritus
9) Termos es
10) Tas pembawa contoh
11) Buku harian pengambilan contoh
12) Sabun disenfektansia.
b. CARA KERJA
1) Menyiapkan alat dan bahan.
2) Mempersiapkan catatan pada formulir pemeriksaan tentang nama
yang diperiksa, umur dan tanggal pemeriksaan, serta tempat
kerjanya.
3) Persiapkan sarung tangan dan dipakai dengan rapi.
4) Perintahkan dengan cara sopan kepada penderita atau orang
yang akan diambil usap duburnya dengan posis menungging.
Kedua belah tanganya memegang masing-masing pinggulnya,
atau bisa dengan tengkurap.
5) Petugas pemeriksa berdiri disamping kiri (bagi yang kidal
sebaliknya) dari penderita.
6) Tangan kira petugas pemeriksa memegang dan melebarkan
lubang anus kearah samping kiri kanan dengan cara merenggakan
dengan jari tangan kiri. Kemudian tangan kanan bersiap dengan
82
lidi kapas steril dimasukkan kedalam larutan carry & blair (alkali
pepton 9 ml) sebagai pelican selanjutnya kedalam anus secara
diputar seara jarum jam dengan arah kira-kira sejajar dengan
badan penderita, dan kapas lidi harus masuk kedalam kurang lebih
3 cm.
7) Selama memasukkan lidi kapas tetap di putar searah jarum jam
dan ditarik dengan terus memutar kearah yang sama sampai
keluar.
8) Setelah lidi kapas diluar, segera ambil botol pembawa buku tutup
botol dan tenggelamkan lidi kapas ke dalamnya, potong kelebihan
lidi kapas sambil memanaskan bibir botol diatas lamu spritus,
kemudian tutup botol denga rapat.
9) Tempelkan kertas cellotape yang telah dipersiapkan ke botol dan
tulis etiket pakai spidol dengan memberi nama dan nomor kode
serta tempat kerja sesuai dalam formulir.
10) Kirimkan segera sampel ke laboratorium.
2. PEMERIKSAAN BAKTERI VIBRIO CHOLERA PADA SAMPEL USAP

DUBUR
a. ALAT DAN BAHAN

1) ALAT
- Tabung reksi & rak tabung
- Cawan petri
- Pinset
- Jarum ose
- Sarung tangan
- Alkohol & kapas
2) BAHAN
- Spesimen usap dubur dalam Media carry & blair atau alkali
pepton 1%
- Media TCBS (Thio sulfate Centrate Bile Salt)
- Anti sera Ogawa, Inaba.
83
b. CARA KERJA
1) Lidi kapas (rectal swab) yang telah mengandung tinja, yaitu
ditandai dengan warna pada ujung kapasnya, yaitu ditandai
dengan warna kuning pada ujung kapasnya, apabila akan
langsung diperiksa dapat dimasukkan ke alkali peptone, apabila
diperiksa lebih dari 2 jam maka dimasukkan ke botol yang berisi
media steril carry & blair.
2) Apabila berasal dari carry yang mengandung faeces diambil
swabnya dan di celupkan ke dalam alkali peptone 1 % di tanam
pada suhu 37oC selama 6-24 jam.
3) Dari alkali peptone 1% diambil 1 ose dan ditanamkan dalam
media TCBS. Dan di tanam pada suhu 37oC dalam inkubator
selama 24 jam.
4) Kemudian bila tumbuh koloni dalam TCBS dengan ciri-ciri, yaitu
bulat, warna kuning keping/ke-emasan dan permukaan halus,
maka akan dilakukan identifikasi dengan cara mengambil koloni
dengan ose kemudian letakkan pada objek glass dengan ditetesi
antisera ogawa kemudian diratakan:
- Jika ada gumpalan, maka ada vibrio cholera jenis ogawa,
- Jika tidak ada gumpalan: maka ditetesi antisera jenis inaba.
Hasilnya: jika terjadi gumpalan maka ada Vibrio cholera jenis
inaba, tetapi jika tidak ada gumpalan dan bila diangkat dengan
ose separti benang, maka terdapat Vibrio cholera jenis polyva.
84
85
D. KESIMPULAN
E. SARAN

o.
p.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
86
PEMERIKSAAN SAMPEL UDARA
WAKTU PELAKSANAAN :
TUJUAN :
2. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pengambilan sampel udara dengan
benar.
3. Mahasiswa mampu melakukan tahapan pemeriksaan angka kuman udara
pada sampel udara dengan benar
A. PENDAHULUAN
Kelompok mikroorganisme yang paling banyak tersebar di udara bebas
adalah bakteri, jamur (termasuk di dalamnya ragi) dan juga mikroalga. Belum ada
mikroorganisme yang habitat aslinya di udara. Mereka terdapat dalam jumlah yang
relatif kecil bila dibandingkan dengan di air atau di tanah. Mikroorganisme udara
dapat dipelajari dalam dua bagian, yaitu mikroorganisme udara di luar ruangan dan
mikroorganisme udara di dalam ruangan. Mikroorganisme paling banyak
ditemukan di dalam ruangan (Waluyo, 2009). Menurut Pelczar (2008), beberapa
faktor yang menentukan jumlah dan jenis mikroorganisme yang mendiami udara
adalah:
a. Sumber mikroorganisme (tanah, laut, bersin dan lain-lain)
b. Ketahanan jenis mikroorganisme tersebut terhadap kondisi fisik seperti suhu,
kelembaban dan cahaya matahari
c. Jumlah dan aktivitasnya.d.Lingkungan luar (kondisi cuaca dan ketinggian
tempat)
Suhu di dalam ruangan dalam rentang 18 0-24 0 C adalah suhu optimal
bagi pertumbuhan kebanyakan jamur, meskipun beberapa jenis jamur dapat hidup
juga di rentang suhu yang luas. Sedikit jamur yang mempunyai temperatur optimal
diatas 300C yaitu Aspergillus sp. Jamur di dalam lingkungan tidak tumbuh jika suhu
di atas 300C. Spora jamur lebih tahan panas daripada miselia dan pada umumnya
bertahan lebih lama pada suhu yang lebih luas rentangnya. (Gutarowska &
Piotrowska,2007).
87
Pengambilan Sampel Kuman Udara Sampling mikrobiologis udara dapat
diperoleh dengan menggunakan metode setting plates (perletakkan lempeng agar)
dam metode mekanik volumetric air sampling.
1. Metode setting plates
Prinsip metode ini pada peletakkan lempeng agar dalam petri diameter
100 mm yang terbuka akan menampung pengendapan partikel mikroba udara
sekitar 1 m3 selama terpapar 15 menit, menggunakan media sampling standar
Brain Heart Infusion Agar atau Trypticase Soy Agar. Atau bisa juga
menggunakan media agar yang lainnya seperti Plate Count Agar. Metode ini
mudah dan tidak mahal tapi hasilnya tidak betul –betul kuantitatif.
2. Metode volumetric air sampling

Merupakan metode kuantitatif yang lebih tepat, karena partikel udara
yang lebih kecil (3mm) dengan kondisi kelembaban udara akan tetap
tersuspensi di udara, tidak turun mengendap di permukaan suatu lempeng
agar tetapi dengan metode high-velocity-volumetric air sampling , partikel kecil
di udara dapat ditarik dengan kecepatan tinggi ke dalam saluran alat
menggunakan suatu pompa (vacuum pump). Selain itu keuntungan pada
partikel ukuran besar yang umumnya diudara rumah sakit, rerata 10-15 mm,
dapat ditarik masuk ke dalam media cair (collection fluid) dan terjadi
gelembung-gelembung udara yang dapat memecahkan partikel besar
sehingga semua kandungan sel-sel mikroba yang hidup akan terpencar dan
merata menimpa, menempel pada permukaan lempeng agar yang
mengandung nutrisi (Brain Heart Infusion Agar atau Trypticase Soy Agar atau
Mueller Hinton Agar dan Saboroud Glucose Agar), sehingga merefleksi jumlah
total mikroba didalam udara per satuan m 3 . Kecepatan aliran udara harus
dikalibrasi dengan tepat untuk menjamin hasil yang akurat (KEMENKES,
2002).
Mengacu pada Keputusan Menteri Kesehatan RI Nomor:
1335/Menkes/SK/X/2002 Tanggal: 29 Oktober 2002 TENTANG STANDAR
OPERASIONAL PENGAMBILAN DAN PENGUKURAN SAMPEL KUALITAS
UDARA RUANGAN DI RUMAH SAKIT. Berikut ini adalah cara pengambilan
sampel gas / udara ruangan di Rumah Sakit untuk pemeriksaan mikrobiologi:
1. Lokasi pengambilan sampel
88
a. Ruang operasi
b. Ruang perawatan
c. Ruang isolasi
d. Ruang cuci
e. Dapur
2. Titik pengambilan sampel
Jumlah titik Sampel minimal sebesar 10% dari jumlah masing-masing
ruangan.
3. Waktu pengambilan sampel
Ruang operasi dilakukan menjelang operasi (ruangan siap digunakan ).
Ruang perawatan dan isolasi dilakukan setelah dilakukan pembersihan
ruangan
B. PROSEDUR KERJA
1. METODE SETTING PLATES
a. ALAT DAN BAHAN
1) Media agar cawan steril (BHI/TSA/PCA) ukuran diameter 10 cm
2) Kapas
3) Alkohol
4) Bunsen
5) Label
6) Alat tulis
7) Termos es
b. CARA KERJA
1) Aseptiskan tangan praktikan.
2) Tentukan titik sampling untuk pengambilan sampel (di tengah-
tengah atau di pojok ruangan)
3) Ambil petri dish yang berisi media agar cawan, tempatkan pada
masing-masing titik pengambilan sampel.
4) Buka tutup petri dish, petri dish terbuka menghadap ke atas, dan
biarkan kontak dengan udara selama 15 menit.
5) Kemudian tutup petri dish dan aseptiskan tutupan dengan dilalukan
pada api Bunsen.
89
6) Beri label untuk keterangan sampel.
7) Masukkan ke dalam termos es dan kirim ke laboratorium.
8) Di laboratorium: masukkan cawan petri yang telah berisi specimen
dari udara ke dalam incubator pada suhu 35-370C selama 24 jam.
9) Amati pertumbuhan koloni bakteri pada agar cawan.
10) Hitung jumlah koloni bakteri menggunakan colony counter.
11) Analisis:
Jumlah kuman udara/m3 = jumlah koloni bakteri pada petri dish
volume ruangan (m3)
Catatan:
Jumlah kuman dapat dinyatakan dalam ......./ft³; pemaparan
Petridish selama 15 menit menunjukkan jumlah partikel mengendap
pada 1 ft3 (= Kecepatan Pengendapan). Volume sampel udara
menentukan jumlah total bakteri dalam suatu volume tertentu
(kepadatan bakteri); Kecepatan mengendap tinggi (>1)
menunjukkan bakteri Dust Borne; Kecepatan mengendap rendah
(<4 ft/ menit) menunjukkan bakteri droplet; Udara mempunyai
kecepatan mengendap 1 – 2 ft/menit menunjukkan organisme
Airborne dalam jumlah yang tinggi.
2. METODE VOLUMETRIC AIR SAMPLING MENGGUNAKAN

MIKROBIOLOGI AIR SAMPLER
a. METODA AGAR
1) Persiapan, pengoperasian alat:
a) Lakukan uji fungsi alat: Lepas kipas dan pelindungnya lalu
bungkus dengan kertas, sterilkan dalam autoclave dengan suhu
121oC selama 15 menit atau dengan sterilisasi kering dengan
suhu 70 oC selama 1 jam.
b) Badan alat didesinfeksi dengan menggunakan alkohol 70%
atau desinfektan lainnya.
c) Pasang battery pada alat atau adaptor.
d) Pasang kembali kipas dan pelindung pada badan alat.
90
e) Atur waktu sesuai dengan lama pengambilan sampel yang
direncanakan antara lain : ruang operasi dan ruang isolasi = 4
menit, ruang perawatan = 2 menit
f) Pasang alat pada piring penyangga / Tripod.
g) Siapkan agar strip (media agar)
2) Cara pengambilan sampel (Metoda Agar Strip)

a) Tempatkan alat pada titik Pengambilan sampel pada
ketinggian 80 cm dari permukaan lantai
b) Lepaskan media agar strip dari kemasannya dan segera
pasangkan pada tempatnya (pelindung kipas) dengan posisi
permukaan agar strip mengarah ke kipas.
c) Hidupkan alat .
d) Tekan tombol start pada remote starter (jarak petugas dengan
alat minimal 3 meter) tinggalkan ruangan apabila alat sedang
beroperasi.
e) Alat akan berhenti secara otomatis sesuai dengan pengaturan
waktu.
f) Petugas segera masuk dan matikan alat .
g) Lepaskan media agar strip dari tempatnya dan masukkan
kembali pada kemasannya, tutup rapat dan disegel.
h) Beri keterangan atau label seperlunya antara lain : waktu
pengambilan, lokasi/tempat, lama pengambilan sampel dan
nama petugas.
i) Amankan agar strip tersebut dengan cara sbb :
* Lapisi agar strip dengan aluminium foil
* Simpan pada cool box (kotak pendingin) dengan suhu 4 –
10 oC
3) Analisis
a) Persiapan: masukkan agar strip pada incubator dengan suhu
30-35oC dan selama 24 jam (bila 24 jam tidak ada
pertumbuhan kuman, pembiakan 24 jam lagi).
91
b) Setelah waktu pembiakan kuman selesai, jumlah koloni kuman
yang tumbuh dihitung dengan menggunakan Colony Counter.
c) Cara menghitung angka koloni kuman pada media agar :
- Hidupkan Colony Counter
- Tempatkan media agar dengan posisi terbalik pada display
dan hidupkan lampu
- Pasang kabel detector pada coloni counter.
- Hidupkan kalkulator
- Hitung koloni kuman yang tumbuh dengan cara menekan
ujung detektor pada agar strip.
- Jumlah koloni kuman yang terbentuk pada agar strip dapat
dibaca pada kalkulator.
Menghitung jumlah koloni kuman, gunakan rumus :

koloni kuman pada agar strip
KK/m3 = ---------------------------------- X 1000 liter
100 lt X waktu (menit)
Keterangan :
KK = Jumlah Koloni kuman yang terbentuk
100 ltr = kemampuan alat untuk menghisap udara selama
1 menit adalah sebanyak 100 liter.
b. METODE TUANG (POUR PLATE)

1) Persiapan
a) Periksa battery melalui indikator flowrate (tingkat akhir) 2,0 Lpm
(liter/menit) apabila indikator kisaran naik turun 0,2 Lpm perlu
diganti battery
b) Isi impinger dengan larutan fisiologis NaCl 0,9% sebanyak 10 ml.
c) Tutup tabung impinger dengan rapat jangan sampai terdapat
gelembung.
d) Sterilisasi tabung impinger yang sudah berisi reagen penyerap
dengan sterilisasi basah pada suhu 121 0C,selama 15 menit
92
e) Tempatkan impinger pada badan alat.
2) Pelaksanaan
a) Impinger yang telah berisi larutan fisiologis NaCl 0,9%
dihubungkan dengan flow meter
b) Hidupkan alat dan atur flow meter 1-2 lpm.
c) Baca dan catat flowmeter pada skala indicator.
d) Lakukan pengambilan sampel selama 15 – 30 menit, sesuai
dengan kondisi kebersihan ruang.
e) Matikan alat dan lepaskan impinger dari badan alat.
f) Masukkan sampel dalam cool box dan dikirim ke laboratorium.
3) Analisis
a) Siapkan 5 petridish steril.
b) tuangkan sampel ke dalam 4 petridis steril masing-masing 1 ml
c) pada petridis ke 5 digunakan sebagai kontrol (tanpa sampel).
d) pada ke 5 petridis masing-masing tuangkan media agar (Plate
Count Agar) sebanyak 10 - 15 ml dalam suhu 46 – 50 oC.
e) goyangkan ke 5 petridis secara perlahan agar bercampur
merata.
f) Diamkan petridish yang berisi sampel sampai membeku.
Kemudian masukan kedalam inkubator pada suhu 35 oC selama
± 24 - 48 jam dengan posisi petridis terbalik.
g) Koloni yang tumbuh dihitung pada Coloni Counter.
h) Perhitungan :
R (koloni/ml) = (a-e) + (b-e) + (c-e ) + (d-e)
-----------------------------------------
4
R x V x 1000/M3
JK = -----------------------------
Qxt
93
Keterangan :
JK = Jumlah Kuman
R = Jumlah koloni rata-rata
V = larutan fisiologis (ml)
Q = Debit aliran udara (L/menit)
t = Lamanya waktu pengambilan sampel (menit)
a-d = Jumlah kuman di petridis a,b,c dan d
e = Jumlah kuman pada petridis e (kontrol)
94
95
D. KESIMPULAN
E. SARAN

q.
r.
Mengetahui
(….................…………….....) (...............……………...……)
NIP. NIP.
96
DAFTAR PUSTAKA
Dwidjoseputro, D, 2002, Dasar-dasar Mikrobiologi, Penerbit Djambatan,

Surabaya
Entjang, I., Mikrobiologi dan Parasitologi, 2003, Penerbit PT. Citra Aditya Bakti,
Bandung
Soeroso, L., 1996, Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, AKL Depkes RI
Purwokerto, Purwokerto
Strohl, William A, Rouse,H, Fisher, BD, 2001, Lippincott’s Illustrated Reviews:
Microbiology, Lippincott William & Wilkins, USA
Suendra, N, 1991, B. P. Mata Ajaran Mikrobiologi Lingkungan, Depkes
RI, Jakarta
Tim Penyusun , 2006, Petunjuk Praktikum Kegiatan Magang Laboratorium Bagi
Tenaga Pengajar/Instruktur, Jurusan Kesehatan Lingkungan, Surabaya.
97
Lampiran 1
Tabel MPN per 100 ml sampel menggunakan 7 buah tabung dengan porsi 5 – 1 – 1
dengan batas kepercayaan 95%.
Jumlah Tabung Positif MPN / 100 Kepercayaan

ml
5 1 1 Lebih Lebih tinggi
rendah
Tabung Tabung Tabung
10 ml 1 ml 0,1 ml
0 0 0 <2 0 5,9
0 1 0 2 0,05 13
1 0 0 2,2 0,05 13
1 1 0 4,4 0,52 14
2 0 0 5 0,54 19
2 1 0 7,6 1,5 19
3 0 0 8,8 1,6 29
3 1 1 12 3,1 30
4 0 0 15 3,3 46
4 0 1 20 5,9 48
4 1 0 21 6 53
5 0 0 38 6,4 330
5 0 1 96 12 370
5 1 0 240 12 3700
5 1 1 >240 - -
98
Lampiran 2
Tabel MPN per 100 ml sampel menggunakan seri 3 tabung untuk setiap pengenceran
Positif MPN MPN / Positif MPN MPN /

10 ml 1 ml 0,1 ml 100 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml 100 ml
0 0 0 - 2 0 0 9,1
0 1 0 3 2 0 1 14
0 0 2 6 2 0 2 20
0 0 3 9 2 0 3 26
0 1 0 3 2 1 0 15
0 1 1 6,1 2 1 1 20
0 1 2 9,2 2 1 2 27
0 1 3 12 2 1 3 34
0 2 0 6,2 2 2 0 21
0 2 1 9,3 2 2 1 28
0 2 2 12 2 2 2 35
0 2 3 16 2 2 3 42
0 3 0 9,4 2 3 0 29
0 3 1 13 2 3 1 36
0 3 2 16 2 3 2 44
0 3 3 19 2 3 3 53
1 0 0 3,6 3 0 0 23
1 0 1 7,2 3 0 1 39
1 0 2 11 3 0 2 64
1 0 3 15 3 0 3 95
1 1 0 7,3 3 1 0 43
1 1 1 11 3 1 1 75
1 1 2 15 3 1 2 120
1 1 3 19 3 1 3 160
1 2 0 11 3 2 0 93
1 2 1 15 3 2 1 150
1 2 2 20 3 2 2 210
1 2 3 24 3 2 3 290
1 3 0 16 3 3 0 240
1 3 1 20 3 3 1 460
1 3 2 24 3 3 2 1100
1 3 3 29
99
Lampiran 3
Tabel MPN per 100 ml sampel menggunakan seri 5 tabung untuk setiap pengenceran

0 0 0 - 1 0 0 2,0
0 0 1 1,8 1 0 1 4,0
0 0 2 3,6 1 0 2 6,0
0 0 3 5,4 1 0 3 8,0
0 0 4 7,2 1 0 4 10
0 0 5 9,0 1 0 5 12
0 1 0 1,8 1 1 0 4,0
0 1 1 3,6 1 1 1 6,1
0 1 2 5,5 1 1 2 8,1
0 1 3 7,3 1 1 3 10
0 1 4 9,1 1 1 4 12
0 1 5 11 1 1 5 14
0 2 0 3,7 1 2 0 6,1
0 2 1 5,5 1 2 1 8,2
0 2 2 7,4 1 2 2 10
0 2 3 9,2 1 2 3 12
0 2 4 11 1 2 4 15
0 2 5 13 1 2 5 17
0 3 0 5,6 1 3 0 8,3
0 3 1 7,4 1 3 1 10
0 3 2 9,3 1 3 2 13
0 3 3 11 1 3 3 15
0 3 4 13 1 3 4 17
0 3 5 15 1 3 5 19
0 4 0 7,5 1 4 0 11
0 4 1 9,4 1 4 1 13
0 4 2 11 1 4 2 15
0 4 3 13 1 4 3 17
0 4 4 15 1 4 4 19
0 4 5 17 1 4 5 22
0 5 0 9,4 1 5 0 13
0 5 1 11 1 5 1 15
0 5 2 13 1 5 2 17
0 5 3 15 1 5 3 19
0 5 4 17 1 5 4 22
0 5 5 19 1 5 5 24
100
2 0 0 4,5 3 0 0 7,8
2 0 1 6,8 3 0 1 11
2 0 2 9,1 3 0 2 13
2 0 3 12 3 0 3 16
2 0 4 14 3 0 4 20
2 0 5 16 3 0 5 23
2 1 0 6,8 3 1 0 11
2 1 1 9,2 3 1 1 14
2 1 2 12 3 1 2 17
2 1 3 14 3 1 3 20
2 1 4 17 3 1 4 23
2 1 5 19 3 1 5 27
2 2 0 9,3 3 2 0 14
2 2 1 12 3 2 1 17
2 2 2 14 3 2 2 20
2 2 3 17 3 2 3 24
2 2 4 19 3 2 4 27
2 2 5 22 3 2 5 31
2 3 0 12 3 3 0 17
2 3 1 14 3 3 1 21
2 3 2 17 3 3 2 24
2 3 3 20 3 3 3 28
2 3 4 22 3 3 4 31
2 3 5 25 3 3 5 35
2 4 0 15 3 4 0 21
2 4 1 17 3 4 1 24
2 4 2 20 3 4 2 28
2 4 3 23 3 4 3 32
2 4 4 25 3 4 4 36
2 4 5 28 3 4 5 40
2 5 0 17 3 5 0 25
2 5 1 20 3 5 1 29
2 5 2 23 3 5 2 32
2 5 3 26 3 5 3 37
2 5 4 29 3 5 4 41
2 5 5 32 3 5 5 45
101
4 0 0 13 5 0 0 23
4 0 1 17 5 0 1 31
4 0 2 21 5 0 2 43
4 0 3 25 5 0 3 58
4 0 4 30 5 0 4 76
4 0 5 36 5 0 5 95
4 1 0 17 5 1 0 33
4 1 1 21 5 1 1 46
4 1 2 26 5 1 2 64
4 1 3 31 5 1 3 84
4 1 4 36 5 1 4 110
4 1 5 42 5 1 5 130
4 2 0 22 5 2 0 49
4 2 1 26 5 2 1 70
4 2 2 32 5 2 2 95
4 2 3 38 5 2 3 120
4 2 4 44 5 2 4 150
4 2 5 50 5 2 5 180
4 3 0 27 5 3 0 79
4 3 1 33 5 3 1 110
4 3 2 39 5 3 2 140
4 3 3 45 5 3 3 180
4 3 4 52 5 3 4 210
4 3 5 59 5 3 5 250
4 4 0 34 5 4 0 130
4 4 1 40 5 4 1 170
4 4 2 47 5 4 2 220
4 4 3 54 5 4 3 280
4 4 4 62 5 4 4 350
4 4 5 69 5 4 5 430
4 5 0 41 5 5 0 240
4 5 1 48 5 5 1 350
4 5 2 56 5 5 2 540
4 5 3 64 5 5 3 920
4 5 4 72 5 5 4 1600
4 5 5 81
102

Panduan Praktik Mikrobiologi Lingkungan

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Panduan Praktik Mikrobiologi Lingkungan

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Panduan Praktek

PRODI SANITASI POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES KUPANG

Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Kupang adalah lembaga

Kupang, Agustus 2019

Dr. R. H. Kristina, SKM., M.Kes

Dalam menghadapi tuntutan kebutuhan masyarakat, kurikulum di Prodi Sanitasi

Kupang, Agustus 2019

Karolus Ngambut, SKM., M.Kes

HALAMAN JUDUL ………………………………………………………………… ii

PENGENALAN ALAT-ALAT LABORATORIUM MIKROBIOLOGI ……………. 1

PEMERIKSAAN MAKANAN/MINUMAN MENGGUNAKAN METODE ANGKA

PEMERIKSAAN JAMUR PADA TANAH …………………………………………. 48

PEMERIKSAAN BAKTERI VIBRIO CHOLERA PADA SAMPEL USAP

PEMERIKSAAN SAMPEL UDARA ……………………………………………….. 87

B. ALAT DAN BAHAN

Alat ini berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang tumbuh

3. Timbangan digital / neraca digital

Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada

Oven berfungsi untuk sterilisasi kering. alat-alat yang disterilkan

7. Hot plate stirrer dan Stirre bar

Termometer adalah batang kaca yang panjangnya 300 mm,

9. Cawan Petri (Petri Dish)

Cawan petri berfungsi untuk membiakkan (kultivasi) mikroorganisme.

Berguna untuk mengukur volume suatu cairan, seperti labu erlenmeyer,

11. Beaker Glass

Beaker glass merupakan alat yang memiliki banyak fungsi. Di

12. Labu Erlenmeyer (Erlenmeyer Flask)

Berfungsi untuk menampung larutan, bahan atau cairan yang. Labu

13. Tabung reaksi (Reaction Tube / Test Tube)

Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan untuk uji-uji

14. Ose / Jarum Inokulum (inoculating loop)

Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan untuk

15. Lampu Bunsen (Pembakar Spiritus)

Salah satu alat yang berfungsi untuk menciptakan kondisi yang

Mortar dan penumbuk (pastle) digunakan untuk menumbuk atau

Cataan Dosen Hasil Penilaian

B. ALAT DAN BAHAN

b. Dengan memakai udara panas

2. Sterilisasi panas lembab

Cataan Dosen Hasil Penilaian

B. ALAT DAN BAHAN

b. Masukkan dalam beker glass

2. Cara pembuatan media LB3 (Triple Strength Lactose Broth)

Misalnya kita ingin membuat 25 ml larutan LB3, maka perhitungannya

b. Masukkan dalam becker glass

3. Cara pembuatan media BGLB

Misalnya kita ingin membuat 70 ml larutan BGLB , maka

4. Cara pembuatan media EMBA (Eosin Methylin Blue Agar)

Misalnya kita ingin membuat 140 ml larutan Media EMBA, maka

b. Masukkan dalam erlenmeyer.

Cataan Dosen Hasil Penilaian

1. Nama dan alamat pengirim contoh air.

1. PENGAMBILAN SAMPEL/CONTOH AIR

3) Pengambilan contoh air dari pipa (kran) dan sumur pompa.

3. PEMERIKSAAN BAKTERI COLIFORM PADA SAMPEL AIR BERSIH

a. UJI DUGA (PRESUMTIF TEST)

Inkubasikan dalam Inkunbator selama 2 x 24 jam suhu 37 0 C

b. UJI PENETAPAN/PENEGASAN (CONFIRMED TEST)

SKEMA UJI PENEGASAN

1-2 mata ose

Uji Duga Positif BGLBB @ 10 ml

Inkubasikan dalam Inkunbator selama 2 x 24 jam suhu 37 0 C

SKEMA UJI LENGKAP