PERBANDINGAN DAYA HAMBAT EKSTRAK AIR DENGAN

EKSTRAK ALKOHOL BUBUK KOPI ROBUSTA (COFFEA

CANEPHORA) PADA KULTUR BAKTERI
PROPIONIBACTERIUM ACNES

USULAN PENELITIAN

Diajukan untuk memenuhi tugas akhir

Fakultas Kedokteran
Universitas Islam Bandung

SASSTY JULYA HIDAYAT

10100119203

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG
2022
PERBANDINGAN DAYA HAMBAT EKSTRAK AIR DENGAN
EKSTRAK ALKOHOL BUBUK KOPI ROBUSTA (COFFEA
CANEPHORA) PADA KULTUR BAKTERI
PROPIONIBACTERIUM ACNES

USULAN PENELITIAN

SASSTY JULYA HIDAYAT

10100119207

Dengan ini menyatakan bahwa usulan penelitian yang telah dibuat

oleh nama yang disebutkan di atas telah diperiksa dan
direvisi secara lengkap dan memuaskan sehingga dapat
diajukan dalam sidang usulan penelitian

Bandung,
Pembimbing I

Prof. Dr. Hendro Sudjono Yuwono, dr., Sp.BV(K)., PhD

NIP. 194701261974031001

Pembimbing II

Ismawati, dr., M.kes

NIP. D.06.0431
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI...........................................................................................................ii
DAFTAR TABEL..................................................................................................iv
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................v
DAFTAR SINGKATAN.......................................................................................vi
DAFTAR LAMPIRAN........................................................................................vii
BAB I PENDAHULUAN.......................................................................................1
1.1 Latar belakang...........................................................................................1
1.2 Rumusan masalah......................................................................................3
1.3 Tujuan Penelitian.......................................................................................3
1. Tujuan Umum........................................................................................3
2. Tujuan Khusus.......................................................................................4
1.4 Manfaat Penelitian.....................................................................................4
1.4.1 Manfaat Akademis.............................................................................4
1.4.2 Manfaat Praktis..................................................................................4
BAB II KAJIAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN...............................5
2.1 Kajian Pustaka...................................................................................................5
2.1.1 Propionibacterium acnes.............................................................................5
2.1.1.1 Klasifikasi............................................................................................5
2.1.1.2 Morfologi.............................................................................................6
2.1.1.3 Struktur................................................................................................6
2.1.1.4 Sifat Pertumbuhan................................................................................7
2.1.1.5 Patogenitas...........................................................................................7
2.1.1.6 Patogenesis...........................................................................................8
2.1.1.7 Pengobatan...........................................................................................8
2.1.2 Klindamisin.................................................................................................8
2.1.2.1 Resistensi.............................................................................................9
2.1.3 Kopi.............................................................................................................9
2.1.3.1 Kopi di Indonesia.................................................................................9

ii
 2.1.3.2 Kopi Robusta.....................................................................................10
2.1.3.4 Klasifikasi Kopi Robusta...................................................................10
2.1.3.5 Kopi sebagai antibakteri....................................................................11
2.1.3 Etanol........................................................................................................12
2.2 Kerangka Pemikiran.....................................................................................12
BAB III OBJEK, BAHAN, DAN METODE PENELITIAN............................15
3.1 Objek, Bahan, dan Alat Penelitian...............................................................15
3.1.1 Objek Penelitian....................................................................................15
3.1.2 Bahan penelitian....................................................................................15
3.1.3 Alat Penelitian.......................................................................................15
3.1.4 Jumlah Sampel......................................................................................17
3.2 Metode Penelitian........................................................................................18
3.2.1 Rancangan Penelitian............................................................................18
3.2.2 Waktu dan Tempat Penelitian...............................................................18
3.2.2.1 Waktu Penelitian................................................................................18
3.2.2.2 Tempat Penelitian..............................................................................19
3.2.3 Variabel Penelitian................................................................................20
3.2.4 Definisi Operasional Variabel Penelitian..............................................20
3.2.5 Prosedur Penelitian...............................................................................21
3.2.6 Analisis Data.........................................................................................25
3.2.7 Aspek Etik Penelitian............................................................................25
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................26

iii
 DAFTAR TABEL
Tabel 2.1Peranan Produk Eksoseluler dari Propionibacterium acnes..............7
Tabel 3.2 Rincian Jadwal Penelitian…………………………………………………………………18
Tabel 3.3 Definisi Operasional............................................................................20

iv
 DAFTAR GAMBAR

Gambar. 2.1 Propionibacterium acnes dilihat dari mikroskop elektron.........5

Gambar 2.2 Kerangka Pemikiran......................................................................14

v
 DAFTAR SINGKATAN

DNA : Deoxyribose Nucleic Acid

IL : Interleukin

MHA : Medium Hinton Agar

NA : Nutrient Agar

NOS : Nitrit oxide synthase

TNF : Tumor Necrosis Factor

vi
DAFTAR LAMPIRAN

vii
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Akne vulgaris adalah penyakit kulit pada kelenjar pilosebasea, ditandai

dengan adaya komedo, papula, pustula maupun nodul yang umum terjadi

pada masa remaja usia 12 – 25 tahun hingga dewasa usia 25-30 tahun. Akne

vulgaris adalah penyakit terbanyak remaja usia 15 – 18 tahun. 1 Di Indonesia,

akne vulgaris merupakan suatu penyakit kulit yang umum terjadi sekitar 85-

100% selama hidup seseorang.2

Akne Vulgaris timbul karena banyak faktor pencetus diantaranya

produksi kelenjar sebaseus yang meningkat, hiperkornifikasi duktus

sebaseus, kolonisasi Propionibacterium acnes, hiperproliferasi sel keratosit,

hormon androgen yang memicu peningkatan produksi sebum, genetik,

rambut berminyak, stres, kosmetik dan obat obat-obatan.2 Penyakit ini bukan

merupakan penyakit berbahaya namun mempunyai dampak yang besar bagi

para remaja, baik secara fisik maupun psikologi seperti tidak percaya diri,

depresi, dan kecemasan, sehingga menjadi masalah besar dalam kehidupan

sosial.3

Propionibacterium acnes merupakan bakteri anaerob yang ditemukan

pada kulit, di mana ia mendominasi konstituen lain dari flora normal di

folikel pilosebasea.3 Bakteri ini termasuk bakteri Gram-positif.4 Bakteri ini

1
salah satu faktor utama yang menyebabkan reaksi inflamasi pada penyakit

Akne Vulgaris.

Pengobatan penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri adalah dengan

menggunakan antibiotik. Pada umumnya antibiotik memiliki peran penting

dalam pengobatan infeksi termasuk pada akne karena mampu menekan

aktivitas bakteri, namun efek antibiotik akan menyebabkan resisten terhadap

bakteri apabila penggunaan dalam waktu panjang.5 Salah satu pengobatan

untuk infeksi adalah memanfaatkan zat aktif pembunuh bakteri yang

terkandung dalam tanaman obat. Widjayanti (1999) dalam Nur Iman (2009)

menjelaskan salah satu tanaman yang secara empiris digunakan sebagi obat

antibakteri adalah kopi.6

Kopi robusta (Coffea canephora) banyak ditanam di Afrika, India dan

Indonesia. Komoditi kopi robusta di Indonesia sendiri sangat tinggi hingga

menguasai pasar nasional. Sebagai minuman yang popular diseluruh dunia,

selain rasa kopi yang enak digemari, konsumsi kopi juga dipercaya memiliki

banyak manfaat dalam bidang kesehatan, seperti pada penelitian oleh Okabe

ekstrak kopi mampu menjadi zat antibakteri.7 Dalam kandungan kopi telah

diketahui mengandung senyawa non volatil seperti kafein, trigliserida dan

asam klorogenat yang memiliki sifat antibakteri.8 Bubuk kopi juga

mengandung senyawa polifenol 0,2% yang juga berperan sebagai

antioksidan untuk menjaga kulit wajah.9

2
 Ilham melakukan penelitian in vitro daya hambat ekstrak air kopi robusta

terhadap bakteri P.acnes menunjukan bahwa pada kosentrasi 100% dan 75%

memiliki zona hambat, walaupun lebih rendah jika dibandingan dengan

kontrol positif menggunakan antibiotik (eritromisin), namun demikian

ekstrak air kopi robsuta tetap memiliki aktivitas antibakteri.10

Kandungan alkohol sendiri memiliki efektivitas paling tinggi terhadap

virus, bakteri, dan jamur juga tidak menimbulkan resistensi pada bakteri. 11

Peneliti Marsya dan Yuwono mengujikan ekstrak etanol kopi robusta dan

menunjukan adanya aktivitas antibakteri pada konsentrasi 10%, 50% dan

100%.12

Berdasarkan permasalahan diatas, penulis bermaksud melakukan

penelitian perbandingan daya hambat ekstrak air bubuk kopi robusta dengan

ekstrak alkohol bubuk kopi robusta pada media agar kultur bakteri P. acnes.

1.2 Rumusan masalah

1. Bagaimana perbandingan daya hambat ekstrak air dengan ekstrak

alkohol kopi robusta terhadap bakteri Propionibacterium acnes?

1.3 Tujuan Penlitian

1. Tujuan Umum

3
 a. Untuk mengukur besar zona daya hambat ekstrak air dibandingkan

ekstrak alkohol bubuk kopi robusta terhadap Propionibacterium

acnes.

2. Tujuan Khusus

Untuk mengetahui kemampuan antibakteri ekstrak air bubuk kopi robusta

dibandingkan dengan ekstrak alkohol pada kultur bakteri

Propionibacterium acnes menggunakan metode disc diffusion (difusi

cakram).

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademis

Penelitian ini diharapkan dapat menjadi landasan ilmiah penelitian daya

hambat ekstrak air dan alkohol bubuk kopi robusta pada kultur

Propionibacterium acnes.

1.4.2 Manfaat Praktis

Penelitian ini diharapkan dapat memberi informasi bahwa ekstrak

alkohol bubuk kopi ribusta memiliki daya hambat yang lebih kuat , juga

dapat dijadikan pilihan alternatif, selain antibiotik, untuk pengobatan

Acne vulgaris

4
 BAB II
KAJIAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN, DAN
HIPOTESIS

2.1 Kajian Pustaka

2.1.1 Propionibacterium acnes

Propionibacterium acnes merupakan bakteri flora normal pada

kulit yang sering ditemukan pada unit polisebasea.3 Bakteri ini bersifat

apatogen pada kondisi normal, tetapi apabila kondisi kulit mengalami

perubahan, maka bakteri tersebut ikut berubah dari apatogen menjadi

patogen atau yang disebut invasif (menyerang).13

Gambar. 2.1 Propionibacterium acnes dilihat dengan Mikroskop Skrening

Elektron (MES)
Dikutip dari : Zahrah14

2.1.1.1 Klasifikasi

Propionibacterium acnes memiliki klasifikasi sebagi berikut15 :

Kingdom : Bacteria
Phylum : Actinobacteria

5
 Class : Actinobacteria
Order : Actinomycetales
Family : Propionibacteriaceae
Genus : Propionibacterium
Spesies : Propionibacterium acnes

2.1.1.2 Morfologi

Propionibacterium acnes adalah kelompok bakteri yang memiliki bentuk

sel batang, ukurannya bervariasi 1-1,5 µm, nonmotil, dan tidak membentuk

spora yang bersifat aerob.16

2.1.1.3 Struktur

Pada dinding luar sel ini terdapat kapsul yang membentuk lapisan tipis.

Susunan kapsul berasal dari polisakarida dan polipeptida, bersifat antigenik.

Fungsi dari kapsul pada bakteri untuk melindungi pada saat terjadi proses

fagositosis. Terdapat dinding sel yang berfungsi untuk mempertahankan bentuk

bakteri tersusun atas polisakarida yang disebut asam teikoat atau larut dalam

air.17

Membran sitoplasma sebagian besar terdiri dari fosfolipid. Kegunaannya

untuk mengatur masuk dan keluarnya bahan bahan tertentu. Bahan yang dapat

melewati membran sitoplasma seperti air, asam amino, beberapa gula sederhana,

tetapi protein tidak bisa melewati karena dari ukurannya yang relatif besar.17

6
 Inti sel bakteri memiliki kromosom yang berfungsi untuk mengatur

semua kegiatan pada bakteri juga menentukan sifat resisten pada suatu bakteri.

Selain itu sel bakteri ini memiliki materi genetik ekstrak kromosom yaitu small

cyclic yang disebut plasmid.17

2.1.1.4 Sifat Pertumbuhan

Propionibacterium acnes memiliki karakteristik koloni terutama pada

kelenjar sebasea dan folikel rambut di kulit menusia. Suhu optimal untuk

pertumbuhan antara 300C dan 370C. Apabila produksi sebum meningkat hal

tersebut mempengaruhi pertumbuhan bakteri.18

2.1.1.5 Patogenitas

P. acnes dapat melakukan invasi ke dalam jaringan, dengan demikian

akan menghasilkan beberapa produk enzim yang dapat mengakibatkan

terjadinya proses inflamasi.

Tabel 2.1Peranan Produk Eksoseluler dari Propionobacterium acnes19

Enzim Substrat Peranan

Lipase Trigliserid Nutrisi, memproduksi asam lemak
bebas sebagai iritan
Phospholipase C Phospholipid Mengganggu fungsi membrane
Nutrisi, aktivasi komplemen,
menghasilkan kemotaksin,
proteolisis dalam kolon, invasi
jaringan
Hialuronidase, Mukopolisakarida Invasi jaringan
neuroaminidase
Acid Phosphatase Fosfat gula Nutrisi

7
 bacteriocins
Histamin Triptamin Arterial muscle Antagonis dengan bakteri lain dan
mediator inflamasi akut

2.1.1.6 Patogenesis

Proses terbentuknya akne vulgaris ada beberapa faktor yaitu produksi

sebum berlebihan, inflamasi, dan adanya aktivitas bakteri. Peran bakteri P.acne

pada pembentukan akne adalah memecah trigliserida, yang merupakan salah satu

komponen dari sebum, menjadi asam lemak bebas sehingga mengakibatkan

terjadinya kolonisasi P.acne dengan adanya aktivasi berkepanjanganm oleh

peningkatan produksi sitokin pro inflamasi seperti IL-6, IL-8, IL-12, dan TNF-

alfa yang berperan dalam lesi akne.20

2.1.1.7 Pengobatan

Pengobatan akne vulgaris terutama bertujuan untuk menekan

pertumbuhan bakteri P. acnes. Obat untuk pengobatan jerawat adalah antibiotik.

Antibiotik yang digunakan adalah golongan makrolida yaitu klindamisin. 21 22

Selain menekan pertumbuhan bakteri P. acnes, antibiotik juga dapat memberikan

efek antiinflamasi. Pemberian antibiotik dapat dikombinasikan secara sistemik

dan topikal tergantung dari derajat keparahan dari akne vulgaris.23

2.1.2 Klindamisin

Klindamisin merupakan obat golongan makrolida dapat digunakan secara

topikal dan sistemik, sering digunakan untuk mengobati akne yang bertujuan

8
untuk mengurangi konsentrasi P. acnes.23 Secara umum, klindamisin memiliki

mekanisme kerja menurunkan presentase asam lemak bebas, memiliki efek

antiinflamasi dengan cara menghambat i NOS enzim dan berbagai sitokin

proinflamasi, serta menurunkan jumlah P. acnes dengan menghambat

pertumbuhan, sintesis protein, mengikat 50S subunit ribosom bakteri, produksi

lipase, produksi folikular asam lemak dan molekul kemotaksis pada P. acnes.23

Klindamisin sangat efektif terhadap bakteri anaerob gram positif seperti

Propionibacterium.21

2.1.2.1 Resistensi

Resistensi klindamisin pada penderita akne sering terjadi karena adanya

perubahan “binding site” bakteri dan adanya mutasi pada kromosom, sehingga

menyebabkan tidak terjadinya ikatan pada subunit 50S ribosom. Suatu penelitian

yang dilakukan dari tahun 1991 oleh Coates et al, menemukan terjadinya

resistensi pada pemberian eritromisin dan klindamisin. Walau demikian, strain

bakteri yang resisten terhadap klindamisin masih lebih sedikit dari pada strain

bakteri yang resisten terhadap eritromisin. 22 Sebagai alternatif pengobatan akne

dapat menggunakan Kopi sebagai antibakteri berdasarkan penelitian Widjayanti

(1999) dalam Nur Iman (2009).6

2.1.3 Kopi

9
2.1.3.1 Kopi di Indonesia

Indonesia merukapan negara dengan produksi kopi terbesar keempat

setelah Brazil, Vietnam dan Kolombia. Dengan jumlah ekspor sebesar 467,800

ton pada tahun 2017 dengan nilai mencapai US $ 1,187,157,000 menjadikan

kopi sebagai devisia negara terbesar yang berasal dari hasil pertanian.24

Terdapat dua jenis kopi utama yang banyak ditemukan dan memiliki nilai

ekonomi yang tinggi di Indonesia, yaitu kopi robusta dan kopi arabika.

Mayoritas perkebunan kopi di Indonesia didominasi oleh kopi robusta, sebanyak

81.96%. Selain itu kopi robusta juga lebih tahan terhadap hama dan penyakit.

Daerah produksi kopi robusta tersebar di berbagai daerah yang ada di Indonesia

termasuk Sumatera Selatan, Daerah Istimewa Yogyakarta, dan Jawa Tengah.24

2.1.3.2 Kopi Robusta

Coffea canephora Pierre ex Froehner atau dikenal dengan kopi robusta

merupakan kopi yang berasal dari Grear Lakes region di Afrika Timur.25 Kopi

robusta memiliki rasa yang lebih pahit, sedikit asam, dan mengandung kafein

yang jauh lebih tinggi dibanding arabika, yaitu sebanyak 0,18% kafein pada kopi

arabika dan 0,21% kafein pada kopi robusta.26

2.1.3.3 Klasifikasi Kopi Robusta

Intergrated Taxonomic Information System (ITIS) menyatakan klasifikasi

kopi robusta sebagi berikut15 :

Kingdom : Plantae

10
 Sub Kingdom : Viridiplantae

Infakingdom : Streptophyta

Super Divisi : Embryophyta

Divisi : Tracheophyta

Kelas : Magnoliopsida

Super order : Asteranae

Order : Gentianales

Famili : Rubiaceae

Genus : Coffea L.

Spesies : Coffea canephora Pierre ex Froehner

2.1.3.4 Kopi sebagai antibakteri

Kopi banyak mengandung kafein, asam klorogenik, dan trigonelin yang

dapat bersifat sebagai antimikroba. Telah terbukti dilakukan penelitian bahwa

kandungan trigonelin mampu berkorelasi dengan penurunan pembentukan

biofilm terhadap suatu bakteri. Kafein dan klorogenik juga mampu

memperhambat daya pertumbuhan bakteri yang sangat kuat, yaitu merusaknya

dinding sel dan struktur bakteri karena mengalami inaktifasi dengan cara

bereaksi dengan asam amino pada struktur bakteri.26 27

Kopi yang memilki daya hambat dan bersifat bakteriostatik terhadap

bakteri gram positif ataupun negatif yaitu kopi yang mengandung tinggi kafein. 28

11
Telah teruji dari hasil keduanya menunjukan bahwa ekstrak kopi aktif terhadap

semua gram staining, namun lebih aktif terhadap bakteri gram positif. Kopi yang

mengandung kafein tinggi salah satu contohnya adalah kopi robusta.6 28

2.1.4 Etanol

Etanol merupakan alkohol primer yaitu etana yang salah satu

hidrogennya disubstitusi oleh gugus hidroksi. Memiliki peran sebagai obat

antiseptik, pelarut polar, neurotoksin, agen teratogenik. Etanol adalah cairan

bening tidak berwarna dengan bau khas anggur dan memiliki rasa tajam. 29

Termasuk ke dalam rantai tunggal, dengan rumus kimia C2H5OH mempunyai

berat molekul 46. Titik didih pada suhu 780C. Selain itu, dalam sebuah penelitian

menunjukan bahwa ekstrak etanol mampu menghambat pertumbuhan bakteri

terhadap bakteri gram positif ataupun negatif.29

2.2 Kerangka Pemikiran

Propionibacterium acnes merupakan bakteri anaerob yang ditemukan

pada kulit manusia tepatnya di unit polisebasea. bersifat Gram-positif, berukuran

antara 1-1,5 µm, non motil, tidak berspora. Memiliki produk eksoseluler yaitu

lipase, phospolipase C, proteinase, hyaluronidase, neuroaminidase, acid

phosphatase, bacteriocins, histamin, triptamin yang berperan dalam terjadinya

proses inflamasi dan kolonisasi bakteri sehingga menyebabkan akne vulgaris. 16 19

20

12
 Pengobatan akne vulgaris dapat menggunakan antibiotik, baik secara

topikal maupun sistemik. Antibiotik yang digunakan adalah klindamisin, dimana

memiliki mekanisme kerja sebagai antiinflamasi dan dapat menekan

pertumbuhan P.acne dengan cara menghambat sintesisn protein, produksi lipase,

produksi folikular asam lemak dan molekul kemotaksis pada P.acne. 23

Penggunaan antibiotik dalam jangka panjang dapat menyebabkan

resistensi bakteri.22 Sehingga memerlukan alternatif lain untuk menggantikan

antibiotik. Salah satunya dengan menggunakan kopi.6 Penggunaan kopi sebagai

antibiotik didapatkan melalui ektrak air maupun ekstrak alkohol. Dimana

alkohol memiliki sifat sebagai obat antiseptik dan diteliti dapat menghambat

pertumbuhan bakteri baik gram positif ataupun negatif.11 Kafein yang terdapat

didalam kopi dapat bersifat bakteriostatik yang mampu memperhambat daya

pertumbuhan bakteri dari adanya senyawa alkaloid yang mengganggu

metabolisme bakteri sehingga mengalami inaktivasi dan lisis dengan cara

bereaksi dengan asam amino pada struktur bakteri lalu menyebabkan kerusakan

pada dinding sel dan struktur DNA bakteri, sehingga akan mengganggu fungsi

dari inti sel. Sedangkan untuk klorogenik sendiri memiliki hal yang serupa yaitu

dengan cara masuk ke dalam sel bakteri dan merusaknya.26 27 Senyawa lain yaitu

trigonelin sebagai penambah aroma yang ada di kopi memiliki aksi dengan sel

bakteri yang melibatkan ikatan hidrogen tujuannya untuk merusak membran

sitoplasma sehingga inti sel bakteri dapat bocor dan rusak27

13
Gambar 2.2 Kerangka Pemikiran

14
 BAB III

OBJEK, BAHAN, DAN METODE PENELITIAN

3.1 Objek, Bahan, dan Alat Penelitian

3.1.1 Objek Penelitian

Objek penelitian ini menggunakan isolat Propionibacterium acnes yang

didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi dan Parasitologi FK Unpad.

3.1.2 Bahan penelitian

Bahan yang digunakan untuk penelitian ini adalah:

1. Kopi robusta (Coffea canephora)

2. Isolat bakteri Propionibacterium acnes

3. Etanol

4. Cakram antibiotik Klindamisin

5. Aquadest

6. Mueller-Hinton agar

7. Nutrient agar

8. Larutan NaCL 0,9%

9. Standar McFarland 0,5

3.1.3 Alat Penelitian

Alat-alat penelitian yang dipakai pada penelitian ini adalah:

1. Inkubator

15
2. Cawan Petri 24 pcs

3. Penggaris

4. Bunsen

5. Gelas ukur

6. Cotton bud / sterile swab

7. Jarum Ose / Inoculation

8. Autoklaf

9. Kertas cakram

10. Tabung reaksi

11. Pipet 100 ml

12. Forceps

13. Ayakan ukuran 65 mesh

14. Blender

15. Timbangan dan neraca

16. Label nama / Marker

17. Alumunioum Foil

18. Erlemayer

19. Kertas saring whatman no 1

20. Freezedrying

21. Jas lab

22. Sarung tangan

23. Masker

16
3.1.4 Jumlah Sampel
Perlakuan yang diberikan pada penelitian ini terdiri dari 2 perlakuan dalam satu

konsentrasi yaitu 100%, 1 kontrol positif, dan 1 kontrol negatif sehingga jumlah

kelompok yang ada adalah 4. Sampel minimal yang harus terpenuhi dihitung

dengan Rumus Federer, yaitu

( n−1 )( t−1 ) ≥15

( n−1 )( 4−1 ) ≥ 15

( n−1 )( 3 ) ≥ 15

( 3 n−3 ) ≥ 15

( 3 n ) ≥15+ 3

3 n ≥18

n ≥ 6 pengulangan

Keterangan:

n = banyak pengulangan

t = kelompok

Berdasarkan perhitungan di atas, maka dalam penelitian ini dilakukan 6 kali

pengulangan dalam 4 sampel penelitian. Maka total sampel adalah 24 sampel

penelitian.

17
 3.2 Metode Penelitian

3.2.1 Rancangan Penelitian

Peneliti ini menggunakan studi eksperimental laboratorium secara in vitro.

Isolat bakteri P.acnes disesuaikan dengan standar McFarland 0,5 yang diambil

dari laboratorium Mikrobiologi Farmasi Unisba. Dilakukan perbandingan daya

hambat ekstrak air bubuk kopi robusta dengan ekstrak alkohol bubuk kopi

robusta dibuat dalam 1 konsentrasi yaitu 100% dan

antibiotik klindamisin terhadap bakteri P. acnes menggunakan metode

diffusion.

3.2.2 Waktu dan Tempat Penelitian

3.2.2.1 Waktu Penelitian

Penelitian dimulai bulan November 2021 sampai oktober 2022.

Tabel 3.2 Rincian Jadwal Penelitian

2021 2022
Kegiatan
Fe Ju
Nov Des Jan Mar Apr Mei Jun Agst Sep Okt Nov Des
b l
Penyusuna
n draft UP
&
bimbingan
Pendaftaran
sidang UP
Sidang UP
Revisi draft
UP &
bimbingan
Pembuatan

18
ethical
clearance
Identifikasi
biji kopi
robusta
Pembuatan
ekstrak air
& alkohol
kopi
robusta
Penelitian
daya
hambat di
Lab
Pengolahan
& analisis
data
Penyusuna
n draft
skripsi &
bimbingan
Pendaftaran
sidang
skripsi
Sidang
skripsi
Revisi draft
skripsi &
bimbingan
Penyusuna
n artikel &
bimbingan
Review
artikel oleh
reviewer

3.2.2.2 Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Rumah Sakit Pendidikan

Unpad. Jl. Eijkman 38, Bandung

19
3.2.3 Variabel Penelitian

A. Variabel bebas

1. Ekstrak kopi robusta

B. Variabel terikat

1. Daya hambat terhadap Propionibacterium acnes

3.2.4 Definisi Operasional Variabel Penelitian

Tabel 3.3 Definisi Operasional

Variabel Definisi Alat ukur Hasil ukur Skala ukur

Operasional

Ekstrak air Sari dari kopi Gelas ukur, 100% Numerik

kopi robusta robusta yang timbangan
telah direbus
dalam
aquadest
selama 15
menit dengan
wadah
tertutup, yang
kemudian
difiltrasi
menggunakan
kapas dan
kertas saring
whatman
No.1, dan
dibekukan
selama 48 jam.

Ekstrak Sari dari kopi Gelas ukur, 100% Numerik

alkohol kopi robusta yang timbangan
robusta telah direbus
dalam Etanol
70% selama
15 menit

20
 dengan wadah
tertutup, yang
kemudian
difiltrasi
menggunakan
kapas dan
kertas saring
whatman
No.1, dan
dibekukan
selama 48 jam.

Daya Zona hambat Penggaris Milimeter Numerik

hambat di sekitar disk (mm)
terhadap menunjukan
P.acnes sensitifitas zat
aktif
antibakteri dari
ekstrak kopi
robusta

3.2.5 Prosedur Penelitian

A. Persiapan dan Determinasi Biji Kopi Robusta

Biji kopi yang digunakan jenis robusta. Kemudian dilakukan determinasi

biji kopi robusta di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Departemen Biologi,

FMIPA UNPAD untuk memastikan kebenaran dari biji kopi robusta.

B. Sterilisasi Alat

Semua alat yang terbuat dari kaca misalnya tabung reaksi dan lain-lain di

sterilkan dengan autoklaf selamat 20 menit suhu 1210. Sedangkan semua alat

yang terbuat dari plastik dicuci bersih dan dikeringkan kemudian dibilas

alkohol 70%.

21
 C. Pemberian Kertas Label pada Bagian Cawan Petri

Untuk cawan petri yang digunakan berjumlah 4 dalam satu perlakuan.

Cawan petri yang pertama digunakan untuk perlakuan ekstrak air kopi robusta

dan dituliskan dengan 100%. Cawan kedua untuk perlakuan ekstrak alkohol

kopi robusta dituliskan dengan 100%. Cawan ketiga kontrol positif

(klindamisin) dan cawan ke empat kontrol negatif (aquadest). Jadi jumlah

cawan petri adalah 24 karena 6 kali pengulangan.

D. Pembuatan Ekstrak Air Bubuk Kopi Robusta

Setelah biji kopi robusta dilakukan uji determinasi, biji kopi robusta

dikumpulkan untuk dibersihkan dari kotoran, selanjutnya dicuci di air mengalir

sampai bersih, lalu keringkan. Kemudian dimasukan ke tempat blender untuk

dibubukan, setelah bubuk disaring kembali menggunakan ayakan mesh 65

hingga menghasilkan serbuk yang halus dan homogen. Hasilnya dimasukkan

ke dalam wadah tertutup.

Kemudian ditimbang menggunakan neraca sebanyak 25gram, lalu rebus

dalam aquadest 250ml (100mg/ml) selama 15 menit dalam wadah yang ditutup

dengan alumunium foil. Ekstrak disaring dengan kapas diikuti dengan kertas

saring whatman no 1. Filtrat dibekukan selama 48 jam dan dilakukan

Freezdrying, lalu sampel yang direbus dan dibekukan ini disimpan dalam

lemari es sampai digunakan pengujian. Hasil tersebut didapatkan konsetrasi

100%.

22
 E. Pembuatan Ekstrak Alkohol (etanol) Kopi Robusta

Proses pembuatan ekstrak etanol dari kopi robusta dikerjakan dengan

metode maserasi. Bubuk kopi robusta yang sudah disaring menggunakan

ayakan mesh 65 kemudian ditimbang kembali sebanyak 25gram menggunakan

timbangan neraca, lalu disatukan dengan larutan etanol 70%, selanjutnya

difiksasi dengan tutup dari alumunium foil dan disimpan selama 5 hari. Setelah

itu dilanjutkan dengan proses penyaringan menggunakan kertas saring

secukupnya dan akan didapatkan hasil, filtrat 1 dan ampas 1.

Ampas ini kemudian dimaserasi dengan 70% etanol kemudian ditutup

kembali menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan ampas 2. Filtrat

1 dan 2 digabungkan, lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator

sehingga diperoleh ekstrak biji kopi robusta.

F. Persiapan Bakteri

1. Peremajaan Bakteri

Bakteri Propionobacterium acnes yang berasal dari isolat diambil

menggunakan cotton bud steril lalu diinkulasikan dengan cara digores pada

medium Nutrient Agar (NA), kemudian diinkubasi pada suhu 370C selama 24

jam.

2. Pembuatan Suspensi Bakteri

Setelah proses peremajaan bakteri Propionibacterium acnes dibuat

suspensi dengan mengencerkan bakteri menggunakan NaCI 0,9% hingga

23
mencapai kekeruhan standar 0,5 McFarland, yaitu setara dengan 1,5 x 108

CFU/ml.

G. Pengujian Daya Hambat Ekstrak Air Kopi Robusta

Langkah-langkah dalam pengujian daya hambat ini adalah

1. Menyiapkan Medium Hinton Agar (MHA) kemudian disterilkan dengan

suhu 400C, lalu dimasukan ke dalam cawan petri yang berjumlah 24, tunggu

hingga memadat menjadi lapisan dasar.

2. Masukan kapas lidi steril ke suspensi bakteri yang telah dibuat

sebelumnya.

3. Inokulasi permukaan MHA dengan menggoreskan kapas lidi steril di atas

seluruh permukaan agar. Ulangi prosedur dua kali dengan memutar cawan petri

600C, setiap pengulangan untuk memastikan penyebaran inokulum yang merata

dan biarkan permukaan mengering sekitar 3-5 menit.

4. menyiapkan 24 cakram dan masukan ekstrak air kopi ke 1 kosentrasi

100%, ekstrak alkohol kopi kosentrasi 100%, lalu cakram antibiotik klindamisin

15 µ sebagai kontrol positif dan cakram yang telah diberikan aquadest sebagai

kontrol negatif. Lakukan pengulangan sebanyak 6 kali

5. Meletakan cakram ke permukaan MHA menggunakan pinset steril, di

tekan dengan ringan untuk memastikan cakram telah menempel rata pada

permukaan agar.

24
6. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 35-370C, kemudian amati dan ukur

zona hambat pada sekitar cakram menggunakan penggaris dalam satuan

milimeter.

3.2.6 Analisis Data

Hasil didapatkan dengan melihat distribusi rata-rata dari zona hambat dan

disajikan dalam bentuk numerik.

3.2.7 Aspek Etik Penelitian

1. Objek penelitian digunakan dengan metode ilmiah. Penelitian ini

dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Unpad sehingga

peneliti harus melakukan prosedur secara hati-hati.

2. Setiap kegiatan yang dilakukan dalam penelitian ini telah mendapatkan

izin dari instansi terkait.

25
 DAFTAR PUSTAKA

1. Irma BSS, Sjarif MW. Akne vulgaris. Dalam: Adhi D, Aida S.D Suriadiredja,
Aryani Su, Benny EW, Detty DK, Emmy SS, dkk, penyunting. Ilmu penyakit
kulit dan kelamin. Edisi ke-7. Jakarta: Universitas Indonesia; 2021. Hlm. 288-
289.

2. Fakultas Kedokteran; Universitas Malahayati, Department Dermatologi dan

Venereologi Rumah Sakit Pertamina Bintang Amin B. Hubungan kebersihan
wajah terhadap kejadian akne vulgaris pada siswa kelas x smk negeri tanjungsari
lampung selatan tahun 2020, 2020. Hernowo Anggoro Wasono 1, Nopi Sani 2 ,
Resati Nando Panongsih 3 , Muhammad Shauma 4 1.

3. Dréno B, Pécastaings S, Corvec S, Veraldi S, Khammari A, Roques C.

Cutibacterium acnes ( Propionibacterium acnes ) and acne vulgaris: a brief look
at the latest updates. J Eur Acad Dermatology and Venereol. 2018;32:5-14

4. Knobler Stacey, Institute of Medicine (U.S.). Forum on Microbial Threats. The

infectious etiology of chronic diseases : defining the relationship, enhancing the
research, and mitigating the effects : workshop summary. National Academies
Press; 2004. 215.

26
5. Sitohang IBS, Fathan H, Effendi E, Wahid M. The susceptibility of pathogens
associated with acne vulgaris to antibiotics. Medical Journal of Indonesia. 2019
Mar 1;28(1):21–7.

6. Alesta Tanauma H, Citraningtyas G, Lolo WA. Aktivitas Antibakteri Ekstrak

Biji Kopi Robusta (Coffea canephora) terhadap bakteri Escherichia coli.
Pharmacon. 2016;5(4):244-251

7. Okabe Y, Yamamoto Y, Yasuda K, Hochito K, Kawano K, Ishiti1 N. The

Antibacterial Effects of Coffee on Escherichia coli and Helicobacter pylori. J
Clin Biochem Nutr. 2004;34(3):85-7

8. Bharath N, Sowmya NK, Metha DS. Determintion of Antibacterial Activity of

Green Coffee Bean Extract on Periodotogenic Bacterial like Prophyromonas
ginggivalis, Prevotell intermedia, fusobacterium nucleatum and Aggregatibacter
actinomycetemcontaminans. Contemporary clinical dentistry. 2015;6(2):166–9.

9. Wulandari A, Rustiani E, Noorlaela E, Agustina P. formulasi ekstrak dan biji

kopi robusta dalam sediaan masker gel peel-off untuk meningkatkan kelembaban
dan kehalusan kulit. fitofarmaka: Jurnal Ilmiah Farmasi. 2019 Dec 30;9(2):77–
85.

10. Mauludin I. daya hambat ekstrak air kopi robusta (coffea canephora) terhadap
bakteri propionibacterium acnes. Bandung; 2021.

11. Triyani MA, Pengestuti D, Khotijah SL, Susilaningrum DF, Ujilestari T.

Aktivitas Antibakteri Hand Sanitizer Berbahan Ekstrak Daun Sirih dan Ekstrak
Jeruk Nipis. 2021;2(1):16–23.

27
12. Marsya NM, Yuwono HS, Haribudiman O. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Air
Kopi Robusta (Coffea Canephora) terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa.
JIKS. 2021;3(1):38-47

13. Tri Mulyani YW, Hidayat D, Isbiantoro I, Fatimah Y. ekstrak daun katuk
(Sauropus androgynus (L) Merr) sebagai antibakteri terhadap Propionibacterium
acnes dan Staphylococcus epidermidis. JFL : Jurnal Farmasi Lampung. 2017
Nov 1;

14. Zahrah H, Mustika A, Debora K. aktivitas antibakteri dan perubahan morfologi

dari propionibacterium acnes setelah pemberian ekstrak curcuma xanthorrhiza.
Vol. 20, Jurnal Biosains Pascasarjana. 2018.

15. Integrated taxonomic Information System (ITIS) [database on Internet].

Propionibacterium Acnes. [diunduh 2022 Jan 31]; Tersedia dari:
https://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?
search_topic=TSN&search_value=965070#null

16. Narulita W. uji efektivitas ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia) dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes secara In Vitro.
Lampung; 2017.

17. Karen C. Carroll M. Pseudomonads, Acinetobacters, and Uncommon Gram-

Negative Bacteria. 27th ed. Jawetz, Melnick & Adelberg’s Medical
Microbiology. McGraw Hill; 2014. Hlm. 245

18. Achermann Y, Goldstein EJC, Coenye T, Shirtliffa ME. Propionibacterium

acnes: From Commensal to opportunistic biofilm-associated implant pathogen.
Clinical Microbiology Reviews. 2014;27(3):419–40.

28
19. Wilyani D. Pengaruh Ekstrak Kulit Pisang Ambon (musa paradisiaca) terhadap
Pertumbuhan P. acnes secara In Vitro. [Malang]; 2017.

20. Chandrasegar D. hubungan antara propionibacterium acnes dengan derajat

keparahan acne vulgaris pada mahasiswa fakultas kedokteran universitas
sumatera utara. [Sumatera Utara]; 2016.

21. Rusli D. Formulasi Krim Clindamycin Sebagai Anti Jerawat dan Uji Efektivitas
terhadap Bakteri Propionibacterium Acne. Vol. 19, Jurnal Penelitian Sains.
Sumatera Selatan; 2017.

22. Hindritiani R, Soedarwoto A, Ruchiatan K, Suwarsa O, Umi Budiarti M,

Husadani D, dkk. resistensi antibiotik propionibacterium acnes dari berbagai lesi
kulit akne vulgaris di rumah sakit dr. hasan sadikin bandung antibiotic resistancy
of propionibacterium acnes from acne vulgaris lesions in dr. hasan sadikin
hospital bandung.

23. Sibero HT, Wayan I, Putra A, Anggraini di. tatalaksana terkini akne vulgaris.
Lampung; 2019.

24. Jeszka-Skowron M, Zgoła-Grześkowiak A, Grześkowiak T. Analytical methods

applied for the characterization and the determination of bioactive compounds in
coffee. Vol. 240, European Food Research and Technology. Springer Verlag;
2015. p. 19–31.

25. Baba Nitsa M, Akinyele BO, Aiyelari OP, Dada KE, Fayeum LS, Anagbogu CF,
et al. Phenotypic Diversity Studies of Coffee (Coffea canephora Pierre ex.
Froehn) Landrace Accessions and an Accession from Germplasm Using

29
 Morphological Markers [Internet]. Vol. 7, International Journal of Plant
Breeding and Genetics. Nigeria; 2020. Available from:
www.internationalscholarsjournals.org

26. Wijaya W, Ridwan RD, Budi HS. Antibacterial ability of arabica (Coffea
arabica) and robusta (Coffea canephora) coffee extract on Lactobacillus
acidophilus. Dental Journal (Majalah Kedokteran Gigi). 2017 Feb 14;49(2):99.

27. Yaqin MA, Nurmilawati M. Yaqin & Nurmilawati. Ekstrak Coffea robusta
Sebagai Penghambat Pertumbuhan Staphylococcus aureus Seminar Nasional XII
Pendidikan Biologi FKIP UNS 2015 867 Pengaruh Ekstrak Kopi Robusta
(Coffea robusta) sebagai Penghambat Pertumbuhan Staphylococcus aureus The
Effect of Robusta Coffe Extract (Coffea robusta) as Inhibitors of Growth
Staphylococcus aureus.

28. Runti G, Pacor S, Colomban S, Gennaro R, Navarini L, Scocchi M. Arabica

coffe extract shows antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis and
Enterococcus faecalis and low toxicity towards a human cell line. ELSEVIER.
2015 Jun;62(1):108–14.

29. Mishra US, Mishra R, Kumari P, N M, Naik BS. Antibacterial Activity of

Ethanol Extract of Andrographis paniculata [Internet]. India; 2009. Available
from: www.ijpsonline.com

30