Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103

https://doi.org/10.1007/s13346-022-01172-z

ARTIKEL ASLI

Gel duloxetine HCl termosensitif gliserosomal in situ sebagai platform

nano baru untuk pengiriman rektal: optimasi in vitro dan penilaian in
vivo

Heba F. Salem1· Adel A. Ali1· Yasmine K.Rabea1· Fatma I. Abo El‑Ela2· Rasha A. Khallaf1

Diterima: 25 April 2022 /Diterbitkan online: 27 Mei 2022

© Penulis 2022

Abstrak
Duloxetine HCl (DXH) adalah inhibitor reuptake serotonin dan norepinefrin yang digunakan untuk mengobati gangguan depresi mayor.
Karena metabolismenya yang ekstensif di hati, sifat labil asam, dan kelarutan dalam air yang terbatas, DXH memiliki bioavailabilitas oral
yang buruk (40%). Jalur rektal telah disarankan sebagai jalur pemberian lain untuk mengatasi tantangan tersebut. Penelitian ini bertujuan
untuk menyiapkan gel in situ DXH-loaded gliserosomal (DXH-GLYS) untuk pemberian rektal guna meningkatkan permeabilitas DXH dan
meningkatkan bioavailabilitasnya. Desain Box – Behnken (BBD) diadopsi untuk mempersiapkan dan mengoptimalkan nanogliserosom.
Dampak konsentrasi Phospholipon 90G (PL90G), Tween 80, dan persentase gliserol terhadap efisiensi enkapsulasi, ukuran nanogliserosom,
% kumulatif DXH yang dilepaskan, dan DXH kumulatif yang diserap per satuan luas setelah 24 jam dipelajari oleh desain. Perilaku
farmakokinetik dan farmakodinamik formulasi yang dioptimalkan diselidiki pada tikus. DXH-GLYS yang diformulasikan memiliki ukuran
vesikel berkisar antara 135,9 dan 430,6 nm dan efisiensi penjebakan antara 69,11 dan 98,12%. Eksperimen permeasi mengungkapkan
bahwa gel in situ DXH-GLYS yang dioptimalkan meningkatkan permeasi DXH sebesar 2,62 kali lipat dibandingkan dengan larutan DXH. Studi
farmakokinetik mengungkapkan bahwa gel rektal DXH-GLYS in situ dipamerkan
Peningkatan bioavailabilitas DXH 2,24 kali lipat dibandingkan larutan DXH oral. Studi farmakodinamik mengungkapkan bahwa pengobatan
rektal DXH-GLYS secara signifikan meningkatkan parameter analisis perilaku dan lebih berkhasiat sebagai antidepresan dibandingkan
larutan DXH oral. Secara kolektif, temuan ini menunjukkan bahwa GLYS dapat dianggap sebagai nanocarrier rektal yang berpotensi
berharga yang dapat meningkatkan kemanjuran DXH.

Kata kunciDuloxetine HCl · Depresi · Gliserosom · Pengiriman rektal · Farmakokinetik, Farmakodinamik, Gel
in situ termosensitif

Perkenalan
Duloxetine HCl (DXH), penghambat reuptake serotonin dan
norepinefrin ganda, memiliki nama kimia (3S)-N-methyl-3-
naphthalen-1-yloxy-3-thiophen-2ylpropan-1-amine. Pada
tahun 2002, disetujui oleh FDA Amerika Serikat untuk
pengelolaan depresi, gangguan kecemasan umum [1],
inkontinensia urin stres wanita, fibromyalgia, dan
neuropati perifer [2]. Dibandingkan dengan antidepresan lain, obat ini
memiliki karakteristik farmakodinamik yang menguntungkan, seperti
penghambatan ganda, toleransi dan keamanan, pemulihan lebih cepat,
efek samping yang lebih sedikit, dan kemungkinan rendah untuk
berikatan dengan reseptor saraf lainnya.3–5].
DXH diserap dengan baik bila diberikan secara oral; Meskipun
demikian, diperlukan waktu dua jam sebagai jeda waktu sebelum
penyerapan dimulai, dan enam jam setelah pemberian dosis hingga
mencapai tmaks. Bioavailabilitas DXH oral rendah dan berfluktuasi

* Rasha A. Khallaf dari 30 hingga 60%. Ketersediaan hayati yang buruk dapat
Rasha.mahmoud@pharm.bsu.edu.eg ; dianggap disebabkan oleh kelebihan 1st-melewati metabolisme
Rasha_khallaf@yahoo.com melalui sitokrom P450 P1A2 dan kelarutannya terbatas karena
1 termasuk obat BCS kelas II. DXH juga mudah terdegradasi dalam
Departemen Farmasi dan Farmasi Industri,
Fakultas Farmasi, Universitas Beni-Suef, Beni-Suef, medium asam gastrointestinal (GIT), sehingga tingkat
Mesir terapeutiknya rendah dan efektivitas klinisnya berkurang.6,7].
2
Departemen Farmakologi, Fakultas Kedokteran Selain itu, beberapa dosis reguler DXH konvensional atau strategi
Hewan, Universitas Beni-Suef, Mesir 62511, Mesir pengobatan multimodal yang melibatkan pemberian

Jil.:(0123456789)
3084
Penggunaan dua atau lebih obat dari kelas antidepresan terapeutik yang
berbeda wajib dilakukan untuk menghindari pasien mengalami pemulihan
yang kurang optimal, sehingga menyebabkan kepatuhan pasien yang buruk.
Mengingat hal tersebut, diperlukan sistem penghantaran rektal sebagai
alternatif bentuk sediaan DXH konvensional.
Sistem pemberian obat melalui dubur umumnya dianggap
sebagai sistem noninvasif dan bertarget lokal yang dapat
meminimalkan toksisitas sistemik. Dengan teknik pemberian
obat yang dikembangkan baru-baru ini, teknik ini juga sedang
dipertimbangkan untuk pemberian obat sistemik. Rute rektal
memiliki beberapa keuntungan, termasuk lebih sedikit
kerentanan terhadap degradasi enzimatik serta
kemampuannya untuk membatasi sebagian metabolisme
prasistemik obat, di mana bagian bawah aliran darah vena
rektal terhubung langsung ke sirkulasi sistemik. Hasilnya,
tersedia lingkungan yang lebih stabil untuk penyerapan obat,
memungkinkan konsentrasi obat dalam plasma tetap konstan
dan stabil, mengurangi interval pemberian obat dan
meningkatkan kepatuhan pasien.8,9].
Ketidaknyamanan dan penolakan pasien adalah efek samping umum
dari supositoria tradisional yang mengganggu kepatuhan pasien [10].
Selain itu, jika obat tersebut kurang melekat pada membran mukosa,
dosis konvensional tersebut dapat dengan mudah mencapai ujung usus
besar, sehingga menyebabkan obat-obatan tersebut mengalami
metabolisme lintas pertama.11–13]. Akibatnya, formulasi rektal lain yang
mudah diberikan dengan kekuatan bioadhesif yang sesuai harus
digunakan [14]. Gel in situ mukoadhesif termosensitif, yang berbentuk
cair pada suhu kamar dan berubah menjadi bentuk gel di dalam tubuh,
dimanfaatkan untuk memperpanjang waktu tinggal sediaan dan dengan
demikian meningkatkan laju penyerapannya. Tipe gel ini dipelajari
secara luas untuk sistem penghantaran melalui hidung, intraperitoneal,
subkutan, topikal, mata, dan rektal.15,16]. Poli(N-isopropil akrilamida),
poloksamer (Pluronic®), dan turunan selulosa adalah polimer
termosensitif yang umum digunakan dalam penghantaran obat.
Sistem nano-vesikular fosfolipid telah membangkitkan minat
yang besar, terutama sebagai sistem penghantaran obat yang
menjanjikan, yang dapat meningkatkan penyerapan berbagai obat
secara transdermal, dermal, dan transmukosa dan menghindari
degradasinya di saluran cerna dan hati.17]. Liposom adalah
generasi pertama dari vesikel berbasis fosfolipid, yang terdiri dari
satu atau lebih lapisan ganda lipid di sekitar inti air, yang
memungkinkan mereka untuk mengenkapsulasi berbagai macam
molekul obat, baik hidrofilik atau lipofilik.18]. Selama beberapa
dekade terakhir, berbagai bahan tambahan seperti etanol dan
surfaktan telah digunakan untuk mengubah sifat fisik, kimia, dan
fungsional liposom, dan generasi baru (dikenal sebagai liposom
elastis atau ultra-deformasi) telah ditemukan, memungkinkan
penghantaran obat yang lebih efisien. melintasi membran biologis [
19–22]. Invasom, etosom, transferosom, dan gliserosom adalah
contoh sistem inovatif yang telah diselidiki secara luas untuk
pemberian beberapa obat secara dermal, transdermal,
transmukosa, dan rektal.23–26].
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Gliserosom (GLYS) pertama kali diperkenalkan sebagai muatan
nano vesikular fleksibel baru pada tahun 2012, dibuat dari
dipalmitoylphosphatidylcholine sebagai tulang punggung dan
persentase gliserol tidak berbahaya yang berbeda, hingga 40%
dalam fase air [27]. Integrasi gliserol dalam jumlah tinggi
meningkatkan permeabilitas GLYS, sesuai dengan kemampuannya
untuk memodifikasi fluiditas bilayer fosfolipid, dengan perbaikan
lebih lanjut pada penetrasi dan penyerapan gliserosom. GLYS
mungkin mengandung zat aditif seperti kolesterol, yang
meningkatkan stabilitas bilayer PL90G, dan juga dapat diproduksi
menggunakan metode yang sama dengan yang digunakan dalam
sediaan liposom konvensional.
Baru-baru ini, GLYS telah diusulkan untuk pemberian obat
topikal, intranasal, dan transdermal serta sistem pengiriman
inhalasi [28–31]. Memang, berbagai percobaan telah dilakukan
untuk meningkatkan bioavailabilitas DXH, termasuk gel thiomer
proniosomal DXH intranasal dan gel DXHcubosomal in situ
intranasal untuk meningkatkan bioavailabilitas DXH dan potensi
penargetan otaknya [32,33]. Hingga saat ini, belum ada uji coba
yang mengeksplorasi penggunaan GLYS untuk meningkatkan
bioavailabilitas DXH. Selain itu, literatur tidak memiliki data
mengenai kemampuan GLYS untuk meningkatkan permeabilitas
transmukosa obat yang diberikan secara rektal. Akibatnya,
penelitian saat ini berkaitan dengan penyesuaian dan penilaian
sistem pembentuk gel in situ nanovesikel baru sebagai paradigma
yang sesuai untuk pemberian DXH secara rektal, mengatasi
masalah pemberian DXH secara oral. Dalam perspektif ini, GLYS
yang dibuat secara fisiokimia dikarakterisasi dengan mengadopsi
BBD, dan dispersi gliserosom optimal kemudian diintegrasikan ke
dalam basis gel in situ yang dievaluasi secara in vitro dan in vivo.
Bahan dan metode
Bahan
Duloxetine HCL (DXH) diperoleh oleh EVA pharma (Kairo,
Mesir) sebagai sampel yang diberikan, dan Phospholipon
90G (PL90G) disumbangkan dari lipoid GmbH
(Nattermannallee, Jerman). Gliserol, Kolesterol, Tween 80,
Poloxamer 407 (P407), Poloxamer 188 (P188), hidroksipropil
metilselulosa (HPMC, K15M), dan asetonitril (grade HPLC)
diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.USA). Semua
bahan kimia dan pelarut lain yang digunakan memiliki
kualitas analitis. Air deionisasi ganda digunakan selama
seluruh penelitian.
Desain eksperimental
Faktor penyebab dan tingkat kodenya (rendah, sedang, dan
tinggi) dipilih dalam penelitian ini berdasarkan data tinjauan
literatur dan uji skrining sebelumnya. Variabel independen
yang dipilih untuk optimasi adalah konsentrasi PL90G
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103 3085

(2, 3, dan 4% b/v) (A), persentase gliserol (20, 30, dan 40%
(v/v) (B), dan konsentrasi surfaktan (5, 10 dan 15% b/b dari
total lipid yang digunakan) (C).Efisiensi jebakan (EE %, Y1),
ukuran nanogliserosom (Y2), kumulatif DXH dirilis (%CDXR, Y
3), dan DXH kumulatif yang diserap per satuan luas setelah
24 Q24(μg/cm2) (Y4) dipilih sebagai respons dependen. Lima
belas run disiapkan menggunakan tiga tingkat, tiga faktor
(33) Desain Box–Behnken dibuat dengan Design-Expert®
perangkat lunak (versi 10.0.0.3, Manugistics Inc., Rockville,
USA). Meja1menampilkan komposisi GLYS yang
dikembangkan beserta respons yang diamati. Model yang
paling sesuai (linier, interaksi dua faktor, atau model
kuadrat) untuk setiap respons dipilih berdasarkan
parameter statistik yang dihasilkan. Persamaan polinomial
yang mewakili masing-masing model juga diperoleh dan
didefinisikan sebagai:
= b0+B1SEBUAH + b2B+b3C + b12AB+b13AC + b23SM
+ b11A2+B22B2+B33C2
(1)
dimana, R dan b0adalah respon yang dipilih dan intersepsi,
masing-masing. Faktor pasti yang diteliti adalah A, B, dan C,
dan koefisien regresi yang dihitung berdasarkan nilai R
adalah b1ke b33. Koefisien interaksinya adalah AB, AC dan
BC, sedangkan A2, B2dan C2adalah istilah kuadrat. Respons
yang diamati dianalisis secara statistik menggunakan
analisis varians (ANOVA) untuk memperkirakan signifikansi
setiap model padaP≤ 0,05. Interaksi dan plot 3 dimensi (3-D)
dibuat untuk empat respon guna mempelajari interaksi
antar faktor penyebab.
Pembuatan DXH‑GLYS
DXH-GLYS dikembangkan mengikuti teknik hidrasi film tipis. PL90G,
Tween 80, kolesterol, dan DXH yang ditimbang secara akurat
semuanya dilarutkan dalam 10 ml kloroform dalam labu alas bulat.
Kolesterol dan DXH dalam jumlah tetap digunakan dalam semua
formulasi (masing-masing 20 mg dan 10 mg). Larutan organik
bening yang dihasilkan diuapkan menggunakan penguap putar
(evaporator putar Stuart, RE300, laboratorium suhu Wolf, North
Yorkshire, Inggris, dengan pompa vakum Stuart, RE3022C,
Laboratorium Wolf, NorthYorkshire, Inggris) dalam kondisi vakum
pada suhu 60 °C selama 30 menit untuk mendapatkan lapisan film
tipis yang homogen tanpa sisa pelarut pada dinding labu. 10 ml
larutan buffer fosfat (PBS) (PH 7.4) yang mengandung gliserol
dengan persentase berbeda (20, 30, 40% v/v) digunakan untuk
menghidrasi lapisan tipis yang terbentuk. Selanjutnya, dispersi
gliserosom yang telah disiapkan dimasukkan ke dalam bak
sonikator (Sonix TV ss-series ultrasonikator, USA) selama 5 menit
untuk menghasilkan suspensi berukuran nano [28].
Karakterisasi DXH‑GLYS
Penentuan efisiensi penjebakan DXH
Suspensi nanogliserosomal yang disonikasi dipisahkan dari
DXH yang tidak dienkapsulasi menggunakan metode dialisis
lengkap. Setiap formulasi yang disiapkan didialisis terhadap air
deionisasi (500 ml) menggunakan membran dialisis (cut-off 12
hingga 14 kDa MW, ukuran pori 3 nm; Spectrum Laboratories

Tabel 1Respons desain Box-

Rumus- Variabel Dependen Independen (Mean±SD) Poli
Behnken dari formulasi
kode tion variabel penyebaran
nanogliserosme DXH
AB C Y1 Y2 Y3 Y4 Indeks (PDI)

1 11 0 80,22 ± 0,95 430,6 ± 3,9 34,08 ± 3,00 445,55 ± 11,00 0,621

2 -1 0 -1 75,38 ± 0,82 200,2 ± 5,67 55,23 ± 1,30 ± 522,21 ± 9,03 0,694
3 -1 1 0 69,11 ± 0,83 160,9 ± 2,97 41,17 ± 1,42 540,07 ± 19,57 0,475
4 -1 0 1 83,76 ± 0,32 140,0±1,25 54,81 ± 1,03 527,37 ± 10,21 0,348
5 -1 -1 0 81,79 ± 0,99 135,9±2,32 60,52 ± 1,51 486,21 ± 9,62 0,439
6 0 1 -1 73,54 ± 0,92 333,5±4,31 42,23 ± 3,8 385,61 ± 12,65 0,707
7 0 0 0 86,21 ± 0,56 234,8±9,72 50,64 ± 2,21 440,22 ± 3,68 0,401
8 0 0 0 87,76 ± 0,54 250,8±2,01 52,05 ± 0,98 427,45 ± 8,54 0,450
9 1 0 -1 93,21 ± 0,13 424,9±5,52 30,96 ± 2,5 332,5 ± 17,99 0,635
10 0 -1 1 96,01 ± 0,81 226,3±5,00 58,83 ± 0,89 370,45 ± 11,84 0,287
11 1 -1 0 98,12 ± 0,73 375,7±2,0 37,94 ± 1,41 320,23±7,00 0,690
12 0 0 0 86,99 ± 0,33 240,3±5,0 52,37±0,72 429,43 ± 6,8 0,248
13 1 0 1 94,65 ± 0,89 395,5±2,32 40,68 ± 1,49 405,6 ± 9,85 0,581
14 0 1 1 32,77 ± 0,44 236,9±1,58 43,96 ± 1,20 500,32 ± 15,29 0,513
15 0 - 1 -1 89,87 ± 0,29 259,6±3,21 56,52 ± 1,36 365,3 ± 2,62 0,370

NB A: Phospholipon 90G (PL90G), B: persentase gliserol, C: tween 80 konsentrasi\ Y1:

EE%, Y2: ukuran nano-gliserosom, Y3: %CDXR, dan Y4: Q24(μg/cm2)

13
3086
Inc., Mesir) pada suhu 8 °C selama 2 jam, yang efektif dalam menghilangkan
DXH yang tidak terperangkap [34]. Untuk gangguan vesikel, 1 ml GLYS yang
dipisahkan dari masing-masing formulasi ditambahkan ke 5 ml etanol [35].
Setelah pengenceran yang tepat dengan larutan buffer fosfat, kuantitas DXH
dinilai menggunakan spektrofotometer UV (Jasco, V-530, Tokyo, Jepang) diλ
maks289. Pengukuran dilakukan sebanyak tiga kali pada periode yang berbeda.
Persamaan (2) digunakan untuk mengukur persen DXH yang terperangkap
sebagai berikut:
E% = DXH yang terperangkap ∕Total DXH ∗100 (2)
Penentuan ukuran vesikel
Diameter rata-rata DXH-GLYS dan indeks polidispersitas (PDI)
dianalisis menggunakan Malvern Zeta Sizer (Malvern, Jerman)
pada suhu 25±2 °C dengan teknik hamburan cahaya dinamis
(DLS). Sebelum pengukuran, suspensi nano yang baru
disiapkan diencerkan dengan benar (1:10) menggunakan air
deionisasi. Sudut hamburan diatur ke 90 derajat [36]. Tiga
penentuan disediakan untuk setiap formulasi.
Studi rilis in vitro DXH dari DXH‑GLYS
Pelepasan DXH dari formulasi gliserosom berbeda dan larutan
DXH dilakukan menggunakan sel difusi Franz yang dimodifikasi
dengan ukuran 6,15 cm2daerah difusi efektif. Nanosuspensi
gliserosom dari formulasi berbeda (setara dengan 4 mg DXH)
dimasukkan ke bagian donor sel Franz. Kemudian, ia berdifusi
melalui membran selulosa dialisis (Mw cutoff = 12.000 Da) yang
telah disimpan semalaman dalam wadah pelepas sebelum
studi pelepasan dimulai. Lima puluh mililiter PBS dengan pH 7,4
(komposisi; 8 gram NaCl, 1,44 gram Na2HPO4, 0,2 gram KCL,
0,24 gram KH2PO4dilarutkan dalam 1000 ml air suling)
ditempatkan di ruang reseptor [37]. Ruang reseptor diaduk
pada 100 rpm dengan suhu disesuaikan menjadi sekitar 37±0,5
°C selama seluruh studi disolusi. Sampel volume 2 ml diambil
secara berkala (0,5, 1, 2, 4, 6, 8, dan 24 jam) dari setiap ruang
pelepasan. Volume yang dihilangkan segera diganti
menggunakan media segar dengan volume yang sama setiap
kali sampel diambil untuk menjamin volume konstan (kondisi
wastafel), kandungan DXH diukur secara spektrofotometri pada
λmaks289 nm di semua sampel yang ditarik. Percobaan
pelepasan diulang tiga kali, dan rata-rata dari tiga pembacaan
dihitung. Persen akumulatif DXH yang dilepaskan dinyatakan
menggunakan Persamaan.2:
DXH kumulatif dirilis(%) = % rilis pada waktu "T"
( )
Volume pada sampel ditarik
+ (3)
melepaskan volume sedang
dirilis sebelum εtε(T-1))
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Kinetika pelepasan DXH ditentukan dengan menyesuaikan
data pelepasan yang diperoleh ke model difusi orde nol, orde
pertama, dan Higuchi. Pemilihan model yang sesuai dengan
mekanisme pelepasan DXH dilakukan berdasarkan model yang
memberikan nilai koefisien korelasi tertinggi (R2) [38].
Studi permeasi ex vivo
Sel difusi Franz buatan dengan luas permukaan 6,15 cm2
digunakan untuk mempelajari permeasi DXH dari formulasi
nanogliserosomal yang disiapkan dan larutan DXH. Rektum
sapi yang baru dipotong digunakan sebagai membran model
permeasi, yang disimpan dalam PBS (pH 7,4) selama 1 jam
untuk menyeimbangkan sebelum penelitian. PBS (PH 7.4)
dengan volume 50 ml digunakan untuk mengisi ruang
reseptor, yang terus diaduk dengan kecepatan 100 rpm selama
24 jam dan termostat pada suhu 37 ± 0,5 °C. Semua prosedur
yang digunakan di sini sebelumnya dilaporkan oleh Salem et al.
(2017) [14]. Di bagian donor sel Franz, volume suspensi DXH-
GLYS yang berbeda (setara dengan 4 mg DXH) ditambahkan
agar bersentuhan langsung dengan mukosa rektal. Sampel
sebanyak 2 ml diambil dari ruang reseptor pada interval
terprogram 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, dan 24 jam, dan kemudian
kendaraan penarik dengan cepat diganti dengan larutan buffer
segar dengan volume yang sama pada suhu kamar. setiap kali
untuk menjaga kondisi wastafel. Sampel yang disaring dan
diencerkan dengan benar menjadi sasaran analisis
spektrofotometri pada 289 nm untuk mengukur konsentrasi
DXH. Kuantitas akumulatif DXH yang meresap ke seluruh
rektum sapi dihitung untuk setiap interval waktu menurut
Persamaan.3[28]:
∑
jumlah kumulatif =V1×Cn+ [V2( C1+⋯ +Cn-1)]
(4)
dimana, V1adalah volume ruang reseptor (50 ml), V2adalah
volume yang diambil pada setiap interval (2 ml), dan CNadalah
konsentrasi sampel yang dicapai pada waktu n.
Pengukuran rangkap tiga dikembangkan untuk setiap
formulasi (tiga sampel terisolasi) dalam percobaan, dan
data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. DXH kumulatif
meresap selama 24 jam per cm persegi; Q24(μg /cm2) diplot
terhadap waktu, dan karenanya, semua parameter
permeasi rektal dapat disediakan. Fluks kondisi tunak DXH
(Jss) (μg/cm2/h) diturunkan dari kemiringan garis lurus [39].
Koefisien permeabilitas KP(cm/jam) DXH untuk semua
formulasi dihitung dengan membagi Jss (μg/cm2/h) dengan
konsentrasi DXH awal yang dimasukkan ke dalam
kompartemen donor [40]. Waktu DXH untuk memulai
permeasi (jeda waktu dalam menit) ditentukan dari
perpotongan x pada bagian linier [14,40].
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Penilaian dan optimalisasi DXH‑GLYS
Evaluasi model eksperimental
Perangkat lunak ahli desain digunakan untuk menganalisis semua
hasil kuantitatif Y1-Y4menggunakan uji ANOVA padaP<0,05. Ini
memberikan matriks model untuk mengevaluasi model yang paling
sesuai dan persamaan polinomial untuk menilai hubungan
matematis antara variabel independen. Metode prediksi titik
perangkat lunak Design-Expert diterapkan untuk mendeteksi
formulasi yang dioptimalkan tergantung pada kemampuannya
untuk menetapkan tingkat variabel independen (A, B, dan C),
mencapai ukuran gliserosom terkecil yang berkorelasi dengan % EE
terbesar, %CDXR , dan Q24. Komposisi optimum yang dipilih
kemudian diekspos untuk pemeriksaan lebih lanjut.
Karakterisasi formulasi DXH‑GLYS yang
dioptimalkan
Formulasi optimal telah disiapkan dan diikutsertakan dalam
banyak penelitian, termasuk pengukuran efisiensi penjerapan,
ukuran vesikel, potensi zeta, dan studi stabilitas. Perilaku
pelepasan in vitro dan studi difusi ex vivo juga dilakukan untuk
formulasi yang dioptimalkan dengan menggunakan teknik dan
prosedur yang sama seperti diuraikan di atas. Mikroskop
elektron transmisi (TEM) (Jeol, Tokyo, Jepang) digunakan untuk
memeriksa bentuk dan morfologi formulasi yang dioptimalkan.
Rasio peningkatan (ER) juga ditentukan untuk menilai
efektivitas nanogliserosom dalam meningkatkan permeabilitas
DXH dibandingkan dengan larutan DXH. ER dihitung
tergantung pada persamaan di bawah ini:
rasio peningkatan = Jss dari DXH − GLYS yang dioptimalkan
∕Jss dari solusi DXH
(5)
Potensi Zeta
Potensi zeta (ZP) dari dispersi nonogliserosom
optimal diukur menggunakan Malvern Zeta Sizer
(Malvern, UK), dan rata-rata pengukuran rangkap tiga
dihitung (n = 3). Dalam pengukuran ZP, kecepatan
vesikel gliserosom melalui cairan diukur
menggunakan teknik berbasis elektroforesis setelah
diterapkan medan listrik.
Morfologi nanogliserosom
TEM resolusi tinggi dengan tegangan operasi 80 kV digunakan
untuk menguji bentuk formulasi DXH-GLYS yang dioptimalkan
beserta morfologi dan ukuran permukaannya. Pada susunan
cupper berlapis karbon, satu tetes yang baru diencerkan
3087
formulasi ditempatkan. Setelah menerapkan larutan asam
fosfotungstatik 1% (%b/v) untuk pewarnaan negatif, sampel
yang dikeringkan di udara difoto [37].
Studi stabilitas
Formulasi DXH-GLYS yang dioptimalkan disimpan dalam botol kaca
tertutup rapat dipertahankan pada suhu 4 °C selama tiga bulan.
Sampel yang dikumpulkan dari formulasi yang dioptimalkan setelah
30, 60, dan 90 hari dikarakterisasi dengan mengukur potensi zeta,
ukuran vesikel, serta EE% dan semuanya dibandingkan dengan
sampel yang baru disiapkan untuk memeriksa stabilitas fisik
formulasi yang dioptimalkan [41]. Seluruh data yang diperoleh
merupakan rata-rata dari tiga kali pengukuran ± SD.
Pembuatan gel in situ termosensitif DXH‑GLYS
Untuk pembuatan gel in situ DXH-GLYS yang dipicu secara
termal, digunakan P407, P188, dan HPMC K15M dengan
persentase (20:3:0,5%). Metode dingin yang dijelaskan oleh
Schmolka et al. sedikit dimodifikasi untuk membuat gel in situ
berdasarkan berat/volume [42]. Secara singkat, jumlah polimer
mukoadhesif)HPMC K15M( yang dihitung ditaburkan ke
suspensi DXH-GLYS yang baru disiapkan sambil diaduk terus
menerus hingga campuran benar-benar larut. Setelah itu,
kombinasi P407 dan P188 dimasukkan, dicampur dengan
benar, dan kemudian disimpan jam 4
º C sampai dibutuhkan. Konsentrasi DXH yang digunakan adalah 0,8%.
Formulasi gel DXH bebas in situ juga dibuat dengan menggunakan
metode yang sama untuk tujuan perbandingan.
Karakterisasi sistem pembentuk gel in situ DXH‑GLYS
Gel in situ DXH-GLYS yang baru dibuat dievaluasi dengan
inspeksi visual untuk sifat organoleptiknya (tekstur dan
transparansi). Pelepasan in vitro dan permeabilitas ex vivo gel
in situ juga dinilai dengan metode yang sama yang telah
diinformasikan sebelumnya.
pengukuran pH
Karena sediaan gel in situ ditujukan untuk pemberian rektal,
evaluasi pH diperlukan untuk memastikan bahwa sediaan tersebut
tidak menyebabkan iritasi. PH meter digunakan untuk mengukur
pH gel dalam rangkap tiga.
Daya sebar
Teknik sederhana digunakan untuk menilai daya sebar gel.
Secara singkat, 0,5 g formulasi gel ditempatkan pada tanda
yang telah ditentukan pada pelat kaca, yang kemudian
ditutup dengan pelat lain. Pelat atas dikompresi
13
3088
selama 5 menit pada tekanan konstan, dan diperkirakan tidak ada
penyebaran lebih lanjut. Diameter lingkaran yang tersebar di
sekitar tanda diukur.
Kandungan obat
0,1 g sampel diambil dari formulasi gel in situ dan kemudian
disonikasi menggunakan 5 ml etanol untuk gangguan vesikel.
Setelah pengenceran yang tepat dengan larutan PBS, kandungan
DXH dianalisis secara spektrofotometri padaλmaks289.
Suhu dan waktu gelasi
Metode yang diinformasikan oleh Mansour et al. digunakan
untuk mengukur suhu transisi fase sol-ke-gel (suhu gelasi) dari
gel in situ DXH-GLYS [43]. Aliquot 2 ml formulasi gel in situ
dipindahkan ke dalam tabung reaksi yang ditutup dengan
parafilm dan direndam dalam penangas air digital termostatik
yang diatur pada suhu 25 °C. Suhu penangas air dinaikkan
secara bertahap sebesar 1 °C dan diseimbangkan selama 10
menit dengan setiap penyesuaian suhu baru. Sampel termogel
diperiksa gelasinya secara teratur. Sampel gel dinilai, dalam
rangkap tiga, untuk gelasi yang disarankan terjadi setelah
meniskus gel berhenti bergerak ketika dimiringkan 90 derajat [
44,45]. Waktu deteksi gelling pertama didefinisikan sebagai
waktu gelasi. Tiga pengukuran berturut-turut dilakukan.
Pengukuran kekuatan gel
Sebuah metode yang dijelaskan oleh El Leithy et al. digunakan
untuk menentukan kekuatan gel in situ [9]. Dalam penangas air
yang dikontrol secara termostatis, sampel 50 g gel in situ DXH-
GLYS yang dioptimalkan dimasukkan ke dalam silinder ukur 100
ml. Suhu penangas air diseimbangkan pada suhu gelasi gel
DXH-GLYS in situ yang telah ditentukan. Pada permukaan gel
ditempatkan berat standar 35 g. Waktu yang dibutuhkan berat
untuk menembus sedalam 5 cm ke dalam formulasi gel dalam
hitungan detik diukur dan dianggap sebagai indeks kekuatan
gel yang berubah-ubah. Untuk aplikasi rektal, rentang waktu
10-50 detik dianggap dapat diterima.
Kapasitas pembentuk gel
Kapasitas pembentukan gel ditentukan dengan memeriksa perilaku
formulasi gel, seperti waktu gelasi dan erosi, sebagai fungsi dari
perubahan lingkungan. Pengkodean untuk kapasitas pembentuk
gel dijelaskan seperti yang dilaporkan dalam literatur sebagai
berikut: + menjadi gel setelah beberapa menit dan larut dengan
cepat, + + menjadi gel setelah beberapa menit dan tetap utuh
selama beberapa jam, dan + + + segera menjadi gel dan tetap utuh
selama waktu yang lama [46,47].
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Pengukuran mukoadhesi in vitro
Alat pengukur mukoadhesif yang dibuat di laboratorium kami
digunakan untuk mengevaluasi kekuatan bioadhesif gel in situ
DXH-GLYS menggunakan keseimbangan fisik yang dimodifikasi.
Prinsip yang diterapkan adalah mengukur kekuatan yang
diperlukan untuk memisahkan sediaan gel dari jaringan
mukosa rektal. Dengan menggunakan lem cyanoacrylate,
sepotong mukosa rektal yang baru dipotong dari fundus tikus
dipasang dengan sisi mukosa menghadap ke atas pada
masing-masing dua kaca objek. Pada slide pertama, 0,2 g gel in
situ diendapkan, dan slide ini ditempatkan pada loyang yang
ketinggiannya dapat disesuaikan. Setelah itu, slide lain dengan
mukosa rektal difiksasi secara terbalik, ditempelkan pada
keseimbangan. Dengan persiapan gel di antaranya, kedua slide
disimpan berdekatan satu sama lain selama 2 menit. Beratnya
terus meningkat di ujung timbangan yang lain sampai kedua
slide terlepas [48]. Berat terkecil yang dapat melepaskan
jaringan mukosa rektal dari permukaan termogel digunakan
untuk menghitung gaya mukoadhesif (tekanan pelepasan
dalam Dynes/cm2) sebagai berikut:
kekuatan perekat ukoadhesif (Dynes∕cm2) = m ∗ g∕a (6)
dimana, m adalah berat yang dibutuhkan untuk memisahkan dua slide
dalam gram, g adalah percepatan gravitasi (980 cm/detik2), dan A adalah
area mukosa rektal.
Penentuan sifat reologi
Viskometer kerucut dan pelat (AS) digunakan untuk menyelidiki
sifat reologi gel in situ termosensitif DXH-GLYS yang
dioptimalkan sebelum dan sesudah gelasi. Pada suhu 25 dan
37 °C, pengukuran viskositas dilakukan menggunakan wadah
sirkulasi yang dihubungkan ke viskometer pada rentang laju
geser 20 hingga 400 (detik−1) [48]. Spindel S64 dipilih untuk
dicelupkan ke dalam gel yang diuji. Area loop histeresis juga
dideteksi dengan menerapkan aturan trapesium.
Lokalisasi in vivo dan retensi gel in situ
termosensitif DXH‑GLYS di rektum
Untuk memeriksa retensi rektum dan lokalisasi formulasi
gel DXH-GLYS in situ, metode yang dijelaskan oleh Choi et
al. [13] diimplementasikan menggunakan empat tikus
albino Wistar dengan berat 180–200 g. Formulasi gel in situ
termosensitif DXH-GLYS yang dioptimalkan yang
mengandung 0,1% (b/v) metilen biru dimasukkan ke dalam
rektum 4 cm di atas anus melalui jarum sonde lambung
yang dipasang pada jarum suntik plastik sekali pakai. Tikus
dikorbankan 5 menit, dan 6 jam setelah pemberian gel in
situ, perutnya dibuka dan warna pewarna dipastikan
lokalisasi formulasinya.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Studi in vivo
Untuk formulasi yang telah disiapkan dilakukan uji
Farmakokinetik (PK) dan Farmakodinamik (PD).
Penelitian ini memenuhi standar pedoman komite etik
hewan Universitas Beni-Suef, protokol Helsinki, dan
persetujuannya disortir sebelum dimulainya percobaan
(kode persetujuan: BSU-IACUC 021–190). Semua
prosedur penanganan hewan mematuhi protokol yang
disetujui oleh institusi komite perawatan dan
penggunaan hewan di Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Beni-Suef, Mesir.
Studi farmakodinamik
Hewan
Percobaan dilakukan pada 20 ekor tikus albino jantan dewasa, dibagi
menjadi empat kelompok yang masing-masing terdiri dari lima hewan.
Tikus diaklimatisasi dengan makanan dasar hewan pengerat selama 15
hari setelah kedatangan mereka sebelum dilakukan induksi depresi atau
prosedur eksperimental. Tikus juga memiliki akses terhadap air bersih
dan segar sepanjang hari. Untuk menghindari buang air besar selama
percobaan, tikus yang diberi formulasi rektal tidak diberi makanan apa
pun selama 16 jam sebelum dimulainya penerimaan dosis, dan hanya air
yang diperbolehkan.
Induksi depresi dan protokol eksperimental
Semua hewan kecuali kelompok kontrol normal dipaksa
berenang di dalam tabung air (tinggi: 40 cm; diameter 25 cm
(menampung 30 cm air (suhu; 25 ± 2 °C). Mengikuti teknik yang
dijelaskan oleh Kaur dkk. ( 2016), tikus diberi sesi berenang
setiap hari selama 7 hari [49]. Mereka menjalani periode
renang pra-tes selama 15 menit pada hari pertama, diikuti
dengan periode berenang 6 menit pada hari berikutnya dalam
dua sesi, “siang dan malam”. Tikus diklasifikasikan sebagai G1;
non-depresi (kontrol negatif), sedangkan G2 diobati dengan 0,5
ml normal saline sebagai kontrol positif tikus depresi. G3 diolah
dengan larutan DXH dalam air murni (2,5 mg/ml; 20 mg/kg)
secara oral. G4 diobati dengan 400 μl formulasi gel in situ
termosensitif DXH-GLYS yang dioptimalkan yang mengandung
4 mg obat (20 mg/kg) secara rektal. Dosis oral diberikan
menggunakan jarum suntik dan jarum suntik berujung bola
berukuran 16-gauge. Untuk pemberian dosis intrarektal, jarum
suntik plastik yang dipasang pada jarum sonde lambung
digunakan untuk memberikan formulasi gel di atas anus, pada
kedalaman 4 cm. Tikus digantung dalam posisi ventral dengan
kepala menunduk dan rektum ditutup selama sekitar 10 menit
sampai obat benar-benar larut.
3089
Tes renang paksa (FST)
FST adalah tes perilaku hewan pengerat yang sering digunakan
dalam penelitian depresi, terutama sebagai alat skrining
antidepresan akut. Imobilitas dianggap sebagai perilaku seperti
depresi (behavioral putus asa) dalam tes ini. Tikus ditempatkan
di dalam tong berisi air untuk tes renang terbatas atau wajib.
Setelah dosis 10 menit, waktu berenang tikus dinilai. Tikus yang
diberi obat antidepresan akan secara aktif melakukan perilaku
yang mengarah pada pelarian untuk waktu yang lebih lama
dibandingkan tikus yang diberi obat saline.50].
Tes suspensi ekor
Tikus digantung pada ekornya pada palang datar dengan
menggunakan pita perekat. Perilaku setiap tikus dinilai 30
menit setelah pemberian obat selama 5 menit [51].
Uji preferensi sukrosa
Berkurangnya preferensi terhadap makanan manis pada tes
kecenderungan sukrosa menunjukkan anhedonia, yang dapat
diatasi dengan obat antidepresan jangka panjang. Sepanjang sesi
pelatihan, dari hari ke-1 hingga hari ke-4, seluruh tikus mendapat
bahan makanan yang bervariasi, yaitu dua botol air murni tersedia
pada hari ke-1 dan ke-2, dua botol sukrosa 1% pada hari ke-3, serta
satu botol air murni dan satu botol. sukrosa 1% pada hari ke 4 [52].
Setelah itu, ada dua sesi pengujian setelah 1 jam dan sekali lagi
setelah 12 jam pemberian air dan makanan kepada semua hewan.
Setiap tikus diberi 200 ml air bersih dan 200 ml larutan sukrosa 1%,
kemudian dicatat jumlah air bersih dan larutan sukrosa yang
dikeluarkan. Preferensi sukrosa dapat dihitung sebagai berikut:
persentase preferensi ukrosa (%) = konsumsi larutan
sukrosa (g)∕(konsumsi larutan sukrosa [g]
+ konsumsi air [g]) ×100%.
(7)
Tes lapangan terbuka
Tikus dengan bebas menjelajahi lingkungan sekitar selama 5,5 menit
setelah ditempatkan di tengah kandang persegi hitam berukuran 100 ×
50 cm, dengan 30 detik pertama digunakan untuk menyesuaikan diri
dengan lingkungan. Rekaman kamera digunakan untuk menghitung
waktu yang dihabiskan di tengah kotak lapangan terbuka dan jarak
keseluruhan yang ditempuh sepanjang tes 5,5 menit [52].
Pemberian makanan dengan penekanan baru (tes berbasis kecemasan)
(ABT)
Ketakutan intrinsik terhadap hal-hal baru pada tikus dieksploitasi untuk
menginduksi penghambatan perilaku makan yang disebabkan oleh paparan
faktor baru dengan tes ini [53]. Dalam model ini, hewan kelaparan
13
3090
24 jam dipaparkan pada kandang bening dengan lantai tertutup serbuk
gergaji, satu pelet makanan, dan penerangan terkonsentrasi. Tes ini
mendeteksi perilaku yang berhubungan dengan depresi dan kecemasan
dengan mengevaluasi waktu yang dibutuhkan tikus untuk menunjukkan
perilaku makan sebagai respons terhadap stimulus baru, serta jumlah
makanan yang dikonsumsi.54].
Studi farmakokinetik
Hewan
Sebanyak 15 tikus Wister jantan dengan berat rata-rata antara 180
dan 200 g digunakan untuk melakukan analisis PK komparatif
antara formulasi rektal dan oral. Tikus dibagi menjadi tiga
kelompok secara acak (masing-masing 5 tikus, n = 5). Untuk
menghindari buang air besar selama percobaan, tikus tidak diberi
makanan apa pun selama 16 jam sebelum dimulainya penerimaan
formulasi obat rektal, dan hanya air yang diperbolehkan.55].
Pemberian DXH pada tikus
Kelompok I dan Kelompok II masing-masing menerima gel in situ
termosensitif DXH-GLYS yang dioptimalkan dan gel in situ DXH
bebas secara rektal, sedangkan Kelompok III menerima larutan
DXH oral dengan dosis 20 mg/kg [32]. Anus direkatkan setelah
pemberian dosis menggunakan pita perekat untuk mencegah
kemungkinan kebocoran dosis yang diberikan [10]. Obat ini hadir
pada konsentrasi 8 mg/ml dalam sediaan gel apa pun.
Pengumpulan sampel
Pada jeda 0,5, 1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, dan 72 jam, sekitar 1 ml sampel
darah diambil dari pleksus retro-orbital tikus dan dimasukkan ke
dalam tabung yang berisi larutan EDTA. Tabung EDTA kemudian
dimasukkan ke dalam centrifuge dengan kecepatan 3000 rpm
selama 30 menit, dilanjutkan dengan pemisahan plasma dari darah
secara menyeluruh. Kemudian, pada suhu -20 °C, sampel serum
yang telah dipisahkan dibekukan hingga dianalisis kandungan
DXHnya.
Analisis LC – MS / MS DXH dalam plasma
Metode kromatografi cair-spektrometri massa tandem LC-MS /MS
yang dimodifikasi (Shimadzu, Jepang) digunakan untuk estimasi
DXH dalam sampel plasma tikus menggunakan venlafaxine sebagai
standar internal [32]. Sistem LC dilengkapi dengan aDGU-20A3unit
degassing, dan anLC-20ADunit distribusi pelarut dengan aSIL-20A
pengambilan sampel otomatis. Pemisahan DXH dan venlafaxine
dilakukan pada kolom C18, 100 A (50×4,6 mm) (Phenomenex, USA),
dengan ukuran partikel 5 mm. Spektrometer massa adalah AB Sciex
API-3200 (Foster City, CA, USA), digunakan untuk kuantisasi dalam
mode ion positif. Ionnya
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
tegangan semprotan diatur menjadi 5500 V. Campuran 80% (v/v)
asetonitril dan 20% (v/v) asam format berair 0,1% digunakan
sebagai fase gerak. Kolom mengalirkan fase gerak dengan
kecepatan 0,2 ml/menit melalui kolom. Mode Pemantauan Reaksi
Berganda digunakan untuk kuantifikasi massa DXH dan standar
internal pada m/z 298,01 hingga 153,95 untuk DXH dan m/z 278,11
hingga 121 untuk venlaf axine.
Persiapan sampel untuk analisis
Ekstraksi DXH dari semua sampel plasma yang dicairkan dilakukan
dengan menggunakan teknik ekstraksi cair-cair. 500 μl masing-
masing plasma tikus dibubuhi 50 μl venlafaxine (100 ng/ml dalam
asetonitril), diikuti dengan penambahan 5 ml kloroform. Untuk
mendapatkan DXH dalam kloroform, campuran divorteks berbagai
macam dan kemudian disentrifugasi pada 5000 rpm selama 10
menit. Lapisan atas harus dihilangkan dengan hati-hati, dan lapisan
kloroform dimasukkan ke dalam tabung baru yang lain, kemudian
diuapkan sampai benar-benar kering. Lapisan tabung reaksi kering
kemudian dilarutkan dalam 100 μl metanol, dan 20 μl alikuot
ekstrak bening yang telah dilarutkan ini disuntikkan ke dalam
sistem LC-MS/MS untuk kuantifikasi DXH [56]. Prosedur yang sama
digunakan untuk menyiapkan semua sampel plasma, baik yang
digunakan untuk kalibrasi atau analisis PK. Kurva kalibrasi untuk
DXH dalam plasma telah dibuat dari 0,5 ng/ml hingga 250 ng/ml.
Analisis farmakokinetik
Perangkat lunak WinNonlin (versi 1.5, Scientific Consulting, Inc.,
Rockville, MD) digunakan untuk memperkirakan berbagai
karakteristik PK DXH dari data yang diperoleh untuk setiap
tikus. Dari profil konsentrasi-waktu plasma tikus, Cmaks(ng/ml)
(konsentrasi plasma DXH maksimum yang diamati) dan Tmaks(h)
(waktu yang dibutuhkan untuk mencapai Cmaks)), waktu tinggal
rata-rata (MRT), konstanta laju eliminasi (K), dan waktu paruh
biologis (T1/2) dicapai dengan menggunakan model PK non-
kompartemen standar. Berdasarkan aturan trapesium linier,
AUC0—72 jam(area di bawah kurva konsentrasi plasma-waktu)
dan AUC0-∞didapatkan. Akhirnya, bioavailabilitas relatif (Frel)
untuk sediaan rektal dihitung berdasarkan rumus berikut:
rel = AUC formulasi gel in situ∕AUC dari
(8)
formulasi lisan ∗ 100
Studi histologis
Pada dua kelompok tikus albino jantan (tiga tikus per kelompok, n =
6), dilakukan evaluasi histopatologi rektal. Tikus dipuasakan selama
24 jam (dengan akses bebas terhadap air) sebelum
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
dimulainya percobaan histologis untuk meminimalkan kotoran
di rektum. Kelompok A adalah kontrol, sedangkan kelompok B
menerima gel DXH-GLYS in situ yang dioptimalkan secara
rektal. Tikus dibunuh 24 jam setelah pemberian obat.
Kemudian, ruas rektum dipisahkan, difiksasi dalam buffer
formalin 10%, dan akhirnya dimasukkan ke dalam parafin dan
diiris menjadi beberapa bagian. Akhirnya, irisan parafin rektum
diwarnai dengan hematoxylin dan eosin, dan kelainan atau
iritasi apa pun divisualisasikan di bawah mikroskop optik [23].
Analisis statistik
Perangkat lunak SPSS versi 22 (Chicago, IL) digunakan untuk
analisis statistik dari data yang diperoleh. Perbedaan yang
signifikan antara parameter PK yang diperoleh untuk formulasi
gel rektal dan larutan DXH oral dibuktikan dengan
menggunakan analisis varians satu arah (ANOVA) yang diikuti
dengan uji perbandingan berganda Tukey. Perbedaan rata-rata
signifikan secara statistik ketika tingkat probabilitasnya
signifikanP<0,05. Semua data yang diperoleh direpresentasikan
sebagai rata-rata ± standar deviasi dari 3 percobaan.
hasil dan Diskusi
Karakterisasi dan optimalisasi formulasi
DXH‑GLYS
Desain eksperimen merupakan kombinasi berbagai teknik, yang
berhasil digunakan untuk menyelidiki dampak variabel serta
interaksinya terhadap hasil eksperimen. Metodologi permukaan
respons adalah pendekatan statistik dan matematis yang
digunakan secara luas dalam penelitian farmasi untuk mendeteksi
hubungan fungsional antara beberapa respons dan variabel [57].
Hal ini secara bersamaan dapat mengoptimalkan tingkat faktor
yang dipelajari untuk menghasilkan formulasi yang memiliki sifat
dan kemanjuran yang diinginkan. Desain Box-Behnken diterapkan
dalam penelitian ini karena memerlukan eksperimen yang jauh
lebih sedikit dibandingkan dengan teknik lain seperti desain
faktorial penuh.58].
Koefisien determinasi (R2), disesuaikan (R2), prediksi (R2),
dan nilai CV% digunakan untuk mengevaluasi model yang
paling sesuai untuk setiap respons. Tabel S1 menunjukkan
nilai kuadrat variabel terikat beserta R-nya2, SD, dan %CV.
efisiensi penjebakan DXH
Pembawa nanogliserosom berhasil mempertahankan DXH, dengan
EE% berfluktuasi dari 69,11 menjadi 98,12%, seperti yang
diilustrasikan pada Tabel1. Model kuadrat dianggap yang terbaik
3091
model yang cocok dengan data EE% bergantung pada nilai
R tertingginya2. Itu signifikan secara statistik (P<0,0001),
dengan nilai F yang terdeteksi sebesar 151,64. Berdasarkan
analisis data eksperimen dengan ANOVA, dihasilkan
persamaan polinomial berikut:
E% = +86,99 + 7,02SEBUAH -8.20B+2.47C -1.30AB
- 1.73AC -0,59SM -1.06A2− 3.62B2+ 0,82C2
(9)
Tanda positif untuk koefisien regresi menunjukkan dampak
sinergis dari faktor-faktor tersebut, sedangkan tanda negatif
untuk koefisien regresi menunjukkan dampak antagonistik.
Konsentrasi PL90G dan Tween 80 menunjukkan efek sinergis (P
<0,0001) pada EE% DXH. Khususnya, peningkatan konsentrasi
PL90G dari 2 menjadi 4% pada konsentrasi gliserol dan Tween
konstan meningkatkan % EE F5 dari 81,79 ± 0,99% menjadi
98,12 ± 0,73% pada F11. Selanjutnya, % EE F2 adalah 75,38 ±
0,82%, yang meningkat menjadi 83,76 ± 0,32% pada F4 setelah
meningkatkan konsentrasi Tween 80 dari 5 menjadi 15%
dengan tetap menjaga PL90G dan gliserol tetap konstan. EE%
DXH yang diperkuat dalam GLYS dengan meningkatkan PL90G
dapat disebabkan oleh luas permukaan tinggi yang tersedia
untuk menjebak DXH pada konsentrasi PL90G yang lebih tinggi
yang diperoleh dari arsitektur lipid bilayer dari vesikel tertutup
GLYS [59]. Selain itu, sifat lipofilik DXH, yang membuatnya
mudah larut dalam PL90G, terutama bertanggung jawab untuk
meningkatkan kemungkinan integrasi dan pengendapan
dengan kandungan lipid GLYS, sehingga meningkatkan DXH
EE% [38,39]. Selain itu, ukuran gliserosom yang lebih besar
yang dicapai dengan meningkatnya konsentrasi PL90G
mungkin menghasilkan volume enkapsulasi DXH yang lebih
tinggi [34,60]. Temuan ini bertepatan dengan yang
dikemukakan oleh Zhang et al. (2017), yang mendukung bahwa
peningkatan konsentrasi fosfolipid meningkatkan paeoniflorin
EE% dalam vesikel gliserosom [59]. Demikian pula, Tween 80
memiliki efek sinergis dalam melarutkan obat yang sukar larut
seperti DXH yang meningkatkan keterbasahan obat, kemudian
meningkatkan volume daerah bilayer lipofilik yang tersedia
untuk penjeratan DXH [61,62].
Selanjutnya, EE% DXH menunjukkan korelasi negatif
yang signifikan (p <0,0001) dengan persen gliserol (C),
dimana EE% F1 yang memiliki 40% gliserol dan F11 yang
memiliki 20% gliserol adalah 80,22 ± 0,95% dan 98,12 ±
masing-masing 0,73%. Peningkatan kelarutan DXH dalam
media antarvesikel yang mengandung gliserol dengan
meningkatnya kandungan gliserol dalam fase air dapat
menjelaskan rembesan DXH dari GLYS dan penurunan % EE
pada persentase gliserol yang lebih tinggi [27,63]. Manca
dkk. (2014) berbagi temuan serupa, ketika mereka
menyiapkan quercetin GLYS untuk meningkatkan tindakan
perlindungan obat terhadap stres oksidatif. Dampak PL90G,
konsentrasi Tween 80, dan persentase gliserol pada EE%
diwakili oleh plot 3-D, Gambar.1A.
13
3092
Gambar 1(A) Plot permukaan respons 3D menunjukkan pengaruh variabel independen pada (A) % efisiensi jebakan (EE%) dan (B) ukuran partikel (PS)
Analisis ukuran vesikel
Penetrasi vesikel melalui mukosa rektum secara signifikan
dipengaruhi oleh ukuran partikelnya, dan oleh karena itu,
pembuatan GLYS berukuran kecil dapat meningkatkan
penyerapan obat secara signifikan. Ukuran vesikel formulasi
DXH-GLYS bervariasi secara dramatis dari 135,9 ± 2,32 hingga
430,6 ± 3,9 nm, dengan nilai PDI yang dapat diterima (PDI <0,7),
menunjukkan keseragaman yang baik. Dampak variabel
independen terhadap ukuran vesikel GLYS disesuaikan dengan
model kuadrat tergantung pada nilai R tertingginya.2. Nilai F
model ukuran gliserosom adalah 171,68 (signifikan padaP=
0,0001). Persamaan9mewakili pengaruh kuantitatif ketiga
faktor terhadap ukuran GLYS dengan nilai yang dikodekan.
Ukuran LYS = +241,97 + 123,71SEBUAH +20.55B−27.44C
+ 7.48AB+7.70AC -15.82SM +29.94A2
+ 3.87B2+ 18.24C2
(10) masing-masing. Penjelasan yang mungkin untuk pengamatan ini
Tanda positif A dan B menunjukkan bahwa konsentrasi
PL90G dan persen gliserol menunjukkan dampak sinergis
yang signifikan terhadap ukuran DXH-GLYS (P<0,0001).
Ukuran vesikel F1 yang terdiri dari 4% PL90G dan F3 yang
terdiri dari 2% PL90G masing-masing adalah 430,6 ± 3,9 nm
dan 160,9 ± 2,97 nm. Juga, ukuran vesikel F1 memiliki 40%
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
gliserol dan F11 yang memiliki 20% gliserol masing-masing
berukuran 430,6 ± 3,9 nm dan 375,7 ± 2,0 nm. Peningkatan ukuran
GLYS dengan meningkatnya konsentrasi PL90G mungkin
disebabkan oleh kecenderungan molekul PL90G untuk beragregasi
dan menyatu dengan meningkatkan konsentrasinya, sehingga
menyebabkan pembentukan GLYS berukuran besar.64].
Interpretasi hipotetis lain untuk pembesaran ukuran GLYS adalah
bahwa viskositas GLYS meningkat dengan meningkatnya
konsentrasi PL90G, yang menurunkan efek homogenisasi pada
vesikel dan efektivitas daya ultrasonik untuk pengurangan ukuran
vesikel [65]. Temuan tersebut konsisten dengan penelitian
sebelumnya [22,66,67].
Mirip dengan efek PL90G, peningkatan persentase
gliserol dari 20 menjadi 40% meningkatkan ukuran GLYS
secara signifikan. Hal ini mungkin disebabkan oleh sifat
lengket gliserol.30,59]. Sebaliknya, konsentrasi Tween 80 (C)
menunjukkan efek negatif yang signifikan terhadap ukuran
gliserosom (P=0,0064), dimana ukuran vesikel F2 dan F4
adalah 200,2 ± 5,67 nm dan 140 ± 1,25 nm,
adalah kemampuan Tween 80 untuk mengurangi ketegangan
antarmuka antara komponen lipid dan air, sehingga
mengakibatkan penurunan ukuran vesikuler [68]. Pengaruh PL90G,
konsentrasi Tween 80, dan persen gliserol pada ukuran vesikel
diwakili oleh plot permukaan 3-D seperti yang ditunjukkan pada
Gambar.1B.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Studi pelepasan in vitro
Berdasarkan uji ANOVA, model interaksi kuadrat signifikan (P=0,0006)
untuk % data CDXR yang diamati, dengan nilai F sebesar 34,88, yang
cocok dengan data tersebut. Data yang diperoleh mengungkapkan
bahwa formulasi GLYS yang disiapkan berbeda secara efisien
melepaskan DXH dalam pola yang berkelanjutan (dari 30,96±2,5%
menjadi 60,52±1,51% selama 24 jam), sedangkan larutan DXH dengan
cepat melepaskan 100% obat asli dalam 4 jam. Temuan ini sejalan
dengan penelitian sebelumnya tentang DXH [6]. Dalam penelitian yang
dilaporkan sebelumnya, DXH yang dilepaskan dari gel proniosomal yang
diformulasikan dan gel proniosom mukoadhesif setelah 24 jam
diinformasikan masing-masing sebesar 30% dan 24%. Hal ini
menunjukkan bahwa formulasi DXH-GLYS kami mencapai tingkat DXH
yang lebih tinggi dan pola pelepasan yang lebih berkelanjutan
dibandingkan penelitian sebelumnya. Model kuadrat dari % data CDXR
direpresentasikan dalam faktor-faktor yang dikodekan dengan
persamaan polinomial berikut:
CDXR = +51,69 − 8,51SEBUAH -6.55B+1.67C+3.87AB
+ 2.53AC -0,14SM -6.61A2− 1,65B2+ 0,35C2
(11)
Tanda negatif dari istilah A menunjukkan bahwa konsentrasi
PL90G memiliki efek antagonis yang signifikan terhadap% CDXR (p
<0,0001). %CDXR F1 yang terdiri dari 4% PL90G dan F3 yang terdiri
dari 2% PL90G masing-masing adalah 34,08 ± 2,00% dan 41,17 ±
1,42%. Penurunan %CDXR seiring dengan meningkatnya
konsentrasi PL90G bukanlah hal yang mengejutkan. Dampak yang
menyedihkan ini mungkin disebabkan oleh pembentukan misel
silinder panjang pada konsentrasi PL90G yang lebih tinggi,
sehingga membentuk struktur jaringan yang menahan obat.
Akibatnya, jumlah DXH yang tersedia untuk disebarkan berkurang [
69]. Demikian pula dengan mengamati dampak persen gliserol
terhadap % CDXR, diketahui bahwa persen gliserol menunjukkan
pengaruh negatif yang signifikan terhadap % CDXR (P<0,0001),
dimana % CDXR F10 yang mengandung 20% gliserol dan F14 yang
mengandung 40% gliserol berturut-turut adalah 58,83 ± 0,89% dan
43,96 ± 1,20%. Hasil ini dapat disebabkan oleh sifat osmotik serta
higroskopisitas gliserol, yang memungkinkannya menarik air dari
media pelepas ke kompartemen donor, menyebabkan konsentrasi
campuran air/gliserol menjadi tidak seimbang, sehingga
mengakibatkan obat tambahan terperangkap di dalamnya. GLYS
dan mengurangi penghabisan DXH. Lebih lanjut, seperti yang
diuraikan sebelumnya dalam evaluasi EE%, peningkatan persentase
gliserol terjadi pada ukuran vesikel yang besar, akibatnya
mengurangi luas permukaan yang tersedia untuk pelepasan DXH [
27,28]. Memang benar, pelepasan obat dari GLYS sangat
dipengaruhi oleh ukuran partikelnya. Kecepatan pelepasan vesikel
berukuran kecil lebih tinggi dibandingkan vesikel berukuran besar.
70]. Konsentrasi tween (C) menunjukkan pengaruh moderat
terhadap % CDXR (p = 0,0607). Hasil konsentrasi PL90G, Tween 80,
dan persen gliserol
3093
% CDXR secara grafis digambarkan oleh plot permukaan 3
dimensi pada Gambar.2A.
Analisis regresi linier digunakan untuk menganalisis
data rilis DXH untuk menentukan urutan rilis DXH-GLYS.
Tergantung pada koefisien determinasi dengan nilai
tertinggi (R2), pelepasan DXH dari formulasi GLYS yang
berbeda telah mematuhi mekanisme kendali difusi
Higuchi, yang merupakan model pelepasan umum
untuk hampir semua pembawa nanovesikular.
Studi permeasi kulit ex vivo
Ex-vivoanalisis permeasi adalah pendekatan yang
bermanfaat untuk memprediksi dan memberikan beberapa
indikasi tentang kemanjuran sistem penghantaran obat
secara in vivo [71]. Epitel rektum umumnya diketahui mirip
dengan epitel saluran cerna bagian atas, dan permeasi
transeluler tampaknya menjadi mekanisme utama
penetrasi obat melintasi mukosa rektal.72]. Parameter
permeasi DXH dari DXH-GLYS dihitung dan diwujudkan
dalam Tabel S2. Gambar S1 mengilustrasikan bahwa
formulasi DXH-GLYS memiliki permeasi DXH yang jauh lebih
tinggi di seluruh mukosa rektal per satuan luas setelah 24
jam (Q24berkisar antara 300,23 ± 7,00 hingga 540,07 ± 19,57
μg/cm2) dibandingkan solusi DXH dengan jumlah DXH yang
sama (Q24223,03 ± 4,7 g/cm2). Pengaruh variabel
independen terhadap Q24dipasang ke model kuadrat
tergantung pada nilai R terbesarnya2. Model kuadrat yang
diusulkan memiliki nilai F sebesar 52,13 dan signifikan
secara statistik (P=0,0002). Persamaan (10) menunjukkan
hasil variabel independen pada Q24dalam nilai kode:
24= + 432,37 − 71,50SEBUAH +41.17B+24.77C+17.87AB
+ 16.99AC+27.39SM +28.57A2− 12.93B2− 14.02C2
(12)
Sehubungan dengan Persamaan.10, tanda negatif yang diamati
pada suku (A) mengungkapkan bahwa peningkatan konsentrasi
PL90G mempunyai dampak negatif yang signifikan terhadap Q24
dari DXH (P<0,05), dimana Q24F2 yang mengandung 2% PL90G dan
F9 yang mengandung 4% PL90G adalah 522,21 ± 18,03 dan 332,5 ±
10,99 µg/ cm2, masing-masing. Secara umum, kehadiran PL90G,
yang memiliki afinitas kuat terhadap membran biologis, sebagai
komponen utama GLYS membantu meningkatkan efisiensi
permeasi DXH. Temuan penting adalah bahwa Q24nilai DXH-GLYS
ditemukan menurun secara bersamaan dengan peningkatan
konten PL90G. Perbedaan ini dapat diperdebatkan berdasarkan
pembentukan GLYS berukuran besar yang kurang dapat
dideformasi dan lebih utuh yang terbentuk pada konsentrasi PL90G
yang lebih tinggi. Oleh karena itu, karena kekakuan yang dihasilkan
dari GLYS yang berkembang pada tingkat PL90G yang lebih tinggi,
DXH tidak mampu melewati mukosa rektal.73,74]. Hasil ini sejalan
dengan hasil yang dikumpulkan dari studi pelepasan in vitro. Dalam
garis paralel, terjadi peningkatan DXH EE%.
13
3094
Gambar 2Plot permukaan respons 3D menunjukkan pengaruh variabel independen pada (A) %CDXR dan (B) Q24(μg/cm2)
dari peningkatan konsentrasi PL90G secara tidak langsung
dapat mengakibatkan penurunan fleksibilitas vesikel, yang
saling terkait dengan pembatasan fluiditas fosfolipid yang
disebabkan oleh molekul obat, sehingga mengurangi permeasi
DXH [75,76].
Efek sinergis yang signifikan diamati untuk konsentrasi Tween
80 dan persentase gliserol pada Q24DXH yang dibuktikan dengan
tanda positif (B) dan (C) pada persamaan di atas. Q24F9 memiliki 5%
Tween 80 dan F13 memiliki 15% tween 80 adalah 315,5 ± 10,99,
405,6 ± 9,85 µg/ cm2, masing-masing, sementara Q24F10 yang
mengandung 20% gliserol dan F14 yang mengandung 40% gliserol
adalah 370,45 ± 7,0, 500,32 ± 15,29 µg/cm2, masing-masing.
Peningkatan permeabilitas DXH secara signifikan melintasi mukosa
rektum setelah 24 jam dari GLYS yang dirakit dengan meningkatkan
konsentrasi Tween 80 dan gliserol (aktivator tepi) dapat
dikorelasikan dengan peningkatan fleksibilitas GLYS yang
dikembangkan dengan meningkatkan konsentrasinya, yang
meningkatkan pelepasan DXH dari GLYS. nanovesikel dan dengan
demikian memfasilitasi difusi DXH melalui epitel rektal [77,78].
Deformabilitas dan fluiditas lapisan ganda fosfolipid GLYS juga
memungkinkan mereka untuk masuk melalui membran biologis
rektum dengan lebih mudah [35,79]. GLYS baru ini tampaknya
menggabungkan fitur vesikel elastis dan vesikel yang mengandung
penambah penetrasi [80–82]. Pengaruh konsentrasi PL90G, Tween
80, dan persen gliserol terhadap Q24(µg/cm2) secara grafis
digambarkan oleh plot permukaan 3-D pada Gambar.2B.
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Optimasi
Mengenai data yang dianalisis dengan ANOVA, tidak ada
kekurangan yang signifikan untuk respons apa pun. Pendekatan
keinginan dan optimasi numerik digunakan untuk menentukan
komposisi formulasi GLYS yang optimal. Pakar Desain®perangkat
lunak telah menyarankan level A, B, dan C berdasarkan
pemaksimalan Y1, Y3, Y4, dan minimalisasi Y2 untuk menyiapkan
formulasi yang dioptimalkan sesuai dengan komposisi berikut: 2%
b/v PL90G, 23,01% v/v gliserol, dan 15% w/w Tween 80. Komposisi
ini dipilih tergantung pada formulasinya, dengan indeks keinginan
yang tinggi (0,828){Venugopal, 2016 #37;Venugopal, 2016 #37}.
Respons yang diperoleh dari formulasi baru yang telah disiapkan
sangat sesuai dengan nilai prediksi dengan persentase kesalahan
yang dapat diterima, seperti terlihat pada Tabel2. Lebih-lebih lagi,
nilai yang diamati dan diprediksi tidak berbeda secara signifikanP
≤0,05, menunjukkan bahwa proses optimasi dapat diandalkan. Nilai
PDI formulasi GLYS yang dioptimalkan adalah 0,348±0,09,
menunjukkan homogenitas dispersi yang baik.
Evaluasi pelepasan in vitro dari formulasi
DXH‑GLYS yang dioptimalkan
Angka3menunjukkan bahwa formulasi DXH-GLYS yang
dioptimalkan memiliki perilaku pelepasan berkelanjutan untuk DXH
dibandingkan dengan solusi DXH.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103 3095

Meja 2Nilai prediksi dan eksperimental dari formulasi nano-gliserosom DXH yang dioptimalkan (berarti ±SD,N=3)

fosfolipon Gliserin Dua belas konsentrasi Y1 Y2(nm) Y3(%) Y4(µg/cm2) keinginan

konsentrasi 90G persen (%) (% b/b dari total
(%b/v) (%v/v) lemak)

Nilai yang diprediksi 2% 23,01% 15% 87.4 135.14 59.67 484.15 0,822
Eksperimental 2% 23,01% 15% 86.66 130.34 58.44 475.34 0,822
nilai ±1,48 ±16.22 ±1,08 ±7,08
Bias% –– –– –– 0,85 3.68 2.1 1.85 ––

%Bias = (nilai prediksi-nilai eksperimen)/nilai eksperimen

Morfologi formulasi DXH‑GLYS yang dioptimalkan
Formulasi DXH-GLYS yang dioptimalkan muncul oleh TEM sebagai titik-
titik hitam, mewakili vesikel dengan permukaan berbentuk bola dan
halus, tanpa aglomerasi atau kristal DXH, seperti yang digambarkan
pada Gambar.4. Gambar TEM mengungkapkan vesikel dengan ukuran
nanometrik, terkait erat dengan ukuran vesikel yang terdeteksi
menggunakan pendekatan DLS.
Stabilitas fisik formulasi DXH‑GLYS yang
dioptimalkan
Setelah 90 hari penyimpanan, dapat dideteksi dari studi stabilitas bahwa
formulasi DXH-GLYS yang dioptimalkan tidak berbeda secara signifikan
dengan formulasi segar dalam hal EE%, ukuran gliserosom, atau ZP (P<
0,05). Tidak ada pengendapan atau pemisahan lapisan yang terlihat
dalam formulasi yang dioptimalkan, yang menunjukkan bahwa
formulasi tersebut stabil secara fisik.

ZP dari formulasi DXH‑GLYS yang dioptimalkan

ZP digunakan sebagai indikator stabilitas GLYS, yang mencerminkan
kecenderungan nanopartikel untuk aglomerasi. Formulasi yang
dioptimalkan memiliki ZP tinggi (+15 mV), yang menunjukkan stabilitas
vesikel. Seperti dilaporkan sebelumnya dalam literatur, DXH memiliki
gugus kationik, sehingga adsorpsi obat pada permukaan menggeser ZP
vesikel GLYS ke arah sisi positif.6,32].
Gambar 3%DXH kumulatif dilepaskan dari formulasi nano-gliserosom
yang dioptimalkan terhadap larutan DXH oral dalam buffer fosfat pH.7.4
Evaluasi gel in situ DXH‑GLYS
Gel in situ DXH-GLYS yang dibuat terlihat elegan, putih,
homogen, dan halus tanpa gelembung udara atau gumpalan.
Mukosa rektal dapat menahan sediaan yang memiliki pH
6,8-7,4 [9]; sementara itu, nilai pH gel in situ DXH-GLYS yang
dioptimalkan ditemukan sebesar 7,05, sehingga dapat
ditoleransi secara rektal dan diharapkan bebas dari dampak
berbahaya terkait pH. Selanjutnya, persentase kandungan DXH
gel in situ adalah 98,92 ± 1,19%, menunjukkan homogenitas
yang baik. Daya sebar formulasi gel in situ juga memainkan
peran penting dalam kemanjuran gel sebagai sistem
penghantaran obat yang dapat meningkatkan luas permukaan
yang tersedia untuk penyerapan DXH di tempat pemberian.
Formulasi gelnya mudah dioleskan (diameter 5,7 cm). Selain itu,
gel in situ DXH-GLYS yang dirakit memiliki kekuatan gel 45,7
detik, menunjukkan bahwa gel in situ dapat dianggap masuk
akal untuk penggunaan rektal.
Memang benar, kisaran suhu gelasi in situ yang ideal adalah 30
hingga 36 °C. DXH-GLYS in situ-gel diubah dari keadaan cair
menjadi gel setelah 30 detik ketika dipertahankan pada suhu 33 ±
0,09 °C, dan tetap utuh selama beberapa jam (++) sesuai dengan
pengkodean kapasitas pembentuk gel yang telah disebutkan
sebelumnya. Waktu gelasi yang singkat dari formulasi tersebut
menunjukkan bahwa formulasi tersebut dapat membentuk gel
dengan cepat setelah pemberian rektal, sehingga mencegah
kebocoran bentuk sediaan dari anus. Selain itu, kekuatan bioadhesif
gel GLYS in situ dihitung sebesar 14.582,8± 2,39 dyne/ cm2, yang
cukup tinggi untuk mencegah formulasi gel mencapai ujung usus
besar, tempat terjadinya efek lintas pertama. Hasil ini mungkin
berkorelasi dengan tingginya

13
3096
Gambar 4Fotomikrograf TEM
dari formulasi nanogliserosom
DXH yang dioptimalkan
berat molekul dan viskositas HPMC yang tertanam, karena
berat molekul yang lebih tinggi sangat penting dalam
memaksimalkan bioadhesi melalui keterikatan dan atraksi van
der Waals [43].
Selain itu, gel in situ DXH-GLYS yang dioptimalkan memiliki
nilai viskositas 1113,28 ± 10,65 pada 25 °C dan 6679,7 ± 9,22 cps
pada 37 °C dengan konstanta Farrows lebih besar dari satu (N=
3.43), mengkonfirmasikan karakteristik penipisan geser dari gel
nanogliserosom yang dikembangkan, Gambar S2. Luas loop
histeresis juga dihitung sebesar 2449,216 (Dyne/cm2.detik).
Agaknya, laju geser yang lebih tinggi menyebabkan viskositas
yang lebih rendah dan sebaliknya. Karena rektum bersifat
konstan dan statis dibandingkan dengan GIT bagian atas, laju
gesernya diyakini minimal, dan viskositas maksimum formulasi
tidak akan berubah setelah pemberian, sehingga membantu
menghindari kebocoran gel dari tempat pemberian.8].
Mengenai uji lokalisasi in vivo, warna biru dari formulasi
gel in situ DXH-GLYS yang dioptimalkan terdeteksi dengan
jelas di rektum setelah 5 menit setelah pemberian.
Kemudian, setelah 6 jam, warna biru gel in situ juga terlihat
di rektum 4 cm di atas anus, namun memudar. Hal ini
menunjukkan bahwa posisi gel di rektum tidak berubah
secara signifikan dari waktu ke waktu dan tidak teramati di
usus besar. Hasil ini menunjukkan bahwa kekuatan
mukoadhesif formulasi gel cukup untuk menahannya di
rektum selama lebih dari 6 jam.
Mengenai studi pelepasan in vitro dan permeasi ex vivo,
hasil yang diperoleh mengungkapkan bahwa dispersi GLYS
obat bebas dan GLYS yang mengandung obat dalam gel
poloxamer in situ menghasilkan penurunan jumlah DXH
yang dilepaskan dan diserap dari keduanya. Sikap ini
pertama-tama dapat dianggap berasal dari “efek reservoir
ganda”, yang terjadi ketika vesikel digabungkan
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
ke dalam matriks gel sebagai reservoir obat, mencegah
difusi obat dari sistem gel ke media sekitarnya [83]. Kedua,
viskositas formulasi juga mempengaruhi jumlah DXH yang
dilepaskan atau diserap karena obat dilepaskan dari
matriks gel melalui difusi melintasi saluran air ekstramisel,
dan viskositas gel yang tinggi menghambat proses ini.84].
Di sisi lain, parameter permeasi formulasi gel in situ DXH-
GLYS (Q24= 450,25 ± 12,54 g/cm2meresap setelah 24 jam, Jss
= 30,42 μg/cm2/h) secara signifikan lebih tinggi
dibandingkan gel obat bebas (Q24= 199,55 ± 20,11 g/cm2, Jss
= 11,586 g/cm2/h), yang berkontribusi terhadap efek
peningkatan permeasi dari GLYS yang tergabung seperti
dijelaskan sebelumnya, Gambar.5. Rasio peningkatannya
adalah 2,62. Sepengetahuan kami, laporan sebelumnya
menginformasikan bahwa fluks DXH dari gel proniosom
mukoadhesif DXH intranasal ditemukan sebesar 16,1 μg/cm
2/H [85]. Menurut temuan kami, gel in situ DXH-GLYS
menunjukkan fluks 30,42 μg/cm2/H. Hasil ini
mengungkapkan keunggulan formulasi kami dibandingkan
penelitian sebelumnya dalam meningkatkan permeasi DXH
di seluruh mukosa rektal.
Studi farmakodinamik
Insufisiensi serotonin dan norepinefrin adalah tanda klinis
depresi, yang ditandai dengan penurunan fungsi dan
kesejahteraan, kelambatan pergerakan, dan ketidakhadiran
kerja yang berlebihan.86]. Pada tikus, para peneliti telah
menilai mobilitas untuk membedakan efek obat,
menentukan peran fungsional berbagai sistem
neurobiologis, dan menyaring senyawa dengan potensi
psikoaktivitas [56, 87].
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Gambar 5DXH kumulatif meresap per satuan luas setelah 24 jam (Q24μg/cm2) gel in-
situ termosensitif bermuatan nano-gliserosomal DXH yang dioptimalkan
dibandingkan dengan gel in-situ yang memuat DXH bebas
Setelah pengobatan dengan DXH-GLYS, kami mengamati
peningkatan signifikan dalam aktivitas perilaku yang
disebabkan oleh pemulihan neurotransmiter. DXH
meningkatkan kadar serotonin dan norepinefrin di korteks
frontal tikus dan hipotalamus dengan menghambat
pengambilan kembali mereka ke dalam neuron prasinaps,
sehingga mempertahankan molekul di celah sinaptik lebih
lama. Karena neurotransmiter tetap berada di sinaps untuk
waktu yang lama, mereka terus berikatan dengan reseptor
neuron pascasinaps, memicu efek fisiologis yang terkait
dengannya. Peningkatan neurotransmiter secara eksklusif
meningkatkan waktu memanjat dan berenang serta berbagai
aktivitas perilaku pada tikus.
Tes renang paksa (FST)
FST adalah tes perilaku yang banyak digunakan pada tikus untuk
menilai potensi kemanjuran obat antidepresan baru dan
memprediksi keberhasilan terapi antidepresan pada manusia.88].
Tes renang bekerja berdasarkan gagasan untuk menghasilkan
imobilitas, perilaku seperti depresi, dan kemudian menentukan
apakah obat antidepresan dapat membalikkannya. Seperti yang
digambarkan pada Gambar.6A, terdapat pengurangan waktu
imobilitas yang signifikan dengan memberikan perlakuan pada
hewan dengan DXH. Nilai rata-rata waktu imobilitas untuk kedua
kelompok yang diberi perlakuan (oral dan rektal) ditemukan
signifikan bila dibandingkan dengan kelompok normal atau depresi
(P<0,05). Tikus yang diberikan secara rektal menunjukkan
penurunan yang signifikan dalam periode imobilitas total (33,5 ± 3,1
detik) dibandingkan dengan kelompok perlakuan larutan oral (69 ±
4,5 detik). Selain itu, setelah 24 jam penyelidikan, tikus dalam
kelompok gel rektal DXH meningkat (24 ± 1,1 detik) (P<0,05) dan
berenang (190 ± 10 detik) (P<0,05) lebih banyak dibandingkan tikus
dalam larutan oral DXH dan kelompok kontrol.
3097
Tes suspensi ekor
Uji suspensi ekor menunjukkan bahwa tikus yang diobati dengan gel in
situ DXH-GLYS memiliki waktu imobilitas yang jauh lebih rendah (23,25 ±
3,3 detik) dibandingkan tikus yang diobati dengan larutan DXH oral (54,5
± 4,4 detik)(P<0,01), menunjukkan bahwa dosis DXH rektal memiliki
aktivitas antidepresan yang lebih baik daripada dosis oral DXH, Gambar.
6B. Hal ini mungkin terkait dengan pemeliharaan konsentrasi DXH
plasma yang konstan dengan pemberian DXH-GLYS secara rektal.
Uji kesukaan sukrosa (SPT)
Persentase preferensi sukrosa tikus yang dinilai setelah 1 jam
dan 12 jam dibandingkan, dan hasilnya disajikan pada Gambar.
6C. Nilai persen setelah 12 jam lebih besar dibandingkan
setelah 1 jam. Pemberian rektal memiliki preferensi sukrosa
tertinggi (85,66% ± 2,08) bila dibandingkan dengan kelompok
larutan DXH oral (64,6% ± 0,5) dan efeknya sangat mirip
dengan kelompok kontrol negatif.
Uji lapangan terbuka (OFT)
Tikus kontrol yang mengalami depresi mengalami penurunan yang
signifikan(P<0,05) jarak tempuh keseluruhan dan persentase jarak
zona pusat lebih rendah (1503 ± 3,55 cm & 0,9 ± 0,1%) dibandingkan
tikus kontrol normal (2063 ± 1,13 cm & 3,6 ± 0,5%). Sementara itu,
kelompok perlakuan gel in situ DXH-GLYS rektal memiliki jarak
tempuh keseluruhan dan % jarak zona pusat yang jauh lebih tinggi
(2583 ± 5,0 cm & 7 ± 0,9%) dibandingkan larutan DXH oral (2283 ±
2,8 cm & 4,6 ± 1,5%). ) dan kelompok kontrol normal (2063 ± 1,13
cm & 3,6 ± 0,5%), Gambar S3.
Pemberian makan yang ditekan secara baru (tes berbasis kecemasan)
(ABT)
Tikus yang diobati dengan antidepresan, khususnya yang
diberikan melalui rute rektal, menunjukkan latensi makan yang
jauh lebih pendek dalam situasi baru (latensi makan di
lingkungan baru) (60,3 ± 4,5 detik) dibandingkan kontrol negatif
(63,6 ± 3,2 detik) dan kelompok depresi positif (82,3 ± 2,5 detik),
serta bila dibandingkan dengan kelompok larutan DXH oral
(73,6 ± 3,2 detik), Gambar S4.
Studi farmakokinetik
Untuk mempelajari kinerja in vivo dari gel in situ DXH-GLYS yang
dioptimalkan, gel in situ DXH bebas, dan membuat perbandingan
dengan larutan DXH oral, uji LC-MS/MS digunakan untuk mengukur
DXH guna memperkirakan parameter farmakokinetik. DXH dalam
plasma tikus. Angka7menggambarkan
13
3098
Gambar 6A. Analisis perilaku (Immobilitas, Berenang & Memanjat) setelah tes
berenang paksa (FST) untuk dua persiapan (oral & rektal) dibandingkan
dengan tikus normal dan tikus depresi.B. Uji suspensi ekor (TST), imobilitas
untuk dua sediaan (oral & rektal) dibandingkan dengan tikus normal dan tikus
depresi.C. Pengaruh kekurangan makanan sebagai stres ringan terhadap
persentase preferensi sukrosa pada tikus terhadap dua sediaan
profil konsentrasi-waktu DXH plasma rata-rata setelah
pemberian larutan DXH oral dan aplikasi rektal dari gel in
situ DXH-GLYS yang dioptimalkan dan gel in situ DXH bebas.
Parameter farmakokinetik yang dihasilkan diuraikan dalam
Tabel3. Jelas sekali, Cmaksnilai gel in situ DXH-GLYS rektal
(247,75 ± 26,37 ng/ml pada Tmaks= 6 jam) secara signifikan
lebih tinggi (P<0,0001) dibandingkan larutan DXH oral
(136,86 ± 19,42 ng/ml pada Tmaks= 4 jam). Selanjutnya,
konsentrasi maksimum 160,46 ng/ml dicapai pada 5,2 jam
untuk gel in situ DXH bebas rektal. Kadar larutan DXH oral
dalam plasma turun dengan cepat beberapa jam setelah
pemberian. Di sisi lain, formulasi rektal mempertahankan
konsentrasi plasma DXH dari waktu ke waktu. AUC yang
dihitung(0–∞)gel GLYS in situ rektal (13,699.63 ng.h/ml) dan
gel in situ DXH bebas (7962.48 ng.h/ ml) jauh lebih tinggi (P
<0,0001) (masing-masing 2,24 kali lipat dan 1,30 kali lipat)
bila dibandingkan dengan larutan DXH oral (6106,6 ng.h/
ml). itu1/2adalah 18,36 ± 3,91 jam untuk larutan DXH oral,
sedangkan 20,75 ± 4,6 jam untuk gel in situ DXH bebas
rektal dan 25,91 ± 6,15 jam untuk formulasi GLYS rektal.
T yang tertundamaksdan T yang berkepanjangan1/2untuk kedua formulasi
rektal relatif terhadap larutan DXH oral disimpulkan adanya keterbelakangan
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
tions (lisan & rektal). Preferensi sukrosa diukur dalam 1 jam (biru) dan
dalam 12 jam (merah). Tikus yang depresi menunjukkan penurunan
preferensi sukrosa pada tikus. Hasil disajikan sebagai mean±SD,P<.05,
dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (tikus normal) dan
kontrol positif (tikus depresi).
dalam pelepasan DXH yang dapat diakreditasi karena alasan
berikut: (i) matriks gel HPMC bioadhesif memiliki kemampuan
untuk meningkatkan viskositas produk secara keseluruhan dan
mendistorsi atau menekan saluran air ekstra-misel dari misel
poloxamer yang melaluinya DXH dapat berdifusi [89]; (ii)
kemampuan HPMC dalam menurunkan laju konversi sol-gel dari
kedua formulasi gel karena ia berikatan dengan rantai polietilen
oksida yang ada dalam molekul poloksamer, sehingga
mempercepat dehidrasi dan meningkatkan keterikatan molekul-
molekul yang berdekatan dengan ikatan hidrogen antarmolekul;
dan (iii) lapisan mukosa rektum terdiri dari rantai oligosakarida
dengan asam sialat, sehingga polimer mukoadhesif dengan gugus
hidrofilik seperti gugus hidroksil dapat berikatan kuat dengan
rantai oligosakarida, menghasilkan kekuatan bioadhesif yang lebih
besar pada rektum, dan oleh karena itu a penundaan rilis DXH [13].
Oleh karena itu, pemberian rektal baik gel GLYS in situ atau gel in
situ obat bebas menunjukkan profil penyerapan yang lambat untuk
DXH, dengan T tertunda.makssampai difusi obat sempurna dari
matriks gel ke lingkungan sekitar dan kemudian ke darah sistemik.
Sebaliknya, waktu tinggal DXH yang jauh lebih tinggi pada mukosa
rektal yang dihasilkan oleh gel GLYS in situ dibandingkan dengan
gel DXH in situ bebas mungkin disebabkan oleh efek berkelanjutan
ganda.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103 3099

Gambar 7Profil waktu konsentrasi

plasma duloxetine HCl pada tikus
setelah pemberian larutan DXH
oral, gel in situ nano-gliserosomal
DXH yang dioptimalkan secara
rektal, dan gel in situ DXH bebas
rektal (rata-rata±SD)

diinduksi oleh sistem vesikuler dan pembentuk gel.14].
Temuan ini konsisten dengan studi pelepasan in vitro DXH.
Ketersediaan hayati relatif DXH sebagai gel in situ GLYS
rektal dan gel in situ DXH bebas masing-masing adalah
130,38% dan 224,1%, dibandingkan dengan larutan DXH oral.
Peningkatan bioavailabilitas DXH yang luar biasa ini dapat
dijelaskan dalam hal melewati metabolisme lintas pertama di
hati serta mengatasi hidrolisis asam DXH di GIT, yang keduanya
dicapai melalui pemberian rute rektal. Secara bersama-sama,
efek mukoadhesif HPMC dan basa (Poloxamers) dapat
mencegah formulasi gel bergerak ke vena hemoroid bagian
atas, yang mengalir ke vena mesenterika melalui vena portal
hepatik ke dalam hati, sehingga meningkatkan retensi rektum
bagian bawah. Penyerapan melalui vena hemoroid bagian
bawah, yang dilalui obat
dimasukkan langsung ke dalam sirkulasi sistemik, dapat meningkatkan
bioavailabilitas DXH [90]. Selain itu, efek peningkatan penetrasi GLYS
sebagai nanocargo merupakan faktor signifikan dalam peningkatan
bioavailabilitas DXH dibandingkan dengan gel in situ DXH bebas. Hasil
yang diperoleh menyiratkan bahwa gel in situ DXH-GLYS dapat secara
efektif menghantarkan DXH secara rektal.
Investigasi histopatologi
Pemeriksaan histopatologi dilakukan pada spesimen rektum
tikus untuk mendeteksi adanya iritasi atau kerusakan yang
diamati pada jaringan rektal setelah pemberian gel GLYS relatif
terhadap kontrol, Gambar.8. Dibandingkan dengan kelompok
kontrol, epitel rektum normal dan epitel penutup utuh

Tabel 3Parameter
Farmakokinetik Solusi DXH oral DXH Bebas Rektal Gel in situ Nanogliserosomal
farmakokinetik DXH memuat
parameter gel DXH rektal
gel nanogliserosom in situ
dan larutan DXH oral Cmaks(ng/ml) 136,86 ± 19,42 160,45 ± 19,22 247,75 ± 26,37
Tmaks(H) 4 ± 0,00 5,2 ± 0,97 6 ± 0,00
T1/2(H) 18,36 ± 3,91 20,75 ± 4,67 25,91 ± 6,15
Ke(H−1) 0,037 ± 0,002 0,033 ± 0,003 0,026 ± 0,004
MRT(jam) 30,47±5,24 41,53±6,4 8,29±54,81
AUC(0–72)(ng.h/ml) 5005,80±1080,17 6112,00±535,86 796,11±10.736,11
AUC(0-∞)(ng.h/ml) 6106,67±785,2 7962,48±797,76 13.699,63±2076,8
Ketersediaan hayati relatif 130.38 224.1

Cmaks: Konsentrasi serum maksimum, Tmaks: Saatnya mencapai Cmaks, AUC(0–72):Area di bawah kurva waktu konsentrasi
serum, danMRTBerarti waktu tinggal

13
3100
Gambar 8Fotomikrograf histopatologi (A) mukosa dubur yang tidak diobati dan (B) mukosa rektum diobati dengan formulasi gel DXH-nanogliserosomal in situ
yang dioptimalkan
beberapa sel goblet telah muncul di mukosa rektal
kelompok B yang menerima gel GLYS in situ tanpa
indikasi efek samping (eritema, iritasi, atau peradangan)
setelah pemberian rektal. Akibatnya, temuan ini
menunjukkan bahwa gel in situ DXH-GLYS dapat
dianggap aman.
Kesimpulan
Formulasi DXH-GLYS yang berbeda dikembangkan dan dioptimalkan
menggunakan desain Box – Behnken. GLYS yang disiapkan dapat
menggabungkan DXH dengan EE% yang tinggi, ukuran vesikel yang
sesuai, dan kemampuan permeasi DXH yang lebih tinggi di seluruh
mukosa rektal. Menurut penelitian PK, formulasi gel DXH-GLYS in situ
yang dioptimalkan dapat meningkatkan bioavailabilitas DXH sebesar
2,24 kali lipat dibandingkan dengan larutan DXH oral. Dengan demikian,
gel in situ DXH-GLYS yang dirancang dapat memberikan platform yang
aman dan efektif untuk pemberian DXH melalui rektal, mengatasi
kekurangan DXH oral, termasuk bioavailabilitas yang rendah dan
metabolisme hati yang ekstensif. Berdasarkan temuan penyelidikan PD,
gel in situ DXH-GLYS yang diberikan secara rektal menunjukkan
efektivitas antidepresan yang kuat dibandingkan dengan pemberian
DXH oral. Oleh karena itu,
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
gel in situ DXH-GLYS yang dirancang berpotensi mencapai manfaat
klinis dalam mengelola depresi dengan aman, berkelanjutan, dan
dalam jangka panjang.
Informasi tambahanVersi online berisi materi tambahan yang
tersedia dihttps://doi.org/10.1007/s13346-022-01172-z.
Ucapan Terima KasihPara penulis sangat berhutang budi kepada bank
pengetahuan Mesir (ekb) yang telah mendukung layanan penyuntingan naskah
dalam bahasa Inggris menggunakan enago.®layanan pengeditan.
Kontribusi penulisKonseptualisasi, Salem HF, Ali AA.; metodologi &
perangkat lunak, Rabea YK, Abo El-Ela; validasi,penulisan—
persiapan draf asli, Khallaf RA.
PendanaanPendanaan akses terbuka disediakan oleh The Science,
Technology & Innovation Funding Authority (STDF) bekerja sama dengan The
Egyptian Knowledge Bank (EKB).
Ketersediaan dataTak dapat diterapkan.
Deklarasi
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasiStudi in vivo
telah disetujui oleh pedoman komite etika hewan Universitas Beni-Suef,
protokol Helsinki, dan persetujuan mereka disortir sebelum dimulainya
percobaan (kode persetujuan: BSU-IACUC 021–190).
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
Persetujuan untuk publikasiSemua penulis telah membaca dan menyetujui
versi naskah yang diterbitkan.
Kepentingan yang bersaingPara penulis menyatakan tidak ada kepentingan yang bersaing.
Akses terbukaArtikel ini dilisensikan di bawah Lisensi Internasional Creative
Commons Atribusi 4.0, yang mengizinkan penggunaan, berbagi, adaptasi,
distribusi, dan reproduksi dalam media atau format apa pun, selama Anda
memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, berikan a
tautan ke lisensi Creative Commons, dan tunjukkan jika ada perubahan.
Gambar atau materi pihak ketiga lainnya dalam artikel ini termasuk dalam
lisensi Creative Commons artikel tersebut, kecuali dinyatakan lain dalam batas
kredit materi tersebut. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative
Commons artikel dan tujuan penggunaan Anda tidak diizinkan oleh peraturan
perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus
mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan
lisensi ini, kunjungihttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.
Referensi
1. Koponen H, dkk. Khasiat duloxetine untuk pengobatan
gangguan kecemasan umum: implikasi bagi dokter perawatan
primer. Pendamping perawatan primer untuk Jurnal psikiatri
klinis. 2007;9(2):100.
2. Anggota Parlemen Lunn, Hughes RA, Wiffen PJ. Duloxetine untuk mengobati
neuropati yang menyakitkan, nyeri kronis atau fibromyalgia.Database
Cochrane dari Revi Sistematis. 2014;(1).
3. Oleh Master FP, dkk. Afinitas komparatif duloxetine dan venlafaxine
terhadap transporter serotonin dan norepinefrin in vitro dan in
vivo, subtipe reseptor serotonin manusia, dan reseptor saraf
lainnya. Neuropsikofarmakologi. 2001;25(6):871–80.
4. Sharma A, Goldberg MJ, Cerimele BJ. Farmakokinetik dan
keamanan duloxetine, inhibitor reuptake dual-serotonin dan
norepinefrin. J Klinik Farmakol. 2000;40(2):161–7.
5. Turcotte JE, dkk. Penilaian sifat penghambatan reuptake
serotonin dan norepinefrin duloxetine pada subjek sehat.
Neuropsikofarmakologi. 2001;24(5):511–21.
6. Patel K, Padhye S, Nagarsenker M. Duloxetine HCl nanopartikel
lipid: persiapan, karakterisasi, dan desain bentuk sediaan.
AAPS PharmSciTech. 2012;13(1):125–33.
7. Ganesh M, dkk. Pengembangan duloxetine hidroklorida
memuat nanopartikel silika mesopori: karakterisasi dan
evaluasi in vitro. AAPS PharmSciTech. 2015;16(4):944–51.
8. Jannin V, dkk. Jalur rektal di Abad 21 untuk merawat anak-anak.
Adv Drug Deliv Rev.2014;73:34–49.
9. El-Leithy ES, dkk. Evaluasi hidrogel mukoadhesif yang diisi
dengan mikrosfer natrium-kitosan diklofenak untuk pemberian
rektal. AAPS PharmSciTech. 2010;11(4):1695–702.
10. El-Kamel A, El-Khatib M. Supositoria cair karbamazepin pembentuk
gel in-situ yang dapat dibalik secara termal. Pengantar obat.
2006;13(2):143–8.
11. Huang C, dkk. Formulasi supositoria berlapis ganda untuk
tinggal lama di rektum bawah. Yakuzaigaku. 1987;47(1):42–8.
12. Özgüney I, dkk. Evaluasi in vitro-in vivo dari pembentuk gel in-
situ dan supositoria cair ketoprofen termosensitif.
Farmakokinet Metab Obat Eur J. 2014;39(4):283–91.
13. Choi HG, dkk. Pengembangan supositoria cair asetaminofen in-situ-
gelling dan mukoadhesif. Farmasi Int J. 1998;165(1):33–44.
14. Moawad FA, Ali AA, Salem HF. Gel in-situ termosensitif yang dimuat
nanotransfersome sebagai sistem pengiriman rektal tizanidine HCl:
persiapan, kinerja in vitro dan in vivo. Pengantar obat.
2017;24(1):252–60.
3101
15. Miyazaki S, dkk. Gel xyloglucan yang dapat dibalik secara termal sebagai
sarana penghantaran obat rektal. J Rilis Kontrol. 1998;56(1–3):75–83.
16. Yeo WH, dkk. Supositoria cairan termosensitif yang mengandung
Docetaxel: optimalisasi sifat reologi. Res Farmasi Lengkungan.
2013;36(12):1480–6.
17. Jain S, Jain V, Mahajan SC. Sistem Pengiriman Obat Vesikular Berbasis
Lipid. Kemajuan di bidang Farmasi. 2014;2014: 574673.
18. Bozzuto G, Molinari A. Liposom sebagai perangkat nanomedis. Int J
Nanomed. 2015;10:975.
19. Ashtikar M, Nagarsekar K, Fahr A. Pengiriman transdermal
dari formulasi liposom – Evolusi teknologi selama tiga
dekade terakhir. J Rilis Kontrol. 2016;242:126–40.
20. Romero EL, Morilla MJ. Vesikel yang sangat mudah berubah bentuk dan sangat
cair sebagai sistem penghantaran obat yang potensial: pertimbangan teoritis
dan praktis. Int J Nanomed. 2013;8:3171.
21. Cevc G, Blume G. Vesikel lipid menembus ke dalam kulit utuh karena
gradien osmotik transdermal dan kekuatan hidrasi.Biochimica et
Biophysica Acta (BBA) -Biomembran. 1992;1104(1):226-232.
22. Touitou E, dkk. Etosom—pembawa vesikuler baru untuk
penyampaian yang lebih baik: karakterisasi dan sifat penetrasi
kulit. J Rilis Kontrol. 2000;65(3):403–18.
23. Din FU, dkk. Hidrogel bermuatan nanopartikel lipid padat termosensitif
ganda-terbalik yang baru untuk pemberian flurbiprofen secara rektal
dengan bioavailabilitas yang lebih baik dan mengurangi efek ledakan
awal. Farmasi dan biofarmasi j Eropa. 2015;94:64–72.
24. Ahmed OA, Badr-Eldin SM. Pengembangan film transdermal
invasomal berisi avanafil yang dioptimalkan: permeasi kulit ex vivo
dan evaluasi in vivo. Farmasi Int J. 2019;570: 118657.
25. Salama HA, dkk. Pengiriman olanzapine ke otak melalui
pemberian vesikel transfersomal intranasal. J Liposom Res.
2012;22(4):336–45.
26. Ascenso A, dkk. Studi pengembangan, karakterisasi, dan pengiriman
kulit dari vesikel ultradeformable terkait: transfersom, etosom, dan
transetosom. Int J Nanomed. 2015;10:5837.
27. Manca ML, dkk. Peningkatan efek perlindungan quercetin terhadap
kerusakan kulit akibat stres oksidatif melalui penggabungan dalam
nanovesikel. Koloid Surf, B. 2014;123:566–74.
28. Salem HF, dkk. Desain Formulasi dan Optimasi Gliserosom Lunak
Baru untuk Peningkatan Pengiriman Celecoxib dan Cupferron
secara Topikal oleh Desain Statistik Box-Behnken.Farmasi industri
pengembang obat. 2018 (baru saja diterima);1–34.
29. Manca ML, dkk. Gliserosom: Penggunaan campuran fosfatidilkolin
kedelai terhidrogenasi dan pengaruhnya terhadap fitur vesikel dan
penetrasi kulit diklofenak. Farmasi Int J. 2016;511(1):198–204.
30. Naguib MJ, dkk. Menyelidiki potensi pemanfaatan gliserosom
sebagai platform vesikuler baru untuk meningkatkan pengiriman
lacidipine intranasal. Farmasi Int J. 2020;582: 119302.
31. Melis V, dkk. Polimer-gliserosom yang dapat dihirup sebagai pembawa yang
aman dan efektif untuk pengiriman rifampisin ke paru-paru. Selancar Koloid,
B.2016;143:301–8.
32. Elsenosy FM, dkk. Penargetan Otak Duloxetine HCL melalui
Pengiriman Intranasal dari Loaded Cubosomal Gel: Karakterisasi In
vitro, Permeasi ex vivo, dan Studi Biodistribusi in vivo. Int
J Nanomed. 2020;15:9517.
33. khatoon M, dkk. Pengembangan dan Evaluasi Gel Proniosomal
Kitosan Tiol Teroptimal yang Mengandung Duloxetine untuk
Pengiriman Intranasal.AAPS PharmSciTech, 2019;20(7):288.
34. Castangia I, dkk. Pengaruh interkalasi diklofenak dan glikol pada
perakitan struktural vesikel pipih fosfolipid. Farmasi Int J.
2013;456(1):1–9.
35. Manca ML, dkk. Gliserosom: penyelidikan peran 1, 2-
dimyristoyl-sn-glisero-3-fosfatidikolin (DMPC) pada kinerja
perakitan dan pengiriman kulit. Farmasi Int J.
2017;532(1):401–7.
13
3102
36. Salem HF, dkk. Evaluasi dan optimalisasi niosom yang responsif terhadap pH
sebagai pembawa untuk pengobatan kanker payudara yang efisien. Obat
Memberikan Terjemahan Res. 2018;8(3):633–44.
37. Tentang HM, dkk. Spons vagina pembentuk gel in-situ yang baru dari
kubosom berbasis sildenafil sitrat untuk penargetan rahim. Pengantar
obat. 2018;25(1):1328–39.
38. Salem HF, dkk. Gel nanoethosomal transdermal baru dari
lercanidipine HCl untuk pengobatan hipertensi: optimasi
menggunakan desain Box-Benkhen, karakterisasi in vitro dan in
vivo. Obat Memberikan Terjemahan Res. 2020;10(1):227–40.
39. Hosny KM, dkk. Sistem nanovesikular yang dilengkapi dengan
penghambat fospodiesterase tipe-5 (avanafil) generasi kedua yang baru-
baru ini disetujui: I. Penapisan dan karakterisasi Plackett-Burman.J Obat
Memberikan Sci Technol. 2018;43:154–159.
40. Tentang HM, dkk. Nanotransfersomes dari Carvedilol untuk
pengiriman intranasal: formulasi, karakterisasi dan evaluasi in vivo.
Pengantar obat. 2016;23(7):2471–81.
41. Nasr M, dkk. Sistem aceclofenac vesikular: studi
perbandingan antara liposom dan niosom. J
Mikroenkapsul. 2008;25(7):499–512.
42. Schmolka IR. Kulit buatan I. Persiapan dan sifat gel pluronik
F-127 untuk pengobatan luka bakar.J biomed materi res.
1972;6(6):571–582.
43. Mansour M, dkk. Gel pembentuk in-situ ciprof loxacin
hidroklorida berbasis poloxamer mata. Pengembang Obat Ind
Pharm. 2008;34(7):744–52.
44. Yadav DJ, Kunjwani HK, Suryawanshi SS. Formulasi dan evaluasi
gel salbutamol sulfat in-situ termosensitif untuk sistem
penghantaran obat hidung. Ilmu Farmasi Int J Pharm.
2012;4(4):188–94.
45. Singh RM, Kumar A, Pathak K. Gel loratadine mukoadhesif in-situ yang
dipicu secara termal: kompleks β-siklodekstrin untuk pemberian melalui
hidung. AAPS PharmSciTech. 2013;14(1):412–24.
46. Makwana SB, Patel VA, Parmar SJ. Pengembangan dan karakterisasi
gel in-situ untuk formulasi mata yang mengandung ciprofloxacin
hidroklorida. Hasil dalam Ilmu Farmasi. 2016;6:1–6.
47. Lakshmi P, Harini K. Desain dan Optimasi gel in-situ hidung termo-
reversibel dari atomoxetine hidroklorida menggunakan desain
susunan ortogonal Taguchi. Jurnal Ilmu Farmasi Universitas Dhaka.
2019;18(2):183–93.
48. Elkomy MH, dkk. Pengiriman transdermal betahistine dihydrochloride melalui gel
termosensitif yang dioptimalkan: evaluasi penyerapan perkutan
menggunakan pertumbuhan tikus sebagai biomarker. Obat Memberikan
Terjemahan Res. 2018;8(1):165–77.
49. Kaur P, dkk. Pengiriman otak gel intranasal in-situ dari
pembawa polimer nanopartikel yang mengandung obat
antidepresan: penilaian perilaku dan biokimia. J Sasaran
Narkoba. 2015;23(3):275–86.
50. Rex A, Schickert R, Fink H. Efek seperti antidepresan dari
nikotinamida adenin dinukleotida dalam uji berenang paksa pada
tikus. Perilaku Biokimia Farmakol. 2004;77(2):303–7.
51. Sindhu P, dkk. Sistem mikroemulsi yang mengandung Duloxetine untuk
meningkatkan aktivitas perilaku dengan meningkatkan regulasi
serotonin dan norepinefrin di otak untuk pengobatan depresi. J Psikiater
Res. 2018;99:83–95.
52. Dia LW, dkk. Optimalisasi uji kekurangan makanan dan preferensi sukrosa
pada model tikus SD yang mengalami stres ringan kronis yang tidak
dapat diprediksi. Model hewan dan pengobatan eksperimental.
2020;3(1):69–78.
53. Bodnoff SR, dkk. Efek pengobatan antidepresan kronis pada
hewan model kecemasan. Psikofarmakologi.
1988;95(3):298–302.
54. Stedenfeld KA, dkk. Perilaku mencari hal baru memprediksi
kerentanan dalam model depresi hewan pengerat. Perilaku Fisiol.
2011;103(2):210–6.
13
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
55. Kumar B, dkk. Evaluasi farmakokinetik dan farmakodinamik Solid
self-nanoemulsifying delivery system (SSNEDDS) yang mengandung
kurkumin dan duloxetine dalam redaman nyeri neuropatik pada
tikus.Ilmu Neurol. 2020;1–13.
56. Alam MI, dkk. Pemberian intranasal pembawa lipid berstrukturnano
yang mengandung obat yang bekerja pada SSP: Studi dan estimasi
farmakodinamik dalam darah dan otak. J Psikiater Res.
2012;46(9):1133–8.
57. Bezerra MA, dkk. Metodologi permukaan respons (RSM)
sebagai alat optimasi dalam kimia analitik. Talanta.
2008;76(5):965–77.
58. Goyal G, dkk. Pengembangan dan karakterisasi gel niosomal
untuk pemberian benzoil peroksida topikal. Pengantar obat.
2015;22(8):1027–42.
59. Zhang K, dkk. Gliserosom yang dimediasi minyak atsiri meningkatkan
pengiriman paeoniflorin transdermal: optimasi, karakterisasi, dan
evaluasi in vitro dan in vivo. Int J Nanomed. 2017;12:3521–32.
60. Manca ML, dkk. Susunan molekul dan pembentukan bilayer yang
saling berhubungan disebabkan oleh alkohol atau polialkohol
dalam vesikel fosfolipid. Koloid Surf, B. 2014;117:360–7.
61. Ekambaram P, Abdul HSA. Formulasi dan evaluasi
nanopartikel lipid padat ramipril. Jurnal apoteker muda:
JYP. 2011;3(3):216–20.
62. Hao Y, dkk. Studi tentang enkapsulasi colchicine yang tinggi oleh
sistem niosom. Farmasi Int J. 2002;244(1–2):73–80.
63. Moolakkadath T, dkk. Persiapan dan optimalisasi nanovesikel lunak
berbasis gliserol yang dimuat fisetin dengan desain Box-Behnken.
Farmasi Int J. 2020;578: 119125.
64. Shelke S, dkk. Gel termoreversibel intranasal berbasis poloxamer 407
dari nanoethosomes yang mengandung zolmitriptan: studi
formulasi, optimasi, evaluasi dan permeasi. J Liposom Res.
2016;26(4):313–23.
65. Zhou H, dkk. Persiapan dan karakterisasi nanoemulsi lesitin
sebagai sistem pengiriman topikal. Lett.Res Skala Nano.
2010;5(1):224–30.
66. Moolakkadath T, dkk. Pengembangan formulasi
transethosomes untuk pengiriman fisetin dermal: desain Box-
Behnken, optimasi, penetrasi kulit in vitro, interaksi vesikel-
kulit dan studi dermatokinetik. Sel buatan, pengobatan nano,
dan bioteknologi. 2018;46(sup2):755–65.
67. Moolakkadath T, dkk. Fisetin memuat etosom biner untuk
pengelolaan kanker kulit dengan aplikasi kulit pada tikus yang
terpapar sinar UV. Farmasi Int J. 2019;560:78–91.
68. Sharma N, Madan P, Lin S. Pengaruh variabel proses dan formulasi
pada pembuatan nanopartikel polimer biodegradable yang
mengandung paclitaxel parenteral: Sebuah studi ko-surfaktan. Asia
J Farmasi Sci. 2016;11(3):404–16.
69. Varshosaz J, dkk. Pengembangan organogel berbasis nanoemulsi
lesitin untuk meningkatkan permeasi metoprolol melalui kulit tikus.
J Nanomater. 2013;2013:6.
70. Salem HF, dkk. Aktivator tepi dan polimer polikationik
meningkatkan formulasi nanoagglomerate vorikonazol berpori
untuk digunakan sebagai inhaler bubuk kering. J Liposom Res.
2016;26(4):324–35.
71. Ammar HO, dkk. Sistem matriks polimer untuk pemberian tramadol
hidroklorida dalam waktu lama, bagian II: evaluasi biologis. AAPS
PharmSciTech. 2009;10(3):1065–70.
72. Kamel R, Basha M, Abd El-Alim SH. Pengembangan sistem vesikular
baru menggunakan campuran biner sorbitan monostearat dan
ester asam lemak polietilen glikol untuk pengiriman rutin melalui
rektal.J liposom res 2013;23(1):28–36.
73. Abdel Messih HA, dkk. Nanoethosomes untuk pengiriman
transdermal tropisetron HCl: pemodelan prediktif multi-faktorial,
karakterisasi, dan permeasi kulit ex vivo. Pengembang Obat Ind
Pharm. 2017;43(6):958–71.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2022) 12:3083–3103
74. Barupal A, Gupta V, Ramteke S. Persiapan dan karakterisasi etosom untuk
pemberian topikal aceclofenac. Ilmu Pengetahuan Farmasi J India.
2010;72(5):582.
75. Uchino T, dkk. Karakterisasi dan permeasi kulit dari sistem
vesikular yang mengandung ketoprofen. Biofarmasi Eur J
Pharm. 2014;86(2):156–66.
76. Manca ML, dkk. Gliserosom: Alat baru untuk penghantaran obat melalui
kulit dan transdermal yang efektif. Farmasi Int J. 2013;455(1):66–74.
77. El Zaafarany GM, dkk. Peran aktivator tepi dan muatan permukaan dalam
mengembangkan vesikel ultradeformable dengan peningkatan pengiriman
kulit. Farmasi Int J. 2010;397(1–2):164–72.
78. Vesikula DMPC Westh P. Unilamellar dalam gliserol berair:
interaksi preferensial dan termokimia. Biofisis J.
2003;84(1):341–9.
79. Abdellatif MM, Khalil IA, Khalil MA. Sertaconazole nitrate
memuat sistem nanovesikular untuk menargetkan infeksi
jamur kulit: evaluasi in-vitro, ex-vivo, dan in-vivo. Farmasi Int J.
2017;527(1–2):1–11.
80. van den Bergh BA, dkk. Elastisitas vesikel dinilai dengan resonansi
putaran elektron, mikroskop elektron, dan pengukuran ekstrusi.
Farmasi Int J. 2001;217(1–2):13–24.
81. Manconi M, dkk. Pengembangan dan karakterisasi liposom yang
mengandung glikol sebagai pembawa diklofenak. Koloid Surf, A.
2009;342(1–3):53–8.
82. Manconi M, dkk. Pengiriman diklofenak melalui kulit secara ex vivo melalui
transkutol yang mengandung liposom dan mekanisme interaksi vesikel pada
kulit yang disarankan. Biofarmasi Eur J Pharm. 2011;78(1):27–35.
83. Nie S, dkk. Pluronik Termoreversibel®Hidrogel berbasis F127 yang
mengandung liposom untuk pengiriman paclitaxel yang terkontrol:
studi pelepasan obat in vitro, sitotoksisitas sel, dan serapan. Int J
Nanomed. 2011;6:151.
3103
84. Gandra SC, dkk. Gel flukonazol termoresponsif untuk pemberian topikal:
sifat reologi dan mekanik, pelepasan obat in vitro dan kemanjuran
antijamur. Teknologi Pengembang Farmasi. 2015;20(1):41–9.
85. Sohail MF, dkk. Pengembangan dan evaluasi gel proniosomal kitosan
tiolasi yang dioptimalkan yang mengandung duloxetine untuk
pengiriman intranasal. AAPS PharmSciTech. 2019;20(7):1–12.
86. Engleman EA, dkk. Peningkatan simultan monoamina ekstraseluler
dalam mikrodialisa dari hipotalamus tikus yang sadar oleh
duloxetine, penghambat serapan serotonin dan norepinefrin
ganda. Neuropsikofarmakologi. 1995;12(4):287–95.
87. Paulus MP, dkk. Organisasi perilaku tidak bergantung pada aktivitas
lokomotor pada strain tikus 129 dan C57. Resolusi Otak.
1999;835(1):27–36.
88. Porsolt RD, dkk. Perilaku putus asa pada tikus: model baru yang
sensitif terhadap pengobatan antidepresan. Farmakol Eur J.
1978;47(4):379–91.
89. Yuan Y, dkk. Gel in-situ termosensitif dan mukoadhesif berdasarkan
poloxamer sebagai pembawa baru untuk pemberian nimesulida
secara rektal. Farmasi Int J. 2012;430(1–2):114–9.
90. Al-Joufi F, dkk. Gel Rektal In-situ Mukoadhesif yang Mengandung
Rifampisin: Strategi untuk Meningkatkan Bioavailabilitas dan
Mengurangi Toksisitas Hati. Ilmu farmasi. 2021;13(3):336.
Catatan PenerbitSpringer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim
yurisdiksi dalam peta yang dipublikasikan dan afiliasi kelembagaan.
13