PEMERIKSAAN SEROLOGIS PENYAKIT

INFEKSI: TUBERKULOSIS,DEMAM
TIFOID, SIFILIS,
 TB DI INDONESIA
• PENYEBAB KEMATIAN KE DUA ( SKRT 92)
• KASUS 445.000/TAHUN
• PREVALENSI TB : 0,29 % ( SKRT 79-82 )
• MENINGGAL 175.000/TAHUN
• HIV + TB
• MULTIPLE DRUG RESISTANCE ( RIF + INH )
• USIA PRODUKTIF ( ¾ )

• SEPARUH TIDAK TERDIAGNOSIS !

 BTA DAHAK MIKROSKOPIS
LANGSUNG
• Keunggulan:
– Murah, praktis, cepat, spesifik
• Kelemahan:
– Kurang sensitiv
• Usaha meningkatkan sensitifitas:
– Pelaksanaan SPS (Sewaktu-Pagi-Sewaktu)
– Pengecatan Auramine, Rhodamine
 PROBLEM DIAGNOSTIK LAB
KONVENSIONAL TB
• BTA
– PENGUMPULAN BAHAN
(TB EKSTRA PULMONER & TB ANAK ? )
– PENGOLAHAN BAHAN
– KEMAMPUAN BACA
– Mycobacterium TB / Mycobacterium NON-TB (MOTT)

• BIAKAN
– WAKTU LAMA
– IDENTIFIKASI
 TUNTUTAN DIAGNOSTIK
MASA KINI
• PENGGANTI HAPUSAN
– HASIL < 2 JAM, DAPAT DITUNGGU
– CARA MUDAH , DAPAT DILATIH < 3 JAM
– INTERPRETASI MUDAH
– DAPAT DIGUNAKAN UNTUK PENDERITA
HIV
– SPESIFIK
 TES SEROLOGI TB

• NEGARA MAJU: KASUS SEDIKIT &

SARAN MEMADAI  MOLEKULER
• NEGARA BERKEMBANG: KASUS
BANYAK & DANA TERBATAS 
SEROLOGI
 INDIKASI SEROLOGI TB
1. BTA DAHAK NEGATIF
2. TB EKSTRAPULMONUM
3. TB ANAK
4. SPESIFISITAS:
– TGT JENIS ANTIGEN (REAKSI
SILANG)
5. KONTROVERSI KARENA:
– Kurang pemahaman patogenesis
– Bersikukuh pada Postulat Koch
Fishman AP, Elias JA.Pulmonary disease and disorder.4ed, New york, Mcgrawhill,2008.p792
 Patogenesis (Paradigma Th1 / Th2)
Mycobacterium tuberculosis

ESAT-6 protein lain

Faktor Virulensi
Infeksi
Respons imun
Selluler Humoral
Th1  IFN-, IL12 Th2  Sel B  Ab
Th1 Th2
dominan dominan
Proteksi Marka
diagnostik

Sehat Sakit (TB aktif)

Th1 >> Th2 Th2 >> Th1
 DETEKSI TUBERKULOSIS
LATEN
Pengganti Uji tuberculin (PPD) : deteksi adanya
serokonversi
Pengukuran IFN-γ dari limfosit T, setelah stimulasi
dengan PPD/ESAT-6
• ELISPOT
• QuantiFERON-TB (IGRA = Interferon γ Release
Assay)  diakui ISTC
Adanya reaksi: pernah kontak dgn M. tb
Aktif atau Latent  ditentukan oleh cutoff point.
 KESIMPULAN
DIAGNOSIS LABORATORIUM UNTUK TB
MASIH TERUS DIKEMBANGKAN
• Baku emas: tetap Biakan / Kultur
• BTA dahak: ditingkatkan sensitivitasnya
• Metode lain: terutama pada BTA negatif
• Metode canggih: lebih cepat , lebih mahal
• Perlu dipelajari untung ruginya setiap
diagnostik baru
• Lab perlu berhati-hati memilih tes diagnostik,
sesuaikan dengan kebutuhan.
 UJI SEROLOGI DEMAM
TIFOID
1. TES WIDAL
2. TES IgM Salmonella
3. ELISA
4. BIAKAN / KULTUR DARAH
INDIKASI
Membantu menegakkan Dx & menentukan Px
dari penyakit DEMAM TIFOID
SUPAYA MENDAPAT PENGERTIAN YANG JELAS
MENGENAI LANDASAN DASAR & INTERPRETASI
TES, PERLU DIKETAHUI :

- Sifat-sifat antigenik dari S. typhi/paratyphi

- PATOGENESIS demam tifoid

Gambar 34. Struktur antigen Salmonella
 PATOGENESIS DEMAM TIFOID

S. typhi
 105
Sirkulasi
Bakteriemi 1
Hepar
Organ2 Lien
d. thorac Ren
7-10 hari Sutul

Bakteriemi 2
Pl. Player
Gambar 36. Patogenesis demam tifoid
BAKTERIEMI 2 KAPSEL Vi
Fagositosis sukar

Jalur alternatif 7 – 10 HARI ( PERUBAHAN KAPSEL )

komplemen

Lisis
Fagositosis Pembengkakan
ENDOTOKSIN ( AG
organ-organ
–O) Sel-sel
imunokompeten
Tak ada bakteriemi
(akhir mgg. Ke 2)
AGLUTININ

GEJALA KLINIS O H Vi
Gambar 37. Imunopatogenesis demam tifoid
Gambar 38. Roseola di dada anak dengan demam tifoid
 PRINSIP DASAR UJI WIDAL yi. UJI AGLUTINASI

Ag. pada permukaan sel

Aglutinasi
Ab.

Tak larut

Gambar 39. Prinsip dasar reaksi aglutinasi

ANTIGEN UNTUK TES WIDAL :
1. Ag. O ( somatik ); S. typhi tak motil  + dg alkohol abs.

2. Ag. H ( flagella ); S. typhi yang motil  + dg formalin 0,3%

Pengawet larutan phenol 0,5%

3. Ag. PA; S.paratyphi A  + dg formalin 0,3%

4. Ag. PB; S.paratyphi B  + dg formalin 0,3%

Ad 1, sebelum dipakai  encerkan  kons. Alk, 12%

Gambar 8. Suspensi antigen O, H, PA, dan PB untuk
uji Widal
PERHATIAN

- Konsentrasi Ag : 3 Mc. Farland unit ( 9 X 108 kuman/ml )

- Sebaiknya dipakai strain Salmonella dari daerah endemis

- Ag yang “multi-strain” > baik daripada yang “mono-strain”.

CARA PEMERIKSAAN UJI WIDAL
1. Uji Slide / Lempeng.
1 tetes serum + 1 tetes Ag  Aglutinasi
Pengenceran Serum ( untuk kit MJD ).
EKIVALEN RASIO DARI
DENGAN TITER SERUM PBS

1/10 1 BAGIAN 2 BAGIAN

1/20 1 BAGIAN 3 BAGIAN
1/40 1 BAGIAN 5 BAGIAN
1/80 1 BAGIAN 7 BAGIAN
1/160 1 BAGIAN 9 BAGIAN
1/320 1 BAGIAN 13 BAGIAN
1/640 1 BAGIAN 23 BAGIAN
 Pengenceran serum:
O Dimulai titer : 1: 40
H
Untuk : PB Dimulai titer : 1: 80
PA Dimulai titer : 1:20

POSITIF LANJUTKAN dg. PENGENCERAN

SELANJUTNYA

NEGATIF STOP DILAPORKAN : NEGATIF

PROSEDUR PEMERIKSAAN
- DI ATAS GELAS OBYEK
- 2 TETES (  40 µl ) SERUM YG DIENCERKAN

- 2 TETES (  40 µl ) SUSPENSI
ANTIGEN (O, H, PA, PB)

DIGOYANG t° RUANGAN 5 MENIT

AGLUTINASI
AMBANG ATAS NILAI NORMAL

- DILAKUKAN PADA 120 ORANG SEHAT

- AGLUTININ O 1: 80
H 1: 80
PA 1: 40
PB 1: 160
 KRITERIA DIAGNOSTIK
DEMAM TIFOID

I. TITER AGLUTININ O atau  2X ambang ata

AGLUTININ O& H nilai normal

II. DALAM JANGKA WAKTU 5 - 7 HARI :

TITER MENINGKAT 4x
2. Uji tabung.
: Pengenceran serial dalam 4 baris
Baris 1 diberi Ag O, Baris 3 diberi PA,
Baris 2 diberi Ag H, Baris 4 diberi PB,

2.1. CARA KLASIK :

Inkubasi ; 37°C, 24 jam
2.2 CARA STOKES :

Prinsip hampir sama dengan cara klasik

 PERBEDAANNYA

a. Serumnya ; waterbath 56°C, ½ jam

b. Diluent-nya ; PBS, pH 7,4.

c. Inkubasinya ; tbg O  waterbath 37°C, 4 jam

H, PA, & PB  waterbath 50°C, 2 jam

Pembacaannya : - Segera
- Lebih baik setelah semalam pada 4°C
 `

Gambar 41. Aglutinat di dasar tabung uji Widal yang

positif
Gambar 42. Endapan antigen pada dasar tabung uji
Widal yang positif
FAKTOR-FAKTOR YANG PERLU DIPERHATIKAN.

4.1. Dr hasil 1X tes belum dapat ditarik kesimpulan yang

berarti. Perlu ulangan setelah 5-7 hari

4.2. Harga normal tes Widal tabung.

Aglutinin O : 1/160 Aglutinin PA : 1/80
Aglutinin H : 1/160 Aglutinin PB : 1/320
4.3. Vaksinasi; aglutinin H dapat dipertahankan beberapa
tahun,

4.4. Antibiotika ; dapat memperlambat kenaikan titer

4.5. Febris ; dapat memberikan kenaikan titer

4.6. Narkotik ; Ketagihan  hasil pos. semu

4.7. Stadium penyakit ; mgg ke 1  neg./dlm batas normal

mgg ke 2 titer mulai naik  puncaknya mgg ke 5 - 6;

4.8. Obatnya-2 imunosupresif; hambat pembentukan

aglutinasi

4.9. Peny.-2 tertentu ; agamaglobulinemia & keganasan.

4.10. Infeksi campuran ; mis TB milliair  sering neg.

semu.
 IgM Salmonella
• Lebih spesifik dari Widal
• Positif lebih dini pada panas minggu 1 - 2
STS MEMEGANG PERANAN PENTING
DALAM Dx LAB. DR LUES SEBAB :

- Perjalanan penyakit lama

- Belum berhasil membenihkan T. pallida pada

media pembenihan.

- Pemeriksaan mikroskop memberi bbp. kesukaran a.l. ;

* bahan harus diambil dari lesi yang manifes dalam
waktu singkat,
* sering memberi hasil negatif semu.
INFEKSI DG T.pallida AKAN MENIMBULKAN
2 JENIS Ab.

1. Ab Non-treponemal/reagin ; baru terbentuk setelah

infeksi  kel. Limfe regional ( kerusakan jaringan ).

2. Ab Treponemal ; bereaksi dg T.pallida /closely

related strains.
Dapat dibedakan 2 jenis Ab.
a. Group Treponemal Ab ; thd Ag somatik dr
semua treponema
b. Specific Treponemal Ab ; thd Ag spesifik
dr T.pallidum.
 IgG Tre
p onemal
Ab

IgM Re
ag
Tr in
ep
on
em
al
Ab

Gambar 29. Kadar beberapa Ab selama perjalanan Syphilis

 Titer
2560

Rx
640
Ig.
G-F
TA
160 TPH -Ab
A s
Ig.
40 M
-F
TA
RP -A
R/ bs
10 .
Kontak

VD
RL

Waktu

Gambar 30. Pengaruh Rx pada titer Ab thd Syphilis

Gambar 31. Ulcus durum Lues I
Gambar 32. Syphilis Stadium II ( Condylomata Lata )
 BEBERAPA STS YANG DAPAT DIKERJAKAN DI
INDONESIA

1. Tes VDRL
2. Tes Treponema pallidum Immobilization ( TPI )

3. Tes Treponema pallidum Hemagglutination ( TPHA ).

4. Tes Fluorescence Treponemal Antibody Absorption

( FTA-ABS )
5. Enzyme – linked Immunosorbant Assay ( ELISA )
UJI V.D.R.L.

Prinsip dasar : Uji presiptasi

Ag. : Lipoid Ag (Cardiolipin-lecithin-cholesterol)
Serum : Waterbath 56°C, 30 men.  Inaktivasi C

Dikenal 2 macam teknik.

1. Uji Tabung ; dibaca secara Makroskopis.

2. Uji Slide ; dibaca secara Mikroskopis.

 PEMBACAAN HASIL UJI V.D.R.L

A. Kualitatif : di bawah mikroskop ( pemb. 100 X )

a. Gumpalan besar/sedang  Positif

b. Gumpalan kecil  Positif lemah
c. Tiada gumpalan/sedikit kasar  Negatif

B. Semi-kuantitatif : Pd serum yg pos./pos. lemah

pengenceran secara serial  Titer

Titer 1:4 ;Di Indonesia dianggap syphilis

Pembagian Uji VDRL atas Dasar Cara
Pengambilan Sampel.

1. Uji VDRL Mikro

- 5 tetes drh ujung jari tengah +0,15 ml PZ
- Hasil dinyatakan secara kualitatif (+/-)
- Bila pos.,sesuai dengan titer  1 : 2
- Dipakai untuk survei lapangan/uji saring

2. Uji VDRL Makro

- 5 cc drh dr V. Cubiti. Hasil dinyatakan secara
kualitatif maupun semi-kuantitatif ( titer )
TPHA.
Prinsip Dasar.
- Hemaglutinasi Pasif
- Sebagai Ag ; T. pallida strain Nichol
- Sebagai carrier ; SDM Kalkun.

Sensitivitas : Baik kecuali L I.

Spesifisitas : Cukup baik

Penting : Tak dapat dipakai untuk mengikuti hasil Rx.

Gambar 33. Uji TPHA
 POSITIF SEMU BIOLOGIK ( BFP )
Serologis pos. tanpa syphilis, dapat terjadi :

1. akut disebabkan penyakit-2 akut / stres ( imunisasi )

Seperti mononucleosis infeksiosa & demam tifoid,
2. menahun ( kronis ) disebabkan penyakit-2 menahun
seperti frambusia, lepra, penyakit kolagen ( LE ),
malaria, kehamilan dan narkotika.

Titernya umumnya rendah kecuali pada mononukleosis

infeksiosa
 INTERPRETASI HASIL

VDRL MAKRO KUANTITATIF

mempunyai Arti klinis yang penting sebab :
Merupakan garis Dasar untuk Evaluasi hasil
uji laboratorium selanjutnya.
Bila pada uji ulangan didapatkan :

1. Titer , menunjukan adanya ;

a. infeksi dengan T. pallida
b. re-infeksi
c. relapse pd penderita-2 yg Serofast

2. Titer   Rx adekuat pd pend Lues dini

3. Titer tetap  reagin masih ada dalam

drh stlh Rx
BILA STS TREPONEMAL POSITIF.

1. Sedang menderita lues ( peny. Aktif ) atau

2. Pernah menderita lues ttp telah sembuh.

Tak dapat untuk mengikuti hasil Rx.

Keunggulan Ig. M-FTA-Abs & Ig. M-ELISA.

1. Sebagai parameter biolgis apakah Rx masih diperlukan

2. Untuk Dx Lues kongenital pada bayi yang baru lahir

Bila tes neg., tak menyingkirkan Dx Lues kongenita.
KESIMPULAN.
Paling Ideal ; Ig. M- ELISA ( Dx, keaktivan,
mengikuti hasil Rx )

Di Indonesia ; TPHA  Dx
VDRL  Aktivitas &
mengikuti hasil Rx

Neurosyphilis : VDRL  Dx
Jumlah sel Keaktivan &
Protein Total mengikuti hasil Rx