PRAKTIKUM FITOKIMIA

FAKULTAS FARMASI DAN SAINS

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PROF. DR. HAMKA
2022
 PRAKTIKUM 9
ISOLASI PIPERIN & IDENTIFIKASINYA

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

Tujuan Praktikum
Setelah mengikuti praktikum ini mahasiswa diharapkan mampu
melakukan isolasi senyawa alkaloid piperin dari simplisia menggunakan
metode sederhana serta mengidentifikasi hasil isolasinya menggunakan
metode KLT.

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

 Piperin merupakan senyawa alkaloid yang diisolasi dari family
Piperaceae, seperti dari buah mentah (lada hitam) dan inti dari buah
matang (lada putih) dari Piper nigrum, dari buah cabe jawa (Piper
longum), biji Cubeba censii, Piper fainechotti dan Piper chaba.

Piperin memiliki rumus molekul C17H19NO3

Piperin dapat larut dalam petroleum eter, kloroform, etanol, metanol, tetapi
tidak dapat larut di dalam air (Kolhe et al. 2011). Piperin larut dalam alkohol
(1g/15ml) dan eter (1g/36ml) (Kar 2009).

Piperin dapat diidentifikasi secara kualitatif dengan reaksi warna menggunakan

beberapa pereaksi seperti Dragendorff (larutan iodobismutat), Mayer (larutan
kalium merkuri-iodida), iodoplatinat (larutan kalium periodat) dan asam
fosfomolibdat.
www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
 Pengamatan di bawah sinar UV 365 piperin akan memberikan bercak
dengan pendar berwarna biru. Pengamatan di bawah sinar UV 254 nm,
bercak piperin akan memberikan warna ungu. Pereaksi deteksi yang
dapat digunakan unutk deteksi keberadaan piperin adalah larutan
Dragendorff (bercak berwarna kuning hingga jingga kemerahan pada
sinar tampak) ataupun larutan anisaldehid-asam sulfat (bercak
berwarna kuning setelah plat dipanaskan pada suhu 110°C selama 10
menit pada sinar tampak) (Shah dan Seth 2010; Hanani 2015).

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

Alat dan Bahan

Bahan : Simplisia buah cabe jawa atau lada, etanol 95%, KOH-
etanol 10%, n-heksana, etil asetat, standar piperin, pereaksi
Dragendorff

Alat : Seperangkat alat Ekstraksi (Soxhlet atau maserasi), rotary

evaporator, water batch, lemari asam, oven, Erlenmeyer, gelas
ukur, plat KLT silika GF254, chamber, kertas saring, aluminium foil,
vial, botol semprot, UV Box

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

 Prosedur Kerja

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

 Serbuk Simplisia Lada putih
Ekstraksi (Soxhletasi, maserasi) Pemekatan Ekstrak cair
Timbang Serbuk Simplisia

Ekstrak kental

Pindahkan kedalam vial, Tambahkan 10 ml KOH-etanol 10%,

Rekristalisasi dengan etil asetat dan n-heksan sampai Kristal bersih diamkan 24 jam Larutkan, saring

Fase diam : plat KLT GF254

Fase gerak : n-heksana:etil asetat (1:1) atau diklorometan:etil asetat (3:1)
Cek dibawah UV 254 dan 366nm.
Penampak bercak : Pereaksi semprot Dragendorff
Positif : bercak berwarna kuning hingga jingga kecoklatan
Hitung nilai Rf isolat dan dibandingkan dengan nilai Rf pembanding
piperin.
 
www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
PERSIAPAN MINGGU DEPAN (PRAKTEK
KLT)
www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
 Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah bentuk dari kromatografi planar
yang paling sering digunakan. Metode yang mudah, murah, dan
cepat untuk analisis dan isolasi produk bahan alam dan sintetik
(Gibbons 2012).

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

Alat dan Bahan

 Alat : Lempeng kromatografi (silika gel GF254), oven, bejana

kromatografi (Chamber), Pipa Kapiler, alat penyemprot pereaksi,
lampu UV 254 dan 366 nm, pinset.
 Bahan : Fase gerak, pereaksi semprot, bahan uji (sampel ekstrak).

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
1. Siapkan plat KLT ukuran 4 x 10 cm (jarak penotolan 1-1,5 cm, batas bawah 1 cm
dan batas atas 1 cm)

2. Plat diaktifkan dengan pemanasan suhu 100°C selama 5-10 menit

3. Eluen dijenuhkan dalam bejana 15-30 menit (atau bisa dibantu dengan
memasukkan kertas saring sampai eluen merambat sampai bagian atas maka
dianggap sudah jenuh)

4. Larutan bahan uji (ekstrak, hasil salah satu fraksi dan hasil kromatografi kolom)
dan/atau pembanding yang sudah disiapkan, ditotolkan pada lempeng) dengan
volume tertentu. Ekstrak di totolkan menggunakan pipa kapiler pada tepi bawah
plat, kemudian amati pada sinar UV 254 dan 366 nm.

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

PLAT KLT

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

5. Plat dimasukkan kedalam bejana sampai eluen merambat, dengan posisi tegak
dan bagian tepi bawah tercelup dalam fase gerak, tetapi totolan tidak terendam.
Bejana ditutup rapat dan fase gerak dibiarkan merambat hingga batas jarak
rambat. Kemudian plat diangkat, didiamkan hingga kering, Amati pada sinar UV 254
dan 366 nm

6. Lalu semprot dengan pereaksi yang sesuai. Amati dibawah sinar UV 254 dan 366 nm.
Warna yang terjadi dicatat. Kadang warna yang terjadi sesudah disemprot memerlukan
suhu lebih tinggi agar pembentukan warna lebih optimum.

7. Kemudian dipanaskan suhu 100°C selama 10-15 menit

8. Hitung nilai Rf dan/atau Rx (Rx= jarak rambat bercak dibagi jarak rambat
pembanding)

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
 Identifikasi senyawa dengan KLT :
Senyawa Fenol
Fase diam : lempeng silika gel 60 F254
Fase gerak : toluene : aseton : asam format (6:6:1)
Larutan deteksi : 1% larutan besi (III) klorida
Pengamatan : sinar tampak
Pembanding : asam galat

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

Senyawa Flavonoid
Fase diam : lempeng silika gel 60 F254
Fase gerak : kloroform : metanol :air (80:18:2)
Larutan deteksi : 5% aluminium klorida dalam methanol
(pengamatan dengan pemanasan)
Pengamatan : sinar tampak dan UV366nm
Pembanding : kuersetin/rutin

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid Uhamka @UhamkaI
 TERIMAKASIH

Ingat 3M:
Mencuci tangan, Memakai masker, dan Menjaga
jarak

Semoga dunia lekas pulih serta

kita dan keluarga tetap sehat dan terhindar dari
COVID-19

www.uhamka.ac.id info@uhamka.ac.id (021)73944451 uhamkaid

20
Uhamka @UhamkaI