Bikimia Enzin Dan PH
Bikimia Enzin Dan PH
Kelompok :D
I. TUJUAN PERCOBAAN
Setelah mengikuti praktikum, mahasiswa diharapkan:
memahami dan menjelaskan fungsi enzim amilase
memahami pengaruh pH terhadap aktivitas enzim pada umumnya, dan enzim amilase
secara khusus
II. DASAR TEORI
Dalam mahkluk hidup, reaksi metabolisme berlangsung dengan melibatkan suatu
senyawa protein yang disebut enzim. Enzim merupakan protein yang khusus disintesis oleh
sel hidup untuk mengkatalisis reaksi yang berlangsung di dalamnya. Fungsi khusus dari
enzim adalah untuk menurunkan energi aktivasi, mempercepat reaksi pada suhu dan tekanan
yang tetap tanpa mengubah besarnya tetapan keseimbangan dan sebagai pengendali
reaksinya (Martoharsono, 1994).
Enzim adalah substansi yang dihasilkan oleh sel-sel hidup dan berperan sebagai
katalisator pada reaksi kimia yang berlangsung dalam organisme. Katalisator adalah
substansi yang mempercepat reaksi tetapi pada hasil reaksi, substansi tersebut tidak berubah.
Enzim mempunyai ciri dimana kerjanya dipengaruhi oleh lingkungan. Salah satu lingkungan
yang berpengaruh terhadap kerja enzim adalah pH. pH optimal enzim adalah sekitar pH 7
(netral) dan jika medium menjadi sangat asam atau sangat alkalis enzim mengalami
inaktivasi (Gaman & Sherrington, 1994).
Ada beberapa faktor untuk menentukan aktivitas enzim berdasarkan efek katalisnya yaitu
persamaan reaksi yang dikatalis, kebutuhan kofaktor, pengaruh konsentrasi substrat dan
kofaktor, pH optimal, daerah temperatur, dan penentuan berkurangnya substrat atau
bertambahnya hasil reaksi. Penentuan ini biasa dilakukan di pH optimal dengan konsentrasi
substrat dan kofaktor berlebih, menjadikan laju reaksi yang terjadi merupakan tingkat ke 0
(zero order reaction) terhadap substrat. Pengamatan reaksinya dengan berbagai cara kimia
atau spektrofotometri. Ada dua teori tentang mekanisme pengikatan substrat oleh enzim,
yaitu teori kunci dan anak kunci (lock and key) dan teori induced fit (Wirahadikusumah,
1989).
Suasana yang terlalu asam atau alkalis menyebabkan denaturasi protein dan hilangnya
secara total aktivitas enzim. Pada sel hidup, perubahan pH sangat kecil. Enzim hanya aktif
pada kisaran pH yang sempit. Oleh karena itu media harus benar-benar dipelihara dengan
menggunakan buffer (larutan penyangga). Jika enzim memiliki lebih dari satu substrat, maka
pH optimumnya akan berbeda pada suatu substrat (Tranggono & Sutardi, 1990).
Salah satu enzim yang diperlukan untuk pertumbuhan adalah amilase. Amilase dapat
diartikan sebagai segolongan enzim yang merombak pati, glikogen, dan polisakarida yang
lain. Tumbuhan mengandung α dan ß amylase; hewan memiliki hanya α amylase, dijumpai
dalam cairan pankreas dan juga (pada manusia dan beberapa spesies lain) dalam ludah.
Amilase memotong rantai polisakarida yang panjang, menghasilkan campuran glukosa dan
maltosa. Amilosa merupakan polisakarida yang terdiri dari 100-1000 molekul glukosa yang
saling berikatan membentuk rantai lurus. Dalam air, amilosa bereaksi dengan iodine
memberikan warna biru yang khas (Fox, 1991).
Amilase adalah enzim pemecah karbohidrat dari bentuk mejemuk menjadi bentuk yang
lebih sederhana. Misalnya, pati dan glikogen dipecah menjadi maltosa, maltotriosa atau
oligosakarida. Enzim ini terdapat dalam air liur (ptialin) dan getah pankreas yang membantu
pencernaan karbohidrat dalam makanan. Darah normal juga mengandung sedikit amilase dari
hasil pemecahan sel yang berlangsung secara normal. Pada penyakit radang pankreas,
gondongan, kencing manis, kadarnya dalam darah meningkat. Sebaliknya pada penyakit hati,
kadarnya menurun (Anonim, 1990).
- Encerkan 1,0 mL larutan stock (500mg iodine/I2 dan 5,0 gram Kl/100mL
air) 100 kali. Simpan dalam botol gelap.
Preparasai Larutan Pati 1,0% (W/V) :
RO AE = R
AE RO
VORTEX
C) Siapkan set 2
Blangko
D) Ambil dari B
500 mikro L dari masing-masing tabung ke tabung set 2 yang sudah diberi 5,0
larutan I2 kemudian Vortex
E) Zeroing spektrofotometer dengan blangko
F) Amati serapan pada λ 620 nm
𝑅𝑜−𝑅
G) Hitung aktivitas enzim → D( ) X 100
𝑅𝑜
pH 4 pH 6,5 pH 10
R 1,736 0,294 1,516
Ro 3,00 3,00 2,432
Aktivitas Enzim 42,133 90,2 37,66
𝑅𝑜− 𝑅
( ) x 100
𝑅𝑜
pH Ro AE/R
4 Biru Pekat Biru Pekat
6,5 Biru Pekat Coklat transparan
10 Biru Pekat Ungu Pekat
gambar 1. Hasil pada pH 10