Hari, Tanggal

: Jumat, 14 Juni 2014

Dosen

: Nurlela, S.Si
Adawiyah, S.Si

Asisten

: Fuady Hanief
Lia Pratiwi

PENGARUH KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

I.

Dasar Teori
Terdapat hubungan kuantitatif antara konsentrasi substrat dengan kecepatan reaksi

enzim. Pada konsentrasi enzim yang tetap, peningkatan konsentrasi substrat akan menaikan
kecepatan reaksi enzim sampai mencapai kecepatan maksimum (Vmaks) yang tetap. Dengan
meningkatnya [S] maka kcepatan reaksiakan semakin meningkat sampai keadaan enzim telah
jenuh oleh substrat.
Konsentrasi substrat [S] pada saat enzim mencapai setengah kecepatan maksimumnya
disebut tetapan Michaelis-Menten.
Kecepatan pembentukan ES :
k1 [E] [S] = k1 ([Et] [ES]) [S]
Sedangkan kecepatan penguraian ES :
k1 [ES] + k2 [ES]
Dalam keadaan setimbang, ketika kecepatan pembentukan ES sama dengan kecepatan
penguraiannya, maka :
k1 ([Et] [ES]) [S] = k1 [ES] + k2 [ES]
k1 [Et] [S] - k1 [ES] [S] = (k1 + k2) [ES]
k1 [Et] [S] = (k1 [S] + k1 + k2) [ES]

[ ES ] =

k 1[ Et ][ S]
k 1 [ S ] +k 1+k 2

[ ES ] =

[Et ][ S ]
[ S ] +(k 1+k 2)/ k 1

Jika Vo = k2 [S], maka :

Vo=

k 2[ Et ][ S]
[ S ] +( k 1+ k 2)/k 1

Vo=

k 2[ Et ][ S]
( KM + [ S ] )

Km adalah ketetapan Michaelis-Menten, yang besarnya (k 1+k 2)/k 1

Dengan mendefinisikan Vmaks sebagai

k 2[ Et ] , maka didapat persamaan Michaelis-

Menten:
Vo=

Jika

Vmaks[S ]
[ S ] + KM ..................................................................................................................(1)

Vo=

Vmaks[S ]
[ S ] + KM

maka

[ S ] + KM
[S]
1
KM
=
=
+
Vo Vmaks[S ] Vmaks[S ] Vmaks[S ]

....................................(2)

II.

III.

Tujuan Percobaan
Mengetahui faktor yang memengaruhi aktifitas enzim
Menentukan nilai km dan Vmaks
Metodelogi
a. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah tabung reaksi, gelas kimia, corong, rak tabung
reaksi, waterbath dan pipet ukur.

Bahan yang digunakan adalah larutan amilum 2%, enzim amilase, larutan
iodium dan pereaksi benedict.
b. Cara kerja
Empat tabung reaksi disiapkan. Kemudian diisi masing-masing tabung dengan
larutan amilum 1ml, 2ml, 4ml dan 6ml. Lalu, ke dalam masing-masing tabung,
ditambahkan 1ml enzim amilase. Dicampurkan dengan baik, inkubasi di dalam
water bath 37 0C. Setelah itu jui masing-masing tabung dengan pereaksi iodium
setiap 3 menit. Tentukan waktu yang dibutuhkan sampai warna biru tidak tampak
(titik akromatik). Tentukan nilai Vmaks dan Km dari hasil percobaan.

IV.

Hasil dan Pembahasan

Tabung

Larutan
amilum

Kinetika reaksi
Titik Akromatik

(det)
1
1ml
60
2
2ml
105
3
4ml
210
4
6ml
585
Tabel 1. Hasil pengamatan titik akromatis enzim
Perhitungan
Pengenceran amilum
Larutan amilum 1ml
Va . Na = Vb . Nb
1ml . 2% = 6 . N
N = 0,33 %
Larutan amilum 2ml
Va . Na = Vb . Nb
2ml . 2% = 6 . N
N = 0,67 %
Larutan amilum 4ml
Va . Na = Vb . Nb
4ml . 2% = 6 . N
N = 1,33 %
Larutan amilum 6ml
Va . Na = Vb . Nb
6ml . 2% = 6 . N
N = 2%

1/[S]

1/V

3,03
1,5
0,75
0,5

181,8
156,7
157,9
292,5

 1/[S]
Larutan amilum 1ml = 1/[S]
= 1/0,33 %
= 3,03 %
Larutan amilum 2ml = 1/[S]
= 1/0,67 %
= 1,5 %
Larutan amilum 4ml = 1/[S]
= 1/0,67 %
= 0,75 %
Larutan amilum 6ml = 1/[S]
= 1/2 %
= 0,5 %
1/[V]
Larutan amilum 1ml
1/V = t/konsentrasi
1/V = 60/0,33
= 181,8
Larutan amilum 2ml
1/V = t/konsentrasi
1/V = 105/0,67
= 156,7
Larutan amilum 4ml
1/V = t/konsentrasi
1/V = 210/1,33
= 157,9
Larutan amilum 6ml
1/V = t/konsentrasi
1/V = 585/2
= 292,5

Grafik Hubungan 1/[S] dengan 1/[V]

Grafik Hubungan 1/[S] Dengan 1/[V]

350
300
250
200

f(x) = - 22.97x + 230.42

R = 0.16

1/[V] 150
100
50
0
0

0.5

1.5

1/[S]

Menghitung nilai Km dan Vmaks

Y = -22,97 x + 230,4
Y =

+ b

1
Km
1
1
=
.
+
Vo Vmaks [S ] Vmaks

b=

1
Vmaks

230,4=

1
Vmaks

Vmaks=0,0043

a=

Km
Vmaks

22,97=

Km
0,0043

2.5

3.5

Km=0,098
Pembahasan
Percobaan kali ini adalah percobaan pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas
enzim. Enzim yang digunakan adalah enzim amilase yang ada pada saliva. Tujuan dari
percobaan ini adalah mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim dan
menentukan nilai Vmaks dan Km. Percobaan ini menggunakan amilum 2% sebagai substrat
dengan jumlah yang berbeda-beda. Berdasarkan percobaan, semakin tinggi konsentrasinya
maka semakin tinggi titik akromatiknya. Sehingga laju reaksinya semakin besar. Pada
konsentrasi enzim yang tetap, peningkatan konsentrasi substrat akan menaikan kecepatan
reaksi enzim sampai mencapai kecepatan maksimum (Vmaks) yang tetap. Dengan
meningkatnya [S] maka kecepatan reaksi akan semakin meningkat sampai keadaan enzim
telah jenuh oleh substrat. Dari percobaan tersebut, dapat dibuat grafik hubungan antara 1/[S]
dengan 1/V. persamaan yang diperoleh adalah y = -22,97 x + 230,4. Dari persamaan tersebut,
Vmaks adalah 0,0043 dan Km adalah -0,098. Percobaan ini membuktikan bahwa konsentrasi
substrat mempengaruhi aktivitas enzim amilase.
V.

Kesimpulan
Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa :
1. Faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim adalah konsentrasi substrat
serta konsentrasi enzim, suasana pH dan shuhu yang optimum, dan keberadaan

VI.

inhibitor.
2. Nilai Vmaks dan Km berturut-turut adalah 0,0043 dan -0,098
.
Daftar Pustaka
Fox, P.F. (1991). Food Enzymology Vol 2. Elsevier Applied Science. London.
Gaman, P.M & K.B. Sherrington. (1994). Ilmu Pangan, Pengantar Ilmu Pangan,
Nutrisi dan Mikrobiologi. Universitas Gadjah Mada press. Yogyakarta.
Sandra, Hermanto.2010. buku ajar biokimia. UIN Syarif Hidayatullah : Jakarta