Bakteri Sederhana

LAPORAN LENGKAP
PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI 1
OLEH : KELOMPOK 3
1.Alan Dwi Saputra (PO713203181005)
2. Amril (PO713203181007)
3. Arianto (PO713203181011)
4. Nur Ali Zainuddin Patty (PO713203181026)
POLTEKKES KEMENKES MAKASSAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN
TAHUN AJARAN 2018/2019
1i
KATA PENGANTAR
Dengan menyebut nama Allah SWT yang Maha Pengasih lagi Maha
Panyayang, Kami panjatkan puja dan puji syukur atas kehadirat-Nya, yang telah
melimpahkan rahmat, hidayah, dan inayah-Nya kepada kami, sehingga kami dapat
menyelesaikan Laporan Praktikum Bakteriologi I. Laporan ini disusun untuk
memenuhi tugas kelompok dalam mata kuliah “Praktikum bakteri I” . Dengan
selesainya laporan ini kami tidak lupa mengucapkan terima kasih kepada dosen
pembimbing praktikum bakteriologi, yang telah memberikan bimbingan dan
pengarahan sehingga dapat terselesainya laporan ini.
Kami sangat berharap laporan ini dapat berguna dalam rangka menambah
wawasan serta pengetahuan kita mengenai bakteri dalam kehidupan kita. Kami
juga menyadari sepenuhnya bahwa di dalam makalah ini terdapat kekurangan dan
jauh dari kata sempurna. Oleh karena itu , kami berharap adanya kritik, saran dan
usulan demi perbaikan laporan yang telah kami buat dimasa yang akan dating.
Mengingat tidak ada sesuatu yang sempurna tanpa saran yang membangun.
Semoga laporan sederhana ini dapar berguna bagi kami sendiri maupun orang
yang membacanya. Sebelumnya kami mohon maaf apabila terdapat kesalahan
kata-kata yang kurang berkenan.
Laporan praktikum ini telah kami susun dengan maksimal dan

mendapatkan bantuan dari berbagai pihak sehingga dapat memperlancar
pembuatan laporan ini. Untuk itu kami menyampaikan banyak terima kasih
kepada semua pihak yang telah berkontribusi dalam pembuatan laporan ini.
Makassar, 26 Juni 2019
Penulis
ii
LEMBAR PENGESAHAN
Laporan lengkap praktikum bakteriologi I dengan judul “Laporan Praktikum

Bakteriologi I” yang di susun dan diajukan oleh :
Nama : 1. Alan Dwi Saputra (PO713203181005)
2. Amril (PO713203181007)
3. Arianto (PO713203181011)
4.Nur Ali Zainuddin Patty (PO713203181026)
Tingkat : D-III Tingkat I
Kelompok : 9 (Sembilan)
Sebagai salah satu syarat untuk mengikuti final pada praktikum mata kuliah
praktikum bakteriologi I.
Pembimbing I Pembimbing II
Prawansa Amran,S.Si.,M.Kes Hasnawati,S.Si.,M.Kes
Pembimbing III Pembimbing IV
Arwin,S.ST Rafika,S.Si.,M.Si
iii
DAFTAR ISI
Kata Pengantar……………………………………………………………. i
Lembar Pengesahan …………………………………………………….... ii
Daftar isi………………………………………………………………….. iv
Lembar Penilaian…………………………………………………………. v
Pewarnaan Sederhana…………………………………………………….. 1
Pewarnaan Pergerakan Bakteri…………………………………………… 12
Pewarnaan Gram…………………………………………………………. 20
Pewarnaan BTA………………………………………………………….. 36
Pewarnaan Spora…………………………………………………………. 47
Pewarnaan Negatif……………………………………………………….. 60
Pewarnaan Kapsul……………………………………………………….. 72
iv
LEMBAR PENILAIAN
LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI I
Kelompok 9
NAMA NIM NILAI
Alan Dwi Saputra PO713203181005
Amril PO713203181007
Arianto PO713203181011
Nur Ali Zainuddin Patty PO713203181026
v
LEMBAR PENGESAHAN
Laporan lengkap praktikum bakteriologi I dengan judul “Laporan Praktikum

Bakteriologi I” yang di susun dan diajukan oleh :
Nama : 1. Alan Dwi Saputra(PO713203181005)
2. Amril (PO713203181007)
3. Arianto (PO713203181011)
4. Nur Ali Zainuddin Patty (PO713203181026)
Tingkat : D-III Tingkat I
Sebagai salah satu syarat untuk mengikuti final pada praktikum mata kuliah
praktikum bakteriologi I.
Pembimbing I Pembimbing II
Prawansa Amran,S.Si.,M.Kes Hasnawati,S.Si.,M.Kes
Pembimbing III Pembimbing IV
Arwin,S.ST Rafika,S.Si.,M.Si
vi
LAPORAN 1
PEWARNAAN SEDERHANA
NAMA : ALAN DWI SAPUTRA
NIM : PO. 71.3.203.18.1.005
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Bakteri adalah organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih
tersebar luas dibandingkan makhluk hidup yang lain. Bakteri memiliki
ratusan ribu spesies yang hidup di darat hingga lautan dan pada tempat-
tempat yang ekstrim.Bakteri ada yang menguntungkan tetapi ada pula yang
merugikan. Bakteri memiliki ciri-ciri yang membedakannya dengan mahluk
hidup yang lain. Bakteri adalah organisme uniselluler dan prokariot serta
umumnya tidak memiliki klorofil dan berukuran renik atau mikroskopik.
Mikroba sulit dilihat dengan cahaya karena tidak mengadsorbsi atau

membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna digunakan
untuk mewarnai mikroorganisme. Zat warna mengadsorbsi dan membiaskan
cahaya sehingga kontras mikroba dengan sekelilingnya dapat ditingkatkan.
Penggunaan zat warna memungkinkan pengamatan strukur seperti spora,
flagela, dan bahan inklusi yng mengandung zat pati dan granula fosfat
(Entjang, 2003) Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat
sulit, kerena selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat
kecil. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik
pewarnaan sel bekteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati.
Olek karena itu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salahsatu cara
yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi.
Bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu basil (batang), coccus, spirilum.

Bakteri yang berbentuk tongkat maupun kokus dibagi menjadi beberapa
macam. Pada bentuk basil pembagiannya yaitu basil tunggal, diplobasil, dan
tripobasil. Sedangkan pada coccus dibagi menjadi monococcus, diplococcus,
sampai stophylococcus. Khusus pada spirilum hanya dibagi dua yaitu
setengah melengkung dan melengkung.
2
Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak
digunakan. Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit,
karena selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil.
Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel
bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-
penelitian mikrobiologi. Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya
ikatan ion antara komponen seluler dari bakteri dengan senyawa aktif dari
pewarnaan yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan
listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarnaan. Berdasarkan
adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.
Teknik Pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit tapi perlu ketelitian dan
kecermatan bekerja serta mengikuti aturan dasar yang berlaku. Oleh karena
itu yang melatar belakangi praktek ini yaitu untuk mengetahui teknik
pewarnaan mikroorganisme sehingga mempermudah dalam melihat bagian-
bagian bakteri.
A. Maksud
Maksud dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara
melakukan pewarnaan sederhana pada bakteri. Selain itu, praktikum juga
dimaksudkan untuk mengetahui bentuk-bentuk bakteri.
B. Tujuan
Tujuan dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara

C. Waktu dan Lokasi Praktikum

• Waktu :
• Lokasi : Laboratorium Bakteriologi
3
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Antoni Van Leuwenhoek berhasil menemukan bakteri untuk pertama kalinya di
dunia pada tahun 1676. Banyak species bakteri yang bergerak menggunakan flagel.
Bskteri yang tidsk memiliki alat gerak biasanya hanya mengikuti pergerakan media
pertumbuhan atau lingkungan tempat bakteri tersebut berada . Sama seperti srtuktur
kapsul , flagel juga dapat menjadi agen penyebabpenyakit pada beberapa sepsis
bakteri . Berdasarkan tempat dan jumlah flagel yang dimiliki , bakteri dibagi mejadi
atrik , monotrik , lofotrik ,amfitrik , dan peritrik.
B. Defenisi
Pewarnaan sederhana yaitu pewarnaan dengan menggunakan satumacam zat warna
dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel bakteri dan untuk mengetahui
morfologi dan susunan selnya . pewarnaan ini dapat menggunakan pewarnaan basa
pasda umumnya antara lain kristal violet , metylen blue , karbol , fuchsin , dan
safranin. Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak
digunakan. Disebut sederhana karena hanya menggunakan satu jenis zat warna
untuk mewarnai organisme tersebut. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan
pewarnaan- pewarnaan sederhana karena sitoplasamanya bersifat basofilik (suka
dengan basa). Zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya
bersifat alkolin. Dengan pewarnaan sederhana dapat mengetahui bentuk dan
rangkaian sel-sel bakteri. Pewarna basa yang biasa digunakan untuk pewarnaan
sederhana ialah metilen biru, kristal violet, dan karbol fuehsin yang mana
pewarnaan sederhana ini dibagi lagi menjadi dua jenis pewarnaan.
4
C. Morfologi dan Identifikasi
- Jenis Bakteri : E. coli,
-Nama Bakteri : Escherichia coli
- Bentuk : Batang (tebal maupun tipis, rantai maupun tunggal)
Bakteri E. coli yang dilihat di bawah mikroskop cahaya dengan pembesaran 40x.
Berwarna Ungu . Bentuk E. coli tampak seperti batang (basil) pendek yang
membentuk koloni yang tersusun seperti rantai yang memanjang.
Sel bakteri dapat diamati dengan jelas jika menggunakan mikroskop dengan
perbesaran 100 x 10 yang ditambah minyak emersi. Jika dibuat preparat ulas tanpa
pewarnaan, sel bakteri sulit terlihat. Pewarnaan bertujuan untuk memperjelas sel
bakteri dengan menempelkan zat warna ke permukaan sel bakteri.Zat warna dapat
mengabsorbsi dan membiaskan cahaya, sehingga kontras sel bakteri dengan
sekelilingnya ditingkatkan.Zat warna yang digunakan bersifat asam atau basa. Pada
zat warna basa, bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut kromofor
dan mempunyai muatan positif. Sebaliknya pada zat warna asam bagian yang
berperan memberikan zat warna memiliki muatan negatif. Zat warna basa lebih
banyak digunakan karena muatan negatif banyak ditemukan pada permukaan sel.
Contoh zat warna asam antara lain cristal violet, methylen blue, safranin, Base
Fuchsin, Malachite Green, dll. Sedangkan zat warna basa antara lain Eosin, Congo
Red dll
Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarnaan-pewarnaan sederhana
karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna
yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen
kromotofiknya bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan
bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna, subtrat, intensifikasi, pewarnaan dan
penggunaan warna penutup. Suatu preparat yang sudah menyerap zat warna,
kemudian dicuci dengan asam encer maka zat warna terhapus. Sebaliknya terdapat
juga preparat yang tahan terhadap asam encer. Bakteri-bakteri ini disebut bakteri
tahan asam, dan ini merupakan ciri khas bagi suatu spesies.
5
BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
A. Alat dan Bahan
Alat Bahan
1. Gelas Preparat 1. Kotoran Mulut
2. Jarum Ose 2. Aquades
3. Labelling 3. Methylen Blue
4. Mikroskop 4. Tustel
5. Bunsen 5. Alkohol
6. Pipet tetes 6. Tissue
7. Tabung Reaksi 7. Minyak Imersi
8. Rak Tabung Reaksi 8. Kapas Alkohol
Cara kerja :
1. 1.Bersihkan preparat dengan alkohol 70% kemudian di fiksasi di

atas bunsen
2. Siapkan sampel dengan mengambil kotoran gigi menggunakan
tustel
3. Oleskan kotoran gigi pada preparat dan ratakan pulasan secara
melingkar (berbentuk oval)
4. Tunggu kering dan fiksasi di atas Bunsen
5. Genangi preparat dengan zat warna methylen blue selama 3 menit
6. Bilas preparat dengan aquades
7. Keringkan di udara
6
8. Amati di bawah mikroskop dengan pembesaran lensa objektif 40x,
apabila ingin diamati dengan pembesaran 100x maka preparat
ditetesi minyak oil imersi.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
- Jenis Bakteri : Staphylococcus

-Nama Bakteri : Staphylococcus sp.
- Bentuk : Bergerombol seperti buah anggur
Bakteri Staphylococcus sp. yang dilihat di bawah mikroskop cahaya
dengan pembesaran 40x. Berwarna Ungu . Bentuk Staphylococcus sp.
dapat dilihat jelas dengan pembesaran lensa objektif 100x yang nantinya
akan tampak seperti bola-bola yang saling bergerombol sehingga akan
terlihat seperti buah anggur.
7
B. Pembahasan
Pewarnaan sederhana adalah pewarnaan yang menggunakan pewarna
tunggal. Pewarna tunggal yang biasanya digunakan dalam pewarnaan sederhana
adalah Methylene Blue, Basic Fuchsin, dan Crystal Violet . Semua pewarna
tersebut dapat bekerja dengan baik pada bakteri karena bersifat basa dan alkalin
(kromoforiknya bermuatan positif), sedangkan sitoplasma bakteri bersifat
basofilik (suka terhadap basa) sehingga terjadilah gaya tarik antara komponen
kromofor pada pewarna dengan sel bakteri, hal tersebut menyebabkan bakteri
dapat menyerap pewarna dengan baik. Pewarnaan sederhana bertujuan untuk
memberikan kontras antara bakteri dan latar belakang. Pewarnaan sederhana
dilakukan ketika kita ingin mengetahui informasi tentang bentuk dan ukuran sel
bakteri. Gambar pewarnaan sederhana dapat dilihat dibawah mikroskop.
Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara
komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut
kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen
seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat
dibedakan asam dan pewarna basa. Pewarna asam dapat terjadi karena bila
senyawa pewarna bermuatan negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral dinding
sel bakteri cenderung bermuatan negatif, sehingga pewarna asam yang bermuatan
negatif akan ditolak oleh dinding sel, maka sel tidak berwarna. Contoh dari
pewarna basa misalnya metilen biru, kristal violet, safranin, dan lain-lain. Teknik
pewarnaan asam basa ini hanya menggunakan satu jenis senyawa pewarna, teknik
ini disebut pewarna sederhana.
Pewarnaan sederhana ini diperlukan untuk mengamati morfologi, baik
bentuknya maupun susunan sel. Bentuk bakteri yang dikenal saat ini ada 3 yaitu :
coccus, basil, dan spiral. Adapun susunan bakteri yang diketahui yaitu:
a) Bakteri Basilberbentuk bulat yang dikenal sebagai basil. Kata basil berarti
dari bacillus yang berarti batang. Bentuk basil dapat dibedakan atas:
1. Basil tunggal adalah bakteri yang hanya berbentuk satu batang,
misalnya Salmonella typh i, penyebab penyakit tipus.
2. Diplobasil yaitu bakteri yang berbentuk batang yag bergandengan dua-dua.
8
3. Streptobasil adalah bakteri yang membentuk batang yang bergandengan
memanjang membentuk rantai misalnya Bacillus anthracis penyebab
penyakit antraks.
b) Bakteri Coccus
Bakteri berbentuk bola yang dikenal sebagai coccus, bakteri ini juga dapat
dibedakan atas:
1. Monokokus, yaitu bakteri berbentuk bola tunggal, misalnya Neisseria
gonorrhoeae,penyebab penyakit kencing nanah.
2. Diplokokus, yaitu bakeri berbentuk bola yang bergandengan dua-dua,
misalnya Diplococcus pneumonia penyebab penyakit pneumonia atau radang
paru-paru.
3. Sarkina, yaitu bakteri berbentuk bola yang berkelompok empatbari-empat
sehngga bentuknya mirip kubus.
4. Streptokokus, yaitu bakteri bentuk bola yang berkelompok memanjang
membentuk rantai.
5. Stafilokokus, yaitu bakteri berbentuk bola yang berkoloni membentuk
sekelopok sel tidak teratur sehingga membentuknya mirip buah anggur
dompolan.
c) Bakteri bentuk spiral

Ada tiga mcam bentuk spiral:
1. Spiral, yaitu golongan bakteri yang bentuknya seperti spiral,
misalnya Spirillum .
2. Vibrio, dianggap sebagai bentuk spiral yang sempurna, misalnya Vibrio
kolera yangmenyebabkan penyakit kolera.
3. Spiroseta adalah golongan bakteri berbentuk spiral yang besifat lentur. Pada
saat bergerak, cobalah dapa memanjang dan mengerut.
9
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Dari hasil praktikum maka dapat disimpulkan bahwa Pewarnaan

sederhana adalah pewarnaan yang menggunakan pewarna tunggal. Pewarna
tunggal yang biasanya digunakan dalam pewarnaan sederhana adalah
Methylene Blue, Basic Fuchsin, dan Crystal Violet. Pada pewarnaan ini kita
dapat mengamati morfologi bakteri baik itu bentuk maupun susunannya.
B. Kritik dan Saran
Untuk menghindari kesalahan- kesalahan yang dapat terjadi di dalam

praktikum selanjutnya yaitu memperhatikan prosedur kerja atau cara kerja
yang ada sebelum melakukan praktikum, memperhatikan zat warna yang
akan digunakan didalam praktikum dan memperhatikan zat warna yang
pertama di pakai serta waktu yang dibutuhkan dalam pewarnaan.
10
DAFTAR PUSTAKA
Supardi I, 1999.Mikrobiologi dalam pengelolaan dan keamanan pangan, Alumni,

Bandung.
Aryulina, Diah.2004.Biologi Umum. Jakarta : Erlangga
Campbell, Nell.2003. Biologi Edisi Kelima Jilid 2. Jakarta : Erlangga.
11
LAPORAN 2
PERGERAKAN BAKTERI
NAMA : NUR ALI ZAINUDDIN PATTY
NIM : PO. 71.3.203.18.1.026
12
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Kebanyakan species bakteri dapat bergerakdengan menggunakan flagel, akan
tetapi adapula yang tidak bergerak karena tidak mempunyai flagel. Flagel
merupakan filament protein helix dengan panjang dan diameter yang sma,
dimilii oleh bakteri pathogen untuk bergerak bebas dan cepat (pergerakan
berenang). Flagel disusun oleh tiga bagian , filament, hook (sudut), dan basal
body (bagian dasar), bagian dasar menancap pada membrane plasma,
peptidoglikan pada bakteri gram negative berhubungan dengan membranluar
pembungkus sel.
Pada bakteri yang memiliki flagel atau lofotrik pergerakannya hanya searah
(berputar dalam satu arah) gerakan yang dihasilkan biasanya tergolong cepat,
berputar-putar dan berubah arah, sedangkang yang mempunyai flagel
peritrikus akan bergerak berputar-putar dan berubah arah. Gerakan yang
dihasilkan biasanya lurus dan lambat, pergeraka flagella adalah dengan cara
memutar flagella membentu heliks. Pergerakan ini dapat disamakan dengan
pergerakan memutar ketika membuka botol gabus.proses ini memerlukan
energy dari sel.
Beberapa organisme prokariotik daoat bergerak kalau tidak memiliki organ
pergerakan atau flagel. Gerakan yang dihasilkan terjadi dengan cara meluncur
(menggelinding) dan hanya bergerak jika ada kontakd dengan suatu
13
permukaan padat.organisme ini tidak akan bergerak jika terdapat dalam
bentuk suspense di dalam cawan.
B. Maksud dan Tujuan
Untuk mengamati morfologidan pergerakan bakteri.
 Waktu : Selasa , 2 April 2019
 Lokasi praktikum : Laboratorium Bakteriologi
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Antoni Van Leuwenhoek berhasil menemukan bakteri untuk pertama kalinya
di dunia pada tahun 1676. Banyak species bakteri yang bergerak
menggunakan flagel. Bskteri yang tidsk memiliki alat gerak biasanya hanya
mengikuti pergerakan media pertumbuhan atau lingkungan tempat bakteri
tersebut berada . Sama seperti srtuktur kapsul , flagel juga dapat menjadi agen
penyebabpenyakit pada beberapa sepsis bakteri . Berdasarkan tempat dan
jumlah flagel yang dimiliki , bakteri dibagi mejadi atrik , monotrik , lofotrik
,amfitrik , dan peritrik.
14
B. Definisi
Flagel merupakan struktur kompleks yang tersususn atas bermacam-
macam protein termasuk flagelin yang membuat flagella berbentuk seperti
tabung cambuk dan protein kompleks yang memanjangkan dinding sel dan
membrane sel untuk membentuk motor yang menyebabkan flagella berotasi.
Flagella berbentuk seperti cambuk dan digunakan sebagai alat gerak.
C. Morfologi dan identifikasi
1. Monotrik yaitu mempunyai satu flagel yang berada di salah satu ujung sel
2. Peritrik yaitu mempunyai banyak flagel pada permukaan tubuh
3. Lofotrik yaitu mempunyai flagel pada salah satu ujung bakteri dengan
jumlah lebih dari 2 buah
4. Amfitrik yaitu memiliki flagel pada kedua kutubnya dengan jumlah lebih
dari satu
5. Atrik yaitu tidak memiliki flagel
15
BAB III
A. Alat dan Bahan
a) Alat
1. Objek glass
2. Lampu spiritus
3. Oce
4. Tabung reaksi
5. Pipet tetes
6. Deck glass
7. Rak tabung reaksi
8. Mikroskop
9. Masker
10. Hadscoon
b) Bahan praktikum
1. Biakan bakteri
2. Oil mercy
c) Reagen yang digunakan
1. Nacl
2. Air kran
16
B. Cara Kerja
1. Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan
2. Buat suspensi terlebih dahulu
3. Fiksasi objek glass terlebih dahulu
4. Diambil 1-2 mata oce media cair (suspense) tersebut diatas objek glass
5. Lalu tutup dengan deck glass, lalu tambah oil mersi
6. Kemudian diperiksa dibawah mikroskop dengan pembesaran objektif
100x
BAB IV
A. Hasil
Keterangan :
Pergerakan brown
17
A. Pembahasan
Praktikum ini digunakan untuk mengamati gerak atau motilitas bakteri.
Metode ini bertujuan untuk mengamati gerak bakteri yang bergera. Pada alat
inokulasi bakteri diambil dan ditusukan menggunakan jarum ose pada
tabung reaksi yang sudah terisi media dan tabung reaksi dapat dilihat
mikroba yang bergerak, pengelompokan bakteri secara natural dan reaksi
bakteri terhadap bahan kimia .
Gerak bakteri yang bersifat motil diakibatkan oleh adanya struktur atau
organ sel bakteri yang berbentuk benang yang flagelia. Flagella panjang dan
ramping. Pada umumnya memiliki panjang sekitar 12-30 mm. Untuk bisa
melihat jelas pergerakan flagella bakteri digunakan zat warna tertentu.
Kemampuan suatu mikroorgnisme untuk bergerak sendiri disebut motilitas
(daya gerak). Hamper semua selbakteri spiral dan sebagian dari sel bakteri
bersifat motil, sedangkan bakteri yang berbentuk kokkus bersifat tidak
bergerak (motil).
Dari pengamatan bentuk bakteri diketahui bahwa bentuk bakteri yang
diamati adalah bentuk basil. Pergerakan pada bakteri yang bersifat motil
menunjukkan pergerakan yang lebih konpleks, menuju kearah tertentu
(bukan gerak grown) sedangkan gerak pada bakteri yang bersifat tidak motil
akan bergerak maju mundur secara zigzag yang disebut dengan gerak brown.
Gerak brown adalah gerak partikel koloid yang bergerak dengan arah zigzag,
gerakan ini disebabkan karena adanya tumbukan antara molekul pelarut
18
dengan molekul koloid. Flagel padabakteri selalu berlekuk apalagi jika
bakteri sedang bergerakdi medium cair.
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum dapat disimpulkan bahwa telah didapatkan
pergerakan bakteri yang bersifat motil yaitu gerak brown karena
pergerakannya mengikuti arus air.
B. Kritik dan saran
Pada praktikum selanjutnya , diharapkan praktikum dilakukan dengan
sungguh-sungguh agar praktikum yang dilakukan berjalan dengan benar dan
jelas.
DAFTAR PUSTAKA
Volk & Wheeler. 1984. Mikrobiologi Dasar Edisi Kelima Jilid I. Jakarta :
Erlangga.
Pelczar, M.J.2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.
Lay, Bibiana.W.1994.Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : Rajawali.
19
LAPORAN 3
PEWARNAAN GRAM
NIM : PO. 71.3.203.18.1.005
20
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Bakteri mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas.
Bakteri merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain
mikroskopik, bakteri juga hamper tidak berwarna atau transparan dan kontras
dengan air. Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup
sangat sulit. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik
pewarnaan sel bakteri. Ini merupakan salah stu cara yang paling utama dalam
penelitian-penelitian mikrobiologi. Hal ini untuk mempermudah proses
identifikasi bakteri.
Bakteri juga dapat dibedakan melalui teknik pewarnaan gram. Teknik
pewarnaan gram tersebut dapat menghasilkan warna merah dan ungu. Bakteri
gram negative ditandai dengan pewarnaan ungu sedangkan yang positif
berwarna merah. Hal ini bertujuan untuk memberikan waran pada bakteri pada
akhirnya dapat diidentifikasi dengan mudah. Selain itu, ada endospore yang bisa
diwarnai. Endospore adalah organisme yang dibentuk dalam kondisis yang stress
karena kurang nutrisi, yang memiliki kemungkinan untuk tetap berlanjut di
lingkungan sampai kondisi menjadi baik.
Pada praktikum proses pewarnaan gram olesan bakteri yang terfiksasi
dikenai larutan-larutan berikut dalam urutannya yaitu ungu Kristal, larutan
yodium, alcohol (bahan pengecat), dan safranin atau beberapa pewarnaan
21
tandingan lain yang sesuai. Bakteri yang diwarnai dengan metode gram ini
dibagi menjadi dua kelompok. Salah satu diantaranya, bakteri gram positif,
mempertahankan zat ungu Kristal. Di gunakan untuk pengecatan differensial,
menggunakan beberapa jenis zat, di gunakan untuk mengelompokkan bakteri,
seperti pengecatan gram atau pengecatan acidpast, bakteri gram negatif,,
kehilangan ungu Kristal ketika dicuci dengan alcohol, dan sewaktu diberi
pewarna tandingan dengan warna merah safranin, tampak berwarna merah.
1. Untuk mengetahui definisi pewarnaan gram.
2. Untuk membedakan gram positif dan gram negatif dengan melihat
dinding sel.
• Waktu :
22
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Ketika bekerja dengan jaringan paru-paru yang terinfeksi dari mayat, ahli
patologi Denmark menemukan sebuah teknik yang luar biasa yang masih
digunakan secara umum hingga lebih dari 100 tahun kemudian. Bagaimana ini
bisa terjadi? Hans Christian Gram (lahir pada tahun 1853) belajar botani di
Universty of Copenhangen di Denmark. Studi tentang tanaman
memperkenalkannya kepada dasar farmakologi dan penggunaan mikroskop.
Pada tahun 1883, ia lulus dari sekolah kedokteran dan setelah merantau
di seluruh Eropa, ia menetap di Berlin. Pekerjaan awalnya bersangkutan studi sel
darah merah manusia. Dia adalah orang yang pertama mengakui bahwa makrosit
merupakan karakteristik anemia pernisiosa.
Pada tahun 1884, sambil memeriksa jarigan paru-paru dari pasien yang
meninggal karena pneumonia, gram telah menemukan bahwa noda yang
istimewa diambil dan disimpan oleh sel bakteri. Pada langkah pertama, ia
dikeringkan cairan smear pada kaca preparat di atas api kompor dan
menuangkan larutan gentian (Kristal) violet di atasnya. Setelah dibilas dengan
air, ditambahkan larutan lugol sampai larutan triodida kalium yang bertindak
sebagai mordant untuk memperbaiki pewarnaan. Lalu ia menuangkan etanol
lebih dari slide untuk mebasuh pewarna. Bakteri tertentu (pneumokokus)
23
mempertahankan warna (gram positif), sementara spesies lain menjadi hiilang
warnanya dengan alcohol (gram negatif). Pekerjaan awal dengan proses
pewarnaan ini dilakukan pada Streptococcus pneumonie dan Klebsiella
pneumonia.
Gram adalah seorang manusia sederhana, dan dalam publikasi awal ia
berkomentar, “Karena itu saya telah menerbitkan metode, meskipun saya sadar
bahwa belum sempurna, samgat cacat dan tidak sempurna, tetapi metode
tersebut sangat diharapkananan akan berubah menjadi berguna di tangan peneliti
lainnya nanti.” Gram tidak menggunakan counterstain dalam prosedur nya.
Beberapa tahun kemudia, bahwa ahli patologi Jerman Carl Weigert (1845-1904)
dari Frankfurt, menambahkan langkah terakhir dari pewarnaan dengan safranin.
Gram dahulu tidak pernah menggunakan counterstaining merah untuk
memvisualisasikan bakteri gram negatif.
Pada tahun 1891, gram menjadi dosen di farmakologi, dan kemudian di
tahun itu diangkat sebagai professor di Universitas Copenhangen. Pada tahun
1990 ia mengundurkan diri kursi di farmakologi menjadi professor kedokteran.
Raja denmark memberikannya penghargaan Dannebrog Komandan pada tahun
1912, dan Glden Medal of Merit pada tahun 1924. Dia pension pada tahun 1923
dan meninggal pada tahun 1938.
Teknik pewarnaan yang ia kembangkan masih merupakan metode yang
paling penting untuk membedakan antara dua kelas utama dari bakteri.
Penemuannya pada tahun 1884 terjadi selama tahun-tahun kemasan
24
mikrobiologi klinis. Waktu itu saat piring petri diciptakan (1887), agar
ditemukan (1881), dan Pasteur dan Koch berada di puncak kinerjanya, dan
penemuan agen etiologi dari banyak penyakit yang ganas dan menjengkelkan
saat itu. Terlepas dari ksederhanaan dan keraguan keberhasilannnya, teknik ini,
Gram Stain, terus menjadi prosedur standar untuk klasifikasi bakteri di
mikrobiologi medis hingga saat ini.
B. Definisi
Pewarnaan Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang penting untuk
identifikasi bakteri. Teknik pewarnaan ini termasuk differential stain atau
pewarnaan bertingkat yang menggunakan lebih dari satu jenis pewarna. Mula-
mula apusan sel bakteri yang telah difiksasi dengan panas diberi pewarna kristal
violet, kemudian ditambahkan iodin yang berfungsi sebagai mordant (zat kimia
yang berfungsi mempertahankan zat pewarna). Tahap selanjutnya adalah
dekolorisasi menggunakan alkohol 95% dan pewarnaan kembali atau
counterstaining dengan safranin.
Berdasarkan pewarnaan Gram, bakteri dapat dibedakan menjadi bakteri
Gram-positif dan bakteri Gram-negatif. Di bawah mikroskop bakteri Gram-
positif akan tampak berwarna ungu-violet sedangkan Gram-negatif akan terlihat
berwarna pink. Contoh dari bakteri Gram-positif adalah Bacillus, Clostridium,
Lactobacillus, Staphylococcus, dan Streptococcus. Sementara itu Escherichia
coli, Salmonella, Shigella, Pseudomonas, dan Moraxella merupakan contoh dari
25
bakteri Gram-negatif. Dari gambar di samping dapat dilihat bakteri berbentuk
batang merupakan Gram-negatif sedangkan bakteri berbentuk coccus merupakan
Gram-positif.
Teknik pewarnaan Gram didasarkan atas perbedaan struktur dinding sel
kedua jenis bakteri tersebut. Dinding sel bakteri Gram-positif hanya terdiri dari
satu lapisan tebal yang tersusun dari satu jenis molekul saja. Sementara itu
Gram-negatif memiliki dua lapis dinding sel, yaitu lapisan peptidoglikan yang
relatif lebih tipis dan membran luar. Dinding sel Gram-positif 90 % nya
merupakan peptidoglikan sedangkan hanya 10-20 % dinding sel bakteri Gram-
negatif yang tersusun atas peptidoglikan, sisanya merupakan polisakarida, lipid,
dan protein yang menyusun membran luar. Oleh karena itu membran luar
disebut juga sebagai lapisan lipopolisakarida (LPS).
- Jenis Bakteri : Bacillus
- Nama Bakteri : Bacillus subtilis
- Bentuk : Batang (tebal maupun tipis, rantai maupun tunggal)
- Gram : Positif
- Spora : Penghasil endospora
Proses identifikasi mikroba metode pewarnaan gram umumnya
menggunakan zat warna garam-garam yang dibangun oleh ion-ion yang
26
bermuatan positif dan negatif dimana salah satu ion tersebut berwarna. Zat
warna dikelompokkan menjadi dua, yaitu zat pewarna yang bersifat asam dan
basa. Jika ion yang mengandung warna adalah ion positif maka zat warna
tersebut disebut pewarna basa. Prosedur pewarnaan ini menggunakan zat warna
basa seperti seperti crystal violet, biru metilen, safranin atau hijau malakit serta
bila ion yang mengandung warna adalah ion negatif maka zat warna tersebut
disebut pewarna asam. Contoh dari zat pewarna asam yaitu tinta cina, larutan
Nigrosin, asam pikrat, eosin dan lain-lain.. Hal ini sesuai dengan Fitriani (2016)
yang menyatakan bahwa zat warna yang digunakan bersifat asam atau basa.
Pada zat warna basa, bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut
kromofor dan mempunyai muatan positif. Sebaliknya pada zat warna asam
bagian yang berperan memberikan zat warna memiliki muatan negatif. Zat
warna basa lebih banyak digunakan karena muatan negatif banyak banyak
ditemukan pada permukaan sel. Contoh zat warna basa antara lain Crystal
Violet, Methylene Blue, Safranin, Base Fuchsin, Malachite Green dan lain-lain.
Sedangkan zat warna asam antara lain Eosin, Congo Red dan lain-lain.
27
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Alat dan Bahan
a). Alat yang digunakan
- ose
- Bunsen
- Objek glass
- Mikroskop
- Pipet tetes
- Bak pewarnaan
b). Bahan yang digunakan
- Biakan bakteri
- Carbol Gentian Violet Oksalat
- Lugol
- Safranin 0,25 %
- Alkohol 95%
- Aquadest
c). Reagen untuk pewarnaan gram
- Carbol Gentian Violet Oksalat
- Lugol
- Alkohol 95 %
28
- Safranin 0,25 %
B. Cara Kerja
1. Sediaan yang telah difiksasi dibubuhi larutan carbol gentian
violet selama 2-3 menit
2. Cuci dengan air mengalir
3. Tetesi lugol dan diamkan selama 1 menit
4. Cuci dengan air kran
5. Tetesi alcohol 96% selama 15-30 detik
6. Tetesi safranin 0,25% selama 30 detik
7. Cuci dengan air mengalir dankeringkan
8. Periksan dibawah mikroskop dengan oil emercy pada
pembesaran 100X
29
BAB IV
A. Hasil
Morfologi : Bentuk staphylococcus atau berbentuk buah anggur
dan berwarna ungu yang artinya bakteri gram positif
B. Pembahasan
Berdasarkan tinjauan pustaka diatas, dilakukanlah praktikum tentang
pewarnaan gram. Dimana pewarnaan gram adalah pewarnaan diferensial yang
sangat bergunak dan paling banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi
karena merupakan tahapan penting dalam langka awal identifikasi pewarnaan
didasarkan pada tebal atau tipisnya lapisan peptodoglikan dinding sel dan
banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran sel bakteri. Jenis nakteri
30
berdasarkan pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu pewarnaan gram negatif
dan gram positif.
Pewarnaan yang didasarkan tebal atau tipisnya peptidoglikan. Dimana
pada bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal berupa peptidoglikan
dan berlapis tunggal atau monolayer sehingga pada bakteri gram positif tetap
mempertahankan warna ungunya sedangkan pada bakteri gram negatif memiliki
dinding sel tpis dan berlapis tiga atau multilayer dengan kandungan lemak yang
berlebih serta peptidoglikan terletak diantara membrane dalam dan membrane
luarnya saja sehingga pada bakteri gram negatif tidak mempertahankan warna
ungunya melainkan warna terakhir yang diberikan yaitu berwarna merah.
Tujuan dilakukannya praktikum adalah untuk mengetahui prosedur
pewarnaan gram dan memahami reaksi- reaksi kimiawi yang terlibat. Adapun
prinsip praktikum adalah pada saat bekteri diwarnai dengan zat warna primer
(kristal violet), bakteri gram positif akan menyerap zat warna tersebut sehingga
berwarna ungu, sedangkan bakteri gram negatif akan melepaskan zat warna
(kristal violet) setelah dicuci dengan alkohol dan akan kemudian akan menyerap
zat warna terakhir yang diberikan yaitu safranin atau karbon fuchsin sehingga
berwarna merah.
Pada praktikum yang kami lakukan pada pewarnaan gram, adapun
biakan bakteri yang digunakan adalah staphylococcus. Staphylococcus
merupakan bakteri gram positif, tidak bergerak, tidak berspora dan mampu
membentuk kapsul sertan berbentuk staphylococcus dan tersusun seperti buah
31
anggur. Hal pertama yang dilakukan yaitu membersihkan kaca preparat supaya
terbebas dari kontaminasi oleh jenis bakteri lain. Selanjutnya diambil biakan
bakteri pada tabung reaksi dan digoreskan pada kaca preparat yang telah bersih.
Setelah itu digoreskan dengan baik pada kaca preparat maka dilakukan fiksasi.
Fiksasi berfungsi untuk melekatkan sel bakteri pada kaca preparat. Selanjutnya
diteteskan Kristal violet di seluruh permukaan kaca preparat. Fungsi Kristal
violet adalah untuk memberikan warna ungu pada bakteri gram positif.
Kemudian ditunggu selama kurang lebih 1 menit. Setelah selesai dicuci
menggunakan aquades atau air mengalir. Pencucian dengan aquades atau air
mengalir berfungsi untuk membersihkan sisa- sisa zat warna yang tidak di
butuhkan lagi. Setelah itu dikeringkan dan selanjutnya diteteskan dengan larutan
lugol selama 1 menit. Larutan lugol berfungsi untuk meningkatkan afinitas
pengikatan zat warna kristal violet oleh bakteri sehingga peningkatan zat warna
bakteri menjadi lebih kuat. Setelah 1 menit dicuci dengan aquades atau air
mengalir, kemudian dikeringkan kembali. Selanjutnya diteteskan larutan
pemucat atau alkohol 96% diatas permukaan kaca preparat selama 30 detik.
Fungsi larutan alkohol adalah sebagai larutan pemucat atau pembersih. Setelah
itu dicuci dengan aquades yang kemudian dikeringkan lagi. Setelah kering
kemudian diteteskan air fuchsin kurang lebih 1 menit. Air fuchsin berfungsi
memberikan warna terakhir pada bakteri karena larutan kristal violet dan larutan
lugol telah larut, selanjutnya dibilas dengan aquades. Kemudian dikeringkan dan
setelah kering ditambahkan minyak emersi sebelum di amati dibawah
mikroskop. Minyak emersi berfungsi untuk memperjelas struktur sel bakteri
32
pada saat dilakukan pengamatan di bawah mikroskop. Setelah diteteskan minyak
emersih maka dilakukan pengamatan di mikroskop dengan pembesaran 100x.
Adapun hasil praktikum yang telah kami lakukan setelah melakukan
pengamatan dibawah mikroskop adalah pada bakteri Staphylococcus merupakan
bakteri gram positif yang berbentuk Staphylacoccus seperti buah anggur dan
berwarna ungu dari kristal violet. Hal ini sesuai dengan teori karena pada bakteri
yang di ujikan merupakan jenis bakteri gram positif, memiliki bentuk
Staphylococcus serta akan mengikat warna pertama yang diberikan yaitu kristal
violet dan pada saat dibilas dengan alkohol maka pori- pori dinding sel akan
menyempit sehingga akan mempertahankan warna ungunya.
Hubungan antara fikasasi, dinding peptidoglikan dengan zat pewarnaan
hingga mengakibatkan bakteri menjadi ungu atau mrah adalah pada saat
dilakukan proses fiksasi dinding sel bakteri atau pori- pori sel bakteri akan
membesar atau melebar sehingga nanti pada saat diberi dengan zat warna (kristal
violet) zat warna tersebut akan terserat masuk kedalamnya dan diikat dengan
dinding peptidoglikan yang ada. Pada saat dibilas dengan alkohol maka pori-
pori tersebut akan menyempit sehingga dinding selnya akan mempertahankan
zat warna yang telah diberikan sedangkan pada bakteri gram negatif memiliki
dinding peptidoglikan yang tipis dengan lapisan lipid atau lemak yang lebih
banyak sehingga pada saat proses pembilasan dengan alkohol maka pori- pori
dinding sel melebar dan bakteri tidak dapat mempertahankan zat warna ungu
(kristal violet) sehingga bakteri selanjutnaya akan menyerap zat warna terakhir
33
yaitu air fuchsin sehingga pada saat diamati bakteri tersebut berwarna merah
dari air fuchsin.
Kesalahan- kesalahan yang mungkin terjadi dalam pewarnaan gram
adalah kaca preparat yang digunkan tidak bersih sehingga pada saat melakukan
pengamatan bakteri terkontaminasi dengan kotoran yang ada, fiksasi dilakukan
telalu lama, pemberian alkohol terlalu lama sehingga struktur bakteri ikut luntur
saat pembilasan dengan air mengalir atau aquades.
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Setelah melakukan praktikum dapat disimpulkan bahwa bakteri
Staphylococcus yang diamati dibawah mikroskop memiliki bentuk
Staphylococcus atau berbentuk buah anggur dan berwarna ungu yang artinya
bakteri gram positif.
B. Kritik dan Saran
Untuk menghindari kesalahan- kesalahan yang dapat terjadi di
dalam praktikum selanjutnya yaitu memperhatikan prosedur kerja atau cara kerja
yang ada sebelum melakukan praktikum, memperhatikan zat warna yang akan
digunakan didalam praktikum dan memperhatikan zat warna yang pertama di
pakai serta waktu yang dibutuhkan dalam pewarnaan.
34
DAFTAR PUSTAKA
Dwidjoseputro, D.2005.Dasar - Dasar Mikrobiologi.Malang: Penerbit

Djambatan.
Fardiaz, S. 1989. Mikrobiologi Pangan. Bogor : IPB
Karmana, Oman. 2008. Biologi. Jakarta : PT Grafindo Media Pratama.
35
LAPORAN 4
PEWARNAAN BASIL TAHAN ASAM (BTA)
NIM : PO. 71.3.203.18.1.005
36
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar belakang
Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur
dansifat-sifat yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup
hampirtidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri
tersebutdisuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri
sehinggamudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau
pewarnaan.Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya
yaitumengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian
pengecatan.Bakteri tahan asam (BTA) merupakan bakteri yang memiliki
ciri-ciri yaitu berantai karbon (C) yang panjangnya 8 - 95 dan memiliki
dinding sel yangtebal yang terdiri dari lapisan lilin dan asam lemak mikolat,
lipid yang ada bisa mencapai 60% dari berat dinding sel. Bakteri yang
termasuk BTA antaralain Mycobacterium tuberculose, Mycobacterium
bovis, Mycobacteriumleprae, Nocandia meningitidis, dan Nocandia
gonorrhoeae. Mycobacteriumtuberculose adalah bakteri patogen yang dapat
menyebabkan penyakittuberculose, dan bersifat tahan asam sehingga
digolongkan sebagai bakteritahan asam (BTA). Penularan Mycobacterium
tuberculose terjadi melalui jalan pernafasan (Syahrurachman,
1994).Pewarnaan Ziehl Neelson atau pewarnaan tahan asam
memilahkankelompok Mycobacterium dan Nocandia dengan bakteri lainnya.
Kelompok bakteri ini disebut bakteri tahan asam karena dapat
37
mempertahankan zatwarna pertama (carbol fuchsin) sewaktu dicuci dengan
larutan pemucat(alkohol asam). Larutan asam terlihat berwarna merah,
sebaliknya pada bakteri yang tidak tahan asam karena larutan pemucat
(alkohol asam) akanmelakukan reaksi dengan carbol fuchsin dengan cepat,
sehingga sel bakteritidak berwarna. Dinding bakteri yang tahan asam
mempunyai lapisan lilin dan lemak yangsukar ditembus cat. Oleh karena
pengaruh fenol dan pemanasan maka lapisan lilin dan lemak itu dapat
ditembus cat basic fuchsin. Pada waktu pencucianlapisan lilin dan lemak
yang terbuka akan merapat kembali. Pada pencuciandengan asam alkohol
warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan pada bakteritidak tahan asam akan
luntur dan mengambil warna biru dari methylen blue.Sebagai tenaga analis
kesehatan dibutuhkan keterampilan dalam membuatspesimen yang berguna
dalam pemeriksaan spesimen di laboratorium. Bakteriumumnya memiliki
warna yang transparan maka dari itu diperlukan pewarnaan bakteri agar
bentuk dan struktur bakteri dapat terlihat lebih jelas jika diamati dengan
mikroskop cahaya. Hal tersebut yang melatarbelakangi penulis untuk
mengangkat permasalahan ini sebagai masalah yang akandibahas dalam
laporan praktikum dengan judul “ Pewarnaan BTA”.
B. Maksud dan tujuan
Maksud dari praktikum ini adalah untuk mengetahui tehnik pewarnaan
BTA metode Ziehl-Neelsen serta mengetahui bentuk – bentuk ( morfologi )
dan sifat BTA. Adapun tujuannya yaitu untuk mengelompokkan 2 kelompok
bakteri, yaitu bakteri tahan asam dan bakteri tidak tahan asam .
38
C. Waktu dan Lokasi
 Waktu : Selasa ,
 Lokasi : Laboratorium Bakteriologi
BAB II
TINJUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Basil tahan asam adalah jenis bakteri yang tidak dapat diwarnai dengan
pewarnaa anilin biasa kecuali dengan menggunakan fenol dan dengan
pemanasan. Bakteriini memiliki dinding sel berlilin karena mengandung
sejumlah besar materi lipoidal oleh karena itu bakteri ini hanya dapat
diwarnai degan pewarnaan BTA (Acid-Fast Stain). Dinding sel hidrofobik
dan impermeable terhadap pewarnaa dan bahan kimia lain pada cairan atau
larutan encer. Ketika proses pewarnaan , basil tahan asam ini melawn
dekolorisasi dengan asam sehingga tersebut disebut basil tahan asam.
B. Definisi
Pewarnaan basil tahan asam adalah tipe pewarnaan diferensial lebih dari
satu warna untuk membedakan suatu mikroorganisme dengan kandungan
dinding sel peptidoglikan serta disusun lebih dari 60% lipid kompleks yang
tahan terhadap dekolorisasi dengan alkohom asam.
39
Tehnik pewarnaan Ziehl-Neelsen yaitu dengan menggunaka zat warna
carbol fuchsin 0,3 % , asam alcohol 3% , dan methylen blue 0,3% . Pada
pemberian warna pertama , yaitu carbol fuchsin , BTA bersifat
mempertahankannya . Carbol fuchsin merupakan fuchsin basa yang
dilarutkan dalam larutan fenol 5% . Larutan ini memberikan warna merah
pada sediaan dahak . Fenol digunakan sebagai pelarut untuk membantu
pemasukan zat warna ke dalam sel bakreti sewaktu pemanasan . Fungsi
pemanasan untuk melebarkan pori- pori lemak BTA sehingga carbol fuchsin
dapat masuk sewaktu BTA dicuci dengan larutan pemucat , yaitu asam
alcohol , maka zat warna pertama tidak mudah dilunturkan . Bakteri
kemudian dicuci dengan air mengalir untuk menutup pori-pori an
menghentikan pemucatan . BTA akan terlihat berwarna merah , sedangkan
bakteri yang tidak tahan asam akan melarutkan carbol fuchsin dngan cepat
sehingga sel bakteri tidak berwarna . Setelah penambahan zat warna kedua
yaitu methylene blue , bakteri tidak tahan asam akan berwarna biru.

Morfologi bakteri BTA yaitu berbentuk basil.
Salah satu cara yang dilakukan untuk mengamati morfologi agar mudah
diidentifikasi yaitu dengan dilakukan suatu pewarnaan yaitu pewarnaan
BTA(Ziehl- Neelsen) yang menggunakan zar warna carbol fuchsin dan
methilen blue serta asam alcohol.
40
BAB III
A. Alat dan Bahan

a) Alat
1. Bak pewarnaan
2. Objek glass
3. Pipet tetes
4. Lampu spirtus
5. Kaki tiga
6. Kawat kasa
7. Tusuk gigi
8. Mikroskop
9. Handscoon
10. Masker
11. Kantong plastic hitam
b) Bahan
1. Dahak
2. Oil mersy
3. Tissue
A. Reagen untuk pewarnaan BTA
1. Zat warna carbol fuchsin 1%
2. Asam alcohol 5%
3. Methylene blue / asam pikrat
4. Air kran
B. Cara Kerja
1. Disiapkan alat dan bahan

2. Fiksasi terlebih dahulu sediaan yang telah dibuat
41
3. Teteskan carbol fuchsin pada sediaan yang diletakkan di bak pewarnaan
dan yang telah difiksasi
4. Kemudian dipanaskan sampai menguan (jangan sampai mendidih)
selama 10 menit
5. Kemudian zat warna dibuang dan dilunturkan degan asam alcohol
selama 1-2 detik sampai warna berubah
6. Bilas dengan air kran
7. Kemudian ditetesi dengan methylene blue selama 1 menit
8. Lalu dibilas dengan air kran,kemudian dikeringkan lalu di periksa
dibawah mikroskop pembesar objektif 100x
BAB IV
A. Hasil
Keterangan:
1 .bakteri basil tahan asam
2. berbentuk basil
Preparat yang diamati dengan pembesaran 100x dan menggunakan oil

imersi memperlihatkan gambar lapangan pandang yang di dalamnya terdapat
42
bakteri berbentuk basil yang kebanyakan memiliki susunan streptococcus(rantai)
dan bakteri di latarbelakangi zat methylen blue sehingga latar belakang tampak
berwarna biru.
B. Pembahasan
Pewarnaan BTA merupakan pewarnaan yang ditujukan terhadap bakteri
yang mengandung lemak dalam konsentrasi tinggi sehingga sukar menyerap
zat warna, namun jika bakteri diberi zat warna khusus misalnya karbol
fukhsin melalui proses pemanasan, maka akan menyerap zat warna dan akan
tahan diikat tanpa mampu dilunturkan oleh peluntur yang kuat sekalipun
seperti asam-alkohol. Karena itu bakteri ini disebut bakteri tahan asam
(BTA). Teknik pewarnaan ini dapat digunakan untuk mendiagnosa
keberadaan bakteri penyebab tuberkulosis yaitu Mycobacterium
tuberculosis .
Dari pewarnaan BTA dapat dibedakan 2, yaitu golongan bakteri tahan
asam yang akan tetap mengikat zat pewarnaan primer (karbol fuksin) dan
tidak akan dilepas pada pencucian alkohol asam, serta tidak akan mengikat
zat warna sekunder (methylen blue), sedangkan bakteri tidak tahan asam
akan melepaskan zat warna primer pada pencucian alcohol asam dan akan
mengikat zat warna sekunder. Pewarnaan ini adalah segolongan bakteri
yang sulit diwarnai, tetapi sekali diwarnai sulit dihapus. Dinding sel bakteri
tahan asam terdiri dari peptidogikan, arabinogalaktan, dan lipid, dimana 50%
dari lipid ini terdiri dari asam nikolat. Bakteri ini dimasukkan kedalam
golongan mikrobacterium yang sebagian besar bersifat satprofit, dikenal juga
golongan atipik , sebagian kecil pathogen bagi manusia yaitu
Mycrobaterrium tuberculosis dan Mycrobacterium leprae.
Pewarnaan Ziehl Neelson atau pewarnaan tahan asam memilahkan
kelompok Mycobacterium dan Nocandia dengan bakteri lainnya. Kelompok
bakteri ini disebut bakteri tahan asam karena dapat mempertahankan zat
warna pertama (carbol fuchsin) sewaktu dicuci dengan larutan pemucat
43
(alkohol asam).Larutan asam terlihat berwarna merah, sebaliknya pada
bakteri yang tidak tahan asam karena larutan pemucat (alkohol asam) akan
melakukan reaksi dengan carbol fuchsin dengan cepat, sehingga sel bakteri
tidak berwarna (Lay, 1994).
Uji bakteri tahan asam (BTA) pada praktikum kali ini menggunakan
prosedur pewarnaan Ziehl Neelson yaitu dengan memberi larutan pewarna
carbol fuchsin, alkohol asam, dan methylen blue.
Hasil yang diperoleh saat praktikum yaitu positif 1 dan positif 2 yang
dilaporkan secara kuantitatif menurut IUAT, yaitu:
Negatif: apabila tidak ditemukan BTA.
Positif: apabila terdapat 1–9 BTA/100 lapang pandang.
Positi1: apabila terdapat 10–90 BT/100 lapang pandang.
Positif2:apabila terdapat 1–9 BTA/1 lapang pandang.
Positif3:apabila terdapat > 10 BTA / 1 lapang pandang.
Dari hasil praktikum yang dilakukan, pada metode Ziehl-Neelsen
ditemukan bakteri yang berbentuk basil dan berwarna merah karena
menyerap zat warna pertama yaitu Carbol Fuchsin.Sedangkan pada metode
Kinyoun- Gabbet ditemukan bakteri yang bebentuk basil dan berwarna
merah karena menyerap zat warna pertama yaitu Kinyoun.
44
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Dari hasil praktikum yang diamati ditemukan bakteri BTA (+) yang
berbentuk basil.
B. Kritik dan Saran
Adapun saran yang ingin penulis (praktikan) sampaikan melalui laporan
ini adalah sebagai berikut :
1. Membaca dan mempelajari protab terlebih dahulu sebelum melakukan
praktikum.
2. Menggunakan APD pada saat praktikum.
3. Mengikuti protab pada saat praktikum
4. Tidak menukar-nukar pipet untuk menghindari kontaminasi antar
larutan.
45
DAFTAR PUSTAKA
Bonang G. dan Koeswardono E.S. 1979. Mikrobiologi Kedokteran untuk

Laboratorium dan klinik. Jakarta : Gramedia
Karmana, Oman. 2008. Biologi. Jakarta : PT Grafindo Media Pratama.
Lay, Bibiana.W.1994.Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : Rajawali.
46
LAPORAN 5
PEWARNAAN SPORA
NAMA : ARIANTO
NIM : PO. 71.3.203.18.1.011
47
BAB I
PENDAHULUAN
1.2 Latar Belakang

Bakteri adalah organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih
tersebar luas dibandingkan makhluk hidup yang lain. Bakteri memiliki
ratusan ribu spesies yang hidup di darat hingga lautan dan pada tempat-
tempat yang ekstrim.Bakteri ada yang menguntungkan tetapi ada pula yang
merugikan. Bakteri memiliki ciri-ciri yang membedakannya dengan mahluk
hidup yang lain. Bakteri adalah organisme uniselluler dan prokariot serta
umumnya tidak memiliki klorofil dan berukuran renik atau mikroskopik.
Spora bakteri adalah bentuk bakteri yang sedang dalam usaha

mengamankan diri terhadap pengaruh buruk dari luar.spora bakteri
mempunyai fungsi yang sama sepertti kristal amoeba, sebab bakteri dalam
bentuk spora dan amoeba dalam bentuk Kristal merupakan suatu fase di
mana kedua mikroorganisme itu berubah bentuk untuk melindungi diri
terhadap faktor luar yang tidak menguntungnkan. Endospora hanya terdapat
pada bakteri merupakan tubuh dinding yang tebal yang sangat refraktif, dan
sangat resisten. Dihasilkan oleh semua spesies basillus, clostidum, dan
sporosarcina. Bakteri yang mampu membentuk endospora dapat tumbuh
dan bereproduksi selama banyak generasi sehingga sel vegetatif. Namun
pada beberapa tahapan di dalam pertumbuhanya, terjadi sintesis
protoplasma baru dalam sitoplasma vegetatifnya yang di maksudkan untuk
menjadi spora.
Bentuk spora ada yang bulat, ada pula yang bulat panjang. Hal ini
tergantung oleh spesisesnya endospora ada yang lebih kecil ada pula yang
lebih besar dari pada diameter sel induk. Letak sel di dalam sel serta
ukurannya dalam pembentukanya tidaklah sama bagai semua spesies.
Sebagai contoh beberapa spora adalah sental yang dibentuk ditengah-tengah
48
sel, yang kedua adalah terminal yang dibentuk diujung, ketiga yaitu
subterminal yang dibentuk di dekat ujung. Pada umumnya sporulasi itu
mudah terjadi jika keadaan medium memburuk dan zat-zat yang timbul
sebagai zat-zat pertukaran zat bertimbun-timbun dan faktor-faktor luar
lainya merugikan tetapi pada beberapa spesies mampu membentuk spora
meskipun tidak terganggu oleh faktor luar. Sporulasi dapat di cegah, jika
selalu diadakan pemindahan piaraan ke medium yang baru, beberapa spesies
bakteri dapat kehilangan kemampuanya untuk membentuk spora-spora
dapat tumbuh lagi menjadi bakteri apabila keadaan di luar menguntungkan.
Mula-mula air meresap ke dalam spora, kemudian spora mengembang dan
kulit spora menjadi retak karenanya keretakan ini dapat terjadi pada salah
satu ujung. Tetapi juga dapat terjadi di tengah-tengah spora. Hal ini
merupakan cirri khas bagi beberapa spesies bacillus, jika kulit spora pecah
di tengah-tengah maka masing-masing pecahan akan merupakan suatu tutup
pada kedua ujung bakteri.
Sepanjang pengetahuan yang kita miliki sekarang, hanya golongan

basillah yang dapat membentuk spora, akan tetapi tidak semua basil mampu
berbuat demikian. Beberapa spesies Bacillus yang aerob dan beberapa
spesies Clostridium yang anaerob dapat membentuk spora. Spora ini lazim
disebut endospora, dikarenakan spora itu dibentuk di dalam sel.
Proses pewarnaan endospora dilakukan setelah fiksasi pemanasan agar

bakteri dapat sangat melekat pada kaca preparat dan membuat bakteri
merasa terancam sehingga membuat spora. Kemudian preparat diteteskan
malasit hijau secara merata yang berfungsi sebagai pewarnaan primer yang
digunakan untuk melumuri fiksasi panas dan dipanaskan sampai
menggepul. Preparat dipanaskan di atas spirtus yang bertujuan untuk
membantu warna menembus dinding endospora dan dijaga jangan sampai
pewarna kering. Kemudian dicuci dengan aquades dengan cara mengalir
dan dikering udarakan bertujuan untuk menghilangkan malasit hijau dari
seluruh bagian sel endospora. Pewarnaan dengan safranin bertujuan sebagai
49
counterstain yang digunakan untuk melumuri bagian warna dari sel yang
lain daripada endospora. Kemudian dibilas kembali denan aquades atau air
mengalir agar warna safranin luntur dan dikerigkan agar warna cepat kering
dan terlihat. Kemudian diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran
1000x dan memakai minyak imersi.
Data dan hasil pengamatan menunjukkan bahwa semua bakteri dari

seluruh tabung dapat menghasilkan spora yang ditandai dengan
terbentuknya warna hijau akibat pewarnaan malasit green, dengan
morfologi sel basil, penataan sel streptococcus. Sedangkan tabung 4 hanya
berbeda penataan sel yaitu diplobasil mengikuti bentuk penataan sel
bakteriya namun tetap berwarna hijau. Spora yang terbentuk oleh bakteri
mengindikasikan bahwa bakteri telah terancam atau dalam keadaan
berbahaya akibat lingkungan yang tidak mendukung untuk mempertahanka
keturunannya, sehingga spora kan terbang dan mencari media baru serta
berkembang biak.
Jamur dan fungi tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan gram dan
biasanya diidentifikasi dengan pewarnaan jaringan yang terinfeksi untuk
melihat struktur tipikal. Kultur murni dapat diwarnai dengan metilen biru
atau malasit hijau untuk menunjukkan struktur reproduksinya.
A. Maksud
Maksud dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara
B. Tujuan
Tujuan dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara

50
• Waktu :
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Sarjana yang dikenal berjasa dalam membuktikan penyebab penyakit yang
disebabkan kuman – kuman ialah Robert Koch. Dia adalah orang Jerman yang
pada tahun 1876 membuktikan dan menemukan penyakit anthrax yang
disebabkan oleh Bacillus anthracis, dapat menimbulkan sakit pada binatang dan
juga manusia. Demikian pula Robert Koch menemukan pula terjadinya
keracunan darah (septicaemia) karena adanya serangan bakteri terhadap tubuh
manusia.
Menurut Volk & Wheeler (1988), dalam pengamatan spora bakteri diperlukan
pewarnaan tertentu yang dapat menembus dinding tebal spora. Contoh dari
pewarnaan yang dimaksudkan oleh Volk & Wheeler tersebut adalah dengan
penggunaan larutan hijau malakit 5%, dan untuk memperjelas pengamatan, sel
vegetative juga diwarnai dengan larutan safranin 0,5% sehingga sel vegetative
ini berwarna merah. Dengan demikian ada atau tidaknya spora dapat teramati,
bahkan posisi spora di dalam tubuh sel vegetative juga dapat
diidentifikasi.Namun ada juga zat warna khusus untuk mewarnai spora dan di
dalam proses pewarnaannya melibatkan treatment pemanasan, yaitu; spora
dipanaskan bersamaan dengan zat warna tersebu tsehingga memudahkan zat
warna tersebut untuk meresap ke dalam dinding pelindung spora bakteri, namun
menurut Dwijoseputro (1979) beberapa bakteri mampu membentuk spora
meskipun tidak dalam keadaan ekstrem ataupun medium yang kurang nutrisi.
51
Hal ini dimungkinkan karena bakteri tersebut secara genetis, dalam tahapan
pertumbuhan dan perkembangannya memang memiliki satu fase sporulasi
B. Defenisi
Spora bakteri adalah bentuk bakteri yang sedang dalam usaha

mengamankan diri terhadap pengaruh buruk dari luar.spora bakteri mempunyai
fungsi yang sama sepertti kristal amoeba, sebab bakteri dalam bentuk spora dan
amoeba dalam bentuk Kristal merupakan suatu fase di mana kedua
mikroorganisme itu berubah bentuk untuk melindungi diri terhadap faktor luar
yang tidak menguntungnkan. Endospora hanya terdapat pada bakteri merupakan
tubuh dinding yang tebal yang sangat refraktif, dan sangat resisten. Dihasilkan
oleh semua spesies basillus, clostidum, dan sporosarcina. Bakteri yang mampu
membentuk endospora dapat tumbuh dan bereproduksi selama banyak generasi
sehingga sel vegetatif. Namun pada beberapa tahapan di dalam pertumbuhanya,
terjadi sintesis protoplasma baru dalam sitoplasma vegetatifnya yang di
maksudkan untuk menjadi spora.
Metode pewarnaan spora berfungsi untuk mempermudah pengamatan agar

peneliti atau pengamat mampu melihat spora, membedakan dengan sel
vegetative ataupun mengamati bentuknya. Endospora tidak mudah diwarnai
dengan zat pewarna pada umumnya. Hal tersebut yang menjadi dasar dari
metode pengecatan endospora dengan larutan hijau malasit. Metode Shaeffor,
foton endospora diwarnai pertama dengan larutan hijau malasit. Pengecatan
tersebut sifatnya kuat karena dapat berpenetrasi ke dalam endospora dengan
perlakuan.

-Nama Bakteri : Bacillus subtilis
- Bentuk : Batang
- Susunan : Strepto- ( Rantai)
52
Pada praktikum Pewarnaan Spora digunakan suspensi dari bakteri Bacillus
subtilis. Spora bakteri merupakan bentuk bakteri yang sedang dalam usaha
mengamankan diri terhadap pengaruh buruk dari luar. Setelah keadaan luar
membaik bagi mereka, maka pecahlah bungkus spora dan tumbuhlah bakteri.
Spora lazim disebut endospora ialah karena spora itu dibentuk di dalam sel.
Endospora jauh lebih tahan terhadap pengaruh luar yang buruk dari pada bakteri
biasa yaitu bakteri dalam bentuk vegetatif. Sporulasi dapat dicegah, jika selalu
diadakan pemindahan piaraan ke medium yang baru.
Spora bakteri mempunyai dinding yang tebal sehingga diperlukan pemanasan
agar pori-pori membesar zat warna fuchsin dapat masuk, dengan pencucian pori-
pori kembali mengecil menyebabkan zat warna fuchsin tidak dapat dilepas
walaupun dilunturkan dengan asam alkohol, sedangkan pada badan bakteri warna
fuchsin dilepaskan dan mengambil warna biru dari methylen blue.
53
BAB III
A. Alat dan Bahan

a) Alat
1. Beaker Glass
2. Kapas
3. Kawat Ose
4. Kertas Saring
5. Korek Api
6. Mikroskop
7. Objek Glass
8. Rak Tabung
9. Spidol
10. Spirtus
11. Tabung Reaksi
b) Bahan
1. Alkohol 95%
2. Aquadest
3. Desinfektan
4. Carbol fuchsin
5. NaCl fisiologis
6. H2SO4 1%
7. Minyak Emersi
8. Sampel B. Subtilis
9. Methylen blue
54
B. Cara kerja :
1. Dibuat suspense bakteri yang terdiri dari biakan bakteri dan NaCl
fisiologis di tabung reaksi.
2. Ditambahkan karbon fuksin sebanyak 1:1 ke dapan suspense
tersebut.Kemudian panaskan campuran tersebut dengan penangas
air bersuhu 80 ͦc selama 10-20 menit.
3. Dijaga jangan sampai mendidih atau kering.Setelahs itu sediakan
kaca obyek yang bersih dan baat olesan dari campuran tersebut.
4. Digenangi olesan tersebut dengan pewarna tandingan biru metilen
selame 5 menit dan dibuang zat warna yang tersebut.
5. Bilas dengan aquades dan keringkan dengan kertas saring .
6. Setelah kering tetesi preparat dengan oil imersi dan amati dibawah
mikroskop dengan pembesaran lensa ojektif 100x.
55
BAB IV
A. Hasil
Keterangan :
1. Bacillus subtilis
(Streptobasil)

-Nama Bakteri : Bacillus subtilis
- Bentuk : Basil
- Susunan : Streptobasil (Rantai)
Preparat yang diamati dengan pembesaran 100x dan menggunakan oil

imersi memperlihatkan gambar lapangan pandang yang di dalamnya terdapat
bakteri Bacillus subtilis berbentuk basil dan memiliki susunan streptobasil. Pada
pewarnaan ini bakteri tampak berwarna biru sedangkan spora(endospora) bakteri
tampak berwarna merah.
56
B. Pembahasan
Pewarnaan spora merupakan pewarnaan yang tidak dapat di warnai dengan
pewarnaan biasa, diperlukan tekhnik pewarnaan khusus. Endospora tidak mudah
diwarnai dengan zat pewarna pada umumnya, tetapi sekali diwarnai, zat warna
tersebut akan sulit hilang. Pewarnaan yang dilakukan dalam praktikum ini dengan
menggunakan pewarnaan Klein. Pewarnaan Klein merupakan pewarnaan spora
yang paling banyak digunakan. Spora bakteri sangat sulit sekali bila diwarnai
dengan pewarnaan gram. Untuk pewarnaan spora, perlu dilakukan pemanasan
supaya pewarna bisa masuk kedalam spora, seperti pada pewarnaan tahan asam
dimana pewarna karbol fuksin harus dipanaskan untuk bisa menembus lapisan
lilin asam Mycolic dari Mycobacterium.
Metode pewarnaan spora berfungsi untuk mempermudah pengamatan agar
peneliti atau pengamat mampu melihat spora, membedakan dengan sel vegetative
ataupun mengamati bentuknya. Endospora tidak mudah diwarnai dengan zat
pewarna pada umumnya. Hal tersebut yang menjadi dasar dari metode pengecatan
endospora dengan larutan hijau malasit. Metode Shaeffor, foton endospora
diwarnai pertama dengan larutan hijau malasit. Pengecatan tersebut sifatnya kuat
karena dapat berpenetrasi ke dalam endospora dengan perlakuan.
Dari hasil pewarnaan spora terlihat bakteri berwarna ungu ada titik merah,
dengan bentuk basil. Letak sporanya berada pada subterminal. Letak endospora
berbeda dengan spesies bakteri yang lain. Tipenya ada yang central yaitu lokasi
dari sel vegetatifnya di tengah, terminal letak sel vegetatifnya berada di ujung atau
pinggir dan tipe subterminal berarti lokasi endosporanya berada di antara tengah
dan pinggir dari sel vegetatif. Bakteri yang berbentuk basil memiliki endospora
yang terletak di subterminal.Sebenarnya jenis letak spora ada 3 buah: sentral,
yaitu letak spora berada di tengah-tengah sel; terminal, yaitu letak spora ada
diujung sel; sub terminal, yaitu letak spora diantara ujung dan di tengah-tengah
sel. Akan tetapi pada pengamatan ini hanya ada spora terminalis.Warna sporanya
merah sedangkan dan warna badan vegetatif adalah biru. Bakteri Bacillus subtilis
merupakan bakteri dengan famili Bacillaceae. Bakteri yang dapat menghasilkan
57
spora diantaranya ialah bakteri berasal dari famili Bacillaceae, genus Bacillus,
Clostridium, dan Sporosarcina.
Pewarnaan spora ini bertujuan untuk membedakan antara spora bakteri
dengan sel vegetative bakteri, serta untuk mengetahui letak spora di dalam sel
bakteri. Berdasarkan pengamatan dari bakteri Bacillus subtilis diperoleh spora
dengan letak spora yang terminal, dimana letak sporanya ada diujung sel.
Sebenarnya struktur dan rangkaian endospora bakteri ada 7 jenis :oval, terminal
yaitu bentuk spora oval dan berada di ujung, rectangular, terminal; rectangular,
subterminal; rectangular, central; sikular, terminal; sirkular, central; terminal
bentuk klub (club-shaped). Akan tetapi pada pengamatan ini diperoleh spora
bentuk bacil, warna sel bakteri biru sedangkan warna dan bentuk spora adalah
merah ; rectangular, zat warna yang digunakan adalah karbol fuchsin ( primer
metylen blue) dan letak sporanya adalah terminal.
BAB V
PENUTUP
C. Kesimpulan
Dari hasil praktikum maka dapat disimpulkan bahwa pewarnaan spora

merupakan pewarnaan yang digunakan untuk mengamati dan membedakan
antara spora dan sel vegetative bakteri, dan pewarnaan ini tidak dapat
dilakukan seperti pewarnaan biasa karena diperlukan teknik pewarnaan
khusus.
D. Kritik dan Saran
Untuk menghindari kesalahan- kesalahan yang dapat terjadi di dalam

praktikum selanjutnya yaitu memperhatikan prosedur kerja atau cara kerja
yang ada sebelum melakukan praktikum, memperhatikan zat warna yang
akan digunakan didalam praktikum dan memperhatikan zat warna yang
pertama di pakai serta waktu yang dibutuhkan dalam pewarnaan.
58
DAFTAR PUSTAKA
Hadioetomo, R.S. 1985.Mikrobiologi Dasar dalam Praktek.Jakarta :PT.

Gramedia.
Hastuti, S.U. 2012. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi . Malang : UMM Press.
Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Jilid I. Bandung : Yrama Widya.
59
LAPORAN 6
PEWARNAAN NEGATIF
OLEH : KELOMPOK 3
NAMA : AMRIL
NIM : PO. 71.3.203.18.1.007
60
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Pewarnaan negatif atau pewarnaan asam merupakan salah satu teknik
pewarnaan bakteri. Akan tetapi teknik ini bukan untuk mewarnai sel bakteri,
hanya mewarnai latar belakangnya menjadi hitam gelap. Zat warna yang
digunakan tidak akan mewarnai sel, tetapi mewarnai lingkungan sekitar sehingga
sel bakteri tampak transparan. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding sel
bakteri cenderung bermuatan negatif dan senyawa pewarna juga bermuatan yang
sama sehingga akan ditolak oleh dinding sel. Pewarna yang biasa digunakan
antara lain nigrosin, eosin, dan asam pikrat. Tetapi kini nigrosin sudah tidak
digunakan dalam pewarnaan, dan diganti dengan tinta cina.
Pewarnaan negatif tidak hanya secara khusus menvisualisasikan protein
saja, tetapi dapat digunakan untuk lipoprotein, isolasi organela, kompleks
nukleoprotein. Pada teknik ini apusan bakteri mengalami fiksasi dengan
cepat(beberapa detik sampai menit). Pewarnaan negatif adalah cara pengamatan
mikrobio-xogi yang biasa dilakukan untuk membedakan specimen kecil dengan
cairan optiknya. Untuk mikroskop medan terang, pewarnaan negative biasanya
menggunakan cairan hitam, misalnya nigrosin. Spesimen seperti bakteri dalam
cairan disebar dalam preparat kaca yang dicampur dengan pewarna negatif dan
dibiarkan kering. Ketika diamati dengan mikroskop, bakteri atau sporanya terlihat
bersinar dengan latar belakang yang gelap.
61
Pewarnaan negatif atau pewarna asam dapat terjadi karena senyawa pewarna
bermuatan negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding sel bakteri
cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang bermuatan negatif
akan ditolak oleh dinding sel. Oleh karena itu sel menjadi tidak berwarna. Contoh
pewarna yang biasa digunakan yaitu tinta cina, larutan nigrosin, asam pikrat, dan
eosin. Prosedur pewarnaan negatif sangat sederhana. Pertama,apusan bakteri
difiksasi dan dibiarkan hingga mengering padakaca objek. Kemudian ditetesi
dengan zat pewarna. Ambil kaca objek yang lain dan dorong apusan sejajar
dengan kaca hingga menghasilkan olesan yang tipis. Biarkan hingga kering
kemudian lihat sel bakteri pada mikroskop. Bakteri yang dapat digunakan dalam
pewarnaan ini seperti Pseudomonasaeruginosa dan Lineola longa.
Maksud : Maksud dari praktikum ini adalah agar mahasiswa :
1. Mengetahui proses pewarnaan negative
2. Mengetahui bentuk bakteri
Tujuan :
1. Dapat melakukan prosedur pewarnaan negatif dan memahami pentingnya
2. setiap langkah dalam prosedur,
3. Dapat memahami reaksi kimiawi dari dalam prosedur tersebut.
62
4. Mengamati Morfologi Bakteri yang terdapat pada preparat
C. Waktu dan Lokasi
- Waktu :
- Lokasi : Laboratorium Bakteriologi
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Pada dasarnya pewarnaan negatif bukan digunakan untuk mewarnai bakteri,
tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi gelap, zat warna tidak akan mewarnai
sel melainkan mewarnai lingkungan sekitarnya, sehingga bakteri tampak
transparan dengan latar belakang hitam. Pewarnaan negatif, metode ini bukan
untuk mewarnai bakteri tetapi latar belakngnya menjadi hitam gelap. Pada
pewarnaan ini mikroorganisme kelihatan transparan (tembus pandang). Teknik ini
berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan
tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan
kimia, maka terjadi penyusutan dan salah satu bentuk agar kurang sehingga
penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat
nigrosin atau tinta cina. Pewarnaan negatif atau pewarnaan asam dapat terjadi
karena senyawa pewarnaan berwarna negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral,
dinding sel bakteri cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang
63
bermuatan negatif akan ditolak oleh dinding sel bakteri. Oleh karena itu dinding
sel menjadi tidak berwarna. Contoh pewarna yang biasa digunakan yaitu tinta
cina, larutan nigrosin, asam pikrat dan eosin. Teknik ini berguna untuk
menentukan moffologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak
mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan kimia,
maka terjadi penyusutan dan salah satu bentuk agar penentuan sel dapat diperoleh
denagan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina.
Pada pewarnaan negatif, lingkungan yang berwarna hitam disebabkan oleh
pewarna yang digunakan adalah nigrosin atau tinta cina yang memiliki warna
dasar hitam. Hal ini telah sesuai dengan pustaka yang menyebutkan bahwa zat
pewarna asam membawa suatu muatan negatif, maka pada sel yang
permukaannya juga negatif akan ditolak oleh sitoplasma sel sehingga zat warna
ini akan berkaitan dengan lingkungan yang mengelilingi sel dan bagian dalam sel
akan tetap berwarna bening .Selaini itu, disebutkan juga pustaka bahwa bakteri
merupakan organisme mikroseluler yang pada dinding selnya mengandung ion
negatif, zat warna (nigrosin) yang bermuatan negatif tidak akan mewarnai sel
tetapi yang terwarnai adalah lingkungan luarnya saja.
B. Definisi
Pewarnaan negatif atau pengecetan negatif adalah pewarnaan yang
dilakukan bukan pada mikrobanya melainkan pewarnaan tersebut ditunjukan pada
latar belakang dari sel-sel mikroba. Pewarnaan negatif memerlukan pewarna
asam seperti eosin atau negrosin. Pewarna asam memiliki negatif charge
64
kromogen, tidak akan menembus atau berpenetrasi ke dalam sel karena negative
charge pada permukaan bakteri. Oleh karena itu, sel tidak berwarna mudah dilihat
dengan latar belakang berwarna. Bahan pulas dipakai tinta-cina, karena itu sering
juga disebut pewarnaan tinta-cina. Pewarnaan Burri dipakai untuk mengetahui
adanya golongan spirochaetales dan juga untuk memperlihatkan adanya selubung
(kapsul) pada kuman-kuman yang tertentu seperti pada Diplococcus pneumoniae,
Klebsiella Frielander, dll.
Pewarnaan ini merupakan pewarnaan yang tidak langsung. Kita hanya
mewarnai latar belakang dari bakteri tersebut, sedangkan bakterinya sendiri tidak
mengambil zat-zat warna. Pada negatif staining pada umumnya tidak dilakukan
”fiksasi”, maka praktis bakteri tidak mengalami perubahan-perubahan, tidak
mengerut. Dengan demikian pewarnaan negatif berguna untuk melihat bentuk-
bentuk sel yang sesungguhnya serta berguna untuk pengukuran-pengukuran
bakteri. Pada pewarnaan bakteri ini sel-sel kuman kelihatan ”transparan” (terang
jernih) sedangkan latar belakangnya kelihatan gelap (dengan tinta-cina).
Pewarnaan negatif atau peawarna asam dapat terjadi karena senyawa pewarna
bermuatan negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral, dinding sel bakteri
cenderung bermuatan negatif sehingga pewarna asam yang bermuatan negatif
akan ditolak oleh dinding sel. Oleh karena itu sel menjadi tidak berwarna.
65
Dengan menggunakan tehnik pewarnaan negatif, dimana hanya lingkungannya
yang diwarnai, terdapat bakteri pada kotoran tesebut berbentuk coccus. Adapun
bentuk bakteri yaitu Bacili, Vibrio, Diplococcus, Streptococcus.
Identifikasi pewarnaan negatif yang dilakukan secara tidak langsung mewarnai
bakteri, melainkan mewarnai latar belakang preparat bakteri tersebut. Pewarnaan
ini dilakukan dengan menggunakan pewarna yang bersifat asam seperti nigrosin,
tinta india atau eorsin. Pewarna dicampur dengan bakteri dan kemudian
campurannya disebar diatas cover glass. Pewarna ini tidak akan menembus atau
berikatan dengan dinding sel bakteri karena daya tolak menolak antara muatan
negatif pewarna dan muatan negatif dinding sel bakteri. Pewarna akan membentuk
deposit di sekitar bakteri atau menghasilkan latar belakang hitam sehingga bakteri
tampak tidak berwarna, sementara latar belakangnya berwarna gelap. Pewarnaan
negatif dilakukan pada bakteri yang sukar diwarnai oleh pewarna sederhana
seperti spirochaeta. Pewarnaan negatif bertujuan untuk memberi warna gelap pada
latar belakang dan tidak memberi warna pada sel bakteri. Hal tersebut dapat
terjadi karena pada pewarnaan negatif, pewarna yang digunakan adalah pewarna
asam dan memiliki komponen kromoforik yang bermuatan negatif, yang juga
dimiliki oleh sitoplasma bakteri. Sehingga pewarna tidak dapat menembus atau
berpenetrasi ke dalam sel bakteri karena negatif charge pada permukaan sel
bakteri. Pada pewarnaan negatif ini, sel bakteri terlihat transparan (tembus
pandang).
66
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Alat
- Objek glass
- Lampu spiritus
- Jarum oce
- Mikroskop
B. Bahan
- Biakan bakteri
- Tinta cina
- Oil emersi
- NaCl
C. Reagen
Reagen yang digunakan pada pewarnaan negatif yaitu hanya
menggunakan satu reagen saja yaitu tinta cina.
D. Cara kerja
1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
2. Kemudian disiapkan 2 objek glass yang bersih dan bebas lemak.
3. Letakkan setetes (kira-kira diameter 3 mm) pada ujung kanan objek
glass.
4. Ambil biakan murni lalu gunakan jarum oce dan scampurkan dengan
tinta cina
67
5. Objek gelas kedua digunakan untuk menghomogenkan, kemudian buat
apusan.
6. Keringkan dan jangan difiksasi .
7. Kemudian ditetesi oil emersi, lalu amati preparat dibawa mikroskop
dengan pembesaran 100X
BAB IV
HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
A. Hasil pengamatan
Morfologi : Bentuk basil (menyerupai bentuk kapsul)
Warna latar belakang ; Hitam
68
B. Pembahasan
Pada dasarnya pewarnaan negative bukan digunakan untuk mewarnai
bakteri, tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi gelap, zat warna tidak akan
mewarnai sel melainkan mewarnai lingkungan sekitarnya, sehingga bakteri
tampak transparan dengan latar belakang hitam. Pewarnaan negatif, metode ini
bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi hitam
gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme kelihatan transparan (tembus
pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada
pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras
dengan bahan-bahan kimia, maka terjadinya penyusutan dan salah satu bentuk
agar kurang sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat. Metode
ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina.Pewarnaan negative atau pewarnaan
asam dapat trejadi karena senyawa pewarna bermuatan negative. Dalam kondisi
pH mendekati netral, dinding sel bakteri cenderung bermuatan negative sehingga
pewarna asam yang bermuatan negative akan ditolak oleh dinding sel bakteri.
Oleh karena itu, dinding sel menjadi tidak berwarna. Contoh pewarna yang biasa
digunakan yaitu tinta cina,larutan nigrosin, asam pikrat dan eosin. Teknik ini
berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan iini olesan
tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan –bahan
kimia, maka terjadi penyusutan dan salah satubentuk agar penentuan sel dapat
diperoleh dengan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina
( Hadiotomo, 1990).
69
Pewarnaan negatif, metode ini bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai
latar belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme
kelihatan transparan (tembus pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan
morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan
atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan kimia, maka terjadinya
penyusutan dan salah satu bentuk agar kurang sehingga penentuan sel dapat
diperoleh dengan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta
cina.
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan pengamatan di bawah mikroskop, maka dapat disimpulkan
bahwa pada sampel tersebut ditemukan bakteri berbentuk basil dengan latar hitam.
B. Kritik dan Saran
Adapun saran saya sehubungan dengan pelaksanaan praktikum, yang
khususnya ditujukan bagi mahasiswa adalah :
1. Selama praktikum berlangsung, mahasiswa harus bersunggu-sungguh
dalam mengikuti proses praktikum.
2. Selama praktikum berlangsung, mahasiswa harus mengindahkan tata tertib
yang telah di tetapkan.
3. Selama praktikum berlangsung, mahasiswa harus menggunakan APD
(Alat Pelindung Diri)
70
DAFTAR PUSTAKA
Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : PT Raja Grafindo.
Persada. Pelczar, M.J. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi I. Jakarta: UI Press.
Pratiwi, T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : Erlangga.
71
LAPORAN 7
PEWARNAAN KAPSUL
NAMA : NUR ALI ZAINUDDIN PATTY
NIM : PO. 71.3.203.18.1.026
72
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Beberapa jenis bakteri dan amoeba hijau-biru mengeluarkan bahan-
bahan yang amat berlendir dan lengket pada permukaan selnya,
melengkungi dinding sel. Bila bahan berlendir tersebut kompak dan
tampak sebagai suatu bentuk yang pasti ( bundar/lonjong) maka disebut
kapsul, tetapi bila tidak teratur bentuknya dan menempelnya pada sel
kurang erat maka disebut selaput lendir. Kapsul dan lendir tidaklah
esensial bagi kehidupan sel, tapi dapat berfungsi sebagai makanan
cadangan, perlindungan terhadap fagositosis (baik dalam tubuh inang
maupun dialam bebas) atau perlindungan terhadap dehidrasi. Kemampuan
menghasilkan kapsul merupakan sifat genetis, tetapi produksinya sangat
dipengaruhi oleh komposisi medium tempat ditumbuhkannya sel-sel yang
bersangkutan. Komposisi medium juga dapat mempengaruhi ukuran
kapsul. Ukuran kapsul berbeda-beda menurut jenis bakterinya dan juga
dapat berbeda diantara jalur-jalur yang berlainan dalam satu spesies.Pada
beberapa jenis bakteri adanya kapsul sebagai petunjuk virulensi. Semua
kapsul bakteri tampaknya dapat larut dalam air. Komposisi kimiawi kapsul
ada yang berupa glukosa (misalnya dektrosa pada leokonostok
mesendteroides), polimer gula amino (misalnya asam hialuronat pada
Staphylococcus piogenik), polipeptida (misalnya polimer asam D-
glutamat pada Bacillus antraksis) atau kompleks polisakarida protein
(misalnya B disentri). Simpai biasanya diperlihatkan dengan cara
73
pewarnaan negatif atau modifikasi dari cara itu. Salah satu pewarnaan
simpai (kapsul) ini (metode Welch) meliputi pemberian larutan kristal
ungu panas disusul kemudian dengan pencucian dengan larutan
tembaga sulfat.
Tembaga sulfat ini digunakan untuk menghilangkan zat warna
berlebihan karena pencucian biasa dengan air akan melarutkan simpai.
Garam tembaga memberi pula warna pada latar belakang, sehingga sel dan
latar belakang akan tampak biru tua dan simpai berwarna biru yang lebih
muda.
Kebanyakan bakteri mengeluarkan lendir pada permukaan selnya
yang melapisi dinding sel. Jika lapisan lendir ini cukup tebal dan kompak
maka disebut dengan kapsula. Pada beberapa bakteri adanya kapsula
menunjukkan sifat yang virulen. Kapsula bakteri tidak berwarna sehingga
untuk mengetahui ada tidaknya kapsula bakteri perlu dilakukan pewarnaan
khusus. Pewarnaan ini bisa dilakukan dengan menggunakan nigrosin,
merah kongo atau tinta cina. Setelah ditambahkan pewarna yang tidak
74
menembus kapsul, maka kapsul dapat tampak dengan menggunakan
mikroskop cahaya. Ini merupakan penampilan negatif kapsul yang terlihat
jernih dengan latar belakang gelap .
Kapsula merupakan lapisan polimer yang terletak di luar dinding
sel. Jika lapisan polimer ini terletak berlekatan dengan dinding sel maka
lapisan ini disebut kapsula. Tetapi jika polimer atau polisakarida ini tidak
berlekatan dengan dinding sel maka lapisan ini disebut lender. Baik
kapsula maupun lendir terdiri dari polisakarida dan polipeptin (komplek
polisakarida dengan protein). Kapsula bukan organ yang penting untuk
kehidupan sel bakteri. Hal ini terbukti bahwa sel bakteri yang tidak dapat
membentuk kapsula mampu tumbuh dengan normal dalam medium.
Kapsula berfungsi dalam penyesuaian diri dengan lingkungannya.
Misalnya berperan dalam mencegah terhadap kekeringan, mencegah atau
menghambat terjadinya pencantelan bakteriofag, bersifat antifagosit
sehingga kapsul memberikan sifat virulen bagi bakteri.
Hal yang serupa juga dijelaskan bahwa lapisan lendir terdiri atas
karbohidrat dan pada beberapa spesies tertentu, lendir itu juga
mengandung unsur N atau P. Lendir bukan suatu bagian integral dari sel,
melainkan suatu hasil pertukaran zat. Lendir memberikan perlindungan
terhadap kekeringan, seakan-akan merupakan suatu ”benteng” untuk
bertahan. Kapsula merupakan gudang cadangan makanan (Pelczar: 2007).
Kapsula bakteri-bakteri penyebab penyakit (patogen) berfungsi untuk
menambah kemampuan bakteri untuk menginfeksi. Selain itu, bakteri
75
berkapsula juga menyebabkan adanya gangguan lendir dalam proses
industri. Ukuran kapsula sangat dipengaruhi oleh medium tempat
ditumbuhkannya bakteri tersebut. Pada beberapa kejadian tebalnya kapsula
hanya satu per sekian diameter selnya, namun dalam kasus-kasus lainya
ukuran kapsula jauh lebih besar daripada diameter selnya.
Kapsul cukup tebal sehingga sulit diwarnai, oleh karena itu
diperlukan suatu pewarnaan khusus. Salah satu cara pewarnaan kapsula
menurut Raebiger yaitu dengan menggunakan pewarna larutan formol-
gentian violet Raebiger atau kristal violet. Satu lagi cara untuk perwarnaan
kapsula bakteri adalah dengan pewarnaan negatif (pewarnaan tidak
langsung ). Pada pewarnaan negatif latarbelakangnya diwarnai zat warna
negatif sedangkan bakterinya diwarnai dengan zat warna basa. Kapsula
tidak menyerap warna sehingga terlihat lapisan terang yang tembus dengan
latar belakang yang berwarna.
Maksudnya untuk mengetahui prosedur pewarnaan kapsul dan bentuk-
bentuk dari pewarnaan kapsul. Tujuannya yaitu untuk melihat kapsul pada
bakteri.
C. Waktu dan Lokasi praktikum
76
 Waktu : Selasa,
 Lokasi : laboratorium bakteriologi
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Sejarah
Sebagian ahli berpendapat lapisan lendir merupakan modifikasi
dinding sel terluar yang berasal dari penggembungan gelatinisasi
konstituennya. Sebagia lagi berpendapat bahwa lapisan lendir adalah
produk sekretori yang mempunyai komposisi kimia berbeda degan dinding
sel. Clifton menyatakan bahwa lapisan lendir ini disusun oleh karbohidrat
yang disimpan di sekeliling dinding sel. Bila lapisan ini cukup tebal dan
mempunyai bentuk yang jelas disebut dengan kapsul.
Adanya kapsul yang tebal pada berbagai bakteri pathogen
merupakan indikasi umum tingginya virulensi mikroorganisme. Berbagai
penyakit terbukti disebabkan oleh bakteri yang mempunyai kapsul seperti,
bacillus antrachis (penyebeb antraks), clostridium pefrigens (penyebab
gangrene) dan streptococcus pneumonia (penyebab pneumonia). Selain,
adanya kapsul meningkatkan virulnsi dan infektifitas bakteri pathogen. Hal
ini disebabkan karena kapsul mampumelindungi bakteri pathogen dari
fagositosis oleh makrovat dan leukosit polimoponukleat.
77
B. Definsi
Kapsul merupakan substansia yang bersifat viscous sehingga membentuk
suatu selubung yang mengelilingi dinding sel, memiliki fungsi lain yakni
melindungi tubuh bakteri dari kekeringan sementara dengan mengikat
moleku-molekul air serta memudahkan melekatkan bakteri pada permukaan
atau substrat.
Kapsul merupakaan bahan kental yang mengelilingi dinding sel bakteri.
Kapsul penting karena merupakan pelindung dan sebagai penyimpan
cadangan makanan.
C. Morfologi dan identifikasi
Morfologi pewarnaan kapsul dapat berbentuk basil dan kokus. Untuk
mengidentifikasi bentuk kapsul pada bakteri yaitu dilakukan suatu pewarnaaan
yaitu pewarnaan kapsul .
BAB III
78
A. Alat
- Mikroskop
- Objeck glass
- Tabung reaksi
- Rak tabung
- Bunsen
- Korek api
- Ose
- Bak pewarnaan
- Jembatan pewarnaan
- Pipet tetes
B. Bahan:
- biakan bakteri
- tissue
- Oil immerse
C. Reagen
- Tinta Cina
- safranin
- Aquadest/ Air
- Nacl
D. Cara kerja
1. Menyiapkan alat dan bahan
79
2. Dibuat suspensi bakteri dengan cara diambil biakan bakteri
menggunakan ose sebanyak 1-2 mata ose.
3. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah diisi dengan
larutan NaCl sebelumnya.
4. Lalu dimasukkan tinta Cina secukupnya. Kemudian dihomogenkan.
5. Disiapkan objeck glass yang bersih dan bebas lemak.
6. Lalu diambil suspensi tadi dengan menggunakan pipet tetes sebanyak 1
tetes.
7. Lalu dibuat apusan menggunakan ujung objeck glass yang lain.
8. Preparat dibiarkan kering di udara.
9. Setelah kering, difiksasi sebanyak 3 kali.
10. selanjutnya preparat disimpan di bak pewarnaan.
11. Kemudian digenangi dengan safranin selama 1 menit.
12. Setelah itu, dikeringkan menggunakan kertas saring/ tissue.
13. Preparat kemudian ditetesi dengan oil immerse lalu diamati di bawah
mikroskop dengan perbesaran objektif 100X
BAB IV
80
A. Hasil
Keterangan :
1. Bakteri: Warna merah
2. Kapsul bakteri: Warna transparan
B. PEMBAHASAN
Kapsul adalah lapisan polimer yang terdapat di luar dinding sel. Kapsul
pada bakteri dapat diamati dengan mikroskop dengan teknik pewarnaan, baik
secara langsung maupun tidak langsung.
Pada kegiatan praktikum ini, pewarnaan secara tidak langsung dilakukan
dengan menggunakan tinta cina. Pewarnaan secara tidak langsung ini
dimaksudkan untuk mewarnai latar belakangnya. Apabila bakteri mempunyai
kapsul, maka dalam pengamatan sel bakteri akan tampak transparan dan
diselubungi oleh kapsul yang berwarna kecoklatan. Tinta cina merupakan
larutan yang mempunyai kromophore atau butir pembawa warna yang
bermuatan negatif (memiliki anion) sedangkan muatan yang berada di
sekeliling bakteri juga bermuatan negatif (memiliki anion), sehingga terjadi
81
adanya tolak menolak antara kedua ion tersebut. Hal inilah yang menyebabkan
bakteri berwarna transparan dan yang nampak hanya warna latar belakangnya
yaitu hitam. Terbentuknya warna transparan ini dikarenakan sel bakteri tidak
mampu menyerap warna.
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Setelah melakukan pengamatan di bawah mikroskop dengan perbesaran
100X, ditemukan bakteri berbentuk basil dengan kapsul.
B. Saran
Setelah melakukakan praktikum. diharapkan kepada semua
praktikan agar melakukan praktikum dengan sungguh-sungguh dan berhati-
hati dalam melakukan percobaan serta menggunakan Alat Pelindung Diri
(APD).
DAFTAR PUSTAKA
82
Hadioetomo, R.S. 1985.Mikrobiologi Dasar dalam Praktek.Jakarta :PT.
Gramedia.
Hastuti, S.U. 2012. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi . Malang : UMM Press.
Pelezar,chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press: Jakarta
83

Bakteri Sederhana

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Bakteri Sederhana

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN LENGKAP

POLTEKKES KEMENKES MAKASSAR

Laporan praktikum ini telah kami susun dengan maksimal dan

Makassar, 26 Juni 2019

Laporan lengkap praktikum bakteriologi I dengan judul “Laporan Praktikum

Nama : 1. Alan Dwi Saputra (PO713203181005)

4.Nur Ali Zainuddin Patty (PO713203181026)

Tingkat : D-III Tingkat I

Makassar, 26 Juni 2019

Prawansa Amran,S.Si.,M.Kes Hasnawati,S.Si.,M.Kes

Pembimbing III Pembimbing IV

Lembar Pengesahan …………………………………………………….... ii

Pewarnaan Pergerakan Bakteri…………………………………………… 12

LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI I

NAMA NIM NILAI

Alan Dwi Saputra PO713203181005

Nur Ali Zainuddin Patty PO713203181026

Laporan lengkap praktikum bakteriologi I dengan judul “Laporan Praktikum

Nama : 1. Alan Dwi Saputra(PO713203181005)

4. Nur Ali Zainuddin Patty (PO713203181026)

Tingkat : D-III Tingkat I

Makassar, 26 Juni 2019

Prawansa Amran,S.Si.,M.Kes Hasnawati,S.Si.,M.Kes

Pembimbing III Pembimbing IV

NAMA : ALAN DWI SAPUTRA

NIM : PO. 71.3.203.18.1.005

POLTEKKES KEMENKES MAKASSAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

TAHUN AJARAN 2018/2019

1.1 Latar Belakang

Mikroba sulit dilihat dengan cahaya karena tidak mengadsorbsi atau

Bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu basil (batang), coccus, spirilum.

Tujuan dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara

C. Waktu dan Lokasi Praktikum

A. Alat dan Bahan

1. Gelas Preparat 1. Kotoran Mulut

2. Jarum Ose 2. Aquades

3. Labelling 3. Methylen Blue

6. Pipet tetes 6. Tissue

7. Tabung Reaksi 7. Minyak Imersi

8. Rak Tabung Reaksi 8. Kapas Alkohol

1. 1.Bersihkan preparat dengan alkohol 70% kemudian di fiksasi di

HASIL DAN PEMBAHASAN

- Jenis Bakteri : Staphylococcus

c) Bakteri bentuk spiral

Dari hasil praktikum maka dapat disimpulkan bahwa Pewarnaan

B. Kritik dan Saran

Untuk menghindari kesalahan- kesalahan yang dapat terjadi di dalam

Supardi I, 1999.Mikrobiologi dalam pengelolaan dan keamanan pangan, Alumni,

Aryulina, Diah.2004.Biologi Umum. Jakarta : Erlangga

Campbell, Nell.2003. Biologi Edisi Kelima Jilid 2. Jakarta : Erlangga.

NAMA : NUR ALI ZAINUDDIN PATTY

NIM : PO. 71.3.203.18.1.026

POLTEKKES KEMENKES MAKASSAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

TAHUN AJARAN 2018/2019

Kebanyakan species bakteri dapat bergerakdengan menggunakan flagel, akan

body (bagian dasar), bagian dasar menancap pada membrane plasma,

peptidoglikan pada bakteri gram negative berhubungan dengan membranluar

berputar-putar dan berubah arah, sedangkang yang mempunyai flagel

peritrikus akan bergerak berputar-putar dan berubah arah. Gerakan yang

memutar flagella membentu heliks. Pergerakan ini dapat disamakan dengan