LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA DASAR

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN UNIKA SOEGIJAPRANATA

SEMARANG

OKSIDASI SIKLUS KREBS

Nama: Florence Vincentia Y. 18.I2.0019

Abstrak
Siklus krebs merupakan salah satu contoh reaksi katabolisme respirasi yang
membutuhkan O2, terjadi di mitokondria, dan memiliki nama lain siklus asam
sitrat/siklus asam trikarboksilat. Pada siklus krebs terjadi penggabungan asam
aksaloasetat dengan asetil co-A yang menghasilkan asam sitrat, 2 ATP, 2 FADH 2, 6
NADH2, serta 4 CO2. ATP yang dihasilkan merupakan energi guna melakukan berbagai
aktivitas tubuh. Tujuan praktikum ini adalah memahami oksidasi pada proses siklus
krebs dan mengetahui kadar gula dalam bahan yang berupa buah-buahan. Pada
praktikum ini dilakukan penambahan buffer sukrosa + DCPIP dalam endapan sampel
pada tabung pertama serta buffer sukrosa + asam suksinat 0,1 % + DCPIP dalam
endapan sampel pada tabung kedua kemudian diamati warna pada menit ke-0 dan menit
ke-20. Bahan utama yang digunakan adalah kecambah kacang tanah, biji kacang tanah,
belimbing mentah, dan belimbing matang. Didapati hampir semua sampel tidak
mengalami perubahan warna pada menit ke-20, tidak ada perbedaan saat sampel diberi
buffer sukrosa + DCPIP maupun diberi buffer sukrosa + asam suksinat 0,1 % + DCPIP,
dan kecepatan terjadinya reaksi oksidasi siklus krebs juga dipengaruhi oleh banyak
sedikitnya kadar glukosa. Dari hasil praktikum dapat disimpulkan bahwa oksidasi pada
siklus krebs terjadi pada tahap pembentukan NADH dari isositrat, pembentukan ɑ-
ketoglutarat menjadi suksinil co-A yang menghasilkan NADH, pembentukan FADH 2
dari asam suksinat, serta pembentukan oksaloasetat yang menghasilkan NADH dari
malat. Selain itu, diketahui bahwa buah-buahan memiliki kandungan glukosa yang
tinggi.

Kata kunci : Siklus krebs, buah, buffer

1. TUJUAN PRAKTIKUM makanan menjadi energi potensial yang

Tujuan praktikum ini adalah
memahami oksidasi pada proses siklus
krebs dan mengetahui kadar gula dalam
bahan yang berupa buah-buahan.
2. TINJAUAN PUSTAKA
Siklus krebs merupakan salah
satu contoh reaksi katabolisme respirasi
yang membutuhkan O2, terjadi di
mitokondria, dan memiliki nama lain
siklus asam sitrat/siklus asam
trikarboksilat (Brody. 1994). Produk
dari siklus asam sitrat adalah prekursor
bagi berbagai jenis senyawa organik. Di
dalam mitokondria terdapat enzim-
enzim pengoksidasi, pengatur
pengedaran energi pada sel, serta
pengsintesis ATP dengan mengubah
energi potensial yang terkandung dalam
disimpan dalam bentuk ATP (Kimbal,
1983). Pada siklus krebs terjadi
penggabungan asam aksaloasetat
dengan asetil co-A yang menghasilkan
asam sitrat, 2 ATP, 2 FADH2, 6 NADH2,
serta 4 CO2. ATP yang dihasilkan
merupakan energi guna melakukan
berbagai aktivitas tubuh. (Kimbal,
1983). Pada siklus krebs asam suksinat
merupakan komponen pendonor
elektron dalam rantai transpor dengan
karakteristik berwarna bening dan tidak
memiliki bau (Oxtoby et al, 2001).
Suksinat dehidrogenase berfungsi
sebagai enzim dalam mitokondria yang
bergabung dengan asam suksinat pada
reaksi pelepasan satu gugus elektron
membentuk asam fumarat, pada tahap

1
ini elektron digunakan FAD untuk
membentuk FADH2 (Marks, 2000).
DCPIP yang bereaksi dengan
FADH2 akan tereduksi menjadi tak
berwarna dan juga menghasilkan E-
FAD (flavin adenine dinukleotida)
dengan reaksi : FADH2 + DCPIP 
DCPIP (colorless)+ E-FAD (Murray,
2001).
Sentrifuge adalah alat untuk
memisah suatu larutan menjadi dua
bagian berupa endapan dan supernatan
(substansi hasil sentrifugasi)
berdasarkan kecepatan partikel
mengendap, besar partikel, dan densitas
dari masing-masing partikel
(Tranggono, 1989).
Buffer merupakan larutan yang
berguna untuk mempertahankan pH
dengan penambahan asam, basa,
maupun pengenceran (Mangihut, 2009).
Selain mempertahankan pH, buffer juga
berfungsi untuk mencegah inaktivasi
enzim serta membantu pelarutan
kotoran dalam endapan enzim (Fox,
1991 dan Winarno, 1995).
Pada praktikum ini dilakukan
penghancuran sampel yang bertujuan
untuk menghancurkan struktur dari
kecambah sehingga enzim yang terdapat
di dalam kecambah dapat keluar
(Giannakourou & Taoukis, 2003).
Siklus krebs terdiri dari 8 tahap
Tranggono & Sutardi, 1990):
3. METODE PRAKTIKUM
2
3.1. Materi
3.1.1. Alat
Alat yang digunakan adalah
tabung sentifuge, batang kaca, gelas
ukur, pipet volume, pompa pilleus,
tissue, label, pensil warna, beaker glass,
kain saring (mori), tabung reaksi, rak
tabung reaksi, mortar, aluminium foil,
alu, dan stopwatch.
3.1.2. Bahan
Bahan yang digunakan adalah es
batu, larutan buffer sukrosa, larutan
buffer sukrosa + asam suksinat 0,1 %,
DCPIP, aquades, kecambah kacang
hijau + biji kacang hijau + pisang
mentah + pisang matang (kloter A),
kecambah kacang kedelai + biji kacang
kedelai + pepaya mentah + pepaya
matang (kloter B), kecambah kacang
tanah + biji kacang tanah + nanas
mentah + nanas matang (kloter C),
kecambah kacang tolo + biji kacang tolo
+ mangga mentah + mangga matang
(kloter D), kecambah kacang merah +
biji kacang merah + apel mentah + apel
matang (kloter E), kecambah jagung +
biji jagung + tomat mentah + tomat
matang (kloter F), kecambah kacang
hijau + biji kacang hijau + jambu biji
mentah + jambu biji matang (kloter G),
kecambah kacang kedelai + biji kacang
kedelai + sawo mentah + sawo matang
(kloter H), kecambah kacang tanah +
biji kacang tanah + belimbing mentah +
belimbing matang (kloter I), kecambah
jagung + biji jagung + tomat mentah +
tomat matang (kloter J).
3.2. Metode
Mula-mula kecambah berumur 3 sampai
4 hari dibersihkan dari testas (kuncup)
dan radiclenya (akar, dihancurkan
dengan mortar, dan ditimbang sebanyak
0,5 gram. Lalu, dimasukkan ke dalam
tabung sentrifuge dan diberi 2 perlakuan
yaitu diberi 10 ml larutan buffer dan
masing-masing 5 ml larutan buffer
sukrosa dan asam suksinat. Sentrifuge
dengan kecepatan 3000 rpm selama 15
menit, selama menunggu lakukan
langkah berikutnya. Tabung reaksi diisi
dengan 15 ml aquades kemudian batas
aquades pada tabung reaksi ditandai
dengan label, lalu buang aquades. Hasil
endapan sentrifuge kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
diisi dengan aquades sampai batas
yang ditandai sebelumnya. 0,5 ml
DCPIP ditambahkan lalu dikocok dan
tabung reaksi ditutup dengan aluminium
foil. Perubahan warna pada menit ke-0
dan menit ke-20 diamati.
4. HASIL PENGAMATAN
Hasil pengamatan oksidasi siklus krebs
dapat dilihat pada tabel dilampiran.
Terlihat bahwa pada buah-buahan baik
yang diberi perlakuan buffer sukrosa +
DCPIP atau yang diberi buffer sukrosa
+ asam suksinat + DCPIP, seluruh
sampel tidak mengalami perubahan
warna (tetap biru). Pada kacang tanah,
baik biji maupun kecambah yang diberi
buffer sukrosa + DCPIP dan yang diberi
buffer sukrosa + asam suksinat 0,1 % +
DCPIP, hampir semua kelompok
mendapati tidak adanya perubahan
warna larutan sampel.
5. PEMBAHASAN
Siklus krebs merupakan salah
satu contoh reaksi katabolisme respirasi
yang membutuhkan O2, terjadi di
mitokondria, dan memiliki nama lain
siklus asam sitrat/siklus asam
trikarboksilat (Brody, 1994). Di dalam
mitokondria terdapat enzim-enzim
pengoksidasi, pengatur pengedaran
energi pada sel, serta pengsintesis ATP
dengan mengubah energi potensial yang
terkandung dalam makanan menjadi
energi potensial yang disimpan dalam
bentuk ATP (Kimbal, 1983).
Alat yang digunakan dalam
praktikum ini adalah tabung sentrifuge
3
untuk menampung larutan yang akan
disentrifuge, sentrifuge untuk memisah
suatu larutan menjadi dua bagian berupa
endapan dan supernatan (substansi hasil
sentrifugasi) berdasarkan kecepatan
partikel mengendap, besar partikel, dan
densitas dari masing-masing partikel
(Tranggono, 1989), batang kaca untuk
mengaduk, pipet volum dan pompa
pilleus untuk mengambil larutan,
beaker glass untuk wadah tabung
sentrifuge yang akan ditimbang, kain
mori untuk menyaring, tabung reaksi
untuk wadah sampel serta mereaksikan
zat, rak tabung reaksi untuk meletakan
tabung reaksi, mortar dan alu untuk
menghaluskan bahan, aluminium foil
untuk menutup tabung reaksi, dan
stopwatch untuk menghitung waktu
yang dibutuhkan. Bahan yang
digunakan adalah buffer sukrosa untuk
mempertahankan pH (Mangihut, 2009),
selain mempertahankan pH, buffer juga
berfungsi untuk mencegah inaktivasi
enzim serta membantu pelarutan
kotoran dalam endapan enzim (Fox,
1991 dan Winarno, 1995). Bahan
lainnya adalah asam suksinat 0,1%
sebagai komponen pendonor elektron
dalam rantai transpor dengan
karakteristik berwarna bening dan tidak
memiliki bau (Oxtoby et al, 2001),
DCPIP untuk mengetahui terjadi atau
tidaknya reaksi, dan aquades sebagai
pelarut endapan sampel serta zat cair
yang digunakan untuk membatasi
tabung reaksi setinggi 15 ml. Bahan
utama yang akan dibuat sampel adalah
kecambah kacang tanah, biji kacang
tanah, belimbing mentah, dan belimbing
matang.
Mula-mula kecambah berumur
3 sampai 4 hari dibersihkan dari testas
(kuncup) dan radiclenya (akar,
dihancurkan dengan mortar, dan
ditimbang sebanyak 0,5 gram. Pada
praktikum ini dilakukan penghancuran
sampel yang bertujuan untuk
menghancurkan struktur dari bahan
utama sehingga enzim yang terdapat di
dalam bahan utama dapat keluar
(Giannakourou & Taoukis, 2003). Lalu,
dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge
untuk dipisahkan antara supernatant dan
endapannya. Kemudian, diberi 2
perlakuan yaitu diberi 10 ml larutan
buffer sebagai kontrol dan tabung lain
masing-masing 5 ml larutan buffer
sukrosa dan asam suksinat. Sentrifuge
dengan kecepatan 3000 rpm selama 15
menit, selama menunggu lakukan
langkah berikutnya. Tabung reaksi diisi
dengan 15 ml aquades kemudian batas
aquades pada tabung reaksi ditandai
dengan label, lalu buang aquades. Hasil
endapan sentrifuge kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
diisi dengan aquades sampai batas
yang ditandai sebelumnya. 0,5 ml
DCPIP ditambahkan lalu dikocok dan
tabung reaksi ditutup dengan aluminium
foil. Perubahan warna pada menit ke-0
dan menit ke-20 diamati.
Pada hasil pengamatan dapat
diketahui bahwa tidak terjadi perubahan
warna pada menit ke-20, hal ini
menandakan bahwa reaksi oksidasi
siklus krebs yang terjadi belum selesai.
Banyak sedikitnya kadar
glukosa akan mempengaruhi kecepatan
reaksi siklus krebs. Makin banyak
kandungan glukosa maka siklus krebs
akan semakin lama berakhir karena 1
molekul glukosa akan menghasilkan 2
asam piruvat, kemudian asam piruvat
akan diubah menjadi 2 asetil ko-A. Satu
kali siklus krebs hanya membutuhkan 1
asetil ko-A. Sesuai dengan teori kimbal
(1983), pada siklus krebs terjadi
penggabungan asam aksaloasetat
dengan asetil co-A yang menghasilkan
asam sitrat, 2 ATP, 2 FADH2, 6 NADH2,
serta 4 CO2. ATP yang dihasilkan
merupakan energi guna melakukan
berbagai aktivitas tubuh. Makin banyak
kadar glukosa maka semakin banyak
4
pula asetil ko-A yang dihasilkan
sehingga siklus krebs terjadi terus-
menerus. Sehingga dapat disimpulkan
bahwa pada buah-buahan, mengandung
banyak glukosa karena tidak terjadi
perubahan warna larutan DCPIP.
Tidak ada perbedaan yang
nampak pada sampel yang diberi buffer
sukrosa dengan sampel yang diberi
buffer sukrosa dan asam suksinat. Hal
ini tidak sesuai dengan teori yang
dikemukakan Marks (2000) yang
mengatakan suksinat dehidrogenase
berfungsi sebagai enzim dalam
mitokondria yang bergabung dengan
asam suksinat pada reaksi pelepasan
satu gugus elektron membentuk asam
fumarat, pada tahap ini elektron
digunakan FAD untuk membentuk
FADH2 . Semakin banyak asam suksinat
maka semakin banyak FADH2 yang
terbentuk, DCPIP yang bereaksi dengan
FADH2 akan tereduksi menjadi tak
berwarna dan juga menghasilkan E-
FAD (flavin adenine dinukleotida)
dengan reaksi : FADH2 + DCPIP 
DCPIP (colorless)+ E-FAD (Murray,
2001). Sehingga, seharusnya tabung
yang berisi asam suksinat dan DCPIP
lebih cepat mengalami perubahan warna
karena lebih banyak FADH2 yang
bereaksi dengan DCPIP. Ketidak
sesuaian teori yang ada dengan hasil
dapat disebabkan oleh ketidakjelian
praktikan dalam melihat perubahan
warna larutan karena perbedaan warna
yang tidak begitu signifikan.
Menurut Tranggono dan Sutardi
(1990), reaksi oksidasi pada siklus krebs
terjadi pada tahap pembentukan NADH
dari isositrat, pembentukan ɑ-
ketoglutarat menjadi suksinil co-A yang
menghasilkan NADH, pembentukan
FADH2 dari asam suksinat, serta
pembentukan oksaloasetat yang
menghasilkan NADH dari malat.
Pada kelompok 1 didapati
kecambah kacang tanah yang awalnya
berwarna putih bening saat ditambah  Buah-buahan mengandung
buffer sukrosa + DCIP dan putih keruh banyak glukosa
saat ditambah buffer sukrosa + asam
suksinat 0,1% + DCPIP menjadi putih Semarang, 26 November 2018
keruh dan putih bening di menit ke-20
sedangkan pada kelompok lain yang
juga menggunakan sampel kacang tanah
berupa biji, beberapa kelompok Florence Vincentia Y.
mendapati perubahan warna dari putih
keruh menjadi putih sangat keruh saat 7. DAFTAR PUSTAKA
diberi buffer sukrosa + DCPIP, putih
bening saat diberi buffer sukrosa + asam B. Marks, Dawn, Allan D. Marks, dan
suksinat 0,1 %+ DCPIP (kelompok I5 Collen M. Smith. (2000).
dan I6), dan tidak mengalami perubahan Biokimia Kedokteran Dasar:
pada kelompok I4 (tetap putih keruh Sebuah Pendekatan Klinis edisi
saat diberi buffer sukrosa + DCPIP, Bahasa Indonesia. Jakarta: EGC.
putih sedikit kebiruan keruh saat diberi
buffer sukrosa + asam suksinat 0,1 %+ Brody, Tom. (1994). Nutritional
DCPIP). Hal tersebut dapat disebabkan Biochemistry. New York:
oleh perbedaan perspektif praktikan Academic Press.
dalam melihat warna, ketidaktelitian
saat membuat sampel, serta aluminium Fox, P. F. (1991). Food Enzymology.
foil yang kurang rapat. Elsevier Applied Science. London.

6. KESIMPULAN Giannakourou, M.C & P.S. Taoukis.

 Siklus krebs merupakan salah (2003). Stability of
satu contoh reaksi katabolisme Dehydrofrozen Green Peas
respirasi yang membutuhkan O2, Pretreated with
terjadi di mitokondria, dan Nonconventional Osmotic
memiliki nama lain siklus asam Agents. Journal of Food Science
sitrat/siklus asam trikarboksilat Volume 68, Nr.6 : 2002-2009.
 Suksinat dehidrogenase
berfungsi sebagai enzim dalam Kimball, J.W. (1983). Biology Fifth
mitokondria yang bergabung Edition. United State of
dengan asam suksinat pada America: Addison-
reaksi pelepasan satu gugus WesleyPublishing Company,
elektron membentuk asam Inc.
fumarat.
 reaksi oksidasi pada siklus krebs Mangihut, S. T. (2009). Kimia Dasar.
terjadi pada tahap pembentukan PT. Grafinda Persada. Jakarta.
NADH dari isositrat,
pembentukan ɑ- ketoglutarat Murray. (2001). Biokimia. Jakarta:
menjadi suksinil co-A yang Penerbit Buku Kedokteran.
menghasilkan NADH,
pembentukan FADH2 dari asam Oxtoby, D.W. et al,. (2001). Prinsip-
suksinat, serta pembentukan Prinsip Kimia Modern edisi
oksaloasetat yang menghasilkan Keempat Jilid 1. Jakarta:
NADH dari malat. Erlangga.

5
Tranggono. (1989). Biokimia &
Teknologi Pasca Panen.
Yogyakarta: PAU Pangan & Gizi
UGM.

Tranggono & Sutardi. (1990). Biokimia

dan Teknologi Pasca Panen.
Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press.

Winarno, F. G. (1995). Enzim Pangan.

PT Gramedia Pustaka Utama.
Jakarta.