Contoh Pemeriksaan kadar kolesterol total pada tikus menggunakan metode CHOD-PAP

(Cholesterol Oxidase-Para Amino Antipyrine).

Pemeriksaan Kolesterol Total (Serum) [CHOD-PAP (Cholestrol

Oksidase Para Amino Phenazone)] Terhadap Tikus Jantan
Galur Wistar

Dasar Teori
Hiperlipidemia adalah peningkatan salah satu atau lebih kolesterol total, LDL, atau
trigliserida, dan atau penurunan HDL (Wells dkk.,2009). Hiperlipidemia dapat terjadi secara
primer maupun sekunder. Banyak cara menurunkan kadar kolesterol total dalam darah, salah
satu contohnya dengan simvastatin, yang menghambat aktivitas enzim 3-hidroksi-3-metil-
glutaril koenzim A (HMG-CoA) reduktase sebagai katalis pembentukan kolesterol.
Kelemahan golongan statin adalah memiliki efek samping miopati dan rhabdomiolisis
(Drazen dkk., 2008). Berdasarkan hal tersebut, penelitian tentang obat herbal yang digunakan
sebagai antihiperkolesterolemia masih perlu dikembangkan. Lemak adalah senyawa organik
yang mengandung elemen C, H dan O. Lemak dapat bersumber dari tambuh-tumbuhan
ataupun hewan. Fungsi utama lemak adalah sebagai sumber energi, sebagai pelumas dan
sebagai pelindung organ tubuh.

Prinsip
Ester kolestrol denga bantuan enzim kolestrol esterase akan diubah menjadi kolestrol dan
asam lemak bebas. Kolestrol dioksidase menjadi kolestenon dan hidrogen peroksida+4-amino
phenazone dengan bantuan enzim peroksidase akan diubah menjadi quinoneimine yang
berwarna merah muda. Intensitas warna yang terbentuk sebnding dengan konsentrasi
kolestrol pada sampel dan diukur pada panjang gelombang 546 nm.

Tujuan 
Untuk mengetahui kadar kolestrol total dalam darah.

Alat dan Bahan

1. Tabung reaksi
2. Mikropipet
3. Blue dan yellow tip
4. Reagen kolestrol
5. Sampel serum
 Prosedur  

1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

2. Sampel darah dibekukan terlebih dahulu selama 15-30 menit.
3. Sampel darah yang sudah beku disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 5
menit sampai diperoleh serum.
4. Serum yang sudah terpisah dapat digunakan sebagai sampel pemeriksaan.
5. Memipet serum kedalam tabung reaksi.
6. Dihomogenkan, inkubasi selama 10 menit.
7. Dibaca pada panjang gelombang 546 nm.

Keterangan point 5:
Blanko Standart Sampel
Standart 10 µL
Serum 10 µL
Reagen Kerja 1000 µL 1000 µL 1000 µL

Interpretasi hasil

Pemeriksaan Normal
Kolestrol Total < 200 mg/dL
Resiko Rendah 200 – 239 mg/dL
Resiko Tinggi ≥ 240 mg/dL