“Pembuatan Media Mueller Hinton Agar”

I.Tujuan

Media ini digunakan untuk uji sensitivitas, medium ini kaya nutrisi
sehingga cocok untuk menguji sensitifitas mikroorganisme terutama Neisseria
pathogen. Selain itu digunakan juga untuk kultur mikroorganisme phatogen
khususnya genus Neisseria seperti Neisseria gonorrhoeae dan Neisseria
meningitides.

II.Definisi

Media Mueller Hinton Agar adalah media terbaik untuk pemeriksaan

sensabilitas tes(dengan metode Kirby-Baurer) pada bakteri non-fastidious(baik aerob
dan anaerob fakulatif).Media ini ditemukan oleh Mueller dan Hinton pada tahun
1941, pada awalnya media Mueller Hinton digunakan untuk mengisolasi bakteri
Neiserria sp.Pada uji sensibilitas tes bakteri Streptococcus sp dapat ditambahkan
darah domba 5% dan nicotiname adenine dinucleotide.Oxoid Mueller-Hinton Agar
memenuhi persyaratan WHO9,10. Kritik telah dibuat tentang variasi dalam kinerja
Mueller-Hinton Agar antara dan dengan batch produsen / banyak medium11.
Penyebab variasi tersebut adalah:

1. Perbedaan konsentrasi kation divalen Mg ++ dan Ca ++. Efek ini ditampilkan

sebagai variasi MIC dengan aminoglikosida terhadap Pseudomonas aeruginosa dan
tetrasiklin terhadap staphylococci12,13,14.
2. Variasi dalam timin dan konten timidin, yang mempengaruhi sulfonamide dan
trimethoprim MIC values15,16.
3. Konsentrasi mangan, yang mempengaruhi interpretasi resistensi dengan
glycylcylines17.
4. Konsentrasi zine, yang mempengaruhi interpretasi resistensi dengan imipenem dan
berpotensi carbapenems lainnya
5. Perbedaan karakteristik agar yang digunakan dalam medium, terutama sifat difusi.

Dalam terang kritik seperti itu, CLSI memanggil para produsen yang
tertarik untuk membahas standardisasi dan stabilisasi Mueller-Hinton Agar. Metode
kontrol ditetapkan dimana kombinasi antimikroba / organisme yang penting harus
menghasilkan zona inhibisi yang konsisten dalam 2mm dari diameter yang ditentukan
dalam standar7.Hasil dari upaya kerja sama ini adalah Mueller-Hinton Agar menjadi
media standar dan juga menjadi media pilihan untuk metodologi CLSI yang juga
ditentukan oleh EUCAST8. Media memenuhi kriteria yang dijelaskan dalam
Spesifikasi Teknis ISO / TS 16782: 201618. Mueller-Hinton Agar ditambah dengan
ragi, NAD dan haematin digunakan khusus untuk pengujian kerentanan Haemophilus
influenzae20. Untuk keterangan lebih lanjut lihat Haemophilus Test Medium (HTM).
Mueller-Hinton Agar yang dilengkapi dengan 5% darah kuda yang dikaburkan
(SR0050) dan 20 mg / L β-NAD ditentukan oleh EUCAST untuk menguji organisme
yang cepat berubah. Mueller-Hinton Agar dan Broth digunakan sebagai dasar media
padat dan cair yang mengandung cefoperazone, trimetoprim, piperasilin dan
sikloheksim untuk isolasi selektif Arcobacter spp. dari daging2.

III.Alat dan Bahan

1. Cawan petri
2. Erlenmeyer
3. Botol kultur
4. Corong Buchner
5. Mikropipet
 6. Gelas beker
7. Gelas pengaduk
8. Gelas ukur
9. Autoklaf
10. Pembakar Bunsen
11. Tabung Reaksi
12. Spatula

Bahan:

Formula Gm/Liter
Beef Extract 2 gr
Acid Hydrolysate Of Casein 17,5 gr
Starch 17 gr
Agar 17 gr
Aquadest 1 liter

IV.Prosedur Kerja

1. Timbang 38 gram media, tambahkan 1 liter aquadest.

2. Panaskan sampai mendidih untuk melarutkan media.
3. Sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
4. Tunggu suhu sampai hangat-hangat kuku (45°C-50°C)
5. Tuang ke dalam cawan petri steril.
6. Simpan pada suhu 2-8°C.
V.Hasil
VI.Catat

1. pH akhir pada Mueller Hinton Agar : 7,3±0,1 pada suhu 25°C

2. Piring harus dituangkan hingga kedalaman 4 mm (kira-kira 25 ml agar cair untuk
pelat 100mm, tetapi dalam kasus apa pun hingga kedalaman yang terukur 4 mm).
3. Pelat yang terlalu dangkal akan menghasilkan hasil yang rentan palsu sebagai
senyawa antimikroba akan berdifusi lebih jauh dari seharusnya, menciptakan zona
penghambatan yang lebih besar. sebaliknya, piring yang dituang hingga
kedalaman > 4 mm akan menghasilkan hasil yang salah.
4. Mueller Hinton Agar harus diuji dengan strain organisme yang diketahui
setidaknya setiap minggu untuk memverifikasi bahwa media dan disk bekerja
seperti yang diharapkan.
5. Jika ph >7,4 hasil yang berlawanan dapat terjadi.
6. Simpan media dehidrasi pada 10-30 ° C dan gunakan sebelum tanggal
kedaluwarsa pada label.
7. Simpan piring yang disiapkan pada 2-8 ° C

VII.Refrensi

1. Mueller J. H. and Hinton Jane (1941) Proc. Soc. Exp. Biol. and Med. 48. 330-333.
2.Olsen A. M. and Scott W. J. (1946) Nature 157. 337.
3. Bauer A. W., Kirby W. M., Sherris J. C. and Turck M. (1966) Amer. J. Clin. Path.
45. 493-496