PARASITOLOGI KLINIS

PRAKTIKUM PARASITOLOGI
(PROTOZOA INTESTINAL)

Bahan kuliah
Adhi Kumoro Setya, S.Pd Bio., M.Si

PRODI DIII TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN NASIONAL

 PARASITOLOGI KLINIS

A. PENDAHULUAN

Penyakit infeksi yang disebabkan oleh parasit (Helmin dan Protozoa) masih
tinggi prevelansinya terutama pada penduduk di daerah tropik seperti di Indonesia, dan
merupakan masalah yang cukup besar bagi bidang kesehatan masyarakat. Hal ini
dikarenakan Indonesia berada dalam kondisi geografis dengan temperatur dan
kelembaban yang sesuai, sehingga mendukung kehidupan parasit usus, proses daur
hidup dan cara penularannya. Identifikasi parasit yang tepat memerlukan pengalaman
dalam membedakan sifat berbagai spesies parasit stadium kista, tropozoit telur, larva,
cacing dewasa dan juga memerlukan pengetahuan tentang berbagai bentuk
pseudoparasit dan artefak yang mungkin dikira suatu parasit. Identifikasi parasit juga
bergantung pada persiapan bahan yang baik untuk pemeriksaan baik dalam keadaan
hidup maupun sediaan yang telah di pulas. Bahan yang akan di periksa tergantung dari
jenis parasitnya, untuk cacing atau protozoa usus maka bahan yang akan di periksa
adalah tinja atau feses.
Teknik diagnostik merupakan salah satu aspek yang penting untuk mengetahui
adanya infeksi penyakit cacing, yang dapat ditegakkan dengan cara melacak dan
mengenal stadium parasit yang ditemukan. Sebagian besar infeksi dengan parasit
berlangsung tanpa gejala atau menimbulkan gejala ringan. Oleh sebab itu pemeriksaan
laboratorium baik dari segi persiapan, pelaksanaan dan menyimpulkan (preanalitik,
analitik dan postanalitik) sangat dibutuhkan karena diagnosis yang hanya berdasarkan
pada gejala klinik kurang dapat dipastikan.

B. INDIKASI PEMERIKSAAN TINJA

Indikasi pemeriksaan feses secara umum adalah gangguan traktus gastro intestinalis
seperti :
 - Sembelit / konstipasi
 - Berak darah lender
 - Problem makanan
 - Ikterus
 - Diare
 - Gangguan gastrointestinal dapat disebabkan karena :
 PARASITOLOGI KLINIS

Kuman : salmonella, shigella dan sebagainya

Bukan kuman : ulcus pepticum, carcinoma, invasi parasit,
steatorrhoe (tinja dengan komposisi lemak yang
tinggi) dan lain-lain.

C. PROSES SAMPLING
Sebelum melakukan pemeriksaan terlebih dahulu harus diketahui beberapa syarat dan
hal – hal yang perlu diketahui di dalam memperoleh sampel tinja, yaitu :
1. Cara memperoleh sampel tinja dapat berupa :
a. Sampel sewaktu
b. Sampel 24 jam

2. Cara memperoleh dapat dilakukan dengan :

a. Spontan (dapat menggunakan pencahar)
b. Rectal toucher
c. Rectal swab dengan cotton wool (terutama pada bayi)

3. Persiapan penderita :
a. Terangkan cara penampungan apa yang akan diperiksa
b. Penderita diminta untuk defekasi pada penampung feses bermulut lebar
c. Jangan kencing ditempat penampungan

NB : Jangan meletakkan kertas toilet pada penampung karena akan

berpengaruh terhadap hasil.

4. Syarat pengambilan
Untuk mendapatkan sampel yang memenuhi syarat maka perlu diperhatikan hal-
hal di bawah ini :
a. Feses harus dikumpu.kan pada tempat yang kering, bersih, bebas urin,
kemudian dipindahkan ke penampung dengan menggunakan, tunge spatel.
b. Untuk mendapatkan hasil yang terbaik maka harus segera dikirim ke
laboratorium pemeriksa.
 PARASITOLOGI KLINIS

- Feses yang masih hangat sangat baik untuk pemeriksaan telur dan
tropozoit. Untuk keperluan ini feses tidak boleh dimasukkan atau di
simpan dalam lemari es.
- Feses yang disimpan dalam almari es tidak boleh langsung diperiksa tetapi
sebaiknya dibiarkan dulu pada temperature ruang.
- Tidak boleh di simpan dalam incubator.
c. Sampel terbaik adalah yang fresh (baru)
d. Pengumpulan sampel harus dilakukan sebelum terapi antibiotika dan diambil
segera mungkin pada saat sakit.
e. Jumlah sampel yang dibutuhkan hanya sedikit, kira-kira sebesar ibu jari kaki
bayi. Bila dijumpai mucus atau darah maka sampel diambil dari tempat
tersebut karena parasit biasanya terdapat disitu.
f. Tidak boleh menggunakan feses yang ditampung di kloset atau terkontaminasi
dengan barium atau produk X ray.
g. Beri label yang berisi identitas seperti nama, tanggal, alamat, pemeriksaan apa
yang diminta.

Gbr. 1. Wadah sampel tinja.

Sumber : CDC, Atlanta

 PARASITOLOGI KLINIS

D. ATLAS PARASIT USUS (Protozoa) dan UNSUR PERANCU.

Didalam melakukan identifikasi parasit usus di lababoratorium maka,
pemahaman terhadap berbagai bentuk morfologi parasit termasuk segala stadiumnya
yang bisa ditemukan dalam pemeriksaan tinja merupakan harga mutlak yang harus
diketahui sebagai seorang TLM. Maka dari itu berikut akan disajikan berbagai
morfologi stadium parasit khususnya Protozoa usus dan unsur perancu.

1. Parasit Protozoa patogen.

Entamoeba histolytica.
Mikroskopi

Kista
Matang Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar kista memiliki 4 inti yang khas telah
terletak karyosomes dan halus, kromatin perifer merata. Kista biasanya mengukur 12 sampai
15 μM.
Gbr. 2. Kista E. histolytica

A B

A: Kista E. histolytica / E. dispar dalam preparat basah terwarnai terkonsentrasi tinja.

Perhatikan tubuh chromatoid dengan tumpul, ujung bulat (panah).
B: Kista E. histolytica / E. dispar dalam preparat basah terkonsentrasi diwarnai dengan iodine.
 PARASITOLOGI KLINIS

C D

C: Kista E. histolytica / E. dispar terwarnai trichrome. Tiga inti yang terlihat pada bidang fokus
(panah hitam), dan kista berisi tubuh chromatoid dengan ujung tumpul biasanya (panah merah).
D: Kista E. histolytica / E. dispar terwarnai trichrome. Perhatikan tubuh chromatoid dengan
tumpul, ujung bulat (panah).

Trophozoites
Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar trophozoites memiliki inti tunggal, yang memiliki
karyosome terpusat ditempatkan dan kromatin perifer merata. Ini tampilan khas dari inti tidak
selalu diamati karena beberapa trophozoites dapat memiliki inti dengan karyosome eksentrik
dan kromatin perifer merata. Sitoplasma memiliki "tanah-kaca" tampilan. Butiran atau E.
histolytica / E. dispar trophozoites biasanya mengukur 15 sampai 20 μM (kisaran 10 sampai
60 μM), cenderung lebih memanjang dalam tinja diare.
Erythrophagocytosis (menelan sel darah merah oleh parasit) adalah karakteristik morfologi
satunya yang dapat digunakan untuk membedakan E. histolytica dari nonpathogenic E. dispar.
Namun, erythrophagocytosis tidak biasanya diamati pada noda noda E. histolytica.
 PARASITOLOGI KLINIS

Gbr.3. Tropozoit E.histolytica.

E F

E, F: trophozoites E. histolytica / E. dispar di mount basah langsung diwarnai dengan iodine.

G H

G: Trophozoite E. histolytica / E. dispar, berukuran sekitar 16,7 μM, diwarnai dengan

trichrome. Gambar itu diambil di 1000 × pembesaran dan disumbangkan oleh Departemen
Kesehatan Kansas dan Lingkungan.
H: Trophozoite E. histolytica. Spesimen ini diawetkan dalam poli-vinil alkohol (PVA) dan
terwarnai di trichrome. PCR dilakukan pada spesimen ini untuk membedakan antara E. dan E.
histolytica dispar.
 PARASITOLOGI KLINIS

I : Trophozoite E. histolytica dengan eritrosit tertelan terwarnai trichrome. Para eritrosit

dicerna muncul sebagai inklusi gelap. Erythrophagocytosis adalah karakteristik-satunya yang
dapat digunakan untuk membedakan morfologis E. histolytica dari nonpathogenic E. dispar.

Balantidium coli
Mikroskopi
Kedua trophozoites Balantidium coli dan kista yang ditemukan dalam tinja. Trophozoites
ditandai dengan: ukuran besar (40 μM sampai 200 μM), kehadiran silia pada permukaan sel,
cytostome, dan sebuah macronucleus berbentuk kacang yang sering terlihat dan yang lebih
kecil, mikronukleus kurang mencolok. Kista terlihat lebih sering dan berbagai ukuran dari 50
μM sampai 70 μM. B. coli juga dapat menyerang jaringan.
 PARASITOLOGI KLINIS

Gbr.4. Tropozoit dan kista Balantidium coli.

A B

A: B. coli trophozoite di Pap hematoxylin terwarnai Mann, 500 × pembesaran. Perhatikan

(panah hitam) cytosome dan macronucleus berbentuk kacang.
B: B. coli trophozoite dalam preparat basah, 1000 × pembesaran. Perhatikan silia terlihat pada
permukaan sel. Gambar disumbangkan oleh Laboratorium Kesehatan Masyarakat Oregon.

C D

C: B. coli trophozites dalam jaringan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin.

D: B. coli kista di mount basah, terwarnai.
 PARASITOLOGI KLINIS

Giardia lamblia

Mikroskopi

Kista
Kista Giardia intestinalis yang oval untuk elipsoid dan mengukur 8-19 μM (rata-rata 10-14
μM). Kista matang memiliki 4 inti, sedangkan kista matang memiliki dua. Inti dan fibril yang
terlihat di kedua gunung yodium terwarnai basah dan trichrome terwarnai noda.
Gbr.5. Kista Giardia lamblia.

Sebuah B

A, B: G. intestinalis kista dalam preparat basah terwarnai dengan yodium.

 PARASITOLOGI KLINIS

C D

C, D, E, F: G. kista intestinalis terwarnai trichrome. Kadang-kadang kista sitoplasma dapat

menarik kembali dari dinding sel, hal ini terlihat dalam F Gambar.

E F

Trophozoites
Trophozoites intestinalis Giardia adalah berbentuk buah pir dan mengukur panjang 10-20
mikrometer. Dalam permanen, spesimen terwarnai, 2 inti besar biasanya terlihat. Disk
 PARASITOLOGI KLINIS

mengisap (digunakan untuk melampirkan epitel mukosa untuk tuan rumah), badan median, dan
flagela (8) juga dapat dilihat.
Gbr.6. Tropozoit Giardia lamblia

G H

G: G. intestinalis trophozoite dalam preparat basah terwarnai dengan yodium.

H: G. trophozoite intestinalis terwarnai trichrome.

I: G. trophozoite intestinalis terwarnai trichrome.

 PARASITOLOGI KLINIS

2. Unsur perancu
Salah satu kesulitan dalam diagnostik parasitologi adalah membedakan
organisme parasit dari unsur-unsur lain dalam kotoran dan cairan tubuh lainnya.
Spesimen paling sulit untuk membedakan parasit dari artefak adalah di tinja.
Spesimen tinja terdiri dari banyak komponen seperti:

 makanan sisa
 produk dari pencernaan
 sel epitel, lekosit, eritrosit
 lendir
 mikroorganisme seperti ragi dan bakteri

Karena rasio puing tinja untuk parasit, tidaklah mengherankan bahwa artefak dapat
salah diidentifikasi sebagai stadium trophozoites, telur, kista dan larva dari parasit
yang dicari.

Tujuan dari pengenalan artefak atau unsure perancu ini adalah untuk mengajarkan
microscopists kriteria yang diperlukan untuk membedakan morfologi parasit klinis
penting dari bahan artefak teratur dilihat dalam sampel kotoran dan spesimen dari situs
tubuh lainnya.

Tujuan dari situs ini tidak untuk menggantikan staf pelatihan praktis dalam bidang
khusus tetapi merupakan sumber pelengkap bahan referensi yang tersedia untuk
membantu microscopists maju dan pemula meminimalkan kesalahan identifikasi oleh
yang lebih mampu membedakan "fakta dari artefak."

Artefak tinja yang sering ditemui dalam mikroskopis adalah:

a. Manusia sel / bahan yang berasal sel
 Charcot-Leyden kristal
 Makrofag
 Leukosit polymorphonuclear
 Sel darah merah

b. Elemen non-manusia
 Alga
 Konidia jamur
 PARASITOLOGI KLINIS

 Jamur spora
 Sel tumbuhan
 Akar rambut
 Serbuk sari biji-bijian
 Spora
 Sayuran spiral
 Ragi sel

Gbr.7. Unsur perancu yang berasal dari manusia.

Unsur keterangan
Charcot-Leyden Kristal
Trichrome noda x 1000

Charcot-Leyden kristal adalah

produk pemecahan dari
eosinofil. Mereka ditemukan
dalam kotoran tetapi juga dapat
terjadi dalam sputum dan
jaringan.

Dengan dicatat unsur tersebut

adalah non-spesifik dan tidak
identik dengan infeksi parasit.

Kristal ini hadir pada orang

dengan infeksi menyerang
jaringan-parasit atau pada
individu dengan berbagai macam
kondisi-kondisi alergi.

Sel epitel – tercat Trichrome

x1000

Sel epitel bisa salah dengan

trophozoites Entamoeba.
 PARASITOLOGI KLINIS

Perhatikan bahwa rasio nukleus

ke sitoplasma terlalu besar dan
karyosome pusat tidak cukup
menonjol atau hilang.

Epitel your - Tahap kontras

X400

Sel-sel epitel skuamosa berasal

dari mukosa anus.

Inti refractile dan besar.

Sitoplasma halus dan perbatasan
sel yang berbeda.

Sering diidentifikasi sebagai

trophozoites amuba.

Makrofag dan Sel Darah

Merah
tercat Trichrome
mikroskop cahaya x 1000

Ukuran, bentuk dan dalam

material phagocytized mungkin
disimpulkan sebagai amuba.
Munculnya bar chromatoidal
juga jelas.
 PARASITOLOGI KLINIS

Makrofag
Fase kontras X400

Ukuran, bentuk dan bagian

dalam bahan phagocytized
mungkin mengarah amuba.

Leukosit polymorphonuclear
(Sel darah putih)

Tercat Trichrome
mikroskop cahaya x 1000

Bisa jadi bingung dengan E.

histolytica stadium kista karena
kesamaan dalam ukuran

Rasio bahan nukleus ke

sitoplasma adalah 1:1
Kista Entamoeba adalah 1:02-
01:03
 PARASITOLOGI KLINIS

Ada 2-4 segmen nukleus di

leukosit. Band sempit kromatin
bergabung dan mungkin tidak
terlihat.

Tidak ada massa pada inti

sehingga salah untuk suatu
karyosome

Leukosit polymorphonuclear
Fase kontras X400

Leukosit polymorphonuclear
dapat dilihat pada disentri dan
penyakit inflamasi lainnya

Mereka dapat menyerupai kista

Entamoeba histolytica.

Sel-sel darah merah dan putih

dalam persiapan slide
 PARASITOLOGI KLINIS

Eritrosit

Sel darah merah Ini bisa salah

untuk Blastocystis hominis.

Makrofag dan Sel Darah

Merah
Trichrome x 1000

Alga
Fase kontras x 400

Meskipun penampilan umum

dari objek ini menunjukkan
parasit, tetapi ini bukan.

Mereka dapat ditemukan dalam

spesimen feacal manusia dan
berbagai ukuran mereka dari 43-
70um oleh 25-33um.

Mereka tampaknya memiliki

struktur plug-seperti di setiap
kutub dan dapat bingung dengan
telur Trichuris trichiura.
 PARASITOLOGI KLINIS

Ganggang itu mungkin sengaja

tertelan dengan makanan.

Konidia jamur
Trichrome x 1000

Jamur di mana-mana di alam dan

dapat ditemukan dalam tanah, di
pohon dan vegetasi lainnya.

Mereka mungkin terjadi di rantai

atau individual.

Ukurannya berkisar 5-8 um

(panjang) dengan 3-5 um (lebar).
Ini mungkin bingung dengan
ovum dari Trichuris, namun
ukuran dan kekurangan bahan
internal harus menunjukkan
jamur.

Spora jamur
Fase kontras x 400

Spora jamur mungkin bingung

dengan telur cacing usus kecil.

Spora didominasi asal dietaty

sering dapat dilihat pada
spesimen tinja manusia.

Ini adalah spora dari jamur

merang. Karena ukuran dan
bentuk dari spora kecil, bisa jadi
bingung dengan telur cacing
usus.

Kurangnya struktur internal, sisi

rata dan ukuran kecil (23 um x 13
um) membedakannya dari telur
cacing kremi.
 PARASITOLOGI KLINIS

Tidak adanya suatu operkulum

membedakannya dari telur
trematoda.

gelembung-gelembung lemak
dalam persiapan slide

Gbr.8. Unsur perancu yang berasal bukan dari manusia.

Unsur tanaman Keterangan

Tanaman elemen yang terlihat dalam
kotoran mungkin menyerupai telur dan
kista parasit.

Fase Kontras x 400

Objek-objek ini mungkin keliru untuk

cacing tambang atau telur Ascaris
decorticated.

Kontur tidak teratur dari membran luar dan

penampilan umum harus menunjukkan
berasal dari tumbuhan temuan ini
mikroskopis.
 PARASITOLOGI KLINIS

Serbuk sari biji-bijian erat mungkin

menyerupai telur Taenia.

Studi yang cermat dari massa dalam

mengungkapkan kurangnya fitur khas dari
oncosphere biasanya terlihat pada Taenia
telur (embrio kait, dll).

Adanya pergoresan radial juga merupakan

petunjuk yang baik.

Objek ini bisa salah untuk telur cacing

tambang.

Kontur tidak teratur dari membran luar dan

kurangnya ujung membulat terus terang
menunjukkan asal pabrik.
 PARASITOLOGI KLINIS

Artefak ini bisa bingung dengan telur

unembryonated dari Diphyllobothrium
latum.

Kurangnya operkulum dan uneveness dari

dinding sel menunjukkan bahwa obyek ini
berasal dari tumbuhan.

Struktur tombol kecil seperti agak jelas

dalam gambar ini yang bisa menyebabkan
kebingungan.

Trichrome Stain x 1000

Serbuk sari ini menonjol karena warna

keemasan mereka. Mereka tidak
mengambil noda.

Dinding luar lurik dapat menimbulkan

kebingungan dengan telur Taenia, tapi
ukuran kecil, ketebalan tidak merata dan
kurangnya dinding isi internal tidak
menunjukkan telur.

Akar rambut & elemen tanaman lainnya

Ini adalah fuzz dari buah persik terlihat

sering pada tinja.

Mereka bisa bingung dengan

Strongyloides atau larva nematoda lain
dengan mata berpengalaman. Inti refractile
tidak boleh salah untuk esofagus atau usus
juga dibedakan dari larva nematoda.
 PARASITOLOGI KLINIS

Meskipun salah satu ujung rambut

mungkin lentik dan lancar bulat sebagai
larva nematoda, ujung yang lain biasanya
tumpul dan tidak teratur sebuah fitur yang
tidak terlihat dalam parasit larva.

Akar rambut biasanya lurus, tetapi ketika

tertekuk (di kiri), dapat diartikan sebagai
larva.

Rambut tanaman
Fase kontras
x 1000

Spora
Trichrome Stain x 1000

Artefak ini bisa salah untuk trophozoite

Giardia.

Perhatikan kurangnya dua inti anterior

ditempatkan, median tubuh bernoda dan
axonemes gelap.

Panjang ekor seperti objek tidak seperti

flagel khas Giardia. Objek ini tampaknya
menjadi spora yang berkecambah.

Benih
Modifikasi Kinyoun x 1000

Benih mungkin bingung dengan spesies

Cryptosporidium.
 PARASITOLOGI KLINIS

Tebal luar-membran dan kurangnya

struktur internal menunjukkan berasal dari
tumbuhan.

Modifikasi Kinyoun Stain x 1000x

Unsur tanaman menyerupai Cyclospora.

Perhatikan dinding sel tidak merata,

kurangnya butiran internal dan penampilan
vacuolated.

Ukurannya juga jauh lebih besar daripada

Cyclospora

Stain artefak
Modifikasi Kinyoun x 1000

Karena ukuran perkiraan (sekitar 4 um)

dan warna noda artefak ini, bisa jadi
bingung dengan spesies Cryptosporidium.
 PARASITOLOGI KLINIS

Sayuran spiral
Fase kontras x 400

Struktur mungkin erat atau longgar

melingkar.

Bisa dianggap sebagai proglottids.

Catatan: Proglottids cukup besar untuk
dilihat dengan mata telanjang.

Struktur ini sering terjadi dalam spesimen

tinja sebagai kotoran yang normal.

Budding Ragi
Trichrome noda x 1000

Ragi dapat menyerupai kista protozoa (4-6

um)

Mereka yang seragam dalam warna,

memiliki beberapa inklusi tetapi nukleus
tidak ada.

Bentuk budding dapat dilihat.

Ragi
Gomori methenamine noda
x 1000

Perhatikan dinding sel tebal.

Khas berbentuk cangkir.
Juga, PCP tidak membentuk hifa seperti
yang ditunjukkan pada gambar di sebelah
kiri.

Ragi dapat dianggap sebagai protozoa

kecil seperti E. nana ookista
Cryptosporidium atau Cyclospora dalam
preparat basah.
 PARASITOLOGI KLINIS

Telur serangga
80-120 um
Heterodera spp. dalam persiapan slide.
Serangan parasit Nematoda seperti akar
sayuran bit, lobak dan loba. dapat
membingungkan dengan telur cacing
tambang.

Sumber : www.dpdx.CDC.gov/

E. PEMERIKSAAN LAB

Prinsip pemeriksaan laboratories tinja adalah “Lakukan pemeriksan dengan segera”.

Tetapi kadang hal tersebut sukar dan tidak mungkin untuk dilaksanakan, missal :
1. Jarak rumah penderita dengan laboratorium cukup jauh.
2. Pekerjaan di lab yang bertumpuk – tumpuk.
3. Bahan pemeriksaan perlu dikirim ke lab lain.

Hal – hal diatas kadang sulit dihindari. Maka kita harus mengetahui cara
pengiriman sampel dan cara pengawetanya sehingga sampel masih cukup relevan
untuk diperiksa. Cara pengiriman yang baik ialah dengan metode pengiriman DMC
(double mailing container). Perlu juga diketahui bahwa pada pengiriman sampel
hendaknya disertai :
1. Nama penderita
2. Umur
3. Jenis kelamin
 PARASITOLOGI KLINIS

4. Tanggal pengambilan
5. Jenis bahan
6. Dapat ditambahkan :
a. Nama dokter pengirim
b. Keterangan klinis
c. Jenis pemeriksaan yang diminta

Gbr.9 Persiapan wadah transport sampel tinja.

 PARASITOLOGI KLINIS

Untuk pemeriksaan yang ditunda lebih dari 2 jam maka wajib dilakukanya
pengawetan terhadap sampel tinja, agar tidak terjadi kerusakan atau perubahan dari
berbagai unsur yang di curigai. Dimana metode pengawetan tinja dibagi menjadi
beberapa yaitu :
1. Cara Fisis
Pengawetan menggunakan suhu dingin di almari es 3 – 5oC.
Bentuk telur, larva dan kista dapat bertahan, tetapi bentuk
tripozoit akan rusak dengan pendinginan.

2. Cara kimiawi
Bahan kimia yang sering digunakan untuk pengawet tinja yaitu :
a. Formalin
b. PVA (polly vinyl alcohol)
 PARASITOLOGI KLINIS

c. MIF (merthiolate iodine formalin)